以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201410158903.2

申请日:

2014.04.18

公开号:

CN104107146A

公开日:

2014.10.22

当前法律状态:

实审

有效性:

审中

法律详情:

实质审查的生效IPC(主分类):A61K 8/44申请日:20140418|||公开

IPC分类号:

A61K8/44; A61K8/42; A61K8/64; A61K31/197; A61K38/05; A61Q19/02; A61Q19/10; A61P17/00; A61P29/00

主分类号:

A61K8/44

申请人:

新钰生技股份有限公司

发明人:

王思晴; 吴沛宣; 姚隽仪; 徐乃璇

地址:

中国台湾台北市内湖区瑞光路360号6楼

优先权:

2013.04.18 US 61/813,251

专利代理机构:

北京中原华和知识产权代理有限责任公司 11019

代理人:

寿宁;张华辉

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内容摘要

本发明是有关于一种以甘胺酸衍生物来抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物。上述甘胺酸衍生物不仅可有效地抑制皮肤的发炎反应,更可有效地减少黑素亲和素的表现。上述组合物包含上述的甘胺酸衍生物,且可呈现出抑制发炎反应,与有效减少黑素亲和素的表现等效果。上述的组合物可应用于外用化妆品,或是作为皮肤护理或功能性的药用配方。

权利要求书

1.  一种减少黑素亲和素表现的方法,其特征在于其包含:
将甘胺酸衍生物应用于标的区域,其中上述甘胺酸衍生物具有减少黑素亲和素表现的功能,且上述甘胺酸衍生物具有以下所示的化学式:

其中,R1是C1~C4的烷基,R2是氢原子或甲基,以及n是1~6的整数。

2.
  根据权利要求1所述的减少黑素亲和素表现的方法,其特征在于:其中该甘胺酸衍生物是3(2-乙酰胺基-乙酰胺基)-丙酸,其化学式如下:


3.
  根据权利要求1所述的减少黑素亲和素表现的方法,其特征在于:其中该甘胺酸衍生物是4-(2-乙酰胺基-乙酰胺基)丁酸,其化学式如下:


4.
  根据权利要求1所述的减少黑素亲和素表现的方法,其特征在于:其中该甘胺酸衍生物是[(2-乙酰胺基-乙酰基)-甲基-胺基]乙酸,其化学式如下:


5.
  一种减少黑素亲和素表现的组合物,其特征在于包含:
添加有重量比为0.05~10wt%的甘胺酸衍生物,其中上述甘胺酸衍生物 具有减少黑素亲和素表现的功能,其中上述甘胺酸衍生物具有以下所示的化学式:

其中,R1是C1~C4的烷基,R2是氢原子或甲基,以及n是1~6的整数。

6.
  根据权利要求5所述的减少黑素亲和素表现的组合物,其特征在于:其中该甘胺酸衍生物是3(2-乙酰胺基-乙酰胺基)-丙酸,其化学式如下:


7.
  根据权利要求5所述的减少黑素亲和素表现的组合物,其特征在于:其中该甘胺酸衍生物是4-(2-乙酰胺基-乙酰胺基)丁酸,其化学式如下:


8.
  根据权利要求5所述的减少黑素亲和素表现的组合物,其特征在于:其中该甘胺酸衍生物是[(2-乙酰胺基-乙酰基)-甲基-胺基]乙酸,其化学式如下:


9.
  一种抑制发炎的方法,其特征在于其包含:
将甘胺酸衍生物应用于标的区域,其中上述甘胺酸衍生物具有抑制发炎的功能,且上述甘胺酸衍生物具有以下所示的化学式:

其中,R1是C1-C4的烷基,R2是氢原子或甲基,以及n是1-6的整数。

10.
  根据权利要求9所述的抑制发炎的方法,其特征在于:其中该甘胺酸衍生物是3(2-乙酰胺基-乙酰胺基)-丙酸,其化学式如下:


11.
  根据权利要求9所述的抑制发炎的方法,其特征在于:其中该甘胺酸衍生物是4-(2-乙酰胺基-乙酰胺基)丁酸,其化学式如下:


12.
  根据权利要求9所述的抑制发炎的方法,其特征在于:其中该甘胺酸衍生物是[(2-乙酰胺基-乙酰基)-甲基-胺基]乙酸,其化学式如下:

说明书

以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物
技术领域
本发明是关于一种甘胺酸衍生物,特别是关于以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物。
背景技术
就结构而言,皮肤可分成三层:表皮、真皮、和皮下组织。每层有其特殊的结构与功能性。表皮是在皮肤的表面,具有大量的角质细胞。做为皮肤最外层的结构,表皮角质细胞就成了紫外线照射时最主要的吸收对象。
适当的紫外线照射可诱导产生的皮肤维生素D。维生素D是与骨胳健康有关的营养素。但是,暴露在过量的紫外线之下可能会导致皮肤,眼睛和免疫系统发生急性或慢性健康影响。在过度紫外线照射的皮肤上,最常见的急性发炎症状是皮肤血管舒张和白细胞浸润所引起的晒伤(红斑),而过度紫外线照射对皮肤造成的慢性发炎症状通常是老化。
由于紫外线的刺激,角质形成细胞将通过产生并释放促炎介质而成为炎症的触发者,上述促炎介质例如IL-1,IL-6,IL-8,TNF- ,PGE2。IL-1,IL-6,与TNF- 同时与急性炎症和慢性炎症反应都有相关。而IL-8是一种急性炎症的趋化因子,因为IL-8将会招来更多的促炎细胞。
另一方面,黑素亲和素(Melanophilin,Mlph)是一种与黑色素小体(melanosome)的传递有关的蛋白质,主要是跟黑色素(melanin)的形成与分配有关。Mlph是与黑色素小体的传输有关的一个重要成员,主要是作为Rab27a和肌球蛋白Va(myopsin5a)之间的联结。Mlph也可以是参与肾脏的集合管细胞的上皮钠离子(Na+)通道的传输相关因子。此外,也有一些证据显示,雌激素受体阳性乳腺癌和MLPH的基因表现之间存在着正相关的关系。
有鉴于此,开发一种可抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物,同时可兼具美容与药用等功能应用,是一项相当值得产业重视的课题。
发明内容
鉴于上述的发明背景中,为了符合产业上的要求,本发明提供一种以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物,上述抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物不仅具有极佳的抑制发炎与减少黑素亲和素表现的效果,且具有高度安全性,可应用于美妆品及药 用的配方中,进而可有效提升产业竞争力。
本发明的一个目的在于提供一种抑制发炎的方法,借由在标的区域使用具有抑制发炎功能的甘胺酸衍生物,达到抑制发炎的效果。
本发明的另一个目的在于提供一种减少黑素亲和素表现的方法,借由在标的区域使用具有减少黑素亲和素表现功能的甘胺酸衍生物,达到在转录阶段减少黑素亲和素表现的效果。
本发明的又一个目的在于提供一种减少黑素亲和素表现的方法,借由在标的区域使用具有减少黑素亲和素表现功能的甘胺酸衍生物,达到在转译阶段减少黑素亲和素表现的效果。
本发明的又一个目的在于提供一种包含甘胺酸衍生物的组合物。上述组合物不仅可提供抑制发炎的效果,也可提供减少黑素亲和素表现的效果。上述组合物可用于局部美妆品或药用的配方,例如皮肤护理,或是功能性配方。
根据以上所述的目的,本发明揭示了一种以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物。上述甘胺酸衍生物的化学式如下:

上述甘胺酸衍生物不仅可抑制发炎反应,也可减少黑素亲和素表现。
本发明同时揭露了一种抑制发炎的组合物,以及一种减少黑素亲和素表现的组合物。上述组合物中包含0.05-10wt%的甘胺酸衍生物。上述组合物可应用于皮肤护理的配方,例如,面部和/或身体清洁配方,爽肤水,保湿喷雾,面膜,血清,日霜,晚霜,眼霜,女性晕霜(feminine halo cream),身体霜,护手霜,洗手液,沐浴露,女性卫生清洁剂。更好的是,上述的抑制发炎的组合物可应用于局部美妆品或药用配方,例如皮肤护理制剂,或功能性制剂等。
本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本发明提出的一种减少黑素亲和素表现(reducing melanophilin expression)的方法,其包含:将甘胺酸衍生物应用于标的区域,其中上述甘胺酸衍生物具有减少黑素亲和素表现的功能,且上述甘胺酸衍生物具有以下所示的化学式:

其中,R1是C1~C4的烷基,R2是氢原子或甲基,以及n是1~6的整数。
本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。
前述的减少黑素亲和素表现的方法,其中该甘胺酸衍生物是3(2-乙酰胺基-乙酰胺基)-丙酸[3(2-acetylamino-acetylamino)-propionic acid],其化学式如下:

前述的减少黑素亲和素表现的方法,其中该甘胺酸衍生物是4-(2-乙酰胺基-乙酰胺基)丁酸[4-(2-Acetylamino-acetylamino)-butyric acid],其化学式如下:

前述的减少黑素亲和素表现的方法,其中该甘胺酸衍生物是[(2-乙酰胺基-乙酰基)-甲基-胺基]乙酸([(2-Acetylamino-acetyl)-methyl-amino]-acetic acid),其化学式如下:

本发明的目的及解决其技术问题还采用以下技术方案来实现。依据本发明提出的一种减少黑素亲和素表现(reducing melanophilin expression)的组合物,包含:添加有0.05~10wt%(重量比)的甘胺酸衍生物,其中上述甘胺酸衍生物具有减少黑素亲和素表现的功能,其中上述甘胺酸衍生物具有以下所示的化学式:

其中,R1是C1~C4的烷基,R2是氢原子或甲基,以及n是1~6的整数。
本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。
前述的减少黑素亲和素表现的组合物,其中该甘胺酸衍生物是3(2-乙酰胺基-乙酰胺基)-丙酸[3(2-acetylamino-acetylamino)-propionic acid],其化学式如下:

前述的减少黑素亲和素表现的组合物,其中该甘胺酸衍生物是4-(2-乙酰胺基-乙酰胺基)丁酸[4-(2-Acetylamino-acetylamino)-butyric acid],其化学式如下:

前述的减少黑素亲和素表现的组合物,其中该甘胺酸衍生物是[(2-乙酰胺基-乙酰基)-甲基-胺基]乙酸([(2-Acetylamino-acetyl)-methyl-amino]-acetic acid),其化学式如下:

本发明的目的及解决其技术问题另外再采用以下技术方案来实现。依据本发明提出的一种抑制发炎的方法,其包含:将甘胺酸衍生物应用于标的区域,其中上述甘胺酸衍生物具有抑制发炎的功能,且上述甘胺酸衍生物具有以下所示的化学式:

其中,R1是C1-C4的烷基,R2是氢原子或甲基,以及n是1-6的整数。
本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。
前述的抑制发炎的方法,其中该甘胺酸衍生物是3(2-乙酰胺基-乙酰胺基)-丙酸[3(2-acetylamino-acetylamino)-propionic acid],其化学式如下:

前述的抑制发炎的方法,其中该甘胺酸衍生物是4-(2-乙酰胺基-乙酰胺基)丁酸[4-(2-Acetylamino-acetylamino)-butyric acid],其化学式如下:

前述的抑制发炎的方法,其中该甘胺酸衍生物是[(2-乙酰胺基-乙酰基)-甲基-胺基]乙酸([(2-Acetylamino-acetyl)-methyl-amino]-acetic acid),其化学式如下:

借由上述技术方案,本发明不仅具有极佳的抑制发炎与减少黑素亲和素表现的效果,且具有高度安全性等优点。
上述说明仅是本发明技术方案的概述,为了能够更清楚了解本发明的技术手段,而可依照说明书的内容予以实施,并且为了让本发明的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂,以下特举较佳实施例,并配合附图,详细说明如下。
附图说明
图1是以0.5%Ac-Gly-β-Ala在转录阶段(mRNA)对Mlph的表现结果的实验数据分析图(Mlph mRNA level)。
图2是以Ac-Gly-β-Ala在转译阶段(蛋白质)对Mlph的表现结果的实验数据分析图(Mlph protein level)。
图3是以0.05-0.4%的Ac-Gly-β-Ala对小鼠的IL-6分泌量的实验数据分析图(IL-6production on Raw264.7)。
图4是以0.05-0.4%的Ac-Gly-β-Ala对小鼠的MIP-2分泌量的实验数据分析图(MIP-2production on Raw264.7)。
图5是以Ac-Gly-β-Ala投予Raw2647后的细胞存活率实验结果数据分析图(Cell Viability on Raw264.7)。
图6是以0.05-0.4%的Ac-Gly-β-Ala对人类的IL-6分泌量的实验数据分析图(IL-6production on NHEK)。
图7是以0.05-0.4%的Ac-Gly-β-Ala对人类的IL-8分泌量的实验数据分析图(IL-8production on NHEK)。
图8是以0.05-0.4%的Ac-Gly-β-Ala应用于NHEK后的细胞存活率实验结果数据分析图(Cell Viability on NHEK)。
图9是以0.2%的不同甘胺酸衍生物对于IL-6分泌量的抑制效果比较图(IL-6production on NHEK-0.2%Glycine derivatives),其中,每种甘胺酸衍生物的实验结果,皆与0.2%Ac-Gly-β-Ala(15%IL-6生成)雷同,此外,实验所使用的0.2%甘胺酸衍生物皆不会影响细胞存活率(存活率>90%)。
图10是以0.2%的不同甘胺酸衍生物对于IL-8分泌量的抑制效果比较图(IL-8production on NHEK-0.2%Glycine derivatives),其中,每种甘胺酸衍生物的实验结果,皆与0.2%Ac-Gly-β-Ala(69%IL-8生成)雷同,此外,实验所使用的0.2%甘胺酸衍生物皆不会影响细胞存活率(存活率>90%)。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段及功效,以下结合附图及较佳实施例,对依据本发明提出的以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物其具体实施方式、结构、特征及其功效,详细说明如后。
本发明在此所探讨的方向为一种以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物。为了能彻底地了解本发明,将在下列的描述中提出详尽的制造过程步骤或组成结构。显然地,本发明的施行并未限定于该领域的技艺者所熟习的特殊细节。另一方面,众所周知的组成或制造过程步骤并未描述于细节中,以避免造成本发明不必要的限制。本发明 的较佳体系会详细描述如下,然而除了这些详细描述之外,本发明还可以广泛地施行在其他的体系中,且本发明的范围不受限定,以其之后的专利范围为准。
本发明的一个实施例揭露一种以甘胺酸衍生物减少黑素亲和素表现的方法。上述减少黑素亲和素表现的方法包含将甘胺酸衍生物应用于目标区域的步骤。上述甘胺酸衍生物具有减少黑素亲和素表现的功能。在根据本实施例的一个较佳实施例中,上述的目标区域可以是细胞。在根据本实施例的另一个较佳实施例中,上述的目标区域可以是哺乳动物的皮肤。上述甘胺酸衍生物的结构可以是如下的化学式:

上述化学式中,R1可以是C1-C4的烷基,R2可以是氢原子或甲基,以及n可以是1-6的整数。
在根据本实施例的一个较佳实施例中,上述甘胺酸衍生物可以是3(2-乙酰胺基-乙酰胺基)-丙酸[3(2-acetylamino-acetylamino)-propionic acid或Acetyl-Glycine-β-Alanine,以下简称Ac-Gly-β-Ala]。上述甘胺酸衍生物Ac-Gly-β-Ala的化学式如下:

在根据本实施例的另一个较佳实施例中,上述甘胺酸衍生物可以是4-(2-乙酰胺基-乙酰胺基)丁酸[4-(2-Acetylamino-acetylamino)-butyric acid 或Acetyl-Glycine- -aminobutyric acid,以下简称Ac-Gly-GABA]。上述甘胺酸衍生物Ac-Gly-GABA的化学式如下:

在根据本实施例的另一个较佳实施例中,上述甘胺酸衍生物可以是[(2-乙酰胺基-乙酰基)-甲基-胺基]乙酸([(2-Acetylamino-acetyl)-methyl-amino]-acetic acid或 Acetyl-Glycine-Sarcosine,以下简称Ac-Gly-Sar]。上述甘胺酸衍生物Ac-Gly-Sar的化学式如下:

本发明的另一个实施例揭露一种以甘胺酸衍生物抑制发炎的方法。上述抑制发炎的方法包含将甘胺酸衍生物应用于目标区域的步骤。上述甘胺酸衍生物具有抑制发炎的功能。在根据本实施例的一个较佳实施例中,上述的目标区域可以是细胞。在根据本实施例的另一个较佳实施例中,上述的目标区域可以是哺乳动物的皮肤。上述甘胺酸衍生物的结构可以是如下的化学式:

上述化学式中,R1可以是C1-C4的烷基,R2可以是氢原子或甲基,以及n可以是1-6的整数。
在根据本实施例的一个较佳实施例中,上述甘胺酸衍生物可以是3(2-乙酰胺基-乙酰胺基)-丙酸[3(2-acetylamino-acetylamino)-propionic acid或Acetyl-Glycine-β-Alanine,以下简称Ac-Gly-β-Ala]。上述甘胺酸衍生物Ac-Gly-β-Ala的化学式如下:

在根据本实施例的另一个较佳实施例中,上述甘胺酸衍生物可以是4-(2-乙酰胺基-乙酰胺基)丁酸[4-(2-Acetylamino-acetylamino)-butyric acid 或Acetyl-Glycine- -aminobutyric acid,以下简称Ac-Gly-GABA]。上述甘胺酸衍生物Ac-Gly-GABA的化学式如下:

在根据本实施例的另一个较佳实施例中,上述甘胺酸衍生物可以是[(2-乙酰胺基-乙酰基)-甲基-胺基]乙酸([(2-Acetylamino-acetyl)-methyl-amino]-acetic acid或Acetyl-Glycine-Sarcosine,以下简称Ac-Gly-Sar]。上述甘胺酸衍生物Ac-Gly-Sar的化学式如下:

以下将叙明根据本说明书的以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物的较佳实施例。然而,本说明书的范围应以其后的专利要求的保护范围为准,而不应以下列实施实施例为限。
实施例1:在转录阶段(transcriptional level)对于减少黑素亲和素表现的实验[在本实施例中是以Ac-Gly-β-Ala作为实验代表,然而,本说明书的主张范围不应以此为限]
1.1.材料:
Part A.:小鼠黑色素瘤细胞(Murine melanoma cell)
小鼠黑色素瘤细胞(Murine melanoma cell line)B16-F10(BCRC No.60031)
缓冲液冲洗(Rinse Buffer):无菌的D-PBS
完全培养基(Complete Medium):含有10%胎牛血清(DMEM with10%Fetal Bovine Serum)
定量PCR引物的质量控制(Quality Control of qPCR primer):

1.2.操作步骤:
a.以无菌的D-PBS冲洗汇合的B16-F10细胞,然后以胰蛋白酶使细胞飘起,并进行细胞计数。
b.在每10厘米的培养皿中种入2E+06个B16-F10细胞。
c.让上述的B16F10细胞在37℃,5%CO2下,培养约24小时。
d.在完全培养基中准备0.5%的测试材料。
e.移除培养基后,分别将9mL的对照组样品与0.5%的测试材料加至 上述10-cm培养皿内。
f.让上述的B16-F10细胞在37℃,5%CO2的环境下培养约1小时。
g.在培养约1小时后,移除上清液并用无菌的D-PBS洗涤B16-F10细胞。
h.在清洗后的标的细胞(suspend cell)中添加3mL的Trzol,并委外进行qPCR的检测(委托威健生技Welgene Biotech Co.,Ltd)。
2.3.数据分析:

如图1所示,0.5%的Ac-Gly-β-Ala可以在转录(mRNA)阶段呈现出对于Rab27a、Mlph、Myo5a的抑制效果。下表1是Mlph mRNA表现的实验数据。
表1.以0.5%的Ac-Gly-β-Ala来抑制Mlph mRNA表现的实验数据分析

实施例2:在转译阶段(translational level)减少黑素亲和素表现的实验[在本实施例中是以Ac-Gly-β-Ala作为实验代表,然而,本说明书的主张范围不应以此为限]
2.1.材料:
Part A.:小鼠黑色素瘤细胞(Murine melanoma cell)
小鼠黑色素瘤细胞(Murine melanoma cell line)B16-F10(BCRC No.60031)
缓冲液冲洗(Rinse Buffer):无菌的D-PBS
完全培养基(complete medium)(作为负控制组):含有10%胎牛血清(DMEM with10%Fetal Bovine Serum)
测试培养基(testing medium,作为正控制组):在完全培养基中加入20 M的毛喉素(forskolin,FSK)
使用抗体:

2.2.操作步骤:
a.以无菌的D-PBS冲洗B16-F10细胞,然后以胰蛋白酶使细胞飘起,并进行细胞计数。
b.在每个6-cm的培养皿中植入2E+06个B16-F10细胞。
c.让上述的B16F10细胞在37℃,5%CO2下,培养约24小时。
d.在测试培养基中准备0.5%/0.25%/0.125%的测试材料。
e.移除培养基后,将3mL的对照组样品与测试材料加至上述6-cm培养皿内的B16-F10细胞。
f.让上述的B16-F10细胞在37℃,5%CO2的环境下培养约48小时。
g.在培养约48小时后,移除上清液并用无菌的D-PBS洗涤B16-F10细胞。
h.以西方墨点法(Western blot)来检测Mlph蛋白质表现西方墨点法条件如下:
*载入蛋白质数量:40mg/well
*以半干转印装置(Semi-dry Transfer Apparatus)进行蛋白质转印
*使用一级抗体(稀释比例1:250)在4℃以一个晚上的时间进行免疫印迹(immunoblot)
*使用二级抗体(稀释比例1:5000)在室温进行培养
*以ECL系统进行检测
*以IMAGEJ的免费软件来测定蛋白表现的相对定量。使用β-肌动蛋白(β-actin)作为校正的控制组。
*数据分析:

如图2所示,Ac-Gly-β-Ala可以在转译(蛋白质)阶段呈现出对于Mlph的抑制效果。下表2是Mlph蛋白质表现的实验数据。
表2.以Ac-Gly-β-Ala来抑制Mlph蛋白质表现的剂量依赖性的实验数据分析

实施例3:皮肤美白测试(In-vivo skin test)[在本实施例中是以Ac-Gly-β-Ala作为实验代表,然而,本说明书的主张范围不应以此为限]
在本实施例中的在体内的皮肤测试(In-vivo skin test),是委由AMA Laboratories USA执行。其中皮肤色泽变化(skin color changes)是以美能达较窄的颜色的计算机系统(Minolta chromameter color computer system)进行评估,老年斑(Age spot)变化(Photography)是以逆向工程的照片(Reverse Photo Engineering)影像定量分析进行评估。
在皮肤色泽变化方面,受试者为10位年龄25-48岁的女性,其中9位为白人,1位为亚洲人。受试者在受试前(baseline),使用后14、28、56天以美能达较窄的颜色的计算机系统(Minolta chromameter color computer system)进行色泽变化评估测试。而皮肤色泽评估所使用的样品为0.2%Ac-Gly-β-Ala。皮肤色泽变化(L*值)测试结果如下表3A。
表3A

*统计显著(Statistically Significant)
在Age spot变化方面,受试者为10位年龄38-49岁的女性,其中4位为白人,1位为亚洲人,受试者在受试前(baseline),使用后14、28、56天进行Age spot变化评估测试,利用高解析度数位相机拍摄,再以ReversePhoto Engineering进行Age spot影像定量分析。Age spot变化测试结果如下表3B。
表3B

*统计显著(Statistically Significant)
由本实施例的测试结果显示,使用含有0.2%Ac-Gly-β-Ala的产品,可显著增加皮肤的L*值,即表示可有效亮白肌肤色泽。此外,由影像系统评估Age Spot变化,亦可发现使用含有0.2%Ac-Gly-β-Ala的产品后,Age Spot影像定量显著减少。综合以上结果,证明Ac-Gly-β-Ala具有美白效果。
实施例4:抑制发炎的实验[在本实施例中是以Ac-Gly-β-Ala作为实验代表,然而,本说明书的主张范围不应以此为限]
4.1.材料:
Part A.:小鼠巨噬细胞(Murine macrophage cell)
小鼠巨噬细胞(Murine macrophage cell line)RAW264.7(BCRC No.60001)
缓冲液冲洗(Rinse Buffer):无菌的D-PBS
完全培养基(Complete Medium)(作为负控制组):含有10%胎牛血清(DMEM with10%Fetal Bovine Serum)
测试培养基(testing Medium,作为正控制组):在完全培养基中加入100ng/mL的LPS与10ng/mL的IFN-r
测试装置(ELISA试剂盒):

项目品牌Cat.No小鼠IL-6QUANTIKINE ELISA试剂盒R&DM6000B小鼠CXCL2/MIP-2Quantikine ELISA试剂盒R&DMM200

Part B.:人类表皮角质细胞(Human Epidermal Keratinocytes)
正常人类表皮角质细胞(NHEK,PromoCell No.C-12008)
缓冲液冲洗(Rinse Buffer):无菌的D-PBS
完全培养基(Complete Medium):角质细胞生长培养基2(Keratinocyte Growth Medium2)
控制组:
正控制组:40mJ/cm2UVB
负控制组:无UVB照射
测试装置(ELISA试剂盒):
项目品牌Cat.No人类IL-6QUANTIKINE ELISA试剂盒R&DM6000B人类CXCL2/MIP-2Quantikine ELISA试剂盒R&DMM200

4.2.操作步骤:
程序A.Raw264.7:
a.以无菌的D-PBS冲洗Raw264.7细胞,然后以胰蛋白酶使细胞飘起,并进行细胞计数。
b.将细胞浓度稀释至2E+05/mL,并在96孔盘(96-well plate)的每一个孔中种入0.1mL(相当于2E+04细胞)的细胞液。
c.让上述的Raw264.7细胞在37℃,5%CO2下,培养约24小时。
d.在2x测试培养基(即含有200ng/mL的LPS与20ng/mL的IFN-r)中准备2x剂量溶液的测试材料:0.8%,0.4%,0.2%,0.1%(最后测试材料:0.4%,0.2%,0.1%,0.05%)。
e.将100 L的对照组样品与不同浓度的测试材料加至上述96孔盘中的Raw264.7细胞。
f.让上述的Raw264.7细胞在37℃,5%CO2的环境下培养约48小时。
g.在培养约48小时后,收集控制组与测试材料的上清液。
h.使用前述的R&D ELISA试剂盒来检测上清液的IL-6/MIP-2含量。
程序B.NHEK:
a.以无菌的D-PBS冲洗NHEK细胞,然后以胰蛋白酶使细胞飘起,并进行细胞计数。
b.将细胞浓度稀释至4~8E+04/mL,并在24孔盘(24-well plate)的每一个孔中种入0.5mL(相当于2~4E+04细胞)的细胞液。
c.让上述的NHEK细胞在37℃,5%CO2下,进行培养直到约8-9分满。
d.在完整培养基中准备不同剂量的测试材料溶液:0.4%,0.2%,0.1%,0.05%。
e.以无菌的D-PBS冲洗NHEK细胞后,移除冲洗缓冲液。将400 L的对照组样品与不同浓度的测试材料加至上述24孔盘中的NHEK细胞。
f.让上述具有测试材料的NHEK细胞在37℃,5%CO2的环境下进行前处理(pre-treat)约6小时。
g.在预培养约6小时后,以无菌的D-PBS对NHEK细胞冲洗2次,然后,加入500 L无菌的D-PBS以进行UVB照射。
h.UVB强度约2300 W/cm2,且能量约40mJ/cm2。
i.在UVB照射后,移除无菌的D-PBS,并再次进行冲洗。然后,添加400 L与前处理相同的剂量溶液至每一个孔。
j.在37℃,5%CO2的环境下进行后处理(post-treat)约18小时。
k.在后处理约18小时后,收集对照组与测试材料的上清液。
l.使用前述的R&D ELISA试剂盒来检测上清液的IL-6/IL-8含量。
4.3.数据分析:

上述数据分析可以示针对对照组与测试材料的上清液来进行。
4.4.细胞存活率(cell viability)是透过中性红吸收经验(Neutral Red Uptake Experience)或MTT法(MTT Assay)来进行检测。
将Ac-Gly-β-Ala依据上述实验步骤以3次重复实验应用于Raw264.7细胞,所检测出的小鼠的IL-6产出测试结果整理如下表3。
表3.以Ac-Gly-β-Ala来抑制小鼠IL-6含量的实验数据分析

表3中以0.05%-0.4%的Ac-Gly-β-Ala来抑制IL6产出的剂量依赖关系可参见图3。由图3可明显看出两者间的剂量依存关系。
以3次重复实验将Ac-Gly-β-Ala应用于Raw264.7细胞,所检测出的小鼠的MIP-2产出测试结果整理如下表4。如表4所示,相比于正控制组,Ac-Gly-β-Ala可有效地将MIP-2的产出降低至31%。参见图4,以0.05%-0.4%的Ac-Gly-β-Ala来抑制MIP-2产出的实验中,可明显出具有剂量依存性。
表4.以Ac-Gly-β-Ala抑制小鼠MIP-2含量的数据分析

以3次重复实验将Ac-Gly-β-Ala应用于Raw264.7细胞,所检测出的细胞活力测试结果整理如下表5。相比于正控制组,Ac-Gly-β-Ala可有效地将MIP-2的产出降低至31%。在所有添加有测试材料的测试结果中,细胞存活率皆高于85%。由图5可看出,以0.05%-0.4%的Ac-Gly-β-Ala投予于Raw264.7时,仍可呈现出极佳的细胞存活率。
表5. 以Ac-Gly-β-Ala应用于Raw264.7的细胞存活率数据分析

以4次重复实验将Ac-Gly-β-Ala投予NHEK细胞,所检测出的人类IL-6产出测试结果整理如下表6。如表6所示,相比于正控制组,0.4%Ac-Gly-β-Ala可将IL-6的产出抑制到约3%。如图6所示,在表6中,0.05%-0.4%的Ac-Gly-β-Ala对于IL6产出的抑制效果,具有剂量依存关系。
表6. 以Ac-Gly-β-Ala来抑制人类IL-6含量的数据分析

以4次重复实验将Ac-Gly-β-Ala应用于NHEK细胞,所检测出的人类IL-8产出测试结果整理如下表7。如表7所示,相比于正控制组,0.4%的Ac-Gly-β-Ala可将IL-8的产出抑制到约9%。如图6所示, 0.05%-0.4%的Ac-Gly-β-Ala对于IL-8产出的抑制效果,具有剂量依存关系。
表7.以Ac-Gly-β-Ala来抑制人类IL-8含量的数据分析

表8.将Ac-Gly-β-Ala应用于NHEK的细胞活性数据分析

实施例5:其他甘胺酸衍生物的抑制发炎的实验
我们已经在前述的实施例中讨论了Ac-Gly-β-Ala的抑制发炎效果。为了进一步了解其他根据本说明书的甘胺酸衍生物的抑制发炎效果,在本实施例中我们选用了[(2-乙酰胺基-乙酰基)-胺基]乙酸[(2-acetylamino-acetylamino)-acetic acid(Acetyl-Glycine-Glycine,以下简称Ac-Gly-Gly)]、[(2-乙酰胺基-乙酰基)-甲基-胺基]乙酸([(2-Acetylamino-acetyl)-methyl-amino]-acetic acid或Acetyl-Glycine-Sarcosine,以下简称Ac-Gly-Sar]、以及4-(2-乙酰胺基-乙酰胺基)丁酸[4-(2-Acetylamino-acetylamino)-butyric acid或Acetyl-Glycine- -aminobutyric acid,以下简称Ac-Gly-GABA]等甘胺酸衍生物分别应用于人类表皮角质细胞,并观察其抑制发炎的效果。上述甘胺 酸衍生物Ac-Gly-Gly,Ac-Gly-Sar,Ac-Gly-GABA的结构式如下。

在本实施例中,将分别以上述几个甘胺酸衍生物投予于人类表皮角质细胞(NHEK),来评估上述甘胺酸衍生物对于角质细胞的抑制发炎效果。
材料与操作流程:
请参考上述实施例4。
表9.以不同甘胺酸衍生物来抑制人类IL-6含量的数据分析

表10.以不同甘胺酸衍生物来抑制人类IL-8含量的数据分析

由上述数据可发现,根据本说明书的甘胺酸衍生物确实具有相当显著的抑制发炎效果。
本发明的另一个实施例揭露一种抑制发炎的组合物。上述抑制发炎的组合物包含甘胺酸衍生物,其中,甘胺酸衍生物的含量约为该抑制发炎的组合物的0.05-10wt%(重量百分比)。上述甘胺酸衍生物具有抑制发炎的功能。上述甘胺酸衍生物的结构可以是如下的化学式:

上述化学式中,R1可以是C1-C4的烷基,R2可以是氢原子或甲基,以及n可以是1-6的整数。
上述抑制发炎的组合物可以是应用于皮肤护理的配方,例如,面部和/或身体清洁配方,爽肤水,保湿喷雾,面膜,血清,日霜,晚霜,眼霜,女性晕霜(feminine halo cream),身体霜,护手霜,洗手液,沐浴露,女性卫生清洁剂。更好的是,上述的抑制发炎的组合物可应用于局部美妆品或药用配方,例如皮肤护理制剂,或功能性制剂。
本发明的另一个实施例揭露一种减少黑素亲和素表现的组合物。上述减少黑素亲和素表现的组合物包含甘胺酸衍生物,其中,甘胺酸衍生物的含量约为该减少黑素亲和素表现的组合物的0.05-10wt%(重量百分比)。上述甘胺酸衍生物具有减少黑素亲和素表现的功能。在根据本实施例的一个较佳实施例中,上述减少黑素亲和素表现的组合物可有效减少黑色素的运 输/转录中的黑素亲和素的表现,进而达到抑制黑色素生成的效果。上述甘胺酸衍生物的结构可以是如下的化学式:

上述化学式中,R1可以是C1-C4的烷基,R2可以是氢原子或甲基,以及n可以是1-6的整数。
上述减少黑素亲和素表现的组合物可以是应用于皮肤护理的配方,例如,面部和/或身体清洁配方,爽肤水,保湿喷雾,面膜,精华露(serum),日霜,晚霜,眼霜,女性晕霜(feminine halo cream),身体霜,护手霜,洗手液,沐浴露,女性卫生清洁剂。更好的是,上述减少黑素亲和素表现的组合物可应用于局部美妆品或药用配方,例如皮肤护理制剂,或功能性制剂。
根据本说明书的局部美妆品或药用配方可以是液体,乳液,增稠的乳液,凝胶,霜剂,乳,软膏,糊剂,粉剂,化妆,或是固态的管状或棒状物。上述局部美妆品或药用配方可以选择性地包装为气溶胶,或是以慕斯(mousse)的形式来包装,如气溶胶慕斯,泡沫或喷雾泡沫剂,喷雾剂,棒状,凝胶,膏状,粉末,清洁剂,或肥皂的形式来提供气溶胶或湿巾。.较佳的局部配方形式可以包含乳膏,凝胶,软膏,洗剂,酊剂,喷雾剂,慕斯,清洗组合物或泡沫。以下将列举数种根据本说明书的配方/组合物实施例,上述配方/组合物可以借由习知该项技艺者所熟知的流程来制备。
实施例6.面部清洁配方

外观:白色膏状
pH值(10%溶液/25℃):5.70
流程:
1.将Ac-Gly-β-Ala溶于水中
2.将PartB加至Part A,并加热至80-85℃,直到完全溶解
3.将Part C加至PartA与PartB的混合物中,直到完全澄清并确认没有颗粒
4.在缓慢搅拌中冷却至60℃
5.添加PartD至上述混合物中,并充分搅拌
实施例7.美白精华露

外观:透明凝胶状;
pH值(25℃):4.10;
黏度(S63/60rpm/30Sec/25℃):182cPs;
流程:
1.将黄原胶(Xanthan Gum)加入水中,并充分混合
2.将Part B的成分依序加入,并充分搅拌混合
3.分别预先混合Part C与Part D
4.在搅拌状态中将Part C与Part D加入Part A/B
实施例8.美白淡斑配方

外观:白色乳霜状;
pH值(25℃):4.10;
黏度(S63/60rpm/30Sec/25℃):80,383cP;
流程:
1.预混合Part B,D,与E后,将Part C加至上述混合物,并充分混合
2.将Part B/C加热至75℃,然后将Part D加入Part B/C并充分搅拌
3.加热Part A至75℃,然后将Part B/C/D加入Part A
4.冷却至40℃,加入Part E与Part F,并充分搅拌
针对上述美白淡斑配方进一步实验其稳定性,实验结果如下。
批号(Batch No.)20130109制定日期(Formulation date)2013/01/09预期重量(Expected weight)1500g补给水比例(Additional water percentage)3%最后重量(Final weight)1472.27g


实施例9.爽肤水

外观:透明液体;
pH值(25℃):4.04;
流程:
1.分别预混合Part A,Part B,与Part C
2.将Part B与part C加至Part A,并充分混合
实施例10.美白化妆水


外观:白色乳液状;
pH值(25℃):4.57;
流程:
1. 预混合Part B 与Part C,将Part C加入Part B,并充分混合
2. 将Part A与Part B/C分别加热至75℃,然后将Part B/C加入Part A并充分搅拌
3. 将Part D的成分依序加入,并充分搅拌
4. 冷却至40℃,然后一边搅拌一边加入Part E与Part F.
实施例11. 防晒剂


流程:
1.加热Part A至溶解,然后将Part B加入Part A,并将Part A/B加热至80℃
2.将Part C加入Part A/B,并充分搅拌
3.预混合Part D,并将Part D加热至80℃
4.维持温度不变,以11000rpm速率的均质机充分混合Part A/B/C
5.将Part D加入,并以均质机充分混合,直到混合物变得光滑且均匀
6.停止搅拌并降温至40℃,并将Part E与Part F加入,并搅拌均匀
实施例12.美白BB霜

外观:微黄乳霜状;
在水相中的pH值(25℃)
黏度(S63/60rpm/30Sec/25℃):cPs;
流程:
1.预混合Part A直到匀相
2.将Part B加入Part A,并充分搅拌
3.预混合Part C
4.一边搅拌一边慢慢地将Part C滴入Part A/B.
综上所述,本说明书揭露一种以甘胺酸衍生物来抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物。根据本发明,上述甘胺酸衍生物可以有效地抑制发炎反应。上述甘胺酸衍生物同时可呈现出减少黑素亲和素表现的效果。所以,在根据本发明的一个应用方式中,上述甘胺酸衍生物可借由减少黑素亲和素表现来降低黑色素传递,进而达到皮肤美白的效果。上述的组合物包含上述的甘胺酸衍生物,且可呈现出减少黑素亲和素的表现,与抑制发炎反应等效果。上述的组合物可用于局部美妆品或药用配方,例如,做为皮肤护理的配方,或功能性的配方。
显然地,依照上面体系中的描述,本发明可能有许多的修正与差异。因此需要在其附加的权利要求项的范围内加以理解,除了上述详细的描述外,本发明还可以广泛地在其他的体系中施行。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明做任何形式上的限制,虽然本发明已以较佳实施例揭露如上,然而并非用以限定本发明,任何熟悉本专业的技术人员,在不脱离本发明技术方案范围内,当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例,但凡是未脱离本发明技术方案的内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。

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1、10申请公布号CN104107146A43申请公布日20141022CN104107146A21申请号201410158903222申请日2014041861/813,25120130418USA61K8/44200601A61K8/42200601A61K8/64200601A61K31/197200601A61K38/05200601A61Q19/02200601A61Q19/10200601A61P17/00200601A61P29/0020060171申请人新钰生技股份有限公司地址中国台湾台北市内湖区瑞光路360号6楼72发明人王思晴吴沛宣姚隽仪徐乃璇74专利代理机构北京中原华和知识产。

2、权代理有限责任公司11019代理人寿宁张华辉54发明名称以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物57摘要本发明是有关于一种以甘胺酸衍生物来抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物。上述甘胺酸衍生物不仅可有效地抑制皮肤的发炎反应,更可有效地减少黑素亲和素的表现。上述组合物包含上述的甘胺酸衍生物,且可呈现出抑制发炎反应,与有效减少黑素亲和素的表现等效果。上述的组合物可应用于外用化妆品,或是作为皮肤护理或功能性的药用配方。30优先权数据51INTCL权利要求书3页说明书30页附图4页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书3页说明书30页附图4页10申请公布号。

3、CN104107146ACN104107146A1/3页21一种减少黑素亲和素表现的方法,其特征在于其包含将甘胺酸衍生物应用于标的区域,其中上述甘胺酸衍生物具有减少黑素亲和素表现的功能,且上述甘胺酸衍生物具有以下所示的化学式其中,R1是C1C4的烷基,R2是氢原子或甲基,以及N是16的整数。2根据权利要求1所述的减少黑素亲和素表现的方法,其特征在于其中该甘胺酸衍生物是32乙酰胺基乙酰胺基丙酸,其化学式如下3根据权利要求1所述的减少黑素亲和素表现的方法,其特征在于其中该甘胺酸衍生物是42乙酰胺基乙酰胺基丁酸,其化学式如下4根据权利要求1所述的减少黑素亲和素表现的方法,其特征在于其中该甘胺酸衍生物。

4、是2乙酰胺基乙酰基甲基胺基乙酸,其化学式如下5一种减少黑素亲和素表现的组合物,其特征在于包含添加有重量比为00510WT的甘胺酸衍生物,其中上述甘胺酸衍生物具有减少黑素亲和素表现的功能,其中上述甘胺酸衍生物具有以下所示的化学式权利要求书CN104107146A2/3页3其中,R1是C1C4的烷基,R2是氢原子或甲基,以及N是16的整数。6根据权利要求5所述的减少黑素亲和素表现的组合物,其特征在于其中该甘胺酸衍生物是32乙酰胺基乙酰胺基丙酸,其化学式如下7根据权利要求5所述的减少黑素亲和素表现的组合物,其特征在于其中该甘胺酸衍生物是42乙酰胺基乙酰胺基丁酸,其化学式如下8根据权利要求5所述的减少。

5、黑素亲和素表现的组合物,其特征在于其中该甘胺酸衍生物是2乙酰胺基乙酰基甲基胺基乙酸,其化学式如下9一种抑制发炎的方法,其特征在于其包含将甘胺酸衍生物应用于标的区域,其中上述甘胺酸衍生物具有抑制发炎的功能,且上述甘胺酸衍生物具有以下所示的化学式其中,R1是C1C4的烷基,R2是氢原子或甲基,以及N是16的整数。10根据权利要求9所述的抑制发炎的方法,其特征在于其中该甘胺酸衍生物是32乙酰胺基乙酰胺基丙酸,其化学式如下权利要求书CN104107146A3/3页411根据权利要求9所述的抑制发炎的方法,其特征在于其中该甘胺酸衍生物是42乙酰胺基乙酰胺基丁酸,其化学式如下12根据权利要求9所述的抑制发。

6、炎的方法,其特征在于其中该甘胺酸衍生物是2乙酰胺基乙酰基甲基胺基乙酸,其化学式如下权利要求书CN104107146A1/30页5以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物技术领域0001本发明是关于一种甘胺酸衍生物,特别是关于以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物。背景技术0002就结构而言,皮肤可分成三层表皮、真皮、和皮下组织。每层有其特殊的结构与功能性。表皮是在皮肤的表面,具有大量的角质细胞。做为皮肤最外层的结构,表皮角质细胞就成了紫外线照射时最主要的吸收对象。0003适当的紫外线照射可诱导产生的皮肤维生素D。维生素D是与骨胳健康有关的营养素。但是,暴露。

7、在过量的紫外线之下可能会导致皮肤,眼睛和免疫系统发生急性或慢性健康影响。在过度紫外线照射的皮肤上,最常见的急性发炎症状是皮肤血管舒张和白细胞浸润所引起的晒伤红斑,而过度紫外线照射对皮肤造成的慢性发炎症状通常是老化。0004由于紫外线的刺激,角质形成细胞将通过产生并释放促炎介质而成为炎症的触发者,上述促炎介质例如IL1,IL6,IL8,TNF,PGE2。IL1,IL6,与TNF同时与急性炎症和慢性炎症反应都有相关。而IL8是一种急性炎症的趋化因子,因为IL8将会招来更多的促炎细胞。0005另一方面,黑素亲和素MELANOPHILIN,MLPH是一种与黑色素小体MELANOSOME的传递有关的蛋白。

8、质,主要是跟黑色素MELANIN的形成与分配有关。MLPH是与黑色素小体的传输有关的一个重要成员,主要是作为RAB27A和肌球蛋白VAMYOPSIN5A之间的联结。MLPH也可以是参与肾脏的集合管细胞的上皮钠离子NA通道的传输相关因子。此外,也有一些证据显示,雌激素受体阳性乳腺癌和MLPH的基因表现之间存在着正相关的关系。0006有鉴于此,开发一种可抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物,同时可兼具美容与药用等功能应用,是一项相当值得产业重视的课题。发明内容0007鉴于上述的发明背景中,为了符合产业上的要求,本发明提供一种以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物,上述抑。

9、制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物不仅具有极佳的抑制发炎与减少黑素亲和素表现的效果,且具有高度安全性,可应用于美妆品及药用的配方中,进而可有效提升产业竞争力。0008本发明的一个目的在于提供一种抑制发炎的方法,借由在标的区域使用具有抑制发炎功能的甘胺酸衍生物,达到抑制发炎的效果。0009本发明的另一个目的在于提供一种减少黑素亲和素表现的方法,借由在标的区域使用具有减少黑素亲和素表现功能的甘胺酸衍生物,达到在转录阶段减少黑素亲和素表现的效果。0010本发明的又一个目的在于提供一种减少黑素亲和素表现的方法,借由在标的区域说明书CN104107146A2/30页6使用具有减少黑素亲和素表现功。

10、能的甘胺酸衍生物,达到在转译阶段减少黑素亲和素表现的效果。0011本发明的又一个目的在于提供一种包含甘胺酸衍生物的组合物。上述组合物不仅可提供抑制发炎的效果,也可提供减少黑素亲和素表现的效果。上述组合物可用于局部美妆品或药用的配方,例如皮肤护理,或是功能性配方。0012根据以上所述的目的,本发明揭示了一种以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物。上述甘胺酸衍生物的化学式如下00130014上述甘胺酸衍生物不仅可抑制发炎反应,也可减少黑素亲和素表现。0015本发明同时揭露了一种抑制发炎的组合物,以及一种减少黑素亲和素表现的组合物。上述组合物中包含00510WT的甘胺酸衍生物。上。

11、述组合物可应用于皮肤护理的配方,例如,面部和/或身体清洁配方,爽肤水,保湿喷雾,面膜,血清,日霜,晚霜,眼霜,女性晕霜FEMININEHALOCREAM,身体霜,护手霜,洗手液,沐浴露,女性卫生清洁剂。更好的是,上述的抑制发炎的组合物可应用于局部美妆品或药用配方,例如皮肤护理制剂,或功能性制剂等。0016本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本发明提出的一种减少黑素亲和素表现REDUCINGMELANOPHILINEXPRESSION的方法,其包含将甘胺酸衍生物应用于标的区域,其中上述甘胺酸衍生物具有减少黑素亲和素表现的功能,且上述甘胺酸衍生物具有以下所示的化学式0017。

12、0018其中,R1是C1C4的烷基,R2是氢原子或甲基,以及N是16的整数。0019本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。0020前述的减少黑素亲和素表现的方法,其中该甘胺酸衍生物是32乙酰胺基乙酰胺基丙酸32ACETYLAMINOACETYLAMINOPROPIONICACID,其化学式如下0021说明书CN104107146A3/30页70022前述的减少黑素亲和素表现的方法,其中该甘胺酸衍生物是42乙酰胺基乙酰胺基丁酸42ACETYLAMINOACETYLAMINOBUTYRICACID,其化学式如下00230024前述的减少黑素亲和素表现的方法,其中该甘胺酸衍生物。

13、是2乙酰胺基乙酰基甲基胺基乙酸2ACETYLAMINOACETYLMETHYLAMINOACETICACID,其化学式如下00250026本发明的目的及解决其技术问题还采用以下技术方案来实现。依据本发明提出的一种减少黑素亲和素表现REDUCINGMELANOPHILINEXPRESSION的组合物,包含添加有00510WT重量比的甘胺酸衍生物,其中上述甘胺酸衍生物具有减少黑素亲和素表现的功能,其中上述甘胺酸衍生物具有以下所示的化学式00270028其中,R1是C1C4的烷基,R2是氢原子或甲基,以及N是16的整数。0029本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。0030前述。

14、的减少黑素亲和素表现的组合物,其中该甘胺酸衍生物是32乙酰胺基乙酰胺基丙酸32ACETYLAMINOACETYLAMINOPROPIONICACID,其化学式如下0031说明书CN104107146A4/30页80032前述的减少黑素亲和素表现的组合物,其中该甘胺酸衍生物是42乙酰胺基乙酰胺基丁酸42ACETYLAMINOACETYLAMINOBUTYRICACID,其化学式如下00330034前述的减少黑素亲和素表现的组合物,其中该甘胺酸衍生物是2乙酰胺基乙酰基甲基胺基乙酸2ACETYLAMINOACETYLMETHYLAMINOACETICACID,其化学式如下00350036本发明的目的。

15、及解决其技术问题另外再采用以下技术方案来实现。依据本发明提出的一种抑制发炎的方法,其包含将甘胺酸衍生物应用于标的区域,其中上述甘胺酸衍生物具有抑制发炎的功能,且上述甘胺酸衍生物具有以下所示的化学式00370038其中,R1是C1C4的烷基,R2是氢原子或甲基,以及N是16的整数。0039本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。0040前述的抑制发炎的方法,其中该甘胺酸衍生物是32乙酰胺基乙酰胺基丙酸32ACETYLAMINOACETYLAMINOPROPIONICACID,其化学式如下0041说明书CN104107146A5/30页90042前述的抑制发炎的方法,其中该甘胺。

16、酸衍生物是42乙酰胺基乙酰胺基丁酸42ACETYLAMINOACETYLAMINOBUTYRICACID,其化学式如下00430044前述的抑制发炎的方法,其中该甘胺酸衍生物是2乙酰胺基乙酰基甲基胺基乙酸2ACETYLAMINOACETYLMETHYLAMINOACETICACID,其化学式如下00450046借由上述技术方案,本发明不仅具有极佳的抑制发炎与减少黑素亲和素表现的效果,且具有高度安全性等优点。0047上述说明仅是本发明技术方案的概述,为了能够更清楚了解本发明的技术手段,而可依照说明书的内容予以实施,并且为了让本发明的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂,以下特举较佳实施例,并。

17、配合附图,详细说明如下。附图说明0048图1是以05ACGLYALA在转录阶段MRNA对MLPH的表现结果的实验数据分析图(MLPHMRNALEVEL)。0049图2是以ACGLYALA在转译阶段蛋白质对MLPH的表现结果的实验数据分析图(MLPHPROTEINLEVEL)。0050图3是以00504的ACGLYALA对小鼠的IL6分泌量的实验数据分析图(IL6PRODUCTIONONRAW2647)。0051图4是以00504的ACGLYALA对小鼠的MIP2分泌量的实验数据分析图(MIP2PRODUCTIONONRAW2647)。0052图5是以ACGLYALA投予RAW2647后的细胞存。

18、活率实验结果数据分析图说明书CN104107146A6/30页10(CELLVIABILITYONRAW2647)。0053图6是以00504的ACGLYALA对人类的IL6分泌量的实验数据分析图(IL6PRODUCTIONONNHEK)。0054图7是以00504的ACGLYALA对人类的IL8分泌量的实验数据分析图(IL8PRODUCTIONONNHEK)。0055图8是以00504的ACGLYALA应用于NHEK后的细胞存活率实验结果数据分析图(CELLVIABILITYONNHEK)。0056图9是以02的不同甘胺酸衍生物对于IL6分泌量的抑制效果比较图(IL6PRODUCTIONON。

19、NHEK02GLYCINEDERIVATIVES),其中,每种甘胺酸衍生物的实验结果,皆与02ACGLYALA15IL6生成雷同,此外,实验所使用的02甘胺酸衍生物皆不会影响细胞存活率存活率90。0057图10是以02的不同甘胺酸衍生物对于IL8分泌量的抑制效果比较图(IL8PRODUCTIONONNHEK02GLYCINEDERIVATIVES),其中,每种甘胺酸衍生物的实验结果,皆与02ACGLYALA69IL8生成雷同,此外,实验所使用的02甘胺酸衍生物皆不会影响细胞存活率存活率90。具体实施方式0058为更进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段及功效,以下结合附图及较佳实施。

20、例,对依据本发明提出的以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物其具体实施方式、结构、特征及其功效,详细说明如后。0059本发明在此所探讨的方向为一种以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物。为了能彻底地了解本发明,将在下列的描述中提出详尽的制造过程步骤或组成结构。显然地,本发明的施行并未限定于该领域的技艺者所熟习的特殊细节。另一方面,众所周知的组成或制造过程步骤并未描述于细节中,以避免造成本发明不必要的限制。本发明的较佳体系会详细描述如下,然而除了这些详细描述之外,本发明还可以广泛地施行在其他的体系中,且本发明的范围不受限定,以其之后的专利范围为准。0060。

21、本发明的一个实施例揭露一种以甘胺酸衍生物减少黑素亲和素表现的方法。上述减少黑素亲和素表现的方法包含将甘胺酸衍生物应用于目标区域的步骤。上述甘胺酸衍生物具有减少黑素亲和素表现的功能。在根据本实施例的一个较佳实施例中,上述的目标区域可以是细胞。在根据本实施例的另一个较佳实施例中,上述的目标区域可以是哺乳动物的皮肤。上述甘胺酸衍生物的结构可以是如下的化学式00610062上述化学式中,R1可以是C1C4的烷基,R2可以是氢原子或甲基,以及N可以是16的整数。说明书CN104107146A107/30页110063在根据本实施例的一个较佳实施例中,上述甘胺酸衍生物可以是32乙酰胺基乙酰胺基丙酸32AC。

22、ETYLAMINOACETYLAMINOPROPIONICACID或ACETYLGLYCINEALANINE,以下简称ACGLYALA。上述甘胺酸衍生物ACGLYALA的化学式如下00640065在根据本实施例的另一个较佳实施例中,上述甘胺酸衍生物可以是42乙酰胺基乙酰胺基丁酸42ACETYLAMINOACETYLAMINOBUTYRICACID或ACETYLGLYCINEAMINOBUTYRICACID,以下简称ACGLYGABA。上述甘胺酸衍生物ACGLYGABA的化学式如下00660067在根据本实施例的另一个较佳实施例中,上述甘胺酸衍生物可以是2乙酰胺基乙酰基甲基胺基乙酸2ACETYL。

23、AMINOACETYLMETHYLAMINOACETICACID或ACETYLGLYCINESARCOSINE,以下简称ACGLYSAR。上述甘胺酸衍生物ACGLYSAR的化学式如下00680069本发明的另一个实施例揭露一种以甘胺酸衍生物抑制发炎的方法。上述抑制发炎的方法包含将甘胺酸衍生物应用于目标区域的步骤。上述甘胺酸衍生物具有抑制发炎的功能。在根据本实施例的一个较佳实施例中,上述的目标区域可以是细胞。在根据本实施例的另一个较佳实施例中,上述的目标区域可以是哺乳动物的皮肤。上述甘胺酸衍生物的结构可以是如下的化学式0070说明书CN104107146A118/30页120071上述化学式中,。

24、R1可以是C1C4的烷基,R2可以是氢原子或甲基,以及N可以是16的整数。0072在根据本实施例的一个较佳实施例中,上述甘胺酸衍生物可以是32乙酰胺基乙酰胺基丙酸32ACETYLAMINOACETYLAMINOPROPIONICACID或ACETYLGLYCINEALANINE,以下简称ACGLYALA。上述甘胺酸衍生物ACGLYALA的化学式如下00730074在根据本实施例的另一个较佳实施例中,上述甘胺酸衍生物可以是42乙酰胺基乙酰胺基丁酸42ACETYLAMINOACETYLAMINOBUTYRICACID或ACETYLGLYCINEAMINOBUTYRICACID,以下简称ACGLYG。

25、ABA。上述甘胺酸衍生物ACGLYGABA的化学式如下00750076在根据本实施例的另一个较佳实施例中,上述甘胺酸衍生物可以是2乙酰胺基乙酰基甲基胺基乙酸2ACETYLAMINOACETYLMETHYLAMINOACETICACID或ACETYLGLYCINESARCOSINE,以下简称ACGLYSAR。上述甘胺酸衍生物ACGLYSAR的化学式如下00770078以下将叙明根据本说明书的以甘胺酸衍生物抑制发炎与减少黑素亲和素表现的说明书CN104107146A129/30页13方法及其组合物的较佳实施例。然而,本说明书的范围应以其后的专利要求的保护范围为准,而不应以下列实施实施例为限。007。

26、9实施例1在转录阶段TRANSCRIPTIONALLEVEL对于减少黑素亲和素表现的实验在本实施例中是以ACGLYALA作为实验代表,然而,本说明书的主张范围不应以此为限008011材料0081PARTA小鼠黑色素瘤细胞MURINEMELANOMACELL0082小鼠黑色素瘤细胞MURINEMELANOMACELLLINEB16F10BCRCNO600310083缓冲液冲洗RINSEBUFFER无菌的DPBS0084完全培养基COMPLETEMEDIUM含有10胎牛血清DMEMWITH10FETALBOVINESERUM0085定量PCR引物的质量控制QUALITYCONTROLOFQPCRP。

27、RIMER0086008712操作步骤0088A以无菌的DPBS冲洗汇合的B16F10细胞,然后以胰蛋白酶使细胞飘起,并进行细胞计数。0089B在每10厘米的培养皿中种入2E06个B16F10细胞。0090C让上述的B16F10细胞在37,5CO2下,培养约24小时。0091D在完全培养基中准备05的测试材料。0092E移除培养基后,分别将9ML的对照组样品与05的测试材料加至上述10CM培养皿内。0093F让上述的B16F10细胞在37,5CO2的环境下培养约1小时。0094G在培养约1小时后,移除上清液并用无菌的DPBS洗涤B16F10细胞。0095H在清洗后的标的细胞SUSPENDCEL。

28、L中添加3ML的TRZOL,并委外进行QPCR的检测委托威健生技WELGENEBIOTECHCO,LTD。009623数据分析00970098如图1所示,05的ACGLYALA可以在转录MRNA阶段呈现出对于RAB27A、MLPH、MYO5A的抑制效果。下表1是MLPHMRNA表现的实验数据。0099表1以05的ACGLYALA来抑制MLPHMRNA表现的实验数据分析0100说明书CN104107146A1310/30页140101实施例2在转译阶段TRANSLATIONALLEVEL减少黑素亲和素表现的实验在本实施例中是以ACGLYALA作为实验代表,然而,本说明书的主张范围不应以此为限01。

29、0221材料0103PARTA小鼠黑色素瘤细胞MURINEMELANOMACELL0104小鼠黑色素瘤细胞MURINEMELANOMACELLLINEB16F10BCRCNO600310105缓冲液冲洗RINSEBUFFER无菌的DPBS0106完全培养基COMPLETEMEDIUM作为负控制组含有10胎牛血清DMEMWITH10FETALBOVINESERUM0107测试培养基TESTINGMEDIUM,作为正控制组在完全培养基中加入20M的毛喉素FORSKOLIN,FSK0108使用抗体0109011022操作步骤0111A以无菌的DPBS冲洗B16F10细胞,然后以胰蛋白酶使细胞飘起,并。

30、进行细胞计数。0112B在每个6CM的培养皿中植入2E06个B16F10细胞。0113C让上述的B16F10细胞在37,5CO2下,培养约24小时。0114D在测试培养基中准备05/025/0125的测试材料。0115E移除培养基后,将3ML的对照组样品与测试材料加至上述6CM培养皿内的B16F10细胞。0116F让上述的B16F10细胞在37,5CO2的环境下培养约48小时。0117G在培养约48小时后,移除上清液并用无菌的DPBS洗涤B16F10细胞。0118H以西方墨点法WESTERNBLOT来检测MLPH蛋白质表现西方墨点法条件如下0119载入蛋白质数量40MG/WELL0120以半干。

31、转印装置SEMIDRYTRANSFERAPPARATUS进行蛋白质转印0121使用一级抗体稀释比例1250在4以一个晚上的时间进行免疫印迹IMMUNOBLOT0122使用二级抗体稀释比例15000在室温进行培养0123以ECL系统进行检测说明书CN104107146A1411/30页150124以IMAGEJ的免费软件来测定蛋白表现的相对定量。使用肌动蛋白ACTIN作为校正的控制组。0125数据分析01260127如图2所示,ACGLYALA可以在转译蛋白质阶段呈现出对于MLPH的抑制效果。下表2是MLPH蛋白质表现的实验数据。0128表2以ACGLYALA来抑制MLPH蛋白质表现的剂量依赖性。

32、的实验数据分析01290130实施例3皮肤美白测试INVIVOSKINTEST在本实施例中是以ACGLYALA作为实验代表,然而,本说明书的主张范围不应以此为限0131在本实施例中的在体内的皮肤测试(INVIVOSKINTEST),是委由AMALABORATORIESUSA执行。其中皮肤色泽变化SKINCOLORCHANGES是以美能达较窄的颜色的计算机系统(MINOLTACHROMAMETERCOLORCOMPUTERSYSTEM)进行评估,老年斑(AGESPOT)变化PHOTOGRAPHY是以逆向工程的照片(REVERSEPHOTOENGINEERING)影像定量分析进行评估。0132在皮。

33、肤色泽变化方面,受试者为10位年龄2548岁的女性,其中9位为白人,1位为亚洲人。受试者在受试前BASELINE,使用后14、28、56天以美能达较窄的颜色的计算机系统(MINOLTACHROMAMETERCOLORCOMPUTERSYSTEM)进行色泽变化评估测试。而皮肤色泽评估所使用的样品为02ACGLYALA。皮肤色泽变化L值测试结果如下表3A。0133表3A01340135统计显著(STATISTICALLYSIGNICANT)说明书CN104107146A1512/30页160136在AGESPOT变化方面,受试者为10位年龄3849岁的女性,其中4位为白人,1位为亚洲人,受试者在受。

34、试前BASELINE,使用后14、28、56天进行AGESPOT变化评估测试,利用高解析度数位相机拍摄,再以REVERSEPHOTOENGINEERING进行AGESPOT影像定量分析。AGESPOT变化测试结果如下表3B。0137表3B01380139统计显著(STATISTICALLYSIGNICANT)0140由本实施例的测试结果显示,使用含有02ACGLYALA的产品,可显著增加皮肤的L值,即表示可有效亮白肌肤色泽。此外,由影像系统评估AGESPOT变化,亦可发现使用含有02ACGLYALA的产品后,AGESPOT影像定量显著减少。综合以上结果,证明ACGLYALA具有美白效果。014。

35、1实施例4抑制发炎的实验在本实施例中是以ACGLYALA作为实验代表,然而,本说明书的主张范围不应以此为限014241材料0143PARTA小鼠巨噬细胞MURINEMACROPHAGECELL0144小鼠巨噬细胞MURINEMACROPHAGECELLLINERAW2647BCRCNO600010145缓冲液冲洗RINSEBUFFER无菌的DPBS0146完全培养基COMPLETEMEDIUM作为负控制组含有10胎牛血清DMEMWITH10FETALBOVINESERUM0147测试培养基TESTINGMEDIUM,作为正控制组在完全培养基中加入100NG/ML的LPS与10NG/ML的IFN。

36、R0148测试装置ELISA试剂盒0149项目品牌CATNO小鼠IL6QUANTIKINEELISA试剂盒R0237PH值254100238黏度S63/60RPM/30SEC/25182CPS0239流程02401将黄原胶(XANTHANGUM)加入水中,并充分混合02412将PARTB的成分依序加入,并充分搅拌混合02423分别预先混合PARTC与PARTD02434在搅拌状态中将PARTC与PARTD加入PARTA/B0244实施例8美白淡斑配方说明书CN104107146A2522/30页2602450246外观白色乳霜状0247PH值25410说明书CN104107146A2623/3。

37、0页270248黏度S63/60RPM/30SEC/2580,383CP0249流程02501预混合PARTB,D,与E后,将PARTC加至上述混合物,并充分混合02512将PARTB/C加热至75,然后将PARTD加入PARTB/C并充分搅拌02523加热PARTA至75,然后将PARTB/C/D加入PARTA02534冷却至40,加入PARTE与PARTF,并充分搅拌0254针对上述美白淡斑配方进一步实验其稳定性,实验结果如下。0255批号(BATCHNO)20130109制定日期(FORMULATIONDATE)2013/01/09预期重量(EXPECTEDWEIGHT)1500G补给水。

38、比例(ADDITIONALWATERPERCENTAGE)3最后重量(FINALWEIGHT)147227G02560257实施例9爽肤水0258说明书CN104107146A2724/30页280259外观透明液体0260PH值254040261流程02621分别预混合PARTA,PARTB,与PARTC02632将PARTB与PARTC加至PARTA,并充分混合0264实施例10美白化妆水0265说明书CN104107146A2825/30页290266说明书CN104107146A2926/30页300267外观白色乳液状0268PH值254570269流程02701预混合PARTB与P。

39、ARTC,将PARTC加入PARTB,并充分混合02712将PARTA与PARTB/C分别加热至75,然后将PARTB/C加入PARTA并充分搅拌02723将PARTD的成分依序加入,并充分搅拌02734冷却至40,然后一边搅拌一边加入PARTE与PARTF0274实施例11防晒剂02750276说明书CN104107146A3027/30页310277流程02781加热PARTA至溶解,然后将PARTB加入PARTA,并将PARTA/B加热至8002792将PARTC加入PARTA/B,并充分搅拌说明书CN104107146A3128/30页3202803预混合PARTD,并将PARTD加热。

40、至8002814维持温度不变,以11000RPM速率的均质机充分混合PARTA/B/C02825将PARTD加入,并以均质机充分混合,直到混合物变得光滑且均匀02836停止搅拌并降温至40,并将PARTE与PARTF加入,并搅拌均匀0284实施例12美白BB霜0285说明书CN104107146A3229/30页330286外观微黄乳霜状0287在水相中的PH值250288黏度S63/60RPM/30SEC/25CPS说明书CN104107146A3330/30页340289流程02901预混合PARTA直到匀相02912将PARTB加入PARTA,并充分搅拌02923预混合PARTC0293。

41、4一边搅拌一边慢慢地将PARTC滴入PARTA/B0294综上所述,本说明书揭露一种以甘胺酸衍生物来抑制发炎与减少黑素亲和素表现的方法及其组合物。根据本发明,上述甘胺酸衍生物可以有效地抑制发炎反应。上述甘胺酸衍生物同时可呈现出减少黑素亲和素表现的效果。所以,在根据本发明的一个应用方式中,上述甘胺酸衍生物可借由减少黑素亲和素表现来降低黑色素传递,进而达到皮肤美白的效果。上述的组合物包含上述的甘胺酸衍生物,且可呈现出减少黑素亲和素的表现,与抑制发炎反应等效果。上述的组合物可用于局部美妆品或药用配方,例如,做为皮肤护理的配方,或功能性的配方。0295显然地,依照上面体系中的描述,本发明可能有许多的修。

42、正与差异。因此需要在其附加的权利要求项的范围内加以理解,除了上述详细的描述外,本发明还可以广泛地在其他的体系中施行。0296以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明做任何形式上的限制,虽然本发明已以较佳实施例揭露如上,然而并非用以限定本发明,任何熟悉本专业的技术人员,在不脱离本发明技术方案范围内,当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例,但凡是未脱离本发明技术方案的内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。说明书CN104107146A341/4页35图1图2说明书附图CN104107146A352/4页36图3图4图5说明书附图CN104107146A363/4页37图6图7图8说明书附图CN104107146A374/4页38图9图10说明书附图CN104107146A38。

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