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1、(10)申请公布号 CN 102397279 A (43)申请公布日 2012.04.04 CN 102397279 A *CN102397279A* (21)申请号 201110366335.1 (22)申请日 2011.11.18 A61K 31/56(2006.01) A61P 25/28(2006.01) A61P 9/00(2006.01) A61P 25/14(2006.01) A61P 25/18(2006.01) (71)申请人 新乡医学院 地址 453003 河南省新乡市金穗大道东 (72)发明人 李鹏 李建华 王国红 白瑞樱 段树鹏 朱利红 张群妹 高建辉 尹雅玲 孙瑞利 。
2、王倩倩 杨静 赵蕴 杨丽霞 陈丽 李嘉 (54) 发明名称 无羁萜 -3- 醇在制备抗血管性痴呆的药物 中的应用 (57) 摘要 本发明提供了天然产物无羁萜 -3- 醇在制 备抗血管性痴呆的药物中的应用。本发明经在体 动物试验验证， 无羁萜 -3- 醇可以有效抑制血 管性痴呆大鼠神经组织形态学改变， 提高血管性 痴呆大鼠的认知、 学习和记忆能力， 明显减轻血管 性痴呆症状。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 2 页 CN 102397279 A1/1 页 2 1. 无羁萜 -3- 醇在制备抗血管性痴呆的。
3、药物中的应用。 2. 根据权利要求 1 所述的无羁萜 -3- 醇， 其特征在于， 提取于卫矛科植物卫矛 Euonymus alatus (Thunb.) Sieb. 及冬青卫矛 Euonymus japonicus Thunb. 的叶 ； 菊科植物泽兰 Eupatorium japonicum Thunb. 的叶、 茎 ； 大戟科植物金刚綦 Euphorbia antiquorum L. 及重阳木 Bischofia polycarpa (Levl.) Airy Shaw 的茎、 叶。 3. 根据权利要求 1 所述的无羁萜 -3- 醇， 其特征在于， 分子式 ： C30H52O， 分子量 ： 。
4、428.73， CAS 登录号 ： 5085-72-3， 化学名称 ： 24,25,26-Trinoroleanan-3-ol,5,9,13-trime thyl-,(3a,4b,5b,8a,9b,10a,13a, 14b)-， 结构式 ： 。 4. 根据权利要求 1 所述的血管性痴呆， 其特征在于， 因各种脑血管疾病引起的脑功能 障碍而产生的获得性智能损害综合症， 以记忆、 认知功能缺损为主， 可伴有言语、 运动、 视空 间及人格障碍为主要临床表现的一组神智异常症候群。 权 利 要 求 书 CN 102397279 A1/5 页 3 无羁萜 -3- 醇在制备抗血管性痴呆的药物中的应用 技术领。
5、域 0001 本发明涉及无羁萜-3-醇的应用， 具体地说， 涉及无羁萜-3-醇在制备抗血管 性痴呆的药物中的应用。 背景技术 0002 血管性痴呆 （Vascular Dementia， VD） 是指各种脑血管疾病引起的脑功能障碍而 产生的获得性智能损害综合症。 以记忆、 认知功能缺损为主， 可伴有言语、 运动、 视空间及人 格障碍为主要临床表现的一组神智异常症候群。血管性痴呆是中老年人群的多发病、 常见 病， 是老年期痴呆的主要类型之一。统计表明， 在欧美国家中， 血管性痴呆占老年痴呆总数 的 15% ； 在中国、 日本等亚洲国家， 血管性痴呆占老年痴呆总数的 50%。目前， 我国的血管性 。
6、痴呆患病率为 324/10 万， 65 岁人群中血管性痴呆的患病率为 1.3%。 0003 在各种脑血管疾病中， 缺血性脑病的发病率最高， 也是血管性痴呆最主要的致病 因素。 研究表明， 脑缺血引起的迟发性神经元损伤以细胞凋亡为主， 而大脑皮质和海马神经 元凋亡与学习记忆密切相关， 是导致学习、 记忆障碍的重要因素， 这也是目前研究血管性痴 呆的热点之一。 多数学者认为， 凋亡的发生既是凋亡相关基因表达的结果， 又受许多内外因 素的调节。可能与以下几个因素有关 ： 缺血缺氧本身激活了凋亡发生基因 ； 脑缺血 再灌注后产生大量自由基对神经细胞造成严重损伤的同时， 也诱导了凋亡的发生 ； Ca2+。
7、 超载激活一系列钙依赖性酶促反应， 促进了凋亡的发生。 0004 目前， 血管性痴呆治愈尚较困难， 但多能通过药物治疗改善症状。 主要的治疗原则 包括 ： 用脑代谢赋活剂 （辅酶 Q10、 胞二磷胆碱） 和脑循环促进剂 （氢化麦角碱、 氟桂嗪） 激 活脑代谢， 间接抑制痴呆的发展。脑代谢赋活剂主要通过促进葡萄糖吸收、 代谢， 继发扩张 脑血管， 改善营养代谢， 而脑循环促进剂是直接扩张脑血管的药物 ； 治疗神经传递阻滞 的药物， 如金刚烷胺能促进多巴胺释放， 抑制其重摄取 ； 高泛酸钙可促进葡萄糖的脑内吸收 和代谢， 增加脑组织内 5- 羟色胺浓度和脑血流量， 明显改善神经症状 ； 乙酰胆碱前。
8、体药 （卵 磷脂、 氯化胆碱） 和胆碱脂酶抑制剂 （毒扁豆碱、 四氢胺基吡啶） 通过增加乙酰胆碱系统的功 能， 改善神经症状 ； 神经肽能够提高老年人认识、 记忆能力， 减轻抑郁和无力症状 ； 对症 治疗， 常用甲硫达嗪、 氟奋乃静、 氟呱丁醇等控制血管性痴呆患者急躁和过激行为 ； 常用利 他林、 氯酯酰改善血管性痴呆患者抑郁症状 ； 常用安定改善血管性痴呆患者焦虑症状。 0005 无羁萜 -3- 醇， 提取于卫矛科植物卫矛 Euonymus alatus (Thunb.) Sieb. 及冬青卫矛 Euonymus japonicus Thunb. 的叶 ； 菊科植物泽兰 Eupatorium。
9、 japonicum Thunb. 的叶、 茎 ； 大戟科植物金刚綦 Euphorbia antiquorum L. 及重阳木 Bischofia polycarpa (Levl.) Airy Shaw 的茎、 叶。分子式 ： C30H52O， 分子量 ： 428.73， CAS 登录号 ： 5085-72-3， 化学名称 ： 24,25,26-Trinoroleanan-3-ol,5,9,13-trimethyl-, (3a,4b,5b, 8a, 9b,10a,13a, 14b)-。我们研究发现， 无羁萜 -3- 醇可以有效抑制血管性痴呆大鼠神 经组织形态学改变， 提高血管性痴呆大鼠的认知、。
10、 学习和记忆能力， 明显减轻血管性痴呆症 状， 治疗效果优于麦角新碱、 胞二磷胆碱、 高泛酸钙、 金刚烷胺、 卵磷脂。 说 明 书 CN 102397279 A2/5 页 4 发明内容 0006 本发明的目的在于提供无羁萜 -3- 醇在制备抗血管性痴呆的药物方面的新用 途。 0007 具体地说， 本发明涉及无羁萜 -3- 醇在制备抗血管性痴呆的药物中的应用。 0008 其中， 所述血管性痴呆， 其特征在于， 因各种脑血管疾病引起的脑功能障碍而产生 的获得性智能损害综合症， 以记忆、 认知功能缺损为主， 可伴有言语、 运动、 视空间及人格障 碍为主要临床表现的一组神智异常症候群。 0009 本发。
11、明所述无羁萜 -3- 醇提取于卫矛科植物卫矛 Euonymus alatus (Thunb.) Sieb. 及冬青卫矛 Euonymus japonicus Thunb. 的叶 ； 菊科植物泽兰 Eupatorium japonicum Thunb. 的叶、 茎 ； 大戟科植物金刚綦 Euphorbia antiquorum L. 及重阳木 Bischofia polycarpa (Levl.) Airy Shaw 的茎、 叶。 0010 本发明所述药物是指以无羁萜 -3- 醇为主要活性成分， 与可药用载体制成的医 疗上可接受的制剂， 如片剂、 丸剂或胶囊剂等。 0011 本发明所述药物， 其。
12、服用量以无羁萜 -3- 醇计 ： 成人， 1015mg/ 次， 3 次 / 日 ； 儿 童， 0.10.2mg/kg 次， 3次/日， 即可达到抑制血管性痴呆临床症状的效果， 特别地， 孕妇等 特殊人群服用时需遵医嘱。 0012 本发明所述无羁萜 -3- 醇可以直接通过市售得到， 也可以通过植物提取得到。 0013 本发明通过大鼠跳台试验、 大鼠避暗试验证明了天然产物无羁萜 -3- 醇可以有 效提高血管性痴呆大鼠的认知、 学习、 记忆能力， 治疗效果优于麦角新碱、 胞二磷胆碱、 高泛 酸钙、 金刚烷胺、 卵磷脂。 0014 本发明通过光镜观察发现， 无羁萜 -3- 醇明显抑制血管性痴呆大鼠海马。
13、 CA1 区 三层锥体细胞排列紊乱、 锥体细胞肿胀、 炎细胞浸润、 星形胶质细胞增生、 部分锥体细胞胞 体变小或呈三角形、 顶树突延长、 核固缩和破裂、 胞浆嗜伊红色、 基质疏松伴微空泡形成、 血 管周围有红细胞渗出等形态学改变。 0015 本发明通过电镜观察发现， 无羁萜 -3- 醇明显抑制管性痴呆大鼠海马 CA1 区锥 体细胞胞核固缩、 染色质聚集、 异染色质增多、 核周高电子密度团块出现、 线粒体嵴融合等 形态学改变。 0016 本发明的有益效果在于 ： 1、 本发明提供了无羁萜 -3- 醇的新用途， 其对血管性痴呆症状有很好的抑制作用。 无羁萜 -3- 醇明显抑制血管性痴呆大鼠海马 C。
14、A1 区三层锥体细胞形态学的改变， 有效提 高血管性痴呆大鼠的认知、 学习、 记忆能力， 治疗效果优于氢化麦角碱、 胞二磷胆碱、 高泛酸 钙、 金刚烷胺、 卵磷脂。 2、 本发明采用的无羁萜 -3- 醇提取来自纯天然原料， 化学结构和分子量明确， 质量 可控， 符合国际市场第三代中药产品的要求， 有广阔的市场前景。如果研究成功， 将提高我 国传统中药的国际地位， 对保障人类健康及提高老年人生活质量做出贡献。 附图说明 0017 图 1 无羁萜 -3- 醇对血管性痴呆大鼠跳台、 避暗试验潜伏期的影响 （ 说 明 书 CN 102397279 A3/5 页 5 s） （与血管性痴呆模型组比较， *。
15、P0.05 ； 与高剂量无羁萜 -3- 醇组比较， #0.05） 。 试验结果显示， 无羁萜 -3- 醇明显提高血管性痴呆大鼠跳台、 避暗试验潜伏期， 并且具有 显著的剂量依赖性 ； 与氢化麦角碱、 胞二磷胆碱、 高泛酸钙、 金刚烷胺、 卵磷脂对照组比较， 有明显差异 （P 0.05） 。 0018 图 2 无羁萜 -3- 醇对血管性痴呆大鼠跳台、 避暗试验错误次数的影响 （s） （与血管性痴呆模型组比较， *P0.05 ； 与高剂量无羁萜 -3- 醇组比较， #0.05） 。试验结果 显示， 无羁萜 -3- 醇明显减少血管性痴呆大鼠跳台、 避暗试验错误次数， 并且具有显著的 剂量依赖性 ； 。
16、与氢化麦角碱、 胞二磷胆碱、 高泛酸钙、 金刚烷胺、 卵磷脂对照组比较， 有明显 差异 （P 0.05） 。 0019 图 3 无羁萜 -3- 醇对血管性痴呆大鼠海马 CA1 区皮层锥体细胞形态学的影 响 （光镜 0.4K） 。血管性痴呆模型组海马 CA1 区三层锥体细胞排列紊乱 ； 部分锥体细胞肿 胀， 并有炎细胞浸润， 星形胶质细胞增生 ； 部分锥体细胞胞体变小或呈三角形， 顶树突延长， 有核固缩和破裂现象， 胞浆呈均匀嗜伊红色 ； 部分锥体细胞胞核变浅， 基质疏松伴微空泡形 成 ； 血管周围有红细胞渗出， 个别可见小血管增生。高剂量无羁萜 -3- 醇明显抑制海马 CA1 锥体细胞形态学改。
17、变， 细胞形态基本正常， 可见典型的三层细胞排列。 0020 图 4 无羁萜-3-醇对血管性痴呆大鼠海马CA1区皮层锥体细胞形态学的影响 （电镜12K） 。 血管性痴呆模型组海马CA1区锥体细胞胞核固缩， 染色质聚集成团、 边集， 异 染色质增多， 核周可见高电子密度团块 ； 线粒体肿胀， 有嵴融合并出现空泡变性。高剂量无 羁萜 -3- 醇明显抑制海马 CA1 锥体细胞胞核及细胞器损伤， 细胞器形态基本正常。 具体实施方式 0021 以下通过实施例及试验例来进一步阐述本发明的无羁萜 -3- 醇的新用途及其 有益效果， 但不用来限制本发明的范围。 0022 试验例 1 ： 检测无羁萜 -3- 醇。
18、对大鼠跳台、 避暗试验的影响。 0023 1、 药物 ： 无羁萜 -3- 醇 （上海科兴商贸有限公司） 、 氢化麦角碱 （上海华太药业股 份有限公司） 、 胞二磷胆碱 （苏州天马精细化学品股份有限公司） 、 高泛酸钙 （上海佳伦生物 科技有限公司） 、 金刚烷胺 （石家庄市三和药业有限公司） 、 卵磷脂 （广州邦利生物科技有限 公司） 。 0024 2、 仪器 ： 大鼠跳台记录系统 （淮北正华生物仪器设备有限公司） 、 大鼠避暗仪 （淮北 正华生物仪器设备有限公司） 。 0025 3、 动物 ： Sprague-Dawley（SD） 大鼠， 6 周龄、 雄性、 180220g、 清洁级 （河南。
19、省实验 动物中心） 。 0026 4、 实验分组 ： 分组 ：（1） 空白对照组 ： 健康 SD 大鼠 20 只， 每天清晨空腹三蒸水灌 胃 （灌胃容量为 10ml/kg） ， 连续灌胃 8 周 ；（2） 血管性痴呆模型组 ： 2VO 法制备血管性痴呆 大鼠模型 20 只 ；（3） 低剂量无羁萜 -3- 醇组 ： 血管性痴呆模型大鼠 20 只， 每天清晨空腹 无羁萜 -3- 醇溶液灌胃 （灌胃浓度 0.1mg/kg， 灌胃容量为 10ml/kg） 给药， 连续灌胃 8 周 ； （4） 中剂量无羁萜 -3- 醇组 ： 血管性痴呆模型大鼠 20 只， 每天清晨空腹无羁萜 -3- 醇 溶液灌胃 （灌。
20、胃浓度 0.5mg/kg， 灌胃容量为 10ml/kg） 给药， 连续灌胃 8 周 ；（5） 高剂量无羁 说 明 书 CN 102397279 A4/5 页 6 萜 -3- 醇组 ： 血管性痴呆模型大鼠 20 只， 每天清晨空腹无羁萜 -3- 醇溶液灌胃 （灌胃 浓度 1.0mg/kg， 灌胃容量为 10ml/kg） 给药， 连续灌胃 8 周 ；（6） 氢化麦角碱组 ： 血管性痴呆 模型大鼠20只， 每天清晨空腹氢化麦角碱溶液灌胃 （灌胃浓度2.0mg/kg， 灌胃容量为10ml/ kg） 给药， 连续灌胃 8 周 ；（7） 胞二磷胆碱组 ： 血管性痴呆模型大鼠 20 只， 每天清晨空腹胞 二。
21、磷胆碱溶液灌胃 （灌胃浓度 1.0mg/kg， 灌胃容量为 10ml/kg） 给药， 连续灌胃 8 周 ；（8） 高 泛酸钙组 ： 血管性痴呆模型大鼠 20 只， 每天清晨空腹高泛酸钙溶液灌胃 （灌胃浓度 2mg/kg， 灌胃容量为 10ml/kg） 给药， 连续灌胃 8 周 ；（9） 金刚烷胺组 ： 血管性痴呆模型大鼠 20 只， 每 天清晨空腹金刚烷胺溶液灌胃 （灌胃浓度 0.5mg/kg， 灌胃容量为 10ml/kg） 给药， 连续灌胃 8 周 ；（10） 卵磷脂组 ： 血管性痴呆模型大鼠 20 只， 每天清晨空腹卵磷脂溶液灌胃 （灌胃浓度 0.2mg/kg， 灌胃容量为 10ml/kg。
22、） 给药， 连续灌胃 8 周。 0027 5、 实验内容 ： 大鼠跳台试验、 大鼠避暗试验。 0028 6、 统计学方法 ： 所有数据以均数 标准差 （s） 表示。组间差异比较用 ANOVA 及 Newman-Student 多重比较 ； t 检验分析， 由 SPSS 13.0 统计软件完成， 双侧 P 0.05 认 为差异有显著性。 0029 7、 结果 7.1 无羁萜 -3- 醇对血管性痴呆大鼠跳台试验的影响 ： 试验结果显示， 无羁 萜 -3- 醇明显提高血管性痴呆大鼠跳台试验潜伏期、 减少错误次数， 并且具有显著的剂 量依赖性 ； 与氢化麦角碱、 胞二磷胆碱、 高泛酸钙、 金刚烷胺、 。
23、卵磷脂对照组比较， 存在明显 的差异 （P 0.05） 。 （结果见表 1） 表 1 无羁萜 -3- 醇对血管性痴呆大鼠跳台试验的影响 （s） 分组n潜伏期 （秒）错误次数 /5 分钟 （次） 空白对照组20 169.5836.29*#0.290.09*# 血管性痴呆模型组20 54.2620.25#2.851.65# 低剂量无羁萜 -3- 醇组20 57.8811.12#2.651.67# 中剂量无羁萜 -3- 醇组20 87.7721.23*#1.350.35*# 高剂量无羁萜 -3- 醇组20 134.5425.45*0.790.32* 氢化麦角碱组20 111.4323.26*#1.3。
24、60.65*# 胞二磷胆碱组20 112.5843.77*#1.650.65*# 高泛酸钙组20 97.7125.98*#1.590.76*# 金刚烷胺组20 99.1421.33*#1.440.34*# 卵磷脂组20 87.4323.33*#0.980.46*# 注 : 与血管性痴呆模型组比较， *P0.05 ； 与高剂量无羁萜 -3- 醇组比较， #0.05。 0030 7.2 无羁萜 -3- 醇对血管性痴呆大鼠避暗试验的影响 ： 试验结果显示， 无羁 萜 -3- 醇明显提高血管性痴呆大鼠避暗试验潜伏期， 减少错误次数， 并且具有显著的剂 量依赖性 ； 与氢化麦角碱、 胞二磷胆碱、 高泛酸。
25、钙、 金刚烷胺、 卵磷脂对照组比较， 存在明显 的差异 （P 0.05） 。 （结果见表 2） 表 2 无羁萜 -3- 醇对血管性痴呆大鼠避暗试验的影响 （s） 分组n潜伏期 （秒）错误次数 /5 分钟 （次） 空白对照组20 184.5439.09*#0.430.12*# 血管性痴呆模型组20 26.6815.76#3.541.65# 低剂量无羁萜 -3- 醇组20 27.8312.44#3.321.71# 中剂量无羁萜 -3- 醇组20 123.3321.20*#1.240.43*# 高剂量无羁萜 -3- 醇组20 155.8723.67*0.950.12* 说 明 书 CN 102397。
26、279 A5/5 页 7 氢化麦角碱组20 121.8348.55*#1.250.22*# 胞二磷胆碱组20 111.2723.42*#1.330.23*# 高泛酸钙组20 119.5432.55*#1.540.35*# 金刚烷胺组20 98.4441.22*#1.490.22*# 卵磷脂组20 114.2921.22*#1.340.34*# 注 : 与血管性痴呆模型组比较， *P0.05 ； 与高剂量无羁萜 -3- 醇组比较， #0.05。 0031 7.3 无羁萜 -3- 醇对血管性痴呆大鼠跳台、 避暗试验潜伏期的影响 ： 试验结果 显示， 无羁萜 -3- 醇明显提高血管性痴呆大鼠跳台、 。
27、避暗试验潜伏期， 并且具有显著的剂 量依赖性 ； 与氢化麦角碱、 胞二磷胆碱、 高泛酸钙、 金刚烷胺、 卵磷脂对照组比较， 存在明显 的差异 （P 0.05） 。 （结果见图 1） 7.4 无羁萜 -3- 醇对血管性痴呆大鼠跳台、 避暗试验错误次数的影响 ： 试验结果显 示， 无羁萜 -3- 醇明显减少血管性痴呆大鼠跳台、 避暗试验错误次数， 并且具有显著的剂 量依赖性 ； 与氢化麦角碱、 胞二磷胆碱、 高泛酸钙、 金刚烷胺、 卵磷脂对照组比较， 存在明显 的差异 （P 0.05） 。 （结果见图 2） 试验例 2 ： 检测无羁萜 -3- 醇对大鼠海马 CA1 区锥体细胞形态学影响。 0032。
28、 1、 药物 ： 无羁萜 -3- 醇 （上海科兴商贸有限公司） 。 0033 2、 仪器 ： TS1000 尼康显微镜， HT7700 日立透射电子显。 0034 3、 动物 ： SD 大鼠， 6 周龄、 雄性、 180220g、 清洁级 （河南省实验动物中心） 。 0035 4、 实验分组 ： 分组 ：（1） 正常对照组 ： 健康 SD 大鼠 20 只， 每天清晨空腹三蒸水灌 胃 （灌胃容量为 10ml/kg） ， 连续灌胃 8 周 ；（2） 血管性痴呆模型组 ： 2VO 法制备血管性痴呆 大鼠模型 20 只 ；（3） 无羁萜 -3- 醇组 ： 血管性痴呆模型大鼠 20 只， 每天清晨空腹无。
29、羁 萜 -3- 醇溶液灌胃 （灌胃浓度 1.0mg/kg， 灌胃容量为 10ml/kg） 给药， 连续灌胃 8 周。 0036 5、 实验内容 ： 光镜及电镜下形态学观察。 0037 6、 结果 6.1 无羁萜 -3- 醇对血管性痴呆大鼠海马 CA1 区皮层锥体细胞形态学的影响 （光 镜 0.4K） 。血管性痴呆模型组大鼠海马 CA1 区三层锥体细胞排列紊乱 ； 部分锥体细胞肿 胀， 并有炎细胞浸润， 星形胶质细胞增生 ； 部分锥体细胞胞体变小或呈三角形， 顶树突延长， 有核固缩和破裂现象， 胞浆呈均匀嗜伊红色 ； 部分锥体细胞胞核变浅， 基质疏松伴微空泡形 成 ； 血管周围有红细胞渗出， 个。
30、别可见小血管增生。高剂量无羁萜 -3- 醇明显抑制海马 CA1 锥体细胞形态学改变， 细胞形态基本正常， 可见典型的三层细胞排列。 （结果见图 3） 6.2 无羁萜-3-醇对血管性痴呆大鼠海马CA1区皮层锥体细胞形态学的影响 （电镜 12K） 。血管性痴呆模型组大鼠海马 CA1 区锥体细胞胞核固缩， 染色质聚集成团、 边集， 异 染色质增多， 核周可见高电子密度团块 ； 线粒体肿胀， 嵴融合并出现空泡变性。高剂量无羁 萜 -3- 醇明显抑制海马 CA1 锥体细胞胞核及细胞器损伤， 细胞器形态基本正常。 （结果见 图 4） 说 明 书 CN 102397279 A1/2 页 8 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 102397279 A2/2 页 9 图 3 图 4 说 明 书 附 图 。