一种解脲支原体金标检测试剂盒及检测方法技术领域
本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种解脲支原体金标检测试剂盒及检测方法。
背景技术
解脲支原体(Ureaplasma Urealyticum，UU)是原核细胞微生物，体积介于细菌和病
毒之间，属于支原体柔膜菌纲，缺少细胞壁和脂多糖，常用Dienes染色法将其染成淡紫色。
其分子量小，约为750-947kbp,仅为大肠杆菌的五分之一，合成和代谢有限，是目前已知的
能在无生命培养基上生长繁殖的最小的原核细胞。1954年，Shepard等从男性非淋球菌性尿
道炎(Nongonoccal Urethritis，NGU)患者的尿道分泌物中首次分离得到解脲支原体(UU)。
人解脲支原体至少含有14个血清型，依据基因组大小，16SrRNA，16S-23SrRNA基因
间隔区，酶多态性，DNA-DNA杂交，多条带抗原(Multiple-Banded antigen，MB抗原)的不
同可分为两大类，第一群微小支原体(Ureaplasma parvum Up)，包括血清1、3、6和14四
个血清型，其他10个血清型属于第二群解脲支原体(U.urealyticum,Uu)，60％-80％的解脲支
原体感染是由第一血清型引起。MB抗原是解脲支原体的毒力因子和人感染过程中血清识别的
主要抗原。MB抗原N端相对保守，故制备针对MB抗原N端保守区的抗体来检测临床标本中
的解脲支原体。
解脲支原体可以寄居于健康人泌尿生殖道粘膜表面和婴儿呼吸道，也可以引起侵袭性
疾病。在发达国家，认为解脲支原体感染被认为是一种性传播疾病，女性感染可造成不孕，
孕妇感染可引起产后子宫内膜炎、盆腔炎、绒毛膜羊膜炎、流产、早产、支原体性产褥热，
也可垂直传播感染婴儿。男性感染后会引起前列腺炎、附睾炎、尿道炎症并影响精液的浓度
和PH,对精液质量产生负面作用。
近年来，解脲支原体感染性引起的非淋球菌性尿道炎已成为最常见的性传播疾病，且
发病率有上升趋势，欧美等发达国家已居各类性病之首，我国的发病率也不容忽视。滥用抗
生素导致耐药菌株出现，随时间和地点的变化其耐药性也各不相同。应此，解脲支原体的检
查在优生优育中具有极其重要的地位，越来越受到医学专家们的关注，及早发现对于控制感
染和并发症有着重大意义。
目前，该项目检测主要应用的检测方法为：直接电镜法(EM)、培养法、免疫电镜法
(IEM)、放射免疫法(RIA)、免疫荧光实验、间接血凝试验、酶联免疫法(ELISA)、杂交技
术和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法进行检测。但是，这些检测方法均需要依赖相应
的仪器设备、并需要使用液体试剂等，不便于实地检测，而且试剂的保存温度和使用也受到
限制，也不便于快速简便的得到实验结果。
因而，目前需要一种能够早期、快速、简便、可靠地诊断解脲支原体的方法。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种解脲支原体金标检测试剂盒及检测方法。
本发明采用的技术方案如下：
本发明提供一种解脲支原体金标检测试剂盒，包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、
吸水滤纸和反应支持物；其中，所述样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜、所述吸水
滤纸依次设置在所述反应支持物上；所述样品垫设置在所述反应支持物的底端，所述样品垫
的顶端压住所述胶体金垫的底端并与之粘贴，所述胶体金垫的顶端压住所述硝酸纤维素膜的
底端并与之粘贴，所述硝酸纤维素膜的顶端被所述吸水滤纸的底端压住并与之粘贴。
优选的，所述吸水滤纸长度为20.0mm，所述吸水滤纸与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴
在一起的重叠长度为1.5mm。
优选的，所述胶体金垫的长度为7.0mm，所述胶体金垫与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴
在一起的重叠长度为1.5mm。
优选的，所述样品垫的长度为20.0mm，所述样品垫与所述胶体金垫重叠粘贴在一起
的重叠长度为3.0mm。
优选的，所述胶体金垫为含有胶体金标记的解脲支原体MB蛋白单克隆抗体的胶体金
垫。
优选的，所述硝酸纤维素膜设置有检测条带和质控条带，所述检测条带设置于靠近所
述胶体金垫的一侧并含有解脲支原体MB蛋白单克隆抗体，所述质控条带设置于远离所述胶体
金垫的一侧并含有羊抗鼠IgG多克隆抗体。
优选的，所述反应支持物为塑料。
本发明提供一种应用解脲支原体金标检测试剂盒进行解脲支原体检测的方法，包括以
下步骤：
(1)将待检样本用稀释液处理；其中，所述待检样本为泌尿或生殖道分泌物；
(2)将稀释好的样本滴加至解脲支原体金标检测试剂盒的样品垫上；样本将依次沿
着反应支持物上的各个附着物向吸水滤纸的方向移动；
(3)若所述样本中含有解脲支原体，则解脲支原体中的解脲支原体MB蛋白在经过所
述胶体金垫的过程中，与所述胶体金垫标记的解脲支原体MB蛋白单克隆抗体特异性结合形成
复合物；所述复合物在经过所述硝酸纤维素膜的过程中，依次与解脲支原体MB蛋白单克隆抗
体以及羊抗鼠IgG多克隆抗体特异性结合；则检测条带处出现红色或紫红色，样本为阳性；
若所述样本中不含有解脲支原体，则检测条带处未出现红色或紫红色，样本为阴性：
(4)如果质控条带处出现红色或紫红色，则表明实验结果有效；如果质控条带处未
出现红色或紫红色，则表明胶体金失效或者实验操作有误，实验结果无效。
优选的，步骤(1)中，使用0.01M磷酸盐缓冲液作为样品稀释液，稀释待检样本。
本发明的有益效果如下：
本发明提供的解脲支原体金标检测试剂盒，能够简化泌尿或生殖道样本中解脲支原体
的检测流程。利用该种检测试剂盒检测解脲支原体，不对任何实验仪器、环境或者操作人员
具有依赖性，操作简单、方便、检测周期短、易于判读；另外，不需要特殊的仪器设备，不
需要专业培训，适应性强，便于随时随地的监测和检验。
本发明提供的检测方法操作简单方便、不依赖较高实验室条件、用于快速检测解脲支
原体，进而实现快速简便的辅助诊断泌尿生殖道等相关疾病的病因。
附图说明
图1是本发明的一个检测试剂盒的正面示意图；
图2是本发明的一个检测试剂盒的侧面示意图；
图3是本发明的一个检测试剂盒检测结果阳性示意图；
图4是本发明的一个检测试剂盒检测结果阴性示意图；
图5是本发明的一个检测试剂盒结果无效示意图；
图6是本发明的一个检测试剂盒结果无效示意图。
其中：1、吸水滤纸；2、硝酸纤维素膜；3、胶体金垫；4、样品垫；5、反应支持物；
T、检测条带；C、质控条带。
具体实施方式
以下结合附图对本发明进行详细说明：
本发明实施方式为针对解脲支原体的具体检测方式，其他亚型或者基因型的检测方
法，在制得合适的单克隆抗体后均可以按照以下思路得到检测方法。
本发明提供的解脲支原体金标检测试剂盒由吸水滤纸(1)、硝酸纤维素膜(2)、胶体
金垫(3)、样品垫(4)和反应支持物(5)组成。其中，反应支持物可以为塑料胶板。吸水
滤纸可以防止样本在硝酸纤维素膜的一端堆积，从而导致后续的样本无法继续前行，进而能
够使反应充分。硝酸纤维素膜(2)包括含有解脲支原体MB蛋白单克隆抗体的检测条带T以
及含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控条带C。胶体金垫(3)含有胶体金标记的解脲支原体MB
蛋白单克隆抗体。包被检测条带T和质控条带C的硝酸纤维素膜(2)粘贴在反应支持物(5)
上。
具体的，样品垫设置在反应支持物的底端，样品垫的顶端压住胶体金垫的底端并与之
粘贴，样品垫的长度为20.0mm，所述样品垫与所述胶体金垫重叠粘贴在一起的重叠长度为
3.0mm。
胶体金垫的顶端压住硝酸纤维素膜的底端并与之粘贴，胶体金垫的长度为7.0mm，所
述胶体金垫与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm。
硝酸纤维素膜的顶端被吸水滤纸的底端压住并与之粘贴，吸水滤纸长度为20.0mm，
吸水滤纸与硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm。
在检测条带T的方向上硝酸纤维素膜的边缘距离反应支持物边缘34.0mm，在质控条
带C的方向上硝酸纤维素膜的边缘距离反应支持物的边缘20.0mm。
为了能够达到检测解脲支原体MB蛋白的目的，需要选用合适的稀释液配方，从而能
够将解脲支原体包涵体中的MB蛋白分离出来，本实例中使用的是0.01M磷酸盐缓冲液作为样
品处理液。
将50～100μl的待检样品处理液直接滴加至检测试剂盒样品垫，此时样品将依次沿
着反应支持物(5)上的各个附着物向吸水滤纸的方向移动，15分钟内读取实验结果。
如果待检样本(泌尿生殖道分泌物)中含有的解脲支原体时，则与检测试剂盒上的胶
体金标记的解脲支原体MB蛋白单克隆抗体特异性结合形成复合物，而后继续前行，与包被在
硝酸纤维素膜(2)上的另一个解脲支原体MB蛋白单克隆抗体发生特异性结合，在检测条带
处出现红色或者紫红色，即检测线，表明待检样品中含有解脲支原体，为阳性，参照图3。
如果待检样本中含有的不含有解脲支原体，就不能形成足量复合物，检测条带处也就
不能出现红色或紫红色，为阴性，参照图4。
无论样本中是否含有解脲支原体，上述胶体金标记的单克隆抗体都会继续前行至质控
条带并与此处包被的羊抗鼠IgG多克隆抗体结合，形成红色或者紫红色条带，即为质控线。
如果在检测中此条带不出现，则证明胶体金失效或者操作有失误，结果无效，需要重新检测，
参照图5和图6。
本发明提供的解脲支原体金标检测试剂盒，能够简化泌尿生殖道分泌物样本中解脲支
原体的检测流程。利用该种检测试剂盒检测解脲支原体，不对任何实验仪器、环境或者操作
人员具有依赖性，操作简单、方便、检测周期短、易于判读；另外，不需要特殊的仪器设备，
不需要专业培训，适应性强，便于随时随地的监测和检验。
本发明提供的检测方法操作简单方便、不依赖较高实验室条件、用于快速检测解脲支
原体，进而实现快速简便的辅助诊断泌尿生殖道感染等相关疾病的病因。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来
说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视本
发明的保护范围。