一种具有抗癌作用的中药组合物及其制备方法和用途.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201310099968.X

申请日:

2013.03.26

公开号:

CN104069272A

公开日:

2014.10.01

当前法律状态:

实审

有效性:

审中

法律详情:

实质审查的生效IPC(主分类):A61K 36/88申请日:20130326|||公开

IPC分类号:

A61K36/88; A61P35/00; A61K35/24(2006.01)N; A61K35/64(2006.01)N

主分类号:

A61K36/88

申请人:

成都地奥集团天府药业股份有限公司

发明人:

姚华; 王军; 杜军; 郭洁; 李芳

地址:

610041 四川省成都市高新区高新大道创业路26号

优先权:

专利代理机构:

北京市浩天知识产权代理事务所 11276

代理人:

刘云贵

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内容摘要

本发明提供了一种具有抗癌作用的中药组合物及其制备方法,同时还提供了该中药组合物在制备治疗癌症药物中的应用。该中药组合物由如下原料药组成:白芍1-10重量份、当归1-10重量份、大黄0.5-5重量份、虻虫1-10重量份、五灵脂1-10重量份、蒲黄1-10重量份、吴茱萸1-10重量份、苏木1-10重量份、艾叶1-10重量份。所述制备方法包括如下步骤:1)当归水蒸气蒸馏提取,收集挥发油与蒸馏液;2)步骤1水蒸气蒸馏提取剩余的药渣与其余原药材采用与水互溶的有机溶剂提取,提取液浓缩得清膏;以及3)步骤2的清膏与步骤1的挥发油与蒸馏液混合。本发明中药组合物与对照药物相比,在减少药味、节约资源的条件下,相同剂量的本发明药物对Hela细胞的抑制率均高于对照药物。

权利要求书

1.  一种具有抗癌作用的中药组合物,其特征在于该中药组合物由如下原料药组成:
白芍1-10重量份、当归1-10重量份、大黄0.5-5重量份、虻虫1-10重量份、五灵脂1-10重量份、蒲黄1-10重量份、吴茱萸1-10重量份、苏木1-10重量份、艾叶1-10重量份。

2.
  如权利要求1所述的中药组合物,其特征在于该中药组合物由如下原料药组成:
白芍3-9重量份、当归3-9重量份、大黄1-4.5重量份、虻虫3-9重量份、五灵脂3-9重量份、蒲黄3-9重量份、吴茱萸3-9重量份、苏木3-9重量份、艾叶3-9重量份;
或,白芍4-8重量份、当归4-8重量份、大黄1.5-4重量份、虻虫4-8重量份、五灵脂4-8重量份、蒲黄4-8重量份、吴茱萸4-8重量份、苏木4-8重量份、艾叶4-8重量份;
或,白芍5-7重量份、当归5-7重量份、大黄2-3.5重量份、虻虫5-7重量份、五灵脂5-7重量份、蒲黄5-7重量份、吴茱萸5-7重量份、苏木5-7重量份、艾叶5-7重量份。

3.
  如权利要求2所述的中药组合物,其特征在于该中药组合物由如下重量比的原料药组成:
白芍6重量份、当归6重量份、大黄3重量份、虻虫6重量份、五灵脂6重量份、蒲黄6重量份、吴茱萸6重量份、苏木6重量份、艾叶6重量份;
或,白芍5.5重量份、当归6.5重量份、大黄2.5重量份、虻虫6.5重量份、五灵脂5.5重量份、蒲黄6.5重量份、吴茱萸5.5重量份、苏木6.5重量份、艾叶5.5重量份;
或,白芍6.5重量份、当归5.5重量份、大黄3重量份、虻虫5.5重量份、五灵脂6.5重量份、蒲黄5.5重量份、吴茱萸6.5重量份、苏木5.5重量份、艾叶6.5重量份。

4.
  如权利要求1-3任一所述中药组合物的制备方法,其特征在于该方法 包括如下步骤:
步骤1:当归水蒸气蒸馏提取,收集挥发油与蒸馏液;
步骤2:步骤1水蒸气蒸馏提取剩余的药渣与其余原药材采用与水互溶的有机溶剂提取,提取液浓缩得清膏;以及
步骤3:步骤2的清膏与步骤1的挥发油与蒸馏液混合,即得。

5.
  如权利要求4所述中药组合物的制备方法,其特征在于步骤2所述与水相互溶的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮中的一种或几种;所述提取方法包括煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超声提取或渗漉提取中的任意一种方式,或者不同提取方法的组合。

6.
  一种具有抗癌作用的中药组合物,其特征在于该中药组合物由如下原料组成:
白芍提取物1-10重量份、当归提取物1-10重量份、大黄提取物0.5-5重量份、虻虫提取物1-10重量份、五灵脂提取物1-10重量份、蒲黄提取物1-10重量份、吴茱萸提取物1-10重量份、苏木提取物1-10重量份、艾叶提取物1-10重量份。

7.
  如权利要求6所述的中药组合物,其特征在于该中药组合物由如下重量比的原料组成:
白芍提取物3-9重量份、当归提取物3-9重量份、大黄提取物1-4.5重量份、虻虫提取物3-9重量份、五灵脂提取物3-9重量份、蒲黄提取物3-9重量份、吴茱萸提取物3-9重量份、苏木提取物3-9重量份、艾叶提取物3-9重量份;
或,白芍提取物4-8重量份、当归提取物4-8重量份、大黄提取物1.5-4重量份、虻虫提取物4-8重量份、五灵脂提取物4-8重量份、蒲黄提取物4-8重量份、吴茱萸提取物4-8重量份、苏木提取物4-8重量份、艾叶提取物4-8重量份;
或,白芍提取物5-7重量份、当归提取物5-7重量份、大黄提取物2-3.5重量份、虻虫提取物5-7重量份、五灵脂提取物5-7重量份、蒲黄提取物5-7重量份、吴茱萸提取物5-7重量份、苏木提取物5-7重量份、艾叶提取物5-7重量份。

8.
  如权利要求7所述的中药组合物,其特征在于该中药组合物由如下重量比的原料组成:
白芍提取物6重量份、当归提取物6重量份、大黄提取物3重量份、虻虫提取物6重量份、五灵脂提取物6重量份、蒲黄提取物6重量份、吴茱萸提取物6重量份、苏木提取物6重量份、艾叶提取物6重量份;
或,白芍提取物5.5重量份、当归提取物6.5重量份、大黄提取物2.5重量份、虻虫提取物6.5重量份、五灵脂提取物5.5重量份、蒲黄提取物6.5重量份、吴茱萸提取物5.5重量份、苏木提取物6.5重量份、艾叶提取物5.5重量份;
或,白芍提取物6.5重量份、当归提取物5.5重量份、大黄提取物3重量份、虻虫提取物5.5重量份、五灵脂提取物6.5重量份、蒲黄提取物5.5重量份、吴茱萸提取物6.5重量份、苏木提取物5.5重量份、艾叶提取物6.5重量份。

9.
  如权利要求1-3、6-8任一所述的中药组合物在制备治疗癌症药物中的应用。

10.
  如权利要求1-3、6-8任一所述的中药组合物在制备治疗宫颈癌药物中的应用。

说明书

一种具有抗癌作用的中药组合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和用途,具体涉及一种具有抗癌作用的中药组合物及其制备方法和用途,属中医药技术领域
背景技术
癌症是危及人类健康的重大疾病,其致死率呈逐年上升的趋势,它的发生和发展是多因素参与、多基因改变及多阶段发展的复杂病变过程。目前对于癌症的治疗大多采用手术治疗结合放、化疗方法,但是该方法对病人的创伤大,危险性高,且费用昂贵,但疗效却并不理想。中药作为我国传统防病治病的武器,伴随着近年来逐步深入的研究与探索,在癌症治疗中越来越受到重视。研究表明,在肿瘤防治过程中,中药主要是从提高机体免疫功能、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞转移以及对化疗的减毒增效等方面发挥作用的。
本发明所述中药组合物配伍合理,既能调节气血阴阳和脏腑功能,保护骨髓造血功能,又能启动自身防御系统,提高机体免疫力,对于肿瘤的辅助治疗很有益处。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种具有抗癌作用的中药组合物。
本发明的第二个目的在于提供该组合物的制备方法。
本发明的第三个目的在于提供该组合物在制备治疗癌症药物中的应用。
本发明的第四个目的在于提供该组合物在制备治疗宫颈癌药物中的应用。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的:
一种具有抗癌作用的中药组合物,该中药组合物由如下原料药组成:
白芍1-10重量份、当归1-10重量份、大黄0.5-5重量份、虻虫1-10重量份、五灵脂1-10重量份、蒲黄1-10重量份、吴茱萸1-10重量份、苏木1-10重量份、艾叶1-10重量份。
进一步的,其原料药组成为:
白芍3-9重量份、当归3-9重量份、大黄1-4.5重量份、虻虫3-9重量份、五灵脂3-9重量份、蒲黄3-9重量份、吴茱萸3-9重量份、苏木3-9重量份、艾叶3-9重量份。
进一步的,其原料药组成为:
白芍4-8重量份、当归4-8重量份、大黄1.5-4重量份、虻虫4-8重量份、五灵脂4-8重量份、蒲黄4-8重量份、吴茱萸4-8重量份、苏木4-8重量份、艾叶4-8重量份。
进一步的,其原料药组成为:
白芍5-7重量份、当归5-7重量份、大黄2-3.5重量份、虻虫5-7重量份、五灵脂5-7重量份、蒲黄5-7重量份、吴茱萸5-7重量份、苏木5-7重量份、艾叶5-7重量份。
更进一步的,其原料药组成为:
白芍6重量份、当归6重量份、大黄3重量份、虻虫6重量份、五灵脂6重量份、蒲黄6重量份、吴茱萸6重量份、苏木6重量份、艾叶6重量份;
或,白芍5.5重量份、当归6.5重量份、大黄2.5重量份、虻虫6.5重量份、五灵脂5.5重量份、蒲黄6.5重量份、吴茱萸5.5重量份、苏木6.5重量份、艾叶5.5重量份;
或,白芍6.5重量份、当归5.5重量份、大黄3重量份、虻虫5.5重量份、五灵脂6.5重量份、蒲黄5.5重量份、吴茱萸6.5重量份、苏木5.5重量份、艾叶6.5重量份。
本发明中药组合物可按常规工艺制备成临床可接受的颗粒、片剂、胶囊、滴丸、口服液、混悬液、乳浊液、注射剂。
本发明中药组合物的制备方法包括如下步骤:
步骤1:当归水蒸气蒸馏提取,收集挥发油与蒸馏液;
步骤2:步骤1水蒸气蒸馏提取剩余的药渣与其余原药材采用与水互溶的有机溶剂提取,提取液浓缩得清膏;
步骤3:步骤2的清膏与步骤1的挥发油与蒸馏液混合,即得。
进一步的,步骤2所述与水相互溶的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮中的 一种或几种;更进一步优选为50-90%的乙醇;更进一步优选为60-80%的乙醇;更进一步优选为70%的乙醇;
所述提取方法包括回流提取、浸泡提取、超声提取或渗漉提取中的任意一种方式,或者不同提取方法的组合。
上述制备方法步骤2还可以采用水提醇沉法处理,所述醇沉浓度为50-90%;进一步的,所述醇沉浓度为60-80%;更进一步的所述醇沉浓度为70%。
为使上述剂型能够实现,需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料,例如:填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括:淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等;崩解剂包括:淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等;润滑剂包括:硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等;助悬剂包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等;粘合剂包括:淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等;甜味剂包括:糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等;矫味剂包括:甜味剂及各种香精;防腐剂包括:尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等;基质包括:PEG6000,PEG4000,虫蜡等。为使上述剂型能够实现中药药剂学,需在制备这些剂型时加入药学可接受的其它辅料(范碧亭《中药药剂学》,上海科学出版社1997年12月第1版中各剂型记载的辅料)。
本发明所述中药组合物除了以白芍、当归、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶原药材投料的形式外,还可以采用以白芍、当归、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶提取物(有效部位)投料的形式,因此本发明进一步公开了一种具有抗癌作用的中药组合物:
一种具有抗癌作用的中药组合物,该中药组合物由如下原料药组成:
白芍提取物1-10重量份、当归提取物1-10重量份、大黄提取物0.5-5重量份、虻虫提取物1-10重量份、五灵脂提取物1-10重量份、蒲黄提取物1-10重量份、吴茱萸提取物1-10重量份、苏木提取物1-10重量份、艾叶提取物1-10重量份。
进一步的,其原料药组成为:
白芍提取物3-9重量份、当归提取物3-9重量份、大黄提取物1-4.5重量份、虻虫提取物3-9重量份、五灵脂提取物3-9重量份、蒲黄提取物3-9重量份、吴茱萸提取物3-9重量份、苏木提取物3-9重量份、艾叶提取物3-9重量份。
进一步的,其原料药组成为:
白芍提取物4-8重量份、当归提取物4-8重量份、大黄提取物1.5-4重量份、虻虫提取物4-8重量份、五灵脂提取物4-8重量份、蒲黄提取物4-8重量份、吴茱萸提取物4-8重量份、苏木提取物4-8重量份、艾叶提取物4-8重量份。
进一步的,其原料药组成为:
白芍提取物5-7重量份、当归提取物5-7重量份、大黄提取物2-3.5重量份、虻虫提取物5-7重量份、五灵脂提取物5-7重量份、蒲黄提取物5-7重量份、吴茱萸提取物5-7重量份、苏木提取物5-7重量份、艾叶提取物5-7重量份。
更进一步的,其原料药组成为:
白芍提取物6重量份、当归提取物6重量份、大黄提取物3重量份、虻虫提取物6重量份、五灵脂提取物6重量份、蒲黄提取物6重量份、吴茱萸提取物6重量份、苏木提取物6重量份、艾叶提取物6重量份;
或,白芍提取物5.5重量份、当归提取物6.5重量份、大黄提取物2.5重量份、虻虫提取物6.5重量份、五灵脂提取物5.5重量份、蒲黄提取物6.5重量份、吴茱萸提取物5.5重量份、苏木提取物6.5重量份、艾叶提取物5.5重量份;
或,白芍提取物6.5重量份、当归提取物5.5重量份、大黄提取物3重量份、虻虫提取物5.5重量份、五灵脂提取物6.5重量份、蒲黄提取物5.5重量份、吴茱萸提取物6.5重量份、苏木提取物5.5重量份、艾叶提取物6.5重量份。
上述当归提取物采用如下方法制备:当归经水蒸汽蒸馏得到的挥发油、蒸馏液以及药渣;药渣进一步以与水互溶的有机溶剂提取;将挥发油、蒸馏液和有机溶剂提取物混合即得当归提取物。
上述白芍提取物、当归提取物、大黄提取物、虻虫提取物、五灵脂提取物、蒲黄提取物、吴茱萸提取物、苏木提取物、艾叶提取物分别为白芍、当归、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶以与水相互溶的有机溶剂提取得到的提取物;或,经水提醇沉处理后得到的提取物。
进一步的,所述与水相互溶的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮中的一种或几种;更进一步优选为50-90%的乙醇;更进一步优选为60-80%的乙醇;更进一步优选为70%的乙醇;
所用的提取方法包括回流提取、浸泡提取、超声提取或渗漉提取中的任意一种方式,或者不同提取方法的组合。
进一步的,所述醇沉浓度为50-90%;进一步优选醇沉浓度为60-80%;更进一步的所述醇沉浓度为70%。
本发明所述水提醇沉法是指在中药水提浓缩液中,加入乙醇使达到规定的含醇量(即醇沉浓度),某些成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀,滤过,取乙醇溶液,回收乙醇得提取物,使水提液得以精制的方法。
实验结果表明,本发明中药组合物对Hela细胞均有明显抑制作用,相当于生药30克、10克、3克剂量组抑制率分别为99.9%、99.9%、29.82%。与对照药物相比,本发明中药组合物在减少药味、节约资源的条件下,抗癌效果却有所提高,相同剂量的实验药物对Hela细胞的抑制率均高于对照药物。
效果实验例
实验例1本发明组合物对Hela细胞增殖的影响
1材料
人宫颈癌Hela细胞由天津市肿瘤研究所中心实验室惠赠;RPMI-1640培养基,美国GIBCO公司产品;
实验药物:由本发明实施例1制备的口服液,干燥,粉碎成粉,用DMEM高糖培养基配成相应浓度的试药并过滤除菌;
对照药物:
组方:益母草140g、红花17.5g、花椒(炭)17.5g、水蛭(制)17.5g、当归35g、苏木17.5g、三棱(醋炙)17.5g、两头尖17.5g、川芎17.5g、降香17.5g、 香附(醋炙)17.5g、人参52.5g、高良姜17.5g、姜黄10.5g、没药(醋炙)17.5g、苦杏仁(炒)26.25g、大黄70g、紫苏子17.5g、小茴香(盐炒)26.25g、桃仁26.25g、五灵脂(醋炙)17.5g、虻虫17.5g、鳖甲140g、丁香21.25g、延胡索(醋炙)17.5g白芍35g、蒲黄(炭)17.5g、乳香(醋炙)17.5g、干漆(煅)17.5g、吴茱萸(甘草水炙)17.5g、阿魏17.5g、肉桂17.5g、艾叶(炙)17.5g、熟地黄35g;
制备方法:以上三十四味药材,鳖甲加水煎煮3次(加9倍水),每次3小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至适量(约180ml);当归、川芎、姜黄、高良姜、肉桂、丁香、阿魏、降香水蒸气蒸馏提取6小时(加12倍水),收集挥发油与蒸馏液适量(约50ml),药渣及其余二十五味加水煎煮三次,第一次2小时(加水12倍),第二、三次各1.5小时(分别加水10倍、8倍),合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.15(50~60℃)的清膏,加乙醇使含醇量达70%,调节pH值为7.5~8.0,静置(0~5℃)24小时,滤过,滤液回收乙醇,加水至相对密度为1.06(50~60℃)的清膏,再加入鳖甲煎液,煮沸20分钟,放冷,加挥发油与蒸馏液,干燥,粉碎成粉,用DMEM高糖培养基配成相应浓度的试药并过滤除菌。
2实验方法
2.1台盼蓝拒染法检测本发明组合物对Hela细胞增殖的抑制作用
Hela细胞在5%CO2孵箱中培养,培养基为含10%灭活小牛血清的RPMI-l640,含1%双抗(青霉素和链霉素)。每2~3天传代一次,取对数生长期细胞用于实验。24孔板每孔接种5000/m1个Hela细胞接种后24小时加药培养,按照以下式换算体外培养所加药物浓度:C(μg/ml)=5D(mg/Kg/d);C为体外实验所需浓度,D为临床用药浓度。实验药物和对照药物分别设置相当于生药30g,10g,3g三个剂量组分别作用于Hela细胞,另设空白对照组,96小时后通过台盼蓝拒染法检测其对细胞增殖的影响。
2.2流式细胞术检测本发明组合物对Hela细胞细胞凋亡的影响
取对数生长期的Hela细胞,0.25%胰酶消化后,收集细胞。调整细胞浓度为1×105/孔接种于6孔培养板中,继续培养24h,待细胞贴壁后,换液加药,设实验药物和对照药物分别相当于生药60g,30g剂量组及空白对照组。各实验组对应加入占培基体积10%的各浓度的含药血清,空白对照组加入等体积 培养液,继续培养96h后收集细胞,每组细胞数>1×106个。
用0.25%胰酶消化细胞,1000rpm离心5分钟,PBS溶液洗涤2次,弃去上清,加Buffer结合缓冲液200μl,先加入FITC标记的Annexin-V染液10μl,再加入加PI染液5μl,室温下避光孵育15分钟,加入Buffer结合缓冲液300μl,混匀,上机检测细胞凋亡率。在Cellquest软件下获取信息,并在此软件下分析。
3实验结果
3.1本发明组合物对Hela细胞增殖的抑制作用
台盼蓝计数法检测不同实验组作用于Hela细胞系96h后的细胞抑制率。结果见表1。
表1本发明药物对Hela细胞增殖的影响

由表1可知,对照药物相当于生药30克剂量时对Hela细胞的增殖有抑制作用,抑制率可达到99.9%;实验组相当于生药30克,10克,3克对Hela细胞均有明显抑制作用,抑制率分别为99.9%、99.9%、29.82。
结果表明,与对照药物相比,本发明中药组合物在减少药味、节约资源的条件下,抗癌效果却有所提高,相同剂量的实验药物对Hela细胞的抑制率均高于对照药物。
3.2本发明组合物对Hela细胞细胞凋亡的影响
Hela细胞经处理96h后,流式细胞仪测得细胞凋亡率,结果见表2。
表2本发明药物对Hela细胞细胞凋亡的影响

 对照组1对照组2实验组1实验组2空白对照组相当生药量/g30103010 凋亡率48h1.60±0.21.33±0.18**7.60±0.261.53±0.31.26±0.18

**P<0.01
结果显示实验药物与空白对照组比较,能协同诱导Hela细胞的凋亡,差异有统计学意义(P<0.01)。
具体实施方式
实施例1口服液
处方原料药组成:白芍6g、当归6g、大黄3g、虻虫6g、五灵脂6g、蒲黄6g、吴茱萸6g、苏木6g、艾叶6g;
取处方量的原料药,当归水蒸气蒸馏提取6小时(加12倍水),收集挥发油与蒸馏液适量(约50ml),药渣及其余八味加水煎煮三次,第一次2小时(加水12倍),第二、三次各1.5小时(分别加水10倍、8倍),合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.15(50~60℃)的清膏,加乙醇使含醇量达70%,调节pH值为7.5~8.0,静置(0~5℃)24小时,滤过,滤液回收乙醇,加水至相对密度为1.06(50~60℃)的清膏,再加入挥发油与蒸馏液及聚山梨酯80、甜蜜素,加水搅拌使溶解,静置(0~5℃)24~48小时,滤过,灌封,灭菌(105℃,60min),即得。
实施例2片剂
处方原料药组成:白芍5g、当归7g、大黄2g、虻虫7g、五灵脂5g、蒲黄7g、吴茱萸5g、苏木7g、艾叶5g;
取处方量的原料药,当归水蒸气蒸馏提取5小时,收集挥发油与蒸馏液,药渣及其余八味加5倍量70%乙醇回流提取2次,每次1.5小时;合并提取液,滤过,回收乙醇并浓缩;浓缩液加入挥发油与蒸馏液,减压干燥,粉碎成细粉,加入常规辅料,混匀;干压制粒,压片,即得。
实施例3胶囊剂
处方原料药组成:白芍7g、当归5g、大黄3.5g、虻虫5g、五灵脂7g、蒲黄5g、吴茱萸7g、苏木5g、艾叶7g;
取处方量的原料药,当归水蒸气蒸馏提取7小时,收集挥发油与蒸馏液,药渣及其余八味加10倍量甲醇超声提取3次,第一次40min,第2、3次各20min,合并提取液,滤过,减压浓缩;浓缩液加入挥发油与蒸馏液,减压干燥,粉碎成细粉,加入常规辅料,混匀;干压制粒,装入胶囊,即得。
实施例4颗粒剂
处方原料药组成:白芍1g、当归10g、大黄0.5g、虻虫10g、五灵脂1g、蒲黄10g、吴茱萸1g、苏木10g、艾叶1g;
取处方量的原料药,当归水蒸气蒸馏提取6小时,收集挥发油与蒸馏液适量,药渣及其余八味加8倍量水煎煮三次,每次1.5小时,滤过,合并滤液,浓缩至相对密度为1.15(50~60℃)的清膏;加乙醇使含醇量达50%,静置,滤过,滤液回收乙醇,加水至相对密度为1.06(50~60℃)的清膏,再加入挥发油与蒸馏液;80℃以下减压干燥,粉碎成细粉,加入辅料,混匀;干压制粒,即得。
实施例5口服液
处方原料药组成:白芍10g、当归1g、大黄5g、虻虫1g、五灵脂10g、蒲黄1g、吴茱萸10g、苏木1g、艾叶10g;
取处方量的原料药,当归水蒸气蒸馏提取5小时,收集挥发油与蒸馏液适量,药渣及其余八味加8倍量水煎煮三次,每次1.5小时,滤过,合并滤液,浓缩至相对密度为1.15(50~60℃)的清膏;加乙醇使含醇量达90%,静置,滤过,滤液回收乙醇,加水至相对密度为1.06(50~60℃)的清膏,再加入挥发油与蒸馏液,加入辅料,制成口服液。
实施例6滴丸
处方原料药组成:白芍4g、当归8g、大黄1.5g、虻虫8g、五灵脂4g、蒲黄8g、吴茱萸4g、苏木8g、艾叶4g;
取处方量的原料药,当归水蒸气蒸馏提取7小时,收集挥发油与蒸馏液适量,药渣及其余八味加入8倍量60%乙醇浸渍6h,渗漉24h,流速2L/h;收集渗漉液,回收乙醇并浓缩;浓缩液加入挥发油与蒸馏液,再加入制药上可接受的辅料按照本领域制剂的常规技术制成滴丸剂。
实施例7片剂
处方原料药组成:白芍8g、当归4g、大黄4g、虻虫4g、五灵脂8g、蒲黄4g、吴茱萸8g、苏木4g、艾叶8g;
取处方量的原料药,当归水蒸气蒸馏提取7小时,收集挥发油与蒸馏液适量,药渣及其余八味加5倍量80%乙醇回流提取2次,每次1.5小时;合并提取 液,滤过,回收乙醇并浓缩;浓缩液加入挥发油与蒸馏液,减压干燥,粉碎成细粉,加入常规辅料,混匀;干压制粒,压片,即得。
实施例8
处方原料组成:白芍提取物6g、当归提取物6g、大黄提取物3g、虻虫提取物6g、五灵脂提取物6g、蒲黄提取物6g、吴茱萸提取物6g、苏木提取物6g、艾叶提取物6g;
当归提取物采用如下方法制备:当归经水蒸汽蒸馏得到的挥发油、蒸馏液以及药渣;药渣进一步以与水互溶的有机溶剂提取;将挥发油、蒸馏液和有机溶剂提取物混合即得当归提取物;
白芍提取物、大黄提取物、虻虫提取物、五灵脂提取物、蒲黄提取物、吴茱萸提取物、苏木提取物、艾叶提取物分别为白芍、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶经水提醇沉制备得到的提取物,所述醇沉浓度为70%;
将上述提取物减压干燥,粉碎为细粉,混匀,加入常规辅料制成片剂。
实施例9
处方原料组成:白芍提取物5g、当归提取物7g、大黄提取物2g、虻虫提取物7g、五灵脂提取物5g、蒲黄提取物7g、吴茱萸提取物5g、苏木提取物7g、艾叶提取物5g;
当归提取物按实施例8方法制备;
白芍提取物、大黄提取物、虻虫提取物、五灵脂提取物、蒲黄提取物、吴茱萸提取物、苏木提取物、艾叶提取物分别为白芍、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶经80%乙醇回流提取制备得到的提取物;
将上述提取物减压干燥,粉碎为细粉,混匀,加入常规辅料制成胶囊剂。
实施例10
处方原料组成:白芍提取物7g、当归提取物5g、大黄提取物3.5g、虻虫提取物5g、五灵脂提取物7g、蒲黄提取物5g、吴茱萸提取物7g、苏木提取物5g、艾叶提取物7g;
当归提取物按实施例8方法制备;
白芍提取物、大黄提取物、虻虫提取物、五灵脂提取物、蒲黄提取物、吴茱萸提取物、苏木提取物、艾叶提取物分别为白芍、大黄、虻虫、五灵脂、蒲 黄、吴茱萸、苏木、艾叶经甲醇超声提取得到的提取物;将上述提取物减压干燥,粉碎成细粉,加入常规辅料,混匀;干压制粒,压片,即得。
实施例11
处方原料组成:白芍提取物3g、当归提取物9g、大黄提取物1g、虻虫提取物9g、五灵脂提取物3g、蒲黄提取物9g、吴茱萸提取物3g、苏木提取物9g、艾叶提取物3g;
当归提取物按实施例8方法制备;
白芍提取物、大黄提取物、虻虫提取物、五灵脂提取物、蒲黄提取物、吴茱萸提取物、苏木提取物、艾叶提取物提取物分别为白芍、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶经水提醇沉制备得到的提取物,所述醇沉浓度为50%;
将上述提取物减压干燥,粉碎为细粉,混匀,加入常规辅料制成片剂。
实施例12
处方原料组成:白芍提取物9g、当归提取物3g、大黄提取物4.5g、虻虫提取物3g、五灵脂提取物9g、蒲黄提取物3g、吴茱萸提取物9g、苏木提取物3g、艾叶提取物9g;
当归提取物按实施例8方法制备;
白芍提取物、大黄提取物、虻虫提取物、五灵脂提取物、蒲黄提取物、吴茱萸提取物、苏木提取物、艾叶提取物分别为白芍、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶经水提醇沉制备得到的提取物,所述醇沉浓度为90%;将上述提取物减压干燥,粉碎为细粉,混匀,加入常规辅料制成胶囊剂。

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1、10申请公布号CN104069272A43申请公布日20141001CN104069272A21申请号201310099968X22申请日20130326A61K36/88200601A61P35/00200601A61K35/24200601A61K35/6420060171申请人成都地奥集团天府药业股份有限公司地址610041四川省成都市高新区高新大道创业路26号72发明人姚华王军杜军郭洁李芳74专利代理机构北京市浩天知识产权代理事务所11276代理人刘云贵54发明名称一种具有抗癌作用的中药组合物及其制备方法和用途57摘要本发明提供了一种具有抗癌作用的中药组合物及其制备方法,同时还提供了该。

2、中药组合物在制备治疗癌症药物中的应用。该中药组合物由如下原料药组成白芍110重量份、当归110重量份、大黄055重量份、虻虫110重量份、五灵脂110重量份、蒲黄110重量份、吴茱萸110重量份、苏木110重量份、艾叶110重量份。所述制备方法包括如下步骤1)当归水蒸气蒸馏提取,收集挥发油与蒸馏液;2)步骤1水蒸气蒸馏提取剩余的药渣与其余原药材采用与水互溶的有机溶剂提取,提取液浓缩得清膏;以及3)步骤2的清膏与步骤1的挥发油与蒸馏液混合。本发明中药组合物与对照药物相比,在减少药味、节约资源的条件下,相同剂量的本发明药物对HELA细胞的抑制率均高于对照药物。51INTCL权利要求书2页说明书8页。

3、19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书8页10申请公布号CN104069272ACN104069272A1/2页21一种具有抗癌作用的中药组合物,其特征在于该中药组合物由如下原料药组成白芍110重量份、当归110重量份、大黄055重量份、虻虫110重量份、五灵脂110重量份、蒲黄110重量份、吴茱萸110重量份、苏木110重量份、艾叶110重量份。2如权利要求1所述的中药组合物,其特征在于该中药组合物由如下原料药组成白芍39重量份、当归39重量份、大黄145重量份、虻虫39重量份、五灵脂39重量份、蒲黄39重量份、吴茱萸39重量份、苏木39重量份、艾叶39重量份;。

4、或,白芍48重量份、当归48重量份、大黄154重量份、虻虫48重量份、五灵脂48重量份、蒲黄48重量份、吴茱萸48重量份、苏木48重量份、艾叶48重量份;或,白芍57重量份、当归57重量份、大黄235重量份、虻虫57重量份、五灵脂57重量份、蒲黄57重量份、吴茱萸57重量份、苏木57重量份、艾叶57重量份。3如权利要求2所述的中药组合物,其特征在于该中药组合物由如下重量比的原料药组成白芍6重量份、当归6重量份、大黄3重量份、虻虫6重量份、五灵脂6重量份、蒲黄6重量份、吴茱萸6重量份、苏木6重量份、艾叶6重量份;或,白芍55重量份、当归65重量份、大黄25重量份、虻虫65重量份、五灵脂55重量份。

5、、蒲黄65重量份、吴茱萸55重量份、苏木65重量份、艾叶55重量份;或,白芍65重量份、当归55重量份、大黄3重量份、虻虫55重量份、五灵脂65重量份、蒲黄55重量份、吴茱萸65重量份、苏木55重量份、艾叶65重量份。4如权利要求13任一所述中药组合物的制备方法,其特征在于该方法包括如下步骤步骤1当归水蒸气蒸馏提取,收集挥发油与蒸馏液;步骤2步骤1水蒸气蒸馏提取剩余的药渣与其余原药材采用与水互溶的有机溶剂提取,提取液浓缩得清膏;以及步骤3步骤2的清膏与步骤1的挥发油与蒸馏液混合,即得。5如权利要求4所述中药组合物的制备方法,其特征在于步骤2所述与水相互溶的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮中的一种或。

6、几种;所述提取方法包括煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超声提取或渗漉提取中的任意一种方式,或者不同提取方法的组合。6一种具有抗癌作用的中药组合物,其特征在于该中药组合物由如下原料组成白芍提取物110重量份、当归提取物110重量份、大黄提取物055重量份、虻虫提取物110重量份、五灵脂提取物110重量份、蒲黄提取物110重量份、吴茱萸提取物110重量份、苏木提取物110重量份、艾叶提取物110重量份。7如权利要求6所述的中药组合物,其特征在于该中药组合物由如下重量比的原料组成白芍提取物39重量份、当归提取物39重量份、大黄提取物145重量份、虻虫提取物39重量份、五灵脂提取物39重量份、蒲黄提取物。

7、39重量份、吴茱萸提取物39重量份、苏木提取物39重量份、艾叶提取物39重量份;或,白芍提取物48重量份、当归提取物48重量份、大黄提取物154重量份、虻虫提取物48重量份、五灵脂提取物48重量份、蒲黄提取物48重量份、吴茱萸提取物48重量份、苏木提取物48重量份、艾叶提取物48重量份;权利要求书CN104069272A2/2页3或,白芍提取物57重量份、当归提取物57重量份、大黄提取物235重量份、虻虫提取物57重量份、五灵脂提取物57重量份、蒲黄提取物57重量份、吴茱萸提取物57重量份、苏木提取物57重量份、艾叶提取物57重量份。8如权利要求7所述的中药组合物,其特征在于该中药组合物由如下。

8、重量比的原料组成白芍提取物6重量份、当归提取物6重量份、大黄提取物3重量份、虻虫提取物6重量份、五灵脂提取物6重量份、蒲黄提取物6重量份、吴茱萸提取物6重量份、苏木提取物6重量份、艾叶提取物6重量份;或,白芍提取物55重量份、当归提取物65重量份、大黄提取物25重量份、虻虫提取物65重量份、五灵脂提取物55重量份、蒲黄提取物65重量份、吴茱萸提取物55重量份、苏木提取物65重量份、艾叶提取物55重量份;或,白芍提取物65重量份、当归提取物55重量份、大黄提取物3重量份、虻虫提取物55重量份、五灵脂提取物65重量份、蒲黄提取物55重量份、吴茱萸提取物65重量份、苏木提取物55重量份、艾叶提取物6。

9、5重量份。9如权利要求13、68任一所述的中药组合物在制备治疗癌症药物中的应用。10如权利要求13、68任一所述的中药组合物在制备治疗宫颈癌药物中的应用。权利要求书CN104069272A1/8页4一种具有抗癌作用的中药组合物及其制备方法和用途技术领域0001本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和用途,具体涉及一种具有抗癌作用的中药组合物及其制备方法和用途,属中医药技术领域。背景技术0002癌症是危及人类健康的重大疾病,其致死率呈逐年上升的趋势,它的发生和发展是多因素参与、多基因改变及多阶段发展的复杂病变过程。目前对于癌症的治疗大多采用手术治疗结合放、化疗方法,但是该方法对病人的创伤大,危险性。

10、高,且费用昂贵,但疗效却并不理想。中药作为我国传统防病治病的武器,伴随着近年来逐步深入的研究与探索,在癌症治疗中越来越受到重视。研究表明,在肿瘤防治过程中,中药主要是从提高机体免疫功能、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞转移以及对化疗的减毒增效等方面发挥作用的。0003本发明所述中药组合物配伍合理,既能调节气血阴阳和脏腑功能,保护骨髓造血功能,又能启动自身防御系统,提高机体免疫力,对于肿瘤的辅助治疗很有益处。发明内容0004本发明的第一个目的在于提供一种具有抗癌作用的中药组合物。0005本发明的第二个目的在于提供该组合物的制备方法。0006本发明的第三个目的在于提供该组合物在制备治疗癌症药物中的应。

11、用。0007本发明的第四个目的在于提供该组合物在制备治疗宫颈癌药物中的应用。0008本发明的目的是通过如下技术方案实现的0009一种具有抗癌作用的中药组合物,该中药组合物由如下原料药组成0010白芍110重量份、当归110重量份、大黄055重量份、虻虫110重量份、五灵脂110重量份、蒲黄110重量份、吴茱萸110重量份、苏木110重量份、艾叶110重量份。0011进一步的,其原料药组成为0012白芍39重量份、当归39重量份、大黄145重量份、虻虫39重量份、五灵脂39重量份、蒲黄39重量份、吴茱萸39重量份、苏木39重量份、艾叶39重量份。0013进一步的,其原料药组成为0014白芍48重。

12、量份、当归48重量份、大黄154重量份、虻虫48重量份、五灵脂48重量份、蒲黄48重量份、吴茱萸48重量份、苏木48重量份、艾叶48重量份。0015进一步的,其原料药组成为0016白芍57重量份、当归57重量份、大黄235重量份、虻虫57重量份、五灵脂57重量份、蒲黄57重量份、吴茱萸57重量份、苏木57重量份、艾叶57重量份。0017更进一步的,其原料药组成为0018白芍6重量份、当归6重量份、大黄3重量份、虻虫6重量份、五灵脂6重量份、蒲黄6重量份、吴茱萸6重量份、苏木6重量份、艾叶6重量份;说明书CN104069272A2/8页50019或,白芍55重量份、当归65重量份、大黄25重量份。

13、、虻虫65重量份、五灵脂55重量份、蒲黄65重量份、吴茱萸55重量份、苏木65重量份、艾叶55重量份;0020或,白芍65重量份、当归55重量份、大黄3重量份、虻虫55重量份、五灵脂65重量份、蒲黄55重量份、吴茱萸65重量份、苏木55重量份、艾叶65重量份。0021本发明中药组合物可按常规工艺制备成临床可接受的颗粒、片剂、胶囊、滴丸、口服液、混悬液、乳浊液、注射剂。0022本发明中药组合物的制备方法包括如下步骤0023步骤1当归水蒸气蒸馏提取,收集挥发油与蒸馏液;0024步骤2步骤1水蒸气蒸馏提取剩余的药渣与其余原药材采用与水互溶的有机溶剂提取,提取液浓缩得清膏;0025步骤3步骤2的清膏与。

14、步骤1的挥发油与蒸馏液混合,即得。0026进一步的,步骤2所述与水相互溶的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮中的一种或几种;更进一步优选为5090的乙醇;更进一步优选为6080的乙醇;更进一步优选为70的乙醇;0027所述提取方法包括回流提取、浸泡提取、超声提取或渗漉提取中的任意一种方式,或者不同提取方法的组合。0028上述制备方法步骤2还可以采用水提醇沉法处理,所述醇沉浓度为5090;进一步的,所述醇沉浓度为6080;更进一步的所述醇沉浓度为70。0029为使上述剂型能够实现,需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料,例如填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂。

15、包括淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等;崩解剂包括淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等;润滑剂包括硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等;助悬剂包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等;粘合剂包括淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等;甜味剂包括糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等;矫味剂包括甜味剂及各种香精;防腐剂包括尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等;基质包括PEG6000,PEG4000,虫蜡等。为使上述剂型能够实现中药药。

16、剂学,需在制备这些剂型时加入药学可接受的其它辅料(范碧亭中药药剂学,上海科学出版社1997年12月第1版中各剂型记载的辅料)。0030本发明所述中药组合物除了以白芍、当归、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶原药材投料的形式外,还可以采用以白芍、当归、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶提取物(有效部位)投料的形式,因此本发明进一步公开了一种具有抗癌作用的中药组合物0031一种具有抗癌作用的中药组合物,该中药组合物由如下原料药组成0032白芍提取物110重量份、当归提取物110重量份、大黄提取物055重量份、虻虫提取物110重量份、五灵脂提取物110重量份、蒲黄提取物110重量。

17、份、吴茱萸提取物110重量份、苏木提取物110重量份、艾叶提取物110重量份。0033进一步的,其原料药组成为0034白芍提取物39重量份、当归提取物39重量份、大黄提取物145重量份、虻虫说明书CN104069272A3/8页6提取物39重量份、五灵脂提取物39重量份、蒲黄提取物39重量份、吴茱萸提取物39重量份、苏木提取物39重量份、艾叶提取物39重量份。0035进一步的,其原料药组成为0036白芍提取物48重量份、当归提取物48重量份、大黄提取物154重量份、虻虫提取物48重量份、五灵脂提取物48重量份、蒲黄提取物48重量份、吴茱萸提取物48重量份、苏木提取物48重量份、艾叶提取物48重。

18、量份。0037进一步的,其原料药组成为0038白芍提取物57重量份、当归提取物57重量份、大黄提取物235重量份、虻虫提取物57重量份、五灵脂提取物57重量份、蒲黄提取物57重量份、吴茱萸提取物57重量份、苏木提取物57重量份、艾叶提取物57重量份。0039更进一步的,其原料药组成为0040白芍提取物6重量份、当归提取物6重量份、大黄提取物3重量份、虻虫提取物6重量份、五灵脂提取物6重量份、蒲黄提取物6重量份、吴茱萸提取物6重量份、苏木提取物6重量份、艾叶提取物6重量份;0041或,白芍提取物55重量份、当归提取物65重量份、大黄提取物25重量份、虻虫提取物65重量份、五灵脂提取物55重量份、。

19、蒲黄提取物65重量份、吴茱萸提取物55重量份、苏木提取物65重量份、艾叶提取物55重量份;0042或,白芍提取物65重量份、当归提取物55重量份、大黄提取物3重量份、虻虫提取物55重量份、五灵脂提取物65重量份、蒲黄提取物55重量份、吴茱萸提取物65重量份、苏木提取物55重量份、艾叶提取物65重量份。0043上述当归提取物采用如下方法制备当归经水蒸汽蒸馏得到的挥发油、蒸馏液以及药渣;药渣进一步以与水互溶的有机溶剂提取;将挥发油、蒸馏液和有机溶剂提取物混合即得当归提取物。0044上述白芍提取物、当归提取物、大黄提取物、虻虫提取物、五灵脂提取物、蒲黄提取物、吴茱萸提取物、苏木提取物、艾叶提取物分别。

20、为白芍、当归、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶以与水相互溶的有机溶剂提取得到的提取物;或,经水提醇沉处理后得到的提取物。0045进一步的,所述与水相互溶的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮中的一种或几种;更进一步优选为5090的乙醇;更进一步优选为6080的乙醇;更进一步优选为70的乙醇;0046所用的提取方法包括回流提取、浸泡提取、超声提取或渗漉提取中的任意一种方式,或者不同提取方法的组合。0047进一步的,所述醇沉浓度为5090;进一步优选醇沉浓度为6080;更进一步的所述醇沉浓度为70。0048本发明所述水提醇沉法是指在中药水提浓缩液中,加入乙醇使达到规定的含醇量(即醇沉浓度),某。

21、些成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀,滤过,取乙醇溶液,回收乙醇得提取物,使水提液得以精制的方法。0049实验结果表明,本发明中药组合物对HELA细胞均有明显抑制作用,相当于生药30克、10克、3克剂量组抑制率分别为999、999、2982。与对照药物相比,本发明中药组说明书CN104069272A4/8页7合物在减少药味、节约资源的条件下,抗癌效果却有所提高,相同剂量的实验药物对HELA细胞的抑制率均高于对照药物。0050效果实验例0051实验例1本发明组合物对HELA细胞增殖的影响00521材料0053人宫颈癌HELA细胞由天津市肿瘤研究所中心实验室惠赠;RPMI1640培养基,美国GIBC。

22、O公司产品;0054实验药物由本发明实施例1制备的口服液,干燥,粉碎成粉,用DMEM高糖培养基配成相应浓度的试药并过滤除菌;0055对照药物0056组方益母草140G、红花175G、花椒(炭)175G、水蛭制175G、当归35G、苏木175G、三棱醋炙175G、两头尖175G、川芎175G、降香175G、香附醋炙175G、人参525G、高良姜175G、姜黄105G、没药醋炙175G、苦杏仁炒2625G、大黄70G、紫苏子175G、小茴香盐炒2625G、桃仁2625G、五灵脂醋炙175G、虻虫175G、鳖甲140G、丁香2125G、延胡索醋炙175G白芍35G、蒲黄炭175G、乳香醋炙175G、。

23、干漆煅175G、吴茱萸甘草水炙175G、阿魏175G、肉桂175G、艾叶炙175G、熟地黄35G;0057制备方法以上三十四味药材,鳖甲加水煎煮3次(加9倍水),每次3小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至适量(约180ML);当归、川芎、姜黄、高良姜、肉桂、丁香、阿魏、降香水蒸气蒸馏提取6小时(加12倍水),收集挥发油与蒸馏液适量(约50ML),药渣及其余二十五味加水煎煮三次,第一次2小时(加水12倍),第二、三次各15小时(分别加水10倍、8倍),合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为115(5060)的清膏,加乙醇使含醇量达70,调节PH值为7580,静置(05)24小时,滤过,滤液回收乙醇,加。

24、水至相对密度为106(5060)的清膏,再加入鳖甲煎液,煮沸20分钟,放冷,加挥发油与蒸馏液,干燥,粉碎成粉,用DMEM高糖培养基配成相应浓度的试药并过滤除菌。00582实验方法005921台盼蓝拒染法检测本发明组合物对HELA细胞增殖的抑制作用0060HELA细胞在5CO2孵箱中培养,培养基为含10灭活小牛血清的RPMIL640,含1双抗青霉素和链霉素。每23天传代一次,取对数生长期细胞用于实验。24孔板每孔接种5000/M1个HELA细胞接种后24小时加药培养,按照以下式换算体外培养所加药物浓度C(G/ML)5DMG/KG/D;C为体外实验所需浓度,D为临床用药浓度。实验药物和对照药物分别。

25、设置相当于生药30G,10G,3G三个剂量组分别作用于HELA细胞,另设空白对照组,96小时后通过台盼蓝拒染法检测其对细胞增殖的影响。006122流式细胞术检测本发明组合物对HELA细胞细胞凋亡的影响0062取对数生长期的HELA细胞,025胰酶消化后,收集细胞。调整细胞浓度为1105/孔接种于6孔培养板中,继续培养24H,待细胞贴壁后,换液加药,设实验药物和对照药物分别相当于生药60G,30G剂量组及空白对照组。各实验组对应加入占培基体积10的各浓度的含药血清,空白对照组加入等体积培养液,继续培养96H后收集细胞,每组细胞数1106个。说明书CN104069272A5/8页80063用025。

26、胰酶消化细胞,1000RPM离心5分钟,PBS溶液洗涤2次,弃去上清,加BUFFER结合缓冲液200L,先加入FITC标记的ANNEXINV染液10L,再加入加PI染液5L,室温下避光孵育15分钟,加入BUFFER结合缓冲液300L,混匀,上机检测细胞凋亡率。在CELLQUEST软件下获取信息,并在此软件下分析。00643实验结果006531本发明组合物对HELA细胞增殖的抑制作用0066台盼蓝计数法检测不同实验组作用于HELA细胞系96H后的细胞抑制率。结果见表1。0067表1本发明药物对HELA细胞增殖的影响00680069由表1可知,对照药物相当于生药30克剂量时对HELA细胞的增殖有抑。

27、制作用,抑制率可达到999;实验组相当于生药30克,10克,3克对HELA细胞均有明显抑制作用,抑制率分别为999、999、2982。0070结果表明,与对照药物相比,本发明中药组合物在减少药味、节约资源的条件下,抗癌效果却有所提高,相同剂量的实验药物对HELA细胞的抑制率均高于对照药物。007132本发明组合物对HELA细胞细胞凋亡的影响0072HELA细胞经处理96H后,流式细胞仪测得细胞凋亡率,结果见表2。0073表2本发明药物对HELA细胞细胞凋亡的影响0074对照组1对照组2实验组1实验组2空白对照组相当生药量/G30103010凋亡率48H160021330187600261530。

28、31260180075P0010076结果显示实验药物与空白对照组比较,能协同诱导HELA细胞的凋亡,差异有统计学意义P001。具体实施方式0077实施例1口服液0078处方原料药组成白芍6G、当归6G、大黄3G、虻虫6G、五灵脂6G、蒲黄6G、吴茱萸说明书CN104069272A6/8页96G、苏木6G、艾叶6G;0079取处方量的原料药,当归水蒸气蒸馏提取6小时(加12倍水),收集挥发油与蒸馏液适量(约50ML),药渣及其余八味加水煎煮三次,第一次2小时(加水12倍),第二、三次各15小时(分别加水10倍、8倍),合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为115(060)的清膏,加乙醇使含醇量达。

29、70,调节PH值为7580,静置(05)24小时,滤过,滤液回收乙醇,加水至相对密度为106(5060)的清膏,再加入挥发油与蒸馏液及聚山梨酯80、甜蜜素,加水搅拌使溶解,静置(05)2448小时,滤过,灌封,灭菌(105,60MIN),即得。0080实施例2片剂0081处方原料药组成白芍5G、当归7G、大黄2G、虻虫7G、五灵脂5G、蒲黄7G、吴茱萸5G、苏木7G、艾叶5G;0082取处方量的原料药,当归水蒸气蒸馏提取5小时,收集挥发油与蒸馏液,药渣及其余八味加5倍量70乙醇回流提取2次,每次15小时;合并提取液,滤过,回收乙醇并浓缩;浓缩液加入挥发油与蒸馏液,减压干燥,粉碎成细粉,加入常规。

30、辅料,混匀;干压制粒,压片,即得。0083实施例3胶囊剂0084处方原料药组成白芍7G、当归5G、大黄35G、虻虫5G、五灵脂7G、蒲黄5G、吴茱萸7G、苏木5G、艾叶7G;0085取处方量的原料药,当归水蒸气蒸馏提取7小时,收集挥发油与蒸馏液,药渣及其余八味加10倍量甲醇超声提取3次,第一次40MIN,第2、3次各20MIN,合并提取液,滤过,减压浓缩;浓缩液加入挥发油与蒸馏液,减压干燥,粉碎成细粉,加入常规辅料,混匀;干压制粒,装入胶囊,即得。0086实施例4颗粒剂0087处方原料药组成白芍1G、当归10G、大黄05G、虻虫10G、五灵脂1G、蒲黄10G、吴茱萸1G、苏木10G、艾叶1G;。

31、0088取处方量的原料药,当归水蒸气蒸馏提取6小时,收集挥发油与蒸馏液适量,药渣及其余八味加8倍量水煎煮三次,每次15小时,滤过,合并滤液,浓缩至相对密度为115(5060)的清膏;加乙醇使含醇量达50,静置,滤过,滤液回收乙醇,加水至相对密度为106(5060)的清膏,再加入挥发油与蒸馏液;80以下减压干燥,粉碎成细粉,加入辅料,混匀;干压制粒,即得。0089实施例5口服液0090处方原料药组成白芍10G、当归1G、大黄5G、虻虫1G、五灵脂10G、蒲黄1G、吴茱萸10G、苏木1G、艾叶10G;0091取处方量的原料药,当归水蒸气蒸馏提取5小时,收集挥发油与蒸馏液适量,药渣及其余八味加8倍量。

32、水煎煮三次,每次15小时,滤过,合并滤液,浓缩至相对密度为115(5060)的清膏;加乙醇使含醇量达90,静置,滤过,滤液回收乙醇,加水至相对密度为106(5060)的清膏,再加入挥发油与蒸馏液,加入辅料,制成口服液。0092实施例6滴丸0093处方原料药组成白芍4G、当归8G、大黄15G、虻虫8G、五灵脂4G、蒲黄8G、吴茱萸说明书CN104069272A7/8页104G、苏木8G、艾叶4G;0094取处方量的原料药,当归水蒸气蒸馏提取7小时,收集挥发油与蒸馏液适量,药渣及其余八味加入8倍量60乙醇浸渍6H,渗漉24H,流速2L/H;收集渗漉液,回收乙醇并浓缩;浓缩液加入挥发油与蒸馏液,再加。

33、入制药上可接受的辅料按照本领域制剂的常规技术制成滴丸剂。0095实施例7片剂0096处方原料药组成白芍8G、当归4G、大黄4G、虻虫4G、五灵脂8G、蒲黄4G、吴茱萸8G、苏木4G、艾叶8G;0097取处方量的原料药,当归水蒸气蒸馏提取7小时,收集挥发油与蒸馏液适量,药渣及其余八味加5倍量80乙醇回流提取2次,每次15小时;合并提取液,滤过,回收乙醇并浓缩;浓缩液加入挥发油与蒸馏液,减压干燥,粉碎成细粉,加入常规辅料,混匀;干压制粒,压片,即得。0098实施例80099处方原料组成白芍提取物6G、当归提取物6G、大黄提取物3G、虻虫提取物6G、五灵脂提取物6G、蒲黄提取物6G、吴茱萸提取物6G。

34、、苏木提取物6G、艾叶提取物6G;0100当归提取物采用如下方法制备当归经水蒸汽蒸馏得到的挥发油、蒸馏液以及药渣;药渣进一步以与水互溶的有机溶剂提取;将挥发油、蒸馏液和有机溶剂提取物混合即得当归提取物;0101白芍提取物、大黄提取物、虻虫提取物、五灵脂提取物、蒲黄提取物、吴茱萸提取物、苏木提取物、艾叶提取物分别为白芍、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶经水提醇沉制备得到的提取物,所述醇沉浓度为70;0102将上述提取物减压干燥,粉碎为细粉,混匀,加入常规辅料制成片剂。0103实施例90104处方原料组成白芍提取物5G、当归提取物7G、大黄提取物2G、虻虫提取物7G、五灵脂提取物5G、。

35、蒲黄提取物7G、吴茱萸提取物5G、苏木提取物7G、艾叶提取物5G;0105当归提取物按实施例8方法制备;0106白芍提取物、大黄提取物、虻虫提取物、五灵脂提取物、蒲黄提取物、吴茱萸提取物、苏木提取物、艾叶提取物分别为白芍、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶经80乙醇回流提取制备得到的提取物;0107将上述提取物减压干燥,粉碎为细粉,混匀,加入常规辅料制成胶囊剂。0108实施例100109处方原料组成白芍提取物7G、当归提取物5G、大黄提取物35G、虻虫提取物5G、五灵脂提取物7G、蒲黄提取物5G、吴茱萸提取物7G、苏木提取物5G、艾叶提取物7G;0110当归提取物按实施例8方法制备;。

36、0111白芍提取物、大黄提取物、虻虫提取物、五灵脂提取物、蒲黄提取物、吴茱萸提取物、苏木提取物、艾叶提取物分别为白芍、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶经甲醇超声提取得到的提取物;将上述提取物减压干燥,粉碎成细粉,加入常规辅料,混匀;干压制粒,压片,即得。0112实施例11说明书CN104069272A108/8页110113处方原料组成白芍提取物3G、当归提取物9G、大黄提取物1G、虻虫提取物9G、五灵脂提取物3G、蒲黄提取物9G、吴茱萸提取物3G、苏木提取物9G、艾叶提取物3G;0114当归提取物按实施例8方法制备;0115白芍提取物、大黄提取物、虻虫提取物、五灵脂提取物、蒲黄提。

37、取物、吴茱萸提取物、苏木提取物、艾叶提取物提取物分别为白芍、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶经水提醇沉制备得到的提取物,所述醇沉浓度为50;0116将上述提取物减压干燥,粉碎为细粉,混匀,加入常规辅料制成片剂。0117实施例120118处方原料组成白芍提取物9G、当归提取物3G、大黄提取物45G、虻虫提取物3G、五灵脂提取物9G、蒲黄提取物3G、吴茱萸提取物9G、苏木提取物3G、艾叶提取物9G;0119当归提取物按实施例8方法制备;0120白芍提取物、大黄提取物、虻虫提取物、五灵脂提取物、蒲黄提取物、吴茱萸提取物、苏木提取物、艾叶提取物分别为白芍、大黄、虻虫、五灵脂、蒲黄、吴茱萸、苏木、艾叶经水提醇沉制备得到的提取物,所述醇沉浓度为90;将上述提取物减压干燥,粉碎为细粉,混匀,加入常规辅料制成胶囊剂。说明书CN104069272A11。

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