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1、(10)申请公布号 CN 102657843 A (43)申请公布日 2012.09.12 CN 102657843 A *CN102657843A* (21)申请号 201210181397.X (22)申请日 2012.06.05 A61K 38/16(2006.01) A61K 38/10(2006.01) A61K 38/08(2006.01) A61K 9/16(2006.01) A61K 47/34(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61P 31/10(2006.01) A23L 3/3526(2006.01) (71)申请人 云南民族大学 地址 6505。
2、00 云南省昆明市呈贡区大学城云 南民族大学 (72)发明人 李宏利 袁明龙 李丽丽 袁明伟 于美玲 (54) 发明名称 抗菌肽组合物及其制备方法 (57) 摘要 本发明的提供一种抗菌肽组合物及其制备方 法， 是用同时具有疏水及亲水性能的可降解高分 子材料对抗菌肽进行负载， 使抗菌肽分子负载到 材料上就得到抗菌肽组合物。具体负载方法是采 用文献广泛研究的物理包裹的方法， 把抗菌肽包 裹在可降解高分子材料的中心制备成纳米到微米 级的微球， 当材料开始降解后逐步释放抗菌肽。 本 发明采用同时具有疏水及亲水性的可降解高分子 材料作为载体， 其结构与抗菌肽有相似之处， 与现 有聚乳酸 - 羟基乙酸共聚。
3、物具有更好生物相容性 和亲水性能， 更有利于稳定抗菌肽的结构。 通过调 节材料的亲水疏水性及分子量， 可以实现对抗菌 肽释放时间的调节， 有利于满足各种使用需求， 扩 大使用范围。这种抗菌肽组合物可以用在生物医 学领域及食品保鲜领域作为长效食品保鲜剂。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 7 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 7 页 1/1 页 2 1. 一种抗菌肽组合物， 其特征是 ： 用同时具有疏水及亲水性能的可降解高分子材料对 抗菌肽进行负载， 使抗菌肽分子负载到材料上就得到抗菌肽组合物。 2. 根据权利要求 1 。
4、所述的抗菌肽组合物， 其特征在于 ： 所述同时具有疏水及亲水性能 的可降解高分子材料为由疏水材料及亲水材料组成的共聚物材料， 其中疏水材料为聚乳 酸、 聚乙醇酸、 聚三亚甲基碳酸酯及聚己内酯中的任意一种单独或几种混合使用， 亲水材料 为聚乙二醇、 侧链带羧基的聚氨基酸、 侧链带羟基的聚氨基酸及侧链带氨基的聚氨基酸中 的任意一种或几种混合使用。 3. 根据权利要求 1 所述的抗菌肽组合物， 其特征在于 ： 所述的抗菌肽主要为单功能抗 菌肽和双功能抗菌肽即 Pexiganan， Hlf1-11， Plectasin， Neuprex， Iseganan， Brevinin-1， Brevinin-。
5、2， Esculentin-1， Esculentin-2， Ranacyclin 中的任意一种或几种的混合物。 4. 根据权利要求 1 所述的抗菌肽组合物的制备方法， 其特征在于 ： 可降解高分子材料 对抗菌肽的具体负载方法是采用物理包裹的方法， 把抗菌肽包裹在可降解高分子材料的中 心制备成纳米到微米级的微球， 当材料开始降解后逐步释放抗菌肽， 微球的制备采用双乳 液 W1/O/W2 或 O/W 体系制备。 5. 根据权利要求 4 所述的抗菌肽组合物的制备方法， 其特征在于 ： 同时具有疏水及亲 水性能的可降解高分子材料中疏水材料及亲水材料的比例可以是重量比 95 ： 540 ： 60 之 。
6、间， 可降解高分子材料的分子量一般控制在 2000-30 万之间。 6. 根据权利要求 4 所述的所述的抗菌肽组合物的制备方法， 其特征在于 ： 可用来负载 抗菌肽的具有疏水材料及亲水材料组成的共聚物可以但不局限于是 ： 聚乳酸 - 聚乙二醇共 聚物、 聚乳酸-聚天冬酸共聚物、 聚乳酸-聚赖氨酸共聚物、 聚乳酸-聚乙二醇-聚天冬酸共 聚物、 聚乳酸 - 聚乙二醇 - 聚赖氨酸共聚物、 聚乙二醇 - 聚天冬酸共聚物、 聚乙二醇 - 聚赖 氨酸共聚物、 聚乳酸 - 聚乙醇酸 - 聚乙二醇共聚物、 聚乳酸 - 聚己内酯 - 聚赖氨酸共聚物、 聚乳酸 - 聚三亚甲基碳酸酯 - 聚赖氨酸共聚物及聚乳酸 。
7、- 聚丝氨酸共聚物及聚乳酸 - 聚谷 氨酸共聚物， 可以一种单独或几种混合使用。 权 利 要 求 书 CN 102657843 A 2 1/7 页 3 抗菌肽组合物及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种抗菌肽组合物及其制备方法， 具体而言， 涉及抗菌肽长效缓释剂 型及其制备方法， 属于生物工程领域。 背景技术 0002 1981 年， 这种具有抗菌活性的物质被命名为 cecropin， 这是人们第一次真正意义 上发现抗菌肽。抗菌肽由于其具有高效的抗菌活性和极低的耐药性， 有望成为新一代抗生 素。抗菌肽 （Antimicrobial Peptides， AMPs） 是生物内在免疫的重要。
8、组成部分， 一般由 6-100 个氨基酸残基组成。抗菌肽一般都有两亲性结构， 有 1 个疏水区域与脂质结合， 1 个 带正电荷的亲水性区域与水或者带负电荷的残基结合。 这些特性使得抗菌肽能够很好地与 由两性分子构成、 特别是呈电负性的细胞膜结合， 这是抗菌肽与细菌细胞膜发生相互作用 的结构基础。抗菌肽具有广谱抗菌活性， 对大多数革兰式阳性菌、 革兰氏阴性菌有效， 对真 菌也有很强的抑制作用， 这是其临床应用潜力被看好的一个重要原因。 0003 虽然抗菌肽具有广谱抗菌活性， 并且不容易产生耐药性， 具有良好的应用前景， 抗 菌肽的研究也有 20 多年， 但到目前为止， 还没有临床剂型出现， 主要。
9、原因是抗菌肽的临床 应用面临着一些问题容易被蛋白酶降解， 体内循环半衰期短， 从而导致稳定性差等， 需要频 繁给药， 不仅给患者带来了较大的经济负担， 还给患者带来了给药痛苦。 中国科学院昆明动 物所的赖仞教授通过对多种蛙科的皮肤分泌物进行分离纯化， 得到了对革兰氏阳性菌、 革 兰氏阴性菌和真菌都具有比较好的治疗效果的多种抗菌肽， 虽然在稳定性方面有一定改善 但没有从根本上解决稳定性问题， 并且在提高抗菌肽的持续性杀灭细菌的作用也没有很好 的解决办法。 0004 近年来， 生物可降解的高分子材料广泛应用于蛋白质、 多肽类药物长效剂型的研 究， 最有效的方法就是通过用生物可降解材料为载体进行控制。
10、释放体系的研究， 对增强 药物的稳定性、 提高药物的溶解度以及提高药物分子的持续稳定输送具有非常重要的作 用。文献对许多蛋白灭活疫苗或基因工程疫苗如人血清白蛋白 （HSA） 、 霍乱毒素共调菌毛 （TCP） 、 钩端螺旋体外膜蛋白 （OMP） 、 伤寒杆菌荚膜蛋白 （Vi） 、 乙肝病毒表面抗原 （HBsAg） 等进行控制释放来达到免疫目的， 所用载体为聚乳酸 （PLA） 、 聚乳酸 - 聚乙醇酸 (PLGA) 及 聚乳酸 - 聚乙二醇共聚物 （PELA） 等可降解生物材料 ( 李孝红 . 袁明龙等， 生物降解聚合 物的研究和产业化进展及展望， 高分子通报 ,2008, (8):109; Li。
11、 X H et al, Int. J. Pharm., 1999, 178:245; Zhou S B et al, J. Control. Release, 2003, 86:195; Mar J.et al, Journal of Controlled Release,1997,43:81; Thejani E， et al, Journal of Controlled Release, 2010,142:196; Karen Fu et al, Pharmaceutical Research, 2000, 17:1)。在抗菌肽缓释研究方面， 中国专利 （CN102274485A） 报道了。
12、用聚乳酸 - 羟基 乙酸共聚物作载体制备抗菌肽缓释载体制备了聚乳酸缓释微球剂型， 但由于聚乳酸 - 羟基 乙酸共聚物是属于脂肪族聚酯， 缺乏亲水性， 不利于稳定抗菌肽的结构， 本发明的目的是根 据抗菌肽的结构及性能， 应用新材料， 对抗菌肽进行控制释放， 以达到解决抗菌肽稳定性、 说 明 书 CN 102657843 A 3 2/7 页 4 安全性、 长效释放及提高材料对抗菌肽负载量的问题。 发明内容 0005 本发明的内容是提供一种抗菌肽组合物及其制备方法， 具体而言， 涉及抗菌肽长 效缓释剂型及其制备方法， 是用同时具有疏水及亲水性能的可降解高分子材料对抗菌肽进 行负载， 使抗菌肽分子负载。
13、到材料上就得到抗菌肽组合物。这种抗菌肽组合物可以用在生 物医学领域及食品保鲜领域作为长效食品保鲜剂。 0006 本发明的目的是这样实现的 ： 这种抗菌肽组合物， 用同时具有疏水及亲水性能的可降解高分子材料对抗菌肽进行负 载， 使抗菌肽分子负载到材料上就得到抗菌肽组合物。 0007 这种抗菌肽组合物， 所述同时具有疏水及亲水性能的可降解高分子材料由疏水材 料及亲水材料组成的共聚物材料， 其中疏水材料为聚乳酸、 聚乙醇酸、 聚三亚甲基碳酸酯及 聚己内酯中的任意一种单独或几种混合使用， 亲水材料为聚乙二醇、 侧链带羧基的聚氨基 酸、 侧链带羟基的聚氨基酸及侧链带氨基的聚氨基酸中的任意一种或几种混合使。
14、用。 0008 这种抗菌肽组合物， 长效缓释微球适合于包裹所有目前依据公众知识得到的 抗菌肽， 而所述的抗菌肽主要为单功能抗菌肽和双功能抗菌肽即 Pexiganan， Hlf1-11， Plectasin， Neuprex， Iseganan， Brevinin-1， Brevinin-2， Esculentin-1， Esculentin-2， Ranacyclin 等中的任意一种或几种的混合物。 0009 这种抗菌肽组合物的制备方法， 同时具有疏水及亲水性能的可降解高分子材料对 抗菌肽的具体负载方法是文献广泛研究的物理包裹的方法， 把抗菌肽包裹在可降解高分子 材料的中心制备成纳米到微米级的。
15、微球， 当材料开始降解后逐步释放抗菌肽， 微球的制备 采用文献中研究别的包裹对象时所采用的双乳液 W1/O/W2（水相 1/ 油相 / 水相 2） 或 O/ W（油相 / 水相） 体系制备 （李孝红 . 袁明龙等， 生物降解聚合物的研究和产业化进展及 展望， 高分子通报 ,2008, (8):109; Li X H et al, Int. J. Pharm., 1999, 178:245; Zhou S B et al, J. Control. Release, 2003, 86:195; Mar J.et al, Journal of Controlled Release,1997,43:8。
16、1; Thejani E， et al, Journal of Controlled Release, 2010,142:196; Karen Fu et al, Pharmaceutical Research, 2000, 17:1） ， 具体操作方 法如下 （除特别说明外， 所涉及的份数均为重量份数， 百分比均为重量百分数） ： (1) 将抗菌肽溶于超纯水或 pH 为 5.5 -7.5 的缓冲溶液中， 制成内水相。 0010 (2) 将聚乳酸基高分子载体材料溶于有机溶剂中， 制成中油相。 0011 (3) 将步骤 (1) 制成的内水相加入到中油相中， 其中内水相与中油相的体积比为 5-25。
17、%， 机械搅拌作用下形成 W/O（油 / 水） 的初乳。 0012 (4) 将步骤 (3) 制成的初乳滴加到含有一定量乳化剂的外水相分散介质中， 机械 搅拌作用下， 乳化形成 W/O/W（水 / 油 / 水） 的复乳。 0013 (5) 在步骤 (4) 的复乳中加入一定量的异丙醇溶液， 在机械搅拌作用下挥发 3 小 时， 除去有机溶剂， 使微球固化。然后高速离心收集， 冷冻干燥 24 小时， 即得抗菌肽微球。 0014 其中， 有机溶剂为二氯甲烷、 三氯甲烷、 二恶烷中任意一种或几种的混合物。乳化 剂为聚乙烯醇、 羧甲基纤维素钠、 丙甲基纤维素、 吐温中的任意一种或几种混合物。 0015 这种。
18、抗菌肽组合物的制备方法， 所述的可降解高分子材料中疏水材料及亲水材料 说 明 书 CN 102657843 A 4 3/7 页 5 的比例可以是重量比 95 ： 540 ： 60 之间， 材料分子量一般控制在 2000-30 万之间。 0016 本发明中典型的可用来负载抗菌肽的具有疏水材料及亲水材料组成的共聚物可 以但不局限于是 ： 聚乳酸 - 聚乙二醇共聚物、 聚乳酸 - 聚天冬酸共聚物、 聚乳酸 - 聚赖氨酸 共聚物、 聚乳酸-聚乙二醇-聚天冬酸共聚物、 聚乳酸-聚乙二醇-聚赖氨酸共聚物、 聚乙二 醇 - 聚天冬酸共聚物、 聚乙二醇 - 聚赖氨酸共聚物、 聚乳酸 - 聚乙醇酸 - 聚乙二醇。
19、共聚物、 聚乳酸 - 聚己内酯 - 聚赖氨酸共聚物、 聚乳酸 - 聚三亚甲基碳酸酯 - 聚赖氨酸共聚物及聚 乳酸-聚丝氨酸共聚物及聚乳酸-聚谷氨酸共聚物等， 可以一种单独或几种混合使用， 材料 的重均分子量这些材料的制备在文献中已经有报道， 典型的结构示例如下 ： 聚乳酸 - 聚乙二醇共聚物 聚乳酸 - 聚乙醇酸 - 聚乙二醇共聚物 侧链带羧基的聚乳酸 - 聚氨基酸共聚物 侧链带氨基的聚乳酸 - 聚氨基酸共聚物 说 明 书 CN 102657843 A 5 4/7 页 6 侧链带氨基的聚乙二醇 - 聚氨基酸共聚物 聚乳酸 - 聚三亚甲基碳酸酯 - 聚赖氨酸共聚物 聚乳酸 - 聚己内酯 - 聚赖。
20、氨酸共聚物 上述反应式中其中的 x、 y 及 z 为材料的聚合度， x=10-5000、 y=10-5000,z =10-5000。 0017 这种抗菌肽组合物可以用在生物医学领域及食品保鲜领域作为长效食品保鲜剂。 本发明与已有技术相比， 具有多方面的积极效果和优点， 本发明采用同时具有疏水及亲水 性的可降解高分子材料作为载体， 特别是聚氨基酸的引入， 其结构与抗菌肽有相似之处， 与 现有聚乳酸 - 羟基乙酸共聚物具有更好生物相容性和亲水性能， 更有利于稳定抗菌肽的结 构。 通过调节材料的亲水疏水性及分子量， 可以实现对抗菌肽释放时间的调节， 有利于满足 各种使用需求， 扩大使用范围。 本发明。
21、采用的抗菌肽对革兰氏阳性菌、 革兰氏阴性菌和真菌 都具有比较好的治疗效果， 而且其来源比较广泛。本发明采用 W/O/W 的方式制备抗菌肽微 球具有核 - 壳结构， 有利于抗菌肽的缓控释放。 0018 下面给出本发明的 10 个实施例， 通过实施例对本发明进行具体描述。有必要在此 指出的是， 实施例只用于对本发明进行进一步的说明， 不能理解为对本发明保护范围的限 制， 该领域的技术熟练人员可以根据上述本发明的内容做出一些非本质的改进和调整。 说 明 书 CN 102657843 A 6 5/7 页 7 具体实施方式 0019 在以下实施例中， 除特别说明外， 所涉及的份数均为重量份数， 百分比均。
22、为重量百 分数。 0020 实施例 1 称取 1 份的抗菌肽 Pexiganan 溶于 19 份的超纯水中制成抗菌肽含量为 5% 内水相。 同时称取 10 份的聚乳酸 - 聚乙二醇共聚物溶于 190 份的二氯甲烷中， 制备成中油相。在 500rpm 的机械搅拌的情况下， 将内水相加入到中油相中， 搅拌半个小时， 形成初乳。称取 6 份的聚乙烯醇加入到 214 份的超纯水中， 制成外水相。将初乳加入到外水相中， 并且在转速 为 700rpm 的搅拌作用下， 搅拌 1 小时形成 W/O/W 的复乳。在复乳中加入 40 份的异丙醇， 敞 口搅拌 3 小时后， 在 10000rpm 的转速下离心， 将。
23、沉淀冷冻干燥即得到的抗菌肽组合物。 0021 实施例 2 称取 1 份的抗菌肽 Hlf1-11 溶于 99 份的超纯水中制成抗菌肽含量为 1% 内水相。同时 称取 10 份的聚乳酸 - 聚三亚甲基碳酸酯 - 聚赖氨酸共聚物溶于 190 份的二氯甲烷中， 制备 成中油相。在 500rpm 的机械搅拌的情况下， 将 10 份内水相加入到 90 份中油相中， 搅拌半 个小时， 形成初乳。称取 3 份的聚乙烯醇加入到 97 份的超纯水中， 制成外水相。将 10 份初 乳加入到 80 份外水相中， 并且在转速为 700rpm 的搅拌作用下， 搅拌 1 小时形成 W/O/W 的复 乳。在 100 份复乳中。
24、加入 20 份的异丙醇， 敞口搅拌 3 小时后， 在 12000rpm 的转速下离心， 将沉淀冷冻干燥即得到的抗菌肽组合物。 0022 实施例 3 称取 1 份的抗菌肽 Plectasin 溶于 99 份的超纯水中制成抗菌肽含量为 1% 内水相。同 时称取 1 份的聚乳酸 - 聚乙醇酸 - 聚乙二醇共聚物溶于 99 份的二氯甲烷中， 制备成中油 相。在 500rpm 的机械搅拌的情况下， 将 10 份内水相加入到 40 份中油相中， 搅拌半个小时， 形成初乳。称取 3 份的聚乙烯醇加入到 97 份的超纯水中， 制成外水相。将 10 份初乳加入 到 80 份外水相中， 并且在转速为 700rpm。
25、 的搅拌作用下， 搅拌 1 小时形成 W/O/W 的复乳。在 100 份复乳中加入 30 份的异丙醇， 敞口搅拌 3 小时后， 在 9000rpm 的转速下离心， 将沉淀冷 冻干燥即得到的抗菌肽组合物。 0023 实施例 4 称取 5 份的抗菌肽 Neuprex 溶于 95 份的超纯水中制成抗菌肽含量为 5% 内水相。同时 称取 1 份的聚乳酸 - 聚赖氨酸共聚物溶于 99 份的二氯甲烷中， 制备成中油相。在 500rpm 的机械搅拌的情况下， 将 10 份内水相加入到 40 份中油相中， 搅拌半个小时， 形成初乳。称 取 3 份的聚乙烯醇加入到 97 份的超纯水中， 制成外水相。将 10 份。
26、初乳加入到 80 份外水相 中， 并且在转速为 700rpm 的搅拌作用下， 搅拌 1 小时形成 W/O/W 的复乳。在 100 份复乳中 加入 20 份的异丙醇， 敞口搅拌 3 小时后， 在 10000rpm 的转速下离心， 将沉淀冷冻干燥即得 到的抗菌肽组合物。 0024 实施例 5 称取1份的抗菌肽Iseganan溶于99份的超纯水中制成抗菌肽含量为1%内水相。 同时 称取 1 份的聚乙二醇 - 聚天冬酸共聚物溶于 99 份的二氯甲烷中， 制备成中油相。在 500rpm 的机械搅拌的情况下， 将 10 份内水相加入到 30 份中油相中， 搅拌半个小时， 形成初乳。称 取 3 份的聚乙烯醇。
27、加入到 97 份的超纯水中， 制成外水相。将 10 份初乳加入到 80 份外水相 说 明 书 CN 102657843 A 7 6/7 页 8 中， 并且在转速为 700rpm 的搅拌作用下， 搅拌 1 小时形成 W/O/W 的复乳。在 100 份复乳中 加入 15 份的异丙醇， 敞口搅拌 3 小时后， 在 8000rpm 的转速下离心， 将沉淀冷冻干燥即得到 的抗菌肽组合物。 0025 实施例 6 称取5份的抗菌肽Brevinin-1溶于95份的pH=7.4的PBS缓冲液中制成抗菌肽含量为 5% 内水相。同时称取 10 份的聚乳酸 - 聚乙二醇 - 聚赖氨酸共聚物溶于 190 份的三氯甲烷 。
28、中， 制备成中油相。在 500rpm 的机械搅拌的情况下， 将 10 份内水相加入到 40 份中油相中， 搅拌半个小时， 形成初乳。称取 3 份的羧甲基纤维素钠加入到 97 份的超纯水中， 制成外水 相。将 10 份初乳加入到 80 份外水相中， 并且在转速为 700rpm 的搅拌作用下， 搅拌 1 小时 形成 W/O/W 的复乳。在 100 份复乳中加入 25 份的异丙醇， 敞口搅拌 3 小时后， 在 11000rpm 的转速下离心， 将沉淀冷冻干燥即得到的抗菌肽组合物。 0026 实施例 7 称取 1 份的抗菌肽 Brevinin-2 溶于 99 份的超纯水中制成抗菌肽含量为 1% 内水相。
29、。 同时称取 1 份的聚乳酸 - 聚己内酯 - 聚赖氨酸共聚物溶于 99 份的二氯甲烷中， 制备成中油 相。在 500rpm 的机械搅拌的情况下， 将 10 份内水相加入到 30 份中油相中， 搅拌半个小时， 形成初乳。称取 3 份的聚乙烯醇加入到 97 份的超纯水中， 制成外水相。将 10 份初乳加入 到 80 份外水相中， 并且在转速为 700rpm 的搅拌作用下， 搅拌 1 小时形成 W/O/W 的复乳。在 100份复乳中加入15份的异丙醇， 敞口搅拌3小时后， 在10000rpm的转速下离心， 将沉淀冷 冻干燥即得到的抗菌肽组合物。 0027 实施例 8 称取1份的抗菌肽Ranacyc。
30、lin溶于99份的超纯水中制成抗菌肽含量为1%内水相。 同 时称取 1 份的聚乳酸 - 聚丝氨酸共聚物溶于 99 份的二氯甲烷中， 制备成中油相。在 700rpm 的机械搅拌的情况下， 将 10 份内水相加入到 30 份中油相中， 搅拌半个小时， 形成初乳。称 取 3 份的聚乙烯醇加入到 97 份的超纯水中， 制成外水相。将 10 份初乳加入到 80 份外水相 中， 并且在转速为 700rpm 的搅拌作用下， 搅拌 1 小时形成 W/O/W 的复乳。在 100 份复乳中 加入 15 份的异丙醇， 敞口搅拌 3 小时后， 在 8500rpm 的转速下离心， 将沉淀冷冻干燥即得到 的抗菌肽组合物。。
31、 0028 实施例 9 称取 5 份的抗菌肽 Esculentin-1 溶于 95 份的超纯水中制成抗菌肽含量为 5% 内水 相。同时称取 1 份的聚乳酸 - 聚谷氨酸共聚物溶于 99 份的二氯甲烷中， 制备成中油相。在 500rpm 的机械搅拌的情况下， 将 10 份内水相加入到 40 份中油相中， 搅拌半个小时， 形成初 乳。称取 3 份的聚乙烯醇加入到 97 份的超纯水中， 制成外水相。将 10 份初乳加入到 80 份 外水相中， 并且在转速为 700rpm 的搅拌作用下， 搅拌 1 小时形成 W/O/W 的复乳。在 100 份 复乳中加入 20 份的异丙醇， 敞口搅拌 3 小时后， 在。
32、 10000rpm 的转速下离心， 将沉淀冷冻干 燥即得到的抗菌肽组合物。 0029 实施例 10 称取 5 份的抗菌肽 Esculentin-2 溶于 95 份的超纯水中制成抗菌肽含量为 5% 内水相。 同时称取 1 份的聚乳酸 - 聚乙二醇 - 聚赖氨酸共聚物溶于 99 份的二氯甲烷中， 制备成中油 相。在 600rpm 的机械搅拌的情况下， 将 10 份内水相加入到 40 份中油相中， 搅拌半个小时， 说 明 书 CN 102657843 A 8 7/7 页 9 形成初乳。称取 3 份的聚乙烯醇加入到 97 份的超纯水中， 制成外水相。将 10 份初乳加入 到 80 份外水相中， 并且在转速为 700rpm 的搅拌作用下， 搅拌 1 小时形成 W/O/W 的复乳。在 100 份复乳中加入 20 份的异丙醇， 敞口搅拌 3 小时后， 在 9000rpm 的转速下离心， 将沉淀冷 冻干燥即得到的抗菌肽组合物。 说 明 书 CN 102657843 A 9 。