一种动物脑组织磷脂提取分析方法 技术领域：
本发明涉及一种动物脑组织磷脂提取薄层分析方法。
技术背景：
现有技术有关植物磷脂提取、分离的研究较多，如：鲍风等(大豆磷脂组分的研究I磷脂组成的薄层色谱分析.生物化学和生物物理学报.1981，4(13)：373～377)、李立(大豆磷脂的开发与应用.饲料工业.1999，20，(12)：33～36)、马辰等(大豆磷脂中磷脂类成分含量的测定.中国中药杂志，1999，20(12)：33～36)。而涉及动物脑组织磷脂复合物方面研究的有周建忠等(高效液相色谱法测定大鼠肺及脑组织细胞膜磷脂.色谱.1994，6(12)，44 1～442)、李世莉等(大鼠脑组织磷脂色谱随龄性变化的研究.佳木斯医学院学报.1992，15(1)：1～2)。其中大部分是以高效液相色谱进行分析，而且是以获取其中的某个成分为目的的。最终的产业实施需投资大，操作麻烦，时间长，溶剂用量大，磷脂复合物各成分的分离效果较差，成本高。
发明内容：
本发明提供一种操作简单，成本低廉，斑点与背景对比明显的动物脑组织磷脂提取分析方法。
本发明的目的可通过如下技术措施来实现：
该方法按如下步骤进行(均按重量份)：
a.动物脑组织磷脂提取滤液经蒸发得固状磷脂复合物，然后用氯仿溶解、再定容；
b.将硅胶∶羧甲基纤维素钠＝1∶2-4混合均匀，用铺板器铺0.2-0.6mm薄层层析板，晾干后于90-120℃烘箱中活化20-60分钟；
c.将氯仿∶无水乙醇∶三乙胺∶水＝1∶1-1.5∶1-1.5∶2-3.5混合为展开剂，对磷脂复合物进行展开，而后晾干；
d.再将薄层层析板放入用中性去离子水配制的0.3-0.4％的溴百里香酚蓝染液中浸板，取出后，放在通风处直至斑点与背景对比达到最佳。
本发明的目的还可通过如下技术措施来实现：
所述的中性去离子水的pH＝6-8；所述的浸板时间为5-30秒；所述的蒸发温度为不高于80℃；所述的硅胶∶羧甲基纤维素钠＝1∶2.5-3。
本发明利用胆固醇和油溶于丙酮而磷脂不溶的性质，搅拌萃取去除动物脑中的胆固醇和油。然后利用磷脂溶于甲苯等一些有机溶剂的性质，进行磷脂复合物的提取，所得的磷脂复合物经旋转蒸发获得黄色固体状磷脂复合物，将之用氯仿溶解、定容，利用碱性展开剂对磷脂复合物氯仿液进行展开，展开完毕后，晾干，放入用中性去离子水配制的显色剂中浸渍显色，取出后晾干，通过斑点与背景对比，达到各磷脂组分分离地目的。本发明还可继续进行薄层扫描定量测定，或薄层法各分离成分的小样制备，或作为柱层析效果的判断。
此方法操作简单，成本低廉，斑点与背景对比明显，且磷脂组分分离效果明显。所用的原料为鲜牛脑，也可采用鱼、兔、鸡、蟾蜍等不同动物的脑组织，经干燥和组织破碎器破碎即可。
溴百里香酚蓝溶液，可采用多种存在质量差异的溴百里香酚蓝指示剂，只要采用pH为中性的去离子水配制显色剂即可。
具体实施方式：
实施例1：
鲜牛脑经55℃干燥，干牛脑用破碎器破碎，取干牛脑10公斤、丙酮30公斤，在80r/min搅拌下提取1h，过滤，得滤渣，重复提取3次，去除胆固醇和油。将滤渣在55℃烘干，加入30公斤的甲苯，在80r/min搅拌下提取1h，过滤得滤液，重复提取3次，滤液在40℃旋转蒸发得干的黄色固体状磷脂复合物，然后称取5mg，加氯仿溶解、定容为5mg/ml。将硅胶(GF254)与0.5％的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液以1∶2的重量比混合均匀，用自动铺板器铺板，薄层板厚度为0.4mm，晾干，110℃条件下活化40min，置干燥器内备用。以氯仿∶无水乙醇∶三乙胺∶水＝10∶11.3∶11.7∶2.0为展开剂，对氯仿溶解的磷脂复合物进行展开，展距110cm。待层析完毕后，取出薄板，自然晾干，然后将之放入用pH＝6.5的去离子水配制的0.3％的溴百里香酚蓝溶液中，染色15秒，取出后，放在通风处直至斑点与背景对比达到最佳。
实施例2：
鲜兔脑经50℃干燥，干兔脑用破碎器破碎，取干兔脑10公斤、丙酮20公斤，在60r/min搅拌下提取1.5h，过滤，得滤渣，重复提取4次，去除胆固醇和油。将滤渣在室温下晾干，加入30公斤的乙醚，在100r/min搅拌下提取0.5h，过滤得滤液，重复提取2次，滤液在65℃旋转蒸发得干的黄色固体状磷脂复合物，然后称取5mg，加氯仿溶解、定容为5mg/ml。将硅胶(GF254)与0.5％的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液以1∶3的重量比混合均匀，用自动铺板器铺板，薄层板厚度为0.2mm，晾干，90℃条件下活化60min，置干燥器内备用。以氯仿∶无水乙醇∶三乙胺∶水＝10∶10∶11∶3为展开剂，对氯仿溶解的磷脂复合物进行展开，展距105cm。待层析完毕后，取出薄板，自然晾干，然后将之放入用pH＝7.5的去离子水配制的0.4％的溴百里香酚蓝溶液中，染色20秒，取出后，放在通风处直至斑点与背景对比达到最佳。
实施例3：
鲜鸡脑经55℃干燥，干牛脑用破碎器破碎，取干牛脑10公斤、丙酮30公斤，在100r/min搅拌下提取0.5h，过滤，得滤渣，重复提取2次，去除胆固醇和油。将滤渣在55℃烘干，加入30公斤的正己烷，在60r/min搅拌下提取1.5h，过滤得滤液，重复提取4次，滤液在25℃旋转蒸发得干的黄色固体状磷脂复合物，然后称取5mg，加氯仿溶解、定容为5mg/ml。将硅胶(GF254)与0.5％的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液以1∶4的重量比混合均匀，用自动铺板器铺板，薄层板厚度为0.6mm，晾干，120℃条件下活化20min，置干燥器内备用。以氯仿∶无水乙醇∶三乙胺∶水＝10∶15∶14∶3.5为展开剂，对氯仿溶解的磷脂复合物进行展开，展距100cm。待层析完毕后，取出薄板，自然晾干，然后将之放入用pH＝7的去离子水配制的0.3％的溴百里香酚蓝溶液中，染色15秒，取出后，放在通风处直至斑点与背景对比达到最佳。
实施例4：
鲜蟾蜍脑经55℃干燥，干牛脑用破碎器破碎，取干牛脑10公斤、丙酮30公斤，在90r/min搅拌下提取1.2h，过滤，得滤渣，重复提取3次，去除胆固醇和油。将滤渣自然晾干，加入30公斤的氯仿，在70r/min搅拌下提取1h，过滤得滤液，重复提取2次，滤液在45℃旋转蒸发得干的黄色固体状磷脂复合物，然后称取5mg，加氯仿溶解、定容为5mg/ml。将硅胶(GF254)与0.5％的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液以1∶3的重量比混合均匀，用自动铺板器铺板，薄层板厚度为0.4mm，晾干，100℃条件下活化30min，置干燥器内备用。以氯仿∶无水乙醇∶三乙胺∶水＝10∶10∶15∶2.5为展开剂，对氯仿溶解的磷脂复合物进行展开，展距110cm。待层析完毕后，取出薄板，自然晾干，然后将之放入用pH＝7.2的去离子水配制的0.35％的溴百里香酚蓝溶液中，染色10秒，取出后，放在通风处直至斑点与背景对比达到最佳。