一种食用油中脱氧核糖核酸的提取方法及其试剂盒.pdf

本发明涉及生物化学技术领域，尤其涉及一种食用油中脱氧核糖核酸的提取方法及其试剂盒。本发明提供了一种用于提取脱氧核糖核酸的漂洗液I，包括异硫氰酸胍、柠檬酸钠、HEPES-TRIS、Tween20和水。并提供了利用该漂洗液I提取食用油中脱氧核糖核酸方法，包括以下步骤：取磁珠与食用油混合，结合脱氧核糖核酸后经第一磁性分离弃油，获得结合有脱氧核糖核酸的磁珠；取所述结合有脱氧核糖核酸的磁珠，与漂洗液I混合后，经第二磁性分离弃除上清液，经漂洗、干燥、洗脱、第三磁性分离，即得脱氧核糖核酸溶液。本发明提供的方法操作简单、缩短了操作时间，且不需要使用正己烷、苯酚和氯仿等高毒性的有机溶剂，操作更加安全。

1.  一种提取食用油中脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：取磁珠与食用油混合，结合脱氧核糖核酸后经第一磁性分离弃油，获得结合有脱氧核糖核酸的磁珠；
步骤2：取所述结合有脱氧核糖核酸的磁珠，经第一漂洗，第二磁性分离弃除上清液，第二漂洗、干燥、洗脱、第三磁性分离，即得脱氧核糖核酸溶液。

2.  一种采用硅醇基磁珠提取食用油中脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：取硅醇基磁珠与食用油混合，结合脱氧核糖核酸后经第一磁性分离弃油，获得结合有脱氧核糖核酸的硅醇基磁珠；
步骤2：取所述结合有脱氧核糖核酸的硅醇基磁珠，经第一漂洗，第二磁性分离弃除上清液，第二漂洗、干燥、洗脱、第三磁性分离，即得脱氧核糖核酸溶液。

3.  一种如权利要求1或2所述方法使用的试剂盒，其特征在于，包括磁珠悬液、漂洗液I、漂洗液II、漂洗液III和洗脱液；
其中，所述漂洗液I包括异硫氰酸胍、柠檬酸钠、HEPES-TRIS、Tween20和水；
所述漂洗液II为漂洗液I与乙醇的混合物；
所述漂洗液III为乙醇水溶液；
所述洗脱液为ddH₂O。

4.  根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液I中所述异硫氰酸胍的含量以摩尔体积浓度计为4mol/L～6mol/L。

5.  根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液I中所述柠檬酸钠的含量以摩尔体积浓度计为10mmol/L～50mmol/L。

6.  根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液I中所述HEPES-TRIS的含量以摩尔体积浓度计为20mmol/L～200mmol/L。

7.  根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液I中所述Tween20的含量以体积分数计为0.5%～4%。

8.  根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液II中漂洗液I与乙醇的体积比为（1～4）:1。

9.  根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液III中乙醇的体积分数为75%。

一种食用油中脱氧核糖核酸的提取方法及其试剂盒
技术领域
本发明涉及生物化学技术领域，尤其涉及一种食用油中脱氧核糖核酸的提取方法及其试剂盒。
背景技术
从古至今，植物源食用油一直是人类得以健康生活的保障，因此对其的安全性检测越发重要。影响食用油安全性主要有两个方面，分别为：转基因食用油和地沟油。虽然目前还缺乏科学依据证明转基因食用油对人类健康和环境安全性的危害，但近几年的调查研究显示消费者对转基因作物制备食用油高度关注；另外，已经证实严重危害人体健康的地沟油在加工过程中油脂发生了水解、氧化、缩合等一系列复杂的化学反应，产生了大量的苯、萘、蒽、硝酸盐和亚硝酸盐等有害物质，其中有一些物质为强致癌物质，因此，食用地沟油对人体健康危害极大。
2011年9月卫生部曾发布消息，全力组织科研攻关研究鉴别地沟油检验方法。卫生部征集到7家技术机构研制的5种地沟油检测方法，分别从多环芳烃、胆固醇、电导率等指标对地沟油进行检测，但采用这些方法特异性都不强。而对转基因食用油的检测更是无法通过上述指标完成。因此，目前对转基因食用油和地沟油的检测多采用PCR方法，以检测食品中是否含有特定的外源基因。然而，外源基因的检测很大程度上受限于对食用油中脱氧核糖核酸提取的方法，而食用油生产加工过程通常需经过高温和高压处理，产品中的DNA遭到严重破坏，DNA的质量大大降低，加大了食用油核酸提取及检测的难度。因此，开发有效的从食用油中提取DNA的方法非常重要。
现有的提取食用油中DNA的方法通常需经乳化、萃取、抽提、沉淀、洗涤、溶解方可得到DNA溶液，这些方法步骤繁多、操作复杂，且操作时间长，DNA提取过程中，每增加一个步骤都会造成DNA的大量损失，且操作过程过长容易导致DNA的降解，因此，这些方法都不易得到足够用于检测的DNA。另外，乳化过程需采用乳化剂，而乳化剂通常为正己烷、乙醇、石油醚等有 机溶剂；抽提通常采用苯酚或氯仿等有机溶剂；乳化和抽提中采用的这些有机溶剂具有较大的毒性，操作过程中，安全性较低。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种食用油中脱氧核糖核酸的提取方法及其试剂盒。本发明提供的食用油中脱氧核糖核酸的提取方法采用磁珠直接结合食用油中脱氧核糖核酸，结合了脱氧核糖核酸的磁珠经第一次漂洗、第二次漂洗、干燥、洗脱然后得到脱氧核糖核酸的技术路线。食用油在磁珠结合脱氧核糖核酸之前没有进行乳化、消解及萃取等步骤，从而减少了操作步骤，缩短了提取时间，避免了有机溶剂的使用。
本发明提供了一种提取食用油中脱氧核糖核酸的方法，包括以下步骤：
步骤1：取磁珠与食用油混合，结合脱氧核糖核酸后经第一磁性分离弃油，获得结合有脱氧核糖核酸的磁珠；
步骤2：取结合有脱氧核糖核酸的磁珠，经第一漂洗，第二磁性分离弃除上清液，第二漂洗、干燥、洗脱、第三磁性分离，即得脱氧核糖核酸溶液；
第一漂洗采用漂洗液I。
漂洗液I包括：异硫氰酸胍、柠檬酸钠、HEPES-TRIS和Tween20，溶剂为水。
本发明提供的方法在提取油脂中的DNA时无需进行乳化、消解及萃取等步骤，克服了传统方法中认为对油脂中DNA的提取必须先进行乳化的技术偏见，操作简单并缩短了操作时间，因此，一方面减少了提取过程中因操作繁琐而导致的核酸损失，另一方面提高了提取速度，使提取和检测工作可在2小时以内完成。
作为优选，磁珠表面由任何能够与脱氧核糖核酸非特异或者特异结合的材料制成。
优选地，漂洗液I中异硫氰酸胍的含量以摩尔体积浓度计为4mol/L～6mol/L。
优选地，漂洗液I中柠檬酸钠的含量以摩尔体积浓度计为10mmol/L～50mmol/L。
优选地，漂洗液I中HEPES-TRIS的含量以摩尔体积浓度计为20 mmol/L～200mmol/L。
优选地，漂洗液I中Tween20的含量以体积分数计为0.5%～4%。
作为优选，磁珠采用硅醇基磁珠、氨基磁珠、羧基磁珠；
优选地，磁珠采用硅醇基磁珠。
作为优选，提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中的第二漂洗依次采用漂洗液II及漂洗液III。
优选地，漂洗液II为采用漂洗液I与乙醇的混合物。
更优选地，漂洗液II中漂洗液I与乙醇的体积比为（1～4）：1。
更优选地，漂洗液III为乙醇水溶液。
最优选地，漂洗液III中乙醇的体积分数为75%
优选地，洗脱采用ddH₂O。
本发明还提供了一种采用硅醇基磁珠提取食用油中脱氧核糖核酸的方法，包括以下步骤：
步骤1：取硅醇基磁珠与食用油混合，结合脱氧核糖核酸后经第一磁性分离弃油，获得结合有脱氧核糖核酸的硅醇基磁珠；
步骤2：取结合有脱氧核糖核酸的硅醇基磁珠，经第一洗脱，第二磁性分离弃除上清液，漂洗、干燥、溶解，即得脱氧核糖核酸溶液；
第一漂洗采用漂洗液I。
漂洗液I包括：异硫氰酸胍、柠檬酸钠、HEPES-TRIS和Tween20溶剂为水。
由于硅醇基磁珠可直接进入PCR扩增体系，因此在提取过程中可省略洗脱步骤，缩短了提取时间。
优选地，漂洗液I中异硫氰酸胍的含量以摩尔体积浓度计为4mol/L～6mol/L。
优选地，漂洗液I中柠檬酸钠的含量以摩尔体积浓度计为10mmol/L～50mmol/L。
优选地，漂洗液I中HEPES-TRIS的含量以摩尔体积浓度计为20mmol/L～200mmol/L。
优选地，漂洗液I中Tween20的含量以体积分数计为0.5%～4%。
作为优选，提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中的第二漂洗依次采用漂 洗液II及漂洗液III。
优选地，漂洗液II为采用漂洗液I与乙醇的混合物。
更优选地，漂洗液II中漂洗液I与乙醇的体积比为（1～4）：1。
更优选地，漂洗液III为乙醇水溶液。
最优选地，漂洗液III中乙醇的体积分数为75%。
作为优选，溶解采用ddH₂O。
本发明采用的磁珠可直接从油脂中抓捕吸附带有负电荷的核酸或含核酸类物质，从而无需乳化步骤在油中就能够完成对核酸的结合，减少了乳化或者萃取造成的损失。
本发明还提供了一种用于本发明提供的食用油中脱氧核糖核酸提取方法的试剂盒，包括磁珠悬液、漂洗液I、漂洗液II、漂洗液III和洗脱液；
其中，漂洗液I包括异硫氰酸胍、柠檬酸钠、HEPES-TRIS、Tween20和水；漂洗液II为漂洗液I与乙醇的混合物；漂洗液III为乙醇水溶液；洗脱液为ddH₂O。
本发明采用漂洗液I中含有异硫氰酸胍，可以促使核酸分子的磷酸基团与磁珠发生吸附作用，其中的柠檬酸钠控制了体系的离子强度，提供了一个高盐环境，使核酸紧紧结合在磁珠上，不会被漂洗步骤洗掉，而tween20作为非离子表面活性剂，有利于除去磁珠表面附着的油，提高核酸产物的纯度，因此，漂洗液I的采用改变了磁珠和核酸的结合方式，可促进核酸紧紧吸附于磁珠表面；最终通过漂洗-洗脱，最后得到高质量的核酸。
作为优选，漂洗液I中异硫氰酸胍的含量以摩尔体积浓度计为4mol/L～6mol/L。
优选地，漂洗液I中柠檬酸钠的含量以摩尔体积浓度计为10mmol/L～50mmol/L。
优选地，漂洗液I中HEPES-TRIS的含量以摩尔体积浓度计为20mmol/L～200mmol/L。
优选地，漂洗液I中Tween20的含量以体积分数计为0.5%～4%。
作为优选，磁珠悬液中的磁珠为带正电荷的磁珠。
优选地，磁珠悬液中的磁珠为硅醇基磁珠、氨基磁珠、羧基磁珠。
优选地，磁珠悬液中的磁珠为硅醇基磁珠。
优选地，漂洗液II中漂洗液I与乙醇的体积比为（1～4）：1。
优选地，漂洗液III中乙醇的体积分数为75%。
本发明提供了一种提取食用油中脱氧核糖核酸的方法，首先，取磁珠与食用油混合，结合脱氧核糖核酸后经第一磁性分离弃油，获得结合有脱氧核糖核酸的磁珠；然后，取所述结合有脱氧核糖核酸的磁珠，经第一漂洗，第二磁性分离弃除上清液，第二漂洗、干燥、洗脱、第三磁性分离，即得脱氧核糖核酸溶液。本发明提供的方法在提取油脂中的DNA时无需进行乳化、消解及萃取等步骤，克服了传统方法中认为对油脂中DNA的提取必须先进行乳化的技术偏见，操作简单并缩短了操作时间，因此，一方面减少了提取过程中因操作繁琐而导致的核酸损失，另一方面提高了提取速度，使提取和检测工作可在2小时以内完成；并且，应用本方法提取食用油脂中的DNA时不需要使用正己烷、苯酚和氯仿等高毒性的有机溶剂，操作更加安全。实验表明，采用本发明提供的方法提取的食用油中的DNA可有效用于转基因植物油和地沟油的检测。
附图说明
图1示采用本发明提供的方法提取的金龙鱼精炼一级大豆油中核酸荧光PCR检测图，其中，横坐标为循环数，纵坐标为荧光强度，直线7示扩增曲线的起跳阈值，曲线1示金龙鱼精炼一级大豆油提取到的核酸中外源基因CaMV35S的扩增曲线，曲线2示金龙鱼精炼一级大豆油提取到的核酸中外源基因FMV35S的扩增曲线，曲线3示金龙鱼精炼一级大豆油提取到的核酸中外源基因NOS的扩增曲线，曲线4示金龙鱼精炼一级大豆油提取到的核酸中内源基因Lectin的扩增曲线，曲线5示金龙鱼精炼一级大豆油提取到的核酸中外源基因NPT II的扩增曲线，曲线6示以ddH₂O为模板的阴性对照扩增曲线；
图2示采用本发明提供的方法提取的金龙鱼精炼一级菜籽油中核酸荧光PCR检测图，其中，横坐标为循环数，纵坐标为荧光强度，直线6示扩增曲线的起跳阈值，曲线1示金龙鱼精炼一级菜籽油提取到的核酸中内源基因HMG的扩增曲线，曲线2示金龙鱼精炼一级菜籽油提取到的核酸中外源基因NOS的扩增曲线，曲线3示金龙鱼精炼一级菜籽油提取到的核酸中外源基因 FMV 35S的扩增曲线，曲线4示金龙鱼精炼一级菜籽油提取到的核酸中外源基因CaMV 35S的扩增曲线，曲线5示金龙鱼精炼一级菜籽油提取到的核酸中外源基因NPT II的扩增曲线；
图3示采用本发明提供的方法提取的红蜻蜓香菜油中核酸荧光PCR检测图，其中，横坐标为循环数，纵坐标为荧光强度，直线6示扩增曲线的起跳阈值，曲线1示红蜻蜓香菜油提取到的核酸中内源基因HMG的扩增曲线，曲线2示红蜻蜓香菜油提取到的核酸中外源基因CaMV 35S的扩增曲线，曲线3示红蜻蜓香菜油提取到的核酸中外源基因NOS的扩增曲线，曲线4示红蜻蜓香菜油提取到的核酸中外源基因FMV 35S的扩增曲线，曲线5示红蜻蜓香菜油提取到的核酸中外源基因NPT II的扩增曲线；
图4示采用本发明提供的方法提取的金龙鱼食用调和油中核酸荧光PCR检测图，其中，横坐标为循环数，纵坐标为荧光强度，直线7示扩增曲线的起跳阈值，曲线1示金龙鱼食用调和油提取到的核酸中油菜内源基因HMG的扩增曲线，曲线2示金龙鱼食用调和油提取到的核酸中外源基因NOS的扩增曲线，曲线3示金龙鱼食用调和油提取到的核酸中外源基因FMV 35S的扩增曲线，曲线4示金龙鱼食用调和油提取到的核酸中外源基因CaMV 35S的扩增曲线，曲线5示金龙鱼食用调和油提取到的核酸中大豆内源基因Lectin的扩增曲线，曲线6示金龙鱼食用调和油提取到的核酸中外源基因NPT II的扩增曲线；
图5示采用本发明提供的两种方法提取的红蜻蜓香菜油中核酸内源基因HMG的荧光PCR检测图，其中，横坐标为循环数，纵坐标为荧光强度，直线4示扩增曲线的起跳阈值，曲线1示以包含洗脱步骤的方法提取红蜻蜓香菜油中核酸内源基因HMG的扩增曲线，曲线2示以不包含洗脱步骤的方法提取红蜻蜓香菜油中核酸内源基因HMG的扩增曲线，曲线3示以ddH₂O为模板对内源基因HMG的扩增曲线；
图6示采用本发明提供的方法提取不同地沟油含量的食用油中DNA的质量检测，其中，泳道M示Marker I，泳道1示阴性对照模板的扩增条带，泳道2示以地沟油含量为100%的食用油中提取出的DNA溶液为模板的扩增条带，泳道3示以地沟油含量为0.1%的食用油中提取出的DNA溶液为模板的扩增条带，泳道4示以地沟油含量为1%的食用油中提取出的DNA溶液为模 板的扩增条带，泳道5示以地沟油含量为5%的食用油中提取出的DNA溶液为模板的扩增条带，泳道6示以地沟油含量为10%的食用油中提取出的DNA溶液为模板的扩增条带，泳道7示以地沟油含量为50%的食用油中提取出的DNA溶液为模板的扩增条带，目的条带大小为110bp；
图7示采用本发明提供的试剂盒提取的金龙鱼精炼一级菜籽油中油菜内源基因HMG荧光PCR检测图，其中，横坐标为循环数，纵坐标为荧光强度，直线5示扩增曲线的起跳阈值，曲线1示以常规方法提取的油菜基因组DNA溶液作为模板的内源基因HMG的扩增曲线，曲线2示在5mL金龙鱼精炼一级菜籽油中提取到的DNA-5溶液内源基因HMG的扩增曲线，曲线3示在10mL金龙鱼精炼一级菜籽油中提取到的DNA-10溶液内源基因HMG的扩增曲线，曲线4示以ddH₂O作为模板内源基因HMG的扩增曲线。
具体实施方式
本发明提供了一种提取食用油中脱氧核糖核酸的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供了一种提取食用油中脱氧核糖核酸的方法，包括以下步骤：
步骤1：取磁珠与食用油混合，结合脱氧核糖核酸后经第一磁性分离弃油，获得结合有脱氧核糖核酸的磁珠；
步骤2：取结合有脱氧核糖核酸的磁珠，经第一漂洗，第二磁性分离弃除上清液，第二漂洗、干燥、洗脱、第三磁性分离，即得脱氧核糖核酸溶液；
第一漂洗采用漂洗液I。
漂洗液I包括：异硫氰酸胍、柠檬酸钠、HEPES-TRIS和Tween20溶剂为水。
漂洗液I中异硫氰酸胍的含量以摩尔体积浓度计为4mol/L～6mol/L。
漂洗液I中柠檬酸钠的含量以摩尔体积浓度计为10mmol/L～50mmol/L。
漂洗液I中HEPES-TRIS的含量以摩尔体积浓度计为20mmol/L～200 mmol/L。
漂洗液I中Tween20的含量以体积分数计为0.5%～4%。
磁珠采用硅醇基磁珠、氨基磁珠、羧基磁珠。
磁珠采用硅醇基磁珠。
提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中的第二漂洗依次采用漂洗液II及漂洗液III。
漂洗液II为采用漂洗液I与乙醇的混合物。
漂洗液II中漂洗液I与乙醇的体积比为（1～4）：1。
漂洗液III为乙醇水溶液。
漂洗液III中乙醇的体积分数为75%
洗脱采用ddH₂O。
磁珠悬液与食用油的体积比为4:3000。
本发明提供的提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中，结合脱氧核糖核酸具体为：震荡使磁珠与食用油充分混匀后放置。
其中，震荡的时间为5min。
放置的时间为10min。
为提高结合脱氧核糖核酸效率，在步骤1后，还包括重复结合的步骤。
重复结合具体为：取结合有脱氧核糖核酸的磁珠与食用油，震荡使其混合均匀后放置。
重复结合的次数为8次～12次。
本发明提供的提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中，第一磁性分离为：置于磁力架上静置5min或11000rpm离心5min。
为提高分离效果，第一磁分离为11000rpm离心5min。
本发明提供的提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中，漂洗液I的添加量与所用食用油体积的体积比为（1:250）～（1:400）。
本发明提供的提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中，第二磁性分离为：置于磁力架上静置5min或11000rpm离心5min。
为提高分离效果，第二磁分离为11000rpm离心5min。
本发明提供的采用磁珠提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中，提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中的第二漂洗依次采用漂洗液II及漂洗液III。
漂洗液II为采用漂洗液I与乙醇的混合物。
漂洗液II中漂洗液I与乙醇的体积比为（1～4）：1。
第二漂洗采用的漂洗液II的添加量与所用食用油体积的体积比为（1:250）～（1:400）。
采用漂洗液II的漂洗具体为：采用漂洗液I与乙醇的混合物重悬磁珠，进行第四磁性分离弃除上清液。
为进一步对提取的DNA进行漂洗，用漂洗液III进一步漂洗。
为提高漂洗效果，重复用漂洗液III漂洗一次。
用漂洗液III的添加量与所用食用油体积的体积比为（1:250）～（1:400）。
为提高漂洗效果，重复用漂洗液III漂洗一次。
本发明提供的提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中，为避免DNA降解，干燥为在室温下放置晾干。
干燥时间为5min～10min。
本发明提供的提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中，为将DNA从磁珠上洗脱下来，洗脱采用ddH₂O。
ddH₂O的添加量与所用食用油的体积比为（1:2000）～（1:3600）。
本发明提供的提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中，第三磁性分离为：置于磁力架上静置5min或11000rpm离心5min。
为提高分离效果，第三磁分离为11000rpm离心5min。
本发明提供的提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中，洗脱具体为：采用ddH₂O重悬磁珠，室温放置10min，期间混匀3～5次。
本发明还提供了一种采用硅醇基磁珠提取食用油中脱氧核糖核酸的方法，包括以下步骤：
步骤1：取硅醇基磁珠与食用油混合，结合脱氧核糖核酸后经第一磁性分离弃油，获得结合有脱氧核糖核酸的硅醇基磁珠；
步骤2：取结合有脱氧核糖核酸的硅醇基磁珠，经第一洗脱，第二磁性分离弃除上清液，漂洗、干燥、溶解，即得脱氧核糖核酸溶液；
第一漂洗采用漂洗液I。
漂洗液I包括：异硫氰酸胍、柠檬酸钠、HEPES-TRIS和Tween20溶剂为水。
由于硅醇基磁珠可直接进入PCR扩增体系，因此在提取过程中可省略洗脱步骤，缩短了提取时间。
漂洗液I中异硫氰酸胍的含量以摩尔体积浓度计为4mol/L～6mol/L。
漂洗液I中柠檬酸钠的含量以摩尔体积浓度计为10mmol/L～50mmol/L。
漂洗液I中HEPES-TRIS的含量以摩尔体积浓度计为20mmol/L～200mmol/L。
漂洗液I中Tween20的含量以体积分数计为0.5%～4%。
提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中的第二漂洗依次采用漂洗液II及漂洗液III。
漂洗液II为采用漂洗液I与乙醇的混合物。
漂洗液II中漂洗液I与乙醇的体积比为（1～4）：1。
漂洗液III为乙醇水溶液。
漂洗液III中乙醇的体积分数为75%。
溶解采用ddH₂O。
本发明提供的采用硅醇基磁珠提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中，磁珠悬液的浓度为50mg/mL。
磁珠悬液与食用油的体积比为4:3000。
本发明提供的采用硅醇基磁珠提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中，结合脱氧核糖核酸具体为：震荡使磁珠与食用油充分混匀后放置。
其中，震荡的时间为5min。
放置的时间为10min。
为提高结合脱氧核糖核酸效率，在步骤1后，还包括重复结合的步骤。
重复结合具体为：取结合有脱氧核糖核酸的磁珠与食用油，震荡使其混合均匀后放置。
重复结合的次数为8次～12次。
本发明提供的采用硅醇基磁珠提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中，第一磁性分离为：置于磁力架上静置5min或11000rpm离心5min。
为提高分离效果，第一磁分离为11000rpm离心5min。
本发明提供的采用硅醇基磁珠提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中，漂洗液I的添加量与所用食用油体积的体积比为（1:250）～（1:400）。
第二磁性分离为：置于磁力架上静置5min或11000rpm离心5min。
为提高分离效果，第二磁分离为11000rpm离心5min。
本发明提供的采用硅醇基磁珠提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中，提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中的第二漂洗依次采用漂洗液II及漂洗液III。
漂洗液II为采用漂洗液I与乙醇的混合物。
漂洗液II中漂洗液I与乙醇的体积比为（1～4）：1。
第二漂洗采用的漂洗液II的添加量与所用食用油体积的体积比为（1:250）～（1:400）。
采用漂洗液II的漂洗具体为：采用漂洗液I与乙醇的混合物重悬磁珠，进行第四磁性分离弃除上清液。
为进一步对提取的DNA进行漂洗，用漂洗液III进一步漂洗。
为提高漂洗效果，重复用漂洗液III漂洗一次。
用漂洗液III的添加量与所用食用油体积的体积比为（1:250）～（1:400）。
为避免DNA降解，干燥为在室温下放置晾干。
干燥时间为5min～10min。
溶解采用ddH₂O。
溶解采用的ddH₂O与所用食用油的体积比为（1:2000）～（1:3600）。
本发明还提供了一种用于本发明提供的食用油中脱氧核糖核酸提取方法的试剂盒，包括磁珠悬液、漂洗液I、漂洗液II、漂洗液III和洗脱液；
其中，漂洗液I包括异硫氰酸胍、柠檬酸钠、HEPES-TRIS、Tween20和水；漂洗液II为漂洗液I与乙醇的混合物；漂洗液III为乙醇水溶液；洗脱液为ddH₂O。
漂洗液I中异硫氰酸胍的含量以摩尔体积浓度计为4mol/L～6mol/L。
漂洗液I中柠檬酸钠的含量以摩尔体积浓度计为10mmol/L～50mmol/L。
漂洗液I中HEPES-TRIS的含量以摩尔体积浓度计为20mmol/L～200mmol/L。
漂洗液I中Tween20的含量以体积分数计为0.5%～4%。
磁珠悬液中的磁珠为带正电荷的磁珠。
磁珠悬液中的磁珠为硅醇基磁珠、氨基磁珠、羧基磁珠。
磁珠悬液中的磁珠为硅醇基磁珠。
磁珠悬液中磁珠的质量-体积浓度为50mg/mL。
漂洗液II中漂洗液I与乙醇的体积比为（1～4）：1。
漂洗液III中乙醇的体积分数为75%。
本发明还提供了一种提取食用油中脱氧核糖核酸的方法，首先，取磁珠与食用油混合，结合脱氧核糖核酸后经第一磁性分离弃油，获得结合有脱氧核糖核酸的磁珠；然后，取结合有脱氧核糖核酸的磁珠，经第一漂洗，第二磁性分离弃除上清液，第二漂洗、干燥、洗脱、第三磁性分离，即得脱氧核糖核酸溶液。本发明提供的方法在提取油脂中的DNA时无需进行乳化、消解及萃取等步骤，克服了传统方法中认为对油脂中DNA的提取必须先进行乳化的技术偏见，操作简单并缩短了操作时间，因此，一方面减少了提取过程中因操作繁琐而导致的核酸损失，另一方面提高了提取速度，使提取和检测工作可在2小时以内完成；并且，应用方法提取食用油脂中的DNA时不需要使用正己烷、苯酚和氯仿等高毒性的有机溶剂，操作更加安全。实验表明，采用本发明提供给的方法提取的食用油中的DNA可有效用于转基因植物油和地沟油的检测。
本发明采用的试剂皆为普通市售品，皆可由市场购得。
其中，油样选自金龙鱼精炼一级大豆油（原材料为转基因大豆）、金龙鱼精炼一级菜籽油（原材料为转基因油菜籽）、红蜻蜓香菜油（原材料为非转基因油菜籽）、金龙鱼食用调和油（原料含转基因大豆和转基因油菜籽）；荧光PCR仪采用安捷伦公司的Mx 3000P；2×qPCR premix购自SNOVA公司，磁珠悬液购自SNOVA公司。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1 采用本发明提供的方法提取食用油中的DNA
采用本发明提供的方法提取金龙鱼精炼一级大豆油中的DNA，首先，按照以下配方配制所需溶液：
磁珠悬液：取硅醇基磁珠，用ddH₂O将其配制成浓度为50mg/mL的悬浊液。
漂洗液I：4mol/L异硫氰酸胍，10mmol/L柠檬酸钠，20mmol/L HEPES-TRIS，体积分数为0.5%的Tween20，溶剂为水，调节pH值为4.0。
漂洗液II：由漂洗液I和无水乙醇以1:1的体积比混合而成。
漂洗液III：体积分数为75%的乙醇水溶液。
取4个50mL离心管，每管中加入40μL磁珠悬液、30mL油样，震荡5min使磁珠和油充分混匀，放置10min，中间混匀数次，置于磁力架上静置5min磁性分离后弃油。
向各管中重新加入30mL油样，震荡5min重悬磁珠，使磁珠和油充分混匀，放置10min，中间混匀数次，置于磁力架上静置磁性分离后弃油。
共富集240mL油中的DNA，置于磁力架上静置5min磁性分离后，弃油。
向各管中加入900μL漂洗液I，重悬磁珠，并将磁珠悬液分别转入4个2mL离心管中，置于磁力架上静置5min，弃上清（尽量除去管内残留的油）。分别用900μL漂洗液II重悬磁珠，合并为一管，然后置于磁力架上静置5min，弃上清。向管中加入900μL漂洗液III，震荡重悬磁珠，然后置于磁力架上静置5min，弃上清。再向管中加入900μL漂洗液III，震荡重悬磁珠，置于磁力架上静置5min，弃上清。
室温放置5min晾干，向管中加入100μL洗脱液，震荡重悬磁珠，室温放置10min，中间混匀3次，然后置于磁力架上静置5min进行磁性分离，取上清得到DNA溶液。
实施例2 采用本发明提供的方法提取食用油中的DNA
采用本发明提供的方法提取金龙鱼精炼一级菜籽油中的DNA，首先，按照以下配方配制所需溶液：
磁珠悬液：取氨基磁珠，用ddH₂O将其配制成浓度为50mg/mL的悬浊液。
漂洗液I：6mol/L异硫氰酸胍，50mmol/L柠檬酸钠，200mmol/LHEPES-TRIS，体积分数为4%的Tween20，溶剂为水，调节pH值为6.5。
漂洗液II：由漂洗液I和无水乙醇以4:1的体积比混合而成。
漂洗液III：体积分数为75%的乙醇水溶液。
取4个50mL离心管，向各管中加入40μL磁珠悬液、30mL油样，震荡5min使磁珠和油充分混匀，放置10min，中间混匀数次，11000rpm离心5 min进行磁性分离。
向各管中重新加入30mL油样，震荡5min重悬磁珠，使磁珠和油充分混匀，放置10min，中间混匀数次，11000rpm离心5min后弃油。
共富集240mL油中的DNA，11000rpm离心5min，弃油。
向各管中加入900μL漂洗液I，重悬磁珠，并将磁珠悬液分别转入4个2mL离心管中，11000rpm离心5min，弃上清（尽量除去管内残留的油）。分别用900μL漂洗液II重悬磁珠，合并为一管，11000rpm离心5min，弃上清。向管中加入900μL漂洗液III，震荡重悬磁珠，然后11000rpm离心5min，弃上清。再向管中加入900μL漂洗液III，震荡重悬磁珠，11000rpm离心5min，弃上清。
室温放置10min晾干，向管中加入100μL洗脱液，震荡重悬磁珠，室温放置10min，中间混匀5次，11000rpm离心5min，取上清得到DNA溶液。
实施例3 采用本发明提供的方法提取食用油中的DNA
采用本发明提供的方法提取红蜻蜓香菜油中的DNA，首先，按照以下配方配制所需溶液：
磁珠悬液：取羧基磁珠，用ddH₂O将其配制成浓度为50mg/mL的悬浊液。
漂洗液I：5mol/L异硫氰酸胍，30mmol/L柠檬酸钠，110mmol/LHEPES-TRIS，体积分数为2.25%的Tween20，溶剂为水，调节pH值为5.25。
漂洗液II：由漂洗液I和无水乙醇以2.5:1的体积比混合而成。
漂洗液III：体积分数为75%的乙醇水溶液。
取4个50mL离心管，向各管中加入40μL磁珠悬液、30mL油样，震荡5min使磁珠和油充分混匀，放置10min，中间混匀数次，置于磁力架上静置5min磁性分离后弃油。
向各管中重新加入30mL油样，震荡5min重悬磁珠，使磁珠和油充分混匀，放置10min，中间混匀数次，置于磁力架上静置5min磁性分离后弃油。
共富集240mL油中的DNA，置于磁力架上静置5min磁性分离后，弃油。
向各管中加入900μL漂洗液I，重悬磁珠，并将磁珠悬液分别转入4个2mL离心管中，11000rpm离心5min，弃上清（尽量除去管内残留的油）。分 别用900μL漂洗液II重悬磁珠，合并为一管，11000rpm离心5min，弃上清。向管中加入900μL漂洗液III，震荡重悬磁珠，然后11000rpm离心5min，弃上清。再向管中加入900μL漂洗液III，震荡重悬磁珠，11000rpm离心5min，弃上清。
室温放置7min晾干，向管中加入100μL洗脱液，震荡重悬磁珠，室温放置10min，中间混匀4次，然后置于磁力架上静置5min进行磁性分离，取上清得到DNA溶液。
实施例4 采用本发明提供的方法提取食用油中的DNA
采用本发明提供的方法提取金龙鱼食用调和油中的DNA，首先，按照以下配方配制所需溶液：
磁珠悬液：取硅醇基磁珠，用ddH₂O将其配制成浓度为50mg/mL的悬浊液。
漂洗液I：4mol/L异硫氰酸胍，50mmol/L柠檬酸钠，20mmol/LHEPES-TRIS，体积分数为4.5%的Tween20，溶剂为水，调节pH值为5。
漂洗液II：由漂洗液I和无水乙醇以3:1的体积比混合而成。
漂洗液III：体积分数为75%的乙醇水溶液。
取4个50mL离心管，向各管中加入40μL磁珠悬液、30mL油样，震荡5min使磁珠和油充分混匀，放置10min，中间混匀数次，置于磁力架上静置5min磁性分离后弃油。
向个管中重新加入30mL油样，震荡5min重悬磁珠，使磁珠和油充分混匀，放置10min，中间混匀数次，置于磁力架上静置5min磁性分离后弃油。
共富集360mL油中的DNA，置于磁力架上静置5min磁性分离后，弃油。
向各管中加入900μL漂洗液I，重悬磁珠，并将磁珠悬液分别转入4个2mL离心管中，11000rpm离心5min，弃上清（尽量除去管内残留的油）。分别用900μL漂洗液II重悬磁珠，合并为一管，11000rpm离心5min，弃上清。向管中加入900μL漂洗液III，震荡重悬磁珠，然后11000rpm离心5min，弃上清。再向管中加入900μL漂洗液III，震荡重悬磁珠，11000rpm离心5min，弃上清。
室温放置8min晾干，向管中加入120μL洗脱液，震荡重悬磁珠，室温 放置10min，中间混匀3次，然后置于磁力架上静置5min进行磁性分离，取上清得到DNA溶液。
实施例5 本发明提供方法提取食用油中DNA质量检测
采用荧光PCR的方法，对实施例1～4中提取出的食用油中的DNA质量进行鉴定。
荧光PCR扩增体系为：

其中，上游引物溶液浓度为10μmol/L，下游引物溶液浓度为10μmol/L，Taqman探针溶液浓度为10μmol/L。
荧光PCR反应条件为：
95℃预变性3min；
95℃变性10sec，55℃退火30sec，72℃延伸1min，循环5次；95℃变性5sec，60℃退火并延伸30sec，循环40次（在每个循环结束时采集荧光）。
其中，用于检测DNA质量的目的基因如表1所示：
表1 用于DNA质量检测的目的基因


在检测各目的基因的Taqman探针序列5’端连接有荧光基团FAM，3’端连接有荧光淬灭基团BHQ1。
采用表1所示的引物及探针序列，对实施例1～4中提取出的DNA分别进行检测：其中对金龙鱼转基因大豆油中提取出的DNA的检测结果如图1所示；对金龙鱼转基因菜籽油中提取出的DNA的检测结果如图2所示；对红蜻蜓非转基因菜籽油中提取出的DNA的检测结果如图3所示；对金龙鱼调和油中提取出的DNA的检测结果如图4所示。采用表1中提供给的引物和探针在对金龙鱼转基因大豆油中提取出的DNA进行检测的同时，还以ddH2O为模板采用Lectin基因的引物和探针进行扩增作为阴性对照。
结果表明，对金龙鱼转基因大豆油中提取出的DNA的检测结果显示：内源基因lectin良好的扩增信号表明核酸提取成功，转基因筛选检测的4个目的基因中有3个（CaMV 35S、NOS、FMV 35S）结果显示为阳性；
对金龙鱼转基因菜籽油提取出的DNA的检测结果显示：内源基因HMG良好的扩增信号表明核酸提取成功，转基因作物筛选检测的4个目的基因中有3个（分别为CaMV 35S、NOS、FMV 35S）结果显示为阳性；
对红蜻蜓非转基因菜籽油提取出的DNA的检测结果显示：内源基因HMG良好的扩增信号表明核酸提取成功，转基因筛选检测的4个目的基因中有1个（CaMV 35S）结果显示为阳性。该现象重复检测两次结果一致，不排除该 食用油含有转基因材料的可能性。
对金龙鱼调和油提取出的DNA的检测结果显示：内源基因HMG良好的扩增信号表明核酸提取成功，转基因筛选检测的4个目的基因中有3个（CaMV35S、NOS、FMV 35S）结果显示为阳性。该调和油表明其原材料中含有转基因大豆和转基因油菜籽，而实际没能检出大豆的内源基因是因为其大豆原料含量少，350mL油量还不足以稳定检出其lectin含量。
实施例6 本发明提供的不含洗脱步骤的方法提取食用油中DNA
由于硅醇基磁珠可直接进入扩增体系，因此采用硅醇基磁珠提取食用油中DNA的方法可省略洗脱步骤。为检测不洗脱方式提取DNA的质量，取红蜻蜓香菜油为原材料，分别采用含洗脱步骤和不含洗脱步骤两种方式提取DNA。
首先，按照以下配方配制所需溶液：
磁珠悬液：取硅醇基磁珠，用ddH₂O将其配制成浓度为50mg/mL的悬浊液。
漂洗液I：4mol/L异硫氰酸胍，10mmol/L柠檬酸钠，20mmol/LHEPES-TRIS，体积分数为0.5%的Tween20，溶剂为水，调节pH值为4.0。
漂洗液II：由漂洗液I和无水乙醇以1:1的体积比混合而成。
漂洗液III：体积分数为75%的乙醇水溶液。
提取方法为：
取2个50mL离心管，每管加入20μL磁珠并加入20mL油样，震荡5min使磁珠和油充分混匀，放置10min，中间混匀数次，11000rpm离心5min，弃油（注意不要倒出磁珠），向各管中再加入20mL油样，震荡5min重悬磁珠，使磁珠和油充分混匀，放置10min，中间混匀数次，11000rpm离心5min，弃油（注意不要倒出磁珠），重复富集约80mL油里面的核酸。
在各管中加入900μL漂洗液I，重悬磁珠，将磁珠悬液转入2mL离心管管中，11000rpm离心5min，弃上清（尽量除去管内残留的油）。向各管中加入900μL漂洗液II，震荡重悬磁珠，然后11000rpm离心5min，弃上清。各管中加入900μL漂洗液III，震荡重悬磁珠，然后11000rpm离心5min，弃上清。再向管中加入900μL漂洗液III，震荡重悬磁珠，11000rpm离心5min， 弃上清。
室温下放置10min晾干管内残留的乙醇。
为考察不含洗脱步骤的方法是否会降低提取出的DNA的质量，对两个离心管中的一个进行洗脱，而另一个直接以ddH₂O溶解后检测。具体为：向其中一个离心管加入20μL洗脱液，震荡重悬磁珠，室温放置10min，中间混匀3～5次，然后11000rpm离心5min，取上清转移至另一干净的1.5mL离心管中，标记为DNA1；另外一个离心管直接加入18μL ddH₂O后用于扩增检测，标记为DNA2。
实施例7 本发明提供的不含洗脱步骤的方法提取食用油中DNA的质量检测
对实施例6中提取到的DNA1及DNA2进行检测，检测采用荧光PCR的方式。仪器采用安捷伦公司的Mx3000P荧光PCR仪，
其扩增体系为：

其中，上游引物溶液浓度为10μmol/L，下游引物溶液浓度为10μmol/L，Taqman探针溶液浓度为10μmol/L。
扩增的目的基因为油菜的内源基因HMG，其上游引物具有SEQ ID NO:4所示核苷酸序列，其下游引物具有SEQ ID NO:5所示核苷酸序列，Taqman探针具有SEQ ID NO:6所示核苷酸序列，其中，Taqman探针序列5’端连接有荧光基团FAM，3’端连接有荧光淬灭基团BHQ1。
分别取DNA1和DNA2为模板进行荧光PCR扩增，并设立以ddH2O为模板的阴性对照，对提取到的DNA的质量进行考察。
其PCR反应条件为：
95℃预变性3min；
95℃变性10sec，55℃退火30sec，72℃延伸1min，5个循环；
95℃变性5sec，60℃退火并延伸30sec，40个循环（在每个循环结束 时采集荧光）。
扩增结果如图5所示，结果表明：以DNA1和DNA2为模板的扩增皆能检测出目的基因，表明采用包含洗脱步骤的方法进行提取或采用不包含洗脱步骤的方法进行提取皆可提取到DNA。不包括洗脱步骤的方法可减少核酸提取步骤并减小洗脱效率带来的核酸量损失，但磁珠进入扩增体系对扩增检测效果也有一定抑制作用。
实施例8 采用本发明提供的方法提取地沟油中的DNA
收集炸香肠、火腿及其它食品重复使用后的油，低温放置使其呈现沉淀，离心去除沉淀。按表2的比例将地沟油与食用油混合均匀，作为提取样品。
表2 地沟油与食用油混合比例

采用本发明实施例1～4或6任一项中配制的溶液进行提取。
提取方法为：
取6个50mL离心管，向各管加入40μL磁珠，并分别加入表2中6种地沟油的油样，每管35mL，充分震荡使磁珠和油混匀，放置10min，中间混匀数次。11000rpm离心5min，弃油（注意不要倒出磁珠）。
向各管中加入900μL漂洗液I重悬磁珠，将磁珠悬液转入2mL离心管中，11000rpm离心5min，弃上清（尽量除去管内残留的油）。然后向各管中加入900μL第一洗涤液，震荡重悬磁珠，然后11000rpm离心5min，弃上清。各管中加入900μL第二洗涤液，震荡重悬磁珠，然后11000rpm离心5min，弃上清。在向各管中加入900μL第二洗涤液，震荡重悬磁珠，然后11000rpm离心5min，弃上清。
室温下放置10min晾干管内残留的乙醇，向各管加入20μL洗脱液，震荡重悬磁珠，室温放置10min，中间混匀3～5次，然后11000rpm离心5min，将各管中上清分别转移至另一干净的1.5mL离心管中，得到的DNA溶液。
实施例9 本发明提供的方法提取地沟油中DNA的质量检测
取实施例7中提取到的DNA溶液，采用PCR扩增的方式对其质量进行检测。并设置以ddH₂O为模板的阴性对照。由于地沟油多用于烹制肉类食品，在反复利用的过程中引入了动物源性核酸，因此，扩增的目的基因采用动物特有Cytb基因的保守区域，Cytb基因来自猪、牛、羊、鸡、鸭或鱼，扩增产物预期长度约为110bp。
扩增所采用的上游引物具有SEQ ID NO:19所示的核苷酸序列，下游引物具有SEQ ID NO:20所示的核苷酸序列。
PCR扩增体系为：
2×qPCR premix  20μL
上游引物        0.8μL
下游引物        0.8μL
模板            18.4μL
其中，上游引物溶液浓度为10μmol/L，下游引物溶液浓度为10μmol/L，Taqman探针溶液浓度为10μmol/L。
取实施例7中提取到的DNA溶液为模板，分别配制扩增体系，并设立以ddH₂O为模板的阴性对照。
其PCR反应条件为：
95℃预变性3min；
95℃变性10sec，55℃退火30sec，72℃延伸1min，5个循环；
95℃变性5sec，60℃退火并延伸30sec，40个循环。
在各扩增产物中取10μL进行琼脂糖电泳分析。电压为100V，电泳1小时，在凝胶成像仪上分析结果。结果如图6所示。结果表明，从含有不同体积分数地沟油的样品中提取得到的核酸中皆可扩增得到目的条带，说明本发明提供的方法可成功提取到地沟油中的DNA，提取出的DNA可用于食品中地沟油的检测。
实施例10 食用油中DNA提取试剂盒的制备
首先，配制母液：
摩尔-体积浓度为6mol/L的异硫氰酸胍母液（100mL）：称取70.9g异硫氰酸胍，加入75mL灭菌纯化水，39℃条件下搅拌2小时～3小时，待试剂完全溶解后定容至100mL。常温避光保存。
摩尔-体积浓度为0.5mol/L的柠檬酸钠母液（100mL）：称取14.7g柠檬酸钠，加入适量灭菌纯化水，试剂完全溶解后定容至100mL，121℃灭菌20min。常温保存。
摩尔-体积浓度为2mol/L的HEPES-TRIS母液（100mL）：称取47.68gHEPES，加入适量灭菌纯化水，60℃条件下搅拌1小时～2小时，待试剂完全溶解后用浓度为1mol/L Tris溶液调pH值至6.0，然后定容至100mL。常温保存。
体积分数为20%的Tween20母液（100mL）：量取20mL Tween20，加入80mL灭菌纯化水，充分混匀。常温保存。
配制所需溶液（100次量）：
磁珠悬液（4mL）：取硅醇基磁珠200mg，加入ddH₂O定容至4mL。
漂洗液I（150mL）：在适当的容器中加入112.5mL的6mol/L异硫氰酸胍母液、7.5mL的0.5mol/L柠檬酸钠母液、7.5mL的2mol/L HEPES-TIRS（pH6.0）、15mL的20%Tween20、7.5mL的灭菌纯化水，充分混匀，避光保存。
漂洗液II（100mL）：50mL漂洗液I与50mL无水乙醇混合均匀即得。
漂洗液III（200mL）：150mL无水乙醇与50mL灭菌纯化水混合均匀。
洗脱液：ddH₂O 1.5mL。
取配制好的磁珠悬液（4mL）、漂洗液I（100mL）、漂洗液II（100mL）、漂洗液II（100mL）和洗脱液(1.5mL)，灌装、包装，即得100次量的食用油中DNA提取试剂盒。
实施例11 食用油中DNA提取试剂盒的制备
首先，配制母液：
摩尔-体积浓度为6mol/L的异硫氰酸胍母液（100mL）：称取70.9g异硫氰酸胍，加入75mL灭菌纯化水，39℃条件下搅拌2小时～3小时，待试剂完全溶解后定容至100mL。常温避光保存。
摩尔-体积浓度为0.5mol/L的柠檬酸钠母液（100mL）：称取14.7g柠檬酸钠，加入适量灭菌纯化水，试剂完全溶解后定容至100mL，121℃灭菌20min。常温保存。
摩尔-体积浓度为2mol/L的HEPES-TRIS母液（100mL）：称取47.68gHEPES，加入适量灭菌纯化水，60℃条件下搅拌1小时～2小时，待试剂完全溶解后用浓度为1mol/L Tris溶液调pH值至6.0，然后定容至100mL。常温保存。
体积分数为20%的Tween20母液（100mL）：量取20mL Tween20，加入80mL灭菌纯化水，充分混匀。常温保存。
配制所需溶液（100次量）：
磁珠悬液（4mL）：取氨基磁珠200mg，加入ddH₂O定容至4mL。
漂洗液I（150mL）：在适当的容器中加入100mL的6mol/L异硫氰酸胍母液、3mL的0.5mol/L柠檬酸钠母液、1.5mL的2mol/L HEPES-TIRS（pH6.0）、3.75mL的20%Tween20、41.75mL的灭菌纯化水，充分混匀，避光保存。
漂洗液II（100mL）：75mL漂洗液I与25mL无水乙醇混合均匀即得。
漂洗液III（200mL）：150mL无水乙醇与50mL灭菌纯化水混合均匀。
洗脱液：ddH₂O 1.5mL。
取配制好的磁珠悬液（4mL）、漂洗液I（100mL）、漂洗液II（100mL）、漂洗液II（100mL）和洗脱液(1.5mL)，灌装、包装，即得100次量的食用油中DNA提取试剂盒。
实施例12 食用油中DNA提取试剂盒的制备
首先，配制母液：
摩尔-体积浓度为9mol/L的异硫氰酸胍母液（100mL）：称取106.35g异硫氰酸胍，加入75mL灭菌纯化水，39℃条件下搅拌2小时～3小时，待试剂完全溶解后定容至100mL。常温避光保存。
摩尔-体积浓度为0.5mol/L的柠檬酸钠母液（100mL）：称取14.7g柠檬 酸钠，加入适量灭菌纯化水，试剂完全溶解后定容至100mL，121℃灭菌20min。常温保存。
摩尔-体积浓度为2mol/L的HEPES-TRIS母液（100mL）：称取47.68gHEPES，加入适量灭菌纯化水，60℃条件下搅拌1小时～2小时，待试剂完全溶解后用浓度为1mol/L Tris溶液调pH值至6.0，然后定容至100mL。常温保存。
体积分数为40%的Tween20母液（100mL）：量取40mL Tween20，加入80mL灭菌纯化水，充分混匀。常温保存。
配制所需溶液（100次量）：
磁珠悬液（4mL）：取羧基磁珠200mg，加入ddH₂O定容至4mL。
漂洗液I（150mL）：在适当的容器中加入100mL的9mol/L异硫氰酸胍母液、15mL的0.5mol/L柠檬酸钠母液、15mL的2mol/L HEPES-TIRS（pH6.0）、15mL的40%Tween20、5mL的灭菌纯化水，充分混匀，避光保存。
漂洗液II（100mL）：80mL漂洗液I与20mL无水乙醇混合均匀即得。
漂洗液III（200mL）：150mL无水乙醇与50mL灭菌纯化水混合均匀。
洗脱液：ddH₂O 1.5mL。
取配制好的磁珠悬液（4mL）、漂洗液I（100mL）、漂洗液II（100mL）、漂洗液III（100mL）和洗脱液(1.5mL)，灌装、包装，即得100次量的食用油中DNA提取试剂盒。
实施例13 食用油中DNA提取试剂盒的使用
取实施例10～12任一项制备的食用油中DNA提取试剂盒对食用油中的DNA进行提取。提取的油样为金龙鱼精炼一级菜籽油。
方法为：50mL离心管，向各管中加入40μL磁珠悬液、5～10mL油样，震荡5min使磁珠和油充分混匀，放置10min，中间混匀数次，11000rpm离心5min，弃油。
向各管中加入900μL漂洗液I，重悬磁珠，并将磁珠悬液分别转入4个2mL离心管中，11000rpm离心5min，弃上清（尽量除去管内残留的油）。分别用900μL漂洗液II重悬磁珠，合并为一管，11000rpm离心5min，弃上清。 向管中加入900μL漂洗液III，震荡重悬磁珠，然后11000rpm离心5min，弃上清。再向管中加入900μL漂洗液III，震荡重悬磁珠，11000rpm离心5min，弃上清。
室温放置8min晾干，向管中加入120μL洗脱液，震荡重悬磁珠，室温放置10min，中间混匀3次，11000rpm离心5min，取上清得到DNA溶液。
其中，提取5mL油样获得的DNA溶液标记为DNA-5，提取10mL油样获得的DNA溶液标记为DNA-10。另取常规方法提取的油菜基因组DNA溶液作为阳性对照模板，ddH₂O作为阴性对照模板。
实施例14 采用本发明提供的试剂盒提取的DNA质量检测
对实施例13中提取到的DNA进行检测，检测采用荧光PCR的方式。仪器采用安捷伦公司的Mx3000P荧光PCR仪，
其扩增体系为：

其中，上游引物溶液浓度为10μmol/L，下游引物溶液浓度为10μmol/L，Taqman探针溶液浓度为10μmol/L。
扩增的目的基因为油菜的内源基因HMG，其上游引物具有SEQ ID NO:4所示核苷酸序列，其下游引物具有SEQ ID NO:5所示核苷酸序列，Taqman探针具有SEQ ID NO:6所示核苷酸序列，其中，Taqman探针序列5’端连接有荧光基团FAM，3’端连接有荧光淬灭基团BHQ1。
分别取DNA1和DNA2为模板进行荧光PCR扩增，并设立以ddH₂O为模板的阴性对照，对提取到的DNA的质量进行考察。
其PCR反应条件为：
95℃预变性3min；
95℃变性10sec，55℃退火30sec，72℃延伸1min，5个循环；95℃变性5sec，60℃退火并延伸30sec，40个循环（在每个循环结束时采集 荧光）。
其中，采用本发明实施例12提供的试剂盒提取的DNA的扩增结果如图7所示，结果表明：以油菜内源基因HMG为目的基因，以常规方法提取的油菜基因组DNA溶液作为模板有扩增信号产生，以ddH₂O作为模板无扩增信号产生，以本发明实施例12提供的试剂盒提取的DNA-5及DNA-10为模板有扩增信号。表明采用本发明实施例12提供的试剂盒可提取到DNA。本发明其他实施例提供给的试剂盒的扩增结果与此相似，表明本发明提供的试剂盒可有效从食用油中提取到DNA分子。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。