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1、(10)申请公布号 CN 103070899 A (43)申请公布日 2013.05.01 CN 103070899 A *CN103070899A* (21)申请号 201210595305.2 (22)申请日 2012.12.13 A61K 36/288(2006.01) B01D 15/10(2006.01) A61P 31/00(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 7/10(2006.01) A61P 15/14(2006.01) A61P 31/06(2006.01) A61P 17/00(2006.01) A61P 11/04(2006.01) A6。
2、1P 11/00(2006.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 27/02(2006.01) A61P 13/00(2006.01) A23L 1/29(2006.01) (71)申请人 大兴安岭林格贝有机食品有限责任 公司 地址 165000 黑龙江省加格达奇长虹社区鑫 源小区阿加公路道北林格贝集团 (72)发明人 姚德坤 姚德利 张亚红 姚航 黄运生 吴海龙 (54) 发明名称 一种蒲公英总黄酮的分离纯化方法 (57) 摘要 本发明公开一种蒲公英总黄酮的分离纯化方 法， 该方法为 ： 将蒲公英全草粉碎成粗粉， 加 15 倍 量 85的甲醇回流提取 120 分钟， 滤过 。
3、； 滤液， 回 收甲醇， 浓缩至 3 波美， 用体积比 1 1 的盐酸 水将浓缩液pH值调至2.5， 放置20分钟， 滤过 ； 滤 液上广谱型大孔树脂吸附柱， 收集洗脱液， 回收甲 醇， 浓缩干燥得总黄酮半成品 ； 将所得总黄酮半 成品上硅胶层析柱， 并以体积比31的丙酮甲 醇洗杂质， 继用体积比 7 1 的丙酮甲醇洗脱， 收集洗脱液 ； 将所收集到的总黄酮洗脱液进行精 制得蒲公英总黄酮成品， 其含量在 96以上。本 发明方法的最大特点是利用大孔吸附树脂 - 硅胶 层析耦合方便快捷、 原料来源丰富、 生产成本低 廉、 分离效果明显、 提取纯度高。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说。
4、明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 103070899 A CN 103070899 A *CN103070899A* 1/1 页 2 1. 一种蒲公英总黄酮的分离纯化方法， 其特征在于该方法包括如下步骤 ： 将蒲公英全草粉碎成粗粉， 加入机粉质量 15 20 倍量的 85 100甲醇回流提取 120 180 分钟， 滤过 ； 滤液回收甲醇后浓缩至 3 5 波美得浓缩液， 然后用体积比 1 1 的盐酸水溶液将浓缩液 pH 值调至 2.5 3， 放置 20 40 分钟后滤过 ； 滤液上 HPD400、 H。
5、PD100、 DM-130 或 AB-8 广谱型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水洗杂质， 再用 5 20的 甲醇洗杂质， 然后用 50 80的甲醇洗脱， 得总黄酮半成品洗脱液， 总黄酮半成品洗脱 液回收甲醇后浓缩干燥得总黄酮半成品 ； 将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱， 并用丙酮甲 醇的体积比为 1 3 1 的丙酮与甲醇混合物洗杂质， 然后用丙酮甲醇的体积比为 5 7 1 的丙酮与甲醇混合物洗脱， 得总黄酮洗脱液 ； 将总黄酮洗脱液进行精制得蒲公英总黄 酮。 2. 如权利要求 1 所述的蒲公英总黄酮的分离纯化方法， 其特征在于该方法包括如下步 骤 ： 称取粉碎成粗粉的蒲公英全草， 加入粗粉质量 2。
6、0 倍量的 85甲醇回流提取 180 分钟， 滤过 ； 滤液回收甲醇后浓缩至5波美得浓缩液， 然后用体积比11的盐酸水溶液将浓缩 液 pH 值调至 3， 放置 40 分钟后滤过 ； 滤液上 HPD400 型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水洗杂 质， 再用 5的甲醇洗杂质， 然后用 50的甲醇洗脱， 得总黄酮半成品洗脱液， 总黄酮半成 品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得总黄酮半成品 ； 将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱， 并用 丙酮甲醇的体积比为 1 1 的丙酮与甲醇混合物洗杂质， 然后用丙酮甲醇的体积比为 5 1 的丙酮与甲醇混合物洗脱， 得总黄酮洗脱液 ； 将总黄酮洗脱液进行精制得蒲公英总黄 酮。 3。
7、. 如权利要求 1 或 2 所述的蒲公英总黄酮的分离纯化方法， 其特征在于该方法中所述 大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱， 保留液面， 将调 pH 值后的滤液通过吸附柱， 流速每分钟 0.05ml/g 树脂。 4. 如权利要求 1 或 2 所述的蒲公英总黄酮的分离纯化方法， 其特征在于该方法中所述 硅胶层析步骤采用湿法装柱， 保留液面， 将半成品按重量 1 1 拌活化后硅胶， 并将拌好的 混合物至于硅胶柱上方， 洗脱流速每分钟0.1ml/g硅胶。 硅胶活化条件为， 110摄氏度30分 钟。 5. 如权利要求 1 或 2 所述的蒲公英总黄酮的分离纯化方法， 其特征在于该方法中采用 活性炭脱色、 重结。
8、晶方法进行精制， 按 4g/100ml 总黄酮洗脱液加入针剂活性炭， 25 40 摄 氏度搅拌 20 40 分钟， 滤过 ； 滤液回收混合试剂后浓缩干燥得中间体 ； 中间体用 7 9 倍 甲醇 40 摄氏度热溶， 滤过 ： 滤液放凉析出晶体， 抽滤得蒲公英总黄酮成品。 6. 如权利要求 5 所述的蒲公英总黄酮的分离纯化方法， 其特征在于该方法中精制过程 包括如下步骤 ： 按 4g/100ml 洗脱液加入针剂活性炭， 25 摄氏度搅拌 40 分钟， 滤过 ； 滤液， 回收混合试 剂， 浓缩干燥得中间体 ； 中间体用 9 倍甲醇 40 摄氏度热溶， 滤过 ： 滤液放凉析出晶体， 抽滤 得蒲公英总黄。
9、酮成品。 7. 如权利要求 6 所述的蒲公英总黄酮的分离纯化方法， 其特征在于该方法中成品用 7 倍甲醇重结晶， 过滤母液， 回收甲醇， 浓缩干燥得总黄酮半成品。 权 利 要 求 书 CN 103070899 A 2 1/3 页 3 一种蒲公英总黄酮的分离纯化方法 技术领域 ： 0001 本发明属于天然有机化学领域， 涉及一种蒲公英总黄酮的分离纯化方法， 特别是 涉及种利用大孔吸附树脂 - 硅胶层析耦合法富集纯化蒲公英总黄酮的方法。 背景技术 ： 0002 蒲公英又称尿床草， 为菊科植物蒲公英 Toraxacum mongolicum Hand.Mazz.、 碱地 蒲公英 Toraxacum 。
10、borealisinense Kitam。或同属数种植物的干燥全草。全草入药， 开花 前连根采集， 洗净， 晒干。 蒲公英含有多种活性成分， 如蒲公英甾醇、 蒲公英苦素、 黄酮类、 咖 啡酸、 绿原酸和多糖等。 0003 蒲公英总黄酮具有清热解毒、 消肿散结、 利尿通淋功能， 用于乳痈、 瘰疬、 疗疮、 肿 毒、 咽痛、 肺痈、 肠痈、 目赤、 湿热黄疸、 热淋涩痛， 是国家颁布的药食两用品种之一。 近年来， 随着药品和保健食品的发展， 蒲公英提取物的需求越来越大。对于蒲公英总黄酮的研究越 来越多， 李喜凤， 郝哲， 杜云峰。蒲公英中总黄酮提取工艺的研究。时珍国医国药， 2009， 20(7)。
11、 ： 1695， 1696对蒲公英总黄酮的提取工艺做了系统的研究。 公开号为CN10198218IA的 专利申请， 其公开了一种蒲公英提取物的制备方法， 产品含量高达 90以上， 但该提取分离 工艺， 树脂前处理试剂消耗较大， 后期精制中的色谱成本较高， 整体经济效益远不如本专利 涉及的分离纯化方法。 发明内容 0004 本发明目的在于提供一种蒲公英总黄酮的分离纯化方法 ； 本发明目的还在于提供 一种方便快捷、 原料来源丰富、 生产成本低廉、 分离效果明显、 提取纯度高的利用大孔吸附 树脂 - 硅胶层析耦合法富集纯化蒲公英总黄酮的方法。 0005 本发明目的是通过如下技术方案实现的。 0006。
12、 本发明蒲公英总黄酮的分离纯化方法包括如下步骤 ： 0007 将蒲公英全草粉碎成粗粉， 加入粗粉质量 15 20 倍量的 85 100甲醇回 流提取 120 180 分钟， 滤过 ； 滤液回收甲醇后浓缩至 3 5 波美得浓缩液， 然后用体积 比 1 1 的盐酸水溶液将浓缩液 pH 值调至 2.5 3， 放置 20 40 分钟后滤过 ； 滤液上 HPD400、 HPD100、 DM-130 或 AB-8 广谱型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水洗杂质， 再用 5 20的甲醇洗杂质， 然后用 50 80的甲醇洗脱， 得总黄酮半成品洗脱液， 总黄酮半成 品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得总黄酮半成品 ； 将所。
13、得总黄酮半成品上硅胶层析柱， 并用 丙酮甲醇的体积比为 1 3 1 的丙酮与甲醇混合物洗杂质， 然后用丙酮甲醇的体积比 为571的丙酮与甲醇混合物洗脱， 得总黄酮洗脱液 ； 将总黄酮洗脱液进行精制得蒲公 英总黄酮， 其含量在 96以上。 0008 本发明蒲公英总黄酮的分离纯化方法包括如下步骤 ： 0009 称取粉碎成粗粉的蒲公英全草， 加入粗粉质量20倍量的85甲醇回流提取180分 钟， 滤过 ； 滤液回收甲醇后浓缩至 5 波美得浓缩液， 然后用体积比 1 1 的盐酸水溶液将 说 明 书 CN 103070899 A 3 2/3 页 4 浓缩液 pH 值调至 3， 放置 40 分钟后滤过 ； 。
14、滤液上 HPD400 型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水 洗杂质， 再用 5的甲醇洗杂质， 然后用 50的甲醇洗脱， 得总黄酮半成品洗脱液， 总黄酮 半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得总黄酮半成品 ； 将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱， 并用丙酮甲醇的体积比为 1 1 的丙酮与甲醇混合物洗杂质， 然后用丙酮甲醇的体积 比为51的丙酮与甲醇混合物洗脱， 得总黄酮洗脱液 ； 将总黄酮洗脱液进行精制得蒲公英 总黄酮。 0010 所述大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱， 保留液面， 将调 pH 值后的滤液通过吸附 柱， 流速每分钟 0.05ml/g 树脂。 0011 所述硅胶层析步骤采用湿法装柱， 保留液面， 将。
15、半成品按重量 1 1 拌活化后硅 胶， 并将拌好的混合物至于硅胶柱上方， 洗脱流速每分钟 0.1ml/g 硅胶。硅胶活化条件为， 110 摄氏度 30 分钟。 0012 本发明中采用活性炭脱色、 重结晶方法进行精制。按 4g/100ml 洗脱液加入针剂活 性炭， 25 40 摄氏度搅拌 20 40 分钟， 滤过 ； 滤液， 回收混合试剂， 浓缩干燥得中间体 ； 中 间体用 7 9 倍甲醇 40 摄氏度热溶， 滤过 ； 滤液放凉析出晶体， 抽滤得蒲公英总黄酮成品。 0013 本发明中精制过程包括如下步骤 ： 0014 按 4g/100ml 洗脱液加入针剂活性炭， 25 摄氏度搅拌 40 分钟， 。
16、滤过 ； 滤液， 回收混 合试剂， 浓缩干燥得中间体 ； 中间体用 9 倍甲醇 40 摄氏度热溶， 滤过 ； 滤液放凉析出晶体， 抽滤得蒲公英总黄酮成品。 0015 本发明中精制过程中成品用 7 倍甲醇重结晶， 过滤母液， 回收甲醇， 浓缩干燥得总 黄酮半成品。 0016 本发明应用大孔吸附树脂 - 硅胶层析耦合法富集纯化蒲公英总黄酮， 对蒲公英总 黄酮的吸附选择性良好， 吸附快解析也快， 吸附容量较大 ； 原料来源丰富， 生产成本低廉， 分 离效果明显， 提取纯度高， 可以得到含量 45以上的总黄酮半成品和含量 96以上的总黄 酮终产品， 克服了常规提取率相对较低、 提取纯度低的缺点。 00。
17、17 本发明选用理化性质稳定、 表面积较大、 交换速度较快、 机械强度高、 抗污染能力 强、 热稳定性好的大孔吸附树脂， 不容于酸、 碱及有机媒， 对有机物选择性较好， 不受无机盐 类及强离子低分子化合物存在的影响， 可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附总黄酮， 吸附快、 解析也快， 吸附容量较大。 0018 本发明选用硅胶层析法纯化并结合活性炭与重结晶精制， 分离效果更佳。 具体实施方式 ： 0019 实施例 1 ： 0020 称取蒲公英全草 10kg， 粉碎成粗粉， 加 18 倍量 90的甲醇回流提取 140 分钟， 滤过 ； 滤液， 回收甲醇， 浓缩至 4 波美， 用体积比 1 1 的盐。
18、酸水溶液将浓缩液 pH 值调 至 2.8， 放置 40 分钟， 滤过 ； 滤液上 HPD100 型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水洗杂质， 再用 15的甲醇洗杂质， 然后用 70的甲醇洗脱， 得总黄酮半成品洗脱液， 总黄酮半成品洗脱液 回收甲醇后浓缩干燥得总黄酮半成品 ； 将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱， 并用丙酮甲 醇的体积比为21的丙酮与甲醇混合物洗杂质， 然后用丙酮甲醇的体积比为61的丙 酮与甲醇混合物洗脱， 得总黄酮洗脱液2L ； 加入80g针剂活性炭， 30摄氏度搅拌30分钟， 滤 说 明 书 CN 103070899 A 4 3/3 页 5 过 ； 滤液， 回收混合试剂， 浓缩干燥得。
19、中间体 35g ； 中间体用 8 倍甲醇 40 摄氏度热溶， 滤过 ； 滤液放凉析出晶体， 抽滤得蒲公英总黄酮成品 20g， 含量 98。 0021 实施例 2 ： 0022 称取蒲公英全草 15kg， 粉碎成粗粉， 加 20 倍量 95的甲醇回流提取 160 分钟， 滤 过 ； 滤液， 回收甲醇， 浓缩至 5 波美， 用体积比 1 1 的盐酸水溶液将浓缩液 pH 值调至 3， 放置 40 分钟， 滤过 ； 滤液上 HPD400 型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水洗杂质， 再用 10的 甲醇洗杂质， 然后用 60的甲醇洗脱， 得总黄酮半成品洗脱液， 总黄酮半成品洗脱液回收甲 醇后浓缩干燥得总黄酮。
20、半成品 ； 将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱， 并用丙酮甲醇的体 积比为 1 1 的丙酮与甲醇混合物洗杂质， 然后用丙酮甲醇的体积比为 7 1 的丙醇与 甲醇混合物洗脱， 得总黄酮洗脱液 3.5L ； 加入 140g 针剂活性炭， 40 摄氏度搅拌 40 分钟， 滤 过 ； 滤液， 回收混合试剂， 浓缩干燥得中间体 60g ； 中间体用 9 倍甲醇 40 摄氏度热溶， 滤过 ； 滤液放凉析出晶体， 抽滤得蒲公英总黄酮成品 32g， 含量 96.3。 0023 实施例 3 ： 0024 称取蒲公英全草 20kg， 粉碎成粗粉， 加 15 倍量 87的甲醇回流提取 120 分钟， 滤 过 ； 滤液，。
21、 回收甲醇， 浓缩至 3 波美， 用体积比 1 1 的盐酸水溶液将浓缩液 pH 值调至 2.5， 放置 40 分钟， 滤过 ； 滤液上 AB-8 型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水洗杂质， 再用 5的 甲醇洗杂质， 然后用 80的甲醇洗脱， 得总黄酮半成品洗脱液， 总黄酮半成品洗脱液回收甲 醇后浓缩干燥得总黄酮半成品 ； 将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱， 并用丙酮甲醇的体 积比为 3 1 的丙酮与甲醇混合物洗杂质， 然后用丙酮甲醇的体积比为 5 1 的丙酮与 甲醇混合物洗脱， 得总黄酮洗脱液5L ； 加入200g针剂活性炭， 25摄氏度搅拌20分钟， 滤过 ； 滤液， 回收混合试剂， 浓缩干燥得。
22、中间体70g ； 中间体用8倍甲醇40摄氏度热溶， 滤过 ； 滤液 放凉析出晶体， 抽滤得蒲公英总黄酮成品 36g， 含量 97.5。 0025 实施例 4 ： 0026 称取蒲公英全草 5kg， 粉碎成粗粉， 加 20 倍量 98的甲醇回流提取 160 分钟， 滤 过 ； 滤液， 回收甲醇， 浓缩至 3 波美， 用体积比 1 1 的盐酸水溶液将浓缩液 pH 值调至 2.6， 放置 40 分钟， 滤过 ； 滤液上 DM-130 型大孔树脂吸附柱， 吸附完毕用水洗杂质， 再用 5 的甲醇洗杂质， 然后用 50的甲醇洗脱， 得总黄酮半成品洗脱液， 总黄酮半成品洗脱液回收 甲醇后浓缩干燥得总黄酮半成品 ； 将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱， 并用丙酮甲醇的体 积比为 1 1 的丙酮与甲醇混合物洗杂质， 然后用丙酮甲醇的体积比为 7 1 的丙酮与 甲醇混合物洗脱， 得总黄酮洗脱液1200ml ； 加入48g针剂活性炭， 40摄氏度搅拌25分钟， 滤 过 ； 滤液， 回收混合试剂， 浓缩干燥得中间体 20g ； 中间体用 7 倍甲醇 40 摄氏度热溶， 滤过 ； 滤液放凉析出晶体， 抽滤得蒲公英总黄酮成品 12g， 含量 98.2。 说 明 书 CN 103070899 A 5 。