从披针叶黄华草地上部分中提取金雀花碱的方法
技术领域
本发明属于制药技术领域，具体涉及从披针叶黄华草地上部分中提取金雀花碱的方法。
背景技术
披针叶黄华(T. lanceolata R.Br.)又名牧马豆、野决明，系豆科(leguminoseae)野决明属(Thermopsis)多年生草本植物。该属植物主要分步于我国的青海、内蒙古、宁夏、四川、甘肃等省区，俄罗斯，蒙古也有分布，生于沙漠草地、高山草甸草地、沙丘、林下灌丛以及田边、路旁，偶进入农田。
据文献报道，披针叶黄华的种子、花、茎叶、根均有毒，是因为其含有大量的金雀花碱。金雀花碱类是指分子内具有a-吡啶酮环的三环或四环结构的喹诺里西啶类生物碱化合物，主要包括三环结构的金雀花碱(cytisine)、N-甲基金雀花碱(N-methylcytisine)和四环结构的臭豆碱(anagyrine)、黄华碱(thermopsine)等。披针叶黄华中的金雀花碱具有极强的生理活性，在临床上用金雀花碱0.15％的水溶液供肌肉或静脉注射，抢救因手术和创伤引起的反射性呼吸暂停、休克和新生儿窒息等，近期研究表明，该类生物碱还具有抗心律失常、抗微生物感染、抗溃疡、升高白细胞等多方面的药理作用，特别是该类化合物具有较强的抗癌活性。另外，有研究称含磷的金雀花碱衍生物还具有保肝作用；金雀花碱是美国辉瑞公司生产的一种新型戒烟药“Varenicline”的主要原料；含金雀花碱的农药组合物是一种高效广谱的农药。
披针叶黄华中的金雀花碱提取，目前主要是以从种籽中提取为主，从种籽中提取的金雀花碱纯度较低，生产成本高。
因此，现有技术存在缺陷，需要改进完善。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种从披针叶黄华草地上部分中提取金雀花碱的方法。
为实现上述目的，本发明提供一种从披针叶黄华草地上部分中提取金雀花碱的方法，其中，包括以下步骤：A1，将盛花期采集的披针叶黄华草地上部分粉碎，经提取、浓缩得浸膏，A2，将所述浸膏用酸水酸化，分离除去酸不溶性杂质，得到含金雀花碱的酸水液，A3，将所述酸水液碱化，再用有机溶媒萃取，得到主要含金雀花碱的总生物碱，A4，将所述总生物碱溶解于水，再用有机溶媒萃取，回收有机溶媒并结晶，得到纯度较高的金雀花碱；A5，将步骤A4得到的所述纯度较高的金雀花碱溶解于有机溶媒，并进行柱层析，得到纯度99％以上的金雀花碱产品。
所述的方法，其中，所述步骤A1具体执行以下操作：将所述披针叶黄华草地上部分粉碎至10-20目，装入不锈钢多功能提取罐中，共加入75％-85％的甲醇12倍量，分3次热回流提取，合并提取液，减压浓缩至相对密度1.15-1.20。
所述的方法，其中，所述步骤A3和A4中，调节溶液PH值至10-13，用有机溶媒萃取，至薄层层析无明显的生物碱反应为止。
所述的方法，其中，所述用有机溶媒萃取的步骤重复两次以上。
所述的方法，其中，所述柱层析使用氧化铝柱进行。
所述的方法，其中，所述氧化铝目数为60-300目。
所述的方法，其中，所述有机溶媒为甲苯、二甲苯、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯中的一种或两种以上混合物。
所述方法，其中，所述酸化步骤采用盐酸、硫酸、磷酸之一进行。
所述方法，其中，所述碱化步骤采用氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、浓氨水之一进行。
所述方法，其中，所述结晶步骤中，结晶溶剂采用丙酮、乙醇、乙酸乙酯中的一种或两种以上混合。
本发明的工艺路线简单，制得的产品成本低、纯度可达99％以上。
附图说明
图1为本发明工艺流程图；
图2为金雀花碱对照品高效液相色谱图，其中峰1保留时间5.047，峰高148150峰面积1151629面积(％)100.0000；
图3为实施例1样品的高效液相色谱图，其中峰1保留时间5.034峰高145466峰面积1135225面积(％)100.0000；
图4为实施例2样品的高效液相色谱图，其中峰1保留时间5.026峰高145687峰面积1142127面积(％)100.0000；
图5为实施例3样品的高效液相色谱图，其中峰1保留时间5.030峰高148150峰面积1151629面积(％)100.0000。
具体实施方式
以下通过具体实施例，对本发明进行详细说明。
本发明薄层层析检测的条件及结果：
1、薄层板：
(1)、市售硅胶G板(青岛海洋化工厂)
(2)、自制硅胶G板：取薄层层析用的硅胶G，用0.5％的羧甲基纤维素钠水溶液调成糊状，搅拌至无气泡，制成薄层板，临用前在105℃的条件下活化30min。
2、对照品：金雀花碱(含量99.5％以上)
3、展开剂：
乙酸乙酯∶甲醇体积比3∶2
4、显色剂：改良的碘化铋钾试剂
5、薄层层析结果：Rf值0.23
实施例1
将盛花期采集的干燥的披针叶黄华草地上部分500kg，粉碎至10-20目，装入4.5吨不锈钢多功能提取罐中，分三次加入2500kg、2000kg、1500kg 75％的甲醇，加热回流提取，加热温度62-65℃，提取时间第一次2小时，第二次2小时，第三次1小时，合并三次提取液，减压浓缩至相对密度1.15(热测)，得浸膏162kg。
在浸膏内加入稀盐酸溶液，调节PH值2-3使生物碱溶解于酸水内，分离除去酸不溶性杂质。酸水层加浓氨水碱化，调节PH值10-11，用二甲苯萃取数次，至薄层层析无明显的生物碱反应为止，回收二甲苯，得总生物碱浸膏为15.1kg。将此总生物碱溶解于水中，调节PH值10-11，用二甲苯萃取数次，至薄层层析无明显的生物碱反应为止，回收二甲苯得金雀花碱黄色结晶1.70kg。将金雀花碱黄色结晶用乙酸乙酯溶解，过60-100目氧化铝柱，回收乙酸乙酯，溶液中有大量的微黄色针状结晶析出，分离结晶，干燥，得到金雀花碱1.25kg，收率为2.5‰，用高效液相色谱法检测纯度为98.7％，如图3所示。
实施例2：
将盛花期采集的干燥的披针叶黄华草地上部分500kg，粉碎至10-20目，装入4.5吨不锈钢多功能提取罐中，分三次加入2500kg、2000kg、1500kg 85％的甲醇，加热回流提取，加热温度62-65℃，提取时间第一次2小时，第二次2小时，第三次1小时，合并三次提取液，减压浓缩至相对密度1.20(热测)，得浸膏149kg。
在浸膏内加入稀盐酸溶液，调节PH值3-4使生物碱溶解于酸水内，分离除去酸不溶性杂质。酸水层加20％氢氧化钠溶液碱化，调节PH值12-13，用二氯甲烷萃取数次，至薄层层析无明显的生物碱反应为止，回收二氯甲烷，得总生物碱浸膏为13.7kg。将此总生物碱溶解于水中，调节PH值12-13，用二氯甲烷萃取数次，至薄层层析无明显的生物碱反应为止，回收二氯甲烷得金雀花碱黄色结晶1.66kg。将金雀花碱黄色结晶用丙酮溶解，过100-200目氧化铝柱，回收丙酮，溶液中有大量的微黄色针状结晶析出，分离结晶，干燥，得到金雀花碱1.38kg，收率为2.76‰，用高效液相色谱法检测纯度为99.0％(如图4所示)。
实施例3：
将盛花期采集的干燥的披针叶黄华草地上部分500kg，粉碎至10-20目，装入4.5吨不锈钢多功能提取罐中，分三次加入2500kg、2000kg、1500kg80％的甲醇，加热回流提取，加热温度62-65℃，提取时间第一次2小时，第二次2小时，第三次1小时，合并三次提取液，减压浓缩至相对密度1.19(热测)，得浸膏156kg。
在浸膏内加入稀盐酸溶液，调节PH值2-3使生物碱溶解于酸水内，分离除去酸不溶性杂质。酸水层加10％氢氧化钠溶液碱化，调节PH值12-13，用三氯甲烷萃取数次，至薄层层析无明显的生物碱反应为止，回收三氯甲烷，得总生物碱浸膏为14.5kg。将此总生物碱溶解于水中，调节PH值12-13，用三氯甲烷萃取数次，至薄层层析无明显的生物碱反应为止，回收三氯甲烷得金雀花碱黄色结晶1.88kg。将金雀花碱黄色结晶用丙酮溶解，过200-300目氧化铝柱，回收丙酮，溶液中有大量的微黄色针状结晶析出，分离结晶，干燥，得到金雀花碱1.47kg，收率为2.94‰，用高效液相色谱法检测纯度为99.2％(如图5所示)。
上述实施例1至3中采用的高效液相色谱法检测条件为：
色谱柱：C18柱(4.6mm×250mm，5um)流动相：0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(含磷酸2ml)∶甲醇∶高氯酸钠(85ml∶15ml∶1.0g)；
检测波长：306nm
流速：1ml/min
柱温：25℃
进样浓度：0.1mg/Ml
进样量：10uL；理论塔板数按金雀花碱峰计算应不低于5000。
应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。