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1、10申请公布号CN104059053A43申请公布日20140924CN104059053A21申请号201410264602822申请日20140613C07D401/06200601C07D401/14200601A61K31/473200601A61K31/5377200601A61K31/541200601A61K31/496200601A61P35/0020060171申请人大连理工大学地址116024辽宁省大连市高新园区凌工路2号72发明人李晓莲于汀汀张英利马黎明孟扬陈思宇74专利代理机构大连东方专利代理有限责任公司21212代理人赵淑梅李馨54发明名称一类酰胺侧链含1,2,3三唑。
2、的萘酰亚胺衍生物的合成及其应用57摘要本发明涉及一类酰胺侧链含1,2,3三唑的萘酰亚胺衍生物的合成及其应用，属于有机合成领域，所述衍生物具有通式A结构的化合物，所述衍生物的制备方法以萘酐为原料，经过与丙醇胺酰胺化，再通过三溴化磷取代羟基，然后将溴叠氮化，最后与连有环状胺的胺基丙炔反应制得，所述衍生物应用在抑制肿瘤细胞药物中。51INTCL权利要求书1页说明书7页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书7页10申请公布号CN104059053ACN104059053A1/1页21一类酰胺侧链含1,2,3三唑的萘酰亚胺衍生物，其特征在于所述衍生物具有通式A结构的化合物通。
3、式A中R为吗啉基、硫吗啉基、六氢吡啶基、吡咯烷基、甲基哌嗪基或哌嗪基。2如权利要求1所述的酰胺侧链含1,2,3三唑的萘酰亚胺衍生物的制备方法，其特征在于所述制备方法以萘酐为原料，经过与丙醇胺酰胺化，再通过三溴化磷取代羟基，然后将溴叠氮化，最后与连有环状胺的胺基丙炔反应制得；所述环状胺为吗啉、硫吗啉、六氢吡啶、吡咯烷、N甲基哌嗪或哌嗪。3如权利要求1所述的酰胺侧链含1,2,3三唑的萘酰亚胺衍生物在抑制肿瘤细胞药物中的应用。4根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的肿瘤细胞为乳腺癌MCF7细胞、人宫颈癌HELA细胞或肝癌SMMC7721细胞。权利要求书CN104059053A1/7页3一类酰胺侧。
4、链含1,2,3三唑的萘酰亚胺衍生物的合成及其应用技术领域0001本发明涉及一类酰胺侧链含1,2,3三唑的萘酰亚胺衍生物的合成及其应用，属于有机合成领域。背景技术0002对DNA嵌入剂是化学和医药、分子生物学交叉学科的研究热点。嵌入剂嵌插到DNA的碱基对中，改变其构象，导致DNA链解旋变长，进而限制其复制表现出抗肿瘤活性。萘酰亚胺衍生物作抗肿瘤药物已有很大研究进展，如著名的萘酰亚胺类先导药物AMONADE和MITONADE，已进入临床试验。但它们在临床试验中表现出引起骨髓抑制、呕吐、皮疹等副作用，因此设计合成新型有效的DNA靶向药物有重要的应用价值。此外，三唑衍生物被广泛应用于抗菌抗癌等领域，可。
5、以用作芳香化酶抑制剂、血管生成抑制剂、酶抑制剂等发挥抗癌作用。将三唑药效团引入到萘酰亚胺母体的侧链中，将有助于研发新型高效低毒的抗癌药物。发明内容0003本发明的目的是在萘酰亚胺的酰胺侧链上引入有抗癌活性的三唑药效团，以改善分子的生物学活性，从而提高抗肿瘤性能。0004本发明所述的酰胺侧链含1,2,3三唑的萘酰亚胺衍生物，是在萘酰亚胺母体的酰胺侧链上引入三唑药效团，设计的药物分子以萘酐为母体经过酰胺化，溴代，叠氮化，并环等步骤，合成了对体外肿瘤细胞生长有抑制力的一类含三唑的萘酰亚胺衍生物。0005本发明提供了一类酰胺侧链含1,2,3三唑的萘酰亚胺衍生物，其特征在于所述衍生物具有通式A结构的化合。
6、物00060007通式A中0008R为吗啉基、硫吗啉基、六氢吡啶基、吡咯烷基、甲基哌嗪基或哌嗪基。0009本发明的另一目的是提供上述酰胺侧链含1,2,3三唑的萘酰亚胺衍生物的制备方法，所述制备方法以萘酐为原料，经过与丙醇胺酰胺化，再通过三溴化磷取代羟基，然后说明书CN104059053A2/7页4将溴叠氮化，最后与连有环状胺的胺基丙炔反应制得；0010所述环状胺为吗啉、硫吗啉、六氢吡啶、吡咯烷、N甲基哌嗪或哌嗪。0011其反应式如下00120013对照上述反应式，具体的制备方法为以萘酐A为起始原料，与丙醇胺在乙醇中反应得式化合物B；由式化合物B与PBR3在乙酸乙酯中反应得中间体C；式化合物C与。
7、NAN3在DMF中反应得到式化合物D；式化合物与对应环状胺基丙炔反应得到目标产物E。0014本发明的又一目的是提供上述酰胺侧链含1,2,3三唑的萘酰亚胺衍生物在抑制肿瘤细胞药物中的应用。0015本发明所述的肿瘤细胞优选为乳腺癌MCF7细胞、人宫颈癌HELA细胞或肝癌SMMC7721细胞。0016本发明所述酰胺侧链含1,2,3三唑的萘酰亚胺衍生物，用四氮唑盐还原法对乳腺癌MCF7细胞、人宫颈癌HELA细胞和肝癌SMMC7721细胞进行体外抑制肿瘤细胞生长活性的测定，结果表明，该类化合物对乳腺癌、宫颈癌、肝癌等多种癌细胞具有抑制生长的效果。0017用四氮唑盐还原法对乳腺癌MCF7细胞、人宫颈癌HE。
8、LA细胞和肝癌SMMC7721细胞以20003000个/孔接种于96孔培养板内，培养12H后加入梯度浓度药液100L/孔，对每个肿瘤细胞株，设置6个复孔，另设无细胞调零孔、如果药物有颜色要做相应药物浓度无细胞调零孔；肿瘤细胞在37、5CO2条件下培养48H后，加5MG/ML的MTT液继续培养4H后，加入二甲基亚砜DIMETHYLSULFOXIDE或DMSO溶解结晶，然后用酶标仪测OD570值，利用寇式改良法计算被测物对癌细胞生长的IC50值。具体实施方式0018下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。说明书CN104059053A3/7页500。
9、19实施例10020N34吗啉甲基1,2,3三唑丙基1,8萘酰亚胺E1的合成0021在50ML双口瓶中，加入198G萘酐和30ML乙醇，搅拌均匀后加入092ML正丙醇胺，回流反应2H，静置后倒入冷水中，抽滤、用水洗涤、干燥，得化合物B白色固体223G，产率87。00220023在25ML双口瓶中，加入051G化合物B和5ML乙酸乙酯，室温搅拌均匀，将380LPBR3缓慢滴入反应体系，回流反应3H，蒸发得到固体，固体用水洗涤、干燥，得化合物C浅黄色固体050G，产率79。00240025在25ML双口瓶中，加入050G化合物C、8MLDMF和031GNAN3，加热至50反应2H，静置后倒入冷水中。
10、，抽滤、用水洗涤、干燥，得化合物D白色固体044G，产率97。00260027在25ML双口瓶中，加入028G化合物D、100L3吗啉基丙炔、4ML水和4ML叔丁醇混合液、025GCUSO45H2O和040GVCNA，氮气保护下60避光反应，TLC监测至反应完全，反应液用CH2CL2和水萃取，蒸发有机层，硅胶柱层析分离CH2CL2H2O201，得化合物E1白色固体029G，产率71。说明书CN104059053A4/7页6002800291HNMR400MHZ,CDCL3861D,J73HZ,2H,825D,J82HZ,2H,783777M,2H,776S,1H,449T,J70HZ,2H,4。
11、27T,J68HZ,2H,374T,J39HZ,4H,369S,2H,257T,J34,28HZ,4H,248232M,2H0030TOFMSM/ZC22H24N5O3，计算值40619，实测值40617。0031实施例20032N34硫吗啉甲基1,2,3三唑丙基1,8萘酰亚胺E2的合成0033除用3硫吗啉基丙炔代替3吗啉基丙炔外，其他合成及提纯方法同实施例1，得目标化合物E2，灰白色固体，产率72。003400351HNMR400MHZ,CDCL3861D,J67HZ,2H,825D,J80HZ,2H,784S,1H,779T,J71HZ,2H,450T,J64HZ,2H,426T,J67H。
12、Z,2H,383S,2H,302285M,4H,285268M,4H,248234M,2H0036TOFMSM/ZC22H24N5O2S，计算值4221651，实测值4221644。0037实施例30038N34哌啶甲基1,2,3三唑丙基1,8萘酰亚胺E3的合成0039除用3哌啶基丙炔代替3吗啉基丙炔外，其他合成及提纯方法同实施例1，得目标化合物E3，灰色固体，产率80。0040说明书CN104059053A5/7页700411HNMR400MHZ,CDCL3857D,J72HZ,2H,821D,J83HZ,2H,781773M,2H,773S,1H,445T,J72HZ,2H,425T,J6。
13、7HZ,2H,368S,2H,264243M,4H,243230M,2H,172151M,4H,149134M,2H0042TOFMSM/ZC23H26N5O2，计算值4042087，实测值4042083。0043实施例40044N34吡咯烷甲基1,2,3三唑丙基1,8萘酰亚胺E4的合成0045除用3吡咯烷基丙炔代替3吗啉基丙炔外，其他合成及提纯方法同实施例1，得目标化合物E4，灰白色固体，产率75。004600471HNMR400MHZ,CDCL3861D,J73HZ,2H,825D,J82HZ,2H,784777M,2H,776S,1H,448T,J72HZ,2H,429T,J68HZ,2。
14、H,384S,2H,276257M,4H,247232M,2H,190175M,4H0048TOFMSM/ZC22H24N5O2，计算值3901930，实测值3901925。0049实施例50050N34甲基哌嗪甲基1,2,3三唑丙基1,8萘酰亚胺E5的合成0051除用3甲基哌嗪基丙炔代替3吗啉基丙炔外，其他合成及提纯方法同实施例1，得目标化合物E5，浅褐色固体，产率72。0052说明书CN104059053A6/7页800531HNMR400MHZ,CDCL3861D,J73HZ,2H,825D,J82HZ,2H,784777M,2H,776S,1H,448T,J72HZ,2H,429T,J。
15、68HZ,2H,384S,2H,276257M,4H,247232M,2H,190175M,4H0054TOFMSM/ZC23H27N6O2，计算值4192195，实测值4192179。0055实施例60056N,N双34哌嗪甲基1,2,3三唑丙基1,8萘酰亚胺E6的合成0057除用N,N二炔丙基哌嗪代替3吗啉基丙炔外，其他合成及提纯方法同实施例1，得目标化合物E6，灰白色固体，产率69。005800591HNMR400MHZ,CDCL3859D,J74HZ,2H,824D,J81HZ,2H,783777M,2H,776S,1H,447T,J70HZ,2H,424T,J67HZ,2H,372S。
16、,2H,265T,J137HZ,4H,238P,J71HZ,2H0060TOFMSM/ZC40H39N10O4，计算值7233156，实测值7233146。0061应用例10062对实施例16合成的目标产物E1E6的体外抑制肿瘤细胞生长活性测定0063用四氮唑盐MICROCULTURETETROZOLIUM，MTT还原法对三种肿瘤细胞，人乳腺癌细胞MCF7人宫颈癌细胞HELA和人肝癌细胞SMMC7721进行体外抑制肿瘤细胞生长活性测定，所述的MTT还原方法如下0064一、接种细胞00651、用胰蛋白酶消化贴壁的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。说明书CN104059053A7/7页900。
17、662、用计数板计数。00673、将细胞稀释，每孔约有20005000个细胞，用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入100L细胞悬液。00684、PBS加至周围各孔中。00695、将培养板放至37、5CO2的环境中温育12H，等细胞贴壁后可加入药物。0070二、添加药物00711、用培养基将细胞毒性药物稀释成80、40、20、10M四个梯度浓度。由于孔中原有100L培养基，因此加药后药物浓度会被稀释一倍，即为测试的浓度40、20、10、5M。00722、在第2列和第11列的8个孔中加入100L新鲜配制的培养基，这些细胞作为空白对照。00733、在第310列的细胞中加入含细胞毒性药物的培养基。
18、，每个药物浓度仅需6个复孔，这样AD行可用于第一种药物，EH行可用于第二种药物。00744、将培养板放回37、5CO2的环境中温育48H。0075三、存活细胞数的估算00761、在生长期末，在第111列所有孔中各加入20LMTT。00772、在37、5CO2的环境中温育4H。00783、弃去孔中的培养基和MTT,在第111列所有孔中各加入200LDMSO，以溶解残留的MTT甲攒结晶。00794、测试选择测定波长570NM，参考波长630NM，在酶标仪上测定各孔吸光度记录结果，并按下列公式计算出被测物对癌细胞生长的抑制率肿瘤增长抑制率对照组OD值治疗组OD值/对照组OD值100。0080被测物对癌细胞生长的IC50值IC50是指被抑制一半时抑制剂的浓度，目标产物E1E6的体外抑制肿瘤细胞生长活性测定结果见表1。0081表1目标产物E1E6对肿瘤细胞的IC50值00820083结论合成的目标产物E1E6对三种肿瘤细胞都有明显的抑制增殖作用，目标产物E3对三种细胞抑制活性均优于其他5个目标产物；目标产物E1E4对各细胞的IC50值相差不大，说明侧链环胺为吗啉、硫吗啉、六氢吡啶和吡咯烷对分子的抑制活性影响相近。说明书CN104059053A。