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本发明涉及氮化杂环化合物，它们的制备和作为抗菌药物的用途，游离形式、两性离子形式和与可药用无机或有机碱和酸所成的盐形式的通式(I)的化合物其中R1代表(CH2)n-NH2或(CH2)n-NHR基团，其中R是(C1-C6)烷基且n等于1或2；R2代表氢原子；R3和R4一起形成含1、2或3个氮原子的具有5个顶点的芳族氮化杂环，其任选被一个或几个R′基团取代，R′选自氢原子和具有1至6个碳原子的烷基。

1.  具有通式(I)的化合物，其呈游离形式、两性离子形式和与可药用无机或有机碱和酸所成的盐形式：

其中R₁代表(CH₂)_n-NH₂或(CH₂)_n-NHR基团，其中R是(C₁-C₆)烷基，n等于1或2；
R₂代表氢原子；
R₃和R₄一起形成含1、2或3个氮原子的具有5个顶点的芳族氮化杂环，其任选被一个或几个R′基团取代，R′选自氢原子和具有1至6个碳原子的烷基。

2.  根据权利要求1的化合物，其特征在于R₃和R₄一起形成任选取代的吡唑基或三唑基。

3.  根据权利要求1或2的化合物，其特征在于R₁选自(CH₂)_n-NH₂和(CH₂)_n-NHCH₃基团，其中n如权利要求1中所定义，由R₃和R₄形成的杂环被(C₁-C₆)烷基取代。

4.  根据权利要求1或3的化合物，其特征在于R₁代表(CH₂)_n-NH₂或(CH₂)_n-NHCH₃基团，其中n如权利要求1中所定义，R₃和R₄形成被(C₁-C₆)烷基取代的吡唑基环。

5.  游离形式、两性离子形式和与可药用无机或有机碱和酸所成的盐形式的
-反式8-(氨基甲基)-4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-4，8-二氢-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮和
-反式8-(甲氨基甲基)-4，8-二氢-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮。

6.  一种制备式(I)的化合物的方法，其特征在于其包括：
a)使式(II)的化合物与羰基化剂反应的步骤，如果必要，在碱的存在下反应：

其中：
R’₁代表CN、被保护的COOH、COOR或(CH₂)_nR’₅基团，
R′₅是被保护的OH、CN、NH₂或被保护的NHR、被保护的CO₂H、CO₂R基团，
n、R、R₃和R₄定义如上，如果必要，在由R₃和R₄形成的杂环上任选存在的氨基烷基取代基被保护，
ZH代表被保护的-NHOH基团，
以获得具有式(III)的中间化合物：

其中：
R′₁、R₃和R₄具有如上相同的含义，并且或者X₁是氢原子或保护基团，X₂代表-Z-CO-X₃基团，X₃代表该羰基化剂的其余部分，或者X₂是-ZH基团，X₁代表CO-X₃基团，X₃定义如上；
b)在碱的存在下将如上获得的中间体环化的步骤；
以及特征在于：
c)如果必要，在步骤a)之前和/或在步骤b)之后，以适当顺序进行一个或几个下面的反应：
-反应性官能团的保护，
-反应性官能团的脱保护，
-酯化，
-皂化，
-硫酸化，
-酯还原，
-烷基化，
-甲氨酰化，
-叠氮基的形成，
-叠氮基还原成胺，
-成盐，
-离子交换，
-拆分或分离非对映异构体。

7.  根据权利要求6的方法，其特征在于羰基化剂选自光气、双光气、三光气、氯甲酸芳基酯、氯甲酸芳烷基酯、氯甲酸烷基酯和氯甲酸烯基酯、二碳酸烷基酯、羰基-二咪唑及其混合物。

8.  根据权利要求6或7的方法，其特征在于羰基化反应在胺存在下进行。

9.  根据权利要求6至8中任一项的方法，其特征在于式(II)的化合物通过下述方法获得，其中用还原剂处理式(IV)的化合物：

其中R’₁、R₃和R₄如权利要求6中所定义，A代表氢原子或保护氮的基团，以获得式(V)的化合物：

其中A、R’₁、R₃和R₄具有如上所述的含义，其中如果必要，OH基团被离去基团替代，以获得式(VI)的化合物：

其中A、R’₁、R₃和R₄具有如上所述的含义，R₉代表离去基团，将式(VI)化合物用式Z₁H₂的化合物处理，然后如果必要，将其用合适氮原子的脱保护剂处理，其中Z₁代表被保护的-HN-OH基团。

10.  根据权利要求6至8中任一项的方法，其特征在于式(II)的化合物通过下述方法获得，其中将如上所述式(IV)的化合物用羟基被保护的羟胺处理，以获得式(VII)的化合物：

其中A、R’₁、R₃和R₄如权利要求9中所定义，
使式(VII)的化合物与还原剂反应以获得式(VIII)的化合物：

其中A、R’₁、R₃、R₄、n”和ZH定义如上，
如果必要，用合适氮原子的脱保护剂处理式(VIII)的化合物。

11.  如权利要求1至4中任一项所述的产品及其与可药用酸和碱所成的盐，用作药物。

12.  如权利要求5所述的产物，用作药物。

13.  含至少一种根据权利要求11或12中任一项的药物作为活性成分的药物组合物。

氮化杂环化合物、它们的制备和作为抗菌药物的用途
本发明涉及氮化杂环化合物，它们的制备和作为抗菌药物的用途。
申请WO 02/100860描述了具有下式的化合物以及这些化合物与无机或有机碱或酸的盐：

其中：
a)R1代表氢原子、COOH、CN、COOR、(CH₂)n′R₅、CONR₆R₇基团或
R选自任选被吡啶基取代的具有1至6个碳原子的烷基、具有总共3至9个碳原子的-CH₂-烯基、具有1至4个氧原子和3至10个碳原子的(聚)烷氧基、具有6至10个碳原子的芳基或具有7至11个碳原子的芳烷基，该芳基或芳烷基核任选被OH、NH₂、NO₂基团、具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基或一个或几个卤素原子取代，
R₅选自COOH、CN、OH、NH₂、CO-NR₆R₇、COOR、OR、OCOH、OCOR、OCOOR、OCONHR、OCONH₂、OSO₂R、NHR、NHCOR、NHCOH、NHSO₂R、NH-COOR、NH-CO-NHR、NH-CO-NH₂或N₃基团，其中R定义如上，
R₆和R₇相同或不同，选自氢原子、具有1至6个碳原子的烷基、具有6至10个碳原子的芳基、具有7至11个碳原子的芳烷基和被吡啶基取代的具有1至6个碳原子的烷基，
n′等于1或2，
R₃和R₄一起形成苯基或具有5或6个顶点的芳族杂环，该杂环包括1至4个选自氮、氧和硫的杂原子并任选被一个或几个R′基团取代，R′选自氢原子和具有1至6个碳原子的烷基，该烷基任选被一个或几个羟基、氧代、卤素或氰基或被硝基、具有2至6个碳原子的烯基、卤代、氨基、OH、被保护的OH、-OR、-NHCOH、-NHCOR、NHCOOR、COOH、-COOR、-C(C₆H₅)₃和-CH₂-CH₂-S(O)m-R基团取代，其中R定义如上且m等于0、1或2，
b)或R₄代表氢原子或(CH₂)_n′1R₅基团，其中n′1等于0、1或2且R₅定义如上，
R₁和R₃一起形成苯基或如上定义的任选取代的杂环，
在a)和b)的两种情况下，
R₂都选自氢原子、卤素原子和R、S(O)_mR、OR、NHCOR、NHCOOR和NHSO₂R基团，其中m和R定义如上，
X都代表通过碳原子键合到氮原子上的二价基团-C(O)-B-，
B代表通过氧原子键合到羰基上的二价基团-O-(CH₂)_n″-、通过氮原子键合到羰基上的-NR₈-(CH₂)_n″-或-NR₈-O-基团，n″等于0或1且R₈选自氢原子、OH、R、OR、Y、OY、Y₁、OY₁、Y₂、OY₂、Y₃、O-CH₂-CH₂-S(O)m-R、SiRaRbRc和OSiRaRbRc基团，Ra、Rb和Rc独立地代表具有1至6个碳原子的直链或支化烷基或具有6至10个碳原子的芳基，且其中R和m定义如上。
Y选自COR、COOR、CONH₂、CONHR、CONHOH、CONHSO₂R、CH₂COOH、CH₂COOR、CH₂CONHOH、CH₂CONHCN、CH₂-四唑、被保护的CH₂-四唑、CH₂SO₃H、CH₂SO₂R、CH₂PO(OR)₂、CH₂PO(OR)(OH)、CH₂PO(R)(OH)和CH₂PO(OH)₂基团，
Y₁选自SO₂R、SO₂NHCOH、SO₂NHCOR、SO₂NHCOOR、SO₂NHCONHR、SO₂NHCONH₂和SO₃H基团，
Y₂选自PO(OH)₂、PO(OR)₂、PO(OH)(OR)和PO(OH)(R)基团，
Y₃选自基团四唑、被基团R取代的四唑、方酸酯、NH或NR四唑、被基团R取代的NH或NR四唑、NHSO₂R和NRSO₂R，其中R定义如上，
n等于1或2。
式(I)的化合物中所含的不对称碳原子可彼此独立地呈现构型R、S或RS，且式(I)的化合物因此是纯对映异构体或纯非对映异构体形式或对映异构体混合物，尤其是外消旋体混合物，或非对映异构体混合物形式。
此外，由于一方面独立选定的取代基R₁、R₂或R₄，和另一方面X可以在它们所键合的环的顺式和/或反式位置，因此式(I)的化合物是顺式或反式异构体或混合物形式。
此外，申请WO 04/052891描述了相关化合物。
申请人已经发现，在申请WO 02/100860中所述的化合物中，某些特定化合物(无一描述在这些申请的实验部分中)具有相当出乎意料的抗菌性。
本发明化合物的独特性质在于它们具有优异的抗铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)活性，所述铜绿假单胞菌是在院内感染中和在囊性纤维化患者中常见的菌株。
在申请WO 02/100860中制成的含有与本发明化合物的那些不同的R1基团的化合物中，不存在这种有意义和出乎意料的活性。下面在实验描述部分中例证这一点。
此外，已经表明本发明的化合物对动物感染模型，包括对通常耐受常用抗生素的菌株呈活性。本发明的化合物能够抵抗细菌的主要耐药机制，即β-内酰胺酶、外排泵和孔蛋白突变。
本发明的化合物是具有下式的化合物，其中R₂代表氢原子，R₃和R₄一起形成具有5个顶点的芳族氮化杂环，X代表二价基团-C(O)-NR₈-，其中R₈是-OY₁基团，其中Y₁是-SO₃H基团，且尤其是R₁代表被氨基或烷基氨基取代的烷基。
因此，本发明的目的是游离形式、两性离子形式和与可药用无机或有机碱和酸所成的盐形式的具有通式(I)的化合物：

其中R₁代表(CH₂)_n-NH₂或(CH₂)_n-NHR基团，其中R是(C₁-C₆)烷基且n等于1或2；
R₂代表氢原子；
R₃和R₄一起形成含1、2或3个氮原子的具有5个顶点的芳族氮化杂环，其任选被一个或几个R′基团取代，R′选自氢原子和具有1至6个碳原子的烷基。
本文所用的术语“具有1至6个碳原子的烷基”被理解为尤其是指甲基、乙基、丙基、异丙基和直链或支化戊基或己基。
本文所用的术语“具有2至6个碳原子的烯基”被理解为尤其是指烯丙基和直链或支化丁烯基、戊烯基和己烯基。
本文所用的术语“芳族杂环”被理解为尤其是指选自下面基团的那些，其中这两个键代表与氮化环的连接键(R₃R₄)：

在式(I)产物的酸盐中，尤其可以提到与无机酸，如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸或磷酸，或与有机酸，如甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、草酸、乙醛酸、天冬氨酸、烷基磺酸(如甲磺酸和乙磺酸)、芳基磺酸(如苯磺酸和对甲苯磺酸)形成的那些盐。
在式(I)产物的碱盐中，尤其可以提到与无机碱，如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢氧化钙、氢氧化镁或氢氧化铵，或与有机碱，如甲胺、丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、N，N-二甲基乙醇胺、三(羟甲基)氨基甲烷、乙醇胺、吡啶、甲基吡啶、二环己胺、吗啉、苄胺、普鲁卡因、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、N-甲基葡糖胺或鏻盐(如烷基-鏻、芳基-鏻、烷基-芳基-鏻、烯基-芳基-鏻)或季铵盐(如四正丁基铵盐)形成的那些盐。
在式(I)的化合物中，本发明的目的尤其是其中R₃和R₄一起形成任选取代的吡唑基或三唑基杂环的化合物。
在式(I)的化合物中，本发明的目的尤其是如下化合物：其中R1选自基团(CH₂)_n-NH₂和(CH₂)_n-NHCH₃，其中n定义如上，由R₃和R₄形成的杂环被(C₁-C₆)烷基取代。
在式(I)的化合物中，本发明的特定目的是如下化合物：其中R₁代表(CH₂)_n-NH₂或(CH₂)_n-NHCH₃基团，其中n定义如上且R₃和R₄一起形成被(C₁-C₆)烷基取代的吡唑基环。
在式(I)的化合物中，本发明的非常特别的目的是游离形式、两性离子形式和与可药用无机或有机碱和酸所成的盐形式的
-反式8-(氨基甲基)-4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-4，8-二氢-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮和
-反式8-(甲氨基甲基)4，8-二氢-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮。
本发明的另一目的是能够制备式(I)的化合物的方法。
该方法的特征在于，其包括：
a)使式(II)的化合物与羰基化剂反应的步骤，如果必要，在碱的存在下反应：

其中：
R’₁代表CN、被保护的COOH、COOR或(CH₂)_nR’₅基团，
R′₅是被保护的OH、CN、NH₂或被保护的NHR、被保护的CO₂H、CO₂R基团，
n、R、R₃和R₄定义如上，如果必要，在由R₃和R₄形成的杂环上任选存在的氨基烷基取代基随后被保护，
ZH代表被保护的-NHOH基团，
以获得具有式(III)的中间化合物：

其中：
R′₁、R₃和R₄具有如上相同的含义，X₁是氢原子或保护基团，X₂代表-Z-CO-X₃基团，X₃代表该羰基化剂的其余部分，或者X₂是-ZH基团，X₁代表CO-X₃基团，X₃定义如上；
b)在碱的存在下将如上获得的中间体环化的步骤；
以及该方法的特征在于：
c)如果必要，在步骤a)之前和/或在步骤b)之后，以适当的顺序进行下面反应中的一个或几个：
-反应性官能团的保护，
-反应性官能团的脱保护，
-酯化，
-皂化，
-硫酸化，
-酯还原，
-烷基化，
-甲氨酰化，
-叠氮基的形成，
-叠氮基还原成胺，
-成盐，
-离子交换，
-拆分或分离非对映异构体。
作为羰基化剂，可以使用试剂例如光气，双光气，三光气，氯甲酸芳基酯如氯甲酸苯基酯或氯甲酸对硝基苯基酯，氯甲酸芳烷基酯如氯甲酸苄基酯，氯甲酸烷基酯或氯甲酸烯基酯如氯甲酸甲酯或氯甲酸烯丙酯，二碳酸烷基酯如二碳酸叔丁酯，羰基-二咪唑及其混合物，优选双光气。
该反应优选在中和所形成的酸的碱或碱混合物的存在下进行。该碱尤其可以是胺，如三乙胺、二异丙基乙基胺、吡啶、二甲氨基吡啶。但是，也可以使用式II起始产物作为碱来进行。在这种情况下，过量使用。
如果必要，式II产物以酸盐，例如盐酸盐或三氟乙酸盐的形式使用。
作为步骤b)中的碱，也可以使用胺、碱金属或碱土金属的氢化物、醇化物、氨基化物或碳酸盐。
胺可以选自例如上文所例举的物质。
作为氢化物，尤其可以使用氢化钠或氢化钾。
作为碱金属醇化物，优选使用叔丁基化钾。
作为碱金属氨基化物，尤其可以使用双(三甲基甲硅烷基)氨基化锂。
作为碳酸盐，尤其可以使用碳酸钠或碳酸钾或碳酸氢钠或碳酸氢钾。
如果必要，式III的中间体可以以在羰基化反应过程中生成的酸盐，尤其是盐酸盐的形式获得。其随后以此形式用在环化反应中。
优选在不分离出式III中间体的情况下进行环化。
步骤c)中提到的反应通常是本领域技术人员公知的常规反应。在申请WO 02/100860以及在申请04/052891中描述了所用条件的实例。
如果必要，需要保护的反应性官能团是羧酸、胺、酰胺、羟基和羟胺官能团。
尤其以烷基、烯丙基、苄基、二苯甲基或对硝基苄基的酯的形式提供对酸官能团的保护。
使用可溶性钯O络合物通过皂化、酸解、氢解或断裂进行脱保护。
申请WO 02/100860中提供了这些保护和脱保护的实例。
尤其视情况以苄基或三苯甲基化衍生物的形式，以氨基甲酸酯尤其是氨基甲酸烯丙酯、氨基甲酸苄酯、氨基甲酸苯酯或氨基甲酸叔丁酯的形式，或以甲硅烷基化衍生物如叔丁基二甲基、三甲基、三苯基或二苯基叔丁基-甲硅烷基衍生物，或苯基磺酰基烷基或氰基烷基衍生物的形式提供对胺、杂环氮和酰胺的保护。
根据保护基团的性质，通过在液氨中的钠或锂、通过氢解或使用可溶性钯O络合物、通过酸的作用或四丁基氟化铵或强碱(如氢化钠或叔丁基化钾)的作用进行脱保护。
羟胺的保护尤其以苄基或烯丙基醚的形式进行。
醚的断裂通过氢解或使用可溶性钯O络合物进行。
醇和酚的保护按常规方式以醚、酯或碳酸酯/盐的形式进行。醚可以是烷基或烷氧基烷基醚，优选甲基或甲氧基乙氧基甲基醚，芳基醚或优选芳烷基醚，例如苄基醚，或甲硅烷基化醚，例如上述甲硅烷基化衍生物。酯可以是本领域技术人员已知的任何可断裂的酯，并优选为乙酸酯、丙酸酯、苯甲酸酯或对硝基苯甲酸酯。碳酸酯可以是例如碳酸甲酯、碳酸叔丁酯、碳酸烯丙酯、碳酸苄酯或碳酸对硝基苄酯。
脱保护通过本领域技术人员已知的方式进行，尤其是皂化、氢解、用可溶性钯O络合物断裂、在酸性介质中水解或对于甲硅烷基化衍生物用四丁基氟化铵处理。
在实验描述部分中给出实施例。
硫酸化反应通过SO₃-胺，如SO₃-吡啶或SO₃-二甲基甲酰胺在吡啶中的作用进行；所形成的盐，例如吡啶盐可随后与例如另一胺、季铵或碱金属的盐交换。在实验描述部分中给出实施例。
烷基化反应视情况通过硫酸烷基酯或烷基卤或取代烷基对羟基化衍生物、酯或酮烯醇化物、杂环胺或氮的作用来进行，尤其通过游离或酯化的羧基来进行。烷基化反应也可以通过还原胺化进行。
如果必要，通过向化合物的可溶相中加入酸，进行酸作用下的成盐。可以使用在SO₃-吡啶络合物的作用过程中获得的吡啶鎓盐进行通过磺氧基官能团的碱作用下的成盐，并由这种吡啶鎓盐获得其它盐。也可以进行树脂上的离子交换。
可以使用氯甲酸盐或Boc-ON型反应性基团然后胺，或如果必要，氨来进行甲氨酰化反应。
可以例如通过叠氮化钠(sodium azotide)对甲磺酸盐型中间体的作用或通过Mitsunobu型反应引入叠氮基。
可以通过三烷基或三芳基膦的作用进行叠氮基的还原。
可以根据本领域技术人员已知的技术，尤其是色谱法进行对映异构体和非对映异构体的分离。
除上述方法外，式(I)的化合物可以通过一开始使用式(II)的化合物(其中R′₁、R₃、R₄和HZ具有直接是(无转化)所希望制成的化合物中的那些的值)的方法获得。如果必要，要保护化合物中包括反应性官能团(如上文提到的那些)的这些基团，并在环化步骤b)之后或在合成中的任何其它适当的时刻进行脱保护。于是如上所述进行保护和脱保护。
本发明的另一目的是如上所述的方法，其特征在于式(II)的化合物通过下述方法获得，其中用还原剂处理式(IV)的化合物：

其中R’₁、R₃和R₄定义如上，A代表氢原子或保护氮的基团，以获得式(V)的化合物：


其中A、R’₁、R₃和R₄具有如上所述的含义，R₉代表离去基团；将式(VI)化合物用式Z₁H₂的化合物处理，其中Z₁代表被保护的-HN-OH基团，然后如果必要，用合适氮原子的脱保护剂处理。
本发明的另一目的是如上所述的方法，其特征在于式(II)的化合物通过下述方法获得，其中式(IV)的化合物如上所述用羟基被保护的羟胺处理，以获得式(VII)的化合物：

其中A、R’₁、R’₂、R₃、R’₄、n和R’₈定义如上，并使式(VII)的化合物与还原剂反应以获得式(VIII)的化合物：

其中A、R’₁、R₃、R₄、n”和ZH定义如上，如果必要，用合适氮原子的脱保护剂处理式(VIII)的化合物。
该氮保护剂尤其是上文提到的那些之一。
还原剂尤其是碱性硼氢化物。
离去基团尤其是磺酸根，例如甲磺酸根或甲苯磺酸根，其通过相应磺酰基氯在碱存在下的作用获得，或卤素，更特别是氯、溴或碘，其例如通过亚硫酰二氯或P(C₆H₅)₃CBr₄或PBr₃的作用或在碘原子的情况下通过碱性碘化物对磺酸盐的作用获得。
脱保护剂尤其是上文提到的那些之一。
用于式(VII)化合物的还原剂尤其是氰基或乙酰氧基硼氢化钠。
如上所述，通式(I)的化合物对铜绿假单胞菌和在被耐受常用抗菌剂的菌株感染的动物模型中具有优异的抗菌活性。对于申请WO 02/100860中所述的化合物，没有观察到这种显著和出乎意料的抗菌活性。
这些性质使所述化合物适合以游离形式，以两性离子形式或以可药用酸和碱的盐形式用作严重假单胞菌感染，尤其是院内感染和一般而言，高危对象中重症感染的治疗药物。这些特别可以是呼吸道感染例如急性肺炎或慢性上呼吸道感染，血液感染例如败血病，急性或慢性尿路感染，听觉系统感染例如恶性外耳炎或化脓性慢性耳炎，皮肤和软组织感染例如皮炎、感染性创伤、毛囊炎、脓皮病(pyroderma)、耐药型痤疮，眼睛感染例如角膜溃疡，神经系统感染尤其是脑膜炎和脑脓肿，心脏感染如心内膜炎，骨和关节感染如胸骨关节积脓(sternoarticular pyoarthrosis)、脊椎骨髓炎、耻骨联合(pubic symphysitis)，胃肠道感染如坏死性小肠结肠炎和直肠周感染。
因此，本发明的目的还包括如上定义的式(I)的化合物用作药物，尤其是用作抗生素。
在式(I)的化合物中，本发明的目的尤其是其中R₃和R₄一起形成任选取代的吡唑基或三唑基杂环的化合物，尤其是其中R₁选自基团(CH₂)_n-NH₂和(CH₂)_n-NHCH₃，n定义如上，且由R₃和R₄形成的杂环被(C₁-C₆)烷基取代的那些化合物作为药物的用途。
在式(I)的化合物中，本发明的特定目的是其中R₁代表(CH₂)_n-NH₂或(CH₂)_n-NHCH₃基团，其中n定义如上且R₃和R₄一起形成被(C₁-C₆)烷基取代的吡唑基环的化合物作为药物的用途。
在式(I)的化合物中，本发明的非常特定目的是游离形式、两性离子形式和与可药用无机或有机碱和酸所成的盐形式的下面化合物作为药物的用途：
-反式8-(氨基甲基)-4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基
-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-4，8-二氢-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮，和
-反式8-(甲氨基甲基)4，8-二氢-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮。
本发明的另一目的是具有至少一种如上定义的本发明化合物作为活性成分的药物组合物。
这些组合物可以经口给药，经直肠给药，胃肠外，尤其是肌肉内给药，或通过局部施用在皮肤和粘膜上来局部给药。
本发明的组合物可以是固体或液体，并以目前用在人用药中的药物形式存在，例如简单或包衣的片剂、胶囊、颗粒剂、栓剂、注射制剂、软膏、乳膏、凝胶；它们根据通用方法制备。活性成分可掺在这些药物组合物中常用的赋形剂如滑石、阿拉伯树胶、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、可可脂、水性或其它介质、动物或植物来源的脂肪体、石蜡衍生物、二醇、不同润湿剂、分散剂或乳化剂、防腐剂中。
这些组合物尤其可以呈冻干物形式，其按需要溶解在适当的溶剂如无热原的无菌水中。
给药剂量可随要治疗的症状、对象、给药途径和所涉产品而变。例如，使用实施例1中所述的产品经人口服的剂量是0.250至10克/日，或经肌肉内或静脉内注射的剂量是0.25至10克/日。
式(I)的产品也可用作手术器械的消毒剂。
下面实施例例证本发明。
实施例
实施例1：反式[[8-(氨基甲基)-4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮的钠盐和三氟乙酸盐
步骤A：
4，7-二氢-1-甲基-4-((苯基甲氧基)氨基)-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-6(5H)，7-二羧酸的6-(1，1-二甲基乙基)酯和7-甲基酯(B)
将衍生物A(申请WO 02100860中所述的4，7-二氢-4-羟基-1-甲基-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-6(5H)，7-二羧酸的6-(1，1-二甲基乙基)酯和7-甲基酯)(10克，32.12毫摩尔)在环境温度下在氮气和搅拌下混悬在二氯甲烷(100毫升)中。加入三乙胺(14.30毫升，10.28毫摩尔，3.2当量)后，该混悬液溶解。将甲磺酰氯(11.4毫升，96.36毫摩尔，3当量)在二氯甲烷(12毫升，1体积)中的溶液逐滴添加到冷却至-78℃的反应介质中。在30分钟接触后，醇A完全转化成甲磺酸酯。
由O-苄基羟胺盐酸盐(25.4克，160.6毫摩尔，5当量)新鲜制备O-苄基-羟胺在二氯甲烷中的溶液。将O-苄基羟胺盐酸盐溶解在O-苄基羟胺盐酸盐(100毫升)和水(50毫升)的混合物中。在0℃下加入2N苛性钠溶液(85毫升，176.66毫摩尔)。在接触10分钟和倾析后，将有机相用磷酸镁干燥45分钟，然后浓缩至一半体积。在-78℃下经1小时将该溶液逐滴添加到如上制成的甲磺酸酯中。搅拌该反应混合物，以使温度逐渐升至环境温度。加入水(200毫升)并将其用二氯甲烷(100毫升)稀释，搅拌，倾析，然后用二氯甲烷再萃取水相。有机相用饱和NaCl溶液(200毫升)洗涤，干燥，然后浓缩至干。回收白色无定形粉末，其在色谱法处理后生成预期的B衍生物(8.25克，66％)。
MS(ES(+))：m/z[M⁺]＝417.2
¹H NMR(400MHz，CDCl3)：一种非对映异构体(2种旋转异构体)δ(ppm)＝1.43(s，9H，tBu)，3.15(dd，1H，N-CH2-CH-N)，3.68/3.70(s，3H，CH3)，3.84(s，3H，CH3)，3.98(m，2H，N-CH2-CH-N)，4.6-4.8(多个峰(massive)，3H，NH-O-CH2-Ph和N-CH2-CH-N)，5.40/5.8(s，1H，CH-CO2Me)，7.22-7.31(多个峰，5H，Ph)，7.40(s，1H，吡唑的H)
步骤B：
反式1-甲基-6-氧代-5-(苯基甲氧基)4，5，6，8-四氢-4，7-亚甲基-1H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-8(7H)甲基羧酸酯(C)
将4N HCl/二氧杂环己烷溶液(400毫升，15当量)在环境温度下倒入溶解在二氧杂环己烷(50毫升)中的B(21克，50.42毫摩尔)溶液中。将该反应混合物搅拌30分钟，然后蒸发二氧杂环己烷。残留物在搅拌的同时溶解在水(100毫升)和乙酸乙酯(500毫升)的混合物中。在0℃下加入浓缩至20％的氨水溶液(42毫升)。继续搅拌30分钟。在倾析后，水相再用乙酸乙酯(2×300毫升)萃取，并在用NaCl饱和水相后进行最后萃取。干燥有机相，然后浓缩。中间体脱保护哌啶以黄色油形式获得(m＝15.7克，98％)，将其溶解在乙腈(400毫升)中。向冷却至0℃的该混合物中加入三乙胺(21毫升，151.2毫摩尔，3当量)，然后经30分钟逐滴加入双光气(3.04毫升，25.2毫摩尔，0.5当量)。在环境温度下接触过夜后，将该介质浓缩，然后用乙酸乙酯(500毫升)溶解并用10％酒石酸溶液(200毫升)处理。搅拌和倾析该混合物。用10％酒石酸溶液(2×200毫升)然后用饱和NaCl溶液洗涤有机相，然后干燥并减压浓缩。将所得白色产物(m＝15.3克，89％)溶解在二氯甲烷(150毫升)中。逐滴加入1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(7.53毫升，50.04毫摩尔)。将该混合物搅拌2小时，用水(200毫升)处理，搅拌，倾析。用水(2×200毫升)然后用饱和NaCl溶液(1×200毫升)洗涤有机相，并用MgSO₄干燥，然后浓缩至干。
回收白色固体形式的预期衍生物C(m＝14.72克，85％)。
MS(ES(+))：m/z[M⁺]＝343
¹H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝3.25(d，1H，N-CH2-CH-N)，3.45(d，1H，N-CH2-CH-N)，3.80(s，3H，CH3)，3.88(s，3H，CH3)，3.9(s，1H，N-CH2-CH-N)，4.7(d，1H，N-O-CH2-Ph)，5.02(d，1H，N-O-CH2-Ph)，5.22(s，1H，CH-CO2Me)，7.39-7.43(多个峰，6H，吡唑+Ph的H)
步骤C：
4，8-二氢-8-(羟甲基)-1-甲基-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮(D)
将C(5克，14.60毫摩尔)在四氢呋喃(150毫升)/甲醇(50毫升)的无水混合物中的溶液在氮气和搅拌下冷却至-10℃。向该反应介质中加入硼氢化锂(668毫克，30.67毫摩尔，1.2当量)。在-10℃下搅拌2小时后，另外加入1.2当量的LiBH₄。2小时后用10％NaH₂PO₄溶液冷处理该反应。在减压(200毫巴，40℃)下蒸发四氢呋喃和甲醇。用乙酸乙酯(200毫升)溶解残留混合物，搅拌并倾析。水相再用100毫升乙酸乙酯萃取。有机相用硫酸镁干燥，然后浓缩至干。将所得浅黄色粉末(6.6克)在二氧化硅上色谱分离(洗脱液-乙酸乙酯)以得到衍生物D(3.2克，10.18毫摩尔，64％)。
MS(ES(+))：m/z[M⁺]＝315
¹H NMR(400MHz，DMSO-_d6)：δ(ppm)＝3.16(dd，1H，N-CH2-CH-N)，3.48(d，1H，N-CH2-CH-N)，3.71(s，3H，CH3)，3.81-3.91(多个峰，2H，CH2OH)，4.44(m，1H，N-CH2-CH-N)，4.48(m，1H，CHCH2OH)，4.88(m，2H，N-O-CH2-Ph)，5.20(m，1H，OH)，7.35-7.40(多个峰，6H，吡唑+Ph的H).
步骤D：
反式4，8二氢-1-甲基-8-[(甲基磺酰基)氧甲基)]-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮(E)
将衍生物D(2.76克，8.78毫摩尔)在环境温度下在氮气和搅拌下溶解在二氯甲烷(100毫升)中。在冷却至0℃后，加入三乙胺(1.83毫升，13.17毫摩尔，1.5当量)，然后逐滴加入甲磺酰氯(1.61克，14.05毫摩尔)在二氯甲烷(100毫升)中的溶液。在添加结束时移走冰浴。在环境温度下接触1小时后，在搅拌的同时用10％的NaH₂PO₄溶液(80毫升)处理该反应。在搅拌和倾析后，水相再用二氯甲烷(50毫升)萃取。将有机相干燥，然后减压浓缩以得到预期衍生物(3.44克，定量收率)。
MS(ES(+))：m/z[M⁺]＝393
¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ(ppm)＝3.23(dd，1H，N-CH2-CH-N)，3.26(s，3H，CH3)，3.45(d，1H，N-CH2-CH-N)，3.76(s，3H，CH3)，4.52(m，1H，N-CH2-CH-N)，4.58(dd，1H，CH-CH2-OMs)，4.66(dd，1H，CH-CH2-OMs)，4.88(m，3H，CHCH2OMs和N-O-CH2-Ph)，7.35-7.45(多个峰，6H，吡唑+Ph的H)。
步骤E：
反式8-(叠氮基甲基)-4，8-二氢-1-甲基-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮(F)
将叠氮化钠(1.71克，26.3毫摩尔)在环境温度下在氮气和搅拌下一次性添加到E(3.44克，8.78毫摩尔)在二甲基甲酰胺(70毫升)中的溶液中。将反应介质加热至65℃过夜，然后用10％NaH₂PO₄水溶液(50毫升)处理。在搅拌和倾析后，水相再用二氯甲烷(2×50毫升)萃取。将有机相干燥，然后减压浓缩以产生3.96克预期衍生物F(3克，8.78毫摩尔)。
MS(ES(+))：m/z[M⁺]＝340
¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ(ppm)＝3.20(dd，1H，N-CH2-CH-N)，3.48(d，1H，N-CH2-CH-N)，3.66(dd，1H，CH-CH2-N3)，3.72(s，3H，CH3)，3.92(dd，1H，CH-CH2-N3)，4.50(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.76(dd，1H，CHCH2ON3)，4.89(m，2H，N-O-CH2-Ph)，7.35-7.45(多个峰，6H，吡唑+Ph的H).
步骤F：
反式[[4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-8-基]甲基]-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(G)
将1摩尔/升的三甲基膦溶液(3.4毫升，3.4毫摩尔)在环境温度下在氮气和搅拌下逐滴添加到F(1.15克，3.39毫摩尔)在甲苯(5毫升)和四氢呋喃(5毫升)的混合物中的溶液中。在3小时接触后，将BOC-ON(0.92克，3.6毫摩尔)在四氢呋喃(10毫升)中的溶液逐滴添加到冷却至0℃的反应介质中。在环境温度下继续搅拌3小时。用10％NaHCO₃水溶液(50毫升)处理该反应介质。在搅拌和倾析后，水相再用乙酸乙酯(50毫升)萃取。将有机相干燥，然后减压浓缩以得到2.2克油。将未纯化的产物在二氧化硅柱上色谱分离(洗脱液：环己烷/乙酸乙酯5/5)。获得预期产物(0.62克，1.49毫摩尔，70％)。
MS(ES(+))：m/z[M⁺]＝414
¹H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.39(s，9H，tBu)，3.05(dd，1H，N-CH2-CH-N)，3.19(dd，1H，CH-CH2-NHBOC)，3.27(dd，1H，N-CH2-CH-N)，3.72(s，3H，CH3)，3.78(m，1H，CH-CH2-NHBOC)，3.88(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.48(dd，1H，CHCH2NHBOC)，4.79(d，1H，N-O-CH2-Ph)，4.92(d，1H，N-O-CH2-Ph)，5.18(m，1H，不固定的H)，7.35(s，1H，吡唑的H)，7.37-7.48(多个峰，5H，Ph)
步骤G：
反式[[4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-8-基]甲基]-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯的吡啶鎓盐(H)
将10％炭载钯(140毫克)添加到G(0.6克，1.45毫摩尔)在甲醇(10毫升)中的溶液中。将该反应介质氢化3小时。然后减压蒸发甲醇以得到脱苄基化衍生物。
MS(ES(+))：m/z[M⁺]＝324
将该脱苄基化中间体在吡啶/三氧化硫络合物(462毫克，2.9毫摩尔)存在下溶解在吡啶(3毫升)中。将该反应在环境温度下搅拌保持过夜。然后将该介质减压浓缩。将未纯化的反应产物在二氧化硅柱上色谱分离(洗脱液：100％二氯甲烷，然后用5％至20％的甲醇梯度洗脱)以得到衍生物H(0.49克，1.25毫摩尔，84％)。
MS(ES(+))：m/z[M-]＝402
¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ(ppm)＝1.41(s，9H，tBu)，3.30-3.80(多个峰，4H，2 CH2)，3.72(s，3H，CH3)，4.42(dd，1H，CHCH2ONHBOC)，4.64(d，1H，N-CH2-CH-N)，7.21(m，1H，不固定的H)，7.35(s，1H，吡唑的H)，8.02(dd，2H，吡啶)，8.54(m，1H，吡啶)，8.91(m，2H，吡啶)
步骤H：
反式[[4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-8-基]甲基]-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯的钠盐(I)
将60克DOWEX 50WX8树脂在2N苛性钠溶液(300毫升)中的混悬液搅拌1小时，然后倒在色谱柱上。将其用脱盐水洗脱直至pH为中性，然后用90/10的水/THF混合物平衡该柱。将衍生物H(0.49克，1.01毫摩尔)溶解在最少量的水中，置于柱上，然后用90/10水/THF混合物洗脱。合并含目标物的级分并冷冻。将冷冻溶液冻干以得到预期产物I(0.44克，1.03毫摩尔，100％)。
MS(ES(⁺))：m/z[M^-]＝402
¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ(ppm)＝1.39(s，9H，tBu)，3.30-3.72(m，7H，2CH2，CH3)，4.42(m，1H，CHCH2ONHBOC)，4.64(s，1H，N-CH2-CH-N)，7.16(m，1H，H mobile)，7.35(s，1H，吡唑的H).
步骤I：
反式[[8(氨基甲基)-4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮的钠盐和三氟乙酸盐(J)
将三氟乙酸(10毫升)在二氯甲烷(10毫升)中的溶液在氮气下逐滴倒入I(0.15克，0.35毫摩尔)在二氯甲烷(5毫升)中的溶液中，并冷却至0℃。该反应在环境温度下保持搅拌1小时。将该混合物蒸干并溶解在最少量的水中。将该溶液冷冻，然后冻干以得到预期衍生物J(193毫克，0.35毫摩尔，100％)。
MS(ES(⁺))：m/z[M^-]＝301
¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ(ppm)＝3.32(dd，1H，N-CH2-CH-N)，3.33-3.37(m，2H，2CH)，3.43(d，1H，N-CH2-CH-N)，3.74(s，3H，CH3)，4.73(m，2H，CH-CH2-NH3+)，7.41(s，1H，吡唑的H)，8.10(m，3H，NH3⁺)
实施例2：反式[[8-(氨基-甲基)-4，8-二氢-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮的钠盐和三氟乙酸盐
步骤A：
反式-8-(羟甲基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮
将申请WO2004/052891(实施例1，步骤K)中所述的反式-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-8-羧酸甲酯(5克，15.2毫摩尔)在氮气下溶解在无水甲醇/四氢呋喃的1/1混合物(100毫升)中。然后逐渐加入NaBH₄(2.3克，60.9毫摩尔)。将该反应介质在环境温度下搅拌过夜，然后用10％NaH₂PO₄水溶液(100毫升)处理。蒸发至干后，将反应混合物溶解在水中。将形成的沉淀物在冰中搅拌过夜，然后过滤并在P₂O₅存在下真空干燥至少24小时以得到白色粉末形式的预期化合物(3.3克，11.0毫摩尔，72％)：
MS(ES(+))：m/z[M+H]⁺＝301
¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ(ppm)＝3.18-3.50(ABX，2H，N-CH₂-CH-N)，3.65-3.76(ABX，2H，N-CH-CH₂-OH)，4.34(t，1H，N-CH-CH₂-OH)，4.46(d，1H，N-CH₂-CH-N)，4.88(s，2H，CH₂-Ph)，7.29-7.43(m，5H，Ph)，7.66(s，1H，吡唑的H)，12.72(宽，1H，OH).
步骤B：
反式[[4，8-二氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-8-基]甲基]-氨基甲酸1，1-二甲基酯
将实施例2的步骤A中获得的醇(1.73克，5.76毫摩尔)在氮气下在0℃下溶解在无水吡啶(35毫升)中。逐滴加入甲磺酰氯(1.78毫升，23毫摩尔)。在环境温度下搅拌2小时30分钟后，用氯化铵的饱和水溶液(100毫升)处理该反应介质，然后用乙酸乙酯萃取。然后将合并的有机相用氯化铵的饱和水溶液洗涤5次，用硫酸钠干燥，过滤，然后真空浓缩以得到黄色油形式的预期二甲磺酰化衍生物。
将该二甲磺酰化中间体在氮气下在叠氮化钠(1.12克，17.3毫摩尔)存在下溶解在无水二甲基甲酰胺(45毫升)中。将该反应混合物加热至70℃过24小时。如果必要，加入1当量叠氮化物以使转化完全。当反应完全时，用NaH₂PO₄的10％水溶液(100毫升)处理该混合物，然后用二氯甲烷萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，然后真空浓缩以得到黄色油形式的预期叠氮化物。
将该中间体在氮气下在纯乙醇(17.5毫升)中置入反应。然后相继加入二碳酸二叔丁酯(1.38克，6.34毫摩尔)、三乙基硅烷(1.38毫升，8.64毫摩尔)和10％炭载氢氧化钯(52毫克)。在环境温度下一夜后，将反应混合物过滤，然后浓缩得到粗制黄色油。这种粗制油通过在二氧化硅柱上的色谱纯化(洗脱液梯度CH₂Cl₂/MeOH100/0至95/5，1％梯度级)以得到白色固体状的预期化合物(1.36克，3.40毫摩尔，34％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]⁺＝401
¹H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.51(s，9H，C(CH₃)₃)，3.21-3.59(m，4H，N-CH₂-CH-N et N-CH-CH₂-NHBoc)，4.36(m，1H，N-CH-CH₂-OH)，4.46(m，1H，N-CH₂-CH-N)，4.99(AB，2H，CH₂-Ph)，7.41-7.52(m，5H，Ph)，7.63(s，1H，吡唑的H).
步骤C：
反式[[4，8-二氢-1-叔丁氧基氨基甲酸基-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-8-基]甲基]-氨基甲酸1，1-二甲基酯
将实施例2的步骤B中获得的化合物(104毫克，0.26毫摩尔)溶解在元水二氯甲烷(2.5毫升)中，然后向该混合物中加入二碳酸二叔丁酯(114毫克，0.52毫摩尔)和二甲氨基吡啶(32毫克，0.26毫摩尔)。在环境温度下一夜后，用水处理该反应介质。分离相，然后用氯化钠的饱和水溶液洗涤有机相，用硫酸钠干燥，过滤，然后真空浓缩。由此获得的粗产物通过在二氧化硅柱上的色谱纯化(洗脱液：CH₂Cl₂/AcOEt 90/10)以得到预期产物(76毫克，0.15毫摩尔，59％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]⁺＝500
步骤D：
反式[[4，8-二氢-1-叔丁氧基氨基甲酸基-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-8-基]甲基]-氨基甲酸1，1-二甲基酯的吡啶鎓盐
将实施例2的步骤C中获得的化合物(76毫克，0.15毫摩尔)在氮气下溶解在二甲基甲酰胺/CH₂Cl₂的1/3无水混合物(0.87毫升)中。加入以50％在水中的10％炭载钯(49毫克)。在三次真空/氮气吹扫后，将反应混合物置于氢气氛中直至原料物在HPLC中消失。然后将该混合物真空浓缩，然后用无水二氯甲烷共蒸发三次，然后在P₂O₅存在下减压干燥2小时。
将该脱苄基化衍生物在氮气中在吡啶/三氧化硫络合物(48毫克，0.30毫摩尔)存在下溶解在无水吡啶(0.43毫升)中。在环境温度下搅拌该反应混合物直至在HPLC中完全转化，然后在通过添加水处理后蒸发至干。由此获得的粗产物通过在二氧化硅上的色谱纯化(洗脱液：CH₂Cl₂/MeOH 90/10)以得到预期产物(47毫克，0.083毫摩尔55％)。
MS(ES(-))：m/z[M-2＊BOC-H]^-＝388
¹H NMR(400MHz，MeOH-d₄)：δ(ppm)＝1.52(s，18H，2×C(CH₃)₃)，3.50(m，4H，N-CH₂-CH-N et CH₂-NHBoc)，4.62(m，1H，CH-CH₂-NHBoc)，4.85(d，1H，N-CH₂-CH-N)，7.72(s，1H，吡唑的H).
步骤E：
反式[[8-(氨基-甲基)-4，8-二氢-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮的钠盐和三氟乙酸盐
将6克DOWEX 50WX8树脂在2N苛性钠溶液(30毫升)中的混悬液搅拌1小时，然后倒在色谱柱上。用H₂O洗涤直至pH中性后，用THF/H₂O的10/90混合物调节该柱。将实施例2的步骤D中获得的化合物(47毫克，0.08毫摩尔)溶解在最少量的甲醇中，然后置于柱上。用THF/H₂O的10/90混合物洗脱后，合并含预期产物的级分，冷冻，然后冻干以得到预期钠盐。
将该钠盐在氮气中溶解在无水二氯甲烷(1.04毫升)中，然后冷却至0℃。逐滴加入三氟乙酸/无水二氯甲烷的1/1溶液(2.04毫升)。然后将该反应混合物在环境温度下搅拌45分钟。在蒸发至干然后与无水二氯甲烷共蒸发后，将该化合物溶解在水(～2毫升)中，然后冷冻和冻干以得到浅黄色粉末形式的预期盐(16毫克，0.030毫摩尔，36％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]^-＝288
¹H NMR(400MHz，MeOH-d₄)：δ(ppm)＝3.37-3.69(m，4H，N-CH₂-CH-N et CH-CH₂-NH₂)，4.81(dd，1H，CH-CH₂-NH₂)，4.98(d，1H，N-CH₂-CH-N)，7.79(s，1H，吡唑的H).
实施例3：反式8-(甲氨基甲基)-4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮的钠盐和三氟乙酸盐
步骤A：
反式[[[4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-8-基]甲基]-甲氨基]三甲基碘化鏻
将1摩尔/升的三甲基膦溶液(1.5毫升，1.5毫摩尔)在环境温度下在氮气和搅拌下逐滴添加到实施例1的步骤E中获得的衍生物(0.5克，1.25毫摩尔)在四氢呋喃(15毫升)中的溶液中。搅拌2小时后，向该反应介质中加入碘甲烷(0.21克，3.75毫摩尔)。迅速形成浅黄色沉淀物。在环境温度下搅拌一夜后，减压浓缩反应介质。将粗产物在二氯甲烷中研制。过滤沉淀物以得到浅黄色碘盐形式的预期产物(0.42克，1.04毫摩尔，84％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]⁺＝402
¹H NMR(400MHz，CDCl₃)，2种构象异构体形式：δ(ppm)＝2.04(s，3H，CH₃P)，2.32(s，3H，CH₃P)，2.35(s，3H，CH₃P)，3.03(s，3H，P-NCH₃(A)-CH₂)，3.05(s，3H，P-NCH₃(B)-CH₂)，3.37(m，1H，N-CH₂-CH-N或CH-CH₂-N(CH₃)P)，3.44(m，1H，N-CH₂-CH-N或CH-CH₂-N(CH₃)P)，3.69(m，1H，N-CH₂-CH-N或CH-CH₂-N(CH₃)P)，3.82(s，3H，CH₃)，3.88(m，1H，N-_CH2-CH-N或CH-_CH2-N(CH₃)P)，4.05(d，1H，N-CH₂-CH-N)，4.59(d，1H，CH-CH₂-N(CH₃)P)，4.88(d，1H，N-O-CH₂-Ph)，5.00(d，1H，N-O-CH₂-Ph)，7.35(s，1H，吡唑的H)，7.37-7.45(多个峰，5H，Ph)
步骤B：
反式8-(甲氨基甲基)-4，8-二氢-1-甲基-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮
向碳酸钠水溶液(2.5N，9毫升)中加入实施例3的步骤A中获得的衍生物(0.42克，1.04毫摩尔)。将该反应介质在55℃下搅拌3小时30分钟。在环境温度下冷却后，反应介质在乙酸乙酯(25毫升)存在下用氯化钠饱和。水相用乙酸乙酯(3×25毫升)萃取。有机相用硫酸镁干燥，然后减压浓缩以得到黄色油(0.26克)。通过在二氧化硅柱上的色谱纯化反应粗产物(洗脱液二氯甲烷100％，然后甲醇梯度2％至10％)以得到预期衍生物(0.084克，0.256毫摩尔，26％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]⁺＝328
¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ(ppm)＝2.97-3.00(dd，1H，N-CH₂-CH-N)，3.00(CH-CH₂-NCH₃)，3.15(dd，1H，CH-CH₂-NCH₃)，3.9(dd，1H，N-CH₂-CH-N)，3.75(s，3H，CH₃)，3.98(d，1H，CH-CH₂-N(CH₃)Boc)，4.72(dd，1H，N-CH₂-CH-N)，4.90(d，1H，N-O-CH₂-Ph)，5.03(d，1H，N-O-CH₂-Ph)，7.30(s，1H，吡唑的H)，7.34-7.44(多个峰，5H，Ph)
步骤C：
反式[[4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-8-基]甲基]-甲基-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯
将实施例3的步骤B中获得的衍生物(80毫克，0.244毫摩尔)溶解在二氯甲烷(1毫升)中，然后在环境温度下相继加入三乙胺(60微升，0.488毫摩尔)和二碳酸二叔丁酯(106毫克，0.488毫摩尔)。在环境温度下搅拌4小时后，向反应介质中加入用氯化钠饱和的溶液(5毫升)。水相用二氯甲烷(3×20毫升)萃取。有机相在硫酸镁上干燥，然后减压浓缩以得到无定形白色粉末(157毫克)。该反应粗产物在二氧化硅柱上经过色谱处理(洗脱液二氯甲烷100％，然后乙酸乙酯梯度20％至30％)以得到预期衍生物(0.068克，0.159毫摩尔，60％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]⁺＝428
¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ(ppm)＝1.59(s，9H，C(CH₃)₃)，3.05(s，3H，CH₃NBoc-CH₂)，3.10(m，3H，N-CH₂-CH-N，CH-CH₂-NBoc)，3.75(m，1H，N-CH₂-CH-N)，3.85(s，3H，CH₃)，3.99(s，1H，N-CH₂-CH-N)，4.75(m，1H，CH-CH₂-N(CH₃)Boc)，4.90(d，1H，N-O-CH₂-Ph)，5.02(d，1H，N-O-CH₂-Ph)，7.37(s，1H，吡唑的H)，7.40-7.46(多个峰，5H，Ph)
步骤D：
反式[[4，5，6，8-四氢-1-甲基-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-8-基]甲基]-甲基-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯的吡啶鎓盐
按实施例1的步骤G中所示的进行的同时，实施例3的步骤C中获得的化合物(0.068克，0.159毫摩尔)在甲醇(5毫升)中在10％碳载钯(25毫克)存在下生成脱苄基化产物。
MS(ES(+))：m/z[M+H]⁺＝337
该脱苄基化中间体、吡啶(1毫升)、吡啶/三氧化硫络合物(50毫克，0.318毫摩尔)生成预期盐(0.045克，0.090毫摩尔，100％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]^-＝416
¹H NMR(400MHz，MeOH-d₄)，2种构象异构体形式：δ(ppm)＝1.53(s，9H，C(CH₃)₃，3.09(s，3H，CH₃(A)NHBoc)，3.10(s，3H，CH₃(B)NHBoc)，3.37(m，1H，BocN(CH₃)-CH₂-CH或N-CH₂-CH-N)，3.58(m，1H，BocN(CH₃)-CH₂-CH或N-CH₂-CH-N)，3.75(s，3H，CH₃)，3.84(m，1H，BocN(CH₃)-CH₂-CH或N-CH₂-CH-N)，3.90(m，1H，BocN(CH₃)-CH₂-CH或N-CH₂-CH-N)，4.90(m，2H，N-CH-CH₂-N，N-CH₂-CH-N+signal H₂O)，7.54(s，1H，吡唑的H)，8.16(dd，2H，吡啶)，8.70(dd，2H，吡啶)，8.94(d，1H，吡啶)
步骤E：
反式[[4，5，6，8-四氢-1-甲基-6-氧代-5-(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-8-基]甲基]-甲基-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯的钠盐
如实施例1的步骤H中所示进行的同时，实施例3的步骤D中获得的盐(0.045克，0.090毫摩尔)、DOWEX 50WX8树脂(30克)和2N苏打(150毫升)生成预期钠盐(0.039克，0.090毫摩尔，100％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]^-＝416
¹H NMR(400MHz，MeOH-d₄)，2种构象异构体形式：δ(ppm)＝1.56(s，9H，C(CH₃)₃)，3.09(s，3H，CH₃(A)NHBoc)，3.10(s，3H，CH₃(B)NHBoc)，3.37(m，1H，BocN(CH₃)-CH₂-CH或N-CH₂-CH-N)，3.64(m，1H，BocN(CH₃)-CH₂-CH或N-CH₂-CH-N)，3.75(s，3H，CH₃)，3.84(m，1H，BocN(CH₃)-CH₂-CH或N-CH₂-CH-N)，3.93(m，1H，BocN(CH₃)-CH₂-CH或N-CH₂-CH-N)，4.90(m，2H，N-CH-CH₂-N，N-CH₂-CH-N+H₂O的信号)，7.55(s，1H，吡唑的H).
步骤F：
反式8-(甲氨基甲基)-4，8-二氢-1-甲基-5(磺氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂-6(5H)-酮的钠盐和三氟乙酸盐
如实施例1的步骤I中所示进行的同时，实施例3的步骤E中获得的钠盐(0.039克，0.088毫摩尔)、二氯甲烷(5毫升)和三氟乙酸/无水二氯甲烷的1/1混合物(4毫升)生成预期产物(39毫克，0.08毫摩尔，100％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]^-＝315
¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ(ppm)＝2.76(s，3H，CH3NH⁺₂-CH₂)，3.30-3.50(m，4H，N-CH₂-CH-N，NH⁺₂-CH₂-CH)，3.75(s，3H，CH₃)，4.74(m，1H，N-CH₂-CH-N)，4.82(d，1H，CH-CH₂-NH⁺₂CH₃)，7.43(s，1H，吡唑的H)，8.67(m，2H，NH₃⁺)
实施例4：药物组合物
制备注射用组合物，其包含：
-实施例1的化合物：500毫克
-无菌水性赋形剂：q.s.p.5cm³
本发明的产品的药理学研究
体外活性，在液体介质中的稀释法：
准备一系列试管，其中放置等量无菌营养培养基，并在各试管中放置递增量的研究产品，然后在各试管中加入菌株。37℃下在烘箱中孵育24小时后，通过透照评估生长抑制，这使得可以测定以微克/毫升表示的最小抑制浓度(C.M.I)。
以此方式对实施例1和2的产物进行试验，并与申请WO02/100860的实施例18和19的产物进行比较。结果表明，实施例1和2的产物对抵抗铜绿假单胞菌非常具有活性，对比产物完全不这样。