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1、(10)申请公布号 CN 103330764 A (43)申请公布日 2013.10.02 CN 103330764 A *CN103330764A* (21)申请号 201310237357.7 (22)申请日 2013.06.17 A61K 36/736(2006.01) A61K 133/00(2006.01) (71)申请人 黄山神草生物科技有限公司 地址 245200 安徽省黄山市歙县王村镇王村 村 (72)发明人 徐正东 查少怡 徐兵 林翔 (74)专利代理机构 北京科亿知识产权代理事务 所 ( 普通合伙 ) 11350 代理人 汤东凤 (54) 发明名称 一种从绿梅花中提取纯化总。
2、黄酮的方法 (57) 摘要 本发明涉及一种从绿梅花中提取纯化总黄酮 的方法， 以绿梅花为原料， 采用回流提取， 结合大 孔吸附树脂分离技术， 可以快速将绿梅花中总黄 酮类功效成分提取纯化， 总黄酮类物质达到 80% 以上含量。 本发明具有操作步骤简单、 速度快等特 点， 适用于工业化大规模制备绿梅花中总黄酮类 物质， 为绿梅花的开发利用打下基础。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 103330764 A CN 103330764 A *CN10333076。
3、4A* 1/1 页 2 1. 一种从绿梅花中提取纯化总黄酮的方法， 包括以下步骤 ： a) 以绿梅花为原料， 称取一定量干燥的绿梅花， 用 1020 倍 40%60% 乙醇溶液连续 回流提取一次以上， 每次提取时间为 2 个小时以上， 合并提取液 ； b） 将步骤 a） 得到的提取液 40 60减压蒸去乙醇， 过滤得滤液 ； c） 将步骤 b） 中的滤液加入纯水稀释， 做为上样液备用 ； d） 将步骤 c） 中的备用上样液上样 HPD400 树脂柱， 直至有黄酮类物质流出， 停止上样 ； e） 用纯水继续冲洗步骤 d） 中的树脂柱 ； f） 继续用 1020% 乙醇冲洗步骤 e) 中树脂柱 ；。
4、 g） 最后用 6080% 乙醇冲洗步骤 f） 中树脂柱， 从有明显黄色洗脱液流出时开始收集 洗脱液， 收集 24 个柱体积的洗脱液， 蒸干， 得总黄酮含量 80% 的绿梅花总黄酮类物质。 2. 根据权利要求 1 所述的一种从绿梅花中提取纯化总黄酮的方法， 其特征在于所述步 骤 a） 中用 1020 倍 40%60% 乙醇溶液连续回流提取三次， 每次提取时间为 3 个小时。 3. 根据权利要求 1 所述的一种从绿梅花中提取纯化总黄酮的方法， 其特征在于所述步 骤 c） 中用纯水稀释至原滤液体积的 45 倍。 4. 根据权利要求 1 所述的一种从绿梅花中提取纯化总黄酮的方法， 其特征在于所述步 。
5、骤 d） 中上 HPD400 大孔树脂柱的上样速度为 23 个柱体积 / 小时。 5. 根据权利要求 1 所述的一种从绿梅花中提取纯化总黄酮的方法， 其特征在于所述步 骤 e） 中用 34 个柱体积的纯水冲洗树脂柱， 根据权利要求 1 所述的一种从绿梅花中提取纯化总黄酮的方法， 其特征在于所述步骤 f） 中用 45 个柱体积的 1020% 乙醇冲洗树脂柱。 6. 根据权利要求 1 所述的一种从绿梅花中提取纯化总黄酮的方法， 其特征在于所述步 骤 g） 中用 34 个柱体积的 6080% 乙醇冲洗树脂柱。 7. 根据权利要求 1 所述的一种从绿梅花中提取纯化总黄酮的方法， 其特征在于得到的 提取。
6、物中绿梅花总黄酮类物质含量 80% 以上。 权 利 要 求 书 CN 103330764 A 2 1/3 页 3 一种从绿梅花中提取纯化总黄酮的方法 技术领域 0001 本发明属于天然产物化学领域， 具体涉及利用大孔树脂吸附纯化技术快速制备绿 梅花总黄酮的方法。 背景技术 0002 绿梅花， 也称绿萼梅、 白梅花， 为蔷薇科植物梅 Prunus mume (Sieb.) Sieb.et Zucc. 的干燥花蕾。主产于安徽、 江苏、 浙江等地， 其中安徽的黄山市歙县上丰乡现在种植 面积最大， 2013 年干花产量约 80 吨。 中国药典 2005 年版一部收载梅花具有开郁和中、 化痰、 解毒之功。
7、效， 用于郁闷心烦 , 肝胃气痛， 梅核气， 瘰疬疮毒。 中药大辞典 亦将白梅 花作为药用品种 , 记载其具有疏肝， 和胃， 化痰之功效， 用于治疗梅核气， 肝胃气痛， 食欲不 振， 头晕， 瘰疬。 纲目拾遗 记载 ：“安神定魂 , 解痘毒。 ” 赤水玄珠 中记载 ：“治唇上生 疮 ； 白梅瓣贴之， 如开裂出血者即止。 ” 采珍集 中说 ：“梅花瓣 , 雪水煮粥 , 解热毒。专供 疏肝解郁 , 美容艳体。 ” 关于白梅花的化学成分和药理活性国外已有一些相关研究报道 , 研究表明白梅花具 有清除自由基、 抑制醛糖还原酶和抗血小板凝集的作用 , 其主要的活性成分为黄酮类化合 物。 0003 目前在。
8、天然产物总黄酮的提取纯化方面， 国内有很多相关的报道， 提取方法有传 统的溶剂提取以及二氧化碳超临界流体萃取等方法， 纯化有溶剂萃取和层析处理等方法。 但是， 单纯的溶剂萃取等方法， 往往很难得到高含量的总黄酮产品， 张清华在对绿梅花的研 究中， 使用硅胶层析的方法对绿梅花多个组分进行了分离纯化， 得到了多个单一组分。 但是 这种硅胶层析的方法不适合工业化生产， 产品中还会有一些溶剂残留。 0004 此外， 针对不同种类的植物资源， 大孔树脂在总黄酮的提取纯化上也广为使用， 钟 方丽在玉竹总黄酮纯化工艺中， 尝试了 LSA-21、 LSA-10、 AB-8、 LX-36、 D-101、 LSA。
9、-33 型等几 种不同树脂对玉竹总黄酮的纯化效果， 最终确认 D-101 为纯化玉竹总黄酮的理想树脂。不 同树脂对不同植物的总黄酮分离效果不同， 往往有很大区别。绿梅花总黄酮的提取纯化方 面， 目前还没有利用大孔树脂方面的研究报道， 因而摸索开发出适合绿梅花总黄酮的提取 纯化工艺， 对于本地区进一步开发利用绿梅花这种本地资源， 具有重要的实际意义。 发明内容 0005 本发明的目的是提供一种以绿梅花为原料， 经过乙醇溶液回流提取， 再经过大孔 树脂吸附柱处理， 实现快速制备高含量绿梅花总黄酮类物质的工艺方法。 0006 本发明是通过以下方案来实现的 ： 一种从绿梅花中提取纯化总黄酮的方法， 包。
10、括以下步骤 ： a) 以绿梅花为原料， 称取一定量干燥的绿梅花， 用 1020 倍 40%60% 乙醇溶液连续 回流提取一次以上， 每次提取时间为 2 个小时以上， 合并提取液 ； b） 将步骤 a） 得到的提取液 40 60减压蒸去乙醇， 过滤得滤液 ； 说 明 书 CN 103330764 A 3 2/3 页 4 c） 将步骤 b） 中的滤液加入纯水稀释， 做为上样液备用 ； d） 将步骤 c） 中的备用上样液上样 HPD400 树脂柱， 直至有黄酮类物质流出， 停止上样 ； e） 用纯水继续冲洗步骤 d） 中的树脂柱 ； f） 继续用 1020% 乙醇冲洗步骤 e) 中树脂柱 ； g） 。
11、最后用 6080% 乙醇冲洗步骤 f） 中树脂柱， 从有明显黄色洗脱液流出时开始收集 洗脱液， 收集 24 个柱体积的洗脱液， 蒸干， 得总黄酮含量 80% 的绿梅花总黄酮类物质。 0007 进一步， 所述步骤 a） 中用 1020 倍 40%60% 乙醇溶液连续回流提取三次， 每次提 取时间为 3 个小时。 0008 进一步， 所述步骤 c） 中用纯水稀释至原滤液体积的 45 倍。 0009 进一步， 所述步骤 d） 中上 HPD400 大孔树脂柱的上样速度为 23 个柱体积 / 小 时。 0010 进一步， 所述步骤 e） 中用 34 个柱体积的纯水冲洗树脂柱。 0011 进一步， 所述步。
12、骤 f） 中用 45 个柱体积的 1020% 乙醇冲洗树脂柱。 0012 进一步， 所述步骤 g） 中用 34 个柱体积的 6080% 乙醇冲洗树脂柱。 0013 本发明得到的提取物中绿梅花总黄酮类物质含量 80% 以上。 0014 本发明的优点 ： 1） 本发明通过将绿梅花加热回流和树脂柱层析的方法实现绿梅花 中总黄酮类物质的提取和纯化， 操作方便、 简单， 适合于工厂大规模生产。2） 本发明除乙醇 外没有用到其他有害的有机溶剂。3） 发明中采用的设备及相关工艺， 实际操作简单、 易行， 适合规模化生产。 具体实施方式 0015 本发明涉及一种绿梅花中提取纯化总黄酮类物质的方法， 以绿梅花为。
13、原料， 经多 次回流提取后， 合并提取液， 提取液过滤后减压蒸至无醇味， 浓缩的提取液再次过滤。滤液 加纯水稀释， 然后过吸附树脂柱分离纯化， 收集 6080% 乙醇洗脱组分， 蒸干后得含量达 80% 绿梅花总黄酮类提取物。 0016 实施例 1 原料绿梅花中按料液比 1:20 加入浓度为 40% 的乙醇溶液， 70热回流 3 小时， 连续回 流三次。 合并提取液， 50减压蒸至无醇味， 过滤得滤液。 加入3倍体积的纯水稀释后摇匀， 作为上样液。HPD400 树脂装柱， 上样液上样直至有黄酮类物质流出， 停止上样。随后用 3 个 柱体积的纯水冲洗树脂柱。纯水冲洗结束后， 用 4 个柱体积的 1。
14、0% 的乙醇溶液冲洗树脂柱， 冲洗完毕后， 使用 3 个柱体积 80% 乙醇溶液进行洗脱， 共收集 2 个柱体积的洗脱液， 蒸干后， 在 510nm 处以 UV 检测， 得到含量 80% 以上的绿梅花总黄酮类产品。树脂柱洗脱过程中流速 控制在每小时 3 个柱体积。 0017 实施例 2 原料绿梅花中按料液比 1:15 加入浓度为 50% 的乙醇溶液， 80热回流 3 小时， 连续回 流三次。 合并提取液， 50减压蒸至无醇味， 过滤得滤液。 加入4倍体积的纯水稀释后摇匀， 作为上样液。HPD400 树脂装柱， 上样液上样直至有黄酮类物质流出， 停止上样。随后用 4 个 柱体积的纯水冲洗树脂柱。。
15、纯水冲洗结束后， 用 4 个柱体积的 20% 的乙醇溶液冲洗树脂柱， 冲洗完毕后， 使用 3 个柱体积 70% 乙醇溶液进行洗脱， 共收集 2 个柱体积的洗脱液， 蒸干后， 说 明 书 CN 103330764 A 4 3/3 页 5 在 510nm 处以 UV 检测， 得到含量 80% 以上的绿梅花总黄酮类产品。树脂柱洗脱过程中流速 控制在每小时 2 个柱体积。 0018 实施例 3 原料绿梅花中按料液比 1:10 加入浓度为 60% 的乙醇溶液， 80热回流 3 小时， 连续回 流三次。 合并提取液， 50减压蒸至无醇味， 过滤得滤液。 加入3倍体积的纯水稀释后摇匀， 作为上样液。HPD4。
16、00 树脂装柱， 上样液上样直至有黄酮类物质流出， 停止上样。随后用 3 个 柱体积的纯水冲洗树脂柱。纯水冲洗结束后， 用 5 个柱体积的 20% 的乙醇溶液冲洗树脂柱， 冲洗完毕后， 使用 4 个柱体积 60% 乙醇溶液进行洗脱， 共收集 3 个柱体积的洗脱液， 蒸干后， 在 510nm 处以 UV 检测， 得到含量 80% 以上的绿梅花总黄酮类产品。树脂柱洗脱过程中流速 控制在每小时 3 个柱体积。 0019 尽管上文对本发明的具体实施方式给予了详细描述和说明， 但是应该指明的是， 我们可以依据本发明的构想对上述实施方式进行各种等效改变和修改， 其所产生的功能作 用仍未超出说明书所涵盖的精神时， 均应在本发明的保护范围之内。 说 明 书 CN 103330764 A 5 。