CASR激动剂.pdf

本发明探索具有CaSR激动活性的多种变种化合物，提供含有该化合物的CaSR激动剂、药物组合物、腹泻的预防或治疗药以及浓厚味给予剂。以含有具有CaSR激动活性的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐为特征的CaSR激动剂、药物组合物、腹泻的预防或治疗药以及浓厚味给予剂。

权利要求书
1.  下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐：

式中，R2和R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基的基团；
R4为卤代基；
R1和R3中的任一个为磺酸基、且另一个为选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基的基团；
R6表示氢原子或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子，
其中，下述化合物除外：
X为亚甲基、R1为磺酸基、R2～R6均为氢原子的化合物。

2.  下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐：

式中，R1和R3～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基的基团；
R2表示选自硝基、磺酸基、或下述基团

或

的基团、且
R6为羟基；
R7表示氢原子或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子。

3.  下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐在制备CaSR激动剂中的用途，

式中，R1和R3～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基的基团；
R2为选自硝基、磺酸基、或下述基团

或

的基团；且
R6和R7分别独立表示氢原子或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子，
其中，下述化合物除外：
X为亚甲基、R2为下述基团

R1和R3～R6均为氢原子、且R7为氢原子或甲基的化合物。

4.  下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐在制备浓厚味给予剂中的用途，

式中，R1和R3～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基的基团；
R2为选自硝基、磺酸基、或下述基团

或

的基团；且
R6和R7分别独立表示氢原子或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子，
其中，下述化合物除外：
X为亚甲基、R2为下述基团

R1和R3～R6均为氢原子、且R7为氢原子或甲基的化合物。

5.  下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐在制备腹泻治疗或预防药中的用途，

式中，R1和R3～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基的基团；
R2为选自硝基、磺酸基、或下述基团

或

的基团；且
R6和R7分别独立表示氢原子或可具有取代基的碳原子数为1～6 的烷基；
X为亚甲基或氧原子，
其中，下述化合物除外：
X为亚甲基、R2为下述基团

R1和R3～R6均为氢原子、且R7为氢原子或甲基的化合物。

6.  药物组合物，其中含有权利要求1或2所述的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐。

7.  CaSR激动剂，其中含有下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐：

式中，R1～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基或磺酸基、或下述基团

或

的基团，其中，R1～R3中的任一个为选自硝基、磺酸基、或下述基团

或

的基团；且
R6和R7分别独立表示氢原子、羟基或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子。

8.  浓厚味给予剂，其中含有下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐：

式中，R1～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基或磺酸基、或下述基团

或

的基团，其中，R1～R3中的任一个为选自硝基、磺酸基、或下述基团

或

的基团；且
R6和R7分别独立表示氢原子、羟基或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子。

9.  腹泻治疗或预防药，其中含有下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐：

式中，R1～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基或磺酸基、或下述基团

或

的基团，其中，R1～R3中的任一个为选自硝基、磺酸基、或下述基团

或

的基团；且
R6和R7分别独立表示氢原子、羟基或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子。

10.  下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐在制备CaSR激动剂中的用途，

式中，R1～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基或磺酸基、或下述基团

或

的基团，其中，R1～R3中的任一个为选自硝基、磺酸基、或下述基团

或

的基团；且
R6和R7分别独立表示氢原子、羟基或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子。

11.  下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐在制备浓厚味给予剂中的用途，

式中，R1～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基或磺酸基、或下述基团

或

的基团，其中，R1～R3中的任一个为选自硝基、磺酸基、或下述基团

或

的基团；且
R6和R7分别独立表示氢原子、羟基或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子。

12.  下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐在制备腹泻治疗或预防药中的用途，

式中，R1～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基或磺酸基、或下述基团

或

的基团，其中，R1～R3中的任一个为选自硝基、磺酸基、或下述基团

或

的基团；且
R6和R7分别独立表示氢原子、羟基或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子。

说明书CaSR激动剂
本申请是申请号为200980148983.0、申请日为2009年10月5日、发明名称为“CaSR激动剂”的中国专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及具有CaSR激动活性的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐、以及含有该衍生物或其制药学上可接受的盐作为有效成分的CaSR激动剂、药物组合物、腹泻的预防或治疗药和浓厚味(コク味)给予剂。
背景技术
钙敏感受体(Calcium Sensing Receptor：CaSR)也称作钙受体，该受体信号调节各种生物体内功能，具有CaSR激动活性的物质存在可用于各种疾病的治疗或预防的可能性、以及可用作浓厚味给予剂的可能性。专利文献1中公开了浓厚味给予物质的筛选方法、以及含有通过该方法得到的浓厚味给予物质的浓厚味给予剂。而且还记载着：发现各种低分子肽具有CaSR激动活性，从而可以提供能够给予“浓厚味”的浓厚味给予剂，所述浓厚味是指不能单纯显示甜味、咸味、酸味、苦味、香味所表示的5种基本味，还增强稠度(厚み、thickness)、充满(ひろガり、mouthfullness)、持续性、协调(まとまり、harmony)等上述基本味的周边味的味觉。
另一方面，一直以来已知由于γ-谷氨酰苯胺衍生物成为γ-谷氨酰转移酶的底物，所以可用于酶活性测定(非专利文献1、专利文献2)。但是，没有文献记载其与本发明的特征即“钙敏感受体(CaSR)或G蛋 白共轭受体”、“浓厚味”、“腹泻(症)或甲状旁腺功能亢进症”的关系。在本发明中，在特别优选的3-磺酸、3-羧酸、3-硝基衍生物中的一部分公知化合物中，它们的大部分用途也是在γ-谷氨酰转移酶的酶活性测定中用作底物，而作为抗菌剂或抗过敏药的用途(非专利文献2、专利文献3)或作为质量分析用的分析试剂的用途(非专利文献3)只是作为其他用途而略有所知。另外，作为活化CaSR的化合物，除西那卡塞(Cinacalcet)或类似的合成低分子化合物外，还已知以谷胱甘肽为代表的γ-谷氨酰肽衍生物(专利文献4、非专利文献4)，其与本发明的谷氨酸衍生物在结构上有所不同。
因此，人们要求探索具有CaSR激动活性的更多的变种化合物，以提供更优异的浓厚味给予剂，同时提供CaSR激动剂、药物组合物、以及腹泻的预防或治疗药。
专利文献1：WO2007/055393A1公报
专利文献2：US专利第4087331号公报
专利文献3：日本特开平06-172287号公报
专利文献4：WO2007/055388A2公报
非专利文献1：Clinical Chemistry，22，2051(1976)
非专利文献2：Journal of Medicinal Chemistry(1965)，8(3)，398-400
非专利文献3：Analytica Chimica Acta(2004)，519(2)，181-187
非专利文献4：Journal of Biological Chemistry(2006)，281(13)，8864-70
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的课题在于：探索具有CaSR激动活性的多种变种化合物，提供含有该化合物的CaSR激动剂、药物组合物、腹泻的预防或治疗药以及浓厚味给予剂。
解决课题的方法
本发明人探索了具有CaSR激动活性的化合物，结果意外地发现：各种γ-谷氨酸衍生物以及其类似体(以下称作“谷氨酸衍生物”。)具有优异的CaSR激动活性。进一步发现：所发现的具有CaSR激动活性的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐能够成为有用的CaSR激动剂、药物组合物、腹泻的预防或治疗药或浓厚味给予剂，从而完成了本发明。
即，本发明提供以下的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐。
下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐：
[化学式1]

(式中，R1和R3～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基或可具有取代基的碳原子数为1～6的单烷基氨基或二烷基氨基的基团；
R2表示选自硝基、磺酸基、或以下基团
[化学式2]

或
[化学式3]

的基团；且
R6和R7分别独立表示氢原子或可具有取代基的碳原子数为1～6 的烷基；
X表示亚甲基或氧原子)，
其中，下述(i)～(iv)的化合物除外：
(i)X为亚甲基、R2为磺酸基、且R1和R3～R6均为氢原子的化合物；
(ii)X为亚甲基、R2为磺酸基、R1和R4～R6均为氢原子、且R3为硝基的化合物；
(iii)X为亚甲基、R2为硝基、且R1和R3～R6均为氢原子的化合物；以及
(iv)X为亚甲基、R2为下述基团
[化学式4]

R1和R4～R6均为氢原子、R3为氢原子、硝基、羟基、氨基、二乙基氨基或二正丙基氨基、且R7为氢原子或甲基的化合物。
本发明还提供以下的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐。
下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐：
[化学式5]

(式中，R2、R4和R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基或可具有取代基的碳原子数为1～6的单烷基氨基或二烷基氨基的基团；
R1和R3中的任一个为磺酸基、且另一个为选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基或可具有取代基的碳原子数为1～6的单烷基氨基或二烷基氨基的基团；
R6和R7分别独立表示氢原子或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子)，
其中，下述化合物除外：
X为亚甲基、R1为磺酸基、R2～R6均为氢原子的化合物。
本发明还提供以下的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐。
下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐：
[化学式6]

(式中，R1和R3～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基或可具有取代基的碳原子数为1～6的单烷基氨基或二烷基氨基的基团；
R2表示选自硝基、磺酸基、或下述基团
[化学式7]

或
[化学式8]

的基团、且
R6为羟基；
R7表示氢原子或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子)。
本发明还提供含有下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐的药物组合物。
[化学式9]

(式中，R1和R3～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基或可具有取代基的碳原子数为1～6的单烷基氨基或二烷基氨基的基团；
R2为选自硝基、磺酸基、或下述基团
[化学式10]

或
[化学式11]

的基团；且
R6和R7分别独立表示氢原子或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子)，
其中，下述化合物除外：
X为亚甲基、R2为下述基团
[化学式12]

R1和R3～R6均为氢原子、且R7为氢原子或甲基的化合物)。
本发明还提供含有下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐的CaSR激动剂、浓厚味给予剂或腹泻治疗或预防药。
[化学式13]

(式中，R1～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基或可具有取代基的碳原子数为1～6的单烷基氨基或二烷基氨基、磺酸基、或下述基团
[化学式14]

或
[化学式15]

的基团，其中，R1～R3中的任一个为选自硝基、磺酸基、或下述基团
[化学式16]

或
[化学式17]

的基团；且
R6和R7分别独立表示氢原子、羟基或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子)。
本发明还提供含有下述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐的CaSR激动剂、浓厚味给予剂或腹泻治疗或预防药。
[化学式18]

(式中，R1和R3～R5分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基、可具有取代基的碳原子数为1～6的烷氧基或可具有取代基的碳原子数为1～6的 单烷基氨基或二烷基氨基的基团；
R2表示硝基、磺酸基、或下述基团
[化学式19]

或
[化学式20]

的基团；且
R6和R7分别独立表示氢原子或可具有取代基的碳原子数为1～6的烷基；
X为亚甲基或氧原子)。
发明效果
根据本发明，可以提供具有优异的CaSR激动活性的各种化合物，同时可以提供含有这些化合物的CaSR激动剂、药物组合物、腹泻的预防或治疗药以及浓厚味给予剂。
具体实施方式
在本发明的上述通式(I)中，作为本发明的谷氨酸衍生物，R1和R3～R5优选分别独立表示选自氢原子、卤代基、羟基、硝基、氨基、可具有取代基的碳原子数为1～3的烷基、可具有取代基的碳原子数为1～3的烷氧基或可具有取代基的碳原子数为1～3的单烷基氨基或二烷基氨基的基团。更优选R1和R3～R5分别独立表示选自氢原子、氯基或溴基、羟基、硝基、氨基、甲基或甲氧基的基团。
在本发明的上述通式(I)中，R2优选为磺酸基、羧酸基或膦酸基。
或者，R1或R3中的任一个基团可以是磺酸基，此时还优选R4为卤代基。
在本发明的上述通式(I)中，R6和R7优选分别独立表示氢原子或甲基。更优选R6为氢原子或甲基，R7为氢原子。R6也优选羟基。
在本发明的上述通式(I)中，X优选为亚甲基。
作为本发明的上述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐，R1～R3中的任一个优选为磺酸基、羧酸基或膦酸基。其中，R2优选为磺酸基、羧酸基或膦酸基，特别优选为磺酸基。
特别是，上述通式(I)中，当R2为磺酸基时，优选R1为氢原子或羟基，R3为氢原子、氯基、羟基、甲基或甲氧基，R4为氢原子、氯基或硝基，R5为氢原子、羟基、甲基或甲氧基，R6为氢原子或甲基，X为亚甲基或氧原子。上述通式(I)中，当R2为磺酸基时，最优选R1为氢原子或羟基，R3为氢原子、氯基或甲基，R4为氢原子或氯基，R5为氢原子、羟基或甲基，R6为氢原子，X为亚甲基。
作为本发明的上述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐，特别是，上述通式(I)中，当R2为羧酸基时，最优选R1为氢原子或羟基、R3为氢原子、R4为氢原子或溴基、R5为氢原子、R6为氢原子、X为亚甲基。
作为本发明的上述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐，特别是，上述通式(I)中，当R2为-PO(OCH3)OH基或-PO(OH)2基时，最优选R1为氢原子、R3为氢原子、R4为氢原子、R5为氢原子、R6为氢原子、X为亚甲基。
作为本发明的上述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐，特别是，上述通式(I)中，当R2为硝基时，最优选R1为氢原子、R3为氢原子、R4为氢原子、R5为氢原子、R6为氢原子、X为亚甲基。
作为本发明的上述通式(I)所示的谷氨酸衍生物，特别优选实施例中记载的化合物，其中，优选化合物1、7、10、21、22、24、32、33、 34、35和37。特别优选化合物7、10、21、22、24、32、33、34、35和37。
上述通式(I)中存在的烷基、烷氧基和单烷基氨基或二烷基氨基各自可以具有取代基，作为取代基，可以列举：卤素、羟基、烷氧基、氨基、单烷基氨基或二烷基氨基、羧基和磺酸基，但并不限于这些。作为该取代基的烷氧基、单烷基氨基或二烷基氨基分别优选为低级烷氧基、低级单烷基氨基或二烷基氨基。这里，低级是指取代基总体的碳原子数为1～3。
本发明的上述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐还可以使用市售品。另外，通过适当利用(1)化学合成方法、或(2)利用酶反应进行合成的方法等公知方法即可获得。特别是，本发明的上述通式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐，利用本说明书的实施例所述的化学方法来合成的方法是简便的。作为化学合成方法，例如有液相合成法或固相合成法。
所合成的谷氨酸衍生物可以通过常规方法、例如离子交换层析、反相高效液相层析、亲和层析或重结晶等方法来纯化。这样的化学合成方法以及与其相连的纯化在该技术领域为人所熟知。
本发明的上述通式(I)所示的谷氨酸衍生物可以是其制药学上可接受的盐的形式。作为本发明的上述通式(I)所示的谷氨酸衍生物的制药学上可接受的盐，包含可食用的盐，例如有：对于该式中的羧基、磺酸基等酸性基团而言，其铵盐；与钠和钾等碱金属形成的盐；与钙和镁等碱土金属形成的盐；铝盐；锌盐；与三乙胺、乙醇胺、吗啉、吡咯烷、哌啶、哌嗪和二环己胺等有机胺形成的盐；与精氨酸和赖氨酸等碱性氨基酸形成的盐。该式中存在碱性基团时，可以列举：对于该碱性基团而言，与盐酸、硫酸、磷酸、硝酸和氢溴酸等无机酸形成的盐；与乙酸、枸橼酸、苯甲酸、马来酸、富马酸、酒石酸、琥珀酸、鞣酸、丁酸、羟苄基苯甲酸、扑酸、庚酸、癸酸、茶氯酸(teoclate)、水杨酸、乳酸、草酸、苦杏仁酸和苹果酸等有机羧酸形成的盐；与甲 磺酸、苯磺酸和对甲苯磺酸等有机磺酸形成的盐。
本说明书中，“CaSR”是指钙敏感受体(Calcium Sensing Receptor)，其属于7次跨膜型受体的C类，也称作钙受体。在本说明书中，“CaSR激动剂”是指与上述CaSR结合并激活CaSR的物质，“CaSR激动剂”是指与上述CaSR结合并激活CaSR的剂或物质。此外，在本说明书中，“激活CaSR”是指，配体与CaSR结合，激活鸟嘌呤核苷酸结合蛋白以传递信号。将与CaSR结合、并激活CaSR的性质称作“CaSR激动活性”。
以下具体显示筛选具有CaSR激动活性的化合物的方法，但并不限于这些步骤。
1)向用于测定CaSR活性的CaSR活性测定系统中添加被检物质，以测定CaSR活性。
2)比较添加了被检物质时的CaSR活性和未添加被检物质时的CaSR活性。
3)选择在添加了被检物质时显示出CaSR激动活性的被检物质。
CaSR活性的测定例如可以利用使用了表达CaSR的细胞的测定系统来进行。上述细胞可以是内源性表达CaSR的细胞，也可以是外来性地导入了CaSR基因的重组细胞。上述CaSR活性测定系统只要是在向上述表达CaSR的细胞中加入CaSR特异性细胞外配体(活化物质)时可以检测活化物质与CaSR的结合(反应)、或者响应活化物质与CaSR的结合(反应)以向细胞内传递可检测的信号的系统，即可没有特别限定地加以使用。通过与被检物质的反应而检测出CaSR活性时，判定该被检物质具有CaSR刺激活性。
作为上述CaSR，可以优选例示：以GenBank检索号No.NM_000388注册的由人CaSR基因编码的人CaSR。尚需说明的是，CaSR并不限于由上述序列的基因编码的蛋白，只要编码具有CaSR功能的蛋白，可以是由与上述序列具有60％以上、优选80％以上、更优选90％以上的同源性的基因编码的蛋白。需要说明的是，CaSR功能 可以通过使这些基因在细胞内表达，测定添加钙时的电流变化或细胞内钙离子浓度的变化来研究。
对上述CaSR的来源没有特别限定，不仅有上述人的CaSR，还有来自包含小鼠、大鼠、狗等的所有动物的CaSR。
如上所述，CaSR活性可以利用表达CaSR或其片段的活细胞、表达CaSR或其片段的细胞膜、包含CaSR或其片段的蛋白的体外系统等来确认。
以下显示使用活细胞的一个例子，但并不限于此。
使CaSR在非洲爪蟾卵母细胞或仓鼠卵巢细胞或人胚肾细胞等培养细胞中表达。这可以通过向保有外来基因的质粒中克隆CaSR基因，然后导入质粒状态的cRNA或以其为模板得到的cRNA来进行。反应的检测可以使用电生理学方法或细胞内钙上升的荧光指示试剂。
CaSR的表达最初通过钙或特异性活化剂的应答来确认。
相对于5mM左右的浓度的钙，使用观察到细胞内电流的卵母细胞或观察到荧光指示试剂的荧光的培养细胞。改变钙的浓度，以测定浓度依赖性。接下来，制备被检物质使达到1μM～1mM左右，将其添加在卵母细胞或培养细胞中，测定上述被检物质存在下的CaSR活性，由此测定上述被检物质的CaSR激动活性。
本发明的CaSR激动剂，可以单独含有上述通式(I)所示的谷氨酸衍生物所包含的所有谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐、或者组合含有其中的任意2种或3种以上，可以进一步含有制药学上、生理学上、实验上、食品上可接受的所有固体或液体的载体、添加剂等。
作为上述载体，可以列举：例如葡萄糖、乳糖、蔗糖、淀粉、甘露糖醇、糊精、脂肪酸甘油酯、聚乙二醇、羟乙基淀粉、乙二醇、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、明胶、白蛋白、氨基酸、水、生理盐水等。根据需要，还可以向本发明的CaSR激动剂中适当添加稳定化剂、润湿剂、乳化剂、粘合剂、等渗剂等惯用的添加剂。
作为上述添加剂，根据目的，只要是为了该目的而通常使用的添 加剂即可，没有特别限定，具体可以列举：例如香料、糖类、甜味剂、食物纤维类、维生素类、谷氨酸钠(MSG)等氨基酸类、肌苷一磷酸(IMP)等核酸类、氯化钠等无机盐类、水等。
本发明的CaSR激动剂并不受干燥粉末、糊剂、溶液等的理化性质的限制，可以以所有形态使用。另外，本发明的CaSR激动剂可用于药物、准药品、食品、试剂等。
本发明的CaSR激动剂的使用量根据各自的目的而适当调节，例如，通过口服给药给予对象时，以式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐的总量计，在1次给药中，优选每1kg体重使用0.01g～10g，更优选每1kg体重使用0.1g～1g。
对给药次数没有特别限定，每天可以给药1次～数次。
将本发明的CaSR激动剂用于食品或试剂时，优选每个处方为0.000001g～10g，更优选每个处方为0.00001g～1g。
本发明的CaSR激动剂中的式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐的含量只要是适合上述使用量的量即可，没有特别限定，每干燥重量优选0.000001％(质量)～99.9999％(质量)，更优选0.00001％(质量)～99.999％(质量)，特别优选为0.0001％(质量)～99.99％(质量)。
本发明的CaSR激动剂可以进一步含有1种或2种以上的具有CaSR激动活性的已知物质。
作为上述的具有CaSR激动活性的已知物质，可以列举：钙和钆等阳离子；聚精氨酸、聚赖氨酸等碱性肽；腐胺、精胺、精脒等聚胺；鱼精蛋白等蛋白；苯丙氨酸等氨基酸；谷胱甘肽等肽；西那卡塞的类似化合物等，但并不限于这些。
本发明的CaSR激动剂，除了含有具有CaSR激动活性的已知物质以外，根据其目的，可以包含所有已知物质。
在本说明书中，“浓厚味”是指甜味、咸味、酸味、苦味、香味所表示的5种基本味中没有显示出的味，不仅增强基本味、还增强稠度、 充满、持续性、协调等基本味周边味的味。“浓厚味给予剂”是指能够增强甜味、咸味、酸味、苦味、香味所表示的5种基本味中的至少一种味、以及可以给予其所伴随的稠度、充满、持续性、协调等基本味的周边味的剂或物质。因此，本发明的浓厚味给予剂还可以用作伴有味质改善的甜味增强剂、咸味增强剂、酸味增强剂、苦味增强剂或香味增强剂。
浓厚味给予效果可以通过本发明的实施例中所述的人的味觉试验等方法来确认，但并不限于这些方法。
本发明的浓厚味给予剂可以单独含有上述通式(I)所示的谷氨酸衍生物所包含的所有谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐、或者组合含有其中的任意2种或3种以上，可以进一步任意添加其他各种添加剂等。
作为上述添加剂，只要是已知可以添加混合在调味品、食品、饮料等饮食物中的添加剂，即可没有特别限定地使用。作为这样的添加剂，可以列举：例如香料、糖类、甜味料、食物纤维类、维生素类、谷氨酸钠(MSG)等氨基酸类、肌苷一磷酸(IMP)等核酸类、氯化钠等无机盐类、水等。
本发明还提供含有上述式(I)所示的谷氨酸衍生物的饮食品。本发明的上述式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐或浓厚味给予剂在饮食品中的使用量只要是可有效给予浓厚味的量即可，根据用途可以适当调节，例如，当为调味品、食品或饮料时，以本发明的上述式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐或浓厚味给予剂的总量计，在调味品、食品或饮料中为1ppb(质量)～99.9％(质量)，优选为10ppb(质量)～99.9％(质量)。
因此，通过向饮食品中添加1种或2种以上的本发明的上述式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐或浓厚味给予剂，使含有1ppb(质量)～99.9％(质量)、优选10ppb(质量)～99.9％(质量)，可以制造给予了浓厚味的饮食品。
此外，通过向饮食品中添加含有1ppb(质量)～99.9％(质量)的1种或2种以上的本发明的上述式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐或浓厚味给予剂而形成的上述给予了浓厚味的调味品，使含有0.01～10％(质量)、优选0.1～10％(质量)，也可以制造给予了浓厚味的饮食品。
本发明的浓厚味给予剂可以进一步含有1种或2种以上的具有CaSR激动活性的已知物质。
作为上述的具有CaSR激动活性的已知物质，可以列举：钙和钆等的阳离子；聚精氨酸、聚赖氨酸等的碱性肽；腐胺、精胺、精脒等聚胺；鱼精蛋白等的蛋白；苯丙氨酸等氨基酸；谷胱甘肽等肽；西那卡塞的类似化合物等，但并不限于这些。
本发明的浓厚味给予剂，除了含有具有CaSR激动活性的已知物质以外，根据其目的，还可以含有所有已知物质。
作为向饮食品中添加本发明的上述式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐或浓厚味给予剂时的方式，并不受干燥粉末、糊剂、溶液等的理化性质的限制。
本发明的药物组合物可以单独含有上述通式(I)所示的谷氨酸衍生物所包含的所有谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐、或者组合含有其中的任意2种或3种以上。
本发明的药物组合物的使用量根据各自的目的而适当调节，例如，通过口服给药给予对象时，以式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐的总量计，在1次给药中，优选每1kg体重使用0.01g～10g，更优选每1kg体重使用0.1g～1g。对给药次数没有特别限定，每天可以给药1次～数次。
将本发明的药物组合物用于食品或试剂时，优选每个处方为0.001g～10g，更优选每个处方为0.01g～1g。
本发明的药物组合物的式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐的含量只要适合上述使用量即可，没有特别限定，每干燥 重量优选0.000001％(质量)～99.9999％(质量)，更优选0.00001％(质量)～99.999％(质量)，特别优选为0.0001％(质量)～99.99％(质量)。
本发明的药物组合物可以进一步含有1种或2种以上的具有CaSR激动活性的已知物质。
作为上述的具有CaSR激动活性的已知物质，可以列举：钙和钆等的阳离子；聚精氨酸、聚赖氨酸等的碱性肽；腐胺、精胺、精脒等聚胺；鱼精蛋白等蛋白；苯丙氨酸等氨基酸；谷胱甘肽等肽；西那卡塞的类似化合物等，但并不限于这些。
本发明的CaSR激动剂除了含有具有CaSR激动活性的已知物质以外，根据其目的，还可以含有所有既知物质。
对本发明的药物组合物的使用方法没有特别限定，可以采用利用口服给药或注射等的所有侵袭性或非侵袭性的给药，也可以采用栓剂给药或经皮给药。可以将有效成分和适于口服、注射等给药方法的固体或液体的药物用载体一同以惯用的药物制剂的形式给药。作为这样的制剂，例如有：片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂等固体剂的形态；溶液剂、悬浮剂、乳剂等液剂的形态；冷冻干燥剂等形态。这些制剂可以利用制剂上的常规方法来制备。并且，本发明的药物组合物中，可以任意添加制药学上、生理学上可接受的所有固体或液体的载体、添加剂等。
作为上述载体，可以列举：例如葡萄糖、乳糖、蔗糖、淀粉、甘露糖醇、糊精、脂肪酸甘油酯、聚乙二醇、羟乙基淀粉、乙二醇、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、明胶、白蛋白、氨基酸、水、生理盐水等。根据需要，还可以向本发明的药物组合物中适当添加稳定化剂、润湿剂、乳化剂、粘合剂、等渗剂等惯用的添加剂。
本说明书中，腹泻包括过敏性肠综合征、功能性腹泻、炎症性肠病、憩室炎、细菌性腹泻、消化不良等所有种类的腹泻。
本发明的腹泻治疗或预防药可以单独含有上述通式(I)所示的谷氨酸衍生物所包含的所有谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐、或 者组合含有任意的2种或3种以上。
本发明的腹泻治疗或预防药的使用量根据各自的目的而适当调节，例如，通过口服给药给予对象时，以式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐的总量计，在1次给药中，优选每1kg体重使用0.01g～10g，更优选每1kg体重使用0.1g～1g。对给药次数没有特别限定，每天可以给药1次～数次。
将本发明的腹泻治疗或预防药用于食品或试剂时，优选每个处方为0.001g～10g，更优选每个处方为0.01g～1g。
本发明的腹泻治疗或预防药中的式(I)所示的谷氨酸衍生物或其制药学上可接受的盐的含量只要适合上述使用量即可，没有特别限定，每干燥重量优选0.000001％(质量)～99.9999％(质量)，更优选0.00001％(质量)～99.999％(质量)，特别优选为0.0001％(质量)～99.99％(质量)。
本发明的腹泻治疗或预防药可以进一步含有1种或2种以上的具有CaSR激动活性的已知物质。
作为上述的具有CaSR激动活性的已知物质，可以列举：钙和钆等的阳离子；聚精氨酸、聚赖氨酸等的碱性肽；腐胺、精胺、精脒等聚胺；鱼精蛋白等蛋白；苯丙氨酸等氨基酸；谷胱甘肽等肽；西那卡塞的类似化合物等，但并不限于这些。
本发明的CaSR激动剂除了含有具CaSR激动活性的已知物质以外，根据其目的，还可以含有所有既知物质。
对本发明的腹泻治疗或预防药的使用方法没有特别限定，可以采用利用口服给药或注射等的所有侵袭性或非侵袭性的给药，也可以采用栓剂给药或经皮给药。可以将有效成分和适于口服、注射等给药方法的固体或液体的药物用载体一同以惯用的药物制剂的形式给药。作为这样的制剂，例如有：片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂等固体剂的形态；溶液剂、悬浮剂、乳剂等液剂的形态；冷冻干燥剂等形态。这些制剂可以利用制剂上的常规方法来制备。并且，本发明的腹泻治疗或 预防药中，可以任意添加制药学上、生理学上可接受的所有固体或液体的载体、添加剂等。
作为上述载体，可以列举：例如葡萄糖、乳糖、蔗糖、淀粉、甘露糖醇、糊精、脂肪酸甘油酯、聚乙二醇、羟乙基淀粉、乙二醇、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、明胶、白蛋白、氨基酸、水、生理盐水等。根据需要，还可以向本发明的腹泻治疗或预防药中适当添加稳定化剂、润湿剂、乳化剂、粘合剂、等渗剂等惯用的添加剂。
本发明的CaSR激动剂、浓厚味给予剂、腹泻治疗或预防药还可以用作具有各自的效果的饮食品或增补剂。例如，可以制成在容器或包装上标识出对腹泻具有治疗效果或预防效果的饮食品。对饮食品的形态没有特别限定，除了混合具有CaSR激动活性的化合物以外，还可以使用与普通食品相同的材料，按照同样的制造方法来制造。作为食品，例如有：调味品；果汁、牛奶等饮料；点心；果冻；健康食品；农产品加工品；牛乳、奶酪等畜产品加工品；食品辅助剂等。
(通式(I)所示的谷氨酸衍生物的代表性的合成方法)
以下，说明本发明化合物的代表性的制造方法。
需要说明的是，在以下的制造方法中，根据官能团的种类，在原料或中间体阶段先将该官能团取代成适当的保护基、即可以容易地转化成该官能团的基团，这在制造技术上有时是有效的。然后，根据需要除去保护基，可以得到所期望的化合物。作为这样的官能团，例如有氨基、羟基、羧基等；作为它们的保护基，例如，氨基的保护基有叔丁氧基羰基(Boc)或苄氧基羰基(Z或Cbz)、9-芴甲氧羰基(Fmoc)等；羧基的保护基有叔丁基(tBu)或苄基(Bn或Bzl)等Protective Groups in Organic Synthesis第3版(T.W.Green、P.G.M.Wuts著、JOHN WILLY&SONS，INC.发行)中记载的保护基等，根据反应条件可以适当使用这些保护基。保护基的导入和脱保护可以适时采用该参考书所述的方法。例如，显示了使用以下述制造方法1、2中记载的Prot1、Prot2的方式记载的官能团作为保护基，但并不限于此。
(制造方法1)
[化学式21]

制造方法1是使用化合物(II)和化合物(III)，利用羧酸与胺的缩合反应得到化合物(I)的反应。
本反应使用当量的化合物(II)和胺衍生物(III)、或者其中一方使用过剩量，在缩合剂的存在下按照常规方法进行即可。作为缩合剂，例如可以适当使用：N,N-二环己基碳化二亚胺(DCC)、1-乙基-3-[3-(N,N-二甲基氨基)丙基]碳化二亚胺(EDCI或WSC)、六氟磷酸O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲(HBTU)、羰基二咪唑(CDI)、氯化4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)4-甲基吗啉(DMTMM)、六氟磷酸2-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲(HATU)等。相对于羧酸，使用当量或过剩量的这些缩合剂进行反应。作为溶剂，可以使用不参与反应的溶剂、例如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二烷、水、甲醇、乙醇、四氢呋喃(THF)、二氯甲烷、二氯乙烷、二乙醚、氯仿、二甲氧基乙烷(DME)、乙酸乙酯、甲苯、乙腈、二甲基亚砜(DMSO)或它们的混合溶剂等，但优选根据原料或缩合剂的种类等适当选择。有时通过在三乙胺、二异丙基乙基胺、N-甲基吗啉、吡啶、4-二甲基氨基吡啶等碱存在下、或者以这些碱为溶剂进行反应，反应会顺利进行。上述反应通常在冷却～室温下进行，但根据缩合反应的条件，有时优选在加热下实施。
此外，化合物(I)也可以通过将羧酸导入活性衍生物中后使其与胺缩合的方法来制造。这种情况下，使用当量的化合物(II)和胺衍生物(III) 或者其中一方使用过剩量来进行反应。羧酸的活性衍生物例如有：对硝基苯酚等酚系化合物；或与1-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)、1-羟基苯并三唑(HOBt)或7-氮杂-1-羟基苯并三唑(HOAt)等N-羟基胺系的化合物反应得到的活性酯；与碳酸单烷基酯、有机酸反应得到的混合酸酐；使二苯基磷酰氯和N-甲基吗啉反应得到的磷酸系混合酸酐；使酯与肼和亚硝酸烷基酯依次反应得到的酰基叠氮；酰氯化物或酰氟化物等酰卤化物；以及对称型酸酐等。
合成羧酸的活性衍生物时，相对于化合物(II)，使用当量或过剩量的活化试剂来实施。即使在这种情形的反应条件以外，只要是形成酰胺键的反应，任一反应均可使用。
(制造方法2)
[化学式22]

制造方法2是由化合物(IIa)得到中间体，再使化合物(III)与得到的中间体作用，从而得到化合物(I)的反应。
本反应通过使化合物(IIa)和例如当量或稍过剩的N,N-羰基二咪唑或光气、三光气、氯甲酸苄酯、碳酸甲酯等试剂作用，可以得到中间体。此时，优选使用不参与反应的溶剂、例如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二烷、四氢呋喃(THF)、二氯甲烷、二氯乙烷、二乙醚、氯仿、二甲氧基乙烷(DME)、乙酸乙酯、甲苯、乙腈、二甲基亚砜(DMSO)或它们的混合溶剂等来实施。本反应通常在冷却下～室温下进行，但根据试剂和化合物的种类，有时优选加热。得到的中间体，根据需要， 经过置换成优选的溶剂的步骤使当量或中间体或化合物(III)中的任一者稍过剩来进行反应。本反应还可以共存例如三乙胺这样的有机碱、碳酸钾等无机碱。本反应通常在冷却下～100℃左右的加热条件下进行反应，但根据化合物的种类，有时需要进一步加热的条件。除上述方法外，只要是形成氨基甲酸酯的反应，任一反应均可使用。
(制造方法3)
如此操作而制备的本发明化合物，可以直接以游离的形式或其盐的形式，通过该领域中惯用的化学操作、例如萃取、沉淀、分馏层析、分别结晶化、重结晶等进行分离、纯化。另外，该化合物的盐可以通过将游离的本发明化合物供给通常的制盐反应来制备。
当本发明化合物具有不对称碳时，存在光学异构体。这些光学异构体可以通过下述方法来制备：将其导入与光学活性的酸或碱形成的非对映体盐中后分别结晶化的方法；利用柱层析等常规方法进行光学拆分的方法；或者使用光学活性的原料化合物进行合成的方法等。
实施例
以下列举实施例，以更详细地说明本发明，但这些实施例并不限定本发明。
本说明书中，常规方法是指分液操作、干燥、过滤、浓缩所代表的通常作为化学操作使用的方法。
本说明书中，纯化步骤A是指，将利用常规方法得到的粗产物供给以十八烷基化学键合型硅胶(ODS)作为填充剂的反相高效液相色谱，用含有0.1％三氟乙酸(v/v)的水和乙腈的混合溶液洗脱，浓缩、冷冻干燥目标组分的方法。
以下，关于表1所示的代表性的本发明化合物的合成，列举实施例，以进一步详细说明，但本发明的化合物并不受这些实施例的限定。
[表1]

表1
化合物No.R1R2R3R4R5R6X1HSO3HHHHHCH22HSO3HOMeHHHCH23HSO3HHHOMeHCH24HSO3HMeHMeHCH25HSO3HMeHHHCH26HSO3HHNO2OHHCH27OHSO3HHClHHCH28HSO3HHHOHHCH29HSO3HClHHHCH210OHSO3HHHHHCH211HSO3HOHHHHCH212HSO3HHHHCH3CH213HSO3HHHHHO14HCO2HHHHHCH215OHCO2HHHHHCH216HCO2HHBrHHCH217HPO(OMe)OHHHHHCH218HPO(OH)2HHHHCH219HNO2HHHHCH220HHHHHHCH2
实施例I
(合成例1)N5-(3-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.1)
将75mg(0.247mmol)Boc-Glu-OtBu、112mg(0.296mmol)HATU、41mg(0.296mmol)HOAt溶解于1ml DMF中，加入52μl三乙胺，在室温下搅拌10分钟。向其中加入43mg(0.247mmol)3-磺基苯胺，在室温下搅拌一夜。馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化，将得到的中间体溶解于2ml三氟乙酸中，在室温下搅拌3小时，之后馏去溶剂。通过纯化步骤A纯化产物，得到标题化合物。
收量：30.8mg(0.10mmol)，收率：41％。
1H-NMR(D2O，300MHz)：δ7.89(s，1H)，7.67-7.62(m，2H)，7.58-7.53(m，1H)，3.99(t，1H，J＝6.4Hz)，2.73-2.66(m，2H)，2.33-2.25(m，2H)
ESI(m/z)：303[M+H]+，301[M-H]-
(合成例2)N5-(4-甲氧基-3-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.2)
使用对茴香胺-3-磺酸代替合成例1的3-磺基苯胺，进行相同的操作，得到标题化合物。
收量：24.7mg，收率：23％。
1H-NMR(D2O，300MHz)：δ7.96(s，1H)，7.53(d，1H)，7.04(d，1H)，3.98(t，1H)，3.78(s，3H)，2.63-2.52(m，2H)，2.30-2.05(m，2H)
ESI(m/z)：333[M+H]+
(合成例3)N5-(2-甲氧基-5-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.3)
使用邻茴香胺-5-磺酸代替合成例1的3-磺基苯胺，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：75.7mg，收率：69％。
1H-NMR(D2O，300MHz)：δ7.65(s，1H)，7.45(d，1H)，7.04(d，1H)，3.96(t，1H)，3.79(s，3H)，2.80-2.50(m，2H)，2.25-2.10(m，2H)
ESI(m/z)：333[M+H]+
(合成例4)N5-(2，4-二甲基-5-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.4)
使用2，4-二甲基苯胺-5-磺酸钠盐代替合成例1的3-磺基苯胺，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：70.3mg，收率：64％。
1H-NMR(D2O，300MHz)：δ7.55(s，1H)，7.17(s，1H)，3.97(t，1H)，2.67-2.55(m，2H)，2.43(s，3H)，2.30-2.15(m，2H)，2.08(s，3H)
ESI(m/z)：331[M+H]+
(合成例5)N5-(4-甲基-3-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.5)
使用5-氨基-2-甲基苯-1-磺酸代替合成例1的3-磺基苯胺，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：79.3mg，收率：76％。
1H-NMR(D2O，300MHz)：δ7.76(s，1H)，7.34(d，1H)，7.24(d，1H)，3.93(t，1H)，2.60-2.45(m，2H)，2.44(s，3H)，2.30-2.00(m，2H)
ESI(m/z)：317[M+H]+
(合成例6)N5-(2-羟基-3-硝基-5-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.6)
使用3-氨基-4-羟基-5-硝基苯磺酸代替合成例1的3-磺基苯胺，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：73.8mg，收率：62％。
1H-NMR(D2O，300MHz)：δ8.37(s，1H)，8.24(s，1H)，3.94(t，1H)，2.64-2.70(m，2H)，2.09-2.23(m，2H)
ESI(m/z)：364[M+H]+
(合成例7)N5-(5-氯-2-羟基-3-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.7)
将100mg(0.33mmol)Boc-Glu-OtBu、65.6mg(0.43mmol)HOBt一水合物溶解于2ml DMF中，加入0.137ml三乙胺。冷却至0℃后，加入66.4μl(0.43mmol)二异丙基碳化二亚胺、73.7mg(0.33mmol)2-氨基-4-氯苯酚-6-磺酸，在室温下搅拌一夜。馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化，将得到的中间体溶解于2ml TFA中，在室温下搅拌2小时。加入2ml二氯甲烷，滤取析出物，从而得到标题化合物。
收量：16.8mg，收率：14.4％。
1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ11.07(s，1H)，9.39(s，1H)，8.20-8.40(br，2H)，8.02(s，1H)，7.14(s，1H)，3.95(t，1H，J＝6.4Hz)，2.64 (m，2H)，2.07(m，2H)
ESI(m/z)：353[M+H]+
(合成例8)N5-(2-羟基-5-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.8)
使用2-氨基苯酚4-磺酸代替合成例7的2-氨基-4-氯苯酚-6-磺酸，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：31.5mg，收率：30％。
1H-NMR(D2O，300MHz)：δ7.77(s，1H)，7.44(d，1H)，6.94(d，1H)，4.00-3.85(m，1H)，2.65-2.57(m，2H)，2.19-2.10(m，2H)
ESI(m/z)：319[M+H]+
(合成例9)N5-(4-氯-3-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.9)
使用68.4mg4-氯苯胺-3-磺酸代替合成例7的2-氨基-4-氯苯酚-6-磺酸，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：47.8mg，收率：43％。
1H-NMR(D2O，300MHz)：δ7.91(s，1H)，7.50-7.45(m，2H)，4.00-3.85(m，1H)，2.60-2.40(m，1H)，2.25-2.15(m，2H)
ESI(m/z)：337[M+H]+
(合成例10)N5-(2-羟基-3-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.10)
将371mg(1mmol)Z-Glu-OBn溶解于1ml二氯甲烷中，加入180mg(1.1mmol)CDI，在室温下搅拌30分钟。向其中加入223mg(1mmol)2-氨基-4-氯苯酚-6-磺酸、1ml THF，在室温下搅拌一夜。馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化。将得到的中间体溶解于甲醇-水混合溶剂中，加入催化剂量的Pd/C，在氢气氛下、于室温下搅拌一夜。滤除催化剂后，馏去溶剂，通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物。
收量：120mg(0.40mmol)，收率：40％。
1H-NMR(D2O，300MHz)：δ7.67(d，1H，J＝7.9Hz)，7.62(d，1H，J＝8.2Hz)，7.07(dd，1H，J＝7.9Hz，8.2Hz)，3.92-3.97(m，1H)，2.59-2.64(m，2H)，2.25-2.20(m，2H)
ESI(m/z)：303[M+H]+
(合成例11)N5-(4-羟基-3-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.11)
将100mg(0.33mmol)Boc-Glu-OtBu溶解于1ml二氯甲烷和1mlTHF中，加入65mg(1.1mmol)CDI，在室温下搅拌30分钟。向其中加入77mg(0.33mmol)5-氨基-2-羟基苯磺酸钠，在室温下搅拌一夜。馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化。将得到的中间体溶解于2mlTFA中，在室温下搅拌3小时，之后馏去溶剂，通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物。
收量：2mg。
ESI(m/z)：319[M+H]+
(合成例12)N5-甲基-N5-(3-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.12)步骤13-[(2-硝基苯基)磺酰基]氨基苯磺酸的合成
将346.3mg(2mmol)3-氨基苯磺酸悬浮于2.5ml二氯甲烷中，冷却至0℃，之后加入443.2mg(2mmol)2-硝基苯基苯磺酰氯、697μl(4mmol)N,N-二异丙基乙胺。在室温下搅拌1小时，之后馏去溶剂，通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物。
收量：460mg(1.29mmol)，收率：64％。
1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ7.02-7.83(m，8H)
ESI(m/z)：359[M+H]+
步骤2N5-甲基-Ns-(3-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成
向步骤1得到的230mg(0.65mmol)化合物中加入177mg(1.28mmol)碳酸钾、2ml DMF、60μl MeI，在40℃下搅拌6小时。追加44.3mg碳酸钾、40μL MeI，搅拌一夜。馏去溶剂后，通过纯化步骤A得 到160mg3-{甲基[(2-硝基苯基)磺酰基]氨基}苯磺酸的粗产物。将144mg(0.39mmol)该粗产物溶解于3ml DMF中，加入126mg(0.39mmol)碳酸铯、40μl(0.39mmol)苯硫酚，在50℃下搅拌一夜。馏去溶剂后，通过纯化步骤A得到84.1mg3-(甲基氨基)苯磺酸的粗产物。
使用3-(甲基氨基)苯磺酸的粗产物代替合成例1的3-磺基苯胺，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：5.14mg。
ESI(m/z)：317[M+H]+
(合成例13)O-{[(3-磺苯基)氨基]羰基}-L-丝氨酸的合成(化合物No.13)
将200mg(0.77mmol)Boc-Ser-OtBu溶解于3ml二氯甲烷中，冷却至0℃。加入124mg(0.77mmol)N,N-羰基二咪唑，在室温下搅拌2小时。馏去溶剂，加入132.6mg(0.77mmol)3-氨基苯磺酸、2mlDMF、0.4ml二异丙基乙基胺，在70℃下搅拌一夜。馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化，得到中间体。将得到的中间体溶解于1ml TFA中，在室温下搅拌2小时。馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物。
收量：1.39mg，收率：0.6％。
ESI(m/z)：304[M+H]+
(合成例14)3-(L-γ-谷氨酰氨基)苯甲酸的合成(化合物No.14)
将100mg(0.33mmol)Boc-Glu-OtBu、150.4mg(0.40mmol)HATU溶解于2ml DMF中，加入68.5μl三乙胺，搅拌10分钟。向其中加入49.2mg(0.33mmol)3-氨基苯甲酸乙酯，搅拌一夜。使用乙酸乙酯、1M的氢氧化钠水溶液进行分液操作，之后用1M的氢氧化钠水溶液、1M的盐酸、饱和食盐水依次清洗有机层，用硫酸钠干燥，馏去溶剂。将得到的残余物溶解于2ml THF、1ml乙醇、1ml水中，加入13.5mg(0.32mmol)氢氧化锂一水合物。搅拌5小时，之后加入 4.5mg氢氧化锂，搅拌一夜。确认反应结束后，用1M的盐酸调整反应液至pH＝2，馏去溶剂。向得到的残余物中加入3ml TFA，在室温下搅拌5小时。馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物。
收量：54.17mg，收率：61％。
1H-NMR(D2O，300MHz)：δ7.92(s，1H)，7.72(d，1H，J＝7.5Hz)，7.55(d，1H，J＝9Hz)，7.42(dd，1H，J＝7.5，9.0Hz)，4.00-3.80(m，1H)，2.58-2.54(m，2H)，2.20-2.15(m，2H)
ESI(m/z)：267[M+H]+
(合成例15)3-(L-γ-谷氨酰氨基)-2-羟基苯甲酸的合成(化合物No.15)
使用3-氨基-2-羟基苯甲酸乙酯代替合成例14的3-氨基苯甲酸乙酯，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：34.1mg，收率：37％。
1H-NMR(D2O，300MHz)：δ7.70-7.60(m，2H)，6.87(t，1H)，3.91(t，1H)，2.63-2.55(m，2H)，2.20-2.10(m，2H)
ESI(m/z)：283[M+H]+
(合成例16)3-溴-5-(L-γ-谷氨酰氨基)苯甲酸的合成(化合物No.16)
使用3-氨基-5-溴苯甲酸甲酯代替合成例14的3-氨基苯甲酸乙酯，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：16.8mg。
1H-NMR(D2O，300MHz)：δ7.80-7.85(s*2，2H)，3.75-3.90(m，1H)，2.45-2.55(m，2H)，2.10-2.20(m，2H)
ESI(m/z)：345，347[M+H]+
(合成例17)N5-{3-[羟基(甲氧基)磷酰基]苯基}-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.17)
将249mg(1mmol)1-碘-3-硝基苯溶解于10ml乙腈中，加入58mg(3％(mol))四(三苯基膦)合钯、0.138ml(1.5mmol)亚磷酸二甲酯、0.28ml(2mmol)三乙胺，在70℃下搅拌一夜。馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化，得到0.222g(3-硝基苯基)膦酸单甲酯和二甲酯的混合物。将得到的膦酸单甲酯溶解于10ml甲醇中，加入催化剂量的Pd/C，在氢气氛下搅拌一夜。滤除催化剂后馏去溶剂，得到(3-氨基苯基)膦酸单甲酯和二甲酯的混合物。
将303mg(1mmol)Boc-Glu-OtBu、136mg(1mmol)HOAt、380mg(1mmol)HATU溶解于1ml DMF中，加入0.278ml三乙胺。10分钟后，加入(3-氨基苯基)膦酸单甲酯和二甲酯的混合物，在室温下搅拌一夜。
馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物。
收量：11.5mg。
1H-NMR(D2O，300MHz)：δ7.50-7.90(m，4H)，4.14-4.18(m，1H)，3.56(s，1.5H)，3.52(s，1.5H)，2.68-2.74(m，2H)，2.280-2.37(m，2H)
ESI(m/z)：317[M+H]+
(合成例18)N5-(3-膦酰基苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.18)
向合成例17中以中间体的形式得到的170mg(3-硝基苯基)膦酸单甲酯和二甲酯的混合物中加入4ml DMF、1ml三甲基甲硅烷基溴，在60℃下搅拌2小时。馏去溶剂后，将其溶解于水、甲醇混合溶剂中，加入催化剂量的Pd/C，在氢气氛下搅拌一夜。滤除催化剂，馏去溶剂，得到(3-氨基苯基)膦酸的粗产物。
将236mg(0.78mmol)Boc-Glu-OtBu、127mg(0.936mmol)HOAt、356mg(0.936mmol)HATU溶解于1ml DMF中，加入0.21ml三乙胺。10分钟后，加入(3-氨基苯基)膦酸的粗产物，在室温下搅拌一夜。馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物。
收量：2.5mg。
ESI(m/z)：303[M+H]+
(合成例19)N5-(3-硝基苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.19)
使用3-硝基苯胺代替合成例1的3-磺基苯胺，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：61.6mg，收率：93％。
1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ10.5(s，1H)，8.66(s，1H)，7.86-7.93(m，2H)，7.61(t，1H，J＝8.2Hz)，3.99(t，1H，J＝6.2Hz)，2.50-2.70(m，2H)，2.06-2.16(m，2H)ESI(m/z)：268[M+H]+
(合成例20)N-γ-谷氨酰-苯胺(化合物No.20)
化合物No.20使用从Bachem公司购入的化合物。
以下，关于表2所示的其他代表性的本发明的化合物的合成，给出实施例，以进一步详细说明，但本发明的化合物并不受这些实施例的限定。
[表2]

表2
化合物No.R1R2R3R4R5R6X21HSO3HMeClHHCH222HSO3HHClMeHCH223OHSO3HHNO2HHCH224ClCO2HHClHHCH225ClCO2HHHHHCH226HCO2HHHClHCH227OMeCO2HHHHHCH228HCO2HOHHHHCH229HCO2HHHMeHCH230HCO2HHOHHHCH231MeCO2HHHHHCH232HCO2HHClHHCH233HSO3HMeClHHO34OHSO3HHClHHO35HSO3HHClMeHO36OMeSO3HHClHHO37HSO3HHHClHCH238HHSO3HClHHCH239SO3HHHBrHHCH240HHSO3HIHHCH241SO3HHHIHHCH242HSO3HHHHOHCH243HSO3HHHHOHO
(合成例21)
N5-(3-氯-4-甲基-5-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.21)
向303mg(1mmol)Boc-Glu-OtBu盐酸盐、180mg(1.1mmol)CDI中加入1ml二氯甲烷、1ml THF，之后加入221mg5-氨基-3-氯-2-甲基苯磺酸，在室温下搅拌一夜。通过纯化步骤A进行纯化，得到目标物的保护体。将得到的保护体溶解于5ml三氟乙酸中，搅拌2小时。馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物。
1H-NMR(D2O)δ：7.71(d，1H)，7.60(d，1H)，3.93(t，1H)，2.50-2.57(m，2H)，2.47(s，3H)，2.10-2.20(m，2H)
ESI-MS：349[M-H]-，351[M+H]+
(合成例22)
N5-(3-氯-2-甲基-5-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.22)
向303mg(1mmol)Boc-Glu-OtBu盐酸盐、221mg(1mmol)3-氨基-5-氯-4-甲基苯磺酸、160mg(1.3mmol)HOAt、410mg(1.3mmol)HATU中加入2ml DMF、0.52ml(3mmol)DIEA，在室温下搅拌一夜。用水-乙腈稀释反应液，之后通过纯化步骤A进行纯化，得到目标物的保护体。将得到的保护体溶解于5ml三氟乙酸中，搅拌2小时。馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物。
收量：150mg
1H-NMR(D20)δ：7.81(d，1H)，7.61(d，1H)，4.10(t，1H)，2.74-2.81(m，2H)，2.24-2.37(m，5H)
ESI-MS：349[M-H]-，351[M+H]+
(合成例23)
N5-(2-羟基-5-硝基-3-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.23)
将合成例22的3-氨基-5-氯-4-甲基苯磺酸换成3-氨基-2-羟基-5-硝基苯磺酸，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：185mg
1H-NMR(D2O)δ：8.55(d，1H，J＝2.4Hz)，8.29(d，1H，J＝2.7Hz)，3.95(t，1H，J＝6.3Hz)，2.66(t，2H，J＝7.2Hz)，2.10-2.30(m，2H)
ESI-MS：362[M-H]-，364[M+H]+
(合成例24)
2,5-二氯-3-(L-γ-谷氨酰氨基)苯甲酸的合成(化合物No.24)
(步骤1)
将206mg(1.0mmol)2,5-二氯-3-氨基苯甲酸溶解于4ml丙酮中，加入0.7ml(1.4mmol)三甲基甲硅烷基二偶氮甲烷的2.0M己烷溶液， 在室温下搅拌1.5小时。馏去溶剂，得到2，5-二氯-3-氨基苯甲酸甲酯。收量：220mg
(步骤2)
向110mg(0.5mmol)2,5-二氯-3-氨基苯甲酸甲酯中加入190mg(0.5mmol)HATU、70mg(0.5mmol)HOAt、152mg(0.5mmol)Boc-Glu-OtBu盐酸盐、0.21ml(1.5mmol)三乙胺、2ml二氯甲烷，在室温下搅拌一夜。
馏去溶剂，用乙酸乙酯-水进行萃取，再用饱和食盐水处理有机层，之后用硫酸钠干燥。滤除硫酸钠，馏去溶剂后，加入5ml1N的氢氧化钠溶液，在室温下搅拌2小时。接着加入5ml三氟乙酸，在室温下搅拌2小时。馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物。
收量：6.6mg
1H-NMR(CD3OD)δ：8.08(s，1H)，7.56(s，1H)，3.95-4.01(m，1H)，2.76-2.82(m，2H)，2.20-2.30(m，2H)
ESI-MS：333[M-H]-，335[M+H]+
(合成例25)
2-氯-3-(L-γ-谷氨酰氨基)苯甲酸的合成(化合物No.25)
将合成例24(化合物No.24的合成)中使用的苯甲酸衍生物换成2-氯-3-氨基苯甲酸，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：4.0mg
1H-NMR(D2O)δ：7.47-7.56(m，1H)，7.39-7.46(m，1H)，7.27-7.32(s，1H)，3.81-387(m，1H)，2.59-2.65(m，2H)，2.12-2.21(m，2H)
ESI-MS：299[M-H]-，301[M+H]+
(合成例26)
4-氯-3-(L-γ-谷氨酰氨基)苯甲酸的合成(化合物No.26)
将合成例24(化合物No.24的合成)中使用的苯甲酸衍生物换成4-氯-3-氨基苯甲酸，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：5.3mg
1H-NMR(D2O)δ：8.03(s，1H)，7.76-7.79(m，1H)，7.52-7.55(m，1H)，3.78-3.84(m，1H)，2.59-2.65(m,2H)，2.12-2.22(m,2H)
ESI-MS：299[M-H]-，301[M+H]+
(合成例27)
2-甲氧基-3-(L-γ-谷氨酰氨基)苯甲酸的合成(化合物No.27)
向36mg(0.2mmol)2-甲氧基-3-氨基苯甲酸甲酯中加入84mg(0.2mmol)HATU、30mg(0.2mmol)HOAt、61mg(0.2mmol)Boc-Glu-OtBu盐酸盐、0.084ml(0.6mmol)三乙胺、1ml二氯甲烷，在室温下搅拌一夜。
馏去溶剂，用乙酸乙酯-水进行萃取，有机层用饱和食盐水处理后用硫酸钠干燥。滤除硫酸钠，馏去溶剂，之后加入5ml1N的氢氧化钠溶液，在室温下搅拌2小时。接着加入5ml三氟乙酸，在室温下搅拌2小时。馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物。
收量：6.5mg
1H-NMR(D2O)δ：7.69-7.71(m，1H)，7.56-7.59(m，1H)，7.13-7.18(m，1H)，3.87-3.93(m，1H)，3.68(s,3H)，2.60-2.66(m,2H)，2.12-2.22(m,2H)
ESI-MS：295[M-H]-，297[M+H]+
(合成例28)
6-羟基-3-(L-γ-谷氨酰氨基)苯甲酸的合成(化合物No.28)
将合成例27(化合物No.27的合成)中使用的苯甲酸衍生物换成6-甲氧基-3-氨基苯甲酸，进行相同的操作，从而合成6-甲氧基-3-(L-γ-谷氨酰氨基)苯甲酸。将其通过纯化步骤A进行纯化，得到在合成过程中以副产物的形式得到的标题化合物。
收量：2.1mg
ESI-MS：280[M-H]-，282[M+H]+
(合成例29)
4-甲基-3-(L-γ-谷氨酰氨基)苯甲酸的合成(化合物No.29)
将500mg4-甲基-3-硝基苯甲酸溶解于5ml甲醇、10ml含有4N的氯化氢的二烷溶液中。在室温下搅拌2天，之后馏去溶剂，得到粗产物。将得到的粗产物溶解于10ml甲醇中，在氢气氛下使催化剂量的Pd/C在室温下作用一夜。滤除催化剂，馏去溶剂，得到粗产物。将得到的165mg粗产物、303mg(1mmol)Boc-Glu-OtBu盐酸盐、400mg(约1.3mmol)HATU溶解于1ml DMF中，加入0.26ml DIEA，搅拌一夜。用水-乙腈稀释反应液，之后通过纯化步骤A进行纯化，得到0.31g目标物的保护体。向得到的保护体中加入3ml THF、1.5ml甲醇、1.5ml水，再加入26mg(0.82mmol)氢氧化锂一水合物。搅拌2小时后馏去溶剂，再次加入3ml THF、1.5ml甲醇、1.5ml水，之后加入26mg(0.82mmol)氢氧化锂一水合物，搅拌2小时。加入2ml乙酸乙酯后馏去溶剂，接着加入3ml三氟乙酸，在室温下搅拌2小时。馏去溶剂后，通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物。
1H-NMR(D2O)δ：7.74-7.77(m，1H)，7.30-7.36(m，1H)，3.75-3.81(m，1H)，2.55-2.62(m,2H)，2.10-2.20(m,5H)
ESI-MS：279[M-H]-，281[M+H]+
(合成例30)
5-羟基-3-(L-γ-谷氨酰氨基)苯甲酸的合成(化合物No.30)
将合成例27(化合物No.27的合成)中使用的苯甲酸衍生物换成5-甲氧基-3-氨基苯甲酸，进行相同的操作，从而合成5-甲氧基-3-(L-γ-谷氨酰氨基)苯甲酸。将其通过纯化步骤A进行纯化，得到在合成过程中以副产物的形式得到的标题化合物。
收量：7.5mg
ESI-MS：280[M-H]-，282[M+H]+
(合成例31)
3-(L-γ-谷氨酰氨基)-2-甲基苯甲酸的合成(化合物No.31)
将合成例29(化合物No.29的合成)中使用的苯甲酸衍生物换成2-甲基-3-硝基苯甲酸，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：37mg
1H-NMR(D2O)δ：7.56(dd，1H)，7.30(dd，1H)，7.23(t，1H)，3.82(t，1H)，2.5-2.62(m，2H)，2.21(s，3H)，2.10-2.29(m，2H)
ESI-MS：279[M-H]-，281[M+H]+
(合成例32)
5-氯-3-(L-γ-谷氨酰氨基)苯甲酸的合成(化合物No.32)
(步骤1)
向228mg(1mmol)5-氯-1,3-二苯甲酸甲酯、56mg(1mmol)氢氧化钾中加入8ml甲醇、2ml THF，在室温下搅拌一夜。减压浓缩反应溶液，加入4ml甲苯、0.12ml(0.85mmol)三乙胺、0.19ml(0.88mmol)叠氮化磷酸二苯酯，在50℃下搅拌1小时。接着加入0.19ml(2mmol)叔丁醇、2ml甲苯，在80℃下搅拌一夜。冷却至室温后，用乙酸乙酯-水进行萃取，有机层用饱和食盐水处理后用硫酸钠干燥。滤去硫酸钠，馏去溶剂，之后通过纯化步骤A进行纯化，得到5-氯-3-氨基苯甲酸甲酯-三氟乙酸盐。
收量：30mg
(步骤2)
向30mg(0.1mmol)5-氯-3-氨基苯甲酸甲酯中加入38mg(0.1mmol)HATU、14mg(0.1mmol)HOAt、30mg(0.1mmol)Boc-Glu-OtBu盐酸盐、0.014ml(0.1mmol)三乙胺、1ml二氯甲烷， 在室温下搅拌一夜。
馏去溶剂，用乙酸乙酯-水进行萃取，有机层用饱和食盐水处理后用硫酸钠干燥。滤去硫酸钠，馏去溶剂，之后加入5ml1N的氢氧化钠溶液，在室温下搅拌2小时。接着加入5ml三氟乙酸，在室温下搅拌2小时。馏去溶剂，之后通过纯化步骤A纯化，得到标题化合物。
收量：1.0mg
1H-NMR(D2O)δ：7.54(s，1H)，7.48(s，1H)，7.45(s，1H)，3.96-4.00(m，1H)，2.50-2.56(m,2H)，2.12-2.20(m,2H)
ESI-MS：299[M-H]-，301[M+H]+
(合成例33)
O-{[(3-氯-4-甲基-5-磺苯基)氨基]羰基}-L-丝氨酸的合成(化合物No.33)
将100mg(0.38mmol)Boc-Ser-OtBu、86mg(0.38mmol)5-氨基-3-氯-2-甲基苯磺酸、37mg(0.0127mmol)三光气悬浮于1ml二氯甲烷中，加入66μl(0.76mmol)DIEA。在室温下搅拌一夜后，馏去溶剂。通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物的保护体。将得到的保护体溶解于2ml三氟乙酸中，搅拌2小时后馏去溶剂，通过纯化步骤A纯化，得到标题化合物。
收量：15.5mg
1H-NMR(D2O)δ：7.67(d，1H)，7.57.(d，1H)，4.51(t，2H)，4.15(dd，1H)2.47(s，3H)
ESI-MS：351[M-H]-，353[M+H]+
(合成例34)
3-({[(2S)-2-氨基-2-羧基乙氧基羰基}氨基)-5-氯-2-羟基苯磺酸钠盐的合成(化合物No.34)
将合成例33(化合物No.33的合成)中使用的苯磺酸衍生物换成3- 氨基-5-氯-2-羟基苯磺酸，进行相同的操作，然后加入1当量的0.1N的氢氧化钠水溶液，冷冻干燥，从而得到标题化合物。
收量：15.1mg
1H-NMR(D2O)δ：7.70(s，1H)，7.37(d，1H，J＝2.6Hz)，4.37-4.55(m，2H)，3.98(dd，1H，J＝3.0，5.3Hz)，
ESI-MS：353[M-H]-，355[M+H]+
(合成例35)
O-{[(3-氯-2-甲基-5-磺苯基)氨基]羰基}-L-丝氨酸的合成(化合物No.35)
将合成例33(化合物No.33的合成)中使用的苯磺酸衍生物换成3-氨基-5-氯-4-甲基苯磺酸，进行相同的操作，从而得到标题化合物。
收量：3.9mg
1H-NMR(D2O)δ：7.60-7.64(m,2H)，4.42-4.54(m,2H)，4.03(dd，1H,J＝3.2，4.8Hz)
ESI-MS：351[M-H]-，353[M+H]+
(合成例36)
O-{[(5-氯-2-甲氧基-3-磺苯基)氨基]羰基}-L-丝氨酸的合成(化合物No.36)
向合成例34(化合物No.34的合成)中得到的30mg保护体中加入2ml丙酮，再加入1ml含有2M的三甲基甲硅烷基二偶氮甲烷的己烷溶液、100μl三乙胺。搅拌20分钟后馏去溶剂，通过纯化步骤A进行纯化，得到甲基化体。将得到的甲基化体溶解于2ml三氟乙酸中，在室温下搅拌3小时。馏去溶剂后加入水，进行冷冻干燥，从而得到标题化合物。
收量：1.48mg
1H-NMR(D2O)δ：7.64(brs，1H)，7.27(d，1H,J＝2.6Hz)，4.25-4.22(m,2H)， 3.80(dd，1H,J＝3.1，5.0Hz)，3.52(s，3H)
(合成例37)
N5-(2-氯-5-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.37)
向1mmol4-氯-3-硝基苯磺酸钠盐中加入2ml甲醇、3ml水，再加入催化剂量的2％Pt-S/C，在氢气氛下、于室温下搅拌一夜。滤除催化剂，充分干燥，之后加入303mg(1mmol)Boc-Glu-OtBu盐酸盐、163mg(1.2mmol)HOAt、456mg(1.2mmol)HATU、2ml DMF、0.35ml DIEA，在室温下搅拌一夜。用水-乙腈稀释反应液，之后通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物的保护体。将得到的保护体溶解于3ml三氟乙酸中，在室温下搅拌2小时，之后馏去溶剂。通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物。
收量：69.9mg
1H-NMR(D2O)δ：7.85(brs，1H)，7.50-7.55(m,2H)，4.03(t，1H)，2.66(t，2H,J＝7.1Hz)，2.10-2.30(m,2H)
ESI-MS：335[M-H]-，337[M+H]+
(合成例38)
N5-(3-氯-4-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.38)
步骤1
向4ml发烟硫酸中缓慢加入04ml3-氯苯胺，在室温下搅拌一夜。边冷却至0度边向水中加入反应液，滤出析出的固体。将滤出的固体溶解于2当量的氢氧化钠水溶液中，然后加入浓盐酸，使液性呈酸性。滤出析出的固体，得到4-氨基-2-氯苯磺酸的粗产物。
收量：80mg
步骤2
将合成例21(化合物No.21的合成)中使用的苯磺酸衍生物换成步骤1中得到的4-氨基-2-氯苯磺酸的粗产物，进行相同的操作，从而得 到标题化合物。
收量：40mg
1H-NMR(D2O)δ：7.80(d，1H)，7.63(d，1H)，7.33(dd，1H)，3.94(t，1H)，2.50-2.60(m,2H)，2.10-2.22(m,2H)
ESI-MS：337[M+H]+，335[M-H]-
(合成例39)
N5-(5-溴-2-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.39)
将合成例38(化合物No.38的合成)之步骤1中使用的苯胺衍生物换成3-溴苯胺，同样地进行步骤1、步骤2，得到标题化合物。
收量：9.9mg
ESI-MS：429[M+H]+，427[M-H]-
(合成例40)
N5-(3-碘-4-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.40)
将合成例38(化合物No.38的合成)之步骤1中使用的苯胺衍生物换成3-碘苯胺，同样地进行步骤1、步骤2，得到标题化合物。
收量：
1H-NMR(D2O)δ：8.12(s，1H)，7.84(d，1H)，7.44(dd，1H)，3.75-3.90(m，1H)，2.50-2.60(m,2H)，2.00-2.20(m,2H)
ESI-MS：429[M+H]+，427[M-H]-
(合成例41)
N5-(5-碘-2-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.41)
在合成例40的合成中，得到作为位置异构体的化合物。
收量：
1H-NMR(D2O)δ：8.11(d，1H)，7.63-7.66(m，1H)，7.48(d，1H)，3.80-3.90(m，1H)，2.58-2.66(m,2H)，2.10-2.24(m,2H)
ESI-MS：429[M+H]+，427[M-H]-
(合成例42)
N5-羟基-N5-(3-磺苯基)-L-谷氨酰胺的合成(化合物No.42)
将270mg(4.3mmol)锌粉末、106mg(2mmol)氯化铵悬浮于2ml甲醇：水(1∶1)混合溶剂中，缓慢加入450mg(2mmol)2-硝基苯磺酸钠盐。加热至65℃，搅拌1小时，之后过滤不溶物，馏去所得的滤液，得到羟胺衍生物的粗产物。向450mg(1.5mmol)Boc-Glu-OtBu盐酸盐、230mg(1.7mmol)HOAt、646mg(1.7mmol)HATU中加入5mlDMF、0.35ml DIEA，搅拌10分钟。将该溶液加入之前得到的粗产物中，搅拌一夜。通过纯化步骤A进行纯化，得到标题化合物的保护体。向得到的保护体中加入4ml TFA，搅拌2小时，除去TFA，之后通过纯化步骤A进行纯化，从而得到标题化合物。
收量：135mg
1H-NMR(DMSO)δ：10.65(s，1H)，10.04(s，1H)，7.20-8.40(m，7H)，3.90-4.10(m，1H)，2.60-3.00(m,2H)，1.90-2.20(m,2H)
ESI-MS：317[M-H]-，319[M+H]+
(合成例43)
O-{[羟基(3-磺苯基)氨基]羰基}-L-丝氨酸的合成(化合物No.43)
向1mmol Boc-Ser-OtBu、合成例42中得到的羟胺的粗产物、100mg(0.33mmol)三光气中加入2ml二氯甲烷、0.35ml DIEA，在室温下搅拌一夜。馏去溶剂，通过纯化步骤A纯化所得的残余物，得到标题化合物的保护体。将得到的保护体溶解于4ml TFA中，在室温下搅拌3小时，之后馏去TFA，通过纯化步骤A纯化，得到标题化合物。
收量：6.6mg
1H-NMR(D2O)δ：7.78-7.80(m，1H)，7.43-7.60(m,4H)，4.56-4.58(m,2H)，4.10-4.15(m，1H)
ESI-MS：319[M-H]-，321[M+H]+
实施例II CaSR基因的制备
CaSR的基因的制备如下进行。根据注册在NCBI中的DNA序列(CaSR(钙受体)：NM_000388、SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2)，合成PCR中使用的合成寡DNA(正向引物(SEQ ID NO：3为ACTAATACGACTCACTATAGGGACCATGGCATTTTATAGCTGCTGCTGG)和反向引物(SEQ ID NO：4为TTATGAATTCACTACGTTTTCTGTAACAG)。
以来自人肾脏的cDNA(Clontech公司制)为材料，使用上述引物和Pfu Ultra DNA聚合酶(Stratagene公司制)，在以下的条件下进行PCR。在94℃下反应3分钟后，重复进行35次94℃30秒、55℃30秒、72℃2分钟的反应，之后在72℃下反应7分钟。进行琼脂糖电泳，用DNA染色试剂染色后，通过紫外线照射，检测通过PCR是否进行了扩增。同时，与进行了电泳的尺寸已知的DNA标志物进行比较，从而确认PCR产物的链长。用限制酶EcoRV(Takara公司制)切断质粒载体pBR322。使用连接试剂盒(Promega公司制)，将通过PCR扩增的基因片段连接在该切断位点上。在该反应溶液中转化大肠杆菌DH5α株，选择保持PCR扩增产物得到克隆的质粒的转化体。通过DNA核苷酸序列分析，确认了PCR扩增产物携带CaSR基因。使用该重组质粒，制作人CaSR表达质粒hCaSR/pcDNA3.1。
实施例III CaSR激动活性的评价
(CaSR激动剂评价方法)
在250μg/ml的G418的存在下，用含有10％的胎牛血清的DMEM(含有1.0g/ml的葡萄糖的Dulbecco’s改良Eagle培养基、NACALAI TESQUE)培养293E细胞(EBNA1表达HEK293细胞、ATCC No.CRL-10852)。以1.8×106细胞/15ml接种在直径为10cm的皿中，在 CO2培养箱(5％CO2、37℃)中静置24小时，之后使用转染试剂Mirus TransIT293(Takara Bio)转染人CaSR表达质粒hCaSR/pcDNA3.1。在CO2培养箱中放置24小时后，用含有10％胎牛血清的DMEM回收细胞，以15,000细胞/孔接种在poly-D-赖氨酸包被的384孔平板(Falcon)上。在CO2培养箱中静置24小时，之后除去培养基，以50μl/孔添加溶解于测定缓冲液(146mM NaCl、5mM KCl、1mM MgSO4、1mg/ml葡萄糖、20mM HEPES(pH7.2)、1.5mM CaCl2)中的Ca2+荧光指示剂Calcium4测定试剂盒(分子设备)，在37℃下静置1小时，然后在室温下静置30分钟，使摄入指示剂。将上述384孔板移到FLIPR(分子设备)中，以12.5μl/孔添加溶解于含有0.1％BSA的测定缓冲液中的化合物，测定3分钟荧光强度变化。需要说明的是，化合物No.20从Bachem公司购入。
(EC50计算方法)
通过FLIPR的自动计算求出化合物添加前后的荧光强度的最大值与最小值之差(RFU(Max-Min))。计算以化合物最大浓度添加时的RFU(Max-Min)为100％、以添加同浓度的DMSO来代替化合物时的RFU(Max-Min)为0％而定义的活性率，使用表计算软件Xfit进行曲线拟合，求出活性率为50％时的化合物浓度即EC50值。有关表1和表2所示的化合物的结果见表3和表4。
表3
化合物No.EC50值[μM]10.01222.330.5640.05950.1362770.0019801090.27100.017110.086120.20130.072142.0150.034160.048172.0180.53190.4020094
表4
化合物No.EC50值[μM]210.0057220.0014230.89240.022250.97260.1627015280.33290533029313.7320.0088330.0021340.0019350.0037363.5370.0029386.73950407.9412.3420.031430.043
实施例IV在大鼠大肠袢法中CaSR激动剂对水分吸收的影响(1)(方法)
在戊巴比妥麻醉下，从雄性SD(IGS)大鼠的腹部取出盲肠、大肠，紧挨着盲肠下方起结扎5cm，制作大肠袢。制作袢后，立即将PGE2(4μg/mL/kg、SIGMA)进行腹腔内给药，30分钟后，向制作的袢内注入2mL Tyrode溶液(136.9mM NaCl、2.7mM KCl、1.8mM CaCl2·2H2O、1.04mM MgCl2·6H2O、0.04mM NaH2PO4·2H2O、5.55mM葡萄糖、11.9mM NaHCO3)。1小时后测定袢重量、除去袢内的液体后的重量和袢面积，由此计算袢内残留的、每单位面积的液体重量。
将试验化合物溶解于Tyrode溶液中(将药液调整至pH6.5～7.5)，供给试验。
通过下式计算每单位面积的残留液体量(g/cm2)。
每单位面积的残存液体量(g/cm2)＝(袢重量-除去液体后的袢重量)/袢的面积
由下式计算抑制率，评价水分吸收。
抑制率(％)＝100-(每单位面积的药物残留液量-每单位面积的碱的平均残留液量)/(溶媒的每单位面积的平均残留液量-每单位面积的碱的平均残留液量)×100。
结果见图1。结果提示：表1之No.1的化合物用量依赖性地促进水分吸收，作为腹泻治疗或预防药有效。
实施例V在大鼠大肠袢法中CaSR激动剂对水分吸收的影响(2)
与实施例IV记载的方法一样，对化合物No.7进行相同的试验。结果见图2。结果提示：表1之No.7的化合物用量依赖性地促进水分吸收，作为腹泻治疗或预防药有效。
实施例VI(试验例1)浓厚味评价
对于发现<本发明中使用的化合物类(化合物No.1、No.7的钠盐)的浓厚味给予活性>钙受体活化作用的化合物类(化合物No.1、No.7、No.21的钠盐)，通过定量性的感官评价试验研究浓厚味给予活性的强度。需要说明的是，化合物使用下述化合物：将525mg实施例I、合成例1记载的化合物No.1溶解于5ml蒸馏水中，之后加入16.4ml0.1M的氢氧化钠溶液，调节至pH6.5～7，之后冷冻干燥，以Na盐形式制备的化合物。此外，将500mg实施例I、合成例7记载的化合物No.7悬浮于5ml蒸馏水中，在0℃下依次加入1.61ml1M的氢氧化钠、0.8ml2M的盐酸，过滤收集析出的固体，在40℃下减压干燥，得到426mg化合物No.7。此外，使用下述化合物：将得到的固体悬浮于 10ml蒸馏水中，加入1.2ml1M的氢氧化钠，之后冷冻干燥，以Na盐形式制备的化合物。化合物No.21使用对实施例I、合成例21记载的化合物No.21进行相同的操作而制备的Na盐。
定量性的感官评价试验如下实施。测定以0.000001～0.1g/d1向含有0.05g/d1谷氨酸钠、0.05g/d1肌苷酸一磷酸、0.5g/d1氯化钠的蒸馏水中混合作为试样的化合物类(No.1-Na盐)时的浓厚味给予活性的强度。参照使用已知的浓厚味给予成分γGlu-Cys-Gly、γGlu-Val-Gly。关于试样溶解后相对于未添加对照呈酸性的样品，用NaOH调节至相对于未添加对照为pH±0.2的范围后使用。关于感官评分，以对照：0分、强：3分、非常强：5分，且n＝4来实施。尚需说明的是，“先中味”是指先味和中味合并的味道。在上述添加浓度下广泛显示出浓厚味给予活性，在代表性的浓度下的结果见表5。
表5

附图说明
图1是显示化合物No.1的对腹泻的预防活性的图。
图2是显示化合物No.7的对腹泻的预防活性的图。