灯盏乙素苷元衍生物及其制备方法和其应用.pdf

摘要
申请专利号：	CN201010177202.5	申请日：	2010.05.20
公开号：	CN101891728A	公开日：	2010.11.24
当前法律状态：	授权	有效性：	有权
法律详情：	授权\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):C07D 311/30申请日:20100520\|\|\|公开
IPC分类号：	C07D311/30; C07D405/12; A61K31/352; A61K31/4025; A61K31/5377; A61K31/453; A61P9/10; A61P7/02	主分类号：	C07D311/30
申请人：	南京中医药大学
发明人：	唐于平; 李念光; 段金廒
地址：	210029 江苏省南京市汉中路282号
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专利代理机构：		代理人：
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内容摘要

本发明涉及药物化学研究领域，具体涉及一类新型的灯盏乙素苷元-6-位衍生物(I)，以及它的制备方法和在防治血栓药物中的应用。药理实验结果表明，这类化合物与灯盏乙素和灯盏乙素苷元相比，具有更好的抑制血小板聚集的作用。本发明提供的灯盏乙素苷元-6-位衍生物(I)可用于由于血栓而导致的一系列疾病，例如心肌梗死、缺血性损伤等疾病。

权利要求书

1.灯盏花乙素苷元-6-位衍生物，其特征在于，它们是具有通式(I)所示的化合物：其中R代表取代醚基，取代基为氢、烃基、卤素、羰基、氰基、硝基、氨基、取代氨基、羟基、醚基、羧基、酯基或酰氨基；或者R代表取代酰基，取代基为氢、卤素、羰基、氰基、硝基、氨基、取代氨基、羟基、醚基、羧基、酯基、酰氨基、C₁～C₁₀烷基、C₁～C₁₀烷氧基、C₁～C₁₀氨基烷基、C₁～C₁₀烷基胺基、C₁～C₁₀硫代烷基、C₁～C₁₀全氟烷基、C₁～C₁₀全氟烷氧基、C₁～C₁₀烷氧基羰基、硝基或氨基。2.根据权利要求1所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物，其特征在于，所述的取代氨基为R₁NH或R₁R₂N，其中R₁或R₂为C_1～6的烃基、R₁、R₂连接成环状或者通过1～3个杂原子连接成环状。3.一种制备权利要求1或2所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物的方法，其特征在于包括以下步骤：a、取灯盏乙素(1)为起始原料，在K₂CO₃的作用下，与溴苄烷基化反应得到4’位，6位苄基化的灯盏乙素化合物(2)，备用；b、取步骤a得到的苄基化灯盏乙素化合物(2)在浓硫酸的催化下，于95％乙醇溶液中加热水解，得到6位选择性取代的苄基化的灯盏乙素苷元化合物(3)；c、取步骤b得到的6位苄基化的灯盏乙素苷元化合物(3)，在碱性条件下，在丙酮溶液中与氯甲醚反应得到4’位，7位甲氧基亚甲基取代的灯盏乙素苷元衍生物(4)；d、取步骤c得到的灯盏乙素苷元衍生物(4)在钯/碳催化剂条件下，氢化脱苄基得到灯盏乙素苷元衍生物(5)；e、取步骤d得到的灯盏乙素苷元衍生物(5)在碱性条件下与溴代烷或取代酰氯反应得到化合物(6)，化合物(6)在酸性条件下催化生成灯盏乙素苷元-6-位衍生物。4.根据权利要求3所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物的制备方法，其特征在于，步骤a中灯盏乙素(1)与K₂CO₃的摩尔用量比为1∶2～2.5，灯盏乙素与溴苄的摩尔用量比为1∶2～2.3，反应溶剂为2，5-二甲基呋喃，反应温度为25～30℃，反应时间为6～8小时。5.根据权利要求3所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物的制备方法，其特征在于，步骤b中所用的浓硫酸的摩尔浓度为0～3mol/L，化合物(2)与95％乙醇的用量比为5g/100ml～10g/100ml，反应温度为70～90℃；反应时间为3～6小时。6.根据权利要求3所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物的制备方法，其特征在于，步骤c中所用的碱为碳酸钾，化合物(3)与碳酸钾的摩尔用量比为1∶2～2.4，且化合物(3)与氯甲醚的摩尔用量比为1∶2～2.2，反应温度为60～70℃；反应时间为8～12小时。7.根据权利要求3所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物的制备方法，其特征在于，步骤d所述的钯/碳催化剂浓度为5％～10％，反应溶剂为甲醇、乙醇或四氢呋喃，反应温度为25～30℃。8.根据权利要求3所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物的制备方法，其特征在于，步骤e中灯盏乙素苷元衍生物(5)与溴代烷烃或取代酰氯的摩尔用量比为1∶1～3，灯盏乙素苷元衍生物(5)与溴代烷烃反应所用的碱为碱金属、碱金属氢化物、碱金属氧化物、碱土金属、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱土金属碳酸氢盐；灯盏乙素苷元衍生物(5)与取代酰氯反应所用的碱为有机叔胺类碱或季铵碱，且灯盏乙素苷元衍生物(5)与碱的用量摩尔比为1∶1～4，反应溶剂为二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺或甲苯，反应温度为20～30℃；反应时间为2～48小时。9.权利要求1或2所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物的盐，其特征在于，灯盏乙素苷元-6-位衍生物与碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱土金属碳酸氢盐反应制备得到。10.权利要求1或2所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物在制备防治心肌梗死、缺血性损伤等血栓性疾病药物中的应用。

说明书

灯盏乙素苷元衍生物及其制备方法和其应用

技术领域

本发明涉及药物化学研究领域，具体涉及一类新型的灯盏乙素苷元-6-位衍生物(I)，以及它的制备方法和在防治血栓药物中的应用。

背景技术

灯盏乙素苷元是菊科短亭飞蓬类植物灯盏花中的一个黄酮类化合物，灯盏花又名灯盏细辛，别称灯盏菊、土细辛、地顶草、细辛草、东菊等，灯盏花性寒、微苦、甘温辛，具有散寒解表、祛风除湿、活血化瘀、通经活络、消炎止痛的功效。灯盏花素是从天然植物灯盏花中提取的黄酮类活性成份，有灯盏甲素、灯盏乙素等的混合物，主要为灯盏乙素(含量占有95％以上)(陈一岳，王胜涛，曾文珊，朱颖虹，傅咏梅，江涛.灯盏花素对大鼠主动脉肌环的松弛作用.中药新药与临床药理.1994，5(2)，15-19)。上世纪从70年代起灯盏花素制剂就开始应用于临床，通过近30年的临床应用和广深入的药理研究，其独特的疗效和安全低毒的特点已得到社会认可，现代药物研究证明，灯盏花素具有增加血流量，改善微循环、扩张血管、降低血粘度、降血脂、促纤溶、抗血栓、抗血小板聚集等作用，其注射剂和片剂已成为临床常用药品，在治疗心脑血管疾病、风湿性关节炎和中风后遗症等方面有显著的疗效。

现代临床研究发现，灯盏花素临床应用过程中生物利用度比较低，一方面是溶解性差，文献报道灯盏花素在水中的溶解度仅为0.16mg·mL^-1(张海燕，平其能，郭健新，操锋.灯盏花素及其β-环糊精包合物在大鼠体内的药代动力学.药学学报，2005，40(6)，563-567)，其次灯盏花素脂溶性也很差在pH4.2的PBS溶液中，logP为-2.56(操锋，郭健新，平其能，邵云，梁静.灯盏乙素酯类前药的合成、理化性质及降解研究.药学学报，2006，41(7)，595-602)。另外研究还发现，灯盏花素生物利用度比较低的原因除了溶解性差，很难吸收以外，还有一个重要的原因是其主要成分灯盏乙素在体内很容易代谢，葛庆华等人研究发现不论口服还是静脉给药，灯盏乙素在动物体内代谢消除速度快，Beagle犬口服绝对生物利用度仅(0.40±0.19)％(葛庆华，周臻，支晓瑾，马丽丽，陈秀华.灯盏花素在犬体内的药动学和绝对生物利用度研究.中国医药工业杂志，2003，34(12)，618-621)，而家犬静注消除半衰期短，为(52±29)min(蒋学华，李素华，兰轲，杨俊毅，周静.灯盏花素在家犬体内的药代动力学.药学学报.2003，38(5)，371-373)。冯芳等人研究了人体口服60mg小剂量灯盏乙素滴丸后的药动学参数，发现灯盏乙素在体内消除很快，生物半衰期仅为(2.27±0.58)min(冯芳，沈于兰.人血浆中痕量灯盏乙素SPE-HPLC/MS/MS的建立及药动学研究.中国药学杂志.2006，41(6)，457)，灯盏乙素因其溶解性差和生物利用度低大大限制了其临床应用。

国内一些科研人员希望借助于开发灯盏花素新剂型，以提高其口服生物利用度或延长其体内半衰期。近几年来，已公开的发明专利多达59项，涉及注射剂、脂质体、磷脂复合物、口腔速崩片、舌下片、缓释微丸、渗透泵控释制剂、环糊精包合物、滴丸、自乳化剂等。但目前上市的新剂型不多，这表明通过剂型的改变不能很好的改善灯盏花素溶解性差、吸收差、生物利用度低的问题。

灯盏乙素的刚性结构，是限制其透膜吸收的重要原因，水解掉葡萄糖醛酸基，分子结构变小，刚性降低，有利于其口服吸收。居文政等人测定灯盏乙素血药浓度及其临床药代动力学，受试者口服给药360mg灯盏乙素，在1、3、5、8h取血测灯盏乙素，但只有在5h时检测到20ng·mL^-1，而在血浆和尿中发现大量苷元，提示灯盏乙素可能是到达结肠被水解为苷元而吸收，推断口服灯盏乙素在体内真正起效的可能是苷元(LiuY，HuM.Absorption andmetabolism of flavonoids in the Caco-2 cell culture model and a perfused rat intestinal model.DrugMetab Dispos，2002，30(4)，370-377)。车庆明等研究报道灯盏乙素苷元口服易于吸收，与灯盏乙素相比，体内代谢稳定，其相对生物利用度为301.8％(车庆明，潘丽怡，陈颖，何红.灯盏乙素苷元的药动学研究.中国药学杂志.2007，42(18)，1418-1421)。由于灯盏乙素苷元比灯盏乙素具有更好的药理作用和生物利用度，因此，对溶解度和生物利用度相对较高的灯盏乙素苷元进行结构修饰，在心脑血管疾病药物研究方面，将具有非常重大的意义。

发明内容：

发明目的：本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术的不足，以灯盏花乙素苷为原料经过烷基化、苷水解、选择性甲醚化、氢化脱苄基、6位烷基化或酰化、脱去甲醚保护基团从而合成系列具有药用价值且溶解性好，生物利用度高、不良反应低，用药安全的灯盏花乙素苷元-6-位衍生物，本发明另一个目的是提供灯盏花乙素苷元-6-位衍生物的制备方法和其在制备防治血栓疾病药物中的应用。

技术方案：为了实现以上目的，本发明提供的灯盏花乙素苷元-6-位衍生物的通式(I)如下：

其中R代表取代醚基，取代基可为氢、烃基、卤素、羰基、氰基、硝基、氨基、取代氨基、羟基、醚基、羧基、酯基或酰氨基；

作为优选方案，以上所述的取代氨基为R₁NH或R₁R₂N，其中R₁或R₂为C1～6的烃基、R₁、R₂连接成环状或者通过1～3个杂原子连接成环状。

作为优选方案，以上所述的烃基为芳香烃或C1～15的脂肪烃取代基。

作为优选方案，以上所述的醚基可为C1～10的醚基，所述的羧基为芳香羧基或C1～8的脂肪或脂环羧基，所述的酯基为芳香酯基或C1～8的脂肪或脂环酯基；或作为另一优选方案，其中所述的酰胺基可为芳香酰氨基或C1～8的脂肪或脂环酰氨基。

作为另一优选方案，其中以上所述的的卤素可以为F、Cl、Br或I。

或者R也可代表取代酰基，取代基为氢、卤素、羰基、氰基、硝基、氨基、取代氨基、羟基、醚基、羧基、酯基、酰氨基、C1～C10烷基、C1～C10烷氧基、C1～C10氨基烷基、C1～C10烷基胺基、C1～C10硫代烷基、C1～C10全氟烷基、C1～C10全氟烷氧基、C1～C10烷氧基羰基、硝基或氨基。

作为优选方案，所述的取代氨基为R₁NH或R₁R₂N，其中R₁或R₂为C1～6的烃基、R₁、R₂连接成环状或者通过1～3个杂原子连接成环状。

作为优选方案，所述的醚基可为C1～10的醚基，所述的羧基为芳香羧基或C1～10的脂肪或脂环羧基，所述的酯基为芳香酯基或C1～10的脂肪或脂环酯基；或作为另一优选方案，其中所述的酰氨基可为芳香酰氨基或C1～10的脂肪或脂环酰氨基。

作为优选方案，其中以上所述的的卤素可以为F、Cl、Br或I

本发明提供的灯盏乙素苷元-6-位衍生物的制备方法，具体包括以下步骤：

a、取灯盏乙素(1)为起始原料，在K₂CO₃的作用下，与溴苄烷基化反应得到4’位，6位苄基化的灯盏乙素化合物(2)，备用；

b、取步骤a得到的苄基化灯盏乙素化合物(2)在浓硫酸的催化下，于95％乙醇溶液中加热水解，得到6位选择性取代的苄基化的灯盏乙素苷元化合物(3)；

c、取步骤b得到的6位苄基化的灯盏乙素苷元化合物(3)，在碱性条件下，在丙酮溶液中与氯甲醚反应得到4’位，7位甲氧基亚甲基取代的灯盏乙素苷元衍生物(4)；

d、取步骤c得到的灯盏乙素苷元衍生物(4)在钯/碳催化剂条件下，氢化脱苄基得到灯盏乙素苷元衍生物(5)；

e、取步骤d得到的灯盏乙素苷元衍生物(5)在碱性条件下与溴代烷或取代酰氯反应得到化合物(6)，化合物(6)在酸性条件下催化生成具有通式(I)所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物。

作为优选方案，以上所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物的制备方法，步骤a中灯盏乙素(1)与K₂CO₃的摩尔用量比为1∶2～2.5，作为更优的方案，灯盏乙素(1)与K₂CO₃的摩尔用量比为1∶2.5；且灯盏乙素与溴苄的摩尔用量比为1∶2～2.3，作为更优的方案，灯盏乙素与溴苄的摩尔用量比为1∶2.3，且步骤a反应溶剂为2，5-二甲基呋喃，反应温度为25～30℃，反应时间为6～8小时。

作为优选方案，以上所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物的制备方法，步骤b中所用的浓硫酸的摩尔浓度为0～3mol/L，化合物(2)与95％乙醇的用量比为5g/100ml～10g/100ml，反应温度为70～90℃；反应时间为3～6小时。

作为优选方案，步骤c中所用的碱为碳酸钾，化合物(3)与碳酸钾的摩尔用量比为1∶2～2.4，且化合物(3)与氯甲醚的摩尔用量比为1∶2～2.2，反应温度为60～70℃；反应时间为 8～12小时，作为更优的方案，化合物(3)与碳酸钾的摩尔用量比为1∶2.4，且化合物(3)与氯甲醚的摩尔用量比为1∶2.2。

作为优选方案，本发明所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物的制备方法，步骤d所述的钯/碳催化剂浓度为5％或10％，反应溶剂为甲醇、乙醇或四氢呋喃，反应温度为25～30℃，反应时间为3～12小时。

作为优选方案，本发明所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物的制备方法，步骤e中灯盏乙素苷元衍生物(5)与溴代烷烃或取代酰氯的摩尔用量比为1∶1～3，灯盏乙素苷元衍生物(5)与溴代烷烃反应所用的碱为碱金属、碱金属氢化物、碱金属氧化物、碱土金属、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱土金属碳酸氢盐；灯盏乙素苷元衍生物(5)与取代酰氯反应所用的碱可为三乙胺、三丁胺、三辛胺、吡啶、N，N-二甲基-α-苯乙胺、4-甲基吗啉等有机叔胺类碱或四丁基氢氧化铵等季胺类碱；且步骤e中灯盏乙素苷元衍生物(5)与碱的用量摩尔比为1∶1～4，反应溶剂为二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺或甲苯，反应温度为20～30℃，反应时间为2～48小时。作为另一优选方案，步骤e中化合物(6)在酸性条件下催化生成灯盏乙素苷元-6-位衍生物，所用的催化剂为浓盐酸或浓硫酸，催化反应溶剂为甲醇、乙醇、二氯甲烷、四氢呋喃或它们的混合物，反应温度为0℃～25℃。

本发明提供的灯盏乙素苷元-6-位衍生物在制备防治权利要求1或2所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物在制备防治心肌梗死、缺血性损伤等血栓性疾病药物中的应用，作为优选方案，灯盏乙素苷元-6-位衍生物分子结构中存在多个羟基，从而显示一定的酸性，可以把灯盏乙素苷元-6-位衍生物和碱金属、碱土金属氢氧化物、碱金属碳酸盐或碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱土金属碳酸氢盐反应形成盐。作为进一步优选方案，将灯盏乙素苷元-6-位衍生物盐和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、喷雾剂、注射剂、微囊、软膏剂或透皮控释贴剂剂型的药物。

本发明提供的灯盏乙素苷元-6-位衍生物盐制成片剂时，把灯盏乙素苷元-6-位衍生物盐和载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。本发明提供的灯盏乙素苷元-6-位衍生物盐制成胶囊剂时把灯盏乙素苷元-6-位衍生物盐和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。本发明提供的灯盏乙素苷元-6-位衍生物盐制成颗粒剂时，把组合物和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。如把本发明提供的灯盏乙素苷元-6-位衍生物盐制成注射液时，取灯盏乙素苷元-6-位衍生物盐加入增溶剂，搅拌均匀，80℃加热30分钟，过滤，调节PH值，用垂熔玻璃漏斗或其它滤器过滤至澄明，灌装，在100至115℃灭菌30分钟制成注射液。

有益效果：本发明提供的灯盏乙素苷元-6-位衍生物和现有技术现比具有以下优点：

1、本发明提供的系列灯盏乙素苷元-6-位衍生物，通过在灯盏乙素苷元-6-位选择性的连接酯溶性和水溶性官能团，得到的灯盏乙素苷元-6-位衍生物溶解性好，可提高人体服用后生物利用度，增强抗血栓药理活性，且不良反应低，用药更安全，且灯盏乙素苷元-6-位衍生物可以和多种碱反应制备得到盐化物，并可制成多种药物剂型，方便临床用药。

2、本发明提供的灯盏乙素苷元-6-位衍生物的制备方法，以灯盏乙素苷为原料经过烷基化、苷水解、选择性甲醚化、氢化脱苄基、6-位选择性烷基化或选择性酰基化、脱去甲醚保护基团从而合成系列具有药用价值且溶解性好，生物利用度高的灯盏乙素苷元-6-位衍生物的新化合物，本发明提供的制备方法，可操作性强，生产效率高，成本低，且成品得率高、纯度高。

附图说明

图1为本发明所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物通式(I)的结构示意图。

图2为本发明所述的灯盏乙素苷元-6-位衍生物制备方法的反应流程图。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1 4’，6-二苄氧基-5-羟基-7-葡萄糖醛酸氧基黄酮(2)的制备

在反应瓶中依次加入灯盏乙素2.4g，DMF，K₂CO₃(2.5equiv)，在惰性气体氮气保护下，加入溴化苄(2.3equiv)，25℃反应8小时，反应结束后，加入冰水，控制PH≤6，析出固体，抽滤，干燥得黄色固体2.7克。收率81％。

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：627.01[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，7.20(10H，Ar-H)，5.22(2H，s，H-CHAr)，5.16(2H，s，H-CHAr)，5.51(1H，d，J＝12，1”-H).

实施例2 4’，5，7-三羟基-6-苄氧基黄酮(3)的制备

取实例1制得的化合物23.2g，加入1mol/L的硫酸乙醇溶液中，在惰性气体的保护下，80℃反应12小时，反应结束后，加入冰水，控制PH在5-6，析出黄色固体，抽滤，所得粗品以柱层析纯化得黄色固体0.9g(洗脱液：二氯甲烷∶甲醇)。收率48％。

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：375.01[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，7.20(5H，Ar-H)，5.18(2H，s，1”-H).

实施例3 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-苄氧基黄酮(4)的制备

将1.65g的K₂CO₃、1.9g中间体3，依次投入30ml丙酮中，室温搅拌30分钟后加入MOMCl(1.5equiv)，升温至室70℃搅拌反应12小时。反应结束后加入适量冰水，控制PH4-7，抽滤，滤饼以少量冰水洗。所得粗品经重结晶得黄色固体1.7g(溶剂：乙醚/乙醇)。产率：72.6％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：463.15[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，7.20(5H，m，Ar-H)，5.22(2H，s，1”-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃).

实施例4 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5，6-二羟基黄酮(5)的制备

将1.7g中间体4、0.085g催化剂Pd-C加入到乙醚/甲醇混合溶液中，通H2，25℃反应12小时，抽滤除去催化剂，蒸去溶剂，得黄色粗品，粗品以乙醚/乙醇重结晶的黄色粉末状固体1.05g。收率77％。

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：373.01[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，8.48(1H，s，6-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃).

实施例5 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-甲氧基黄酮(6a)的制备

将750mg的中间体5、415mg的K₂CO₃依次加入到30mL的DMF中，室温搅拌30分钟后加入CH₃I 0.15mL，室温搅拌24小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取反应液，水与饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化得黄色粉末624mg。产率：80％。

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：387.11[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，3.36(3H，s，-OCH₃).

实施例6 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-乙氧基黄酮(6b)的制备

将750mg的中间体5、415mg的K₂CO₃依次加入到30mL的DMF中，室温搅拌30分钟后加入CH₃CH₂I 0.19mL，室温搅拌24小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取反应液，水与饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化得黄色粉末660mg。产率：82.5％。

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：401.05[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，3.42(2H，t，-OCH₂)，1.33(3H，t，-CH₃)

实施例7 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-丙氧基黄酮(6c)的制备

将750mg的中间体5、415mg的K₂CO₃依次加入到30mL的DMF中，室温搅拌30分钟后加入CH₃CH₂CH₂I 0.24mL，室温搅拌24小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取反应液，水与饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化得黄色粉末640mg。产率：77％。

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：415.09[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，3.42(2H，t，-OCH₂)，1.53(2H，m，-CH₂-)，1.03(3H，t，-CH₃)

实施例8 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-丁氧基黄酮(6d)的制备

将750mg的中间体5、415mg的K₂CO₃依次加入到30mL的DMF中，室温搅拌30分钟后加入CH₃CH₂CH₂CH₂I 0.45mL，室温搅拌24小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取反应液，水与饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化得黄色粉末730mg。产率：86％。

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：429.11[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，3.42(2H，t，-OCH₂)，1.53(2H，m，-CH₂-)，1.23(2H，m，-CH₂-)，1.03(3H，t，-CH₃).

实施例9 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-乙酰氧基黄酮(6e)的制备

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的氯乙酰，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得淡黄色粉末526mg。产率：63％.

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：415.01[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)， 3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，2.23(3H，s，-COCH₃)

实施例10 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-丙酰氧基黄酮(6f)的制备

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的氯丙酰，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得淡黄色粉末569mg。产率：66％.

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：429.03[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，2.27(2H，s，-COCH₂)，1.03(3H，t，-CH₃).

实施例11 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-丁酰氧基黄酮(6g)的制备

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的丁酰氯，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得淡黄色粉末632mg。产率：71％.

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：443.11[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，2.27(2H，s，-COCH₂)，1.43(2H，m，-CH₂-)，1.03(3H，t，-CH₃).

实施例12 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-苯甲酰氧基黄酮(6h)的制备

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的苯甲酰氯，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得黄色粉末613mg。产率：64％.

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：477.05[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，7.31-8.11(5H，m，-ArH).

实施例13 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-(N-四氢吡咯甲酰氧基)-黄酮(6i)的制备

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的四氢吡咯甲酰氯，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得淡黄色结晶727mg。产率：77％.

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：470.13[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，2.79(4H，t，-N(CH₂)₂-)，1.48(4H，t，-CH₂-CH₂-).

实施例14 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)-黄酮(6j)的制备

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的N，N-二甲基氨基甲酰氯，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得淡黄色结晶678mg。产率：76％.

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：444.12[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，2.69(6H，s，-NCH₃).

实施例15 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-(N，N-二乙基氨基甲酰氧基)-黄酮(6k)的制备

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的N，N-二乙基氨基甲酰氯，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得淡黄色结晶768mg。产率：81％.

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：472.13[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，2.89(4H，q，-NCH₂-)，1.38(6H，t，-CH₃).

实施例16 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-(N，N-二异丙基氨基甲酰氧基)-黄酮(6l)的制备

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的N，N-二异丙基氨基甲酰氯，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得淡黄色结晶623mg。产率：63％.

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：500.01[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d， j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，2.92(2H，q，-NCH-)，1.18(12H，d，-CH₃)

实施例17 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-(N-吗啉甲酰氧基)-黄酮(6m)的制备

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的N-吗啉甲酰氯，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得黄色结晶828mg。产率：85％.

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：486.01[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，2.79(4H，t，-NCH₂-)，2.98(4H，t，-OCH₂-).

实施例18 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-(N-甲基-N-乙基氨基甲酰氧基)-黄酮(6n)的制备

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的N-甲基-N-乙基氨基甲酰氯，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得淡黄色结晶571mg。产率：62％.

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：458.02[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，2.77(2H，q，-NCH₂-)，2.45(3H，s，-NCH₃)，1.18(3H，T，-CH₃).

实施例19 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-(N-哌啶甲酰氧基)-黄酮(6o)的制备

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的N-哌啶甲酰氯，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得黄色结晶836mg。产率：86％.

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：484.11[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，2.79(4H，t，-NCH₂-)，1.68(4H，dd，-CH₂-)，1.44(2H，dd，-CH₂-)

实施例20 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-[N-(4-苄基)哌啶甲酰氧基]-黄酮(6p)的制备

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的N-(4-苄基)哌啶甲酰氯，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得淡黄色粉末645mg。产率：56％.

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：574.10[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，2.79(4H，t，-NCH₂-)，1.48(4H，m，-CH₂-)，1.54(2H，m，-CH₂-)，2.20(2H，d，-ArCH₂)，7.35-8.21(5H，m，-ArH)

实施例21 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-[N-(4-甲基)哌啶甲酰氧基]-黄酮(6q)的制备

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的N-(4-甲基)哌啶甲酰氯，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得黄色结晶629mg。产率：63％.

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：498.02[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，2.79(4H，t，-NCH₂-)，1.48(4H，m，-CH₂-)，1.54(2H，m，-CH₂-)，1.20(3H，d，-CH₃).

实施例22 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-(丙氨基甲酰氧基)-黄酮(6r)的制备

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的丙氨基甲酰氯，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得淡黄色结晶667mg。产率：75％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：444.02[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，2.39(2H，t，-COCH₂-)，2.48(2H，t，-NCH₂-)，5.71(2H，s，-NH₂)

实施例23 4’，5，7-三羟基-6-甲氧基黄酮(Ia)的制备

取620mg中间体6a，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体产物364mg。产率：76％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：299.01[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，4.18(3H，s，-OCH₃).

实施例24 4’，5，7-三羟基-6-乙氧基黄酮(Ib)的制备

取500mg中间体6b，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体产物355mg。产率：916％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：313.02[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，3.42(2H，t，-OCH₂)，1.33(3H，t，-CH₃)

实施例25 4’，5，7-三羟基-6-丙氧基黄酮(Ic)的制备

取500mg中间体6c，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体产物3mg。产率：85％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：327.03[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，3.42(2H，t，-OCH₂)，1.53(2H，m，-CH₂-)，1.03(3H，t，-CH₃)

实施例26 4’，5，7-三羟基-6-丁氧基黄酮(Id)的制备

取500mg中间体6d，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体产物350mg。产率：88％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：341.00[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，3.42(2H，t，-OCH₂)，1.53(2H，m，-CH₂-)，1.23(2H，m，-CH₂-)，1.03(3H，t，-CH₃).

实施例27 4’，5，7-三羟基-6-乙酰氧基黄酮(Ie)的制备

取500mg中间体6e，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得淡黄色固体产物339mg。产率：86％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：315.00[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，2.23(3H，s，-COCH₃).

实施例28 4’，5，7-三羟基-6-丙酰氧基黄酮(If)的制备

取500mg中间体6f，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得淡黄色固体产物350mg。产率：88％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：329.13[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，2.27(2H，s，-COCH₂)，1.03(3H，t，-CH₃).

实施例29 4’，5，7-三羟基-6-丁酰氧基黄酮(Ig)的制备

取500mg中间体6g，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得淡黄色固体产物325mg。产率：81％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：355.0[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，2.27(2H，s，-COCH₂)，1.43(2H，m，-CH₂-)，1.03(3H，t，-CH₃)。

实施例30 4’，5，7-三羟基-6-苯甲酰氧基黄酮(Ih)的制备

取500mg中间体6h，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得淡黄色固体产物326mg。产率：80％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：389.08[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，7.31-8.11(5H，m，-ArH).

实施例31 4’，5，7-三羟基-6-(N-四氢吡咯甲酰氧基)-黄酮(Ii)的制备

取500mg中间体6i，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得淡黄色固体结晶341mg。产率：84％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：381.11[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，2.79(4H，t，-N(CH₂)₂-)，1.48(4H，t，-CH₂-CH₂-).

实施例32 4’，5，7-三羟基-6-(N，N-二甲基氨基甲酰氧基)-黄酮(Ij)的制备

取500mg中间体6j，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体结晶345mg。产率：86％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：356.12[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，2.69(6H，s，-NCH₃).

实施例33 4’，5，7-三羟基-6-(N，N-二乙基氨基甲酰氧基)-黄酮(Ik)的制备

取500mg中间体6k，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体结晶326mg。产率：80％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：384.07[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，2.89(4H，q，-NCH₂-)，1.38(6H，t，-CH₃).

实施例34 4’，5，7-三羟基-6-(N，N-二异丙基氨基甲酰氧基)-黄酮(Il)的制备

取500mg中间体6l，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体结晶330mg。产率：80％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：412.03[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，2.92(2H，q，-NCH-)，1.18(12H，d，-CH₃)

实施例35 4’，5，7-三羟基-6-(N-吗啉甲酰氧基)-黄酮(Im)的制备

取500mg中间体6m，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体结晶324mg。产率：79％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：398.11[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，2.79(4H，t，-NCH₂-)，2.98(4H，t，-OCH₂-)。

实施例36 4’，5，7-三羟基-6-(N-甲基-N-乙基氨基甲酰氧基)-黄酮(In)的制备

取500mg中间体6n，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体结晶320mg。产率：79％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：370.09[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，2.77(2H，q，-NCH₂-)，2.45(3H，s，-NCH₃)，1.18(3H，T，-CH₃).

实施例37 4’，5，7-三羟基-6-(N-哌啶甲酰氧基)-黄酮(Io)的制备

取500mg中间体6o，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体产物315mg。产率：77％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：396.01[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，2.79(4H，t，-NCH₂-)，1.68(4H，dd，-CH₂-)，1.44(2H，dd，-CH₂-)

实施例38 4’，5，7-三羟基-6-[N-(4-苄基)哌啶甲酰氧基]-黄酮(Ip)的制备

取500mg中间体6p，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体产物343mg。产率：81％

实施例39 4’，5，7-三羟基-6-[N-(4-甲基)哌啶甲酰氧基]-黄酮(Iq)的制备

取620mg中间体6q，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体产物362mg。产率：88％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：410.15[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，2.79(4H，t，-NCH₂-)，1.48(4H，m，-CH₂-)，1.54(2H，m，-CH₂-)，2.20(2H，d，-ArCH₂)，7.35-8.21(5H，m，-ArH)

实施例40 4’，5，7-三羟基-6-(丙氨基甲酰氧基)-黄酮(Ir)的制备

取500mg中间体6r，加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体结晶277mg。产率：69％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：356.12[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，2.79(4H，t，-NCH₂-)，1.48(4H，m，-CH₂-)，1.54(2H，m，-CH₂-)，1.20(3H，d，-CH₃).

实施例41 4’，5，7-三羟基-6-甲酰氧基-黄酮的制备(Is)

取750mg的中间体5、4ml无水吡啶依次加入到30ml的DMF中，室温搅拌反应30分钟后加入2.4mmol的甲酰氯，室温反应24小时。反应结束后反应液倒入冰水中以乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化，得淡黄色粉末，即4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-甲酰氧基黄酮526mg。产率：63％.

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：415.01[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，5.16(2H，s，-OCH₂O-)，5.23(2H，s，-OCH₂O-)，3.21(3H，s，-OCH₃)，3.48(3H，s，-OCH₃)，9.13(1H，s，-COH)

取4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-甲酰氧基黄酮500mg加入到20ml二氯甲烷与乙醚的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得淡黄色固体产物，即4’，5，7-三羟基-6-甲酰氧基-黄酮339mg。产率：86％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：315.00[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，9.14(3H，s，-COH).

实施例42 4’，5，7-三-羟基-6-碘代甲氧基黄酮的制备

将750mg的中间体5、415mg的K₂CO₃依次加入到30mL的DMF中，室温搅拌30分钟后加入CH₂I₂ 0.58mL，室温搅拌24小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取反应液，水与饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化得黄色粉末740mg，产率： 87％。取500mg 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-碘代甲氧基黄酮，加入到20ml二氯甲烷与乙醇的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时，反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体产物，即4’，5，7-三羟基-6-碘代甲氧基黄酮349mg，产率：87％，纯度99％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：425.00[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，3.82(2H，t，-OCH₂I)。

实施例434’，5，7-三羟基-6-N-甲基-N-丙基氨基亚甲氧基黄酮

将750mg的中间体5、415mg的K₂CO₃依次加入到30mL的DMF中，室温搅拌30分钟后加入CH₃NC₃H₇CH₂I 0.65mL，室温搅拌24小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取反应液，水与饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化得黄色粉末760mg，产率：88％。取500mg 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-N-甲基N-丙基氨基亚甲氧基黄酮，加入到20ml三氯甲烷与乙醇的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时，反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体产物，即4’，5，7-三羟基-6-N-甲基-N-丙基氨基亚甲氧基黄酮353mg，产率：88.5％，纯度99.5％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：370.00[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，3.42(2H，t，-OCH₂)，3.72(3H，c，-NCH₃)，3.75(2H，t，-NCH₂)，1.23(2H，m，-CH₂-)，1.03(3H，t，-CH₃)。

实施例44 4’，5，7-三羟基-6-羧基亚甲氧基黄酮的制备

将750mg的中间体5、415mg的K₂CO₃依次加入到30mL的DMF中，室温搅拌30分钟后加入HOOCCH₂I 0.71mL，室温搅拌24小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取反应液，水与饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化得黄色粉末729mg，产率：86％。取500mg 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-羧基亚甲氧基黄酮，加入到20ml三氯甲烷与乙醇的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时，反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体产物，即4’，5，7-三羟基-6-羧基亚甲氧基黄酮370mg，产率：86％，纯度99.8％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：343.00[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，3.62(2H，t，-OCH₂)，12.54(1H，s，-COOH)。

实施45 4’，5，7-三羟基-6-羟基亚甲氧基黄酮的制备

将750mg的中间体5、415mg的K₂CO₃依次加入到30mL的DMF中，室温搅拌30分钟后加入HOCH₂I 0.65mL，室温搅拌24小时。反应结束后以乙酸乙酯萃取反应液，水与饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以柱层析纯化得黄色粉末734mg，产率：87％。取500mg 4’，7-二甲氧基亚甲基氧-5-羟基-6-羟基亚甲氧基黄酮，加入到20ml三氯甲烷与乙醇的混合溶液(1∶1)中，冰浴下加入2ml的浓盐酸，缓慢升温至室温，搅拌6小时，反应结束后以乙酸乙酯萃取，水和饱和食盐水各洗两次，无水硫酸镁干燥。旋去溶剂，所得粗品以硅胶柱层析分离得黄色固体产物，即4’，5，7-三羟基-6-羟基亚甲氧基黄酮388mg，产率：89％，纯度99.9％

所得化合物光谱数据为：

MS(TOF，m/z)：343.00[M-H]^-.

¹HNMR(DMSO-d₆，300MHz)：12.97(5-OH)，10.44(1H，s，7-OH)，10.30(1H，s，4’-OH)，7.91(2H，d，j＝8.58，2’，6’-ArH)，6.92(2H，d，j＝8.58，3’，5’-ArH)，6.74(1H，s，3-H)，6.57(1H，s，8-H)，3.68(2H，t，-OCH₂)，5.6(1H，s，-OH)。

实施例46 灯盏花乙素苷元-6-位衍生物对大鼠凝血酶时间的影响

目前，抗血栓化合物的筛选常规方法是考察化合物抑制血小板聚集的活性和对凝血酶时间的影响，本发明通过测定化合物对凝血酶时间的影响来考察各化合物抗血栓活性。

具体方法：取健康雄性家兔，30mg/kg家兔体重的戊巴比妥钠生理盐水溶液耳缘静脉注射麻醉，手术分离颈总动脉取血，收集于塑料离心管中，3.8％枸橼酸钠水溶液抗凝(血与抗凝剂体积比为9∶1)。800r/min离心10min，制备富血小板血浆(Platelet-rich plasma，PRP)，3000r/min离心10min，制备贫血小板血浆(Platelet-poor plasma，PPP)。

将灯盏花乙素苷和灯盏花乙素苷元作为对照组，灯盏花乙素苷元-6-位衍生物作为实验组，将样品溶于80％乙醇中，配成初始浓度分别约为1.2mg/ml、0.6mg/ml、0.3mg/ml、0.15mg/ml、0.075mg/ml的溶液。

PT(凝血酶原时间)的测定：

原理：凝血活酶与钙离子混合物能使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，凝块形成的时间与血浆中的外源性凝血因子含量呈负相关。

方法：测试杯中加入溶媒或受试样品10μL、PPP 50μL，在37℃预温孔内预温3min，将测试杯转入测试通道，加入37℃预温的诱导剂PT试剂100μL，记录PPP凝固的时间。

APTT(活化部分凝血活酶时间)的测定：

原理：待测血浆加入活化部分凝血活酶溶液，纤维蛋白原转变为纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)。如果内源性途径有缺陷，凝固时间即延长，并与单因子缺乏的程度成正比。同样也与内源性途径所需因子的累积缺乏成正比。

方法：测试杯中溶媒或受试样品10μL、加入PPP 50μL和预温的APTT试剂50μL，在37℃预温孔内预温5min，将测试杯转入测试通道，加入37℃预温的诱导剂CaCl₂试剂50μL，记录PPP凝固的时间。

TT(凝血酶时间)的测定：

原理：待测血浆加入标定的凝血酶溶液，纤维蛋白原转变为纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆凝血酶时间(TT)。

方法：测试杯中加入溶媒或受试样品10μL、PPP 50μL，在37℃预温孔内预温3min，将测试杯转入测试通道，加入室温的诱导剂TT试剂50μL，记录PPP凝固的时间。

FIB(纤维蛋白原)的测定：

原理：定量测定纤维蛋白原是普遍使用的经典方法，这种方法是在加入凝血酶后测定稀释血浆的凝集时间。

方法：①：标准曲线的制备：将复溶后的定值血浆分别制成1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶30的稀释血浆。取不同浓度的稀释血浆各200μL，37℃预温3分钟，然后分别加入FIB试剂100μL，测定凝固时间，由血凝仪自动生成曲线并保存。②：测试杯中加入溶媒或受试样品10μL、PPP 50μL，在37℃预温孔内预温3min，将测试杯转入测试通道，加入室温的凝血酶(FIB)50μL，记录PPP凝固的时间或浓度。

以上所有实验数据以表示，组间均数比较采用t检验，具体实验结果如表1所示。

实施例46 灯盏花乙素苷元-6-位衍生物对血小板聚集的抑制活性

本测定按常规采用ADP诱导的血小板聚集实验法，即用比浊法进行血小板聚集实验。取健康雄性家兔，30mg/kg家兔体重的戊巴比妥钠生理盐水溶液耳缘静脉注射麻醉，手术分离颈总动脉取血，收集于塑料离心管中，3.8％枸橼酸钠水溶液抗凝(血与抗凝剂体积比为9∶1)。800r/min离心10min，制备富血小板血浆(Platelet-rich plasma，PRP)，3000r/min离心10min，制备贫血小板血浆(Platelet-poor plasma，PPP)。将样品溶于无水乙醇中，配成初始浓度分别为150mmol/L、100mmol/L、50mmol/L、25mmol/L、12.5mmol/L的溶液，分别编号为化合物编号.1～化合物编号.5。测试杯中加入280μLPRP、溶媒或受试样品10μL，在37℃预温孔内预温1min，将测试杯转入测试通道，加入诱导剂ADP(终浓度5umol/L)10μL，观察记录6min内最大聚集率(Maximum aggregation rate，MAR)。用无水乙醇作空白对照(Control)，阿魏酸(FA)作阳性对照，计算血小板聚集抑制率(Aggregation inhibition rate，AIR)以及部分样品的50％聚集抑制浓度(IC50)，结果见表1。

表1部分化合物对凝血酶时间和血小板聚集活性的影响情况

  Factions
  浓度  (mg/ml)
  PT(s)
  APTT(s)
  TT(s)
  FIB(s)
ADP(IC₅₀) (mmol/L)
  Control
  80％EtOH
  8.3±0.45
  26.3±2.92
  23.2±1.88
  0.51±0.08

  灯盏乙素
  1.17
  9.2±0.17
  31.6±7.79
  34.5±2.45
  0.61±0.01
  34.7
  灯盏乙素苷元
  1.20
  9.1±0.98
  45.8±4.06
  36.6±2.81
  0.64±0.04
  11.4
  Ia
  1.13
  9.8±0.76
  43.0±4.78
  48.3±2.59
  0.79±0.08
  1.5
  Ib
  1.14
  9.5±0.10
  38.2±3.96
  42.5±3.25
  0.86±0.03
  1.4
  Ic
  1.10
  10.9±1.12
  35.6±2.58
  39.7±2.78
  0.89±0.01
  1.2
  Id
  1.24
  9.5±0.59
  37.7±2.15
  42.3±0.65
  0.82±0.09
  1.6
  Ie
  1.25
  9.7±0.41
  45.7±1.66
  37.9±2.03
  0.94±0.11
  2.5
  If
  1.35
  10.1±0.56
  36.5±1.84
  37.6±3.41
  0.90±0.10
  3.7
  Ig
  1.04
  10.2±0.19
  37.9±4.06
  39.4±2.83
  0.94±0.008
  6.9
  Ih
  1.16
  9.6±0.42
  39.7±4.13
  38.2±1.56
  0.97±0.52
  1.4
  Ii
  1.16
  9.8±0.42
  39.7±4.13
  48.2±1.56
  0.84±0.02
  1.9
  Ij
  1.24
  9.3±0.17
  38.3±1.71
  49.2±1.60
  0.88±0.03
  0.9
  Ik
  1.16
  10.3±0.28
  54.7±3.75
  42.5±5.51
  0.83±0.05
  3.5
  Il
  1.35
  10.8±0.23
  50.2±4.45
  42.9±4.00
  0.87±0.04
  2.8
  Im
  1.25
  10.0±0.28
  41.7±3.47
  44.9±2.56
  0.93±0.07
  0.2
  In
  1.10
  9.4±0.76
  46.2±3.37
  44.8±4.02
  0.89±0.04
  0.9
  Io
  1.16
  9.9±0.27
  49.8±2.66
  46.6±2.62
  0.95±0.08
  2.4
  Ip
  1.25
  9.8±0.22
  52.2±1.65
  47.4±0.67
  0.91±0.01
  3.2
  Iq
  1.10
  9.4±0.27
  62.4±5.06
  39.2±7.81
  0.94±0.04
  1.6
  Ir
  1.16
  9.2±0.60
  60.3±7.37
  40.6±4.88
  0.99±0.08
  1.3
  Is
  1.16
  9.6±0.31
  36.3±3.62
  39.2±6.43
  0.85±0.04
  6.3

结果为：平均值±S.D.(n＝4).^*：P＜0.05，^**：P＜0.01，^***：P＜0.001.

由以上表1实验结果表明，和对照组相比，本发明提供的具有通式I的灯盏乙素苷元-6-位衍生物能提高活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT)的值，并且具有明显的抑制血小板聚集(ADP)活性，说明本发明提供的灯盏乙素苷元-6-位衍生物对凝血酶具有显著的抑制作用，同时实验结果表明部分灯盏乙素苷元-6-位衍生物比灯盏乙素苷和灯盏乙素苷元有更强的抑制活性。并且通过血小板聚集抑制实验结果表明，与灯盏乙素苷和灯盏乙素苷元相比较，本发明提供的灯盏乙素苷元-6-位衍生物具有更好的抑制血小板聚集的活性。因此，本发明提供的对灯盏乙素苷元进行结构修饰后，能较明显增加抗血栓的药理活性，且可以把灯盏乙素苷元-6-位衍生物和碱反应制备得到系列盐化物，改善水溶性，从而制备成不同剂型，因此本发明提供的灯盏乙素苷元-6-位衍生物及其盐化物有望进一步开发成为治疗心肌梗塞、缺血性损伤、中风等血栓性疾病的药物。

以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。