红根草邻醌类化学修饰物及它们的用途 本发明涉及天然产物及它的半合成。
红根草系唇形科丹参属植物(Salvia prionitis Hance)，民间将其全草用于治疗腹泻、菌痢、急慢性扁桃腺炎；咽喉炎并有抗结核活性(药学通报，15，428)，杨保津等[植物学报1988，30(5)：524—527]研究红根草的化学成分，从红根草中分离得到新天然产物红根草邻醌(化合物I)化合物I对P388白血病细胞有很强的抑制活性，在1μg/ml浓度时，抑制率为92.7％，在100-1000μg/ml时，对革兰氏阳性菌(例枯草杆菌，金黄色葡萄球菌等)有明显拮抗作用，但该化合物还有一定缺点。
本发明设计以有生物活性的红根草邻醌作为先导化合物，然后设计出一系列红根草邻醌类化学修饰物。
本发明是通过下列步骤完成：
1.将红根草的乙醇提取物经氯仿——水分配，得氯仿提取物，将该提取物进行硅胶柱层析及制备薄层层析(展开剂为二氯甲烷∶环乙烷＝1∶1V/V)纯化后即得化合物I。
2.化合物I用相应的卤化剂(例NBS等)使R1卤化，分离得化合物II其中R1＝F、Cl、Br、I
R2＝OH
3.化合物II在K2CO3存在下脱HR1后，得化合物III
4.化合物III经水解得化合物IV
5.化合物IV由相应的酰化试剂的存在下，使R1的羟基被相应的酰基取代，分别得化合物V—XI。化合物 R1 R2II Br(F、Cl、I) OHIII R1—R2＝0IV OH OHV OCOCH3 OHVI OCOCH2CH3 OHVII OCO(CH2)2CH3 OHVIII OCOCH＝CH2 OHIXOHX OCO(CH2)2COOH OHXI H H
该类二萜类化合物进行抗肿瘤的药理试验证明其对P388淋巴白血病细胞株和SGC7901人体胃癌细胞、A549人体肺癌细胞具有明显抑制作用，体内对小鼠Lewis肺癌有效。人体癌细胞抑制试验采用MTT法，P388小鼠淋巴白血病细胞采用排染法，体外药理试验结果由表1所示。
表1，红根草邻醌化学修饰物对P388淋巴白血病细胞株的抑制作用(抑制％)化合物 剂量100μg/ml 10μg/ml 1μg/ml II III IV V 97.8 99.4 100 97.8 14.0 100 100 99.3 3.4 8.4 0 24.5表2，化合物IV对人体癌细胞的抑制率(9％)肺癌细胞 剂量100μg/ml 10μg/ml 1μg/ml SGC7901 A549 90 98 100 100 10 66
小鼠体内实验，选用平均体重为17.29的小鼠，瘤型为Lewis肺癌，剂量为20mg/kg腹腔注射化合物V，对照组小鼠瘤重分别为(克)1.98，2.08，2.73，3.16，2.48，2.37，2.96，1.93，1.95，1.50；注射化合物V后的瘤重则明显减小，分别为(克)1.38，1.04，1.64，1.20，1.22，1.35，1.24抑制率为42.7％。
选用裸鼠品系为BALB/C—nn/nμ unde mice，(由中国科学院上海药物研究所提供)鼠重平均为25克，每批用鼠30只，其中给药组，对照组和阳性对照组各10只，瘤型为A549和LAX-83人体肺癌，A549是由美国引进的人体肺癌细胞株，然后接种于裸小鼠体内，成为裸小鼠人体肺癌移植瘤模型，LAX-83是中国科学院上海药物研究所裸鼠实验室于1983年建立的人体肺癌裸小鼠移植瘤模型，实验方法采用采块法，随机分组，接种48小时后腹腔给药，隔天一次，共三周，阳性对照药为MMC，2mg/kg，停药后48小时处死动物，分别称取体重和瘤重，按公式[(C-T)/C]×100计算肿瘤抑制率。结果由表3、表4所示。
表3，化合物IV对裸鼠A549人体肺癌模型的抑制作用 剂量(mg/kg) 抑制率(％) 20.00 30.00 40.00 50.00 60.55 55.60 48.19 64.18表4，化合物IV对裸鼠LAX—83人体肺癌模型的抑制作用 剂量(mg/kg) 抑制率(％) 10.00 40.00 40.00 50.09
下面用实施例进一步说明本发明的实施：
实施例1：
化合物(II)的制备：在一三角瓶中加入红根草邻醌200mg(0.68mmol)，用叔丁醇溶解后，加水7ml，冰水冷却至12℃以下，加入NBS 140mg(0.78mmol)，搅拌10分钟后，撤去冰水冷却浴，继续搅拌3小时，反应混合物于50℃以下蒸除有机溶剂，残余物以乙醚提取，乙醚提取液以无水MgSO4干燥，柱层析纯化，得化合物II200mg(75％)，C20H25BrO3，[M]+m/z：394(392)，366(364)(M-CO)，267，227，211，200，183，171，155，141，128，115，1HNMR(400MHz，CDCl3)δ：1.14，1.16(各3H，d，J＝7.0Hz，CH3-16，17)，1.32，1.37(各3H，s，CH3-18，19)，1.85(2H，m，H-2)，3.00(1H，m，H-15)，3.16(2H，m，H-1)，4.32(1H，dd，J＝11.0，1.9Hz，H-3)，7.06(1H，d，J＝8.2Hz，H-7)，7.07(1H，s，H-14)，7.36(1H，d，J＝8.2Hz，H-6)。
实施例2：
化合物III的制备：60mg化合物II加甲醇溶解，加入K2CO3 1.0g，室温搅拌2.5小时，反应混合物减压蒸除甲醇后，加水稀释，乙醚提取，乙醚提取液以无水MgSO4干燥，纯化得III(28mg，61％)，C20H24O3，[M]+m/z：312，1HNMR(400MHz，CDCl3)δ：1.10，1.15(各3H，d，J＝7.0Hz，CH3-16，17)，1.25，1.30(各3H，s，CH3-18，19)，1.68(1H，m，H-2)，1.79(1H，m，H-2)，2.37(3H，s，C5-CH3)，2.92(1H，m，H-15)，3.11(1H，m，H-1)，3.28(1H，m，H-3)，7.05(1H，d，J＝7.8Hz，H-7)，7.07(1H，s，H-14)，7.36(1H，d，J＝7.8Hz，H-6)。
实施例3：
化合物IV，C20H26O4，[M]+m/z：330，1HNMR(400MHz，CDCl3)δ：1.12，1.13(各3H，d，J＝6.0Hz，CH3-16，17)，1.13，1.20(各3H，s，CH3-18，19)，1.46(1H，m，H-2)，1.77(1H，m，H-2)，2.39(3H，s，C5-CH3)，3.02(1H，m，H-15)，3.08(1H，m，H-1)，3.25(1H，m，H-1)，3.54(1H，dd，J＝10.2，1.2Hz，H-3)，7.05(1H，d，J＝7.7Hz，H-7)，7.07(1H，s，H-14)，7.36(1H，d，J＝7.7Hz，H-6)。
实施例4：
化合物V的制备：130mg化合物IV，5ml醋酐和0.5ml吡啶，置45℃水浴上过夜，反应混合物冷至室温后，倒入碎冰。冰冷下以1096 NaHCO3中和，乙醚提取，纯化，得化合物4(95mg，65％)，C22H28O5，[M]+m/z：372，1HNMR(400MHz，CDCl3)δ：1.14，1.15(各3H，宽的单峰，CH3-16，17)，1.21，1.23(各3H，s，CH3-18，19)，1.46(1H，m，H-2)，1.86(1H，m，H-2)，2.19(3H，s，OCOCH3)，2.34(3H，s，C5-CH3)，3.00(3H，m，H-1，H-15)，5.00(1H，dd，J＝9.5，2.1Hz，H-3)，7.04(1H，d，J＝7.7Hz，H-7).7.06(1H，s，H-14)，7.35(1H，d，J＝7.7Hz，H-6)。同法还可制得化合物V—IX。