高稳定性化学发光底物及检测方法.pdf

高稳定性化学发光底物及检测方法
    本发明涉及一种超微量分析方法。特别是涉及化学发光分析技术。

    化学发光分析技术是现代微量分析方法之一，由于其灵敏度高(可达10-18mol)、简便快速(计数1秒/管)、线性好(可两点校准标准曲线)、有效期长(可达1年)、安全无害(无放射性和致畸物污染)等优点而成为取代放免和酶联的重要技术。以辣根过氧化物酶(HRP)标记的化学分析法是在免疫反应完成后，加入HRP的底物H2O2，在碱性条件下，HRP催化H2O2，使发光底物鲁咪诺发生化学反应而发光，用光信号测量仪记录这种光信号(一般测1秒，单位为CPS)。这种底物的一个配方是：H2O2(7.3mM)、对碘苯酚(0.37mM)、鲁咪诺(3.1mM)。由于该配方使用中是直接加入H2O2，所以存在着两个突出的缺点：一是H2O2本身不稳定，随放置时间的延长而逐步被破坏；二是产生的光信号不稳定，达到高峰以后，随时间而很快衰减，从加样到检测光信号的时间，对每个样品必须严格控制，否则会对检测结果造成或大(竞争法)或小(夹心法)的偏差而导致误检。

    本发明的目的是提供一种既适用于自动化分析，也适用于手工分析，成本低和光信号稳定性好的高稳定性化学发光底物及检测方法。

    本发明所述的高稳定性化学发光底物，该化学发光底物由A、B两种液体组成，并且在HRP标记的免疫反应后被加入混匀，其中A液为氧化酶类，B液为氧化酶的相应底物。

    本发明所述的高稳定性化学发光底物检测方法，以辣根过氧化物酶HRP标记的化学发光免疫反应完成后，加入HRP的底物，采用内源H2O2的方式，将可产生H2O2的A、B两种反应液混匀，利用在一定时间范围内，所述两种反应液产生H2O2速率是基本不变的原理，使化学发光反应保持稳定。

    本发明与传统的技术相比较具有如下优点：

    1、光信号的稳定性好，可以适应自动和手动分析。

    2、检测结果准确，成本低。    

    本发明关键解决了H2O2的稳定性的控制问题。传统的方式由于只能一次性加入H2O2，不可能边反应边测量边添加H2O2，我们称之为“外源”H2O2的方式。本发明将H2O2改为“内源”式，即控制H2O2地反应量，使其达到恒速、均匀地供应的目的。方法之一是以葡萄糖氧化酶作用于葡萄糖而产生H2O2，在一定的时间范围内H2O2的产生速率是基本不变的，这就使化学发光化学发光反应也保持稳定，因此，出现光信号“平台”。这就从理论和实践上，解决了传统方法由于光信号随时间很快衰减而使检测结果不可靠的问题。所述化学发光底物由A液和B液组成；B液为含有葡萄糖、鲁咪诺、对碘苯酚等，A液含葡萄糖氧化酶及其稳定剂等。在HRP标记的免疫反应后加入A液和B液，混匀几分钟后，即可测到稳定信号。

    本发明所述化学发光底物中产生H2O2的系统还可以由下列成份组成：    

    (1)A液含有黄嘌呤氧化物、B液含有水杨醛；(2)A液含有半乳糖氧化酶、B液含有乳糖；(3)A液含有葡萄糖氧化酶、B液含有葡萄糖。