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1、(10)申请公布号 CN 103907497 A (43)申请公布日 2014.07.09 CN 103907497 A (21)申请号 201410117580.2 (22)申请日 2014.03.25 A01G 17/00(2006.01) (71)申请人 郑兴义 地址 518000 广东省深圳市福田区香丽大厦 丽梅阁 5-A (72)发明人 郑兴义 (54) 发明名称 一种李子试管苗扦插快繁的方法 (57) 摘要 一种李子试管苗扦插快繁的方法， 其特征在 于按如下的步骤进行 ： (1) 试管苗培养 ： (2) 扦插 选取和处理 ： 将试管苗截取为上下两部分， 保证 下部分长度在 2-3 。
2、厘米， 用手术刀将上部分间隔 3-4厘米切出V型伤口， 在不同浓度激素中浸泡20 秒后， 将上部分整体放入平盘， 用混合基质埋上， 仅露出顶部芽， 浇透水 ； (3) 扦插诱导生根 ： 于每 年的春、 秋两季， 在珍珠岩混合基质上扦插 ； 其中 的混合基质为珍珠岩、 蛭石、 草炭土、 河沙按重量 份数2211比例混合 ； (4)扦插后的管理。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 (10)申请公布号 CN 103907497 A CN 103907497 A 1/1 页 2 1. 一种。
3、李子试管苗扦插快繁的方法， 其特征在于按如下的步骤进行 ： (1) 试管苗培养 ： 初代培养于春季选取生长健壮、 无病虫害的一年生幼嫩新梢， 用自来 水流动冲洗3060min， 转移至超净工作台上， 用75酒精对新梢带芽茎段消毒3045s， 然后于 0.1升汞中浸泡 5 11min， 无菌水冲洗 4 6 次， 将茎尖部分剥离至 0.5 1mm 大小， 其余部分切成 1cm 左右的茎段， 分别接种于诱导培养基上， 光照条件下培养， 诱导培 养基为 MS+6-BA3.0mg L+IAA0.5mg L+ 蔗糖 30g L+ 琼脂 10g L， pH 值为 6.5， 培养 条件为 ： 光照强度 300。
4、0LX， 光照时间 18h， 温度 26， 培养时间 17d， 经诱导培养， 可诱导腋 芽萌发， 增殖培养 ： 待初代外植体分化成苗后， 转到增殖培养基上， 生根培养将高约 1.5cm 以上的健壮嫩苗转入生根培养基中培养， 初代培养及增殖培养基本培养基为 MS， 生根培养 基本培养基为 1 2MS ； 琼脂 5.0 5.5g L ； 蔗糖 30g L ； pH 值 5.6 .8 ； 光照强度为 1500 2000lx ； 光照时间为 14h d ； 培养温度控制在 (251)； 空气相对湿度为 40 70， 试管苗移栽选取生长健壮并生有3条以上1cm左右新根的试管苗进行炼苗， 自然光下 驯化炼。
5、苗 1 周， 然后揭开瓶盖， 每天喷清水 4 5 次， 3 天后取出幼苗， 洗净附着在根上的残 留培养基， 移植于基质中 ； 其中所述移植基质为腐殖土混合蛭石， 混合比例为 2 1， 放入小 拱棚中， 定期喷水， 每隔 1 周追施一次稀薄液体肥料， 并逐渐增加光照， 待营养钵苗有 4 5 片新叶， 株高 5cm 以上时， 移入大田扦插 ； (2) 扦插选取和处理 ： 将试管苗截取为上下两部分， 保证下部分长度在 2-3 厘米， 用手 术刀将上部分间隔 3-4 厘米切出 V 型伤口， 在不同浓度激素中浸泡 20 秒后， 将上部分整体 放入平盘， 用混合基质埋上， 仅露出顶部芽， 浇透水 ； 其中。
6、所述的激素为 ： 吲哚乙酸、 ABT-1 号生根粉、 ABT-6 号生根粉 ； 所述的试管苗为诱导生根期的吉塞拉 5 号或 6 号的组培苗 ； 所 述的不同浓度激素中浸泡指的是 ： 浓度为 0.4， 0.5， 0.6mg L 吲哚乙酸， ABT-1 号生根粉， ABT-6 号生根粉 ； (3) 扦插诱导生根 ： 于每年的春、 秋两季， 在珍珠岩混合基质上扦插 ； 其中的混合基质 为珍珠岩、 蛭石、 草炭土、 河沙按重量份数 2 2 1 1 比例混合 ； (4) 扦插后的管理 ： 保证棚内温度在 26-28， 湿度在 50-60， 隔天喷洒 1-2 次多菌 灵， 扦插 5-7 天后喷洒 1-5 。
7、次功夫杀虫剂， 每次间隔 2-3 天， 10-14 天观察是否生根， 出苗前 一周施一次尿素以促使幼苗健壮生长 ； 14 天后， 插条新根初步形成， 30 天后幼苗形成， 此时 进行炼苗、 移植 ； 其中所述的多菌灵指的是 1250-1670 毫克千克的水溶液 ； 功夫杀虫剂指 的是 1250-1670 毫克千克的水溶液。 权 利 要 求 书 CN 103907497 A 2 1/4 页 3 一种李子试管苗扦插快繁的方法 技术领域 0001 本发明属于植物种苗繁殖技术领域， 具体为一种李子试管苗扦插快繁的方法。 背景技术 0002 李子在我国的栽培虽有悠久的历史， 但是， 其分布区域较小。近几。
8、年来， 李子作为 一种上市早、 味美色鲜的水果， 愈来愈引起人们的重视。 很多地区都准备引种或扩大栽培面 积， 生产上急需大量的苗木 . 按照传统方式繁殖李子速度慢， 远远不能满足需要。为此， 国 内不少单位开展李子的试管繁殖。 0003 试管苗的扦插快繁技术， 是近年来采取的一项新型实用技术。试管苗扦插技术在 马铃薯、 金银花、 葡萄等植物生产上已取得了很好的效果， 为探索高效、 节俭、 低耗的栽培模 式， 我们将该项技术用于李子砧木生产上， 采用诱导生根期组培苗进行试管苗扦插技术研 究， 获得脱毒李子砧木近万株， 在组培苗过度移栽期短短 20 天的时间内， 让组培试管苗增 殖 3-4 倍，。
9、 效果良好。 0004 李子矮化砧木现有的扦插方法有两种 ： 硬枝扦插、 嫩枝扦插。硬枝扦插存活率极 低。嫩枝扦插是采用剪苗方法、 选材不同于硬枝扦插， 需要高温高湿环境， 存活率最高也只 有 70。目前国内尚没有做李子试管苗扦插的文献报道。 发明内容 0005 针对上述存在的问题， 本发明主要解决的技术问题是提供李子试管苗扦插快繁的 方法， 为解决上述技术问题， 本发明采用的一个技术方案是 ： 0006 (1) 试管苗培养 ： 初代培养于春季选取生长健壮、 无病虫害的一年生幼嫩新梢， 用 自来水流动冲洗 30 60min， 转移至超净工作台上， 用 75酒精对新梢带芽茎段消毒 30 45s，。
10、 然后于 0.1升汞中浸泡 5 11min， 无菌水冲洗 4 6 次， 将茎尖部分剥离至 0.5 1mm 大小， 其余部分切成 1cm 左右的茎段， 分别接种于诱导培养基上， 光照条件下培养， 诱导 培养基为 MS+6-BA3.0mg L+IAA0.5mg L+ 蔗糖 30g L+ 琼脂 10g L， pH 值为 6.5， 培 养条件为 ： 光照强度3000LX， 光照时间18h， 温度26， 培养时间17d， 经诱导培养， 可诱导腋 芽萌发， 增殖培养 ： 待初代外植体分化成苗后， 转到增殖培养基上， 生根培养将高约 1.5cm 以上的健壮嫩苗转入生根培养基中培养， 初代培养及增殖培养基本培。
11、养基为 MS， 生根培养 基本培养基为 1 2MS ； 琼脂 5.0 5.5g L ； 蔗糖 30g L ； pH 值 5.6 .8 ； 光照强度为 1500 2000lx ； 光照时间为 14h d ； 培养温度控制在 (251)； 空气相对湿度为 40 70， 试管苗移栽选取生长健壮并生有3条以上1cm左右新根的试管苗进行炼苗， 自然光下 驯化炼苗 1 周， 然后揭开瓶盖， 每天喷清水 4 5 次， 3 天后取出幼苗， 洗净附着在根上的残 留培养基， 移植于基质中 ； 其中所述移植基质为腐殖土混合蛭石， 混合比例为 2 1， 放入小 拱棚中， 定期喷水， 每隔 1 周追施一次稀薄液体肥料，。
12、 并逐渐增加光照， 待营养钵苗有 4 5 片新叶， 株高 5cm 以上时， 移入大田扦插 ； 0007 (2) 扦插选取和处理 ： 将试管苗截取为上下两部分， 保证下部分长度在 2-3 厘米， 说 明 书 CN 103907497 A 3 2/4 页 4 用手术刀将上部分间隔 3-4 厘米切出 V 型伤口， 在不同浓度激素中浸泡 20 秒后， 将上部 分整体放入平盘， 用混合基质埋上， 仅露出顶部芽， 浇透水 ； 其中所述的激素为 ： 吲哚乙酸、 ABT-1 号生根粉、 ABT-6 号生根粉 ； 所述的试管苗为诱导生根期的吉塞拉 5 号或 6 号的组培 苗 ； 所述的不同浓度激素中浸泡指的是 。
13、： 浓度为 0.4， 0.5， 0.6mg L 吲哚乙酸， ABT-1 号生 根粉， ABT-6 号生根粉 ； 0008 (3) 扦插诱导生根 ： 于每年的春、 秋两季， 在珍珠岩混合基质上扦插 ； 其中的混合 基质为珍珠岩、 蛭石、 草炭土、 河沙按重量份数 2 2 1 1 比例混合 ； 0009 (4) 扦插后的管理 ： 保证棚内温度在 26-28， 湿度在 50-60， 隔天喷洒 1-2 次多 菌灵， 扦插 5-7 天后喷洒 1-5 次功夫杀虫剂， 每次间隔 2-3 天， 10-14 天观察是否生根， 出苗 前一周施一次尿素以促使幼苗健壮生长 ； 14 天后， 插条新根初步形成， 30 。
14、天后幼苗形成， 此 时进行炼苗、 移植 ； 其中所述的多菌灵指的是 1250-1670 毫克千克的水溶液 ； 功夫杀虫剂 指的是 1250-1670 毫克千克的水溶液。 0010 本发明的李子矮化砧木扦插和现有的不同点在于 ： 0011 1、 现有硬枝扦插方法产出的是未脱毒普通苗， 生根率不足 30， 嫩枝扦插最高也 就只有 70。本发明扦插产出的苗是李子脱毒苗， 生根率高达 85 ； 而李子脱毒苗给种植 者提供了很多好处， 如脱毒苗病毒病少， 很多遗传病症基本消失， 保证了苗木的存活率， 并 让苗木产量提高至少 30。 0012 2、 本发明的扦插方法一年能扦插两次， 繁殖倍数高， 时间短。。
15、温度湿度要求较高 ； 现有方法硬枝扦插只能在春节清明节前做， 嫩枝扦插只能在夏季 8 月份做， 时间限制比较 严格。 0013 3、 本发明的扦插方法耗费人工少， 成本低， 工效高， 一年可以在春秋两季使用 ； 现 有硬枝扦插方法扦插劳动量大， 且对剪切口、 扦插手法要求很高。苗术的存活率相对比较 低。 0014 本发明公开的李子试管苗扦插快繁方法与现有技术相比所具有的积极效果在 于 ： 0015 (1) 本发明所述的李子试管苗扦插快繁方法， 其中试管苗的扦插采用的是试管培 育出来的苗作为材料。 由于组培试管苗是非常嫩的苗， 看上去像是豆芽菜一样嫩苗， 这时候 的苗细胞含水量特别大， 没有形成。
16、树木一样的内部结构， 弱不禁风， 一般试管苗存活与否得 看移入大田后其木质化程度好不好， 用这个来判断其适应外界环境和生命能力， 因此， 试管 培育出来的苗完全没有木质化， 一般移入大棚两个月以后移栽大田适应半年后才开始木质 化。 0016 (2) 本发明的试管苗扦插培育出来的是脱毒李子苗， 实验数据显示 ： 半脱毒李子 苗产量比未脱毒李子苗高 30， 全脱毒李子苗产量比未脱毒李子苗高 45。因此， 本发明 的方法可以解决李子脱毒苗的规模化快繁生产问题。 0017 (3) 本发明的试管苗扦插培育出来的是脱毒李子苗， 最大的特点是 ： 短期内可以 繁殖 3-4 倍的脱毒苗， 这样可以有效地解决一。
17、些遗传病症， 保证苗木的存活率， 更有利于大 规模的繁殖生产。 具体实施方式 说 明 书 CN 103907497 A 4 3/4 页 5 0018 实施例 1 0019 (1) 试管苗培养 ： 初代培养于春季选取生长健壮、 无病虫害的一年生幼嫩新梢， 用自来水流动冲洗 30min， 转移至超净工作台上， 用 75酒精对新梢带芽茎段消毒 30s， 然后于 0.1升汞中浸泡 5min， 无菌水冲洗 4 6 次， 将茎尖部分剥离至 0.5mm 大小， 其 余部分切成 1cm 左右的茎段， 分别接种于诱导培养基上， 光照条件下培养， 诱导培养基为 MS+6-BA3.0mg L+IAA0.5mg L+。
18、 蔗糖 30g L+ 琼脂 10g L， pH 值为 6.5， 培养条件为 ： 光照强度3000LX， 光照时间18h， 温度26， 培养时间17d， 经诱导培养， 可诱导腋芽萌发， 增 殖培养 ： 待初代外植体分化成苗后， 转到增殖培养基上， 生根培养将高约 1.5cm 以上的健壮 嫩苗转入生根培养基中培养， 初代培养及增殖培养基本培养基为 MS， 生根培养基本培养基 为 1/2MS ： 琼脂 5.0 5.5g L ； 蔗糖 30g L ； pH 值 5.6 ； 光照强度为 15001x ； 光照时间 为 14h/d ； 培养温度控制在 (251) ； 空气相对湿度为 40 70， 试管苗移。
19、栽选取生长 健壮并生有 3 条以上 1cm 左右新根的试管苗进行炼苗， 自然光下驯化炼苗 1 周， 然后揭开瓶 盖， 每天喷清水 4 5 次， 3 天后取出幼苗， 洗净附着在根上的残留培养基， 移植于基质中 ； 其中所述移植基质为腐殖土混合蛭石， 混合比例为 2 1， 放入小拱棚中， 定期喷水， 每隔 1 周追施一次稀薄液体肥料， 并逐渐增加光照， 待营养钵苗有 4 5 片新叶， 株高 5cm 以上时， 移入大田扦插 ； 0020 (2) 扦插选取和处理 ： 将试管苗截取为上下两部分， 保证下部分长度在 2-3 厘米， 用手术刀将上部分间隔 3-4 厘米切出 V 型伤口， 在不同浓度激素中浸泡。
20、 20 秒后， 将上部 分整体放入平盘， 用混合基质埋上， 仅露出顶部芽， 浇透水 ； 其中所述的激素为 ： 吲哚乙酸、 ABT-1 号生根粉、 ABT-6 号生根粉 ； 所述的试管苗为诱导生根期的吉塞拉 5 号或 6 号的组培 苗 ； 所述的不同浓度激素中浸泡指的是 ： 浓度为 0.4， 0.5， 0.6mg L 吲哚乙酸， ABT-1 号生 根粉， ABT-6 号生根粉 ； 0021 (3) 扦插诱导生根 ： 于每年的春、 秋两季， 在珍珠岩混合基质上扦插 ； 其中的混合 基质为珍珠岩、 蛭石、 草炭土、 河沙按重量份数 2 2 1 1 比例混合 ； 0022 (4) 扦插后的管理 ： 保。
21、证棚内温度在 26-28， 湿度在 50-60， 隔天喷洒 1-2 次多 菌灵， 扦插 5-7 天后喷洒 1-5 次功夫杀虫剂， 每次间隔 2-3 天， 10-14 天观察是否生根， 出苗 前一周施一次尿素以促使幼苗健壮生长 ； 14 天后， 插条新根初步形成， 30 天后幼苗形成， 此 时进行炼苗、 移植 ； 其中所述的多菌灵指的是 1250-1670 毫克千克的水溶液 ； 功夫杀虫剂 指的是 1250-1670 毫克千克的水溶液。 0023 实施例 2 0024 (1) 试管苗培养 ： 初代培养于春季选取生长健壮、 无病虫害的一年生幼嫩新梢， 用自来水流动冲洗 60min， 转移至超净工作。
22、台上， 用 75酒精对新梢带芽茎段消毒 45s， 然后于 0.1升汞中浸泡 11min， 无菌水冲洗 6 次， 将茎尖部分剥离至 1mm 大小， 其余 部分切成 1cm 左右的茎段， 分别接种于诱导培养基上， 光照条件下培养， 诱导培养基为 MS+6-BA3.0mg L+IAA0.5mg L+ 蔗糖 30g L+ 琼脂 10g L， pH 值为 6.5， 培养条件为 ： 光照强度3000LX， 光照时间18h， 温度26， 培养时间17d， 经诱导培养， 可诱导腋芽萌发， 增 殖培养 ： 待初代外植体分化成苗后， 转到增殖培养基上， 生根培养将高约 1.5cm 以上的健壮 嫩苗转入生根培养基中。
23、培养， 初代培养及增殖培养基本培养基为 MS， 生根培养基本培养基 为 1 2MS ； 琼脂 5.5g L ； 蔗糖 30g L ； pH 值 8 ； 光照强度为 2000lx ； 光照时间为 14h/ 说 明 书 CN 103907497 A 5 4/4 页 6 d ； 培养温度控制在 (251) ； 空气相对湿度为 40 70， 试管苗移栽选取生长健壮并 生有 3 条以上 1cm 左右新根的试管苗进行炼苗， 自然光下驯化炼苗 1 周， 然后揭开瓶盖， 每 天喷清水 4 5 次， 3 天后取出幼苗， 洗净附着在根上的残留培养基， 移植于基质中 ； 其中所 述移植基质为腐殖土混合蛭石， 混合比。
24、例为 2 1， 放入小拱棚中， 定期喷水， 每隔 1 周追施 一次稀薄液体肥料， 并逐渐增加光照， 待营养钵苗有 4 5 片新叶， 株高 5cm 以上时， 移入大 田扦插 ； 0025 (2) 扦插选取和处理 ： 将试管苗截取为上下两部分， 保证下部分长度在 2-3 厘米， 用手术刀将上部分间隔 3-4 厘米切出 V 型伤口， 在不同浓度激素中浸泡 20 秒后， 将上部 分整体放入平盘， 用混合基质埋上， 仅露出顶部芽， 浇透水 ； 其中所述的激素为 ： 吲哚乙酸、 ABT-1 号生根粉、 ABT-6 号生根粉 ； 所述的试管苗为诱导生根期的吉塞拉 5 号或 6 号的组培 苗 ； 所述的不同浓。
25、度激素中浸泡指的是 ： 浓度为 0.4， 0.5， 0.6mg L 吲哚乙酸， ABT-1 号生 根粉， ABT-6 号生根粉 ； 0026 (3) 扦插诱导生根 ： 于每年的春、 秋两季， 在珍珠岩混合基质上扦插 ； 其中的混合 基质为珍珠岩、 蛭石、 草炭土、 河沙按重量份数 2 2 1 1 比例混合 ； 0027 (4) 扦插后的管理 ： 保证棚内温度在 26-28， 湿度在 50-60， 隔天喷洒 1-2 次多 菌灵， 扦插 5-7 天后喷洒 1-5 次功夫杀虫剂， 每次间隔 2-3 天， 10-14 天观察是否生根， 出苗 前一周施一次尿素以促使幼苗健壮生长 ； 14 天后， 插条新根初步形成， 30 天后幼苗形成， 此 时进行炼苗、 移植 ； 其中所述的多菌灵指的是 1250-1670 毫克千克的水溶液 ； 功夫杀虫剂 指的是 1250-1670 毫克千克的水溶液。 说 明 书 CN 103907497 A 6 。