说明书 一种中药制剂的质量控制方法 【发明领域】
本发明涉及一种中药制剂的质量控制方法，特别涉及桂枝茯苓制剂质量控制方法。
背景技术
桂枝茯苓制剂原料药是由桂枝、茯苓、桃仁、白芍、牡丹皮组成，为有效控制产品质量，我们建立了制剂的质量控制方法，该方法采用照薄层色谱法对牡丹皮、白芍进行鉴别，采用气相色谱法丹皮酚成分的含量、液相色谱法测定芍药苷的含量。该质量控制方法精密度、灵敏度、稳定性均符合要求，确保产品质量的“均一、稳定、有效、可控”。
【发明内容】
本发明目的在于公开桂枝茯苓制剂的质量控制方法。
本发明质量控制方法包括以下鉴别和/或含量测定方法。
鉴别方法包括以下方法中的一种或几种：
(1)取桂枝茯苓制剂2g，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流提取1-3小时，放至室温，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1ml使溶解作为供试品溶液；另取牡丹皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以4-6∶4-7∶2-5∶3-8甲苯-甲酸乙酯-甲酸-氯仿为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在105℃烘4-6分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取桂枝茯苓制剂2g，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流提取1-3小时，放至室温，滤过，滤液挥至约2ml作为供试品溶液；另取白芍对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以20-30∶10-20∶3-8氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105℃烘约8-12分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定包括以下方法中的一种或几种：
a.丹皮酚含量测定：照气相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI E)测定；系统适用性试验，以甲基硅橡胶为固定相，涂布浓度为4-7％，柱温为120-140℃；理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于600，丹皮酚峰与内标物质峰的分离度应大于2；校正因子测定：取正十五烷烃(色谱纯)适量，精密称定，加氯仿溶解并稀释至每1ml中含1.2mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；另取丹皮酚对照品适量，精密称定，加氯仿溶解并稀释至每1ml含0.2mg的溶液，摇匀；精密量取其4ml及内标液0.5ml，置5ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，取1μl注入气相色谱仪，计算校正因子；供试品溶液的制备与测定：桂枝茯苓制剂0.5g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液约400ml，用氯仿提取4次，合并氯仿液，加无水硫酸钠2g脱水，滤过，用氯仿10ml分次洗涤无水硫酸钠，滤过，合并两次滤液，置70℃水浴上回收氯仿至近10ml，移至10ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀；精密量取4.0ml及内标液0.5ml，置5ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取1μl注入气相色谱仪，计算，即得。
b.芍药苷的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，13-18∶80-90∶0.05-0.1∶0.05-0.1的乙睛∶水∶磷酸∶三乙胺为流动相；检测波长230nm；理论板数按芍药苷峰计算，应不低于1000；对照品溶液配制：取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液；供试品溶液的配制：取本品0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明质量控制方法对产品的质量控制更为有效，方法精密度、灵敏度、稳定性均较高。
本发明各实验例供试品所用制剂均可采用实施例1所述的桂枝茯苓胶囊制剂，也可用与实施例1所述的桂枝茯苓胶囊剂具有相同原料组成地其他制剂。
实验例1丹皮酚的含量测定方法研究
(1)仪器、试剂及样品
仪器：岛津GC-9A气相色谱仪，附氢火焰离子化检测器，C-R6A色谱数据处理机。
对照品：丹皮酚(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号为0708-9003)，内标物：正十五烷烃(色谱纯)，试剂：氯仿(分析纯)。
内标物溶液配制：取正十五烷烃加氯仿制成每1ml含1.2mg的溶液。
对照品溶液配制：取丹皮酚对照品加氯仿制成每1ml含1.0mg的溶液。
供试品溶液的配制：取供试品0.5g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液约400ml，用氯仿分4次萃取(60，40，40，30ml)，合并氯仿液，加无水硫酸钠2g，脱水，滤过，滤液备用。用氯仿10ml洗涤无水硫酸钠，滤过，合并两次滤液，置70℃水浴上回收氯仿至适量，移至10ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，吸取上述供试品溶液4.0ml及内标物溶液0.5ml置5ml量瓶中，加氯仿定容至刻度，摇匀，即得。
(2)测试条件选择
1.色谱条件
色谱柱：5％SE-30，1.6m×0.3mm玻璃柱，柱头进样。
担体为Chromosorb W AW DMCS(60-80目)。
柱温：130℃；检测器(FID)；气化室温度：230℃；N2(载气)：60ml/min；H2：0.7kg/cm2；空气：0.5kg/cm2；纸速：4.5mm/min；灵敏度：102；衰减：22；进样量：1μl。
2.分离度应大于2，理论塔板数(丹皮酚)大于600。
3.浓度与峰面积线性实验：
吸取对照品溶液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml于5ml量瓶中，各加0.5ml内标液，加氯仿稀释至刻度，摇匀，进样。以对照品与内标物峰面积比为纵坐标，以其浓度比为横坐标，作标准曲线，对照品在0.0211～0.5281(mg/ml)浓度范围内，面积比和浓度比呈良好线性关系，回归方程为Y＝-0.0344+4939X，r＝0.9997(n＝6)，结果见表1。
表1 线性实验
对照品与内标物浓度比(X) 0.1591 0.7953 1.5904 2.3863 3.1815 3.9767
对照品与内标物峰面积比(Y) 0.0676 0.3440 0.7442 1.1191 1.5526 1.9369
回归方程 Y＝-0.0344+0.4939X， r＝0.9997
(3)供试品的干扰实验
①内标物的干扰实验
吸取供试品溶液1μl进样，观察在内标物峰的保留时间处是否有杂质峰，测得结果，在内标物保留时间处无明显杂质峰干扰。
②空白实验
阴性对照溶液：按本品提取工艺制备缺牡丹皮的样品，按供试品制备项下制成阴性对照溶液。
吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各1μl进样，观察在丹皮酚峰的保留时间处是否有杂质峰，测得结果，在丹皮酚峰的保留时间处无明显杂质峰干扰。
(4)稳定性实验
取同一供试品溶液(020420)进样，测其含量，以后每隔4hr测定一次，测得结果表明：供试品中丹皮酚在24小时内基本稳定，结果见表2。
表2 稳定性实验
时间(hr) 0 4 8 12 16 20 24 RSD％
丹皮酚含量 0.7037 0.7024 0.6994 0.6976 0.6955 0.6922 0.6865 0.86％
(％)
(5)精密度实验
同一供试品溶液重复进样六次，测其含量，相对标准偏差为0.68％，表明仪器精密度良好，结果见表3。
表3 精密度实验
测定次数 1 2 3 4 5 6 RSD％
丹皮酚含量(％) 0.7091 0.7180 0.7189 0.7187 0.7095 0.7193 0.68％
(6)重现性试验
同一批样品(020414)分别取5份，按供试品制备项下分别制成供试品，分别选择测其含量，相对标准偏差为0.73％，表明重现性良好，结果见表4。
表4 重现性实验
序号 1 2 3 4 5 RSD(％)
丹皮酚含(％) 0.6421 0.6447 0.6390 0.6352 0.6335 0.73
(7)回收率试验
取同一批已知含量的样品5份，各0.5g，加丹皮酚对照品适量，照供试品制备项下制成供试品溶液，分别吸取1μl，连续进样3次，以校正因子计算供试品溶液的含量，结果见表5。
表5 丹皮酚回收率试验
取样量 已知样品 加入量 测得量 回收率 平均回收
试验号 RSD(％)
(g) 含量(mg) (mg) (mg) (％) 率(％)
1 0.4999 3.19 3.06 6.27 100.65
2 0.4997 3.18 3.06 6.23 99.67
3 0.5002 3.20 3.06 6.19 97.71 99.54 1.24
4 0.5002 3.20 3.06 6.23 99.02
5 0.5004 3.21 3.06 6.29 100.65
(8)供试品含量测定
吸取对照品溶液0.8ml和内标物溶液0.5ml，置5ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，取1μl连续进样3次，计算校正因子，另取供试品溶液1μl，连续进样3次，以校正因子计算供试品含量，结果见表6。
表6样品中丹皮酚的含量
批号 取样量 丹皮酚平均含量(％) X(％)
020409 0.5003 0.734 0.73
0.5004 0.734
020414 0.5004 0.652 0.64
0.4996 0.634
020417 0.5003 0.6754 0.68
0.5002 0.6841
020420 0.4999 0.698 0.70
0.5001 0.698
X(4批) 0.69
实验测定了4批样品8个数据，丹皮酚的平均含量为0.69％，考虑到生产实际、药材及其它方面的因素，所以本标准规定，丹皮酚含量不低于1.40mg/粒(0.45％)。
实验例2芍药苷的含量测定方法研究
(1)仪器、试剂及对照品
试剂：乙睛(色谱纯)、磷酸(分析醇)、三乙胺(分析醇)、水(重蒸水)。
仪器：色谱柱：Alltima C18柱(5μ，250*4.6mm)；柱温：30℃；检测器：Agilent 1100紫外检测器。
对照品：芍药苷(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号为0736-200219)。
(2)样品配制
对照品溶液配制：取芍药苷对照品加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液。
供试品溶液的配制：取本品0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为样品溶液。
(3)测试条件选择
1.色谱条件
我们曾采用几种不同流动相，但分离不好，而在流动相乙睛∶水∶磷酸∶三乙胺(15∶85∶0.08∶0.08)的条件下分离良好。
2.分离度应大于2，理论塔板数(芍药苷)大于1000。
(4)线性关系
吸取对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8ml于2ml量瓶中，各加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样。以对照品峰面积为纵坐标，以其浓度为横坐标，作标准曲线，对照品在0.0155～0.248(mg/ml)浓度范围内，面积和浓度呈良好线性关系，回归方程为Y＝-0.0344+4939X，r＝0.9997(n＝6)，结果见表7。
表7线性实验
对照品浓度(mg/ml) 0.0155 0.0310 0.062 0.124 0.186 0.248
对照品峰面积(A) 202.22 412.5 809.5 1637.62 2481.49 3283.47
回归方程 Y＝13288X-4.9236， r＝0.99995
(5)供试品的空白实验
根据补充意见，我们采用高效液相色谱法测定芍药苷的含量，但是由于牡丹皮中也含有芍药甙，专属性不强(根据以前薄层鉴别的结果，在缺白芍的阴性对照品中，有芍药甙的斑点)，所以我们采用同时缺白芍、牡丹皮的提取物作为阴性对照，结果证明，该法可以作为测定白芍的方法。
(6)稳定性实验
取同一供试品溶液(020420)进样，测其含量，以后每隔4hr测定一次，测得结果表明：供试品中芍药苷在20小时内基本稳定，见表8。
表8 稳定性实验
时间(hr) 0 4 8 12 16 20 RSD％
芍药苷峰面(A) 289.25 303.32 292.60 296.93 291.84 293.96 1.68％
(7)精密度实验：
同一标准品溶液重复进样5次，测其峰面积，相对标准偏差为0.3％，表明仪器精密度良好，结果见表9。
表9精密度实验
测定次数 1 2 3 4 5 6 RSD％
芍药苷峰面(A) 811.19 808.54 811.82 814.82 814.35 814.41 0.3％
(8)重现性试验
同一批样品(020414)分别取5份，按供试品制备项下分别制成供试品，分别选择测其含量，相对标准偏差为0.87％，表明重现性良好，结果见表10。
表10 重现性实验
序号 1 2 3 4 5 RSD(％)
芍药苷峰面积(A) 362.85 354.76 358.96 360.53 361.72 0.87％
(9)回收率试验
取同一批已知含量的样品(020417)5份，各0.05g，加芍药苷对照品适量，照供试品制备项下制成供试品溶液，分别吸取10μl，连续进样2次，计算供试品溶液的含量，结果见表11。
表11 芍药苷加样回收率试验
取样量 已知样品 加入量 测得量 回收率 平均回收
试验号 RSD(％)
(g) 含量(mg) (mg) (mg) (％) 率(％)
1 0.0517 0.7703 0.796 1.5860 102.5
2 0.0493 0.7346 0.796 1.5284 99.7
3 0.0509 0.7584 0.796 1.5695 101.9 101.58 1.59
4 0.0498 0.7420 0.796 1.5393 100.2
5 0.0519 0.7733 0.796 1.5979 103.6
(10)供试品含量测定
按供试品含量测定项下制备样品，计算供试品含量，结果见表12。
表12 样品中芍药苷的含量
批号 取样量 峰面积 峰面积平均值 X(mg/粒))
020414 0.1025 362.37 362.85 5.21
363.33
020417 0.1190 374.70 372.24 4.62
369.78
020420 0.1023 289.06 289.25 4.15
289.44
X(3批) 4.66
所用白芍药材平均含芍药苷1.97％
实验测定了3批样品6个数据，芍药苷的平均含量为4.66mg/粒，考虑到生产实际、药材(含芍药苷不得低于0.80％)及其它方面的因素，所以本标准规定，芍药苷的含量不低于1.60mg/粒。
下述实施例均能达到上述实验例的效果。
实施例1桂枝茯苓胶囊
【处方】桂枝240g 茯苓240g 牡丹皮240g 桃仁240g 白芍240g
【制法】以上五味药，牡丹皮采用流通水蒸气蒸馏提取丹皮酚结晶，滤液弃之；药渣与桂枝、白芍、桃仁及处方量20％的茯苓再用90％乙醇提取两次，合并醇提液；药渣再两次水提，合并滤液，药渣弃之。醇提液和水提液分别减压浓缩，醇提液回收至无醇味。合并上述浓缩液，得棕褐色浸膏。将另80％处方量的茯苓细粉与上述浸膏混匀，干燥，粉碎，制粒，烘干，加入丹皮酚细颗粒，混匀，整粒，装入胶囊中，制成1000粒，即得。
【鉴别】(1)取本品，置显微镜下观察：不规则分枝状团块，无色，遇水合氯醛液渐溶化。菌丝无色或淡棕色，直径4-8μm。
(2)取桂皮醛对照品，加氯仿制成每1ml含5μg的溶液，作为对照品溶液，照气相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI E)试验，柱长为1.6m，以甲基硅橡胶(SE-30)为固定液，涂布浓度为5％，柱温为130℃。分别取对照品溶液和含量测定项下的供试品溶液适量，注入气相色谱仪，供试品呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。
(3)取桂枝茯苓胶囊制剂内容物2g，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流提取2小时，放至室温，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1ml使溶解作为供试品溶液。另取牡丹皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以5∶6∶3∶6甲苯-甲酸乙酯-甲酸-氯仿为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取桂枝茯苓胶囊制剂内容物2g，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流提取2小时，放至室温，滤过，滤液挥至约2ml作为供试品溶液。另取白芍对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以26∶14∶5氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105℃烘约10分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定：a.丹皮酚含量测定：照气相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI E)测定。系统适用性试验以甲基硅橡胶为固定相，涂布浓度为5％，柱温为130℃。理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于600，丹皮酚峰与内标物质峰的分离度应大于2。校正因子测定：取正十五烷烃(色谱纯)适量，精密称定，加氯仿溶解并稀释至每1ml中含1.2mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取丹皮酚对照品适量，精密称定，加氯仿溶解并稀释至每1ml含0.2mg的溶液，摇匀。精密量取其4ml及内标液0.5ml，置5ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，取1μl注入气相色谱仪，计算校正因子。供试品溶液的制备与测定：取装量差异项下的内容物0.5g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液约400ml，用氯仿提取4次(60、40、40、30ml)，合并氯仿液，加无水硫酸钠2g脱水，滤过，用氯仿10ml分次洗涤无水硫酸钠，滤过，合并两次滤液，置70℃水浴上回收氯仿至近10ml，移至10ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀。精密量取4.0ml及内标液0.5ml，置5ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取1μl注入气相色谱仪，计算，即得。本品每粒含丹皮酚(C9H10O3)不得少于0.93mg。
b.芍药苷的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙睛∶水∶磷酸∶三乙胺(15∶85∶0.08∶0.08)为流动相；检测波长230nm。理论板数按芍药苷峰计算，应不低于1000。对照品溶液配制：取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液。供试品溶液的配制：取本品0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含白芍按芍药苷(C23H28O11)计，应不低于1.60mg。
实施例2桂枝茯苓片
【处方】桂枝240g 茯苓240g 牡丹皮240g 桃仁240g 白芍240g
【制法】以上五味药，牡丹皮采用流通水蒸气蒸馏提取丹皮酚结晶，滤液弃之；药渣与桂枝、白芍、桃仁及处方量20％的茯苓再用90％乙醇提取两次，合并醇提液；药渣再两次水提，合并滤液，药渣弃之。醇提液和水提液分别减压浓缩，醇提液回收至无醇味。合并上述浓缩液，得棕褐色浸膏。将另80％处方量的茯苓细粉与上述浸膏混匀，干燥，粉碎，制粒，烘干，加入丹皮酚细颗粒，混匀，整粒，经常规制成片剂，0.32g/片。
【质量控制方法】
鉴别、含量测定方法同实施例1，其中含量每片含丹皮酚不得少于1.0mg；每片含芍药苷不得少于1.60mg)。