一种快速生产庆大霉素的方法 本发明涉及一种利用微生物发酵方法以高效率合成化学组合物的工艺。
目前已有的普通生产庆大霉素的发酵培养基的配方和配比如表1。中国专利CN1054617A中公开的培养基配方的配比如表2。菌种为绛红色小单孢菌(Micromonospora purpurea)。
其发酵工艺流程如下：
基础投料—接种—培养—第一次补料—第二次补料—第三次补料—放罐
其中基础投料消毒后约为罐体的一半，在PH值自然的条件下进行接种。接种量为基础料的1/4～1/3，培养温度为36.5℃，搅拌速度为220rpm，发酵周期为120～130小时，第一次补料时间在接种发酵培养35小时后，第二次补料时间在45小时后，第三次补料时间在65小时后。
上述普通发酵工艺所得到的普遍产率低，国内生产厂家发酵指数平均为0.07亿/小时.吨左右，其组份不稳定。
本发明目的是提供一种快速生产庆大霉素的新工艺方法，它用绛红色小单孢菌，发酵培养基配方为：玉米淀粉、葡萄糖、黄豆饼粉(热榨)、玉米粉、蛋白胨、硫酸铵、碳酸钙、硝酸钾、氯化钴、豆油、甘油聚醚、蛋氨酸、赖氨酸、精氨酸、水。
发酵工艺流程为：基础投料—接种—培养—第一次补料—第二次补料—第三次补料—补水—放罐。培养温度为30-36℃。
其特征在于：
(1)发酵培养基配比为：
玉米淀粉4.0-4.5％、葡萄糖1.0-1.4％、黄豆饼粉(热榨)4.0-4.5％、玉米粉1.5-2.0％、蛋白胨0.3％、硫酸铵0.08％、碳酸钙0.8％、硝酸钾0.003％、氯化钴0.001％、豆油0.15％、甘油聚醚0.015％、蛋氨酸0.0008-0.09％、赖氨酸0.0008-0.09％、精氨酸0.0008-0.09％、水86-88％(同表3)。
(2)第一次补料时间在接种培养后17-19小时，第二次补料时间在接种培养后30-34小时，第三次补料时间在接种培养后43-47小时。
(3)第三次补料后，8-12小时补水，补水后15-19小时放罐。
2.根据权利要求1所述的快速生产庆大霉素的方法，其特征在于：淀粉为玉米淀粉，黄豆饼粉为热榨黄豆饼粉。
本发明与现有发酵工艺结果比较，发酵周期由原工艺120～130小时缩短到70～74小时，产率大幅度提高，发酵指数由0.07亿/小时.吨左右，提高到0.10亿/小时.吨左右。产品质量符合90年版中国药典。(C1为25～50％，C1a为15～40％，C2a＋C2为20～50％)。
以下结合实施例对本发明做进一步说明：
发酵培养基地配方和配比见表4。菌种使用生产庆大霉素的绛红色小单孢菌81#菌种。发酵罐体积为25吨。消毒后培养基体积为10吨，PH自然，接种量为基础料1/5。培养温度，补料时间和补水时间，发酵周期等见表4。搅拌速度为220rpm，发酵过程中进行补料，第一、二、三次补料均各为4吨，第四次补水2吨。
其结果见表4。
经岛津LC-4A高效液相色谱仪用HPLC法测定庆大霉素组份为：
C1为27％，C1a为35％，C2a＋C2为38％，符合90年版中国药典。
表1 名称配比(％) 淀粉 5 葡萄糖 0.8 黄豆饼粉 3.5 玉米粉 0.8 鱼粉 0.2 蛋白胨 0.2 硫酸铵 0.05 碳酸钙 0.6 硝酸钾 0.005 氯化钴 0.0006 豆油 0.15 甘油聚醚 0.015 水 89表2
名称 配比(％) 淀粉 5.0-5.5 葡萄糖 0.8-1.0 黄豆饼粉 3.0-3.5 玉米粉 0.8-1.0 鱼粉 0.2 蛋白胨 0.2 硫酸铵 0.05 碳酸钙 0.6 硝酸钾 0.005 氯化钴 6r/ml 豆油 0.15 甘油聚醚 0.015 蛋氨酸 0.001-0.1 赖氨酸 0.001-0.1 精氨酸 0.001-0.1表3 名称 配比(％) 玉米淀粉 4.0～4.5 葡萄糖 1.0～1.4 黄豆饼粉(热榨) 4.0～4.5 玉米粉 1.5～2.0 蛋白胨 0.3 硫酸铵 0.08 碳酸钙 0.8 硝酸钾 0.003 氯化钴 0.001 豆油 0.15 甘油聚醚 0.015 蛋氨酸 0.0008～0.09 赖氨酸 0.0008～0.09 精氨酸 0.0008～0.09 水 86～88
表4 配比、条件及结果 对照 新方法 配 比 ︵ ％ ︶ 淀粉 5 玉米淀粉 4.0 4.5 4.3 葡萄糖 0.8 葡萄糖 1.4 1.2 1.0 黄豆饼粉 3.5黄豆饼粉(热榨) 4.0 4.5 4.3 玉米粉 0.8 玉米粉 1.5 1.7 2.0 鱼粉 0.2 蛋白胨 0.2 蛋白胨 0.3 0.3 0.3 硫酸铵 0.05 硫酸铵 0.05 0.05 0.05 碳酸钙 0.6 碳酸钙 0.8 0.8 0.8 硝酸钾 0.005 硝酸钾 0.003 0.003 0.003 氯化钴 0.0006 氯化钴 0.001 0.001 0.001 豆油 0.15 豆油 0.15 0.15 0.15 甘油聚醚 0.015 甘油聚醚 0.015 0.015 0.015 蛋氨酸 0.0008 0.009 0.09 赖氨酸 0.009 0.0008 0.09 精氨酸 0.09 0.0008 0.009 条 件发酵罐体积(T) 25 25 25 25培养温度(℃) 36.5 36 34 30一次补料时间(h) 35 17 18 19二次补料时间(h) 65 30 34 32三次补料时间(h) 90 47 49 51四次补水时间(h) 55 55 55发酵周期(h) 125 70 72 74放罐体积(T) 20.5 21.5 21.5 22.2 结 果生测效价(n/ml) 1080 850 908 900发酵指数(亿/h.T.) 0.0708 0.1044 0.1084 0.1080发酵指数提高率(％) 100 147.5 153.1 152.5