一种鱼胶原蛋白抗衰老用量的筛选方法技术领域
本发明涉及生物保健研究领域，尤其涉及一种鱼胶原蛋白抗衰老用量的筛选方
法。
背景技术
随着经济水平提高，人们越来越重视健康与养生，各类养生保健类电视节目层出
不穷，市面上的保健品名目繁多，鱼龙混杂，但实际上真正经过验证能达到显著保健效果的
产品却并不多，而且经过长时间动物实验验证的就更少之又少。
深海鱼皮胶原安全性高，市面上常见的胶原大部分都是陆生动物胶原，然而近几
年，哺乳动物疾病不断爆发，疯牛病、禽流感等一些人畜共患疾病严重威胁人类健康，且受
宗教影响，陆生胶原的受益群众范围较小。
深海鱼皮胶原活性激发温度低，陆生动物胶原蛋白活性要在35℃才能全部被激
发，而鱼皮胶原的活性激发温度要低很多，应用于保健、美容领域更为合适。
传统的研究胶原作用的有：通过灌胃观察胶原促钙吸收的研究，有通过涂抹观察
胶原美容效果的研究。然而，通过涂抹观察胶原的效果的方法，周期长，结果不直观。
发明内容
鉴于此，有必要提供一种能够快速、有效研究鱼胶原蛋白肽抗衰老作用的鱼胶原
蛋白抗衰老用量的筛选方法。
一种鱼胶原蛋白抗衰老用量的筛选方法，包括如下步骤：
取25～30g的健康雄性小鼠，皮下注射D-半乳糖；
将小鼠灌胃给予不同剂量的分子量为1-3kDa的鱼胶原蛋白肽；
8周后，测定小鼠的皮肤水分含量，且将小鼠摘眼球取血，留取血清，测定MDA含量、
SOD、CAT和GSH-Px活性。
在其中一个实施例中，小鼠灌胃给予的鱼胶原蛋白肽的剂量为200-800mg/kg。
在其中一个实施例中，健康雄性小鼠的获得方式如下：将实验小鼠检疫3-5天，剔
除不合格小鼠，且在环境温度为20～26℃，相对湿度为40～60％，过滤送风的环境下饲养1
周，饲养期间，小鼠自由摄食和饮水，每日更换饮用水一次。
在其中一个实施例中，D-半乳糖的注射量为1000mg/kg。
在其中一个实施例中，所述鱼胶原蛋白肽能够抑制D-半乳糖诱导的MDA含量的上
升，能够提高SOD、GSH-Px、CAT的活性。
在其中一个实施例中，所述鱼胶原蛋白肽为鳕鱼皮胶原蛋白肽。
在其中一个实施例中，健康雄性小鼠采用6％硫化钠脱毛。
在其中一个实施例中，健康雄性小鼠的脱毛面积为3×3cm。
上述鱼胶原蛋白抗衰老用量的筛选方法，通过往小鼠灌胃鱼胶原蛋白肽，饲养一
段时间后，通过研究小鼠皮肤的水分及血清中的MDA含量、SOD、GSH-Px、CAT活性，能够有效
的得出小鼠的衰老情况，从而快速、有效地研究鱼胶原蛋白肽的抗衰老作用。实验结果表
明，鱼胶原蛋白肽具有显著的延缓衰老的功效。同时，通过上述方法，还能够得出鱼胶原蛋
白肽的最佳使用剂量。
附图说明
图1为一实施方式的各组小鼠的皮肤水分含量对比图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明
进行进一步详细说明，应当理解，此处所描述的具体实例仅以解释本发明，并不用于限定本
发明。
一实施方式的鱼胶原蛋白抗衰老用量的筛选方法，包括如下步骤：
S10、取25～30g的健康雄性小鼠，皮下注射D-半乳糖。
健康雄性小鼠的获得方式如下：将雄性KM小鼠(即昆明小鼠)检疫3～5天，剔除不
合格小鼠，且在环境温度为20～26℃，相对湿度为40～60％，过滤送风的环境下饲养1周得
到。饲养期间，小鼠自由摄食和饮水，每日更换饮用水一次。
在本实施方式中，健康雄性小鼠可以采用6％硫化钠脱毛。且健康雄性小鼠的脱毛
面积为3×3cm。
D-半乳糖的注射量为1000mg/kg。
S20、将小鼠灌胃给予不同剂量的分子量为1-3kDa的鱼胶原蛋白肽。
在本实施方式中，小鼠灌胃给予的鱼胶原蛋白肽的剂量为200-800mg/kg。鱼胶原
蛋白肽的分子量为1-3kDa，在此范围内的鱼胶原蛋白肽应用于保健美容产品中会达到更好
的效果。优选的，小鼠灌胃给予的鱼胶原蛋白肽的剂量为800mg/kg。
优选的，鱼胶原蛋白肽为鳕鱼皮胶原蛋白肽。
S30、8周后，测定小鼠的皮肤水分含量，且将小鼠摘眼球取血，留取血清，测定MDA
含量、SOD、CAT和GSH-Px活性。
S30中，血清可以置于-20℃条件下保存备用。
鱼胶原蛋白肽能够抑制D-半乳糖诱导的MDA含量的上升，能够提高SOD、GSH-Px、
CAT的活性。
为了能够有效研究鱼胶原蛋白肽抗衰老作用，进行了以下实验。
实验动物：KM小鼠(雄性)，25～30g，实验动物接收后检疫3～5天，剔除不合格动
物。环境温度20～26℃，相对湿度40～60％，过滤送风。自由摄食和饮水，每日更换饮水瓶一
次。
实验方法：60只小鼠适应饲养1周后，开始进行实验。所有小鼠均用6％的硫化钠脱
毛(3×3cm)，按照表1分组，分为正常对照组、衰老模型组、实验组和Ve阳性对照组，实验组
又分为鱼胶原蛋白肽低剂量组、鱼胶原蛋白肽中剂量组和鱼胶原蛋白肽高剂量组。衰老模
型组、实验组和Ve阳性对照组均皮下注射1000mg/kgD-半乳糖。正常对照组、抗衰老模型组、
实验组和Ve阳性对照组均灌胃等容量的试剂。正常组和皮肤衰老模型组每天灌胃生理盐
水，实验组每天灌胃鱼胶原蛋白肽，阳性对照组每天灌胃维生素E。实验8周后，动物禁食不
禁水，脱颈椎处死。
鱼胶原蛋白肽人用拟推荐剂量为2.16g/人/天，人体重按60kg计算，即36mg/kg体
重。小鼠等剂量设计为400mg/kg，约为人体剂量的10倍，为鱼胶原蛋白肽中剂量组。鱼胶原
蛋白肽高剂量组为800mg/kg和鱼胶原蛋白肽低剂量组为200mg/kg。
测试样品与检测指标：
1、样品采集：小鼠摘眼球取血，留取血清，-20℃保存备用。
2、补水效果检测指标：皮肤水分(烘干法)。其结果参见附图1。注：图1中#代表与正
常对照组比较，P<0.05，其中P代表概率，#指有差异；*,**代表与衰老模型组比较，*指有差
异，**指有显著差异，P<0.05，P<0.01。
3、抗皮肤衰老效果检测指标：试剂盒法检测血清MDA含量、SOD、CAT和GSH-Px活性。
其结果参见附表2。
动物注射D-半乳糖可以诱导类似加速衰老进程的生理变化。皮肤衰老时，重要特
征之一是皮肤水分含量会随着年龄增长而下降。
请参考图1，实验结果显示，衰老模型组小鼠皮肤水分含量明显低于正常对照组(P
<0.05)。与衰老模型组相比，实验组和阳性对照组小鼠皮肤的水分含量均得到明显的提高，
差异具有统计学意义(P<0.05，P<0.01)，其中除鱼胶原蛋白肽低剂量组外，其余各组与衰老
模型组相比均出现极显著差异(P<0.01)。说明较高剂量的鱼胶原蛋白肽对提高衰老皮肤水
分含量有很好的效果，其中，鱼胶原蛋白肽高剂量组的补水效果最好。
丙二醛(MDA)是脂质过氧化的最终产物，能与生物大分子如蛋白质、核酸、脂类结
合，形成难溶性物质，造成机体内各种大分子的损伤，是机体衰老过程中衡量脂质过氧化的
重要指标。实验发现，与正常对照组相比，衰老模型组的MDA含量明显升高，具有极显著差异
(P<0.01)。与衰老模型组相比，饲喂鱼胶原蛋白肽的实验组均可抑制D-半乳糖诱导的MDA含
量的上升。其中，鱼胶原蛋白肽高剂量组以及阳性对照组与衰老模型组具有显著差异(P<
0.05)。
超过氧化物歧化酶(SOD)是人体最重要的抗氧化酶，它能有效地清除体内超氧自
由基，抑制丙二醛的产生，对人体不断地补充SOD能起到抗衰老的效果。谷胱甘肽过氧化物
酶(GSH-Px)是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶，能够阻断脂质过氧化连锁反
应。过氧化氢酶(CAT)其普遍存在于能呼吸的生物体内，其酶促活性为机体提供了抗氧化防
御机理。由表2分析可得，与正常对照组相比，注射D-半乳糖的衰老模型组三个指标，SOD、
GSH-Px、CAT均显著低于正常对照组(P<0.05，P<0.01)。与衰老模型组相比，实验组和阳性对
照组的三个指标的含量均有一定的上升，其中，鱼胶原蛋白肽高剂量组与衰老模型组相比
有显著差异(P<0.05)。实验表明，鱼胶原蛋白肽具有很好的延缓衰老的功效。
表1动物分组及受试物处理
表2受试物对动物血清氧化指标的影响
注：#与正常对照组比较，P<0.05，#指有差异，##指有显著差异；＊，＊*与衰老模型
组比较，P<0.05，P<0.01，*指有差异，**指有显著差异。
通过小鼠实验发现，中、高剂量的胶原具有明显的补水抗衰老效果，尤其是高剂量
胶原。
上述鱼胶原蛋白抗衰老用量的筛选方法，通过往小鼠灌胃鱼胶原蛋白肽，饲养一
段时间后，通过研究小鼠皮肤的水分及血清中的MDA含量、SOD、GSH-Px、CAT活性，能够快速、
有效的得出小鼠的衰老情况，从而有效研究鱼胶原蛋白肽的抗衰老作用。实验结果表明，鱼
胶原蛋白肽具有很好的延缓衰老的功效。同时，通过上述方法，还能够得出鱼胶原蛋白肽的
最佳使用剂量。且上述方法操作简单，重复性好，效果稳定。
以上所述仅是发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，
在不脱离发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为发明
的保护范围。