新的脲衍生物和其用途.pdf

本发明涉及适用于制备药物组合物的新脲衍生物。

1.  根据式I的化合物和这些化合物的立体异构体、盐或代谢物：

               式I
其中X和Y可相同或不同，表示键或-O-或-S-，其中至少一个基团X或Y是-O-或-S-，
其中R1选自下组：2-或3-吡咯基，2-、4-或5-咪唑基，3-、4-或5-吡唑基，2-、3-或4-吡啶基，2-或3-吡嗪基，2-或4-嘧啶基，3-或4-哒嗪基，3-，4-或5-异噁唑基，3-呋咱基，2-、3-或4-喹啉基，1-、3-或4-异喹啉基，4-、5-、6-或7-吲哚基，其为单或多取代的或未取代的，4-、5-、6-或7-异吲哚基，1，8-萘啶-2-或-3-或-4-基，和苯基，其为单或多取代的或未取代的，
其中R2是单或多取代的或未取代的4-、5-、6-或7-吲哚基，单或多取代的或未取代的4-、5-、6-或7-异吲哚基，单或多取代的或未取代的4-、5-、6-或7-苯并噁唑基，或根据式II的残基，

          式II
其中Z是C或N，
其中V和W相互独立地表示键或-NH-，
其中R3是任意残基，
其中式II中的左侧环可相同或不同地被卤素原子、尤其是被氟、氯或溴单、双、三或四取代。

2.  根据权利要求1的化合物，其中R1被-F、-Cl、-Br、-I、(C₁-C₈)烷基，可能的话其被-F、-Cl、-Br或-I单或多卤化，或(C₁-C₈)氧基烷基单、双或三取代，其中所述取代基可相同或不同。

3.  根据权利要求1或2的化合物，其中R1是苯基、喹啉基或1，8-萘啶-4-基，尤其是带有-F、-Cl、-Br、-I和/或(C₁-C₈)烷基，可能的话被-F、-Cl、-Br或-I单或多卤化。

4.  根据权利要求1至3之一的化合物，其中R1是4-溴-、4-氯-或4-氟-3-(C₁-C₃)烷基苯基，其中对于(C₁-C₃)烷基，被-F、-Cl或-Br单、双或三卤化的甲基或乙基是优选的。

5.  根据权利要求1至4之一的化合物，其中在吲哚基、异吲哚基或苯并噁唑基的情况下，R2被-F、-Cl、-Br、-I、(C₁-C₈)烷基，可能的话是被-F、-Cl、-Br或-I单或多卤化的，或(C₁-C₈)氧基烷基单、双或三取代，其中所述取代基可相同或不同。

6.  根据权利要求1至5之一的化合物，其中R3是-H、-F、-Cl、-Br、-I、(C₁-C₁₀)烷基或(C₁-C₆)氧基烷基，(C₁-C₁₀)烷基或可能的话被部分或完全卤化、尤其是氟化的(C₁-C₁₀)烷基、(C₃-C₇)环烷基，(C₂-C₁₀)链烯基，(C₂-C₁₀)链炔基，(C₁-C₈)烷基(C₃-C₇)环烷基基团，(C₂-C₈)链烯基(C₃-C₇)环烷基基团，杂环基基团，(C₁-C₈)烷基杂环基基团，(C₂-C₈)链烯基杂环基基团，芳基基团，(C₁-C₈)烷基芳基基团，(C₂-C₈)链烯基芳基基团，或(C₂-C₈)链炔基芳基基团，或可能的话被1-2个酮基团，1-2个(C₁-C₅)烷基基团，1-2个(C₁-C₅)烷氧基基团，1-3个卤素原子，1-2个外亚甲基基团取代的包含1-3氮原子和/或1-2个氧原子和/或1-2个硫原子的单环或双环杂芳基基团，(C₁-C₈)烷基杂芳基基团，或(C₂-C₈)链烯基杂芳基基团，(C₂-C₈)链炔基杂芳基基团，其中这些基团可在任意位上与式II连接和可能的话在一个或多个位上被水合。

7.  根据权利要求1至6之一的化合物，其中R3是-(CO)-NH-烷基或-(CO)-O-NH-烷基或-(CO)-NH-氧基烷基。

8.  根据权利要求1至7之一的化合物，其中R1是苯基、喹啉基或1，8-萘啶-4-基，尤其是带有-F、-Cl、-B、-I和/或(C₁-C₈)烷基，可能的话被-F、-Cl、-Br、或-I单或多卤化，或4-溴-、4-氯-或4-氟-3-(C₁-C₃)烷基苯基，其中R2是单或多取代的或未取代的5-吲哚基，单或多取代的或未取代的6-苯并噁唑基，或根据式II的残基，其中Z是N，R3是-(CO)-NH-烷基或-(CO)-O-NH-烷基或-(CO)-NH-氧基烷基。

9.  根据权利要求1至8之一的化合物，即：
N-[4-溴-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氟-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氯-3-(甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氯-3-(全氟乙基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-氧基甲基-氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)甲酰胺，
N-[4-氯-3-(甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氯-3-(乙基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-乙基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-三氟甲基-氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)甲酰胺，
N-[4-氯-3-(甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-三氟甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯氧基]氨基甲酰基}氨基)-3-氟苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，
4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯氧基]氨基甲酰基}氨基)-2-氟苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，
4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯氧基]氨基甲酰基}氨基)-3-氯苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，
4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯氧基]氨基甲酰基}氨基)-2-氯苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺。

10.  药物组合物，其包含生理有效剂量的根据权利要求1至9之一的化合物和任选性的生理耐受性辅助和/或载体物质。

11.  根据权利要求10的药物组合物，另外包含不同于所述化合物的活性物质，该活性物质尤其是选自下组：阿地白介素，氨磷汀，阿曲生坦，贝伐单抗，蓓萨罗丁，硼替佐米，卡培他滨，卡铂，苯丁酸氮芥，顺铂，克拉屈滨，环磷酰胺，塞特酰胺，达卡巴嗪，多烯紫杉醇，屈洛昔芬，依决洛单抗，埃坡霉素，厄洛替尼，依托泊苷，依西美坦，夫拉平度，氟达拉滨，氟化尿嘧啶，福美坦，氟维司群，吉非替尼，吉西他滨，伊达比星，伊立替康，伊沙匹隆，洛那法尼，米替福新，丝裂霉素，新伐司他，奥沙利铂，培美曲塞，卟吩姆，美罗华，替加氟，替莫唑胺，替吡法尼，和美新，三甲曲沙，伏氯唑，长春碱，和两种或多种这些活性物质的混合物。

12.  根据权利要求1至9之一的化合物用于制备药物组合物的用途，所述组合物用于预防或治疗增生性或炎症疾病或用于抑制视网膜中新患病血管的生长(抑制潜行性视力损失(AMD))。

13.  根据权利要求12的用途，其中所述疾病选自下组：癌，如肺癌(非小细胞腺癌，鳞状细胞癌，大细胞肺癌，小细胞肺癌)，支气管癌，尤其是非小细胞支气管癌，肝细胞癌(HCC)，原发性肝癌，原发性皮癌，白血病，卵巢癌，肉瘤，脑膜瘤，肠癌，淋巴结癌，大脑肿瘤，乳腺癌，胰腺癌，前列腺癌，肾癌，恶性黑色素瘤，慢性炎症，哮喘，变态反应，鼻炎，葡萄膜炎，荨麻疹，关节炎，骨关节炎，慢性多关节炎，类风湿关节炎，炎性肠道疾病，退化性关节疾病，软骨断裂的风湿类疾病，败血症，自身免疫疾病，I型糖尿病，桥本甲状腺炎，自身免疫血小板减少症，多发性硬化，重症肌无力，慢性炎症肠疾病，克罗恩病，葡萄膜炎，牛皮癣，非典型性皮炎，周身性红斑狼疮，古德帕斯综合症，错乱白血球粘附性疾病，恶病质，由于增加的TNF-α浓度而产生的疾病，糖尿病，肥胖，细菌感染，尤其是被抗药性细菌感染，心机能不足和慢性心脏衰竭(CCF)。

14.  根据权利要求12或13的用途，其中将权利要求1至9之一的化合物以生理有效剂量与至少一种载体和/或辅助物质混合并制成盖仑给药形式。

15.  用于预防或治疗疾病的方法，所述疾病伴随增生性或炎症疾病，尤其是选自下列：癌，如肺癌(NSCLC)，头/颈癌(HNSCC)，肾癌(RCC，NPC)，白血病，卵巢癌，肝癌，肉瘤，脑膜瘤，肠癌，淋巴结癌，大脑肿瘤，乳腺癌，胰腺癌，前列腺癌，皮肤癌，甲状腺癌，慢性炎症，哮喘，变态反应，鼻炎，葡萄膜炎，荨麻疹，关节炎，骨关节炎，慢性多关节炎，风湿性关节炎，炎性肠道疾病，退化性关节疾病，软骨断裂的风湿类疾病，败血症，自身免疫疾病，I型糖尿病，桥本甲状腺炎，自身免疫血小板减少症，多发性硬化，重症肌无力，慢性炎症肠疾病，克罗恩病，葡萄膜炎，牛皮癣，非典型性皮炎，周身性红斑狼疮，古德帕斯综合症，错乱白血球粘附性疾病，恶病质，由于增加的TNF-α浓度而产生的疾病，糖尿病，肥胖，细菌感染，尤其是被抗药性细菌感染，心机能不足和慢性心脏衰竭(CCF)，其中向需要所述预防或治疗的人供给生理有效剂量的权利要求1至9之一的化合物或权利要求10或11的药物组合物。

新的脲衍生物和其用途
本发明涉及新脲衍生物，包含这些化合物的药物组合物，这些化合物作为活性物质或作为前药的用途，以及用于制备这些化合物(活性物质和前药)的方法。
根据Porter等人的Bioorganic &Medicinal Chemistry Letters11：1907-1910(2001)和Bankston等人的Organic Proces sResearch & Development，6：777-781(2002)等文献，各种1，3-联芳基脲衍生物是本领域已知的。
它们尤其适用于治疗不同疾病，尤其是不同类型的癌。
原则上非常需要新的和改进的活性物质，其能够抑制癌细胞的增生和因此抑制赘生肿瘤生长和抑制身体的过分防卫反应，如感染性休克，变应性，自身免疫疾病，移植排异和急性和慢性炎症反应，同时对完好细胞只具有很低毒性甚至根本没有细胞毒性。另外，它应能够抑制单细胞机体的生长和视网膜中的新患病血管的生长(抑制潜行性视力损失(AMD))。
为此，本发明提出了根据式I的化合物：

式I
其中X和Y可相同或不同，表示键或-O-或-S-，其中至少一个基团X或Y是-O-或-S-，
其中R1选自下组：2-或3-吡咯基，2-，4-或5-咪唑基，3-，4-或5-吡唑基，2-，3-或4-吡啶基，2-或3-吡嗪基，2-或4-嘧啶基，3-或4-哒嗪基，3-，4-或5-异噁唑基，3-呋咱基，2-，3-或4-喹啉基，1-，3-或4-异喹啉基，4-，5-，6-或7-吲哚基(单或多取代的或未取代的)，4-，5-，6-或7-异吲哚基，1，8-萘啶-2-或-3-或-4-基，和苯基(单或多取代的或未取代的)，
其中R2是4-，5-，6-或7-吲哚基(单或多取代的或未取代的)，4-，5-，6-或7-异吲哚基(单或多取代的或未取代的)，4-，5-，6-或7-苯并噁唑基(单或多取代的或未取代的)，或根据式II的残基，

式II
其中Z是C或N，
其中V和W相互独立地表示键或-NH-，
其中R3是任意残基，
其中式II中的左侧环可相同或不同地用卤素原子，尤其是氟，氯或溴单、双、三或四取代，
本发明还提供了式I的这些化合物的立体异构体、盐或代谢物。以上化合物的葡萄糖醛酸化物和N-吡啶氧化物尤其属于代谢物。
R1可被-F，-Cl，-Br，-I，(C₁-C₈)烷基，如果可行可被-F，-Cl，-Br或-I单或多卤化，或(C₁-C₈)氧基烷基单、双或三取代，其中取代基可相同或不同。
R1优选是苯基，喹啉基，或1，8-萘啶-4-基，尤其是用-F，-Cl，-Br，-I和/或(C₁-C₈)烷基(如果可行，被-F，-Cl，-Br或-I单或多卤化)取代。进一步优选R1是4-溴-、4-氯-、或4-氟-3-(C₁-C₃)烷基苯基，其中对于(C₁-C₃)烷基，被-F，-Cl或-Br单、双或三卤化的甲基或乙基是尤其优选的。
在吲哚基，异吲哚基或苯并噁唑基的情况下，R2可被-F，-Cl，-Br，-I，(C₁-C₈)烷基(如果可行，被-F，-Cl，-Br，或-I单或多卤化)，或(C₁-C₈)氧基烷基单，双或三取代，其中所述取代基可相同或不同。它可尤其是N-取代基，例如N-甲基。在苯并噁唑基的情况下，它可以是2-取代基。
R3可以是-H，-F，-Cl，-Br，-I，(C₁-C₁₀)烷基基团或(C₁-C₆)氧基烷基，(C₁-C₁₀)烷基基团或如果可行被部分或完全卤化、尤其是氟化的(C₁-C₁₀)烷基基团，(C₃-C₇)环烷基基团，(C₂-C₁₀)链烯基基团，(C₂-C₁₀)链炔基基团，(C₁-C₈)烷基(C₃-C₇)环烷基基团，(C₂-C₈)链烯基(C₃-C₇)环烷基基团，杂环基基团，(C₁-C₈)烷基杂环基基团，(C₂-C₈)链烯基杂环基基团，芳基基团，(C₁-C₈)烷基芳基基团，(C₂-C₈)链烯基芳基基团，或(C₂-C₈)链炔基芳基基团，或视需要被1-2个酮基团，1-2个(C₁-C₅)烷基基团，1-2个(C₁-C₅)烷氧基基团，1-3个卤素原子，1-2个外亚甲基基团取代的、包含1-3氮原子和/或1-2个氧原子和/或1-2个硫原子的单或双环杂芳基基团，(C₁-C₈)烷基杂芳基基团，或(C₂-C₈)链烯基杂芳基基团，(C₂-C₈)链炔基杂芳基基团，其中这些基团可在任意位上与式II连接和可视需要在一个或几个位上被水合。
R3可尤其是-(CO)-NH-烷基，或-(CO)-O-NH-烷基，或-(CO)-NH-氧基烷基。
所述残基的烷基基团可以是直链或支链的和可例如是甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，叔丁基或正戊基，2，2-二甲基丙基，2-甲基丁基或3-甲基丁基基团，以及己基，庚基，壬基，癸基基团和它们的任意地支化衍生物。甲基或乙基基团是优选的。所提及的烷基基团可视需要被1-5个卤素原子取代。对于部分或完全卤化、尤其是氟化的C₁-C₃-烷基基团，例如可使用以下部分或完全氟化的基团：氟甲基，二氟甲基，三氟甲基，氟乙基，1，1-二氟乙基，1，2-二氟乙基，1，1，1-三氟乙基，四氟乙基，五氟乙基。其中优选的是三氟甲基或五氟乙基基团，其中完全氟化基团也称作全氟烷基基团。
烷氧基基团(＝氧基烷基)可以是直链或支链的和例如是甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，异丁氧基，叔丁氧基或正戊氧基，2，2-二甲基丙氧基，2-甲基丁氧基或3-甲基丁氧基基团。C₁-C₅烷氧基基团是优选的。甲氧基或乙氧基基团是尤其优选的。
环烷基基团是视需要被一个或多个卤素原子，(C₁-C₅)烷基基团，(C₁-C₅)烷氧基基团，NR¹⁰R¹¹-基团，COOR¹²-基团，CHO，氰基取代的饱和环状基团，包含3至7环碳原子，例如环丙基，甲基环丙基，环丁基，甲基环丁基，环戊基，甲基环戊基，环己基，甲基环己基，环庚基，甲基环庚基。
(C₁-C₈)烷基(C₃-C₇)环烷基基团是通过直链或支链的(C₁-C₈)烷基单元键接至环体系上的环烷基基团。
(C₂-C₈)链烯基(C₃-C₇)环烷基基团是通过直链或支链的(C₂-C₈)链烯基单元键接至环体系上的环烷基基团。
杂环基基团不是芳族和可例如是吡咯烷，咪唑烷，吡唑烷，哌啶。全氢喹啉和全氢异喹啉也属于这些杂环基基团。
本发明意义上的芳基基团是具有6至14个碳原子的芳族或部分芳族碳环基团，其包含一个环，如苯基或亚苯基，或多个缩合环如萘基或蒽基。例子是苯基，萘基，四氢萘基，蒽基，茚满基，和茚基。
芳基基团可在任何合适的导致稳定立体异构体的位上被一个或多个选自羟基或卤素的残基取代。
(C₁-C₈)烷基芳基基团是如上所述通过直链或支链的(C₁-C₈)烷基单元键接至环体系上的芳基基团。
(C₂-C₈)链烯基芳基基团是如上所述通过直链或支链的(C₂-C₈)链烯基单元键接至环体系上的芳基基团。
(C₂-C₈)链炔基芳基基团是如上所述通过直链或支链的(C₂-C₈)链炔基单元键接至环体系上的芳基基团。
单环状杂芳基基团可例如是吡啶，吡嗪，嘧啶，哒嗪，三嗪，氮杂吲嗪，2H-和4H-吡喃，2H-和4H-硫代吡喃，呋喃，噻吩，1H-和4H-吡唑，1H-和2H-吡咯，噁唑，噻唑，呋咱，1H-和4H-咪唑，异噁唑，异噻唑，噁二唑，三唑，四唑，噻二唑。
双环杂芳基基团可例如是2-苯并[c]呋喃酮基，硫代2-苯并[c]呋喃酮基，吲哚基，异吲哚基，二氢吲哚基，二氢异吲哚基，吲唑基，苯并噻唑基，吲哚酮基，二氢吲哚酮基，异吲哚酮基，二氢异吲哚酮基，苯并呋喃基，苯并咪唑基，二氢异喹啉基，二氢喹啉基，苯并噁嗪酮基基，酞嗪酮基，二氢酞嗪酮基，喹啉基，异喹啉基，喹啉酮基，异喹啉酮基，喹啉唑基，喹噁啉基，肉啉基，2，3-二氮杂萘基，二氢2，3-二氮杂萘基，1，7-或1，8-萘啶基，香豆素基，异香豆素基，吲嗪基，异苯并呋喃基，氮杂吲哚基，氮杂异吲哚基，呋喃并吡啶基，呋喃并嘧啶基，呋喃并吡嗪基，呋喃并哒嗪基，二氢苯并呋喃基，二氢呋喃并吡啶基，二氢呋喃并嘧啶基，二氢呋喃并吡嗪基，二氢呋喃并哒嗪基，二氢苯并呋喃基，色烯基，异色烯基，色烯酮基或异色烯酮基基团。
(C₁-C₈)烷基杂芳基基团是如上所述通过直链或支链的(C₁-C₈)烷基单元键接至环体系上的杂芳基基团。
(C₂-C₈)链烯基杂芳基基团是如上所述通过直链或支链的(C₂-C₈)链烯基单元键接至环体系上的杂芳基基团。
(C₂-C₈)链炔基杂芳基基团是如上所述通过直链或支链的(C₂-C₈)链炔基单元键接至环体系上的杂芳基基团。
(C₁-C₈)烷基杂环基基团是如上所述通过直链或支链的(C₁-C₈)烷基单元键接至环体系上的杂环基基团。
(C₂-C₈)链烯基杂环基基团是如上所述通过直链或支链的(C₂-C₈)链烯基单元键接至环体系上的杂环基基团。
视需要包含在R2中的式II的结构单元

式II
可与Y键接使得V处于Y的邻，间，或对位。
视需要包含在R2中的结构单元-V-O-W-(参见式II)可具有以下含义：
-O-，
-NH-O-，
-O-NH-，或
-NH-O-NH-。
结构单元-V-O-W-优选是-O-，-NH-O-，或-O-NH-。更尤其优选结构单元-V-O-W-是-O-。
本发明化合物的例子是：
N-[4-溴-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氟-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氯-3-(甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氯-3-(全氟乙基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-氧基甲基-氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)甲酰胺，
N-[4-氯-3-(甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氯-3-(乙基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-乙基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-三氟甲基-氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)甲酰胺，
N-[4-氯-3-(甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-三氟甲基氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺，
4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯氧基]氨基甲酰基}氨基)-3-氟苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，
4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯氧基]氨基甲酰基}氨基)-2-氟苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，
4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯氧基]氨基甲酰基}氨基)-3-氯苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，
4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯氧基]氨基甲酰基}氨基)-2-氯苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺。
其它本发明化合物可按照类似方式通过使用其中残基R1至R3根据定义而改变的原料制备。
本发明进一步提出了一种包含本发明化合物的药物组合物。视需要可将一种或多种生理耐受性辅助物质和/或载体物质与该化合物混合，和将该混合物以盖仑方式用于局部或体系给药，尤其是口服，肠胃外，用于灌注或浸入目标器官中，用于注射(如i.v.，i.m.，囊内或腰髓内)，用于牙袋(牙根和牙龈之间的空间)中的施用和/或用于吸入给药。对附加和/或辅助物质的选择取决于所选的给药形式。根据本发明的药物组合物的盖仑给药可按照常规方式进行。作为离子化合物的抗衡离子，可以使用例如Ca⁺⁺，CaCl⁺，Na⁺，K⁺，Li⁺或环己基铵或Cl^-，Br^-，乙酸根，三氟乙酸根，丙酸根，乳酸根，草酸根，丙二酸根，马来酸根，柠檬酸根，苯甲酸根，水杨酸根，4-甲基苯磺酸根等。合适的固体或液体盖仑制剂形式例如是粒剂，粉剂，糖衣丸，片剂，(微)胶囊，栓剂，糖浆，汁，悬浮液，乳液，滴剂或注射用溶液(i.v.，i.p.，i.m.，s.c.)或喷雾剂(气溶胶)，用于干粉末吸入的制剂形式，透皮体系，和具有延迟释放的活性物质的制剂，生产时使用常规的辅助物质，如载体物质，分裂剂，粘合剂，包衣，浸涨剂，滑动或润滑剂，调味剂，增甜剂和增溶。也可将活性物质包封在优选是生物可降解的纳米胶囊中，例如用于生产吸入制剂。作为辅助物质，在此例如提及碳酸镁，二氧化钛，乳糖，甘露糖醇和其它糖，滑石，乳蛋白，明胶，淀粉，纤维素和其衍生物，动物和植物油如鱼肝油，向日葵油，花生油或芝麻油，聚乙二醇和溶剂，如无菌水和单或多元醇，例如甘油。根据本发明的药物组合物可这样制成：将至少一种按照本发明使用的物质组合以规定的剂量与规定剂量的药物合适的和生理耐受性的载体和合适的话其它合适的活性物质、附加或辅助物质混合，和被制成所需的给药形式。
作为稀释剂，可以使用聚二醇，乙醇，水和缓冲溶液。合适的缓冲物质是例如N，N′-二苄基亚乙基二胺，二乙醇胺，乙二胺，N-甲基葡糖胺，N-苄基苯乙胺，二乙胺，磷酸盐，碳酸氢钠，或碳酸钠。但也可能根本不使用任何稀释剂。
生理耐受性盐是与无机或有机酸，如乳酸，盐酸，硫酸，乙酸，柠檬酸，对甲苯磺酸，或与无机或有机碱，如NaOH，KOH，Mg(OH)₂，二乙醇胺，亚乙基二胺，或与氨基酸，如精氨酸，赖氨酸，谷氨酸等，或与无机盐，如CaCl₂，NaCl或其游离离子，如Ca²⁺，Na⁺，Cl^-，SO₄^2-或其组合的盐。它们通过使用标准方法而制成。
本发明基于这样的发现：通过将至少一个-O-引入基团X或Y之一，得到改进的活性作用，因为具有
或基团
的化合物一方面竞争性地结合天然配体，另一方面不能被代谢。抑制性作用因此显著增加。
根据本发明的物质进一步作用于或抑制两种激酶种类。这包括一方面抑制至血管细胞的信号转导(抗血管生成)，其中涉及受体酪氨酸激酶如VEGFR，PDGFR，KIT和FLT-3。另一方面，这包括抑制肿瘤增生，其中涉及丝氨酸/苏氨酸激酶，如RAF/MEK/ERK信号路径，例如c-Raf，B-Raf或A-Raf。
本发明进一步提出了根据本发明的化合物用于制备药物组合物的用途，该组合物用于治疗一种或多种选自下组中的疾病：癌，如肺癌(NSCLC)，头/颈癌(HNSCC)，肾癌(RCC，NPC)，白血病，卵巢癌，肝癌，肉瘤，脑膜瘤，肠癌，淋巴结癌，大脑肿瘤，乳腺癌，胰腺癌，前列腺癌，皮肤癌，甲状腺癌，慢性炎症，哮喘，变态反应，鼻炎，葡萄膜炎，荨麻疹，关节炎，骨关节炎，慢性多关节炎，风湿性关节炎，炎性肠道疾病，退化性关节疾病，软骨断裂的风湿类疾病，败血症，自身免疫疾病，I型糖尿病，桥本甲状腺炎，自身免疫血小板减少症，多发性硬化，重症肌无力，慢性炎症肠疾病，克罗恩病，葡萄膜炎，牛皮癣，非典型性皮炎，周身性红斑狼疮(Kollagenosen)，古德帕斯综合症，错乱白血球粘附性疾病，恶病质，由于增加的TNF-α浓度而产生的疾病，糖尿病，肥胖，细菌感染，尤其是被抗药性细菌感染，心机能不足和慢性心脏衰竭(CCF)。术语治疗还包括预防。
就本发明而言，各种进一步的实施方案是可能的。例如，根据本发明的药物组合物可包含多种不同的落入以上式I内的化合物。另外，根据本发明的药物组合物可另外包含不同于式I化合物的活性物质。这时它是一种组合制剂。不同所用活性物质可被制成单个给药剂形，即活性物质在给药剂型中混合。但也可以以相同或不同种类的空间上分开的给药剂型给药不同活性物质。
本发明还涉及一种用于生产药物组合物的方法，其中至少一种本发明化合物与药物合适的和生理耐受性的载体物质及合适的话还有其它合适的活性物质，附加或辅助物质混合，并制成合适的给药形式。
优选药物组合物被制成剂量单元和以剂量单元给药，其中每一单元包含作为活性组分的规定剂量的式I的本发明化合物。对于固体剂量单元如片剂，胶囊，糖衣丸或栓剂，该剂量可以是0.1至1000mg，优选1至300mg，对于小瓶形式的注射溶液，为0.01至1000mg，优选1至100mg。
为了治疗50至100kg例如70kg重的成人患者，例如日剂量被指定为0.1至1000mg活性物质，优选1至500mg。但在某些情况下，更高或更低的每日剂量也可以。日剂量的给药可一天一次以单个剂量单元形式或以多个较小剂量单元以及通过将分剂量在一定的间隔内多次给药而进行。
一种或多种根据本发明的活性物质与氨基氧基乙酸化物(AOA，NH2-O-CH2-COOH或其盐或酯，例如C₁-C₁₀烷基或羟基烷基酯)的组合也是可能的。AOA针对小肿瘤(<0.1至1cm3)特别有效或抑制其生成，尤其是转移扩散，而本发明化合物对大肿瘤特别有效。其原因是小和大肿瘤的不同的新陈代谢。以上对组合的解释以类似方式适用。另外，根据本发明的药物组合物可另外包含不同于本发明化合物的活性物质，尤其是选自下组中的活性物质：阿地白介素，氨磷汀，阿曲生坦，贝伐单抗，蓓萨罗丁，硼替佐米，卡培他滨，卡铂，苯丁酸氮芥，顺铂，克拉屈滨，环磷酰胺，赛特酰胺(cytamide)，达卡巴嗪，多烯紫杉醇，屈洛昔芬，依决洛单抗，埃坡霉素，厄洛替尼，依托泊苷，依西美坦，夫拉平度，氟达拉滨，氟化尿嘧啶，福美坦，氟维司群，吉非替尼，吉西他滨，伊达比星，伊立替康，伊沙匹隆，洛那法尼，米替福新，丝裂霉素，新伐司他，奥沙利铂，培美曲塞，卟吩姆，美罗华，替加氟，替莫唑胺，替吡法尼，和美新，三甲曲沙，伏氯唑，长春碱，和两种或多种这些活性物质的混合物。
以下描述本发明化合物的合成实施例和生物活性。首先给出基本合成方案。

实施例1：合成4-氯吡啶-2-羰基氯盐酸盐(1377.3)
反应：

批料1377.3-2：
亚硫酰氯(89ml，5当量)在氩气氛中加热至40℃和与干DMF(3ml)混合。吡啶甲酸(30g，243.7mmol)以小份加入(使每次的都反应掉)。在加入过程中，首先产生绿颜色，在溶解时变成深红色。在40℃下搅拌1小时之后，温度升至72℃，和搅拌过夜(气体生成，颜色变为深紫色)。所得橙色悬浮液与干甲苯(250ml)混合和在真空中浓缩至约100ml。该步骤重复两次和最终浓缩至干燥。得到一种逐渐结晶出的深棕色液体。1377.3-2无需进一步纯化而用于下一步骤。
合成(4-氯-(2-吡啶基))-N-甲基甲酰胺(1377.4)
反应：

批料1377.4-3：
甲胺(2M，在THF中)和干甲醇在氩气氛下在冰浴中冷却至0℃。随后慢慢滴加1377.3(14g，65.9mmol)。在0℃下搅拌3h之后，在真空中进行浓缩，残余物用200ml乙酸乙酯接收，分别用200ml饱和NaCl溶液洗涤，在硫酸钠上干燥和真空浓缩。在闪蒸硅胶(PE/EE 2:1)上净化和在高真空中干燥之后，得到作为浅棕色液体的1377.4-3(10.45g，93％)。
合成[4-(4-氨基苯氧基(2-吡啶基))-N-甲基甲酰胺(1377.14)反应：

批料1377.14-1：
4-羟基苯胺(2.62g，24mmol)在氩气氛下溶解在50ml干DMF中，冷却至0℃，和加入叔丁醇钾(2.78g，24.8mmol)(溶液变成深棕色)。在环境温度下搅拌2h之后，加入1377.4(4.09g，24mmol)和碳酸钾(1.79g，13mmol)，加热至80℃和搅拌过夜。反应溶液被放在400ml乙酸乙酯上和用400ml饱和NaCl溶液洗涤。水相用400ml乙酸乙酯再提取，将合并的有机相每次用200ml饱和NaCl溶液洗涤四次，在硫酸钠上干燥和真空浓缩。在高真空下干燥后获得作为棕色固体材料(5g，85％)的1377.14-1。
合成4-溴-(3-三氟甲基)苯氧基乙酰异羟肟酸乙酯(1377.13)
反应：

批料1377.13-1：
乙酰异羟肟酸乙酯(EH-671.2-2，3.85g，37.3mmol)溶解在40ml无水DMF中，和在0℃下加入K^tOBu(EH-671.2-2，4.61g，41.1mmol)。在环境温度下搅拌30分钟之后，加入2-溴-5-氟三氟甲基苯(10g，41.2mmol)，并随后在80℃下继续搅拌另外2h。在用冰冷却下，与300ml水混合，每次用200ml乙酸乙酯(EH-86.7-28)提取两次，用200ml饱和NaCl洗涤，在硫酸钠(EH-93.8-10)上干燥和真空浓缩。在闪蒸硅胶(Tol/PE 2:1)上净化之后，得到1377.13-1(12.08g，90％)。
合成4-溴-(3-三氟甲基)苯氧胺(1377.15)
反应：

批料1377.15-1：
4-溴-(3-三氟甲基)苯氧基乙酰异羟肟酸乙酯(1377.13，12.08g，37mmol)溶解在二噁烷(60ml)中和用冰浴冷却至0℃。利用注射器，慢慢加入60％高氯酸(15ml)。将冰浴去除和在室温下搅拌1h之后，将反应混合物放在1200ml冰水上和用40％氢氧化钠溶液中和。水相每次用1000ml乙酸乙酯提取两次，用800ml饱和NaCl溶液洗涤，在硫酸钠上干燥和真空浓缩。获得作为深棕色液体的1377.13-1(8.7g，92％)。
合成N-[4-溴-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4[2-(N-甲基-氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)甲酰胺(1377.0)
反应：

批料1377.0-2：
4-溴-(3-三氟甲基)苯氧胺(1377.15，2.1g，8.20mmol)和[4-(4-氨基苯氧基(2-吡啶基))-N-甲基甲酰胺(1377.14，2g，8.22mmol)在氩气氛下一起溶解在80ml吡啶中。随后利用注射器慢慢滴加光气(20％，在甲苯中，4.3ml)并将混合物在室温下搅拌2h。反应混合物被真空浓缩，放在硅胶上和在闪蒸硅胶(EE)上色谱处理。重新进行色谱(PE/EE 1:1)处理，从二噁烷中深冷冻干燥和在65℃下在高真空中干燥48h，最终产物为无定形粉末(0.9g，21％)。
分析数据如下：
¹HNMR(使用Bruker Avance 400测定，400MHz，dmso-d₆，TMS 作为内标)：d(ppm)＝2，78(d，3H，J＝4，9Hz，Me)，7，14(dd，1H，J＝2，6Hz，J＝5，6Hz，5-H_吡啶基)，7，17(d，2H，J＝8，9Hz，AA′/BB′)，7，37(d，1H，J＝2，6Hz，3-H_吡啶基)，7，42(dd，1H，J＝8，9Hz，J＝3，0Hz，6-H)，7，59(d，1H，J＝3，0Hz，2-H)，7，66(d，2H，J＝9，0Hz，AA′/BB′)，7，87(d，1H，J＝8，9Hz，5-H)，8，50(d，1H，J＝5，6Hz，6-H_吡啶基)，8，76(q，1H，J＝4，8Hz，NHMe)，，42(s，1H，NH)，10，55(s，1H，NH).
¹³C NMR(用Bruker Avance 400测定，100，6MHz，dmso-d₆，TMS作为内标)：d(ppm)＝20，66(s，1C，Me)，108，63(s，1C，3-C_吡啶基)，110，45(d，1C，4-C)，113，59(d，1C，2-C)，113，95(s，1C，5-C_吡啶基)，119，24(s，1C，6-C)，121，14(s，2C，AA′/BB′)，122，56(q，1C，J＝273，4Hz，CF₃)，121，74(s，2C，AA′/BB′)，128，93(q，1C，J＝31，0Hz，CCF₃)，136，07(s，1C)，136，19(s，1C)，148，37(s，1C)，150，30(s，1C，6-C_吡啶基)，152，38(s，1C)，156，56(s，1C)，159，21(s，1C)，163，67(s，1C)，165，77(s，1C).
熔点，使用Electrothermal IA 9200测定，加热速率2℃/min：91-99℃。
实施例2：合成N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基-氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)-甲酰胺

步骤如下：
合成2，4-二硝基苯氧基乙酰异羟肟酸乙酯
乙酰异羟肟酸乙酯(5g，48.5mmol)溶解在50ml无水DMF中，和在0℃下加入KO^tBu(6g，53.5mmol)。在20℃下搅拌30分钟之后，加入2，4-二硝基氟苯(10g，53.73mmol)，并随后在80℃下继续搅拌2h。在用冰冷却下，加入300ml水，每次用200ml乙酸乙酯提取两次，用200ml饱和NaCl溶液洗涤，在硫酸钠上干燥和真空浓缩。在闪蒸硅胶(Tol/PE 2:1)上净化之后，得到产物(6.67g，46％)。
合成O-(2，4-二硝基苯基)羟胺
2，4-二硝基苯氧基乙酰异羟肟酸乙酯(3g，11.14mmol)溶解在二噁烷(12ml)中和用冰浴冷却至0℃。利用注射器，慢慢加入60％高氯酸(9ml)。去除冰浴和在20℃下搅拌2h之后，将反应混合物放在240ml冰水上和用50％氢氧化钠溶液中和。水相每次用240ml乙酸乙酯提取两次，用240mlNaCl溶液洗涤，在硫酸钠上干燥和真空浓缩。得到一种深棕色固体物质作为产物(2g，91％)。
合成4-氯-(3-三氟甲基)苯氧胺
4-氯-(3-三氟甲基)苯酚(3.9g，19.84mmol)在氩下溶解在86ml干DMF中，冷却至0℃和与351mg NaH混合。随后在该温度下搅拌混合物30min。O-(2，4-二硝基苯基)羟胺(2g，10.04mmol)溶解在27ml干DMF中，加入分子筛和利用注射器在2h内在20℃下慢慢滴加至反应溶液。在另一2h搅拌之后，加入0.8ml TFA，倒入390ml饱和NaHCO₃溶液中和每次用390ml乙醚提取四次。将合并的有机相每次用390ml0.5M NaOH溶液和用390ml饱和NaCl溶液洗涤四次和在硫酸钠上干燥。反应混合物被真空浓缩，放在硅胶上和在闪蒸硅胶(Tol/PE 1:2)上色谱处理。在高真空中干燥之后，产物作为晶体(1.46g，35％)而得到。
合成N-[4-氯-3-(三氟甲基}苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基-氨基甲酰基}(4-吡啶基氧基}]苯基}氨基)-甲酰胺
最终产物的合成随后根据实施例1进行，其中以上合成的4-氯-(3-三氟甲基)苯氧胺用于替代4-溴-(3-三氟甲基)苯氧胺。
最终产物的分析数据如下：
¹HNMR(用Bruker Avance 400测定，400MHz，dmso-d₆，TMS作为内标)：d(ppm)＝2，78(d，3H，J＝4，9Hz，Me)，7，13(dd，1H，J＝2，6Hz，J＝5，6Hz，5-H_吡啶基)，7，17(d，2H，J＝8，9Hz，AA′/BB′)，7，38(d，1H，J＝2，6Hz，3-H_吡啶基)，7，50(dd，1H，J＝9，0Hz，J＝3，2Hz，6-H)，7，59(d，1H，J＝2，9Hz，2-H)，7，66(d，2H，J＝9，0Hz，AA′/BB′)，7，71(d，1H，J＝8，9Hz，5-H)，8，50(d，1H，J＝5，6Hz，6-H_吡啶基)，8，73(q，1H，J＝5，1Hz，NHMe)，9，39(s，1H，NH)，10，53(s，1H，NH).
熔点，使用Electrothermal IA 9200测定，加热速率1℃/min：88-100℃。
最终产物的甲苯磺酸盐的分析数据如下：
¹H NMR(用Bruker Avance400测定，400MHz，dmso-d₆，TMS作为内标)：d(ppm)＝2，29(s，3H，MeTos)，2，79(d，3H，J＝4，8Hz，Me)，7，16(dd，1H，J＝2，6Hz，J＝5，7Hz，5-H_吡啶基)，7，11(d，2H，J＝7，9Hz，AA′/BB′)，7，41(d，1H，J＝2，5Hz，3-H_吡啶基)，7，52(dd，1H，J＝8，9Hz，J＝2，9Hz，6-H)，7，59(d，1H，J＝2，9Hz，2-H)，7，48(d，2H，J＝8，1Hz，AA′/BB′)，7，66(d，2H，J＝9，0Hz，AA′/BB′)，7，72(d，1H，J＝8，9Hz，5-H)，8，51(d，1H，J＝5，7Hz，6-H_吡啶基)，8，80(q，1H，J＝4，7Hz，NHMe)，9，43(s，1H，NH)，10，55(s，1H，NH).
¹³C NMR(用Bruker Avance 400测定，100，6MHz，dmso-d₆，TMS作为内标)：d(ppm)＝20，66(1C，Me)，25，92(1C，Me)108，78(1C)，113，12(1C)，113，19(1C)，114，00(1C)，119，09(1C)，121，12(1C)，121，71(1C)，123，11(1C)，123，80(1C)，125，39(1C)，126，94(1C)，127，24(1C)，127，93(1C)，132，70(1C)，136，25(1C)，137，46(1C)，145，66(1C)，148，28(1C)，150，01(1C)，151，97(1C)，156，54(1C)，158，67(1C)，163，38(1C)，166，03(1C).
备选的合成
合成N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基-氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)甲酰胺的另一合成方式是，使用同样从文献中已知的2-氯-5-氟苯并三氟化物作为起始原料替代2-溴-5-氟苯并三氟化物。其它工艺方式因此对应于以上详细解释的溴化合物的方法(实施例1)。此外2-氯-5-氟苯并三氟化物可以2-硝基-5-氟苯并三氟化物(如可得自Aldrich，Acros)为起始物，如文件US 4,469,893所述，使用蒸气相反应器而制成。
逆合成：

另外：
2-氯-5-氟苯并三氟化物的制备描述于以下文件：
A novel，base-induced fragmentation of Hantzsch-type 4-aryl-1，4-dihydropyridines.McInally，Thomas；Tinker，AlanC.Dep.Med.Chem.，Fisons plc，Res.Dev.Lab.，Loughborough/Leicestershire，UK.Journal of the ChemicalSociety，Perkin Transactions1：Organic and Bio-OrganicChemistry(1972-1999)(1988)，(7)，1837-44.CODEN：JCPRB4ISSN：0300-922X.Journal written in English.CAN109：230744 AN 1988：630744 CAPLUS
Tang，David Y.；Cotter，Byron R.；Goetz，Frederick J.Nitrodiphenyl ethers.Eur.Pat.Appl.(1986)，21 pp.CODEN：EPXXDW EP 173349 A1 19860305 CAN 105：42472 AN1986：442472 CAPLUS
Tang，David Y.；Cotter，Byron R.；Goetz，Frederick J.Nitrodiphenyl ethers.U.S.(1984)，5pp.CODEN：USXXAM US 4469893 A 19840904 CAN 101：210733 AN1984：610733 CAPLUS
Tang，David Y.；Cotter，Byron R.；Goetz，Frederick J.Nuclear chlorinated aromatic compounds.U.S.(1984)，7 pp.CODEN：USXXAM US 4470930 A 19840911 CAN101：210711 AN 1984：610711 CAPLUS
Tang，David Y.；Cotter，Byron R.；Goetz，Frederick J.Nuclear chlorinated compounds.Eur.Pat.Appl.(1985)，26 pp.CODEN：EPXXDW EP 159388 A2 19851030 CAN104：168090 AN 1986：168090 CAPLUS
Igura，Katsuyata；Nagasaki，Fumihiko.2，5-Dihalo-3-trifluoromethylaniline.Jpn.Kokai Tokkyo Koho(1986)，6pp.CODEN：JKXXAF JP 61083146 A2 19860426 Showa.CAN 105：208595 AN 1986：608595 CAPLUS
Baxter，Andrew John Gilby；Dixon，John；Gould，KennethJohn；McInally，Thomas；Tinker，Alan Charles.Pharmaceutically active dihydropyridines.Eur.Pat.Appl.(1984)，111 pp.CODEN：EPXXDW EP 125803 A219841121 CAN 102：203874 AN 1985：203874 CAPLUS
实施例3：合成4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯氧基]氨基甲酰基}氨基)-3-氟苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺

按照实施例2的类似方式进行合成，但不使用4-羟基苯胺，而是使用等摩尔4-氨基-3-氟苯酚。作为补充，参照用于合成[4-(碘苯氧基-(2-吡啶基-N-甲基甲酰胺(1377.14)的反应方案，以类似方式使用。
实施例4：生物研究
使用如上合成的根据本发明的物质N-[4-溴-3-(三氟甲基)苯基氧基]-({4-[2-(N-甲基-氨基甲酰基)(4-吡啶基氧基)]苯基}氨基)甲酰胺，针对活细胞的线粒体活性进行XTT试验。在此，黄色四唑鎓盐XTT(3＂-[1-(苯基氨基羰基)-3，4-四唑鎓]-双(甲氧基-6-硝基)苯磺酸钠)通过代谢活性细胞被转化成橙色甲臜(XTT的四唑鎓环的分解)。XTT的生物还原通过加入PMS(电子偶联吩嗪甲硫酸盐)而增加。颜色强度与线粒体脱氢酶活性和活细胞的数目相关。颜色强度利用ELISA Reader进行分光光度定量。
在确立方法时，确定每一细胞系的最佳起始细胞计数/井以理想地测定光学密度。另外，针对每一细胞系确定OD和作为基础的细胞计数之间的相关曲线。另外，对于每一细胞系，确定最佳物质加入时间和培养时间。
根据细胞系，500至5000个细胞在时间t0时在96井板的100μl营养介质/井中传代。加入50μl物质或在对照物中加入50μl溶剂。在孵化器中4(NK，MCF-7，BxPC-3，WI-38)或6(MDA-MB-453，HT29，KB-V1)培养天之后，加入75μl新鲜制备的XTT溶液(1mg/ml XTT，0.383mg/ml PMS：比率1∶50)。在孵化器中在37℃下培养3h之后，在ELISA Reader中在波长450nm(参考波长620nm)下测定OD。对于测量方法，参考文件Scudiero，D.等人：Cancer Res.(1988)，48：4827-4833。结果在图1和2中显示。两种细胞系是人乳腺癌细胞系。
实施例6：合成实施例1和2的物质的对比生物研究。
所有3种物质对于不同细胞系在存在和不存在丙酮酸的情况下在营养介质中测试其增生抑制作用。为此，将物质溶解在DMSO中和以八种浓度间隔测试。IC50值(具有细胞增生的50％抑制时的浓度)的计算基于八个单独值测定时的每一浓度。
结果在图3中给出。SO 779是实施例1的合成产物，SO 779I是实施例2的合成产物，SO 779I(S)是实施例2的合成产物的甲苯磺酸盐。MCF-7和MDA-MB-453是人乳腺癌细胞系，HT 29是人结肠癌细胞系，BxPC-3是人胰腺肿瘤细胞系，Novikoff是大鼠肝细胞瘤细胞系，KB-V1是HELA细胞的多药物耐受后代，WI 38是胎畜肺成纤细胞细胞系。
可以看出，对于胰腺细胞系，乳腺癌细胞系和KB V1细胞系存在特殊的活性，因为此时产生非常低的IC50值。进一步可以看出，丙酮酸在营养物介质中的存在或不存在没有实质性影响。
在图4可以看出，所有三种物质通常具有非常类似的活性，其中IC50值最大差异仅为2.5倍。
实施例7：群分析。
实施例2的合成产物(游离形式)在菌落分析中测试。其中，不同人肿瘤体的肿瘤干细胞在软琼脂中培养，肿瘤群在存在和不存在试验物质的情况下进行计数。测试总共25个不同肿瘤模型。其中包括结肠，胰腺和胃癌，小细胞和非小细胞肺肿瘤，乳腺癌，卵巢癌，和肾癌和黑素瘤。这些不同肿瘤类型的使用能够评估受测物质是否仅选择性地作用于某些肿瘤体或作用于多种或甚至众多的肿瘤体。
图5和6示出了作用。对于所有25个模型，这些物质导致肿瘤群形成的剂量依赖性抑制。IC50值(在该物质浓度下，相比对照物，细胞计数有50％的减少，图5)是26μM；IC70值(70％减少，图6)是49μM。
在图5和6中，柱表示IC50/IC70浓度与所有IC50/IC70的平均值的关系。对于朝左的柱，IC50/IC70值低于所有IC50/IC70值的平均值，即这些模型相比所有模型的平均值更加敏感。朝右的柱表示IC50/IC70值高于模型的平均值和因此敏感度低于平均值。以下简称用于肿瘤模型。CXF：结肠癌，GXF：胃癌，LXFA：肺的非小细胞腺癌，LXFE：肺的鳞状细胞癌，FXFL：大细胞肺癌，LXFS：小细胞肺癌，MAXF：胸肿瘤，MEXF：黑素瘤，OVXF：卵巢癌，PAXF：胰腺癌，RXF：肾癌。
总之，可观察到特别宽的效率谱，即在25个模型中，仅一个模型在100μM时不被抑制。几乎对于所有模型，IC50和IC70值相对接近。非小细胞肺肿瘤模型，小细胞肺肿瘤模型和胸肿瘤模型被测定出特别高的敏感度。在此，IC50是60μM，IC70是100μM。最高IC50或IC70值分别是240μM或400μM，被发现是肾肿瘤模型的。
对于实施例6.2，6.3，和6.4的结构，类似于以上研究在细胞培养物试验中得到平均IC50值为80μM，340μM和180μM。