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1、10申请公布号CN104069322A43申请公布日20141001CN104069322A21申请号201410248234822申请日20140529A61K36/896200601A61K8/97200601A61P17/00200601A61Q19/0220060171申请人王恩瀚地址510000广东省广州市番禺区内环西路大学城医院科研楼5楼72发明人王恩瀚54发明名称具有面部美白淡斑作用的药物组合物及其制备方法与应用57摘要本发明公开了一种具有面部美白淡斑作用的药物组合物及其制备方法与应用，本发明原材料均为天然活性提取物，对皮肤无刺激性。所述具有面部美白淡斑作用的药物组合物，是采用如。
2、下的原料制备的以小红参、火棘果实、毛喉鞘蕊花、桑椹、延龄草和虎耳草的总质量计，小红参、火棘果实、毛喉鞘蕊花、桑椹、延龄草和虎耳革，任一组分的质量百分比含量均不超过总质量的40。本发明的药物组合物配方新颖合理，制备方法简单。细胞实验、动物实验和人体试验证实本发明的药物组合物面部美白淡斑的效果显著，安全，对皮肤无刺激性和致敏性，具有良好的社会和经济效益。51INTCL权利要求书1页说明书14页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书14页10申请公布号CN104069322ACN104069322A1/1页21具有面部美白淡斑作用的药物组合物，其特征在于是以小红参、火棘。
3、果实、毛喉鞘蕊花、桑椹、延龄草和虎耳草为原料制备的，且任一组分的重量百分含量均不超过总量的40。2根据权利要求1所述的具有面部美白淡斑作用的药物组合物，其特征在于，是以如下质量份数的原料制备的小红参160份，火棘果实160份，毛喉鞘蕊花160份，桑椹160份，延龄草160份，虎耳草160份。3根据权利要求2所述的具有面部美白淡斑作用的药物组合物，其特征在于，是以如下质量份数的原料制备的小红参150份，火棘果实150份，毛喉鞘蕊花150份，桑椹150份，延龄草150份，虎耳草150份。4根据权利要求13任一项所述的具有面部美白淡斑作用的药物组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤第一步将上述的各。
4、个原料置于体积浓度为2080的乙醇中浸泡，浸泡用的乙醇用量为各个原料总重量的10200倍，过滤，得浸泡液第二步浸泡液浓缩至原重量的25，浓缩液用大孔树脂吸附，再用体积浓度为595的乙醇洗脱，收集洗脱液，即为所述的具有面部美白淡斑作用的药物组合物。5根据权利要求4所述的的具有面部美白淡斑作用的药物组合物的制备方法，其特征在于第一步中，所述的乙醇浸泡时间为248小时；或各个原料先用乙醇浸泡248小时，残渣再用乙醇浸泡248小时，合并浸泡后的溶液，得浸泡液。6根据权利要求4所述的具有面部美白淡斑作用的药物组合物的制备方法，其特征在于第二步中，所述洗脱用乙醇的体积浓度为4095。7根据权利要求13任一。
5、项所述的具有面部美白淡斑作用的药物组合物的用途，其特征在于用于制备皮肤保养化妆品或皮肤的治疗性药物。8皮肤保养化妆品，包括权利要求13任一项所述的具有面部美白淡斑作用的药物组合物和化妆品领域使用的辅料。9皮肤的治疗性药物，包括权利要求13任一项所述的具有面部美白淡斑作用的药物组合物和医学上可接受的载体。权利要求书CN104069322A1/14页3具有面部美白淡斑作用的药物组合物及其制备方法与应用技术领域0001本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，特别是一种具有面部美白淡斑作用的化妆品用药物组合物及其制备方法，适用添加于膏类、霜类、乳类、液类香水除外的化妆品。背景技术0002俗话说“一白遮三。
6、丑”，花容月貌、面白如玉，自古为人们所向往。东方女性历来崇尚白皙的肌肤，美白肌肤是每个女孩子所追求的。由欧莱雅生命科学研究所皮肤学专家德拉夏里教授主持的“中国人皮肤类型学”报告指出“与欧洲女性相比，中国女性在皮肤老化过程中，首先表现出来的是色斑问题，而且色素沉着会随着年龄的增加而增加”。因此在中国，祛斑美白用品一直畅销，其销售额不断创出新高，目前已成为护肤化妆品的主流品种之一。美白化学物是指通过作用于皮肤黑色素的形成、代谢途径的某个阶段，控制、抑制黑色素生成，从而降低皮肤色度或减轻色素沉着，以达到皮肤美白为目的的天然或人工合成的化学物。目前国内外用于化妆品的美白化学物主要为氢醌、曲酸、果酸、熊。
7、果苷和维生素C衍生物等，氢醌和汞盐能达到迅速美白效果，但其毒副作用大，长期使用会造成皮肤永久脱色和接触性皮炎。长期使用曲酸具有细胞毒作用，并可增加卵巢细胞染色体互换及染色体畸变的发生率，但曲酸衍生物美白作用更强，且毒副作用更小，目前的美白化妆品多以此为有效成分；熊果苷作用温和，但使用剂量过大有和曲酸相似的毒副作用。维生素C衍生物则有稳定性差和价格昂贵等缺点。NERYAO，MUSAR，KHATIBS，ETA1CHALCONESPOTENTTYROSINASCINHIBITORSTHEEFFECTOFHYDROXYLPOSITIONSANDNUMBERSJPHYTOCHEMISTRY，2004,6。
8、5138913950003由于合成化学制品存在刺激性、过敏性等安全问题，而植物美白产品不但具有纯天然性，来源的广泛性，品种丰富无毒、无副作用等优点，尚具抑菌、皮脂和角质调节、增强机体局部免疫等诸多功能，因此各化妆品公司纷纷投入重金开发新型植物美白产品。SMITN，VICANOVAJ，PAVELSTHEHUNTFORNATURALSKINWHITENINGAGENTSJINTJMOLSCI,2009,101253265349；KAMAKSHIRFAIRNESSVIAFORMULATIONSAREVIEWOFCOSMETICSKINIIGHTENINGINGREDIENTSJJCOSMETSCI,。
9、2012,6314354中药美容已有二千年历史，积累了丰富的经验，目前，在日本含天然中草药的化妆品已占整个化妆品市场的50以上。因此，这方面的研究一直是化妆品领域研发的热点。舒树苗、肖峰、潘勤美白中药与植物药的研究进展国外医药植物药分册，2007,226252255如专利2008100244119，该专利公开了一种具有美白功能的中药组合物及其应用，该中药组合物由黄芩、虎杖、丹皮提取物复配而成。如专利2009101922744，该专利公开了一种美白祛斑霜及其制备方法，活性成分为中药提取液，中药由如下中药百分数的组分组成手参555、人参花1535、合欢花515、金银花515、玫瑰花1520、菊花5。
10、10。如专利2010102613929，该专利公开了一种用于面部美白淡斑的组合物、植物萃取美白组合物与具有美白功能的组合物，该组合物包括有效量的亚精胺衍生物，以及美容或药说明书CN104069322A2/14页4理学上可接受的媒介物。发明内容0004本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种具有面部美白淡斑作用的药物组合物及其用途。0005本发明所述的具有面部美白淡斑作用的药物组合物，是以小红参、火棘果实、毛喉鞘蕊花、桑椹、延龄草和虎耳草为原料制备的，且任一组分的重量百分含量均不超过总量的40；0006具有面部美白淡斑作用的药物组合物，是以如下质量份数的原料制备的小红参160份，火棘。
11、果实160份，毛喉鞘蕊花160份，桑椹160份，延龄草160份，虎耳草160份。0007具有面部美白淡斑作用的药物组合物，是以如下质量份数的原料制备的小红参150份，火棘果实150份，毛喉鞘蕊花150份，桑椹150份，延龄草150份，虎耳草150份。0008优选的，所述具有面部美白淡斑作用的药物组合物，是以如下重量份数的原料制备的0009小红参140份0010火棘果实140份0011毛喉鞘蕊花140份0012桑椹140份0013延龄草140份0014虎耳草140份0015优选的，所述具有面部美白淡斑作用的药物组合物，是以如下重量份数的原料制备的0016小红参235份0017火棘果实235份00。
12、18毛喉鞘蕊花235份0019桑椹235份0020延龄草235份0021虎耳草235份0022优选的，所述具有面部美白淡斑作用的药物组合物，是以如下重量份数的原料制备的0023小红参830份0024火棘果实830份0025毛喉鞘蕊花830份0026桑椹830份0027延龄草1030份0028虎耳草1030份0029最优选的，是以如下重量份数的原料制备的说明书CN104069322A3/14页50030小红参10份0031火棘果实10份0032毛喉鞘蕊花10份0033桑椹10份0034延龄草10份0035虎耳草10份0036最优选的，是以如下重量份数的原料制备的0037小红参8份0038火棘果实。
13、8份0039毛喉鞘蕊花8份0040桑椹12份0041延龄草12份0042虎耳草12份0043最优选的，是以如下重量份数的原料制备的0044小红参8份0045火棘果实8份0046毛喉鞘蕊花8份0047桑椹15份0048延龄草15份0049虎耳草15份0050最优选的，是以如下重量份数的原料制备的0051小红参8份0052火棘果实10份0053毛喉鞘蕊花10份0054桑椹12份0055延龄草12份0056虎耳草12份0057最优选的，是以如下重量份数的原料制备的0058小红参8份0059火棘果实8份0060毛喉鞘蕊花8份0061桑椹10份0062延龄草10份0063虎耳草15份0064本发明所述的。
14、具有面部美白淡斑作用的药物组合物的制备方法，包括以下步骤00651将上述的各个原料置于体积浓度为2080的乙醇中浸泡248小时，浸泡用的乙醇用量为各个原料总重量的10200倍，过滤，得浸泡液；0066优选的，过滤残渣再用体积浓度为2080的乙醇浸泡248小时，合并浸泡后的溶液，得浸泡液。说明书CN104069322A4/14页600672浸泡液浓缩至原重量的25，浓缩液用大孔树脂吸附，再用体积浓度595的乙醇多次洗脱，收集洗脱液，即为所述的具有面部美白淡斑作用的药物组合物；0068优选的，乙醇的体积浓度为4095；0069所述大孔树脂采用美国罗姆哈斯公司的XAD2型大孔树脂，XAD2型大孔树脂。
15、是以苯乙烯和丙酸酯为单体，加入乙烯苯为交联剂，甲苯、二甲苯为致孔剂，它们相互交联聚合形成了多孔骨架结构。浸泡液浓缩的方法为常规的减压浓缩。0070试验证明，本发明的具有面部美白淡斑作用的药物组合物，具有等多重作用，能够用于制备抑制色素沉着皮肤保养的化妆品和皮肤的治疗性药物；0071本发明还涉及一种皮肤保养化妆品，包括所述具有面部美白淡斑作用的药物组合物和化妆品领域使用的辅料；0072本发明还涉及一种皮肤的治疗性药物，包括权利要求所述的具有面部美白淡斑作用的药物组合物和医学上可接受的载体。0073尤其可以用于制备皮肤护理化妆品，包括霜剂、乳液、化妆水、凝胶剂、面膜、涂搽剂或洗剂；但不局限于上述剂。
16、型，可按照护肤品工业领域中已知的方法，将上述药物组合物按已知方法除菌后制成各种不同的外用制剂。0074制备皮肤护理化妆品时，可将制得的提取液组合物，经减压浓缩至原重量的1050，得到组合物浓缩液，与已知的化妆品以及药品的基质或者辅料、载体、添加剂相混合，按照常规的方法进行制备，其中，所述组合物浓缩液占化妆品总重量的510。0075本发明根据中药理论，从大量的天然药物中，选用了小红参、火棘果实、毛喉鞘蕊花、桑椹、延龄草和虎耳草为原料，制备获得了所述的具有面部美白淡斑作用的组合物，其中，所述的小红参选用茜草科茜草属植物云南茜草RUBIAYUNNANENSISFRANCHDIELS的干燥根，火棘果实。
17、选用蔷薇科苹果亚科火棘属的常绿野生小灌木植勿PYRACANTHAFORTUNEANAMAXIMLI的果实；毛喉鞘蕊花选用唇形科植物鞘蕊花属植物COLEUSFORSKOHLIIWILDBRIQ的干燥花；桑椹选用桑科植物桑MORUSALBAL的干燥果穗；延龄草选用百合科延龄草属植物TRILLIUMTSCHONOSKIIMAXIM的干燥根；虎耳草选用虎耳草科植物虎耳草SAXIFRAGGASTOLONIFERACURT的全草。0076根据中国药典和文献记载0077小红参是云南特产药材，其为茜草科茜草属植物云南茜草RUBIAYUNNANENSISFRANCHDIELS的根，又名滇紫参，小活血，小红药。云。
18、南中草药记载其能“温经通络，调养气血”。小红参具有温经通络、活血祛风、软坚破积和养血补血之功效，小红参临床应用广泛，毒副作用小，用于治疗风寒湿痹、皮下结节、跌打损伤和血痰等多种疾病。现代研究证实小红参对银屑病有显著的治疗作用，能提高皮肤活性，并有抗癌功效。0078火棘果实为蔷薇科苹果亚科火棘属的常绿野生小灌木植物PYRACANTHAFORTUNEANAMAXIMLI的果实，火棘果实又名赤阳子、火把果等，主要分布在我国东南、西南及西北等区域的山地及丘陵地带。火棘果实可食用，性味甘酸，具有健脾消积、生津止渴等功效。火棘果实提取物富含芦丁和金丝桃苷等黄酮类化合物，此外也含有氨基酸、多种无机盐及微量元。
19、素等。国外曾报道火棘果实具有显著的美白作用，并以此为原料成功开发出美白化妆品。说明书CN104069322A5/14页70079毛喉鞘蕊花为唇形科植物鞘蕊花属植物COLEUSFORSKOHLIIWILDBRIQ的花，毛喉鞘蕊花被国内植物学家界定为珍稀植物，我国野生毛喉鞘蕊花国内资源极为稀少，它在我国仅分布于云南省的东北部地区海拔2300米的旷野山坡上有野生植株。毛喉鞘蕊花在古印度被称为万灵药，长期以来在印度民间以全草煎服，用于心脏病、腹痛、呼吸紊乱、失眠、痉挛等病的治疗，疗效显著。近年来毛喉鞘蕊花被发现可以治疗青光眼和皮肤病，从而引起科学家的广泛关注。毛喉鞘蕊花化学成分多样，已经分离的化学成分。
20、主要有萜类、黄酮、甾醇、挥发油等。0080桑椹为桑科植物桑MORUSALBAL的干燥果穗，中医认为桑葚味甘酸，性微寒，入心、肝、肾经，为滋补强壮、养心益智佳果。具有补血滋阴，生津止渴，润肠燥等功效，主治阴血不足而致的头晕目眩，耳鸣心悸，烦躁失眠，腰膝酸软，须发早白，消渴口干，大便干结等症。0081延龄草是百合科延龄草属植物TRILLIUMTSCHONOSKIIMAXIM的干燥根，又名头顶一颗珠，主要生长在海拔2000M左右的山坡林下草丛中，功能镇静安神、活血止血、解毒，主治头晕目眩、高血压、神经衰弱。延龄草富含多种甾体皂苷和氨基酸，是提取甾体皂苷的重要原料。0082虎耳草为虎耳草科植物虎耳草S。
21、AXIFRAGGASTOLONIFERACURT的全草。微苦、辛、寒、有小毒，祛风，清热，凉血解毒。治风疹，湿疹，中耳炎，丹毒，咳嗽，吐血，肺痈，崩漏，痔疾。近年来，人们发现虎耳草花中富含熊果苷，能有效抑制黑色素母细胞的活跃程度，就像给黑色素催眠一样，有美白，淡斑的功效。0083目前，国内外尚未见将小红参、火棘果实、毛喉鞘蕊花、桑椹、延龄草和虎耳草提取物的组合物用于具有面部美白淡斑作用的相关报道。0084综上所述，本发明人阅读了大量文献，依据皮肤美白剂的基本原理，利用细胞模型进行高通量筛选，终于发现具有显著肌肤美白作用的药物组合物。本发明的药物组合物经人体临床试验证实效果显著，安全性好。所涉及。
22、的成分具有效果明确、安全性好、无任何副作用和在化妆品配方中稳定的特点；与现有同类产品相比，具有效果显著的特点，是一种新型具有面部美白淡斑作用的有效天然药物提取物的组合物。具体实施方式0085实施例10086在室温下，取小红参、火棘果实、毛喉鞘蕊花、桑椹、延龄草和虎耳草各10公斤，用体积浓度70的乙醇600公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度70的乙醇600公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后，减压浓缩20倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度50的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。0087实施例20088在室温。
23、下，取小红参8公斤、火棘果实8公斤、毛喉鞘蕊花8公斤、桑椹12公斤、延龄草12公斤和虎耳草12公斤，用体积浓度50的乙醇1200公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度50的乙醇1200公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后，减压浓缩40倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度40的说明书CN104069322A6/14页8乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。0089实施例30090在室温下，取小红参8公斤、火棘果实8公斤、毛喉鞘蕊花8公斤、桑椹15公斤、延龄草15公斤和虎耳草15公斤，用体积浓度80的乙醇1000公斤浸。
24、泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度80的乙醇1000公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩25倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度60的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。0091实施例40092在室温下，取小红参8公斤、火棘果实10公斤、毛喉鞘蕊花10公斤、桑椹12公斤、延龄草12公斤和虎耳草12公斤，用体积浓度30的乙醇2000公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度30的乙醇2000公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩50倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度5。
25、0的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。0093实施例50094在室温下，取小红参8公斤、火棘果实8公斤、毛喉鞘蕊花8公斤、桑椹10公斤、延龄草10公斤和虎耳草15公斤，用体积浓度60的乙醇1200公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度60的乙醇1200公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩30倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度80的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。0095实施例60096将实施例1所获得的液体采用减压浓缩，浓缩至原重量的1050，得药物组合物浓缩液，用。
26、于制备具有面部美白淡斑作用的精华液，组分的重量百分比如下00970098生产工艺搅拌下将A和B相分别加热至70，至全部溶解混合均匀，然后在70说明书CN104069322A7/14页9条件下将B相加入A相中，至形成W/Q型乳剂。搅拌均匀后，冷却至室温即得。0099实施例70100药物组合物具有面部美白淡斑作用的细胞实验研究报告下述实验中，所用的药物提取物的组合物为实施例1的药物组合物。01011材料与方法010211试剂与仪器RPMI1640，GIBCO公司产品；胎牛血清FBS，杭州四季青公司产品；B16小鼠黑素瘤细胞，中科院细胞所提供，维生素C由北京贝丽莱斯生物化学公司提供，符合化妆品原料药。
27、标准；左旋谷氨酰胺、左旋多巴LDOPA、二甲基亚砜DMSO、胰蛋白酶，TRITONX100，均为SIGMA产品，噻唑兰MTT，SERVA产品；CO2培养箱，美国BARNSTEAD公司；TDL40B离心机，上海安亭科学仪器厂；细胞培养板，美国GREINER产品；DG5031酶联免疫检测仪，华东电子管厂产品。010312方法0104121细胞培养B16黑素瘤细胞株购于中科院细胞所，待细胞生长至融合状态，经025胰蛋白酶消化传代，接种于25CM2培养瓶中，用RPMI1640培养液置于37CO2培养箱，5CO2饱和湿度环境进行培养。每一次实验取自同一传代细胞，初始接种细胞浓度为105左右。细胞接种6H。
28、后，添加受试美白剂，各设5个剂量组，于第2天更换相同的含药培养液，连续培养3D后收获细胞，用苔盼蓝染色计数细胞总数，然后将细胞用于以下实验中。0105122试剂配制与实验分组取本发明的美白提取物05G先用1MLDMSO溶解，加新鲜配制的1640培养液稀释至终浓度为5、05、005、0005、00005G/L，DMSO的终浓度低于1。维生素C直接加入培养液稀释至终浓度，稀释浓度分别为101、102、103、104、105MOL/L。空白对照组仅加入稀释药物所用的相应溶媒。0106123酪氨酸酶活性抑制率检测以LDOPA为底物，参考MAEDA等的方法测定细胞酪氨酸酶活性。调整黑素细胞密度，以104。
29、个/孔接种于96孔板，6H后换液，每孔加入200L的药物溶液，每个浓度设置4个复孔，对照组加入新鲜培养液代替药物溶液，5CO2，37孵育3D后中间换液一次，弃去上清液，PBS洗3次，每孔加45L1TRITONX100溶液，震荡10MIN以溶解细胞，每孔加001MOL/L的LDOPA，37孵育60MIN，于450NM波长处比色，以空白孔调零，在酶联免疫检测仪测各孔吸光度值，每一实验重复3次。酪氨酸酶活性抑制率1各浓度平均吸光度值对照组平均吸光度值100，使用SPSS130进行曲线拟合和计算IC50值。0107124黑素合成抑制率检测黑素含量采用VICTORIA的方法测定，调整黑素细胞密度，以51。
30、05个/孔接种于6孔板，6H后换液，每孔加入1ML的药物溶液，每个浓度设置3个复孔，对照组加入新鲜培养液代替药物溶液，5CO2，37孵育3D后中间换液一次，弃去上清液，每孔加入025胰酶1ML于室温下消化2MIN，加入4ML培养液中止消化，吹打成单细胞悬液，取20L作细胞计数，其余细胞悬液1500R/MIN离心5MIN，弃上清液，加入1M11NNAOH溶液，震荡5MIN，80水浴加热1H后，转移至96孔板，每孔加100L，选择405NIH波长，以空白孔调零，在酶联免疫检测仪上测吸光度值，每一实验重复3次。黑素合成抑制率1药物孔吸光度值药物孔细胞密度对照孔吸光度值对照孔细胞密度100，使用SPS。
31、S130进行曲线拟合和计算IC50值。0108125MTT比色法检测细胞增值抑制率取指数生长期的B16细胞，经消化分散制说明书CN104069322A8/14页10备单细胞悬液，调整细胞浓度，将细胞接种至96孔细胞培养板，初始细胞接种浓度为105个/孔，液体量200L/孔，孵育6H待细胞贴壁后，吸去培养液，加入含有不同浓度药物培养液，每个浓度设置6复孔，继续培养3D中间换液一次。测定细胞增殖率时，向每孔加入05MTT贮液20L，置CO2孵箱继续培养4H。此时MTT经线粒体膜琥珀酸脱氢酶转化为甲替FORMAZAN，显微镜下可见细胞内外有大量紫红色针状结晶，小心吸取培养液，每孔加入2001DMSO。
32、，培养板振摇10MIN，使甲替结晶完全溶解。立即置酶标仪于570NIH测光吸收值，每一实验重复3次，用下列公式计算各组细胞增殖抑制率。细胞增殖抑制率1实验组570/对照组570100，使用SPSS130进行曲线拟合和计算IC50值。0109126统计分析对各组中的IC50值采用SPSS进行方差分析，进行样本均数间的比较。0110结果0111表1药物组合物对美白作用的体外评价01120113注与维生素C组比较，P005。0130表2不同部位使用药物组合物不同时间色差E的比较01310132注与使用前比较，P005。这充分说明，志愿者在使用本发明的药物组合物后，其颈部的A值下降，L值持续上升，B值。
33、上升，表明肤色向黄白方向变化；C值升高说明连续使用该品牌美白化妆品后使得肤色黄白饱和度增加；H值变化不大，说明肤色的变化较一致。0134表3使用药物组合物不同时间颊部皮肤颜色量值的比较01350136注与使用前比较，P005，P001。0137产品安全性评估治疗前后均未发生不良反应，无1例患者脱落。整个研究过程未发生与该试验产品相关的不良反应事件。0138采用其它实施例的具有面部美白淡斑作用的药物组合物进行临床试验，结果也证明具有相同的作用。0139实施例90140具有面部美白淡斑作用的药物组合物的皮肤刺激性实验研究报告通过动物试验，来观察本发明的具有面部美白淡斑作用药物组合物对家兔皮肤的刺激。
34、性。下述实验中，所用的药物提取物的组合物为实施例4的药物组合物。01411动物014216只普通级成年健康新西兰兔，雌雄各半，25KG35KG，购买于广东省医学实验动物中心，实验动物生产许可证号为SCXK粤20080002，动物合格证号粤2012A008。饲养于新南方药物安全性评价中心普通区动物房F4房实验动物房合格证号0060590。，试验期间，室温20222，湿度4067，照明12H/12H昼夜明暗交替。本实验中所使用的药物组合物为本发明实施例1的药物组合物，浓度为10G生药/ML。01432方法0144依据中华人民共和国卫生部化妆品卫生规范2007年版，采用同体自身左右侧对比法，左侧给予。
35、空白基质生理盐水，右侧给予10G/ML的药物组合物。给药前准备给药前24H，采用剃毛法去除家兔背部脊柱两侧被毛，去毛范围左、右各约3CM3CM，涂抹面积25CM25CM，勿损伤皮肤。给药取受试物约05ML涂抹在右侧皮肤上，左侧涂生理盐水作为对照，每天涂抹1次，连续14D。从第二天开始，每次涂抹前要被毛。将药液05ML浸透25CM25CM的双层医用纱布片，覆盖于已去毛的皮肤，覆盖一层硫酸纸，再用无刺激性胶布和固定带固定。固定约4H后去除受试物，用温水清除残留受试物。一小时后观察说明书CN104069322A1211/14页13结果。3结果0145在本实验条件下，连续涂抹10G/ML的药物组合物1。
36、4天对家兔皮肤无刺激性反应具体见表4。0146表410G/ML药物组合物对家兔多次皮肤刺激性试验结果014701480149实施例100150具有面部美白淡斑作用的药物组合物的皮肤致敏性实验研究报告通过动物试验，来观察本发明的具有面部美白淡斑作用药物组合物对HARTLEY豚鼠皮肤的致敏性。本实验中所使用的药物组合物为本发明实施例5的药物组合物。01511动物0152选用普通级HARTLEY豚鼠50只，雌雄各半，体重范围180250G，购买于广东省医学实验动物中心，实验动物生产许可证号为SCXK粤20080002，动物合格证号粤2012A016。饲养于新南方药物安全性评价中心普通区动物房F4房实。
37、验动物房合格证号0060590。，试验期间，室温2022，湿度4067，照明12H/12H昼夜明暗交替。说明书CN104069322A1312/14页14按编号对豚鼠进行皮肤染色，用饱和苦味酸溶液黄色染色标记个位数，用2硝酸银溶液咖啡色染色标记十位数；按性别分开饲养，每一笼盒放5只豚鼠，笼盒外贴上标签，标示专题编号、动物类别、组别、性别、给药途径、笼号、动物编号及预计试验起止日期等信息。本实验中所使用的药物组合物为本发明实施例1的药物组合物，浓度为10G生药/ML。01532方法0154依据国家药品注册管理办法、化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则。随机分为阴性对照组、阳性对照组、药。
38、物组合物组，其中阴性对照组10只豚鼠，其余各组20只豚鼠。各组豚鼠雌雄各半。先后进行诱导致敏和激发接触实验，两个实验之间相隔10天的洗脱期。诱导接触实验方法为前24H备皮，剪去豚鼠脊柱两侧各2CM2CM区域的被毛。阳性对照组取252,4二硝基氯代苯的丙酮溶液02G，分别用两层纱布25CM25CM和一层保鲜薄膜覆盖，以无刺激纱布覆盖6H，移去覆盖物，用温水清除残留受试样品，第7天和第14天，以同样方法重复一次；在阴性对照组动物相同部位涂蒸馏水04ML，药物组合物组涂05ML。按同样的步骤进行诱导接触。激发接触则是在末次给受试物致敏接触后14天即实验第28天，在实验组和阴性对照组豚鼠背部备皮处涂敷。
39、05ML，封包和固定，6H后去掉受试物，立刻观察，然后于24H、48H、72H再次观察皮肤过敏反应情况。阳性对照组用252,4二硝基氯代苯的丙酮溶液02G，阴性对照组动物相同部位涂蒸馏水04ML。在致敏后1H、24H及激发后24H和48H观察给药局部皮肤红斑、水肿和其他异常反应。按皮肤过敏反应评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分，并计算各组的过敏反应发生率，按皮肤过敏性评价标准判断过敏反应发生程度。过敏反应发生率组内出现皮肤红斑、水肿或全身过敏反应的动物数/该组动物总数100。01553结果0156激发接触实验后24、48H，由不知道实验内容的专业人员根据化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导。
40、原则评判是否出现皮肤致敏反应表5，致敏反应评分2分时，判定该动物皮肤致敏反应阳性，计算致敏率2分动物数/该组动物总数100，并按化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则中皮肤致敏反应试验分级标准判定本发明的药物组合物对豚鼠皮肤的致敏强度表6。0157表5皮肤致敏反应程度评分标准0158说明书CN104069322A1413/14页150159首先计算每一观察时间点各组积分均值，然后计算观察期限内每天每只动物积分均值，按化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则进行评价。按下列公式计算每天每只动物平均积分。0160表6皮肤致敏反应程度分级标准01610162激发后24H、48H，阴性对照组、药物组合物组的豚鼠激发部位皮肤均未出现红斑、水肿情况，也未出现其它异常反应，过敏反应发生率均为0，过敏反应评价均为未见皮肤过敏反应。0163激发后24H，阳性对照组豚鼠激发部位皮肤全部出现红斑，过敏反应发生率为100，过敏反应评价为极强致敏。激发后48H，阳性对照组豚鼠激发部位皮肤仍全部有红斑，过敏反应发生率为100，过敏反应评价仍为极强致敏。01644结论说明书CN104069322A1514/14页160165在本实验条件下，药物组合物对HARTLEY豚鼠皮肤进行3次致敏和1次激发后未见皮肤过敏反应。说明书CN104069322A16。