辣木叶中黄酮成分的提取方法.pdf

《辣木叶中黄酮成分的提取方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《辣木叶中黄酮成分的提取方法.pdf（12页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。

1、10申请公布号CN104173393A43申请公布日20141203CN104173393A21申请号201410366619422申请日20140729A61K36/185200601A61K127/0020060171申请人四川农业大学地址625014四川省雅安市雨城区新康路46号72发明人汪开毓吉莉莉陈德芳赵玲黄小丽杨倩阳磊74专利代理机构成都高远知识产权代理事务所普通合伙51222代理人李高峡杜朗宇54发明名称辣木叶中黄酮成分的提取方法57摘要本发明提供了辣木叶中黄酮成分的提取方法，它包括如下操作步骤取辣木叶粉以5060V/V乙醇为溶剂，料液比为15060G/ML，进行微波萃取，收集提。

2、取液，即可；其中，微波功率为300400W，提取时间为610MIN。本发明还提供了该提取方法制备的提取物。本发明研究发现，以相同的辣木叶粉为样品，微波萃取的方法所得辣木叶总黄酮含量高于回流提取方法，同时大大缩短了提取时间，节约了提取时所耗的水和电，降低提取成本。51INTCL权利要求书1页说明书7页附图3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书7页附图3页10申请公布号CN104173393ACN104173393A1/1页21辣木叶中黄酮成分的提取方法，其特征在于它包括如下操作步骤取辣木叶粉以5060V/V乙醇为溶剂，料液比为15060G/ML，进行微波萃取，收。

3、集提取液，即可；其中，微波功率为300400W，提取时间为610MIN。2根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于乙醇浓度为5860V/V，料液比为15860G/ML，微波功率为390400W，提取时间为8085MIN。3根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于乙醇浓度为584560V/V，料液比为15960G/ML，微波功率为39715400W，提取时间为813850MIN。4根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于乙醇浓度为5845V/V，料液比为159G/ML，微波功率为39715W，提取时间为813MIN。5根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在微波萃取前，对辣木叶粉进行脱脂处理，。

4、具体方法如下取辣木叶粉，以石油醚或乙醚为溶剂提取，取提取后的辣木叶粉，挥干溶剂，即可。6根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于所述溶剂为石油醚。7根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于所述石油醚沸程为6090。8根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于提取方法选自索氏提取。9根据权利要求8所述的提取方法，其特征在于索氏提取时间为8H。10权利要求19任意一项所述提取方法制备的辣木叶提取物。权利要求书CN104173393A1/7页3辣木叶中黄酮成分的提取方法技术领域0001本发明涉及辣木叶中黄酮成分的提取方法。背景技术0002辣木MORIGAOLEIFERA属辣木科、辣木属，起源于印度北部。

5、的亚喜马拉雅山地带。印度和非洲国家常用于治疗糖尿病、高血压、心血管病、肥胖症等疾病。近年来，辣木在我国广东、云南、海南和四川等都有引种栽培。2012年辣木叶被批准为新资源食品，各种辣木产品开发火热，广泛应用于食品、保健品、水质净化、化妆品等领域。0003陈瑞娇等以70乙醇为提取溶剂，提取温度60，提取时间1H，提取3次，提取液中黄酮含量达到35陈瑞娇等，辣木叶总黄酮乙醇提取工艺的研究，食品研究与开发J，2007,2842931。孙鸣燕等，以70乙醇为提取溶剂，提取温度80，提取时间15H，提取次数3次，提取液中总黄酮含量达到6593孙鸣燕等，辣木叶总黄酮提取方法的优化研究，韶关学院学报J，20。

6、07,28128892。然而，发明人发现，采用回流提取的时间长，能耗成本较高。0004微波萃取是利用微波能使细胞内部的温度迅速上升，细胞内部压力增高使细胞破裂，药材内有效成分流出，并在较低的温度下溶于萃取液。该方法加热均匀，热效率较高，提取速度快。目前还未见使用微波萃取技术对辣木叶总黄酮进行提取的相关报道。发明内容0005本发明的目的在于提供一种辣木叶中黄酮成分的微波提取方法。0006具体的，本发明提供了辣木叶中黄酮成分的提取方法，它包括如下操作步骤0007取辣木叶粉以5060V/V乙醇为溶剂，料液比为15060G/ML，进行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率为300400W，提取时间。

7、为610MIN。0008本发明研究表明，各提取条件参数对提取效率有显著影响00091乙醇体积分数在5060时，提取量较大，而乙醇浓度再增加时，提取量降低。00102当提取时间约为8MIN时，总黄酮得率最高，提取时间稍短，提取不完全，而时间过长，部分黄酮类化合物可能被破坏，而导致得率下降。00113随着提取功率增加，总黄酮得率增加，功率达到约400W时最高，高于400W时则下降。在微波提取过程中，电磁波把能量直接传递到原料内部，使之瞬时加热，当提取功率过高，使辣木叶中的黄酮类化合物分解或异构化，导致总黄酮得率降低。00124料液比从130至160过程中，总黄酮得率逐渐提高，而溶剂用量再增加，总黄。

8、酮得率逐渐降低。0013进一步地，乙醇浓度为5860V/V，料液比为15860G/ML，微波功率为390400W，提取时间为8085MIN。0014更进一步地，乙醇浓度为584560V/V，料液比为15960G/ML，微波功率为39715400W，提取时间为813850MIN。说明书CN104173393A2/7页40015优选地，乙醇浓度为5845V/V，料液比为159G/ML，微波功率为39715W，提取时间为813MIN。0016在本发明的一个具体实施方式中，为了避免低极性成分对黄酮提取结果的影响因素，从而较为准确的判定提取工艺优劣，在微波萃取前对辣木叶粉选择了脱脂处理。当然，即便不使用。

9、脱脂处理，本发明优选的最佳方案，仍然最适合辣木叶黄酮的微波萃取。0017其中，脱脂处理的方法如下0018取辣木叶粉，以石油醚或乙醚为溶剂提取，取提取后的辣木叶粉，挥干溶剂，即可。0019更进一步地，所述溶剂为石油醚。0020优选地，所述石油醚沸程为6090。0021进一步地，提取方法选自索氏提取。0022优选地，索氏提取时间为8H。0023本发明还提供了上述提取方法制备的辣木叶提取物。0024本发明研究发现，以相同的辣木叶粉为样品，微波萃取的方法所得辣木叶总黄酮含量高于回流提取方法，同时大大缩短了提取时间，节约了提取时所耗的水和电，降低提取成本。附图说明0025图1乙醇浓度对辣木叶总黄酮含量的。

10、影响0026图2提取时间对辣木叶总黄酮含量的影响0027图3微波功率对辣木叶总黄酮含量的影响0028图4料液比对辣木叶总黄酮含量的影响0029图5辣木叶微波萃取响应面曲线及3D图具体实施方式0030实施例1本发明提取方法0031取辣木叶粉以5845V/V乙醇为溶剂，料液比为159G/ML，进行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率为39715W，提取时间为813MIN。0032实施例2本发明提取方法0033取辣木叶粉以60V/V乙醇为溶剂，料液比为160G/ML，进行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率为400W，提取时间为85MIN。0034实施例3本发明提取方法0035取辣木叶粉。

11、以58V/V乙醇为溶剂，料液比为158G/ML，进行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率为390W，提取时间为80MIN。0036实施例4本发明提取方法0037取辣木叶粉,以石油醚索式回流脱脂处理8H，取提取后的辣木叶粉，挥干溶剂，再以5845V/V乙醇为溶剂，料液比为159G/ML，进行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率为39715W，提取时间为813MIN。0038实施例5本发明提取方法的工艺考察00391材料与方法说明书CN104173393A3/7页5004011材料与仪器0041辣木叶粉MORIGAOLEIFERA，购自云南景洪。0042为了避免辣木叶中其他低极性成分对。

12、黄酮提取工艺考察结果的影响，本发明在工艺考察过程之前，选择对辣木叶粉进行脱脂处理，并使用同批次处理后的原料进行考察试验。0043本发明使用的辣木叶，均需要脱脂处理，可以采用中药化学或天然植物化学中常用的的脱脂方法，例如用低极性溶剂提取，所用的低极性溶剂可以是石油醚、乙醚等。本发明中主要采用石油醚进行脱脂处理，具体方法为0044取辣木叶粉，以石油醚索式回流提取8H，取提取后的辣木叶粉，挥干溶剂，即可。使用的石油醚的沸程可以是6090，也可以是3060。0045芦丁中国生物制品检定所。0046电脑微波超声波紫外光组合催化合成仪北京祥鹄科技发展有限公司XH300UL型；0047紫外可见分光光度计上海。

13、美谱达仪器有限公司，UV1100型；004812试验方法0049121标准曲线的建立0050精密称取芦丁对照品10MG，置50ML容量瓶中，用30乙醇定容至刻度，摇匀，即得02MG/ML的对照液。精密吸取对照品溶液00、10、20、30、40、50ML，分别置10ML容量瓶中，各加70乙醇至5ML，摇匀，加5亚硝酸钠05ML，摇匀，放置6MIN，加10硝酸铝05ML，摇匀，放置6MIN，再加4氢氧化钠至刻度，摇匀，放置15MIN，在510NM波长下测定吸光度，以试剂空白作参比，所得吸光值与浓度作线性回归方程。0051122回流提取辣木叶黄酮及含量测定0052方法一0053按照陈瑞娇的方法，准确。

14、称定已去脂辣木叶样品30G，加入70乙醇，液料比201，60回流提取3次，每次1H。提取液过滤，合并滤液，即得回流提取总黄酮FLAVONOIDBYREFLUXEXTRACTION,FRE。冷却至室温后，取滤液1ML，按照芦丁标准品溶液吸光值测定方法测定吸光值，测3次取平均值A1。根据标准曲线方程计算出总黄酮含量。0054方法二0055按照孙鸣燕的方法，准确称定已去脂辣木叶样品30G，加入70乙醇，液料比201，80回流提取3次，每次15H。提取液过滤，合并滤液，即得回流提取总黄酮。冷却至室温后，取滤液1ML，按照芦丁标准品溶液吸光值测定方法测定吸光值，测3次取平均值A1。根据标准曲线方程计算出。

15、总黄酮含量。0056123微波萃取辣木叶黄酮及含量测定0057准确称定已去脂辣木叶样品，按试验设计的条件加入溶剂，置微波提取仪中，仪器设定为微波功率恒定模式，超声波功率为200W，磁力搅拌。反应完成后过滤，即得微波萃取总黄酮FLAVONOIDBYMICROWAVEEXTRACTION,FME。冷却至室温后取滤液1ML，按照测芦丁标准品溶液吸光值方法测定吸光值，测3次取平均值A2。根据标准曲线方程计算出总黄酮含量。0058124辣木叶黄酮得率计算根据标准曲线，由吸光值A计算出黄酮质量浓度C，辣说明书CN104173393A4/7页6木叶总黄酮得率F则由下式计算0059F1C110V1/M1100。

16、60式1为回流提取总黄酮得率计算公式C1为黄酮质量浓度MG/ML；10为10倍；V1为滤液体积；M1为样品质量；0061F2C21050/M220062式2为微波萃取总黄酮得率计算公式C2为黄酮质量浓度MG/ML；10为10倍；50为50ML，M2为样品质量。0063125响应面法优化实验0064在单因素实验的基础上，以醇浓度、微波功率、提取时间、液料比等因素为考察变量，以总黄酮得率F为响应值，应用DESIGNEXPERT806软件，优化微波提取辣木叶总黄酮得工艺条件。实验因素与水平设计见表10065表1BOXBEHNKEN设计实验因素水平006600672结果与分析006821线性回归方程0。

17、069根据各浓度芦丁对应的吸光值，计算得到线性回归C00817A00018,相关系数R209998007022回流提取辣木叶黄酮含量0071方法一经回流后的提取液过滤，平均吸光值为0499，体积为1575ML,按照标准曲线计算得总黄酮含量为205。0072方法二经回流后的提取液过滤，平均吸光值为0375，体积为1590ML,按照标准曲线计算得总黄酮含量为172。007322单因素实验0074221乙醇浓度的影响准确称取1G辣木叶粉5份，分别加入50、60、70、80、90乙醇微波提取，微波功率200W，提取时间6MIN，液料比501，结果见图1。0075由图1可见，乙醇体积分数在5070时，提。

18、取量最大，而乙醇浓度再增加时，提取量降低。因此选择体积分数为60。0076222提取时间的影响准确称取1G辣木叶粉5份，加入60乙醇，微波功率200W，液料比501，分别提取6MIN、8MIN、10MIN、12MIN、14MIN。结果见图2。0077由图2可见，当提取时间为8MIN时，总黄酮得率最高，低于8MIN时，提取不完全，而高于8MIN时，部分黄酮类化合物可能被破坏，而导致得率下降。因此，选择提取时间为8MIN。说明书CN104173393A5/7页70078223微波功率的影响准确称取1G辣木叶粉5份，加入60乙醇，液料比501，分别于微波功率100W、200W、300W、400W、5。

19、00W，提取8MIN。结果见图3。0079由图3可见，随着提取功率增加，总黄酮得率增加，功率达到400W时最高，高于400W时则下降。在微波提取过程中，电磁波把能量直接传递到原料内部，使之瞬时加热，当提取功率过高，使黄酮类化合物分解或异构化，导致总黄酮得率降低。因此，选择提取功率为400W。0080224料液比的影响取60乙醇50ML，按照170、160、150、140、130加入辣木叶粉，微波功率400W，提取8MIN，结果见图4。0081由图4可见，当料液比为160时，总黄酮得率最高，因此选择料液比为160。008223响应面法对辣木叶总黄酮微波提取工艺参数的优化0083试验分析方案及结果。

20、见表20084表2试验方案与结果0085说明书CN104173393A6/7页80086将所得试验数据进行多元回归拟合，得到辣木叶黄酮得率Y与微波提取各因素变量的二次回归方程模型为0087Y3480087X1011X20039X30012X4005X1X20027X1X30057X1X4014X2X301X2X40006536X3X4027X12025X22029X32026X420088为了检验方程的有效性，对微波提取辣木叶总黄酮得数学模型进行方差分析，并说明书CN104173393A7/7页9对各因子的偏向回归系数进行检验，结果见表30089表3回归模型方差分析00900091注“”为差异。

21、显著P005，“”为差异高度极显著P001，“”为差异极显著P0001。0092由表3可知，模型P值00001是非常显著的，模型失拟项表示模型预测值与实际值不拟合的概率P01049是不显著的，模型选择合适。回归系数R209852，大于09，说明模型相关度很好。所以，可以使用该模型来分析响应值的变化。0093为了进一步研究相关变量交互作用以及确定最优点，通过DESIGNEXPERT软件绘制响应面曲线图进行可视化分析。结果见图50094由图5响应面3D图可知，响应值存在最大值，经软件分析计算，得到总黄酮含量预测值最大时的分组浓度醇浓度5845，微波功率39715W，提取时间813MIN，料液比159。对试验结果进行5次验证试验，结果表明，总黄酮得平均得率为345，与理论预测值基本吻合。0095以相同的辣木叶粉为样品，微波萃取的方法所得辣木叶总黄酮含量高于回流提取方法，同时大大缩短了提取时间，节约了提取时所耗的水和电，降低了提取成本。说明书CN104173393A1/3页10图1图2说明书附图CN104173393A102/3页11图3图4说明书附图CN104173393A113/3页12图5说明书附图CN104173393A12。