用于检测丙二醛的试剂、制备该试剂的方法以及使用该试剂的试剂盒 【发明背景】
【发明领域】
本发明主要涉及例如在水溶液、血液、尿液和其他体液的介质中对于醛的检测，更具体地说，本发明涉及一种试剂，制备该试剂的方法以及使用该试剂的试剂盒用于醛，尤其是丙二醛的检测。
相关领域的说明
迄今为止，公知的是哺乳动物的应激反应直接或间接发展为迅速改变机体通常还原状态的氧合活动(oxygenated activities)。氧合过度状态(thishyperoxygenated state)能引起严重的身体失调和实际的身体损伤，这些能变成病理状态，接着发展成动脉粥样硬化斑块。这样的斑块能导致高脂类水平沉积尤其是动脉阻塞，其能引起流向心脏的血流停止而导致心脏病发作。这仅仅只是由来自应激反应引起地氧合过度状态的自由基攻击引起的许多人类疾病状态的一种。
从长链聚不饱和脂肪酸分解产生的醛，尤其是二醛的释放中能够测量氧化应激状态。
我们已经发现一种品红碱色度检测法，其在一种迅速、可易操作的主试剂盒中通过使用如下描述的试剂和少量的尿液能够检测释放的醛。得到的形成色与标准化试验带相对照，从而通过+1到+3水平从负值中评价应激水平。
当然，许多醛检测法是已知的。例如，在作者为F.Feigl，由ElsevierPublishing Company，Ind.出版的“Qualitative Analysis by Spot Tests”，第3版，395页所公开的，一滴可包含醛的样品溶液在试管中与2 ml的72％硫酸混合。加入少量的固体chromatropic acid(1，8-dihydrooxynapthianene-3 6disulfate)，在60℃的水浴中加热试管约10分钟。醛存在时出现亮紫色，据报道该试验检测醛的灵敏度为约3ppm醛。
在如Feigl出版物339-340页描述的另一个醛检测法中，在点滴板上用一滴硫酸和一滴品红/硫酸处理一滴可能包含醛的水(或醇)溶液，并使之放置。根据被测溶液中存在的醛的量，在约2至30分钟内出现红至蓝的颜色。据报道这种检测法对一滴被测溶液中约1微克的甲醛灵敏。这种检测法和其他已知醛检测法中的问题是检测不够迅速和不易操作。例如，上述的第一种方法需要在恒温水浴中加热试管溶液10分钟。由于这些醛检测法不够迅速和不易操作，因此醛检测法可能具有下面的种倾向，即它不是如本应该或将要的如此频繁的操作。
此外，在美国专利No.6,165,797中公开了一种醛检测法。如其所描述的，通过将其与一种包含约90-1 10份的20％醋酸，约13.5至16.5份的组分A和约4.5至5.5份的组分B的试剂混合以检测尿液中丙二醛的存在，其中组分A由焦亚硫酸钠、磷酸和去离子水按照约18-22g焦亚硫酸钠、9-11ml浓磷酸、约450-550ml去离子水的比例组成，组分B由碱性品红和组分A按照约0.45-0.55g碱性品红和90-110ml组分A的比例组成。已经发现这样形成的试剂因为使用的醋酸而酸性太强，并且向其中加入尿液时反应时间非常迅速，导致由于尿液PH值而发生颜色变化。因此，出现假阳性，如果不能在一致并且可靠的基础上检测尿液中醛的存在，检测将变得非常困难。
由于这些和其他原因，需要一种改进的试剂用于可靠地检测在生物液中微量存在的醛，以检测相反的生物氧化从而减少医疗费用。同时需要这样的试剂以某种方式包装，从而个人可以在家中的自我检测中容易地使用。
发明概述
本发明的一个目的在于提供一种简单的检测法用于检测试验样品中醛的存在。
本发明的另一个目的在于提供一种当其与包含醛的试验样品混合时能产生颜色变化的检测试剂。
依据本发明，用于检测尤其是在水溶液、尿液和其他体液中存在的醛的检测溶液或试剂包含磷酸、焦亚硫酸钠、碱性品红和去离子水组成的溶液。以1升批量产品计，这些元素的优选比例是10g焦亚硫酸钠、10ml浓缩的磷酸、5g碱性品红和约1000ml水。
碱性品红在酸性溶液中改变颜色，这与被检测的样品中存在的醛的量有关。碱性品红是一种紫色的粉末，其与皮肤、尿液或血浆中的醛反应。在少量或没有醛存在时不发生颜色变化。在中等浓度或高浓度的醛存在时，可得到颜色渐变，这大致取决于存在的醛的浓度。品红的氨基基团与醛偶联，产生粉红色至紫色，大致取决于生物液如血液或尿液中存在的醛的量。颜色变化取决于pH值，其由存在的酸的量控制。
焦亚硫酸钠是一种用于阻止空气中氧干扰的还原剂。偏亚硫酸氢盐阻碍了游离的氧，这样只有醛和品红反应。在试剂混合物上建立氮覆盖，通过阻止任何氧与试剂的反应，使试剂有了更长的储存期限。磷酸稳定了pH值。
长链聚不饱和脂肪酸受到自由基攻击分解而释放醛。
在许多疾病和异常代谢状态例如冠心病、糖尿病和帕金森病中发现了高水平的醛。
一种检测水溶液、尿液、血液和其他体液中醛的方法，包含将试验样品，例如可能包含痕量醛的尿液与如上所述的检测试剂混合，然后在至少2分钟，优选2-5分钟后观察颜色形成。优选的比例是约0.9至1.1ml的试验样品比约0.1-0.2ml的检测试剂。假如混合物在此时间内没有出现颜色，试验样品包含低于约2 ppm的醛。然而如果混合物在指定的时间内或不久出现颜色，例如粉红色-紫色，可以推断试验样品中醛的含量大于2ppm，颜色越深，醛的浓度越高。
优选地，检测试剂包含于密封的安瓿或小瓶中。在易折型安瓿中将试验样品加入试剂。从而提供了一种简单、有效、可靠并且迅速的检测方法用于检测水溶液中醛的存在。典型地，可将安瓿与适当的分配器例如注射器或移液管，以及用于收集样品的容器一起存放于配有比色表的包装中。这提供了一种简单可靠的方法用于个人检测他或她尿液中醛的存在。
优选实施方案的说明
依据本发明，制备试剂的方法如下：首先，将约8-12g焦亚硫酸钠溶解于约995-1005ml去离子水中，然后加入10ml磷酸和约4.8至5.2g碱性品红。碱性品红为经鉴定来自Spectrum Chemical的BA 130。混合物应当混和至少10分钟，然后加入约28-32g动物骨炭。混合物应当充分混合并且放置至少24小时直至36小时。此后，通过离心移除骨炭，过滤混合物。动物骨炭除去了混合物的颜色从而提供了一种脱色溶液。然后缓慢加入磷酸至混合物中并且在此过程中充分混合，将此脱色溶液的PH值调整至1.75-1.93。
依据本发明，一种优选的制备试剂的方法如下：首先，将10g焦亚硫酸钠溶解于1000ml去离子水中。然后加入10ml磷酸和5g碱性品红(BA130)。混合物应当混合至少10分钟。然后加入30g动物骨炭。混合物应当充分混合并且放置至少24小时。此时，通过离心移除骨炭，过滤混合物。
此时，应当调整脱色溶液的PH值。通过加入磷酸逐渐调整PH直至PH达到1.88。缓慢加入磷酸并且在此过程充分混合是非常重要的。
上述的检测溶液优选地保存在独立密封、试验大小的常规医疗溶液类型的安瓿或小瓶中。以这种方式包装并且存贮于干冷的地方时，密封瓶或小瓶具有预期的至少12个月的保存时间。如下所述，通过阳性醛检测方法可以保证得到精确的检测溶液。
提供了一种在水溶液中检测醛存在的方法，通过将约0.9ml被测溶液(包含痕量的醛)混合至0.1ml按照以上方法制备的检测溶液中。在试剂盒的一个优选实施方案中，安瓿是1ml体积的安瓿，其包含0.1ml密封于其中的试剂。在刻痕线折断安瓿的顶部并将其丢弃。使用分配器将约0.9ml尿液填至安瓿。假如被测样品和检测溶液的混合物在约2-5分钟的等待期后保持无色，则检测结果是阴性的，因此被测样品包含少于2ppm醛。混合物的任何颜色变化表明了被测溶液中存在的醛的浓度大于约2ppm。
阳性醛检测优选在检测被测样品之前按照质量控制技术完成，以确保检测溶液被正确地制备或，例如，试剂瓶没有被其他含有非检测溶液的瓶取代。
阳性醛检测优选地通过将1ml可得到的“阳性醛检测溶液(标准)”注射至包含约0.2-0.6ml检测溶液的瓶中。假如瓶中包含正确制备的醛检测溶液时，在约2-5分钟内，瓶中的溶液应当出现粉红-紫色。否则，所选择的“检测溶液”的瓶应当被丢弃。上述的阳性醛检测对10ppm或更多的醛是灵敏的。对5ppm而言，阳性醛检测使用了0.5ml去离子水。5ppm醛检测得到了比10ppm醛检测更低的颜色强度。
因此已经公开了一种用于检测生物液中醛存在的试剂，制备该试剂的方法以及包含此试剂的个人使用的试剂盒。