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1、(10)申请公布号 CN 103575911 A (43)申请公布日 2014.02.12 CN 103575911 A (21)申请号 201310574579.8 (22)申请日 2013.11.15 G01N 33/68(2006.01) (71)申请人 常州和方环保科技有限公司 地址 213000 江苏省常州市常武路 801 号常 州科教城天润科技大厦 D-406 (72)发明人 金容 张念忠 (54) 发明名称 唾液稳定液 (57) 摘要 本发明公开一种唾液稳定液， 包括缓冲液、 防腐剂、 蛋白稳定剂、 钾盐和钠盐， 所述防腐剂 的质量与缓冲液体积的比例为 0.01%-4%W/V， 。
2、所述蛋白稳定剂的质量与缓冲液体积的比例为 0.1%-5%W/V， 所述钠盐的质量与缓冲液体积的比 例为 0.5%-5%W/V， 所述钾盐的质量与缓冲液体积 的比例为 0.5%-5%W/V。本发明通过唾液稳定液来 改变唾液的粘度， 在缓冲液中加入一定的防腐剂 可以有效抑制唾液样本中的细菌生长 ； 在唾液样 本保存中， 为了提高被分析物质的活性， 本发明中 加入一定量的氯化钠或氯化钾可以保持免疫球蛋 白的原始结构不被破坏 ； 本发明中的蛋白稳定剂 是为了保护唾液中的蛋白质不被降解， 以达到长 期保存唾液中蛋白质活性、 便于临床检测的目的。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页。
3、 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 103575911 A CN 103575911 A 1/1 页 2 1. 一种唾液稳定液， 其特征在于 ： 包括缓冲液、 防腐剂、 蛋白稳定剂、 钾盐和钠盐， 所述 防腐剂的质量与缓冲液体积的比例为0.01%-4% W/V,所述蛋白稳定剂的质量与缓冲液体积 的比例为 0.1%-5% W/V， 所述钠盐的质量与缓冲液体积的比例为 0.5%-5% W/V， 所述钾盐的 质量与缓冲液体积的比例为 0.5%-5% W/V。 2. 根 据权利要求 1 所述的唾液稳定液， 其特征在于 ： 。
4、所述缓冲液的浓度 为 0.01-0.1mol/L。 3. 根据权利要求 1 所述的唾液稳定液， 其特征在于 ： 所述缓冲液的 pH 值为 7.1-7.3。 4. 根据权利要求 13 任一项所述的唾液稳定液， 其特征在于 ： 所述缓冲液为磷酸盐缓 冲液、 Tris-HCl 缓冲液、 HEPES 缓冲液、 枸橼酸缓冲液中的一种。 5. 根据权利要求 1 所述的唾液稳定液， 其特征在于 ： 所述防腐剂为苯甲酸、 苯甲酸钠、 山梨酸、 山梨酸钾、 丙酸钙、 对羟基苯甲酸酯中的一种或几种。 6. 根据权利要求 1 所述的唾液稳定液， 其特征在于 ： 所述蛋白稳定剂为葡萄糖、 麦芽 糖、 牛血清白蛋白中的。
5、一种或几种。 7. 根据权利要求 6 所述的唾液稳定液， 其特征在于 ： 所述蛋白稳定剂为葡萄糖或者牛 血清白蛋白中的一种或两者的混合物。 权 利 要 求 书 CN 103575911 A 2 1/3 页 3 唾液稳定液 技术领域 0001 本发明涉及一种蛋白质稳定试剂， 尤其涉及一种唾液中的蛋白质稳定液。 背景技术 0002 唾液是人体重要体液之一， 其成分相对稳定， 获取方便， 其中某些特异成分， 比如 ： 微生物、 抗体、 生物酶、 药物和某些特殊介质， 均可作为疾病诊断、 疗效观察、 药物监测的参 考指标， 在疾病的诊断中具有潜在的应用价值。但唾液同时也受全身各种因素和状态的影 响， 。
6、当唾液脱离人体存在以后容易发生变质、 降解。 0003 中国专利 （CN 1439314A） 公开一种蛋白质稳定剂， 主要涉及稳定酸性水成液如汁 液中蛋白质悬浮体的稳定， 应用于营养健康饮料中添加的蛋白质的稳定， 应用环境明显有 别于唾液。 0004 中国专利 （CN 101822820A） 公开一种稳定蛋白质制剂， 提供治疗免疫系统紊乱的 制剂， 采用给予受试者 CTLA41g 分子的方式， 包括静脉注射、 皮下的低压冻干和液体制剂， 使用和保存环境也明显区别于唾液环境。 0005 目 前 得 到 的 稳 定 剂 包 括 JP-A-10-45794 中 具 有 磷 酰 胆 碱 的 聚 合 物。
7、、 JP-A-10-279594 中的脂肪酸酯， 如三酰基甘油的膜， 以及 JP-A-7-255477 中含有葡萄糖苷 衍生物作为单体单元的聚合物， 然而这些稳定剂在保持蛋白活性方面是不足的。 0006 自 1901 年 Michaels 首先用检查唾液成分作为疾病的辅助工具以来， 由于唾液容 易采集、 对病人无侵入性， 其作为疾病诊断标本方面的价值已收到广泛重视。 如今， 美国FDA 及卫生部已经明确提出， 鼓励美国的科研机构发展采用人体口腔唾液， 来测试人体的各种 肿瘤、 传染性疾病等。然而， 从口腔中分离的唾液蛋白质含量较低又易于迅速降解， 从而危 及其平移于临床实用程序。因此， 迫切需。
8、要开发一种便于人类唾液样本储存的简单、 可靠、 实用的方法。 0007 有鉴于上述现有的唾液蛋白稳定剂存在的缺陷， 本发明人基于从事此类产品设计 制造多年丰富的实务经验及专业知识， 并配合学理的运用， 积极加以研究创新， 以期创设一 种新型唾液稳定液， 使其更具有实用性。经过不断的研究、 设计， 并经反复试作样品及改进 后， 终于创设出确具实用价值的本发明。 发明内容 0008 本发明的主要目的在于， 克服现有的唾液蛋白稳定剂存在的缺陷， 而提供一种新 型唾液稳定液， 长期保存唾液蛋白活性、 便于临床检测， 从而更加适于实用， 且具有产业上 的利用价值。 0009 本发明的目的及解决其技术问题。
9、是采用以下技术方案来实现的。依据本发明 提出的一种唾液稳定液， 包括缓冲液、 防腐剂、 蛋白稳定剂、 钾盐和钠盐， 所述防腐剂的质 量与缓冲液体积的比例为 0.01%-4%W/V, 所述蛋白稳定剂的质量与缓冲液体积的比例为 0.1%-5%W/V， 所述钠盐的质量与缓冲液体积的比例为 0.5%-5%W/V， 所述钾盐的质量与缓冲 说 明 书 CN 103575911 A 3 2/3 页 4 液体积的比例为 0.5%-5%W/V。 0010 作为优选， 前述的唾液稳定液， 所述缓冲液的浓度为 0.01-0.1mol/L。 0011 作为优选， 前述的唾液稳定液， 所述缓冲液的 pH 值为 7.1-。
10、7.3。 0012 作为优选， 前述的唾液稳定液， 所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、 Tris-HCl 缓冲液、 HEPES 缓冲液、 枸橼酸缓冲液中的一种。 0013 作为优选， 前述的唾液稳定液， 所述防腐剂为苯甲酸、 苯甲酸钠、 山梨酸、 山梨酸 钾、 丙酸钙、 对羟基苯甲酸酯中的一种或几种。 0014 作为优选， 前述的唾液稳定液， 所述蛋白稳定剂为葡萄糖、 麦芽糖、 牛血清白蛋白 中的一种或几种。 0015 作为优选， 前述的唾液稳定液， 所述蛋白稳定剂为葡萄糖或者牛血清白蛋白中的 一种或两者的混合物。 0016 前述的唾液稳定液， 用于分析唾液中的蛋白质的种类为具有临床诊断意义的分析 物。
11、质， 来治愈 HIV、 乙肝、 丙肝、 梅毒、 麻疹、 风疹、 心脏病、 肿瘤。 0017 前述的唾液稳定液， 用于分析的物质为免疫球蛋白或心脏疾病标志物或肿瘤标志 物。 0018 借由上述技术方案， 本发明唾液稳定液至少具有下列优点 ： 0019 唾液来源于口腔中各种腺体分泌的复杂混合物， 其中很多组分是各种酶、 免疫球 蛋白、 粘蛋白以及细胞碎片和细菌， 由于唾液粘稠度高， 不利于检测时抗原抗体的结合， 甚 至导致错误的检测结果， 为了不影响唾液中被分析物质如特异性的 IgG 或肿瘤标志物的检 测， 本发明通过唾液稳定液来改变唾液的粘度， 并将缓冲液的pH值控制在7.1-7.3之间 ； 唾。
12、 液中含有的细菌和酶类不利于唾液的长期保存， 会使唾液中的蛋白质发生降解， 本发明在 缓冲液中加入一定的防腐剂可以有效抑制唾液样本中的细菌生长 ； 在唾液样本保存中， 为 了提高被分析物质的活性， 本发明中加入一定量的氯化钠或氯化钾可以保持免疫球蛋白的 原始结构不被破坏 ； 本发明中的蛋白稳定剂是为了保护唾液中的蛋白质不被降解， 以达到 长期保存唾液中蛋白质活性、 便于临床检测的目的。 0020 上述说明仅是本发明技术方案的概述， 为了能够更清楚了解本发明的技术手段， 并可依照说明书的内容予以实施， 以下以本发明的较佳实施例详细说明如后。 具体实施方式 0021 为更进一步阐述本发明为达成预定。
13、发明目的所采取的技术手段及功效 , 对依据 本发明提出的唾液稳定液其具体实施方式、 特征及其功效， 详细说明如后。 0022 实施例 1 0023 按照常规方法配置浓度为 0.05mol/L， pH 值为 7.2 的磷酸盐缓冲液 500ml， 然后称 取 5g 氯化钠加入到已配置好的磷酸盐缓冲液中， 使氯化钠质量和缓冲液的体积比为 1%W/ V, 再在其中加入 0.5 克的苯甲酸钠 （含量为 0.1%W/V） 、 1 克的牛血清白蛋白干粉 （含量为 0.2%W/V） ， 最后用 NaOH 或 HCl 调节溶液的 pH 值至 7.2， 即得到 pH 为 7.2 的唾液稳定液。 0024 本发明的。
14、唾液稳定液于室温保存， 与唾液按体积比 1:1 作用后， 唾液中的蛋白质 （免疫球蛋白、 心脏病标志物或肿瘤标记物） 可在室温中保存 1 个月或者 4冰箱保存半年。 0025 为了检测唾液稳定液的效果， 我们以生理盐水+HBV表面抗体阳性唾液和HBV表面 说 明 书 CN 103575911 A 4 3/3 页 5 抗体阳性唾液作对照试验， 用ELISA方法检测了唾液稳定液在室温下保存30天内对唾液中 HBV 表面抗体的稳定情况， 其结果如表 1 所示 ： 0026 表 1 0027 0028 由实验结果可见 ： HBV 表面抗体阳性唾液在加入唾液稳定液后其抗体的活性得到 了很好的保护。 00。
15、29 实施例 2 0030 按照常规方法配置浓度为 0.05mol/L， pH 值为 7.2 的 Tris-HCl 缓冲液 500ml， 然 后称取 10g 氯化钠加入到已配置好的磷酸盐缓冲液中， 使氯化钠质量和缓冲液的体积比为 2%W/V， 再在其中加入 0.5 克的苯甲酸钠 （含量为 0.1%W/V） 、 1 克的牛血清白蛋白干粉 （含量 为 0.2%W/V） ， 最后用 NaOH 或 HCl 调节溶液的 pH 值至 7.2， 即得到 pH 为 7.2 的唾液稳定液。 0031 实施例 3 0032 按照常规方法配置浓度为 0.05mol/L， pH 值为 7.2 的枸橼酸 - 磷酸盐缓冲。
16、液 500ml， 然后称取 20g 氯化钠加入到已配置好的枸橼酸 - 磷酸盐缓冲液中， 使氯化钠质量和 缓冲液的体积比为 4%W/V, 再在其中加入 0.5 克的山梨酸钾 （含量为 0.1%W/V） 、 1 克的葡萄 糖 （含量为 0.2%W/V） ， 最后用 NaOH 或 HCl 调节溶液的 pH 值至 7.2， 即得到 pH 为 7.3 的唾液 稳定液。 0033 以上所述， 仅是本发明的较佳实施例而已， 并非对本发明作任何形式上的限制， 虽 然本发明已以较佳实施例揭露如上， 然而并非用以限定本发明 , 任何熟悉本专业的技术人 员， 在不脱离本发明技术方案范围内 , 当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰 为等同变化的等效实施例 , 但凡是未脱离本发明技术方案的内容， 依据本发明的技术实质 对以上实施例所作的任何简单修改、 等同变化与修饰， 均仍属于本发明技术方案的范围内。 说 明 书 CN 103575911 A 5 。