本发明是申请号201010114016.7的分案申请
技术领域
本发明是关于一种抑制癌干细胞生长的医药组成物，其除了可抑制一 般癌细胞生长外，还可抑制癌干细胞生长。
背景技术
癌症是位于十大死因之一，且已连续二十七年为居十大死因的榜首。 引发癌症起因主要为：细胞变成异常且持续的自行分裂形成更多的细胞， 则会产生癌症。
有鉴于癌症治疗不易，目前除了使用手术、放射线治疗、化学疗法、 贺尔蒙疗法、生物制剂疗法等西医疗法外，还有人选择以更佳温和的中医 疗法进行癌症治疗。然而，无论是中医或西医疗法，目前市面上使用的抗 癌药物仅能抑制癌细胞的生长，却无法抑制癌干细胞。
潜存于一般肿瘤细胞中的癌干细胞，虽然数量不多，但却具有极高抗 药性，且会由分裂再产生更多的癌细胞形成肿瘤，为癌症治疗的一个瓶颈； 目前西方医学化学治疗药物只可以毒杀一般癌细胞，无法有效抑制癌干细 胞，可以说目前生物医学大部分已知的标准癌症疗法对癌干细胞根本束手 无策。因此，若能有效抑制癌干细胞生长，势必对于治疗癌症极具帮助。
另一方面，中药更是民众普遍认为对身体较温和的治疗药物，并具有 较高的市场接受度。目前虽有一些临床治疗效果显示，部分用于治疗癌细 胞的医药组成物确实可达到控制癌症病情的功效，然而，这些医药组成物 却未经实验证实是否具有对于抑制癌细胞，与抑制癌干细胞的功效。
因此，若能发展出一种医药组成物，其经实验证实后，确实可抑制癌 细胞，尤其是癌细胞中前驱物即癌干细胞的生长，势必可对于癌症治疗具 有相当的帮助。
发明内容
本发明的目的在于提供一种医药组成物，以能抑制癌干细胞的生长。 除此之外，本发明的医药组成物，亦可达到抑制一般癌细胞生长的功效。
为实现上述目的，本发明提供的抑制癌干细胞生长的医药组成物，包 括：一萃取物，该萃取物是将黄莲、黄芩、黄柏、栀子、甘草、及苍朮， 以含水的溶液或含酒精的溶液加热萃取而制得。
于此医药组成物中，黄莲为3至5重量份，黄芩为3至5重量份，黄柏为 3至5重量份，栀子为3至5重量份，甘草为3至5重量份，苍朮为3至5重量份。
此外，本发明还提供另一种抑制癌干细胞生长的医药组成物，包括： 一萃取物，该萃取物是将黄莲、升麻、当归、生地黄及牡丹皮，以含水的 溶液或含酒精的溶液加热萃取而制得。
于此另一医药组成物中，黄莲为3至5重量份，升麻为3至5重量份，当 归为3至5重量份，生地黄为3至5重量份，且牡丹皮为3至5重量份。
于上述的两种医药组成物中，是使用含水或含酒精的溶液加热萃取所 制得。若使用含酒精的溶液，则此含酒精的溶液较佳为20至40％的含酒精 水溶液。此外，于萃取的过程中，可将含中药材的溶液加热至70℃以上。 较佳地是将含中药材的溶液加热至70℃以上萃取，并持续至少60分钟。由 此，可制得本发明的医药组成物。
附图说明
图1是本发明实施例1的肺癌细胞经不同浓度医药组成物处理后，其存 活率的统计图。
图2是本发明实施例1的肺癌细胞与正常细胞经医药组成物处理后，其 存活率的统计图。
图3是本发明实施例1的肺癌细胞经半抑制量的医药组成物处理后，处 理时间与存活率的关系图。
图4是本发明实施例1的于各细胞周期中肺癌细胞所占比率的统计图。
图5是本发明实施例1的G0期肺癌细胞的细胞比率统计图。
图6是本发明实施例1的医药组成物对癌干细胞倍性变化的统计图。
图7是本发明实施例2的肺癌细胞经不同浓度医药组成物处理后，其存 活率的统计图。
图8是本发明实施例2的肺癌细胞与正常细胞经医药组成物处理后，其 存活率的统计图。
图9是本发明实施例2的肺癌细胞经半抑制量的医药组成物处理后，处 理时间与存活率的关系图。
图10是本发明实施例2的于各细胞周期中肺癌细胞所占比率的统计 图。
图11是本发明实施例2的G0期肺癌细胞的细胞比率统计图。
图12是本发明实施例2的医药组成物对癌干细胞倍性变化的统计图。
具体实施方式
于本发明的下述实施例中，是利用A549肺癌细胞株，分析本发明医药 组成物对细胞存活率的影响，并以流式细胞仪检测细胞周期被本发明医药 组成物阻断的步骤，也以染色分析法研究本发明医药组成物促进细胞自戕 的作用，再以流式细胞仪双荧光染色法判断本发明医药组成物对癌干细胞 毒杀效果。
实施例1
取药材黄莲(10g)、黄芩(10g)、黄柏(10g)、栀子(10g)、甘草(10g)、以 及苍朮(10g)，将上述药材分别进行切片处理后，与水一起以加热萃取方式 进行药液的制备，而得一萃取物。其中，加热的条件为70℃，并持续加热 90分钟。所制得的萃取物即为本实施例的医药组成物。
测试例1-细胞存活率测试
将A549肺癌细胞分别以5μl、10μl及50μl实施例1的医药组成物处理72 小时后，以MTT法测定细胞存活率，实验结果如图1所示。其中，横轴代 表控制组以及不同用量的医药组成物；而纵轴为细胞于570nm波长的吸收 值，是用以代表细胞的存活率。
由图1的结果显示，A549细胞在72小时处理后，随着医药组成物的用 量越高，细胞存活率越低。此外，由图1的结果可推知，实施例1的医药组 成物对于A549细胞的半抑制剂量为20μl。
测试例2-细胞存活率测试
接着，将A549肺癌细胞及MRC-5正常细胞，分别以20μl的实施例1的 医药组成物处理72小时后，以MTT法测定细胞存活率，实验结果如图2及 图3所示。其中，图2是实施例1的肺癌细胞与正常细胞经医药组成物处理 后，其存活率的统计图；而图3是实施例1的肺癌细胞经半抑制量的医药组 成物处理后，处理时间与存活率的关系图。
由图2的结果显示，当以半抑制剂量的实施例1医药组成物处理72小时 后，A549肺癌细胞存活率有显著的下降，而MRC-5正常细胞的存活率没有 下降的趋势。因此，实施例1的医药组成物可显著地抑制癌细胞的生长， 却不会对正常细胞生长产生明显的抑制效果。
由图3的结果显示，当以半抑制剂量的实施例1医药组成物处理24、48 及72小时后，相较于未经实施例1的医药组成物处理的A549肺癌细胞，经 实施例1的医药组成物处理的A549肺癌细胞，其存活率有显著的降低。同 时，随着时间的增加，存活率的差异程度越大。
测试例3-细胞周期阻断步骤测试
将上述经半抑制剂量20μl的实施例1的医药组成物，处理A549肺癌细 胞24、48、及72小时后，进行PI染色，而后以流式细胞仪检测肺癌细胞的 DNA含量，以测量肺癌细胞的细胞周期分布情形。实验的定量统计结果如 图4所示，其中，横轴的G0/G1、S、G2/M分别代表细胞周期，而纵轴则代 表各周期细胞所占的比率。
由图4的结果显示，相较于未经实施例1医药组成物处理的对照组肺癌 细胞，经实施例1医药组成物处理的肺癌细胞，无论经24、48、或72小时， G0/G1期的细胞比率均有显著上升。此结果显示，实施例1的医药组成物可 能造成A549肺癌细胞在细胞周期G0/G1停滞的现象。
测试例4-细胞周期阻断步骤测试
将经半抑制剂量20μl的实施例1的医药组成物，处理72小时后的A549 肺癌细胞，以PI及Ki67抗体共染，而后以流式细胞仪检测，以测量G0期肺 癌细胞的细胞比率。其结果如图5所示。
由图5的结果显示，相较于未经实施例1医药组成物处理的癌症细胞， 经实施例1医药组成物处理的癌症细胞，位于G0期的细胞比率有显著的上 升；此结果表示经由实施例1医药组成物处理后，有较多的A549细胞离开 细胞周期，进入不分裂的G0期。
测试例5-癌干细胞比率检测
将经半抑制剂量20μl的实施例1的医药组成物，处理72小时后的A549 肺癌细胞，以Hoechst33342(或同时加入reserpine)染色，而后以流式细胞仪 检测外围族群细胞(side population cell，SP)即癌干细胞比率。通过加入 reserpine可抑制细胞ABCG2运输蛋白将Hoechst33342染剂主动排出细胞 外，由此比较有无加reserpine的结果，可定义出ABCG2表现量高的SP癌干 细胞。
实验的定量统计结果如图6所示，其中纵轴表示倍性变化(Fold change)，即有加reserpine与无加reserpine的比例。由图6的结果显示，经由 实施例1的医药组成物处理后，倍性变化可降至约0.1，表示SP癌干细胞的 细胞量较低，即癌干细胞的比率有显著下降。因此，实施例1的医药组成 物，确实可达到抑制癌干细胞生长的功效。
实施例2
取药材黄莲(10g)、升麻(10g)、当归(10g)、生地黄(10g)、以及牡丹皮 (10g)，将上述药材分别进行切片处理后，与水一起以加热萃取方式进行药 液的制备，而得一萃取物。其中，加热的条件为70℃，并持续加热90分钟。 所制得的萃取物即为本实施例的医药组成物。
测试例6-细胞存活率测试
本测试例的测试方式与测试例1相同，除了使用实施例2的医药组成物 取代实施例1的医药组成物。实验结果如图7所示。
由图1的结果显示，A549细胞在72小时处理后，随着医药组成物的用 量越高，细胞存活率越低。此外，由图7的结果可推知，实施例1的医药组 成物对于A549细胞的半抑制剂量为11μl。
测试例7-细胞存活率测试
本测试例的测试方式与测试例2相同，除了使用以11μl的实施例2的医 药组成物，取代20μl的实施例1的医药组成物。实验结果如图8及图9所示。
由图8的结果显示，当以半抑制剂量的实施例2医药组成物处理72小时 后，A549肺癌细胞存活率有显著的下降，而MRC-5正常细胞的存活率没有 下降的趋势。
由图9的结果显示，当以半抑制剂量的实施例2医药组成物处理24、48 及72小时后，相较于未经实施例2的医药组成物处理的A549肺癌细胞，经 实施例2的医药组成物处理的A549肺癌细胞，其存活率有显著的降低。同 时，随着时间的增加，存活率的差异程度越大。
测试例8-细胞存活率测试
本测试例的测试方式与测试例3相同，除了使用以11μl的实施例2的医 药组成物，取代20μl的实施例1的医药组成物。实验的定量统计结果如图10 所示。
由图10的结果显示，相较于未经实施例2医药组成物处理的对照组肺 癌细胞，经实施例2医药组成物处理的肺癌细胞，无论经24、48、或72小 时，G0/G1期的细胞比率均有显著上升。此结果显示，实施例2的医药组成 物可能造成A549肺癌细胞在细胞周期G0/G1停滞的现象。
测试例9-细胞周期阻断步骤测试
本测试例的测试方式系与测试例4相同，除了使用以11μl的实施例2的 医药组成物，取代20μl的实施例1的医药组成物。实验的定量统计结果如图 11所示。
由图11的结果显示，相较于未经实施例2医药组成物处理的癌症细胞， 经实施例2医药组成物处理的癌症细胞，位于G0期的细胞比率有显著的上 升；此结果表示经由实施例2医药组成物处理后，有较多的A549细胞离开 细胞周期，进入不分裂的G0期。
测试例10-癌干细胞比率检测
本测试例的测试方式系与测试例4相同，除了使用以11μl的实施例2的 医药组成物，取代20μl的实施例1的医药组成物。实验的定量统计结果如图 12所示。
由图6的结果显示，经由实施例2的医药组成物处理后，倍性变化可降 至约0.2，表示SP癌干细胞的表现量较低，即癌干细胞的比率有显著下降。 因此，实施例2的医药组成物，确实可达到抑制癌干细胞生长的功效。
由上述测试例1至10的结果显示，本发明所提供的医药组成物，可同 时达到抑制癌细胞生长与癌干细胞生长的功效。
上述实施例仅是为了方便说明而举例而已，本发明所主张的权利范围 自应以申请的权利要求范围所述为准，而非仅限于上述实施例。