治疗肥胖以及肥胖相关疾病和病症的方法 【发明领域】
本发明涉及医学领域， 且具体涉及健康、 饮食和营养领域。 本发明涉及抗肥胖剂的用途。 发明背景
肥胖及其相关病症是美国及全世界常见的且非常严重的公共健康问题。 上半身肥 胖已知是 2 型糖尿病最强的风险因素， 且是心血管疾病的强风险因素。肥胖也是高血压、 动 脉粥样硬化、 充血性心力衰竭、 中风、 胆囊疾病、 骨关节炎、 睡眠性呼吸暂停、 如多囊卵巢综 合征这样的生殖病症、 乳癌、 前列腺癌和结肠癌以及全身麻醉并发症发病率提高的公认风 险因素 ( 参见例如 Kopelman， Nature 404 ： 635-43(2000))。
肥胖缩短寿命， 肥胖者罹患以上所列相关疾病 (co-morbidities) 以及诸如感染、 静脉曲张、 黑色棘皮症、 湿疹、 运动耐受不良、 胰岛素抵抗、 高血压、 高胆固醇血症、 胆石病、 矫形损伤和血栓栓塞性疾病这样的病症的风险非常高 (Rissanen 等人， Br.Med.J.301 ： 835-7(1990))。肥胖也是一组称作胰岛素抵抗综合征、 或 “X 综合征” 和代谢综合征的病症 的风险因素。全世界用于肥胖及相关病症的医疗费用是巨大的。
人们认为， 肥胖的发病机理是多因素的。 肥胖患者中的一个问题是， 营养物可用性 与能量消耗不平衡， 直至出现过量脂肪组织。中枢神经系统 (CNS) 控制能量平衡并协调合 乎动物代谢状态的各种行为、 自主和内分泌活动。控制这些活动的机制或系统广泛分布于 前脑 ( 例如下丘脑 )、 后脑 ( 例如脑干 ) 和脊髓。最终， 将来自这些系统的代谢 ( 即能量可 用性 ) 和认知 ( 即习得的偏好 ) 信息进行整合， 并开启 ( 进餐获得和开始 ) 或关闭 ( 进餐 终止 ) 参与引起食欲行为 ( 寻找食物 ) 和完成 ( 摄食 ) 行为的决定。下丘脑被认为主要负 责整合这些信号， 并随后向脑干发布指令。脑干核控制完成运动控制系统 (consummatory motor control system) 元件 ( 例如负责咀嚼和吞咽的肌肉 )。同样， 这些 CNS 核在字面上 被称为构成摄食行为的 “最后共同途径” 。
神经解剖学和药理学证据支持， 能量和营养稳态的信号整合在前脑核中， 且完成 运动控制系统位于脑干核中， 可能在环绕三叉神经运动核的区域中。下丘脑和脑干间有着 广泛的相互连接。多种针对 CNS 的抗肥胖治疗剂 ( 例如小分子和肽 ) 主要集中于位于下丘 脑中的前脑基底和 / 或位于脑干中的后脑基底上。
肥胖仍然是一种难以治疗的慢性代谢病症， 这种代谢病症基本上难以控制。 因此， 需要用于减少和 / 或维持患者体重的新疗法。这样的疗法将对患者健康产生显著的有益作 用。
本文所引用的所有专利、 专利申请和出版物均整体通过引用结合到本文中。
发明概述
本发明提供用于控制、 治疗和预防肥胖及肥胖相关病症、 障碍和疾病的方法和组 合物。 本发明的方法包括给予患者控制、 治疗和预防肥胖及肥胖相关病症、 障碍和疾病的有 效量的至少两种抗肥胖剂。
在一方面， 本发明提供降低患者营养物可用性的方法。 另一方面， 本发明提供减少
患者体重的方法。一方面， 本发明提供诱导化合物之中的协同抗肥胖作用的方法。
一方面， 本发明提供治疗患者肥胖的方法， 其包括外周给予治疗有效量的至少两 种不同的抗肥胖剂， 其中至少一种抗肥胖剂作用于前脑中参与食物摄入或体重调节的结 构， 以及至少一种抗肥胖剂作用于后脑中参与食物摄入或体重调节的结构， 其中当一种抗 肥胖剂是 PYY(3-36)、 PYY(3-36) 类似物或 PYY(3-36) 激动剂时， 另一种抗肥胖剂不是胰淀 素 (amylin)、 胰淀素激动剂、 胰淀素类似物、 CCK、 CCK 类似物或 CCK 激动剂， 且其中当一种抗 肥胖剂是毒蜥外泌肽、 毒蜥外泌肽衍生物或毒蜥外泌肽激动剂时， 则另一种抗肥胖剂不是 胰淀素、 胰淀素激动剂、 胰淀素类似物。
在某些实施方案中， 本发明的方法包括给予患者至少两种不同的抗肥胖剂， 其中 至少一种抗肥胖剂选自 NPY1 受体拮抗剂、 NPY5 受体拮抗剂、 NPY2 受体激动剂、 NPY4 受体激 动剂、 苗条蛋白 (leptin)、 重组苗条蛋白、 苗条蛋白衍生物、 苗条蛋白激动剂、 CNTF、 CNTF 激 动剂 / 调节剂、 CNTF 衍生物、 MCH1R 拮抗剂、 MCH2R 拮抗剂、 黑皮质素 4 激动剂、 MC4 受体激动 剂、 大麻素受体 (CB-1) 拮抗剂 / 逆激动剂、 生长素释放肽拮抗剂、 5HT2c 激动剂、 5- 羟色胺 重摄取抑制剂、 5- 羟色胺转运抑制剂、 毒蜥外泌肽、 毒蜥外泌肽衍生物、 毒蜥外泌肽激动剂、 GLP-1、 GLP-1 类似物、 GLP-1 激动剂、 DPP-IV 抑制剂、 阿片样物质拮抗剂、 食欲素 (orexin) 拮抗剂、 代谢型谷氨酸受体第 5 亚型拮抗剂、 组胺 3 拮抗剂 / 逆激动剂、 托吡酯、 CCK、 CCK 类 似物、 CCK 激动剂、 胰淀素、 胰淀素类似物和胰淀素激动剂。在某些实施方案中， 所给予的抗 25， 28， 29 肥胖剂是苯丁胺、 利莫那班、 西布曲明或普兰林肽 ( 人 Pro- 胰淀素 )。 在某些实施方案中， 本发明提供治疗患者肥胖的方法， 其包括外周给予治疗有效 量的至少两种抗肥胖剂， 其中第一种抗肥胖剂选自 NPY1 受体拮抗剂、 NPY5 受体拮抗剂、 NPY2 受体激动剂、 NPY4 受体激动剂、 苗条蛋白、 重组苗条蛋白、 苗条蛋白衍生物、 苗条蛋白 激动剂、 CNTF、 CNTF 激动剂 / 调节剂、 CNTF 衍生物、 MCH1R 拮抗剂、 MCH2R 拮抗剂、 黑皮质素 4 激动剂、 MC4 受体激动剂、 大麻素受体 (CB-1) 拮抗剂 / 逆激动剂、 生长素释放肽拮抗剂、 5HT2c 激动剂、 5- 羟色胺重摄取抑制剂、 5- 羟色胺转运抑制剂、 毒蜥外泌肽、 毒蜥外泌肽衍 生物、 毒蜥外泌肽激动剂、 GLP-1、 GLP-1 类似物、 GLP-1 激动剂、 DPP-IV 抑制剂、 阿片样物质 拮抗剂、 食欲素拮抗剂、 代谢型谷氨酸受体第 5 亚型拮抗剂、 组胺 3 拮抗剂 / 逆激动剂、 托吡 酯， 其中第二种抗肥胖剂选自 CCK、 CCK 类似物、 CCK 激动剂、 胰淀素、 胰淀素类似物和胰淀 素激动剂， 其中当第一种抗肥胖剂不是 PYY(3-36)、 PYY(3-36) 类似物或 PYY(3-36) 激动剂 时， 且当其中第一种抗肥胖剂是毒蜥外泌肽、 毒蜥外泌肽衍生物或毒蜥外泌肽激动剂时， 则 第二种抗肥胖剂不是胰淀素、 胰淀素激动剂、 胰淀素类似物。
在某些实施方案中， 本发明提供治疗肥胖的方法， 其包括组合给予选自胰淀素、 胰 淀素类似物或胰淀素激动剂的第一种抗肥胖剂和选自苗条蛋白、 重组苗条蛋白、 苗条蛋白 衍生物或苗条蛋白激动剂的第二种抗肥胖剂， 其中与单独给予任一药剂相比， 该药剂组合 给予将产生协同作用。
在某些实施方案中， 本发明提供使患者减少体重至少 10％、 减少身体脂肪量 (body fat mass)、 丧失异位脂肪 (ectopic fat) 或其任意组合的方法。
在某些实施方案中， 所述方法涉及患有肥胖、 肥胖相关障碍、 肥胖相关疾病、 肥胖 相关病症、 糖尿病、 胰岛素抵抗综合征、 脂肪营养失调 (lypodystrpohy)、 非酒精性脂肪性肝 炎、 心血管疾病、 多囊卵巢综合征、 代谢综合征的患者或者想减轻体重的患者。
一方面， 抗肥胖剂的组合给予可以是同时、 并行或者相继给予。
本发明还涉及肥胖及肥胖相关病症、 障碍和疾病的治疗， 以及本发明抗肥胖剂和 组合物在制备用于治疗这些病症的药物中的用途。
附图简述
图 1 图示给予苗条蛋白和胰淀素对食物摄入的作用。
图 2 图示给予苗条蛋白和胰淀素对体重的作用。
图 3 图示给予苗条蛋白和胰淀素对身体组成 (body composition) 的作用。
图 4 图示给予苗条蛋白和胰淀素对身体组成的作用。
图 5 图示给予苗条蛋白和胰淀素对能量消耗的作用。
图 6A 图示单独或组合给予苗条蛋白 (500μg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对体重的作用。图 6B 图示单独或组合给予苗条蛋白 (500μg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对身体脂肪的作用。图 6C 图示单独或组合给予苗条蛋白 (500μg/ kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对身体蛋白的作用。
图 7 图示了单独给予苗条蛋白 (500μg/kg/ 天 )、 配对喂饲的单独给予的苗条蛋白 (500μg/kg/ 天 ) 和组合给予苗条蛋白 (500μg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周 对体重的作用。 图 8 显示表示正常 HSD 和 DIO 倾向动物中的血清苗条蛋白浓度， 所述动物接受溶 媒、 与胰淀素处理组配对喂饲或接受胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周。
图 9A 图示在正常动物中给予溶媒或苗条蛋白 (500μg/kg/ 天 ) 对体重的作用。 图 9B 图示在 DIO 倾向动物中给予溶媒或苗条蛋白 (500μg/kg/ 天 ) 对体重的作用。
图 10A 图示单独或组合给予西布曲明 (3mg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对体重的作用。图 6B 图示单独或组合给予西布曲明 (3mg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/ kg/ 天 ) 两周对身体脂肪的作用。图 6C 图示单独或组合给予西布曲明 (3mg/kg/ 天 ) 和胰 淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对身体蛋白质的作用。
图 11A 图示单独或组合给予苯丁胺 (10mg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两 周对体重的作用。图 6B 图示单独或组合给予苯丁胺 (10mg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对身体脂肪的作用。图 6C 图示单独或组合给予苯丁胺 (10mg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对身体蛋白质的作用。
图 12A 图示单独或组合给予利莫那班 (3mg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对体重的作用。图 6B 图示单独或组合给予利莫那班 (3mg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/ kg/ 天 ) 两周对身体脂肪的作用。图 6C 图示单独或组合给予利莫那班 (3mg/kg/ 天 ) 和胰 淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对身体蛋白质的作用。
图 13 图示单独或与胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 组合给予一定剂量范围的 CB-1 拮抗 剂对体重的作用。环形区域中的组合给予的时程在图 14A 和 B 中示出。
图 14A 图示单独或组合给予 CB-1 拮抗剂 (1mg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 对于体重的作用。图 14B 图示单独或组合给予 CB-1 拮抗剂 (3mg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 对于体重的作用。
图 15A 图示单独或组合给予毒蜥外泌肽 -4 类似物 (10μg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对于体重的作用。图 6B 图示单独或组合给予毒蜥外泌肽 -4 类似物
(10μg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对于身体脂肪的作用。图 6C 图示单独或 组合给予毒蜥外泌肽 -4 类似物 (10μg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对于身体 蛋白质的作用。
图 16A 图示单独或组合给予 PYY(3-36)(1mg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对于体重的作用。图 16B 图示单独或组合给予 PYY(3-36)(1mg/kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对于身体脂肪的作用。图 16C 图示单独或组合给予 PYY(3-36)(1mg/ kg/ 天 ) 和胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 两周对于身体蛋白质的作用。
图 17 提供了在胰淀素激动剂和苗条蛋白组合作用下， 24 周研究中入选患者 (N ＝ 31) 的普兰林肽和美曲普汀的平均血浆浓度 ( 实施例 8)。美曲普汀和普兰林肽分别在早餐 和晚餐前 15 分钟内以 5mg BID 和 360μg(mcg)BID 给予。通过本领域已知的常规方法进行 针对美曲普汀和普兰林肽的测定。图例 ： 美曲普汀 ( 底在上的三角形 ) ； 普兰林肽 ( 底在下 的三角形 )。
图 18 显示了在 24 周研究过程中相对于入选时体重的平均变化 ( 实施例 8)。剂量 描述于图 17 和实施例 8。图例 ： 美曲普汀 ( 方形 ) ； 普兰林肽 ( 底在下的三角形 ) ； 美曲普 汀 + 普兰林肽 ( 底在上的三角形 )。
图 19 图示了在实施例 8 描述的 24 周研究过程中相对于入选时体重的最小平方变 化。
图 20 图示了在实施例 8 描述的 24 周研究过程中相对于入选时体重的中值变化。
图 21 图示了在实施例 8 描述的 24 周研究过程中体重相对于基础值的平均变化。
图 22 图示了在实施例 8 描述的 24 周研究过程中从入选至 20 周体重的分类变化。
图 23 图示了在实施例 8 描述的基于体重减轻的 24 周研究过程中从入选至 20 周 体重的分类变化。
图 24 图示了在实施例 8 描述的 24 周研究中于早期速率 (0-12 周 ) 和晚期速率 (12-20 周 ) 中的体重变化速率。
图 25 图示了在实施例 8 描述的 24 周研究过程中依据性别的相对于入选时体重的 平均绝对变化。
图 26 图示了在实施例 8 描述的 24 周研究过程中依据性别的相对于入选时体重的 平均变化百分率。
图 27 图示了在实施例 8 描述的 24 周研究过程中依据 BMI 分类的相对于入选时体 重的平均绝对变化。
图 28 图示了在实施例 8 描述的 24 周研究过程中依据 BMI 分类的相对于入选时体 重的平均变化百分率。
图 29 图示了在实施例 8 描述的 24 周研究过程中依据初始体重减轻的相对于入选 时体重的平均绝对变化。
图 30 图示了在实施例 8 描述的 24 周研究过程中依据初始体重减轻的相对于入选 时体重的平均变化百分率。
图 31 图示了在实施例 8 描述的 24 周研究过程中相对于入选时的总过量体重的平 均变化百分率。
图 32 图示了在实施例 8 描述的 24 周研究过程中相对于入选时的腰围的平均变化。 发明详述
我们已经发现， 将作用于前脑中参与食物摄入和 / 或体重调节结构的抗肥胖剂与 作用于后脑中参与食物摄入和 / 或体重调节结构的抗肥胖剂组合给予， 对于减少营养物可 用性和治疗肥胖及肥胖相关病症、 障碍和疾病惊人地有效。 还已发现， 当以这种方式组合给 予这样的抗肥胖剂时， 抗肥胖剂对于降低接受者的营养物可用性比单独使用其中一种药剂 更为有效。 如本文所示， 例如， 组合的抗肥胖剂可协同作用以降低营养物可用性， 例如， 以减 轻体重、 减少脂肪、 减少食物摄入或这三种的任意组合。
前脑的特定区域 ( 端脑和间脑衍生的脑成分 ) 和后脑或脑干 ( 包括中脑、 脑桥和 髓质 ) 已被鉴定为参与控制能量平衡。参与食物摄入和 / 或体重调节的前脑结构或位于下 丘脑中的核包括例如弓状核 (ARC)、 室旁核 (PVN)、 背内侧下丘脑 (DMH)、 腹内侧核 (VMH) 和 下丘脑外侧核 (LHA)。参与食物摄入和 / 或体重调节的后脑结构或位于脑干中的核包括例 如孤束核 (NST)、 最后区 (AP) 和臂旁外侧核 (lPBN)。控制完成运动控制系统元件的脑干核 有可能受来自如 NST、 AP 和 lPBN 这样的脑干区域的初级或二级投射 (projection) 的控制。 值得注意的是， AP、 NST 和 lPBN 均显示出 ( 共同地和独立地 ) 具有其自身的整合能力。
多种针对 CNS 的抗肥胖剂作用于这些位于下丘脑中的参与食物摄入和 / 或体重调 节的前脑结构。 此外， 针对 CNS 的抗肥胖剂作用于位于脑干中的参与食物摄入和 / 或体重调 节的后脑结构。 这样的抗肥胖剂在本文中有描述。 参见例如表 1。 这样的药剂包括例如神经 肽 Y1(NPY1) 受体拮抗剂、 NPY5 受体拮抗剂、 苗条蛋白和苗条蛋白激动剂、 睫状神经营养因 子 (CNTF) 和 CNTF 激动剂、 黑色素浓缩激素 (MHC) 和 MCH 拮抗剂、 黑皮质素 (melacortins) (MC) 和 MC 激动剂、 大麻素受体 (CB-1) 拮抗剂、 5- 羟色胺 (5-HT) 和 5-HT 激动剂、 肽 YY(PYY) 和 PYY 激动剂、 毒蜥外泌肽和毒蜥外泌肽激动剂、 GLP-1 和 GLP-1 激动剂、 DPP-IV 抑制剂、 生 长素释放肽和生长素释放肽拮抗剂、 缩胆囊肽 (CCK) 和 CCK 激动剂， 以及胰淀素和胰淀素激 动剂。
表 1. 各个抗肥胖靶及定位
在某些实施方案中， 所述方法包括主要靶向诸如 ARC、 PVN、 VM 和 LH 的下丘脑能量 平衡中心的第一种化合物。 在某些实施方案中， 这些方法包括主要靶向诸如 NST、 AP 和 lPBN 的后脑能量平衡中心的第二种化合物。
在某些实施方案中， 这些化合物是抗肥胖剂。 在某些实施方案中， 所述方法可包括 使用一种或多种主要前脑作用的抗肥胖剂。在其它实施方案中， 所述方法可包括使用一种 或多种主要后脑作用的抗肥胖剂。示例性的抗肥胖剂包括 NPY1 受体拮抗剂、 NPY5 受体拮 抗剂、 苗条蛋白或苗条蛋白激动剂或类似物、 CNTF( 例如 )、 MCH 拮抗剂、 MC4 激动剂、 CB-1 拮抗剂 ( 例如利莫那班 )、 5-HT2C 激动剂、 NPY2 受体激动剂 ( 例如 PYY(3-36)
或 PYY(3-36) 激动剂 )、 毒蜥外泌肽或毒蜥外泌肽激动剂或类似物、 GLP-1 或 GLP-1 激动剂 或类似物、 DPP-IV 抑制剂、 生长素释放肽拮抗剂、 CCK 或 CCK 激动剂或类似物以及胰淀素或 胰淀素激动剂或类似物。
如本文所举例的， 作为本发明抗肥胖剂的激动剂和拮抗剂包括例如诸如肽、 多肽 和小分子药剂的分子。
本发明的一种或多种实施方案的细节在附图和以下说明书中给出。 由说明书和附 图以及权利要求书显而易见本发明的其它特征、 目的和优点。
定义
“抗肥胖剂” 是在给予后能够降低身体营养物可用性的化合物。 “体重 - 诱导剂” 是 将提高身体营养物可用性的化合物。一方面， 体重诱导剂是抗肥胖剂的拮抗剂。
本文所使用的 “作用于参与食物摄入和 / 或体重调节的前脑结构” 的抗肥胖剂刺 激或抑制前脑中特定区域的活性， 例如特定的核和 / 或神经元回路。该前脑刺激或抑制导 致身体营养物可用性下降。 “作用于参与食物摄入和 / 或体重调节的后脑结构” 的抗肥胖剂 刺激或抑制后脑中特定区域的活性， 例如特定的核和 / 或神经元回路。该后脑刺激或抑制 导致身体营养物可用性下降。 “降低的营养物可用性 (nutrient availability)” 包括任何方法， 通过所述方法 身体降低可以获得的作为脂肪储存的营养物。换言之， 可以通过包括但不限于， 降低食欲、 提高饱满感、 影响食物选择 / 味觉厌恶、 提高代谢和 / 或降低或抑制食物吸收的方法来降低 营养物可用性。可能受影响的示例性机制包括延迟胃排空或减少食物在肠中的吸收。
“提高的营养物可用性” 包括任何方法， 其增加身体对营养物的获得并将其作为脂 肪储存。 换言之， 可以通过， 包括但不限于， 增进食欲、 降低饱满感、 影响食物选择、 减少味觉 厌恶、 降低代谢和 / 或提高食物吸收的方法来提高营养物可用性。可能受影响的示例性机 制包括减轻胃低动力性或提高食物在肠中的吸收。
尽管 “肥胖” 通常被定义为体重指数 (BMI) 大于 30， 但为本文公开内容的目的， 任 何需要或者希望减轻体重或预防体重增加的患者， 包括那些 BMI 低于 30 的患者， 都包括在 “肥胖” 范围内。因此， BMI 低于 30 和 25 及以上 ( 视为超重 ) 或低于 25 的患者也包括在本 发明的患者内。病态肥胖指 BMI 为 40 或更高。
关于降低营养物可用性的方法， 本文所使用的 “需要其的患者” 包括超重或肥胖或 病态肥胖或者渴望减轻体重的患者。 此外， 胰岛素抵抗、 葡萄糖耐受不良或患有任何形式糖 尿病 ( 例如 1 型、 2 型或妊娠糖尿病 ) 的患者可从这些方法中受益以降低营养物可用性。
关于提高营养物可用性的方法， 本文所使用的 “需要其的患者” 包括体重不足或希 望增重的患者。
“患者” 包括任何动物， 包括人、 灵长类动物和其它哺乳动物， 其包括大鼠、 小鼠、 诸 如猫、 狗这样的宠物， 诸如马、 牛、 绵羊和山羊这样的家畜 ； 以及鸡、 火鸡和任何其它体重或 改变身体组成有可能成问题的动物。
“代谢率” 意指每单位时间释放 / 消耗的能量数量。每单位时间的代谢可通过食物 消耗、 作为热释放的能量或代谢过程中所使用的氧来估计。当人们想要减体重时通常需要 具有较高的代谢率。例如， 具有较高代谢率的人完成一项活动可能比具有低代谢率的人完 成该活动能够消耗更多的能量 ( 例如身体燃烧更多的热量 )。
本文所使用的 “瘦组织量 (lean mass)” 或 “瘦体组织量 (lean bodymass)” 指肌 肉和骨。瘦体组织量不一定表示无脂肪量。瘦体组织量包括含低百分量脂肪 ( 约 3％ ) 的 中枢神经系统 ( 脑和脊髓 )、 骨髓和内部器官。瘦体组织量以密度测量。测定脂肪量和瘦组 织量的方法包括但不限于， 水下称重、 空气置换体积描记器、 x- 射线、 DEXA 扫描、 MRI 和 CT 扫描。在某些实施方案中， 采用本领域已知的水下称重来测量脂肪量和瘦组织量。
“脂肪分布” 意指身体内脂肪沉积的位置。这样的脂肪沉积位置包括例如， 皮下、 内 脏和异位脂肪库 (ectopic fat depot)。
“皮下脂肪” 意指紧靠在皮肤表面下的脂质沉积。患者的皮下脂肪量可采用任何一 种可采用的测量皮下脂肪的方法来测量。测量皮下脂肪的方法是本领域已知的， 例如在第 6,530,886 号美国专利中描述的那些， 该专利整体通过引用结合到本文中。
“内脏脂肪” 意指作为腹内脂肪组织的脂肪沉积。内脏脂肪围绕着重要器官， 且可 以被肝脏代谢以产生血胆固醇。内脏脂肪与诸如以下疾病的风险增加相关 ： 多囊卵巢综合 征、 代谢综合征和心血管疾病。
“异位脂肪储存” 意指在构成瘦体组织量的组织和器官 ( 例如骨骼肌、 心脏、 肝、 胰、 肾、 血管 ) 内或其周围的脂质沉积。一般而言， 异位脂肪储存是身体内常规脂肪组织库之外 的脂质累积。
如本领域广泛理解的， 本文所使用的 “治疗” 是获得有益或所需结果 ( 包括临床结 果 ) 的方法。 “治疗” 或 “减轻” 疾病、 障碍或病症意指与未治疗该病症相比， 病症、 障碍或疾 病状态的程度和 / 或不期望的临床表现减轻和 / 或进展的时程被延缓或者延长。 例如， 在治 疗肥胖时， 体重减轻， 例如体重减轻至少 5％， 是所需治疗结果的一个例子。为本发明目的， 有益或所需的临床结果包括但不限于， 一种或多种症状的减轻或改善、 疾病程度减低、 稳定 的 ( 即未恶化的 ) 疾病状态、 延迟或延缓疾病进展、 改善或减轻疾病状态以及消除 ( 无论是 部分还是总体 )， 无论是可检测的还是不可检测的。 “治疗” 还可意指与如果不接受治疗所 预期的存活相比延长存活。 而且， 治疗不一定只给予一剂， 而是常常在给予一系列剂次后才 实现治疗。因此， 治疗有效量、 足以减轻的量或足以治疗疾病、 障碍或病症的量可以以一次 或多次给予。
如本文所使用的， 术语 “治疗有效量” 意指组合物中的活性化合物的量， 该量将在 组织、 系统、 患者或人中引发研究人员、 兽医、 医生或其它临床医生所寻求的生物学或医学 应答， 所述应答包括所治疗病症的症状的减轻。本发明新的治疗方法针对本领域技术人员 已知的病症。
本文所使用的术语 “预防有效量” 意指组合物中的活性化合物的量， 该量将在组 织、 系统、 患者或人中引发研究人员、 兽医、 医生或其它临床医生所寻求的生物学或医学应 答， 以预防有肥胖或肥胖相关障碍、 病症或疾病的风险患者发生肥胖或肥胖相关障碍、 病症 或疾病。
本文所使用的单数形式 “一种” 、 “一个” 、 “所述” 和 “该” 包括复数含意， 除非另行 指明或者在上下文中是清楚的。例如， “一种” 胰淀素激动剂可包括一种或多种胰淀素激动 剂， 上下文中就会清楚。
本文所使用的 “类似物” 是指这样的肽 ： 其序列衍生自基础参比肽 ( 例如胰淀素和 降钙素 )， 并且相对于参比氨基酸系列包括插入、 取代、 延伸和 / 或缺失， 例如与基础肽具有至少 50％或 55％的氨基酸序列同一性 ； 在其它情况下， 例如与基础肽具有至少 70％、 80％、 90％或 95％的氨基酸序列同一性。 这样的类似物可包含保守或非保守氨基酸取代 ( 包括非 天然氨基酸以及 L 和 D 形式 )。类似物包括具有激动剂的化合物和具有拮抗剂活性的化合 物。如本文所定义的类似物还包括衍生物。
“衍生物” 被定义为上述的在其一个或多个氨基酸侧基、 α- 碳原子、 末端氨基或 末端羧基上带有化学修饰的参比肽或类似物。 化学修饰包括但不限于， 添加化学部分、 生成 新键和除去化学部分。在氨基酸侧基上的修饰包括不限于， 赖氨酸 ε- 氨基的酰基化， 精氨 酸、 组氨酸或赖氨酸的 N- 烷基化， 谷氨酸或天冬氨酸羧酸基团的烷基化， 和谷氨酰胺或天 冬酰胺的脱酰胺化。末端氨基的修饰包括不限于， 脱氨、 N- 低级烷基、 N- 二 - 低级烷基和 N- 酰基修饰。末端氨基的修饰包括但不限于， 脱氨、 N- 低级烷基、 N- 二 - 低级烷基和 N- 酰 基修饰， 诸如烷基酰基、 分支的烷基酰基、 烷基芳基 - 酰基。末端羧基的修饰包括不限于， 酰胺、 低级烷基酰胺、 二烷基酰胺、 芳基酰胺、 烷基芳基酰胺和低级烷基酯修饰。 低级烷基是 C1-C4 烷基。此外， 一种或多种侧基或末端基团， 可以用具备普通技术的合成化学家已知的 保护基保护。氨基酸的 α- 碳可以是单或二甲基化的。
通常， 关于氨基酸序列， 术语 “修饰” 包括单独或组合的取代、 插入、 延长、 缺失和衍 生。本发明的多肽可包括对 “非必需” 氨基酸残基的一种或多种修饰。在本发明的上下文 中， “非必需” 氨基酸残基是在新氨基酸序列中可以被改变 ( 例如缺失或取代 ) 但不取消或 大大降低该多肽 ( 例如类似物多肽 ) 活性 ( 例如激动剂活性 ) 的残基。本发明的多肽可包 括 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10 或更多个非必需氨基酸残基的缺失。本发明的多肽可包括至少 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10 或更多个氨基酸的添加， 而不取消或大大降低该多肽的活性。
取代包括保守氨基酸取代。 “保守氨基酸取代” 是氨基酸残基被具有相似侧链或物 化特性 ( 例如静电、 氢键、 等排、 疏水特性 ) 的氨基酸残基取代的一种取代。 氨基酸可以是天 然存在的或非天然的。具有相似侧链的氨基酸残基家族是本领域已知的。这些家族包括带 有碱性侧链 ( 例如赖氨酸、 精氨酸、 组氨酸 )、 酸性侧链 ( 例如天冬氨酸、 谷氨酸 )、 非荷电极 性侧链 ( 例如甘氨酸、 天冬酰胺、 谷氨酰胺、 丝氨酸、 苏氨酸、 酪氨酸、 甲硫氨酸、 半胱氨酸 )、 非极性侧链 ( 例如丙氨酸、 缬氨酸、 亮氨酸、 异亮氨酸、 脯氨酸、 苯丙氨酸、 色氨酸 )、 β- 分支 的侧链 ( 例如苏氨酸、 缬氨酸、 异亮氨酸 ) 和芳族侧链 ( 例如酪氨酸、 苯丙氨酸、 色氨酸、 组 氨酸 ) 的氨基酸。取代还可包括非保守改变。
“氨基酸” 或 “氨基酸残基” 意指天然氨基酸、 非天然氨基酸和经过修饰的氨基酸。 除非另有指定， 否则任何一般或者个别提及氨基酸均包括 D 和 L 立体异构体， 条件是如果 它们的结构允许这样的立体异构体形式。天然氨基酸包括丙氨酸 (Ala)、 精氨酸 (Arg)、 天冬酰胺 (Asn)、 天冬氨酸 (Asp)、 半胱氨酸 (Cys)、 谷氨酰胺 (Gln)、 谷氨酸 (Glu)、 甘氨酸 (Gly)、 组氨酸 (His)、 异亮氨酸 (Ile)、 亮氨酸 (Leu)、 赖氨酸 (Lys)、 甲硫氨酸 (Met)、 苯丙 氨酸 (Phe)、 脯氨酸 (Pro)、 丝氨酸 (Ser)、 苏氨酸 (Thr)、 色氨酸 (Trp)、 酪氨酸 (Tyr) 和缬 氨酸 (Val)。非天然氨基酸包括但不限于高赖氨酸、 高精氨酸、 高丝氨酸、 氮杂环丁烷羧酸、 2- 氨基己二酸、 3- 氨基己二酸、 β- 丙氨酸、 氨基丙酸、 2- 氨基丁酸、 4- 氨基丁酸、 6- 氨基己 酸、 2- 氨基庚酸、 2- 氨基异丁酸、 3- 氨基异丁酸、 2- 氨基庚二酸、 叔丁基甘氨酸、 2， 4- 二氨基 异丁酸、 锁链素、 2， 2’ - 二氨基庚二酸、 2， 3- 二氨基丙酸、 N- 乙基甘氨酸、 N- 乙基天冬酰胺、 高脯氨酸、 羟赖氨酸、 别羟赖氨酸、 3- 羟脯氨酸、 4- 羟脯氨酸、 异锁链素、 别异亮氨酸、 N- 甲基丙氨酸、 N- 甲基甘氨酸、 N- 甲基异亮氨酸、 N- 甲基戊基甘氨酸、 N- 甲基缬氨酸、 萘丙氨酸 (naphthalanine)、 正缬氨酸、 正亮氨酸、 鸟氨酸、 戊基甘氨酸、 六氢吡啶羧酸和硫代脯氨酸。 其它的非天然氨基酸包括经过修饰的氨基酸残基， 它们被可逆地或不可逆地化学阻断， 或 其 N- 末端氨基或侧链基团经过了化学修饰， 例如 N- 甲基化的 D 和 L 氨基酸或残基， 其中侧 链官能团被化学修饰成为另一种官能团。 例如， 经过修饰的氨基酸包括甲硫氨酸亚砜 ； 甲硫 氨酸砜 ； 天冬氨酸 -(β- 甲酯 )， 一种经过修饰的天冬氨酸氨基酸 ； N- 乙基甘氨酸， 一种经 过修饰的甘氨酸氨基酸 ； 或氨甲酰丙氨酸 (alanine carboxamide)， 一种经过修饰的丙氨酸 氨基酸。其它可以掺入的残基描述于 Sandberg 等人， J. Med.Chem.41 ： 2481-91， 1998。
应当注意， 在整个申请中， 替代物以马库什基团形式书写， 例如， 各氨基酸位置包 含超过一个的可能氨基酸。 特别设想， 马库什基团的每个成员应当分别考虑， 由此构成本发 明的另一个实施方案， 并且马库什基团不能作为一个单位来解读。
本发明的方法
在总体方面， 本发明提供通过组合给予抗肥胖剂来降低营养物可用性的方法。因 此， 本发明提供用于治疗肥胖及肥胖相关疾病、 障碍和 / 或病症的方法， 该方法得益于降低 营养物可用性。 由于组合使用时提高了有效性， 因此， 与诸如单一疗法中单独使用的药剂相 比， 本发明方法可允许组合给予更低剂量的一种或多种抗肥胖剂。 本发明的方法提供抗肥胖剂的组合给予。药剂的 “组合” 给予应理解为意指向需 要治疗的患者提供每一种药剂。 药剂的给予可以用包含所有预定抗肥胖剂的单一药物制剂 形式， 或者用每种预定药剂的各自制剂独立进行给予。
在采用独立制剂的情况下， 各个抗肥胖剂可基本同时 ( 即并行 ) 给予， 或者在分开 交错的时间 ( 即在给予该方法的另一种抗肥胖剂之前或之后顺序 ) 给予。在某些实施方案 中， 组合给予包括在重叠的时间间隔期间给予独立制剂。例如， 第 1 至 30 天给予抗肥胖剂 1， 且第 20 至 50 天给予抗肥胖剂 2。在其它实施方案中， 组合给予包括顺序、 非重叠时间间 隔地给予独立制剂。例如， 第 1 至 30 天给予抗肥胖剂 1， 且第 35 至 50 天给予抗肥胖剂 2。 本发明因此被理解为包括所有这些在整个治疗过程中同时进行的、 交替的或者完全分开的 治疗方案， 术语 “给予” 、 “给药” 和 “组合给予” 将作相应解释。
在某些实施方案中， 本发明提供用于降低营养物可用性的方法 ： 组合给予至少一 种作用于参与食物摄入和 / 或体重调节的前脑结构的抗肥胖剂和至少一种作用于参与食 物摄入和 / 或体重调节的后脑结构的抗肥胖剂。在某些情况下， 本发明的方法能提高或增 强单独使用时 ( 单一疗法 ) 效力有限 ( 如果有的话 ) 的抗肥胖剂的效力。 在这样的情况下， 本发明的方法如下提高或增强抗肥胖剂的效力 ： 例如通过持续使用或提高效能预防或延迟 效力丧失。组合使用时， 本发明的方法可允许给予比任一药剂单独使用时更低剂量的一种 或多种抗肥胖剂。
一方面， 本发明的方法提供所给予药剂之中的协同抗肥胖作用。 因此， 在某些实施 方案中， 组合给予抗肥胖剂产生以下作用 ： 例如， 营养物可用性下降、 体重下降、 食物摄入减 少、 代谢提高， 这些作用大于单独给予抗肥胖剂 ( 单一疗法 ) 的结果的总和。
在本发明的另一方面， 提供了降低或消除患者对抗肥胖剂抗性的方法， 从而使得 给予该药剂时， 它将能够引发抗肥胖应答 ( 例如降低营养物可用性、 降低体重、 降低脂肪 量 )。例如， 不受此以及任何其它理论的束缚， 已形成这样的理论 ： 苗条蛋白抗性可能是由
于在肥胖患者体内存在的高水平苗条蛋白 ( 即机体已对苗条蛋白脱敏 ) 所致。因此， 本发 明的一种方法包括给予除苗条蛋白外的抗肥胖剂 ( 例如胰淀素或胰淀素激动剂 )， 以减轻 患者的体重， 从而降低或除去苗条蛋白抗性。 一旦达到这一效果， 就再将苗条蛋白单独或与 抗肥胖剂 ( 例如胰淀素或胰淀素激动剂 ) 组合给予， 以实现进一步的抗肥胖作用。还设想 了其它减轻体重以改善苗条蛋白抗性的方法， 例如饮食、 运动、 其它饮食药物、 以及外科手 术设备。
在某些实施方案中， 本发明涉及， 在给予作用于参与食物摄入和 / 或体重调节的 前脑结构的第二种抗肥胖剂之前， 送递作用于参与食物摄入和 / 或体重调节的后脑结构的 第一种抗肥胖剂， 以使身体做好准备。 在某些实施方案中， 在给予第二种药剂前给予第一种 药剂数日、 数周乃至数月。 在这一点上， 第二种药剂可以单独给予或者与第一种药剂组合给 予。 在某些实施方案中， 第一种抗肥胖剂是胰淀素或胰淀素激动剂， 且第二种药剂是苗条蛋 白或苗条蛋白激动剂。在某些实施方案中， 给予抗肥胖剂之前的患者的血清苗条蛋白浓度 大于 10ng/ml， 在其它实施方案中， 该浓度大于 20ng/ml。
在某些实施方案中， 在给予苗条蛋白或苗条蛋白激动剂之前向患者给予胰淀素或 胰淀素激动剂至少 1 天、 2 天、 3 天、 5 天、 7 天、 10 天、 14 天、 21 天、 28 天或更多。在某些实 施方案中， 在给予苗条蛋白或苗条蛋白激动剂之前， 向患者给予胰淀素或胰淀素激动剂， 直 至患者的血清苗条蛋白浓度为约 4ng/ml、 小于 4ng/ml、 小于 2ng/ml、 小于 1ng/ml 或小于约 0.5ng/ml。 在某些实施方案中， 以替代疗法的量给予苗条蛋白或苗条蛋白激动剂， 以实现接 近血浆中的苗条蛋白生理浓度。 在本发明的另一方面， 提供了降低发展为代谢病症的风险的方法， 其中所述方法 包括向患者给予有效量的抗肥胖剂的组合， 以减轻患者体重。
在本发明的某些实施方案中， 本发明的方法用于提高患者的代谢率， 降低患者代 谢率的下降水平， 或者保持患者的代谢率。 在某些实施方案中， 代谢率可涉及更优先使用身 体的脂肪作为能量来源 ( 相比于瘦体组织 )。 一方面， 瘦体组织量在组合给予抗肥胖剂后不 降低。 另一方面， 在组合给予抗肥胖剂后， 瘦体组织量的减轻得到减少或者阻止。 又一方面， 在组合给予抗肥胖剂后瘦体组织量得到提高。 这样的优先使用脂肪作为能量来源可以通过 比较脂肪组织与瘦体组织的量来确定， 并通过在治疗开始和结束时测量总体重和脂肪含量 来确认。 代谢率的提高， 是指某一时间段内患者利用热量或另一种能量来源的水平， 相比于 另一时间段内未给予抗肥胖剂组合但条件基本相似或相同的患者利用热量或其它能量来 源的水平， 其水平更高。 在某些实施方案中， 患者的代谢率提高至少约 5％， 在其它实施方案 中， 相比于另一时间段内未给予抗肥胖剂组合但条件基本相似或相同的患者利用热量或其 它能量来源的水平， 患者的代谢率提高至少约 10％、 15％、 20％、 25％、 30％或 35％。代谢率 的提高可利用例如呼吸热量计来测量。这些实施方案中所使用的抗肥胖剂的有效量是， 与 未接受药剂或仅接受其中一种药剂的患者相比， 各药剂组合给予时有效提高患者代谢率的 量。
在另一个实施方案中， 提供了减少患者代谢率降低的方法。这样的代谢率降低， 可以是任何导致代谢率降低的条件或营养或身体状况的结果， 例如， 由于低热量饮食、 受限 制的饮食或体重减轻。限制饮食包括在一个饮食上允许的食物类型或食物量或这二者的 容许量或禁止或两者， 而并非必定基于热量。例如， 如在个人饮食中， 身体根据较低的热
量摄入用降低的代谢率来补偿。本质上， 身体下调对食物的需求， 由此以更少的食物来维 持生存。随着节食的继续， 热量摄入的阈值会降低。当节食结束时， 在食用正常饮食时， 个体通常会由于降低的热量摄入阈值和较低的基础代谢率而增加体重 (NIHTechnology Assessment Conference Panel(1992)Ann.Intern.Med.116 ： 942-949 ； Wadden(1993)Ann. Intern.Med.119 ： 688-693)。一方面， 提供了减少患者代谢率下降的方法， 其中代谢率下降 是低热量饮食或体重减少的结果。通过使用这样的方法， 患者的代谢率降低减少了至少约 10％、 15％、 20％、 25％、 30％、 35％、 40％、 50％、 60％、 70％、 80％、 90％或 95％。对于这样的 方法， 可能给予抗肥胖剂组合的最佳时间是在开始导致代谢率下降或降低的条件或营养或 身体状况时。然而， 还预期可以在启动条件或营养或身体状况之前给予这些药剂。在一种 情况中， 用呼吸热量计来测量代谢率。 如本实施方案中所使用的抗肥胖剂的有效量是， 在组 合给予时每一药剂能够有效降低患者代谢率减少的量。
另一方面， 提供了缩短代谢平台期的方法， 其中某一方法包括向患者组合给予有 效量的抗肥胖剂。 在某些实施方案中， 患者正在减轻体重， 或者已经减轻了体重， 例如， 由于 低热量饮食、 增强运动或其组合。 “代谢平台” 意指稳定代谢率的时间间隔， 该过程中身体 进行调节， 以适应热量或能量输入变化。热量输入或消耗变化可以是例如低热量饮食或增 强的身体活动的结果。 这样的平台可以在例如体重减轻方案过程中重量减轻减缓或停止时 观察到。 在某些实施方案中， 与其他方面相同但不给予抗肥胖剂组合的患者， 在基本类似或 相同的条件下的相同时间段中的代谢平台持续时间相比， 本发明的方法降低了患者的代谢 平台持续时间。 在另一种实施方案中， 与其他方面相同但不给予抗肥胖剂组合的患者， 在基 本类似或相同的条件下的相同时间段中的代谢平台频率相比， 本发明的方法降低了患者的 代谢平台频率。 在其它实施方案中， 与其他方面相同但不给予抗肥胖剂组合的患者， 在基本 类似或相同的条件下的相同时间段中的代谢平台开始相比， 本发明的方法延迟了患者的代 谢平台开始。在某些实施方案中， 代谢平台通过对减少的体重减轻或者无体重减轻的时间 段进行作图来鉴定。在某些实施方案中， 缩短了至少一个代谢平台。在其它实施方案中， 缩 短了至少 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9 或 10 个代谢平台。另一方面， 与在相同或类似条件下未给予抗 肥胖剂组合的患者相比， 代谢平台被延迟一天。在其它方面， 患者的代谢平台被延迟 2 天、 3 天、 4 天、 5 天、 6 天、 1 周、 10 天、 2 周或 3 周。
在另外的其它实施方案中， 提供了保持患者代谢率的方法。 在某些实施方案中， 患 者可能面临由于例如开始低饮食热量、 限制饮食或预期的体重减轻而导致的代谢率下降的 风险。 代谢率的保持是， 与在基本相似或相同的条件下， 在相同时间段内其他方面相同的未 给予抗肥胖剂组合的患者对热量或其它能量来源的利用水平相比， 患者在所述时间段内维 持对热量或另一种能量来源的利用水平。一方面， 代谢率维持在导致代谢率降低这一事件 起始之前的患者代谢率的 15％内。在其它方面， 代谢率维持在患者代谢率的 10％以内、 7％ 以内、 5％以内、 3％或更低以内。 一方面， 在热量降低的饮食、 受限制的饮食或运动方案开始 时给予抗肥胖剂组合。
可以采用任何可以用于测定这样的速率的方法来评价代谢率， 例如通过使用 呼吸热量计。这样的用于测定代谢率的方法和装置是本领域已知的， 且描述于例如第 4,572,208、 4,856,531、 6,468,222、 6,616,615、 6,013,009 和 6,475,158 号美国专利中。或 者， 动物的代谢率可通过测量动物在饮食阶段后所分解代谢的瘦组织对脂肪组织的量来评价。因此， 总体重和脂肪含量可以在规定饮食阶段结束时测量。在大鼠中， 常用于测定总体 脂肪的方法是用外科手术方法取出并称重腹膜后脂肪垫， 腹膜后脂肪垫是位于腹膜后腔中 的脂肪， 腹膜后腔是后腹壁以及后壁腹膜之间的区域。该垫的重量被认为与动物的体脂肪 百分比直接相关。由于大鼠的体重与体脂肪间的关系是线性的， 所以肥胖动物具有相应较 高的体脂肪百分比和腹膜后脂肪垫重量。
在本发明的另一方面， 提供一种通过提高患者代谢率来降低脂肪量的方法， 其中 所述方法包括给予抗肥胖剂组合， 所述组合的量能够有效地通过提高患者的代谢率来降低 脂肪量。 脂肪量以总体重的百分数表示。 在某些方面， 脂肪量在治疗过程中被减少至少 1％、 至少 5％、 至少 10％、 至少 15％、 至少 20％或至少 25％。一方面， 患者的瘦组织量在治疗过 程中不降低。另一方面， 患者的瘦组织量在治疗过程中得以保持或者提高。另一方面， 患者 接受低热量饮食或者限制饮食。 “低热量饮食” 意指， 与同一患者的正常饮食相比， 患者每天 摄食更少的热量。在一种情况中， 患者每天少消耗至少 50 卡路里。在其它情况中， 患者每 天少消耗至少 100、 150、 200、 250、 300、 400、 500、 600、 700、 800、 900 或 1000 卡路里。
在本发明的某些实施方案中， 提供一种改变患者中的脂肪分布的方法， 其中所述 方法包括给予抗肥胖剂组合， 所述组合的量能够有效地改变患者的脂肪分布。 一方面， 该改 变源于患者的内脏或异位脂肪或者这两者的代谢的提高。在某些实施方案中， 该方法涉及 内脏或异位脂肪或二者的代谢率比皮下脂肪代谢率高至少约 5％、 10％、 15％、 20％、 25％、 30％、 40％或 50％。一方面， 这些方法导致有利的脂肪分布。在某些实施方案中， 有利的脂 肪分布是皮下脂肪对内脏脂肪、 异位脂肪或这两者的比率提高。 一方面， 该方法涉及例如肌 细胞量提高引起的瘦体组织量提高。
在其它实施方案中， 提供了降低患者皮下脂肪量的方法， 其中所述方法包括向其 需要的患者给予抗肥胖剂组合， 所述组合的量有效降低患者的皮下脂肪的量。在一种情况 中， 患者的皮下脂肪量减少至少约 5％。 在其它情况下， 与给予抗肥胖剂之前的患者相比， 皮 下脂肪量减少至少约 10％、 15％、 20％、 25％、 30％、 40％或 50％。
本文中所描述的方法可用于减少患者的内脏脂肪量。在一种情况下， 患者的内脏 脂肪量减少至少约 5％。在其它情况下， 与给予抗肥胖剂组合之前的患者相比， 患者的内脏 脂肪减少至少约 10％、 15％、 20％、 25％、 30％、 40％或 50％。患者内脏脂肪可通过任何可获 得的测定内脏脂肪量的方法来测量。这样的方法包括例如借助 CT 扫描和 MRI 的腹部体层 摄影术。例如， 第 6,864,415、 6,850,797 和 6,487,445 号美国专利中描述了测定内脏脂肪 的其它方法。
在某些实施方案中， 提供了预防患者异位脂肪累积或减少异位脂肪量的方法， 其 中所述方法包括向其需要的患者给予抗肥胖剂组合， 所述组合的量能够有效预防患者异位 脂肪累积或减少异位脂肪的量。 在一种情况下， 与给予抗肥胖剂组合之前的患者相比， 患者 的异位脂肪量减少至少约 5％。在其它情况下， 患者的异位脂肪量减少至少约 10％或至少 约 15％、 20％、 25％、 30％、 40％或 50％。或者， 与患者的皮下脂肪相比， 异位脂肪的量按比 例减少 5％、 10％、 15％、 20％、 25％、 30％、 40％、 50％、 60％、 70％、 80％、 90％或 100％。可以 用可获得的任何测量异位脂肪的方法来测量患者中的异位脂肪。
在其它实施方案中， 提供在患者中产生更有利的脂肪分布的方法， 其中所述方法 包括给予患者抗肥胖剂组合， 所述组合的量能有效地产生有利的脂肪分布。在某些实施方案中， 抗肥胖剂组合的给予减少患者内脏脂肪或异位脂肪或这二者的量。例如， 给予抗肥 胖剂组合， 其中至少一种作用于前脑中参与食物摄入或体重调节或这二者的结构的抗肥胖 剂， 以及至少一种作用于后脑中参与食物摄入或体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂组合 给予。 在某些实施方案中， 与减少皮下脂肪相比， 所述方法优选减少内脏或异位脂肪或这二 者组合的量。这样的方法导致皮下脂肪对内脏脂肪或异位脂肪的比率更高。这样的提高的 比率可导致心血管疾病、 多囊卵巢综合征、 代谢综合征或其任意组合的发展的风险降低。 在 某些实施方案中， 异位或内脏脂肪比皮下脂肪的代谢率高 5％。在其它实施方案中， 异位或 内脏脂肪比皮下脂肪的代谢率高至少 10％、 15％、 20％、 25％、 30％、 50％、 60％、 70％、 80％、 90％或 100％。
又一方面， 本发明的方法包括使用与糖皮质类固醇组合给予的治疗有效量的抗肥 胖剂组合。糖皮质类固醇有提高脂肪量和减少瘦组织量的副作用。因此， 设想抗肥胖剂组 合可在糖皮质类固醇使用有益的条件下与糖皮质类固醇联合使用。
还提供了降低病态肥胖患者体重的方法， 所述方法首先将患者体重降低至病态肥 胖以下的水平， 再给予患者有效量的抗肥胖剂组合， 以进一步降低患者体重。 将患者体重降 低至病态肥胖以下的方法包括减少热量摄入、 增强身体活动、 药物治疗、 肥胖症治疗外科手 术 ( 例如胃旁路外科手术 ) 或前述方法的任意组合。一方面， 给予抗肥胖剂组合可进一步 减轻患者体重。在其它实施方案中， 提供降低体重指数为 40 或更低的患者的体重指数的方 法， 其给予有效量的抗肥胖剂组合， 以进一步降低患者的体重。
减轻体重意指患者在治疗过程中丧失他 / 她的部分总体重， 无论该治疗过程是数 天、 数周、 数月还是数年。或者， 减轻体重可被定义为脂肪量与瘦组织量之比的降低 ( 换言 之， 患者减少了脂肪量， 但维持或增加了瘦组织量， 并不一定相应减少了总体重 )。 这些实施 方案中组合给予的抗肥胖剂的有效量是在治疗过程中有效降低患者体重的量， 或是在治疗 过程中有效降低患者的脂肪量百分数的量。在某些实施方案中， 治疗过程中患者的体重减 少了至少约 1％、 至少约 5％、 至少约 10％、 至少约 15％或至少约 20％。或者， 在治疗过程 中， 患者的脂肪量百分数降低了至少 1％、 至少 5％、 至少 10％、 至少 15％、 至少 20％或至少 25％。
在某些实施方案中， 降低患者营养物可用性 ( 例如降低患者体重 ) 的方法包括一 日内向给患者予一次或多次有效量的单次剂量抗肥胖剂。单次剂量是间歇式的药物剂量 ( 与连续输注相反 )。患者可每日给予一个或多个单次剂量。单次剂量可以是相同的， 无论 其什么时候给予患者， 或者可进行调节， 使得在一天当中的特定次与其它次相比给予更大 的单次剂量。以特定制剂给予药剂， 例如持续释放制剂， 单次剂量可给予得不那么频繁， 例 如每三天一次、 每周一次、 每月两次、 每月一次。此外， 单次剂量间的时间优选足够长， 以使 在之前的单次剂量中给予的药物从患者血流中清除。
在其它实施方案中， 降低患者营养物可用性 ( 例如降低患者体重 ) 的方法包括给 予患者有效量的连续给药型抗肥胖剂。 连续给药意指药物通过例如静脉注射或经皮贴剂连 续输注。 或者， 连续给药可以以受控释放的胶囊或片剂的形式经口给予， 所述胶囊或片剂在 一段时间内将药物释放入患者的系统中。当连续给药给予时， 所述药物在约 1 小时的时间 段内释放， 在某些情况下， 药物在约 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、 18 或 24 小时的时间段内 释放。“组合给予” 意指抗肥胖剂以单次给予、 作为分离剂次同时给予或顺序给予。顺序 给予是指在给予一种抗肥胖剂之前或之后给予另一种抗肥胖剂。在某些实施方案中， 第一 种抗肥胖剂在至少一种其它抗肥胖剂之前或之后约 30 分钟给予， 在其它实施方案中， 在至 少一种其它抗肥胖剂之前或之后约 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11 或 12 小时给予。任一种所 给予的抗肥胖剂均可以以单次剂量或连续给药给予。
本发明还涉及提高患者产热的方法， 该方法包括向其需要的患者组合给予有效量 的至少一种作用于前脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂， 以及至少 一种作用于后脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂。产热是通过提高 身体代谢率来将热量以热的形式释放的过程。 产热由包括补充、 营养、 运动和冷暴露在内的 机制激活。
本发明还涉及提高患者氧化代谢的方法， 该方法包括向其需要的患者组合给予有 效量的至少一种作用于前脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂和至少 一种作用于后脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂。氧化代谢是利用 氧从碳水化合物 ( 糖 ) 产生能量的过程。
另一方面， 提供了诱导患者饱足感的方法， 其中所述方法包括向所述患者组合给 予有效量的至少一种作用于前脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂和 至少一种作用于后脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂。
又一方面， 提供了控制患者饥饿的方法， 其中所述方法包括向所述患者组合给予 有效量的至少一种作用于前脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂和至 少一种作用于后脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂。
又一方面， 提供了延长患者饱满感的方法， 其中所述方法包括向所述患者组合给 予有效量的至少一种作用于前脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂和 至少一种作用于后脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂。
又一方面， 提供了通过减少膳食量来降低热量摄入的方法， 其中所述方法包括向 所述患者组合给予有效量的至少一种作用于前脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结 构的抗肥胖剂和至少一种作用于后脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖 剂。
另一方面， 提供了控制食物摄入的方法， 其中所述方法包括向所述患者组合给予 有效量的至少一种作用于前脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂和至 少一种作用于后脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂。
又一方面， 提供了保证或帮助遵循低热量饮食或限制饮食的方法， 其中所述方法 包括向所述患者组合给予有效量的至少一种作用于前脑中参与食物摄入、 体重调节或这二 者的结构的抗肥胖剂和至少一种作用于后脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的 抗肥胖剂。
又一方面， 提供了调节患者调定点的方法， 从而将身体的稳态倾向调节至一个更 健康的调定点， 其中所述方法包括向所述患者组合给予有效量的至少一种作用于前脑中 参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂和至少一种作用于后脑中参与食物摄 入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖剂。
又一方面， 提供了维持体重减轻或者维持体重减失的方法， 其中所述方法包括向所述患者组合给予有效量的至少一种作用于前脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结 构的抗肥胖剂和至少一种作用于后脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖 剂。在本发明该方面的其它实施方案中， 通过重新设置患者的调定点来维持体重减轻。
此外， 在某些实施方案中， 抗肥胖剂的组合给予在本文所述的任意方法中产生协 同效应。 此外， 在某些实施方案中， 组合给予抗肥胖剂导致对至少一种所述药剂的剂量需求 更低， 但却具有相同的效果。
在某些实施方案中， 本发明的方法可用于治疗和 / 或预防受益于营养物可用性降 低的代谢疾病或病症。因此， 这些方法可用于治疗和 / 或预防肥胖、 糖尿病 ( 例如 2 型或非 胰岛素依赖性糖尿病、 1 型糖尿病和妊娠糖尿病 )、 进食障碍疾患、 胰岛素抵抗综合征和心 血管疾病。
在某些实施方案中， 提供了改变患者脂肪分布、 降低脂肪量或这二者的方法。因 此， 对于改变身体组成 (body composition) 是有益的患者来说， 他们也可受益于本发明的 方法。 如本文中所预期的， 改变的身体组成包括体脂肪的减少或维持， 以及瘦体组织量减少 的最小化、 瘦体组织量维持或增加。在这些情况中， 体重可以增加以及减少。因此， 患者可 以是瘦型、 超重或者肥胖， 这些术语在本领域是通用的。本发明的方法还可以包括减少非 脂肪组织中的脂肪， 而不损害瘦组织量。该方法的用途包括治疗诸如非酒精性脂肪性肝炎 (NASH) 或脂肪营养失调这样的疾病。
本文所述方法利用至少一种作用于前脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结 构的抗肥胖剂和至少一种作用于后脑中参与食物摄入、 体重调节或这二者的结构的抗肥胖 剂的组合给予， 来控制、 预防和 / 或治疗这样的病症或障碍。
另一方面， 提供了通过给予作用于前脑和后脑的药剂来刺激食物摄入、 促进体重 增加或这二者的方法。 在这样的方法中， 组合地且以刺激患者食物摄入、 促进患者体重增加 或这二者的有效量向患者给予体重诱导剂。 这些方法尤其对诸如恶病质和食欲缺乏以及其 它以患者食欲不振、 食物摄入减少以及体重减轻为特征的消耗性疾病等疾病和障碍有益。 示例性的体重诱导剂包括 NPY1 受体激动剂、 NPY5 受体激动剂、 苗条蛋白拮抗剂、 MCH 激动 剂、 MC4 拮抗剂、 大麻素受体激动剂、 5-HT2C 拮抗剂、 毒蜥外泌肽拮抗剂、 GLP-1 拮抗剂、 生长 素释放肽激动剂、 CCK 拮抗剂和胰淀素拮抗剂。因此， 某些实施方案提供了在其需要的患者 中刺激食物摄入、 促进体重增加或这二者的方法， 该方法包括向所述患者给予至少两种或 更多种体重诱导剂。
关于体重诱导剂的给予， 体重诱导剂以单次给予， 作为分离的剂次同时给予， 或顺 序给予。在使用独立制剂时， 各个体重诱导剂可在基本相同的时间 ( 即并行 ) 给予， 或分别 于交错时间 ( 例如在给予该方法的另一种体重诱导剂之前或之后顺序给予 ) 给予。在某些 实施方案中， 第一种体重诱导剂在至少一种其它体重诱导剂之前或之后约 30 分钟给予， 在 其它实施方案中， 在至少一种其它体重诱导剂之前或之后约 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11 或 12 小时给予。在某些实施方案中， 组合给予涉及以重叠的时间段给予独立制剂。例如， 体 重诱导剂 1 自第 1 天至第 30 天给予， 而体重诱导剂 2 自第 20 天至第 50 天给予。在其它实 施方案中， 组合给予涉及以顺序的、 非重叠的时间段给予独立制剂。例如， 体重诱导剂 1 自 第 1 天至第 30 天给予， 而体重诱导剂 2 自第 35 天至第 50 天给予。因此， 本发明应理解为 包括整个治疗过程中的所有这些同时、 交替或完全分离的治疗方案。所给予的任一种体重诱导剂均可以单次剂量或连续给药给予。
此外， 在某些实施方案中， 体重诱导剂的组合给予在本发明的任一方面产生协同 效应。 此外， 在某些实施方案中， 体重诱导剂的组合给予导致对至少一种药剂的剂量需求更 低， 但却具有相同的效果。
因此， 在一个实施方案中， 为其需要的患者提供治疗肥胖或减轻体重的方法， 其包 括外周给予治疗有效量的至少两种不同的抗肥胖剂， 其中至少一种抗肥胖剂为胰淀素、 胰 淀素类似物或胰淀素激动剂， 以及至少一种抗肥胖剂为苗条蛋白、 苗条蛋白衍生物或苗条 蛋白激动剂， 所述患者减少体重至少 10％、 12％、 15％、 20％、 30％、 40％乃至 50％。
其它的实施方案包括以下实施方案。
实施方案 1。一种治疗患者肥胖的方法， 所述方法包括外周给予治疗有效量的至 少两种不同的抗肥胖剂， 其中至少一种抗肥胖剂为胰淀素、 胰淀素类似物或胰淀素激动剂 ( 即胰淀素药剂 )， 而另一种为至少一种抗肥胖剂， 其为苗条蛋白、 苗条蛋白衍生物或苗条 蛋白激动剂 ( 即苗条蛋白药剂 ) ； 其中所述患者减轻体重至少 10％。
实施方案 2。 一种减轻患者体重的方法， 所述方法包括外周给予治疗有效量的至少 两种不同的抗肥胖剂， 其中至少一种抗肥胖剂为胰淀素、 胰淀素类似物或胰淀素激动剂， 而 且至少一种抗肥胖剂为苗条蛋白、 苗条蛋白衍生物或苗条蛋白激动剂 ； 其中所述抗肥胖剂 以有效减轻患者体重至少 10％的量给予。 实施方案 3。 实施方案 1 或 2 中任一项的方法， 其中所述至少一种抗肥胖胰淀素药 剂为胰淀素激动剂。
实施方案 4。实施方案 3 的方法， 其中所述胰淀素激动剂包括胰淀素类似物。
实施方案 5。实施方案 4 的方法， 其中所述胰淀素类似物包含普兰林肽。
实施方案 6。 实施方案 1-5 中任一项的方法， 其中至少一种抗肥胖苗条蛋白剂是苗 条蛋白激动剂。
实施方案 7。实施方案 6 的方法， 其中所述苗条蛋白激动剂包括苗条蛋白类似物。
实施方案 8。实施方案 7 的方法， 其中所述苗条蛋白类似物包括成熟人苗条蛋白。
实施方案 9。实施方案 8 的方法， 其中所述苗条蛋白类似物包括美曲普汀。
实施方案 10。实施方案 1-9 中任一项的方法， 其中所述胰淀素药剂的有效量和所 述苗条蛋白药剂的有效量包含这样的量 ： 所述量使得在向所述患者组合给予胰淀素药剂和 苗条蛋白药剂时， 比单独给予任一种药剂， 获得的体重降低量更大。
实施方案 11。实施方案 10 的方法， 其中所述两种药剂同时给予。
实施方案 12。实施方案 11 的方法， 其中所述两种药剂混合在一起。
实施方案 13。 实施方案 1-12 中任一项的方法， 其中所述胰淀素类似物或胰淀素激 动剂以 90-400 微克每日给予两次。
实施方案 14。 实施方案 1-13 中任一项的方法， 其中所述胰淀素类似物或胰淀素激 动剂以 150-375 微克每日给予两次。
实施方案 15。 实施方案 1-14 中任一项的方法， 其中所述胰淀素类似物或胰淀素激 动剂以 180-360 微克每日给予两次。
实施方案 16。 实施方案 1-15 中任一项的方法， 其中所述胰淀素类似物或胰淀素激 动剂以 360 微克每日给予两次。
实施方案 17。 实施方案 1-16 中任一项的方法， 其中所述胰淀素类似物或胰淀素激 动剂以 180 微克每日给予两次。
实施方案 18。实施方案 1-17 中任一项的方法， 其中所述苗条蛋白、 苗条蛋白类似 物或苗条蛋白激动剂以 1.0-6.0 毫克每日给予两次。
实施方案 19。实施方案 1-18 中任一项的方法， 其中所述苗条蛋白、 苗条蛋白类似 物或苗条蛋白激动剂以 1.25-5.0 毫克每日给予两次。
实施方案 20。实施方案 1-19 中任一项的方法， 其中所述苗条蛋白、 苗条蛋白类似 物或苗条蛋白激动剂以 2.0-3.0 毫克每日给予两次。
实施方案 21。实施方案 1-20 中任一项的方法， 其中所述苗条蛋白、 苗条蛋白类似 物或苗条蛋白激动剂以 1.25 毫克每日给予两次。
实施方案 22。实施方案 1-21 中任一项的方法， 其中所述苗条蛋白、 苗条蛋白类似 物或苗条蛋白激动剂以 2.5 毫克每日给予两次。
实施方案 23。 实施方案 1-12 中任一项的方法， 其中所述胰淀素类似物或胰淀素激 动剂以 90-400 微克每日给予两次， 且所述苗条蛋白、 苗条蛋白类似物或苗条蛋白激动剂以 1.0-6.0 毫克每日给予两次。
实施方案 24。 实施方案 1-12 中任一项的方法， 其中所述胰淀素类似物或胰淀素激 动剂以 180-360 微克每日给予两次， 且所述苗条蛋白、 苗条蛋白类似物或苗条蛋白激动剂 以 1.25-2.5 毫克每日给予两次或以 1.25-5.0 毫克每日给予两次。
实施方案 25。实施方案 1-24 中任一项的方法， 其中所述两种药剂同时给予。
实施方案 26。实施方案 1-25 中任一项的方法， 其中所述苗条蛋白、 苗条蛋白类似 物或苗条蛋白激动剂为干燥制剂， 且所述胰淀素、 胰淀素类似物或胰淀素激动剂为液体制 剂。
实施方案 27。实施方案 26 的方法， 其中所述苗条蛋白、 苗条蛋白类似物或苗条蛋 白激动剂干燥制剂用胰淀素、 胰淀素类似物或胰淀素激动剂液体制剂复溶。
实施方案 28。 实施方案 26 和 27 中任一项的方法， 其中所述干燥制剂为冻干制剂。
实施方案 29。 实施方案 1-28 中任一项的方法， 其中所述胰淀素和苗条蛋白药剂分 别配制， 但包装在一起。
实施方案 30。 实施方案 1-29 中任一项的方法， 其中所述胰淀素和苗条蛋白药剂位 于独立腔室的药筒中。
实施方案 31。实施方案 1-30 中任一项的方法， 其中在复溶苗条蛋白药剂之前， 所 述胰淀素和苗条蛋白药剂位于带腔室的注射器的独立腔室中。
实施方案 32。 实施方案 1-31 中任一项的方法， 所述方法还包括至少一种选自以下 的抗肥胖剂 ： NPY1 受体拮抗剂、 NPY5 受体拮抗剂、 NPY2 受体激动剂、 NPY4 受体激动剂、 CNTF、 CNTF 激动剂 / 调节剂、 CNTF 衍生物、 MCH1R 拮抗剂、 MCH2R 拮抗剂、 黑皮质素 4 激动剂、 MC4 受体激动剂、 大麻素受体 (CB-1) 拮抗剂 / 逆激动剂、 生长素释放肽拮抗剂、 5HT2c 激动剂、 5- 羟色胺重摄取抑制剂、 5- 羟色胺转运抑制剂、 毒蜥外泌肽、 毒蜥外泌肽衍生物、 毒蜥外泌 肽激动剂、 GLP-1、 GLP-1 类似物、 GLP-1 激动剂、 DPP-IV 抑制剂、 阿片样物质拮抗剂、 食欲素 拮抗剂、 代谢型谷氨酸受体第 5 亚型拮抗剂、 组胺 3 拮抗剂 / 逆激动剂、 托吡酯、 CCK、 CCK 类 似物、 CCK 激动剂以及 PYY(3-36)、 PYY(3-36) 类似物和 PYY(3-36) 激动剂。实施方案 33。实施方案 32 的方法， 其中所述进一步的至少一种抗肥胖剂为苯丁 胺、 利莫那班、 西布曲明或托吡酯。
实施方案 34。实施方案 1-33 中任一项的方法， 其中所述患者减少体脂肪量。
实施方案 35。 实施方案 1-34 中任一项的方法， 其中所述患者患有至少一种选自以 下的病症 ： 肥胖、 肥胖相关障碍、 肥胖相关疾病、 超重、 肥胖相关病症、 糖尿病、 胰岛素抵抗综 合征、 脂肪营养失调 (lypodystrpohy)、 非酒精性脂肪性肝炎、 心血管疾病、 多囊卵巢综合征 和代谢综合征。
实施方案 36。实施方案 1-35 中任一项的方法， 其中所述 BMI 大于 25。
实施方案 37。实施方案 1-36 中任一项的方法， 其中所述 BMI 为 25-35。
实施方案 38。实施方案 1-37 中任一项的方法， 其中所述 BMI 为 25-40。
实施方案 39。实施方案 1-38 中任一项的方法， 其中所述 BMI 为 25-45。
实施方案 40。实施方案 1-39 中任一项的方法， 其中所述 BMI 为 35-45。
实施方案 41。实施方案 1-40 中任一项的方法， 其中所述 BMI 降低至低于 30。
实施方案 42。实施方案 1-41 中任一项的方法， 其中所述 BMI 降低至低于 25。
实施方案 43。实施方案 1-42 中任一项的方法， 其中所述 BMI 降低至正常值。
实施方案 44。实施方案 1-43 中任一项的方法， 其中体重降低在 4 周治疗内实现。
实施方案 45 实施方案 1-44 中任一项的方法， 其中体重降低在 8 周治疗内实现。
实施方案 46。 实施方案 1-45 中任一项的方法， 其中体重降低在 12 周治疗内实现。
实施方案 47。 实施方案 1-46 中任一项的方法， 其中体重降低在 20 周治疗内实现。
实施方案 48。 实施方案 1-47 中任一项的方法， 其中体重降低在 24 周治疗内实现。
实施方案 49。实施方案 1-48 中任一项的方法， 其中所述患者为人。
实施方案 50。实施方案 1-49 中任一项的方法， 其中所述患者为肥胖病人。
实施方案 51。实施方案 1-50 中任一项的方法， 其中所述患者为人类成年女性。
实施方案 52。实施方案 1-51 中任一项的方法， 其中所述体重降低至少 12％。
实施方案 53。实施方案 1-52 中任一项的方法， 其中所述体重降低至少 15％。
实施方案 54。 实施方案 1-53 中任一项的方法， 其中所述体重降低为在 8 周治疗内 至少降低 10％。
实施方案 55。实施方案 1-54 中任一项的方法， 其中所述体重降低为在 12 周治疗 内至少降低 10％。
实施方案 56。实施方案 1-55 中任一项的方法， 其中所述体重降低为在 20 周治疗 内至少降低 10％。
实施方案 57。实施方案 1-56 中任一项的方法， 其中所述体重降低为在 40 周治疗 内至少降低 15％。
实施方案 58。 实施方案 1-57 中任一项的方法， 其中所述胰淀素药剂和所述苗条蛋 白药剂在餐前 2 小时内给予。
实施方案 59。 实施方案 1-58 中任一项的方法， 其中所述胰淀素药剂和所述苗条蛋 白药剂在餐前 1 小时内给予。
实施方案 60。 实施方案 1-59 中任一项的方法， 其中所述胰淀素药剂和所述苗条蛋 白药剂在餐前 15 分钟内给予。实施方案 61。 实施方案 1-60 中任一项的方法， 其中所述胰淀素药剂和所述苗条蛋 白药剂在早餐前给予。
实施方案 62。 实施方案 1-61 中任一项的方法， 其中所述胰淀素药剂和所述苗条蛋 白药剂在晚餐前给予。
实施方案 63。实施方案 1-62 中任一项的方法， 其中所述有效量的胰淀素剂实现 500-2000pg/ml 的血浆浓度。
实施方案 64。实施方案 1-63 中任一项的方法， 其中所述有效量的胰淀素剂实现 750-1500pg/ml 的血浆浓度。
实施方案 65。 实施方案 1-64 中任一项的方法， 其中所述有效量的胰淀素剂实现约 1500pg/ml 的最大血浆浓度。
实施方案 66。 实施方案 1-65 中任一项的方法， 其中所述有效量的苗条蛋白药剂实 现 20-100pg/ml 的血浆浓度。
实施方案 67。 实施方案 1-66 中任一项的方法， 其中所述有效量的苗条蛋白药剂实 现 25-90pg/ml 的血浆浓度。
实施方案 68。 实施方案 1-67 中任一项的方法， 其中所述有效量的苗条蛋白药剂实 现 25-90pg/ml 的血浆浓度。
实施方案 69。实施方案 1-68 中任一项的方法， 其中所述有效量的胰淀素剂实现 500-2000pg/ml 的血浆浓度， 且所述有效量的苗条蛋白药剂实现 20-100pg/ml 的血浆浓度。
实施方案 70。 实施方案 1-69 中任一项的方法， 所述方法进一步包括单独给予胰淀 素或苗条蛋白药剂， 以维持或继续减轻体重。
实施方案 71。一种减轻患者体重的方法， 所述方法包括以在需要的患者中以对苗 条蛋白有效敏化的量和时间， 至少给予胰淀素、 胰淀素激动剂或胰淀素类似物， 然后给予苗 条蛋白、 苗条蛋白衍生物或苗条蛋白激动剂， 以减轻所述患者的体重至少 10％。
实施方案 72。 一种减轻患者体重的方法， 所述方法包括至少给予胰淀素、 胰淀素激 动剂或胰淀素类似物和苗条蛋白、 苗条蛋白衍生物或苗条蛋白激动剂， 以减轻所述患者至 少 10％的体重， 然后给予单独的胰淀素、 胰淀素激动剂或胰淀素类似物， 或者单独的苗条蛋 白、 苗条蛋白衍生物或苗条蛋白激动剂。
实施方案 73。 一种用于实施方案 1-72 中任一项的方法的药物组合物， 其中所述组 合物包含有效量的胰淀素激动剂和有效量的苗条蛋白激动剂。
实施方案 74。一种对其需要的患者用于治疗肥胖或实现体重降低的药物组合物， 其中所述组合物包含依据实施方案 1-73 中任一项的有效量的胰淀素激动剂和有效量的苗 条蛋白激动剂。
实施方案 75。一种对其需要的患者用于治疗肥胖或实现体重降低的药物组合物， 其中所述组合物包含有效量的胰淀素激动剂和有效量的苗条蛋白激动剂， 其中所述有效量 包括这样的量 ： 所述量使得在向所述患者组合给予所述药剂时， 比单独给予任一种药剂时 获得的体重降低量更大。
实施方案 76。包含实施方案 1-75 中任一项的胰淀素激动剂和苗条蛋白激动剂的 组合物在制备用于治疗肥胖或实现体重降低的药物中的用途。
用于本发明的抗肥胖剂， 包括苗条蛋白、 苗条蛋白衍生物、 重组苗条蛋白和苗条蛋白激动剂。苗条蛋白 ( 源自希腊文 leptos， 意指瘦 ) 是一种主要由脂肪细胞产生的激 素。在肥胖病人中， 苗条蛋白血液水平通常与身体中所存储的脂肪量相关。通常， 脂肪量 越大， 苗条蛋白的量就越大。大多数肥胖者中的血清苗条蛋白水平浓度高， 且不希望受限 于理论， 人们认为存在苗条蛋白抗性状态 (Mantzoros 等人， (2000)J.Clin Endocrinol. Metab.85 ： 4000-4002)。尽管治疗学家尝试使用苗条蛋白来治疗肥胖， 但是重组人苗条蛋 白的效果在使肥胖个体减轻体重中有限的 ( 如果有的话 )。其例外包括对先天性苗条蛋白 缺陷个体的治疗和对皮下脂肪萎缩个体的治疗。参见例如 Heymsfield 等人 (1999)JAMA 282 ： 1568-1575， Farooqi 等人 (1999)N.Engl.J. Med. 341 ： 879-884， 以及美国专利公开号 2005/0020496。
用于本文所述方法和组合物的示例性的苗条蛋白、 苗条蛋白衍生物、 重组苗条蛋 白和苗条蛋白激动剂包括但不限于成熟的重组甲硫氨酰人苗条蛋白 ( 本文称为 rmetHu- 苗 条蛋白 1-146 或美曲普汀 ) 的氨基酸序列， 其具有以下氨基酸序列 ： M V P I Q K V Q D D T K T L I K T I VT R I N D I S H T Q S V S S K Q K V T G L D F I P G L H P I L T L S KM D Q T L A V Y Q Q I L T S M P S R N V I Q I S N D L E N L R D LL H V L A F S K S C H L P W A S G L E T L D S L G G V L E A S G YS T E V V A L S R L Q G S L Q D M L W Q L D L S P G C(SEQ IDNO ： 191)。
在某些实施方案中， 苗条蛋白以替代疗法的形式给予， 从而实现在血浆中接近生 理苗条蛋白浓度。据估计， 苗条蛋白的生理替换剂量对所有年龄的男性均为约 0.02mg/kg 体重每天， 对 18 岁以下的女性为约 0.03mg/kg 体重每天， 对成年女性为约 0.04mg/kg 体重 每天。当尝试实现接近苗条蛋白生理浓度时， 人们可以例如在第一个月的治疗中用 50％的 估计替代剂量、 在第二个月的治疗中用 100％的替代剂量、 在第三个月的治疗中用 200％的 替代剂量等来治疗患者。血清苗条蛋白水平可通过本领域已知的方法来测量， 包括例如用 商业可获得的免疫测定。
本发明的一个方面是， 通过例如给予胰淀素来治疗苗条蛋白抗性的方法来减少脂 肪。一旦苗条蛋白抗性得到改善 ( 减轻 )， 就可给予苗条蛋白来进一步治疗肥胖。
适用于本文所述方法的苗条蛋白和包含苗条蛋白的组合物是本领域已知的， 包 括但不限于重组人苗条蛋白 (PEG-OB， Hoffman LaRoche) 和重组甲硫氨酰人苗条蛋白 (Amgen)。苗条蛋白、 类似物、 衍生物、 制品、 制剂、 药物组合物、 剂量和给予途径之前已经在 以下专利公开文本中作过描述， 这些文献就其所有方面整体通过引用结合到本文中 ： 美国 专利号 5,552,524 ； 5,552,523 ； 5,552,522 ； 5,521,283， 5,935,810 ； 6,001,968 ； 6,429,290 ； 6,350,730 ； 6,936,439 ； 6,420,339 ； 6,541,033 ；美 国 专 利 出 版 号 2005/0176107 ； 2005/0163799 ； 和 PCT 申请公布号 WO 96/05309、 WO 96/40912 ； WO 97/06816、 WO 00/20872、 WO 97/18833、 WO 97/38014、 WO 98/08512、 WO 98/28427、 WO98/46257、 WO 00/09165、 WO 00/47741 和 WO 00/21574。
苗 条 蛋 白 激 动 剂 和 拮 抗 剂 是 本 领 域 已 知 的。 例 如， 苗条蛋白激动剂描述于 第 2004/0072219、 2003/049693、 2003/0166847、 2003/0092126 号 美 国 专 利 公 开 文 本 和 第 6,777,388 和 6,936,439 号 美 国 专 利 中。 苗 条 蛋 白 拮 抗 剂 描 述 于 第 2004/0048773、 2002/0160935 号美国专利公开文本和第 6,399,745 号美国专利中。 测试苗条蛋白激动作用 和拮抗作用的方法描述于例如第 6,007,998 和 5,856,098 号美国专利中。这些专利是示例性的， 且就其所有方面整体通过引用结合到本文中。
用于本发明的抗肥胖剂还包括胰淀素和胰淀素激动剂。胰淀素是一种 37 个氨 基酸的肽激素， 其响应营养物刺激， 与胰岛素共同分泌自胰腺 β 细胞。人胰淀素 (h 胰 淀素 ) 具有以下氨基酸序列 ： Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-A la-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Ala-Ile-Leu-Ser-Ser-Thr-Asn -Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr(SEQ ID NO ： 1)。 大 鼠 胰 淀 素 (r 胰 淀 素 ) 具 有 以 下 序 列 ： KCNTATCATQRLANFLVRS SNNLGPVLPPTNVGSNTY (SEQ IDNO ： 2)。设想在本文所述的方法中 使用任何物种来源的胰淀素。
已经令人惊奇地发现， 诸如通过使用胰淀素、 胰淀素激动剂和胰淀素拮抗剂来调 节有效的体内胰淀素水平， 可调节体内的有效的生长素释放肽水平。
设想在本发明中使用的胰淀素激动剂包括描述于第 5,686,411、 6,114,304 和 6,410,511 号美国专利中的那些， 这些专利就其所有方面整体通过引用结合到本文中。 这样 1 5 10 的化合物包括具有下式 I 的那些 ： A1-X-Asn-Thr- Ala-Thr-Y-Ala-Thr- Gln-Arg-Leu-B1-A 15 20 sn- Phe-Leu-C1-D1-E1- F1-G1-Asn-H1-Gly-25I1-J1-Leu-K1-L1-30Thr-M1-Val-Gly-Ser-35AsnThr-Tyr-Z(SEQ ID NO ： 3) 其中 A1 是 Lys、 Ala、 Ser 或氢 ；
B1 是 Ala、 Ser 或 Thr ；
C1 是 Val、 Leu 或 Ile ；
D1 是 His 或 Arg ；
E1 是 Ser 或 Thr ；
F1 是 Ser、 Thr、 Gln 或 Asn ；
G1 是 Asn、 Gln 或 His ；
H1 是 Phe、 Leu 或 Tyr ；
I1 是 Ala 或 Pro ；
J1 是 Ile、 Val、 Ala 或 Leu ；
K1 是 Ser、 Pro、 Leu、 Ile 或 Thr ；
L1 是 Ser、 Pro 或 Thr ；
M1 是 Asn、 Asp 或 Gln ；
X 和 Y 是独立选择的带有侧链的氨基酸残基， 所述侧链彼此间化学键合， 以形成分 子内连接 ； 和
Z 是氨基、 烷基氨基、 二烷基氨基、 环烷基氨基、 芳氨基、 芳烷基氨基、 烷氧基、 芳氧 基或芳烷氧基。
X 和 Y 的适宜侧链包括衍生自可形成二硫键的烷基硫醇的基团 ； 可形成环内酰胺 的烷基酸和烷基胺 ； 可缩合并还原以形成烷基胺桥的烷基醛或烷基卤化物和烷基胺 ； 或可 相连以形成烷基、 链烯基、 炔基、 醚或硫醚键的侧链。优选的烷基链包括具有约 1 个至约 6 个碳原子的低级烷基基团。
本发明的又一方面涉及未桥化的 SEQ ID NO ： 3 的激动剂类似物， 且其中 X 和 Y 独 立地选自 Ala、 Ser、 Cys、 Val、 Leu 和 Ile 或 Ser 或 Cys 的烷基、 芳基或芳烷基酯和醚。
上述激动剂类似物的生物活性衍生物也包括在本发明的范围内， 其中单独的氨基
酸的立体化学可在一个或多个特定位点从 (L)/S 转化为 (D)/R。
还包括在本发明范围内的是 Asn、 Ser 和 / 或 Thr 残基经过糖基化修饰的激动剂类 似物。
包含较少肽特征的胰淀素的生物活性激动剂类似物包括在本发明范围内。 这样的 肽模拟物可以包括例如 --CO--NH-- 酰胺键的以下一种或多种取代 ： 酯肽 (--CO--O--)、 亚 氨基亚甲基 (--CH2--NH--)、 反式烯 (--CH ＝ CH--)、 β- 烯胺腈 (--C( ＝ CH--CN)--NH--)、 硫代酰胺 (--CS--NH--)、 硫代亚甲基 (--S--CH2-- 或 --CH2--S--)、 亚甲基 (--CH2--C2--) 和 逆酰胺 (retro-amide)(--NH--CO--)。
本发明的化合物与各种无机酸和有机酸以及碱形成盐。 这样的盐包括用有机酸和 无机酸 ( 例如 HCl、 HBr、 H2SO4、 H3PO4、 三氟乙酸、 乙酸、 甲酸、 甲磺酸、 甲苯磺酸、 马来酸、 延胡 索酸和樟脑磺酸 ) 制备的盐。用碱制备的盐包括例如铵盐、 碱金属盐 ( 诸如钠盐和钾盐 ) 和碱土盐 ( 诸如钙盐和镁盐 )。优选乙酸盐、 盐酸盐和三氟乙酸盐。
在整个申请中， 氨基酸序列可用与参比肽毗连的位置 a 至位置 b 的氨基酸表 示。例如， 1-7h 胰淀素是指人胰淀素 (SEQ ID NO ： 1)( 本例中的参比肽 ) 中从 1 位至 7 位 ( 包括在内 ) 的氨基酸序列。对参比肽的修饰可用与修饰毗连的修饰位置来表示。例如， (2Asp7Lys)1-7h 胰淀素表示， 在 2 位带有 Cys 变为 Asp 的修饰和在 7 位带有 Cys 变为 Lys 的 18 28 修饰的人胰淀素中 1 位至 7 位的氨基酸序列。 对于另一个例子， Arg25， Pro-h- 胰淀素表示 在 18 位带有 His 变为 Arg 的修饰、 在 25 位带有 Ala 变为 Pro 的修饰以及在 28 位带有 Ser 变为 Pro 的修饰的人胰淀素的氨基酸序列。 28
示例性的化合物包括但不限于 des-1Lys-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 4)、 Pro-h- 胰淀 25， 28， 29 18 25， 28 素 (SEQ ID NO ： 5)、 Pro-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 6)、 Arg Pro-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 1 18 25， 28 7) 和 des- Lys Arg Pro-h- 胰淀 (SEQ ID NO ： 8)， 它们全部都在被治疗的测试动物体内 显示胰淀素活性 ( 例如激起显著的高乳酸血症， 随后为高血糖症 )。 除具有胰淀素活性特征 外， 还已发现某些本发明优选化合物与人胰淀素相比时具有更令人满意的溶解性和稳定性 29 25， 28， 29 特征。这些化合物的例子包括 25Pro26Val28， Pro-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 9)、 Pro-h- 胰 18 25， 28 淀素 (SEQ IDNO ： 10) 和 Arg Pro-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 7)。 18 25， 28， 29
其 它 化 合 物 包 括 Arg Pro-h- 胰 淀 素 (SEQ ID NO ： 11)、 des-1Lys18Arg25， 28， 29 28， 29 Pro-h- 胰 淀 素 (SEQ ID NO ： 12)、 des-1Lys25， Pro-h- 胰 淀 素 (SEQ ID NO ： 25 26 28 ， 29 23 29 13) 、 Pro Val Pro-h- 胰 淀 素 (SEQ ID NO ： 14) 、 Leu 25Pro 26Val 28， Pro-h- 胰 23 25 26 28 淀 素 (SEQ ID NO ： 15)、 Leu Pro Val Pro-h- 胰 淀 素 (SEQ ID NO ： 16)、 1 23 25 26 28 18 23 25 26 28 des- Lys Leu Pro Val Pro-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 17)、 Arg Leu Pro Val Pro-h- 胰 18 23 25， 28， 29 18 淀 素 (SEQ ID NO ： 18)、 Arg Leu Pro-h- 胰 淀 素 (SEQ ID NO ： 19)、 Arg23Leu25， 17 28， 29 17 28， 28 Pro-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 20)、 Ile23Leu25， Pro-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 21)、 Ile25， 28， 29 29 Pro-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 22)、 des-1Lys17Ile23Leu25， Pro-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 23)、 17 18 23 17 18 23 26 29 Ile Arg Leu-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 24)、 Ile Arg Leu Val Pro-h- 胰淀素 (SEQ ID 17 18 23 25 26 28， 29 13 NO ： 25)、 Ile Arg Leu Pro Val Pro-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 26)、 Thr21His23Leu26Ala28L 13 eu29Pro31Asp-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 27)、 Thr21His23Leu26Ala29Pro31Asp-h- 胰淀素 (SEQ ID 13 NO ： 28)、 des-1Lys13Thr21His23Leu26Ala28Pro31Asp-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 29)、 Thr18Arg21His 23 13 29 Leu26Ala29Pro31Asp-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 30)、 Thr18Arg21His23Leu28， Pro31Asp-h- 胰淀素29 (SEQ ID NO ： 31) 和 13Thr18Arg21His23Leu25Pro26Ala28， Pro31Asp-h- 胰淀素 (SEQ ID NO ： 32)。
有用的胰淀素激动剂类似物包括在 PCT 申请公开文本号 WO93/10146 中鉴定的那 些， 该公开文本的内容也通过引用结合到本文中。
用 于 本 发 明 的 胰 淀 素 激 动 剂 还 可 以 包 括 胰 淀 素 片 段 及 其 如 上 述 的 以 及 EP 289287( 其内容通过引用结合到本文中 ) 中描述的那些类似物。胰淀素激动剂还可以是与 具有胰淀素活性的 SEQ ID NO ： 1 具有至少 60％、 65％、 70％、 75％、 80％、 85％、 90％、 95％或 99％氨基酸序列同一性的化合物。 胰淀素激动剂还包括小分子、 非肽分子， 例如基于小分子 化学的那些。如本文所使用的 “胰淀素活性” 包括胰淀素影响身体内生长素释放肽水平的 能力。胰淀素激动剂还包括在 SEQ IDNO ： 1 的至少一个或多个氨基酸位置具有插入、 缺失、 延伸和 / 或取代的胰淀素的类似物。氨基酸插入、 缺失或取代的数目可以不超过 5、 10、 15、 20、 25 或 30。插入、 延伸或取代可以用其它的天然氨基酸、 合成氨基酸、 肽模拟物或其它化 合物。如本发明中所预期的， 胰淀素激动剂还可以是降钙素， 诸如硬骨鱼降钙素及其类似 物， 以及降钙素基因相关肽 (CGRP) 及其类似物。
胰淀素激动剂还包括在美国专利申请号 60/543,275 和 2005 年 2 月 11 日申请的 PCT 申请号 PCT/US2005/004631( 各自通过引用结合到本文中 ) 中描述的多肽 ( 本文称为 LHC( 环螺旋 C 末端 ) 肽 )， 以及它们的类似物和衍生物。用于本发明的 LHC 肽作为本文所 公开的降钙素、 胰淀素、 CGRP 或这三种的任意组合的至少一种生物学作用的激动剂起作用， 或与胰淀素、 降钙素或 CGRP 的受体的至少一种结合。示例性的 LHC 肽的受体结合活性和生 物活性描述于美国专利申请号 60/543,275 和 PCT 申请号 PCT/US2005/004631。在总的方 面， 这些多肽激动剂具有胰淀素或降钙素及其类似物的至少环区域、 降钙素或其类似物 α 螺旋区域的至少部分 α 螺旋区域， 或具有胰淀素 α 螺旋区域和降钙素 α 螺旋区域或其各 自类似物的部分的 α 螺旋区域， 和胰淀素或降钙素或其类似物的 C- 末端尾部， 附带条件是 降钙素或降钙素类似物的 C- 末端尾部不是脯氨酸 (Pro)、 羟脯氨酸 (Hyp)、 高丝氨酸 (Hse) 或 Hse 的衍生物。
在某些实施方案中， 这些 LHC 肽具有胰淀素或胰淀素类似物环区域、 至少部分的 降钙素或降钙素类似物 α 螺旋区域和胰淀素或胰淀素类似物 C- 末端尾部。在其它实施方 案中， 这些 LHC 肽具有降钙素或降钙素类似物环区域、 至少部分的降钙素或降钙素类似物 α 螺旋区域和胰淀素或胰淀素类似物 C- 末端尾部。 在其它实施方案中， 这些 LHC 肽具有胰 淀素或胰淀素类似物环区域、 至少部分的胰淀素或胰淀素类似物 α 螺旋区域和至少部分 的降钙素或降钙素类似物 α 螺旋区域， 以及胰淀素或胰淀素类似物 C- 末端尾部。在其它 另外的实施方案中， 这些 LHC 肽具有降钙素或降钙素类似物环区域、 至少部分的胰淀素或 胰淀素类似物 α 螺旋区域和至少部分的降钙素或降钙素类似物 α 螺旋区域， 以及胰淀素 或胰淀素类似物 C- 末端尾部。在其它的另外实施方案中， 这些 LHC 肽具有胰淀素或胰淀素 类似物环区域、 部分或降钙素或降钙素类似物 α 螺旋区域、 或至少部分的胰淀素或胰淀素 类似物 α 螺旋区域和至少部分的降钙素或降钙素类似物 α 螺旋区域， 和降钙素或降钙素 类似物 C- 末端尾部。
在某些实施方案中， 这些 LHC 肽的环区域可以进一步包含不超过 1 个、 2 个、 3 个或 4 个的修饰， 所述修饰包括来自于胰淀素或降钙素环及其类似物的取代、 插入或缺失。还设 想， 这些 LHC 肽可在包含 N- 帽区域的环的 N- 末端部分具有其它修饰， 所述修饰可具有疏水或亲水特征， 诸如乙酰基、 异己酰基、 3， 6- 二氧辛酸或 1- 氨基 -4， 7， 10- 三氧杂 -13- 十三胺 琥珀酰亚胺酸 (tridecanamine succinimic acid)。 修饰还可包括 1 个、 2 个、 3 个或其它更 多个附加氨基酸。 这是一个允许许多修饰的区域， 所述修饰多得不能悉数提及， 但本领域技 术人员基于本申请中进一步的举例应当理解。
这些 LHC 肽还可通过诸如酰胺化、 糖基化、 酰化、 硫酸盐化、 磷酸化、 乙酰化和环化 的化学改变进一步衍生化。 这样的化学改变可通过化学或者生物化学方法以及通过体内过 程或其任意组合得到。这些 LHC 肽的衍生物可以进一步包括与一种或多种聚合物或小分子 取代基缀合。一种类型的聚合物缀合是将聚乙二醇 (“PEG” ) 聚合物、 聚氨基酸 ( 例如聚 组氨酸、 聚精氨酸、 聚赖氨酸等 ) 和 / 或各种长度的脂肪酸链， 与多肽的 N- 或 C- 末端或氨 基酸残基侧链连接或附着。小分子取代基包括短烷基和约束 (constrained) 烷基 ( 例如分 支的、 环化的、 稠合的、 金刚烷基 ) 和芳族基团。此外， 诸如 R 和 K 的碱性残基可以用 homoR 和 homoK、 瓜氨酸或鸟氨酸取代， 以改善肽的代谢稳定性。用于本发明的多肽包括酸形式以 及酰胺形式。
在某些实施方案中， LHC 肽的 α 螺旋区域包含降钙素或降钙素类似物 α 螺旋区 域的至少 4 个连续的氨基酸。在其它实施方案中， 该 α 螺旋区域包含降钙素或降钙素类似 物 α 螺旋区域的至少 5、 6、 7 或 8 个连续氨基酸。在其它实施方案中， 该 α 螺旋区域包含 降钙素或降钙素类似物 α 螺旋区域的至少 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21 或更 多个连续氨基酸。在某些实施方案中， 当连续氨基酸的数目少于 8 时， 设想该 α 螺旋区域 还包含胰淀素或胰淀素类似物 α 螺旋区域的至少 4、 5、 6、 7、 9、 10、 11 或更多个氨基酸。在 某些实施方案中， 设想该新型化合物 α 螺旋区域中可存在更少的降钙素或降钙素类似物 的氨基酸但更多的胰淀素或胰淀素类似物的氨基酸。构成 α 螺旋区域的氨基酸数目可为 约 10 个至 23 个氨基酸。因此， 该 α 螺旋区域可以为 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 22 或 23 个氨基酸长。此外， 这些氨基酸应当提供约 3 个至约 6 个 α 螺旋转角。还 设想， 这些化合物的 α 螺旋区域可以进一步包含不超过 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9 或 10 个修饰， 包括来自降钙素和 / 或胰淀素 α 螺旋区域及其类似物的取代、 插入或缺失。
在某些实施方案中， LHC 肽的 C- 末端尾部包含胰淀素或降钙素及其类似物的至少 最后 6 个、 5 个或 4 个氨基酸。在某些实施方案中， 该新型化合物的 C- 末端尾部至少包含部 分带有 β 转角的 C- 末端。在某些实施方案中， 该 β 转角通过氨基酸组合 Gly-Ser 导入。 因此， 所述 LHC 肽可具有包含部分带有 Gly-Ser 或起始于 Gly-Ser 的胰淀素或降钙素 C- 末 端尾部 ( 及其类似物 ) 的 C- 末端。
在某些实施方案中， LHC 肽的该 C- 末端尾部可进一步包含不超过 1 个、 2 个或 3 个 包括来自胰淀素或降钙素环及其类似物的取代、 插入或缺失的修饰。进一步设想， 所述 LHC 肽可在 C- 末端尾部的 C- 末端部分带有其它修饰， 这些修饰可以包括例如 L- 辛基甘氨酸、 4ABU(4- 氨基丁酸 )、 9Anc(9 氨基壬酸 (amiononanoic acid))、 3， 6- 二氧辛酸或 1- 氨基 -4， 7， 10- 三氧杂 -13- 十三胺琥珀酰亚胺酸。修饰还可包括 1 个、 2 个、 3 个或更多个其它氨基 酸。本领域技术人员基于本申请中进一步的举例应理解该区域中所设想的修饰类型。
一方面， 环区域定义为在 N- 末端存在的至少包含 5 个至 8 个氨基酸的区域， 其中 第一个和最后一个氨基酸能够形成键， 例如胰淀素的 2-7 位的残基或降钙素的 1-7 位的残 基以及其各自类似物的相应区域。另一方面， α 螺旋区域定义为胰淀素或降钙素中两侧为环区域和 C- 末端尾部的中间部分， 其在结构上形成 α 螺旋， 例如胰淀素的 8-23 位的残基 或降钙素的 8-27 位的残基以及其各自的类似物的相应区域。 又一方面， C- 末端尾部定义为 α 螺旋后的区域， 例如胰淀素 33-37 位的残基或更长的如 27-37 位的残基或降钙素 27( 或 28) 至 32 位的残基。LHC 肽中同时包括所公开的化合物的酰胺形式和酸形式。
如本文所定义的胰淀素和降钙素包括所有天然的和物种变异。 胰淀素和降钙素的 例子包括但不限于 ： 人胰淀素 (SEQ ID NO ： 1)、 大鼠胰淀素 (SEQ ID NO ： 2)、 鲑鱼降钙素 (sCT)CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP(SEQ ID NO ： 33) 和人降钙素 (hCT)CGNLSTCMLG TYTQDFNKFHTFPQTAIGVGAP(SEQID NO ： 34)。
在总的方面， 所述 LHC 肽至少包含环区域、 α 螺旋区域和 C- 末端尾部。该环区域 包含一段含式 (II)X-Xaa1 序列 -Y 的氨基酸序列， 其中 X 和 Y 能够成键， 且为独立选择的 具有侧链的残基， 所述侧链彼此化学结合或能够彼此化学结合， 以形成分子内连接， 诸如二 硫键 ； 酰胺键 ； 例如由烷基酸和烷基胺形成的环内酰胺 ； 例如通过缩合和还原烷基醛或烷 基卤化物和烷基胺而形成的烷基胺或亚胺桥 ； 和例如通过侧链连接形成的烷基、 链烯基、 炔 基、 醚或硫醚键。 烷基链可包括带有约 1 个至约 6 个碳原子的低级烷基基团。 在某些实施方 案中， 分子内连接可以是二硫键、 酰胺键、 亚胺键、 胺键、 烷基键和烯键。 在某些实施方案中， 式 (II) 的 X 和 Y 独立选自 Ser、 Asp、 Glu、 Lys、 Om( 鸟氨酸 ) 或 Cys。在某些实施方案中， 式 (II) 的 X 和 Y 是 Cys 和 Cys。在其它实施方案中， 式 (II) 的 X 和 Y 是 Ser 和 Ser。在其它 实施方案中， 式 (II) 的 X 和 Y 是 Asp 和 Lys 或者 Lys 和 Asp。
式 (II) 的 Xaa1 序列在 X 和 Y 之间包含 3、 4、 5 或 6 个氨基酸的氨基酸序列。在某 些实施方案中， 该 Xaa1 序列包含氨基酸序列， 该氨基酸序列具有带有相邻于 Y 的一个或多 个取代或非取代的含羟基残基的区域。 例如， 该含羟基的残基区域中与 Y 相邻的 3 个氨基酸 中的至少 2 个为 Ser 或 Thr。Xaa1 序列中的其它氨基酸可以是任何氨基酸。在某些实施方 案中， Xaa1 序列是 3 个氨基酸。 在其它实施方案中， Xaa1 序列是 4 个氨基酸。 在其它另外的 实施方案中， Xaa1 序列是 5 个氨基酸。在其它实施方案中， Xaa1 序列是 6 个氨基酸。因此， 式 (II) 的 Xaa 1 可用 Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7(SEQ ID NO ： 35) 表示。在某些实 施方案中， Xaa2、 Xaa3、 Xaa4、 任意两个或所有这三个可以不存在。 在某些实施方案中， Xaa5、 Xaa6 和 Xaa7 包含含有羟基的残基区域。同样， 三个氨基酸中的至少两个可以是 Ser、 Hse、 Thr、 别苏氨酸 (alloThr)、 d- 苏氨酸 (d-Thr) 或其其它的非天然类似物。Xaa2 可以是任何 氨基酸或不存在， Xaa3 可以是任何氨基酸或不存在， Xaa4 可以是任何氨基酸或不存在 ； 如 果 Xaa6 是 Ser 或 Thr 且 Xaa7 是 Ser 或 Thr， 则 Xaa5 可以是任何氨基酸 ； 如果 Xaa5 是 Ser 或 Thr 且 Xaa7 是 Ser 或 Thr， 则 Xaa6 可以是任何氨基酸 ； 如果 Xaa5 是 Ser 或 Thr 且 Xaa6 是 Ser 或 Thr， 则 Xaa7 可以是任何氨基酸。因此， 在某些实施方案中， Xaa1 可以表示为 Xaa2 不存在， Xaa3 为 Ala、 Gly、 Ser、 Asp 或不存在， Xaa4 为 Asn、 Ala、 Asp、 Gly 或不存在 ； Xaa5 为 Ala、 Leu、 Thr 或 Ser ； Xaa6 为 Ala、 Ser 或 Thr ； 且 Xaa7 为 Ala、 Ser、 Val、 Hse、 (S)-2- 氨 基 (amio)-3- 羟基甲基丁酸 (Ahb)、 (2S， 3R)-2- 氨基 -3 羟基甲基戊酸 (Ahp)、 d-Thr、 Thr 或其衍生物。在其它实施方案中， Xaa1 可表示为 Xaa2 不存在， Xaa3 为 Ser、 Gly 或不存在， Xaa4 为 Asn 或 Asp， Xaa5 为 Ala、 Ser、 Thr 或 Leu， Xaa6 为 Ala、 Thr 或 Ser， 且 Xaa7 为 Ser、 d-Thr、 alloThr 或 Thr。在某些实施方案中， 式 (II) 的环区域包括上述的 Xaa1 的代表， 其 中 Xaa3 为 Ala， 其中 Xaa3 为 Ser， 或其中 Xaa3 为 Gly。备选地或另外地， 该环区域包括上述的 Xaa1 代表， 其中 Xaa4 为 Ala， 其中 Xaa4 为 Asn， 其中 Xaa4 为 Asp， 或其中 Xaa4 为 Gly。 备选地或另外地， 该环区域包括上述的 Xaa1 代表， 其中 Xaa5 为 Ala， 其中 Xaa5 为 Thr， 或其 中 Xaa5 为 Leu。备选地或另外地， 该环区域包括上述的 Xaa1 代表， 其中 Xaa6 为 Ser， 或其 中 Xaa6 为 Ala。备选地或另外地， 该环区域包括上述的 Xaa1 代表， 其中 Xaa7 为 Thr， 或其 中 Xaa7 为 d-Thr。还设想可对该环区域实施不超过 1 个、 2 个或 3 个诸如取代、 插入、 缺失 和 / 或衍生的修饰。
本 发 明 的 环 区 域 例 子 包 括 但 不 限 于 CNTATC(SEQ ID NO ： 36) ； CATATC(SEQ ID NO ： 37) ； CDTATC(SEQ ID NO ： 38) ； CG TA TC(SEQID NO ： 39) ； CNAATC(SEQ ID NO ： 40) ； CNTSTC(SEQ ID NO ： 41) ； CNTA-dThr-C(SEQ ID NO ： 42) ； CNTA-T(OPO3H2)-C(SEQ IDNO ： 43) ； CNTASC(SEQ ID NO ： 44) ； CNTAAC(SEQ ID NO ： 45) ； CNTAVC(SEQ ID NO ： 46) ； CNTA-Hse-C(SEQ ID NO ： 47) ； CNTA-Ahb-C(SEQ ID NO ： 48) ； CNTA-Ahp-C(SEQ ID NO ： 49) ； CSNLSTC(SEQ ID NO ： 50) ； CGNLSTC(SEQ ID NO ： 51) ； CANLSTC(SEQ ID NO ： 52) ； CSALSTC(SEQ ID NO ： 53) ； CSNASTC(SEQ IDNO ： 54) ； CSNLATC(SEQ ID NO ： 55) ； 和 CSNLSAC(SEQ ID NO ： 56)。如前述指 出的， 进一步设想可对该环区域实施不超过 1 个、 2 个或 3 个诸如取代、 插入、 缺失和 / 或衍 生的修饰。 LHC 肽的环区域还可在 N- 末端包含修饰或附加的氨基酸。这样的修饰包括添加 诸如 Lys、 Ala、 Phe、 Ile、 Ser、 辛基甘氨酸、 Isocap、 Fmoc-3， 6- 二氧辛酸、 Fmoc-1- 氨基 -4， 7， 10- 三氧杂 -13- 十三胺琥珀酰亚胺酸、 乙酰基和 / 或用于溶解性、 送递、 信号转导的基 团的化合物。示例性的修饰环包括向 Xaa1 序列添加 Lys 或向 Xaa1 序列添加 Ile。例如， 该修饰的环区域可以是 KCNTATC(SEQ ID NO ： 57)。在某些实施方案中， 在环区域的 N- 末 端的添加和 / 或修饰可改变该环区域。例如， 该环区域可作下述修饰 ： 环 (2， 7)1-7h 胰淀 2 7 素、 环 ( Asp Lys)1-7h 胰淀素、 N- 异己酰 1-7h 胰淀素、 N-3， 6 二氧辛酰 1-7h 胰淀素、 L- 辛 2 7 基甘氨酸 1-7h 胰淀素、 乙酰基 ( Agy， Agy)1-7h 胰淀素 ( 其中 Agy 为烯丙基甘氨酸 )、 1 1 3 乙酰基 ( Ala)1-7h 胰淀素、 ( Thr Asp)1-7h 胰淀素、 Isocap(7Ala)5-7sCT、 乙酰基 (2Agy， 7 Agy)1-7sCT 和环 (1， 7)(1Asp7Lys)1-7sCT。 因此， 以 Isocap(7Ala)5-7sCT 为例， 某些实施方 案在环区域的 N- 末端区域包含修饰， 由此氨基酸 Xaa2 至 Xaa5 为不存在。
LHC 肽的 α 螺旋区域长度可为约 8 个至 23 个氨基酸。 在某些实施方案中， α 螺旋 区域为双亲的。在某些实施方案中， α 螺旋区域包含约 3 个至 6 个螺旋转角。在某些实施 方案中， α 螺旋区域包含 3、 4、 5 或 6 个螺旋转角。 在其它实施方案中， α 螺旋区域是相当于 约 3、 4、 5 或 6 个螺旋转角的刚性结构。一个理想化的螺旋的例子是 LLQQLQKLLQKLKQY(SEQ ID NO ： 58)。在某些实施方案中， 该 α 螺旋是双亲结构。因此， 可以选择将提供该类型结构 的所需氨基酸的特征。
业已发现， 降钙素 α 螺旋区域、 胰淀素和降钙素 α 螺旋区域的组合， 或其部分， 和 / 或一些 CGRP 元件， 在 LHC 肽的 α 螺旋区域中是需要的。如同环区域一样， 设想 α 螺旋 区域可来自任何胰淀素或降钙素及其类似物。因此， 在某些实施方案中， α 螺旋区域为至 少部分的降钙素或降钙素类似物的 α 螺旋区域。在其它实施方案中， α 螺旋区域为至少 部分的降钙素或降钙素类似物的 α 螺旋区域和至少部分的胰淀素或胰淀素类似物的 α 螺 旋。在其它另外的实施方案中， LHC 肽的 α 螺旋区域包含 CGRP 的元件。进一步设想这些 新型化合物可具有不超过 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9 或 10 个诸如取代、 插入、 缺失和 / 或衍生的
其它修饰。
在某些实施方案中， LHC 的 α 螺旋区域可包含 I 型 α 螺旋区域。I 型 α 螺旋 区域包含自 sCT 第 8 位至 sCT 第 18、 19、 20、 21、 22、 23、 24、 25、 26 或 27 位的氨基酸。此外， I 型 α 螺旋区域可包含相同或不同物种的降钙素或降钙素类似物 α 螺旋区域的多个部 分， 例如 8-21sCT 19-27sCT ； 8-21sCT 18-27sCT ； 或 8-16hCT 17-27sCT ； 或 (11Arg)8-16hCT (18Arg)17-27sCT。备选地或另外地， 上述 8-18sCT 至 8-27sCT 的 α 螺旋还可包含 (10Aib)、 (11Arg)、 (11Orn)、 (11hArg)、 (11Cit)、 (11hLys)， (11Lys(for))、 (17Aib)、 (18Arg)、 (18Orn)、 (18hArg)、 (18Cit)、 (18hLys)、 (18Lys(for))、 (18Lys(PEG5000))、 (22Leu)、 (24Pro) 或其任意组 合的一种或多种取代。
在某些实施方案中， LHC 肽的 I 型 α 螺旋区域可表示为 ： X1V LXaa10Xaa11L S Q Xaa15L Xaa17Xaa18L Q T Xaa22P Xaa24T N TX1(SEQ ID NO ： 59)， 其中
Xaa10 是 Gly 或 Aib ；
Xaa11 是 Lys、 Arg、 Orn、 hArg、 Cit、 hLys 或 Lys(for) ；
Xaa15 是 Glu 或 Phe ；
Xaa17 是 His 或 Aib ； Xaa18 是 Lys、 Arg、 Orn、 hArg、 Cit、 hLys、 Lys(for)、 Lys(PEG5000) ；
Xaa22 是 Try 或 Leu ；
Xaa24 是 Arg 或 Pro ； 或
X1 不存在或包含 1-4 个附加氨基酸。
应当记住， 马库什基团中的各成员或其组合是本发明的另一种实施方案， 且不被 视为单一的单元。这是用于陈述的速记方法， 作为举例， LHC 肽的实施方案包括 I 型 α 螺 旋区域式， 其中 Xaa18 可为 Lys、 Arg、 Orn、 hArg、 Cit、 hLys 或 Lys(for)， 且各变化都是本发 明单独的实施方案。因此， I 型 α 螺旋区域式具有其中 Xaa18 为 Lys 的实施方案。还有其 中 Xaa18 为 Arg 等的其它实施方案。还设想 α 螺旋区域可包含不超过 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9 或 10 个诸如取代、 插入、 缺失和 / 或衍生的修饰。因此， I 型 α 螺旋区域的化合物还可在 C- 末端带有缺失。在某些实施方案中， X1 的氨基酸能够形成 α 螺旋转角。
LHC 肽 I 型 α 螺 旋 区 域 的 例 子 包 括 但 不 限 于 8-18sCT、 8-21sCT、 8-24sCT、 11 18 11 18 11 18 8-27sCT、 ( Arg)8-18sCT、 ( Arg)8-18sCT、 ( Arg Arg)8-18sCT、 ( Orn Orn)8-18sCT、 11 18 11 18 11 18 ( Arg Cit)8-18sCT、 ( hArg hArg)8-18sCT、 ( Arg Orn)8-18sCT、 (11Cit18Arg)8-18sCT、 ( 11 Cit 18 Cit)8-18sCT 、( 11 hLys 18 hLys)8-18sCT 、( 10 Aib 11 Arg 17 Aib 18 Arg)8-18sCT 、 ( 11 Lys(for) 18 Lys(for))8-18sCT 、( 10 Aib 11 Lys(for) 17 Aib 18 Lys(for))8-18sCT 、 (11Arg18Lys(PEG 5000))8-18sCT、 (11Arg)8-21sCT、 (18Arg)8-21sCT、 (11Arg18Arg)8-21sCT、 (11Orn18Orn)8-21sCT、 (11Arg18Cit)8-21sCT、 (11hArg18hArg)8-21sCT、 (11Arg18Orn)8-21sCT、 ( 1 1 C i t 1 8 A r g ) 8 - 2 1 s C T 、( 1 1 C i t 1 8 C i t ) 8 - 2 1 s C T 、( 1 1 h L y s 1 8 h L y s ) 8 - 2 1 s C T 、 (10Aib11Arg17Aib18Arg)8-21sCT、 (11Lys(for)18Lys(for))8-21sCT、 (10Aib11Lys(for)17Aib1 8 Lys(for))8-21sCT、 (11Arg18Lys(PEG 5000))8-21sCT、 (11Arg)8-24sCT、 (18Arg)8-24sCT、 ( 11 Arg 18 Arg)8-24sCT 、( 11 Arg 18 Arg 22 Leu)8-24sCT 、( 11 Arg 18 Arg 24 Pro)8-24sCT 、
(11Orn18Orn)8-24sCT、 (11Arg18Cit)8-24sCT、 (11hArg18hArg)8-24sCT、 (11Arg18Orn)8-24sCT、 (11Cit18Arg)8-24sCT、 (11Cit 18Cit)8-24sCT、 (11hLys18hLys)8-24sCT、 (10Aib11Arg17Aib18Arg)8-24sCT、 (11Lys(for)18Lys(for))8-24sCT、 (10Aib11Lys(for)17Aib18Lys(for))8-24sC T、 (11Arg18Lys(PEG 5000))8-24sCT、 (11Arg)8-27sCT、 (18Arg)8-27sCT、 (11Arg18Arg)8-27sCT、 ( 11 Arg 18 Arg 22 Leu)8-27sCT 、( 11 Arg 18 Arg 24 Pro)8-27sCT 、( 11 Orn 18 Orn)8-27sCT 、 (11Arg18Cit)8-27sCT、 (11hArg18hArg)8-27sCT、 (11Arg18Orn)8-27sCT、 (11Cit18Arg)8-27sCT、 ( 11 Cit 18 Cit)8-27sCT 、( 11 hLys 18 hLys)8-27sCT 、( 10 Aib 11 Arg 17 Aib 18 Arg)8-27sCT 、 ( 11 Lys(for) 18 Lys(for))8-27sCT 、( 10 Aib 11 Lys(for) 17 Aib 18 Lys(for))8-27sCT 、 (11Arg18Lys(PEG 5000))8-27sCT、 (11Arg18Arg)8-21sCT-19-27sCT 和 (11Arg18Arg)8-21sCT-( 18 Leu)18-27sCT。
在某些实施方案中， LHC 肽的 α 螺旋区域可包含 II 型 α 螺旋区域。II 型 α 螺 旋区域包含部分的胰淀素或胰淀素类似物的 α 螺旋区域和部分的降钙素或降钙素类似物 的 α 螺旋区域。II 型 α 螺旋区域可包含自 h 胰淀素中 8 位至 h 胰淀素中 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18 或 19 位的氨基酸， 和 sCT 的 13、 14、 15、 16、 17、 18 和 19 位至 sCT 的第 18、 19、 20、 21、 22、 23、 24、 25、 26 或 27 位的氨基酸。备选地或另外地， 上述胰淀素和降钙素的 α 螺 8 9 9 10 10 12 旋区域还可包含 ( Val)、 ( Leu)、 ( Met)、 ( Gly)、 ( His)、 ( Thr)、 (13Thr)、 (13Asn)、 (13Phe)、 (13Tyr)、 (14Arg)、 (14Ala)、 (14Asp)、 (14Glu)、 (14Gln)、 (14Thr)、 (14Gly)、 (15Leu)、 (15Ser)、 (15Glu)、 (15Ala)、 (15Tyr)、 (16Asp)、 (17Ser)、 (17Phe)、 (18Arg)、 (17Aib)、 (18Arg)、 (18Orn)、 (18hArg)、 (18Cit)、 (18hLys)、 (18Lys(for))、 (18Lys(PEG5000))、 (19Phe)、 (20His)、 (21Asn)、 (22Met)、 (22Val)、 (22Phe)、 (22Leu)、 (24Pro) 或其任意组合中的一种或多种的取代。在某些实 施方案中， LHC 肽 II 型 α 螺旋区域中的氨基酸数目为至少 10 个氨基酸。在其它实施方案 中， LHC 肽 II 型 α 螺旋区域中的氨基酸数目为 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 22 或 23。在其它实施方案中， LHC 肽 II 型 α 螺旋区域中的氨基酸数目为 24 或更多。
在某些实施方案中， LHC 肽 II 型 α 螺旋区域可表示为 ： X1Xaa8Xaa9Xaa10R Xaa1 2Xaa13Xaa14Xaa15Xaa16Xaa17Xaa18Xaa19Xaa20Xaa21Xaa22P Xaa24T N T X1(SEQ ID NO ： 60)， 其中
Xaa8 是 Ala 或 Val ；
Xaa9 是 Thr、 Met 或 Leu ；
Xaa10 是 Gln、 Gly、 His ；
Xaa12 是 Leu 或 Thr ；
Xaa13 是 Ala、 Thr、 Asn、 Phe、 Tyr、 Ser 或 Thr ；
Xaa14 是 Asn、 Arg、 Ala、 Asp、 Glu、 Gln、 Thr 或 Gly ；
Xaa15 是 Phe、 Leu、 Ser、 Glu、 Ala、 Asp 或 Tyr ；
Xaa16 是 Leu 或 Asp ；
Xaa17 是 Val、 His、 Ser、 Phe 或 Aib ；
Xaa18 是 His、 Arg、 Lys、 Orn、 hArg、 Cit、 hLys、 Lys(for) 或 Lys(PEG5000) ；
Xaa19 是 Leu、 Ser 或 Phe ；
Xaa20 是 Gln 或 His ；
Xaa21 是 Thr 或 Asn ；
Xaa22 是 Tyr、 Val、 Phe、 Leu 或 Met ；
Xaa24 是 Arg 或 Pro ； 和X1 不存在或包含 1-4 个附加氨基酸。
再次说明， 马库什基团中的各成员或其组合是本发明的另一种实施方案， 且不被 视为单一的单元。还设想 II 型 α 螺旋区域可包含不超过 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9 或 10 个的 修饰， 例如本文所述的化合物的取代、 插入、 缺失和 / 或衍生的修饰。例如， 在某些实施方案 中， 该 II 型 α 螺旋区域可在 C- 末端带有缺失， 导致第 27、 26、 25、 24 或 22 位的缺失。 然而， 在其它实施方案中， 这些缺失并不除去第 19、 20、 21 或 22 位的氨基酸。
LHC 肽 II 型 α 螺 旋 区 域 的 例 子 包 括 但 不 限 于 ： (8Val 9Leu10Gly)11-15h 胰 淀 素 16-27sCT、 (8Val 9Leu10Gly)11-15h 胰 淀 素 (18Arg)16-27sCT、 8-12h 胰 淀 素 18 ( Arg)13-27sCT、 8-18h 胰 淀 素 19-23sCT、 8-18H 胰 淀 素 19-27sCT、 (15Glu18Arg)8-18h 胰 淀 素 19-24sCT、 (14Arg 15Ser)8-18h 胰 淀 素 19-22sCT、 (13Ala 14Ala15Ala)8-18h 胰 淀 素 19-27sCT、 (13Ala 14Asp15Ala)8-18h 胰 淀 素 19-22sCT、 (13Ala14Asp)8-18h 胰 淀 素 19-23sCT、 (13Ala 14Asp)8-18h 胰 淀 素 19-27sCT、 (13Ala14Ala)8-18h 胰 淀 素 19-22sCT、 (13Ala 14Glu)8-18h 胰 淀 素 19-22sCT、 (13Thr 14Asp15Tyr)8-18h 胰 淀 素 19-22sCT、 (13Ala 14 Gln)8-18h 胰淀素 19-22sCT、 (13Asn14Glu15Tyr)8-18h 胰淀素 19-27sCT、 (13Phe14Asp)8-18h 胰 淀 素 19-27sCT、 (13Ala14Asp)8-18h 胰 淀 素 (15Glu18Arg)8-18h 胰 淀 素 19-24sCT、 (19Phe 22 Phe)19-27sCT、 (13Ala14Asp)8-18h 胰淀素 (19Phe20His 22Phe)19-27sCT、 (13Ala14Asp)8-18h 胰淀素 (19Phe 22Phe)19-27sCT、 (9Thr 10His)8-18h 胰淀素 19-22sCT、 (9Thr10His14Gly15Leu 17 Ser18Arg)8-19h 胰 淀 素 20-23sCT、 8-18h 胰 淀 素 (21Asn 22Phe 23Val)19-23sCT、 8-18h 胰 22 22 9 12 13 14 15 淀 素 ( Met)19-27sCT、 8-18h 胰 淀 素 ( Val)19-27sCT、 ( Met Thr Tyr Thr Glu16Asp 17 Phe)8-17h 胰淀素 (18Arg)18-20sCT)。在其它实施方案中， 新型化合物包括上述 示例 性化合物的变化， 其中 α 螺旋终止于 sCT 第 22、 23、 24、 25、 26 或 27 位。换言之， 化合物 8-18h 胰淀素 19-24sCT 也被确切描述为该化合物就是于第 24 位截短的上述 8-18h 胰淀 素 19-27sCT。作为另一实施例， 由于上述语言适用于 (13Ala 14Asp 15Ala)8-18h 胰淀素 19-22， 所以也具体描述了化合物 (13Ala 14Asp 15Ala)8-18h 胰淀素 19-23。
在某些实施方案中， LHC 肽的 C- 末端尾部包含 h 胰淀素自第 27、 28、 29、 30、 31、 32 或 33 位至第 36 或 37 位的氨基酸。在其它实施方案中， LHC 肽的 C- 末端尾部包含 sCT 自 第 27 或 28 位至第 32 位的氨基酸 ； 然而， 当环区域来自降钙素或降钙素类似物， 且 α 螺旋 区域来自降钙素或降钙素类似物时， C- 末端尾部的最后位置不是 Pro、 Hyp、 Hse 或 Hse 的衍 27 生物。备选地或另外地， 胰淀素和降钙素的上述 α 螺旋还可包含 ( Tyr)h 胰淀素、 (29Arg) h 胰淀素、 (32Val)h 胰淀素、 (32Thr)h 胰淀素、 (34Glu)h 胰淀素、 (35Lys)h 胰淀素、 (36Phe)h 胰 淀素、 (36Ala)h 胰淀素、 (37Phe)h 胰淀素、 (30Asn)sCT、 (32Tyr)sCT 或其任意组合中的一种或 多种的取代。
在 某 些 实 施 方 案 中， LHC 肽 的 C- 末 端 尾 部 可 表 示 为 Xaa28Xaa29Xaa30Xaa31Xaa32Xaa33G Xaa35Xaa36Xaa37Xaa38(SEQ IDNO ： 61)， 其中
Xaa28 是 Lys、 Tyr 或不存在 ；
Xaa29 是 Ser、 Pro 或不存在 ；
Xaa30 是 Ser、 Pro、 Arg 或不存在 ；
Xaa31 是 Thr 或不存在 ；
Xaa32 是 Asn 或不存在 ；Xaa33 是 Val、 Thr 或不存在 ；
Xaa35 是 Ser、 Glu
Xaa36 是 Asn、 Lys 或 Gly ；
Xaa37 是 Thr、 Phe 或 Ala ；
Xaa38 是 Tyr、 Phe、 Pro 或不存在 ；
附带条件是， 当 LHC 激动剂的环区域来自降钙素或降钙素类似物， 且 α 螺旋区域 来自降钙素或降钙素类似物时， C- 末端尾部的最后位置不是 Pro、 Hyp、 Hse 或 Hse 的衍生 物。
再次说明， 马库什基团中的各成员或其组合是本发明的另一种实施方案， 且不被 视为单一的单元。还设想 C- 末端尾部可包含不超过 1、 2 或 3 个的修饰， 例如本文所述的化 合物的取代、 插入、 缺失和 / 或衍生的修饰。
LHC 激动剂的 C- 末端尾部的例子包括但不限于 ： 27-37r 胰淀素、 (27Tyr 29Arg 32 Thr)27-37r 胰 淀 素、 (29Arg 32Thr)28-37r 胰 淀 素、 30-37h 胰 淀 素、 (32Thr)30-37h 胰 淀 素、 (35Lys 36Ala 37Phe)30-37h 胰 淀 素、 30-36h 胰 淀 素、 (32Val)30-36h 胰 淀 素、 (34Glu 36 Phe)30-36h 胰 淀 素、 31-37h 胰 淀 素， 31-36h 胰 淀 素， 33-36h 胰 淀 素， 33-37h 胰 淀 素、 30 32 28-32sCT、 ( Asn Tyr)28-32sCT 和 27-32sCT。在其它实施方案中， 该 C- 末端尾部包含氨 基酸序列 KSNFVPTN(SEQ ID NO ： 62) 或 SNFVPTNV(SEQ ID NO ： 63)。
进一步设想， 如前所述， 可对本发明的 C- 末端尾部实施不超过 1、 2 或 3 个诸如取 代、 插入、 缺失和 / 或衍生的修饰。LHC 肽的 C- 末端尾部还可在 C- 末端包含修饰或附加的 氨基酸。这样的修饰包括添加诸如 Lys、 最多 4 个 Lys、 L- 辛基甘氨酸、 4ABU(4- 氨基丁酸 )、 9Anc(9- 氨基壬酸 ) 和 / 或用于溶解性、 稳定性或送递的基团的化合物。例子包括但不限 于： 33-37h 胰淀素 L- 辛基甘氨酸、 33-37h 胰淀素 4ABU 和 33-37h 胰淀素 9Anc。
在总的方面， 用于本发明的 LHC 肽包含
(a) 如本文所述的 LHC 激动剂环区域中的任一个 ；
(b) 如本文所述的 LHC 激动剂 α 螺旋区域中的任一个 ； 和
(c) 任何如本文所述的 LHC 激动剂 C- 末端尾部， 附带条件是， 当环区域来自降钙素 或降钙素类似物且 α 螺旋区域来自降钙素或降钙素类似物时， C- 末端尾部的最后位置不 是 Pro、 Hyp、 Hse 或 Hse 的衍生物。
在另一个总的方面， 用于本发明的 LHC 肽包含
(a) 在 N- 末端含有式 (II)Xaa1 或带有修饰的 Xaa1 的环区域 ；
(b) 含有 I 型或 II 型 α 螺旋区域的 α 螺旋区域 ；
(c)C- 末端尾部由 SEQ ID NO ： 61 所示， 附带条件是， 当环区域来自降钙素或降钙 素类似物且 α 螺旋区域来自降钙素或降钙素类似物时， C- 末端尾部的最后位置不是 Pro、 Hyp、 Hse 或 Hse 的衍生物。C- 末端可包含其它修饰。
又 一 方 面，用 于 本 发 明 的 LHC 肽 包 含 式 (III) 的 氨 基 酸 序 列 ： Xaa1X Xaa3Xaa4Xaa5Xaa6Y Xaa8Xaa9Xaa10Xaa11Xaa12Xaa13Xaa14Xaa15Xaa16Xaa17Xaa18Xaa19 Xaa20Xaa21Xaa22Xaa23Xaa24Xaa25Xaa26Xaa27Xaa28Xaa29Xaa30Xaa31Xaa32(SEQ IDNO ： 64)， 其中
Xaa1 是 A、 C、 hC、 D、 E、 F、 I、 L、 K、 hK、 R、 hR、 S、 Hse、 T、 G、 Q、 N、 M、 Y、 W、 P、 Hyp、 H、 V或不存在 ；
Xaa3 是 A、 D、 E、 N、 Q、 G、 V、 R、 K、 hK、 hR、 H、 I、 L、 M 或不存在 ；
Xaa4 是 A、 I、 L、 S、 Hse、 T、 V、 M 或不存在 ；
Xaa5 是 A、 S、 T、 Hse、 Y、 V、 I、 L或M；
Xaa6 是 T、 A、 S、 Hse、 Y、 V、 I、 L或M；
Xaa8 是 A、 V、 I、 L、 F或M；
Xaa9 是 L、 T、 S、 Hse、 V、 I或M；
Xaa10 是 G、 H、 Q、 K、 R、 N、 hK 或 hR ；
Xaa11 是 K、 R、 Q、 N、 hK、 hR 或 H ；
Xaa12 是 L、 I、 V、 F、 M、 W或Y；
Xaa13 是 A、 F、 Y、 N、 Q、 S、 Hse 或 T ；
Xaa14 是 A、 D、 E、 G、 N、 K、 Q、 R、 H、 hR 或 hK ；
Xaa15 是 A、 D、 E、 F、 L、 S、 Y、 I、 V或M；
Xaa16 是 L、 F、 M、 V、 Y或I；
Xaa17 是 H、 Q、 N、 S、 Hse、 T或V；
Xaa18 是 K、 hK、 R、 hR、 H、 u(Cit) 或 n(Orn) ；
Xaa19 是 F、 L、 S、 Hse、 V、 I、 T 或不存在 ；
Xaa20 是 H、 R、 K、 hR、 hK、 N、 Q 或不存在 ；
Xaa21 是 T、 S、 Hse、 V、 I、 L、 Q、 N 或不存在 ；
Xaa22 是 F、 L、 M、 V、 Y或I；
Xaa23 是 P 或 Hyp ；
Xaa24 是 P、 Hyp、 R、 K、 hR、 hK 或 H ；
Xaa25 是 T、 S、 Hse、 V、 I、 L、 F或Y；
Xaa26 是 N、 Q、 D或E；
Xaa27 是 T、 V、 S、 F、 I或L；
Xaa28 是 G 或 A ；
Xaa29 是 S、 Hse、 T、 V、 I、 L或Y；
Xaa30 是 E、 G、 K、 N、 D、 R、 hR、 hK、 H或Q；
Xaa31 是 A、 T、 S、 Hse、 V、 I、 L、 F或Y； 和
Xaa32 是 F、 P、 Y、 Hse、 S、 T 或 Hyp ；
其中 X 和 Y 能够成键， 且为独立选择的具有侧链的残基， 所述侧链彼此化学结合， 以形成分子内连接， 例如二硫键 ； 酰胺键 ； 可形成环内酰胺的烷基酸和烷基胺 ； 可缩合和还 原以形成烷基胺或亚胺桥的烷基醛或烷基卤化物和烷基胺 ； 或可连接以形成烷基、 链烯基、 炔基、 醚或硫醚键的侧链。烷基链可包括带有约 1 个至约 6 个碳原子的低级烷基基团。在 某些实施方案中， 分子内连接可以是二硫键、 酰胺键、 亚胺键、 胺键、 烷基键和烯键。在某些 实施方案中， X 和 Y 独立选自 Ser、 Asp、 Glu、 Lys、 Orn 或 Cys。在某些实施方案中， X和Y是 Cys 和 Cys。在其它实施方案中， X 和 Y 是 Ser 和 Ser。在其它另外的实施方案中， X和Y是 Asp 和 Lys 或 Lys 和 Asp。
又一方面， 用于本发明的 LHC 肽包含式 (IV) 的氨基酸序列 ： Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Xaa6Xaa7Xaa8Xaa9Xaa10Xaa11Xaa12Xaa13Xaa14Xaa15Xaa16Xaa17Xaa18Xaa19Xaa20Xaa2 1Xaa22PXaa24T N Xaa27G S Xaa30Xaa31Xaa32(SEQ ID NO ： 65)， 其中
Xaa1 是 A、 C、 D、 F、 I、 K、 S、 T 或不存在 ；
Xaa2 是 C、 D、 S 或不存在 ；
Xaa3 是 A、 D、 N 或不存在 ；
Xaa4 是 A、 L、 T 或不存在 ；
Xaa5 是 A 或 S ；
Xaa6 是 T、 A、 S或V；
Xaa7 是 C、 K或A；
Xaa8 是 A、 V、 L或M；
Xaa9 是 L 或 T ；
Xaa10 是 G、 H或Q；
Xaa11 是 K、 R、 Q 或 hArg ；
Xaa12 是 L、 W或Y；
Xaa13 是 A、 F、 N、 Q、 S或T； Xaa14 是 A、 D、 E、 G、 N、 K、 Q或R；
Xaa15 是 A、 D、 E、 F、 L、 S或Y；
Xaa16 是 L 或 F ；
Xaa17 是 H、 Q、 S或V；
Xaa18 是 K、 R、 hArg、 u(Cit) 或 n(Orn) ；
Xaa19 是 F、 L、 S 或不存在 ；
Xaa20 是 H、 Q 或不存在 ；
Xaa21 是 T、 N 或不存在 ；
Xaa22 是 F、 L、 M、 V或Y；
Xaa24 是 P 或 R ；
Xaa27 是 T 或 V ；
Xaa30 是 E、 G、 K或N；
Xaa31 是 A 或 T ； 和
Xaa32 是 F、 P 或 Y。
又 一 方 面，用 于 本 发 明 的 LHC 肽 包 含 式 (V) 的 氨 基 酸 序 列 ： Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5T Xaa7Xaa8Xaa9Xaa10Xaa11L Xaa13Xaa14Xaa15L Xaa17Xaa18Xaa19Xaa20Xaa21Xaa22P Xaa24T N Xaa27GS Xaa30Xaa31Xaa32， (SEQ ID NO ： 66)， 其中
Xaa1 是 A、 C、 F、 I、 K、 S 或不存在 ；
Xaa2 是 C、 D或S；
Xaa3 是 A、 D或N；
Xaa4 是 A、 L或T； Xaa5 是 A 或 S ； Xaa7 是 C 或 K ；Xaa8 是 A 或 V ；
Xaa9 是 L 或 T ；
Xaa10 是 G、 H或Q；
Xaa11 是 K、 R 或 hArg ；
Xaa13 是 A、 F、 N、 S或T；
Xaa14 是 A、 D、 E、 G、 N、 Q或R；
Xaa15 是 A、 E、 F、 L、 S或Y；
Xaa17 是 H、 S或V；
Xaa18 是 K、 R、 hArg、 u(Cit) 或 n(Orn) ；
Xaa19 是 F、 L或S；
Xaa20 是 H 或 Q ；
Xaa21 是 T 或 N ；
Xaa22 是 F、 L、 M、 V或Y；
Xaa24 是 P 或 R ；
Xaa27 是 T 或 V ；
Xaa30 是 E、 G、 K或N；
Xaa31 是 A 或 T ； 和
Xaa32 是 F、 P 或 Y。
在总的方面， 式 (III)、 (IV) 或 (V) 的序列还包含 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12 或更多个取代、 插入、 缺失、 延长和 / 或衍生的修饰。在某些实施方案中， 式 (III)、 (IV) 或 (V) 的序列在第 22 和 23 位氨基酸之间包含插入的 Val。在其它实施方案中， 式 (III)、 (IV) 或 (V) 的序列在第 22 和 23 位之间包含插入的 Gln。在其它另外的实施方案中， 式 (III)、 (IV) 或 (V) 的序列在第 22 和 23 位之间包含 Gln-Thr-Tyr 序列。在其它的另外实施方案 中， 式 (III)、 (IV) 或 (V) 的序列在第 22 和 23 位之间包含 Leu-Gln-Thr-Tyr 序列 (SEQ ID NO ： 67)。在另一个总的方面， 式 (III)、 (IV) 或 (V) 的修饰可以在 N- 末端。在某些实施方 案中， 式 (III)、 (IV) 或 (V) 的 N- 末端部分具有添加的辛基甘氨酸。在其它实施方案中， 式 (III)、 (IV) 或 (V) 的 N- 末端部分具有添加的 isocap。
又一方面， 用于本发明的 LHC 肽包含式 (VI) 的氨基酸序列 ： Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xa a5Xaa6Xaa7Xaa8Xaa9Xaa10Xaa11Xaa12Xaa13Xaa14Xaa15Xaa16Xaa17Xaa18Xaa19Xaa20Xaa2 1Xaa22PXaa24T N Xaa27G S Xaa30Xaa31Xaa32(SEQ ID NO ： 68)， 其中
Xaa1 是 A、 C、 D、 F、 K、 T 或不存在 ；
Xaa2 是 A、 C、 D、 S 或不存在 ；
Xaa3 是 A、 D、 N 或不存在 ；
Xaa4 是 A、 L、 T 或不存在 ；
Xaa5 是 A 或 S ；
Xaa6 是 A、 S、 T或V；
Xaa7 是 A、 C或K；
Xaa8 是 A、 L、 M或V；
Xaa9 是 L 或 T ；Xaa10 是 G、 H或Q；
Xaa11 是 K、 Q或R；
Xaa12 是 L、 W或Y；
Xaa13 是 A、 N、 Q、 S或T；
Xaa14 是 A、 D、 E、 G、 K、 N、 Q或R；
Xaa15 是 A、 D、 E、 F、 L、 S或Y；
Xaa16 是 F 或 L ；
Xaa17 是 H、 Q、 S或V；
Xaa18 是 K 或 R ；
Xaa19 是 F、 L、 S 或不存在 ；
Xaa20 是 H、 K、 Q 或不存在 ；
Xaa21 是 Q、 T 或不存在 ；
Xaa22 是 F、 L或Y；
Xaa24 是 P 或 R ；
Xaa27 是 T 或 V ；
Xaa30 是 E、 K或N；
Xaa31 是 A 或 T ； 和
Xaa32 是 F、 Y 或不存在。
在总的方面， 式 (VI) 的序列还包含 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12 或更多个取代、 插入、 缺失、 延长和 / 或衍生的修饰。在某些实施方案中， 式 (III)、 (IV)、 (V) 或 (VI) 的序 列在第 24 位包含缺失。
又一方面， 用于本发明的 LHC 肽包含氨基酸序列， 所述氨基酸序列包含 ：
a) 包 含 式 (II)Xaa1 的 环 区 域 ； 其 中 Xaa1 包 含 氨 基 序 列 X Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Xaa6Xaa7Y(SEQ ID NO ： 69)， 其中，
Xaa2 是任意氨基酸或不存在 ；
Xaa3 是 Ala、 Gly、 Ser、 Asp 或不存在 ；
Xaa4 是 Asn、 Ala、 Asp、 Gly 或不存在 ；
Xaa5 是 Ala、 Leu、 Thr 或 Ser ；
Xaa6 是 Ala、 Ser 或 Thr ； 和
Xaa7 是 Ala、 Ser、 Val、 Hse、 (S)-2- 氨基 -3- 羟基 - 甲基丁酸 (Ahb)、 (2S， 3R)-2- 氨 基 -3 羟基 - 甲基戊酸 (Ahp)、 d-Thr、 Thr 或其衍生物 ；
X 和 Y 是能够成键的氨基酸， 且为独立选择的具有侧链的残基， 所述侧链可彼此化 学结合以形成分子内连接， 诸如二硫键 ； 酰胺键 ； 由烷基酸和烷基胺形成的环内酰胺 ； 通过 缩合和还原烷基醛或烷基卤化物和烷基胺而形成的烷基胺或亚胺桥 ； 和通过侧链的连接形 成的烷基、 链烯基、 炔基、 醚或硫醚键 ；
b) 包含序列 X1V L Xaa10Xaa11L S Q Xaa15L Xaa17Xaa18L QT Xaa22P Xaa24T N T X1(SEQ ID NO ： 70) 的 I 型 α 螺旋区域， 其中
Xaa10 是 Gly 或 Aib ；
Xaa11 是 Lys、 Arg、 Orn、 hArg、 Cit、 hLys 或 Lys(for) ；Xaa15 是 Glu 或 Phe ；
Xaa17 是 His 或 Aib ；
Xaa18 是 Lys、 Arg、 Orn、 hArg、 Cit、 hLys、 Lys(for)、 Lys(PEG5000) ；
Xaa22 是 Try 或 Leu ；
Xaa24 是 Arg 或 Pro ； 和
X1 不存在或包含 1-4 个附加的氨基酸 ； 和
c) 包含序列 Xaa28Xaa29Xaa30Xaa31Xaa32Xaa33G Xaa35Xaa36Xaa37Xaa38(SEQ ID NO ： 71) 的 C- 末端尾部， 其中
Xaa28 是 Lys、 Tyr 或不存在 ；
Xaa29 是 Ser、 Pro 或不存在 ；
Xaa30 是 Ser、 Pro、 Arg 或不存在 ；
Xaa31 是 Thr 或不存在 ；
Xaa32 是 Asn 或不存在 ；
Xaa33 是 Val、 Thr 或不存在 ；
Xaa35 是 Ser、 Glu
Xaa36 是 Asn、 Lys 或 Gly ；
Xaa37 是 Thr、 Phe 或 Ala ；
Xaa38 是 Tyr、 Phe、 Pro 或不存在 ；
附带条件是， 当环区域来自降钙素或降钙素类似物且 α 螺旋区域来自降钙素或 降钙素类似物时， C- 末端尾部的最后位置不是 Pro、 Hyp、 Hse 或 Hse 的衍生物。
又一方面， 用于本发明的 LHC 肽包含氨基酸序列， 所述氨基酸序列包含 ：
a) 包含 Xaa1 的环区域 ；
a) 包含式 (II)Xaa1 的环区域 ； 其中 Xaa1 包含氨基序列 X Xaa2
Xaa3Xaa4Xaa5Xaa6Xaa7Y(SEQ ID NO ： 72)， 其中，
Xaa2 是任意氨基酸或不存在 ；
Xaa3 是 Ala、 Gly、 Ser、 Asp 或不存在 ；
Xaa4 是 Asn、 Ala、 Asp、 Gly 或不存在 ；
Xaa5 是 Ala、 Leu、 Thr 或 Ser ；
Xaa6 是 Ala、 Ser 或 Thr ； 和
Xaa7 是 Ala、 Ser、 Val、 Hse、 Ahb、 Ahp、 d-Thr、 Thr 或其衍生物 ；
X 和 Y 是能够成键的氨基酸， 且为独立选择的具有侧链的残基， 所述侧链可彼此化 学结合以形成分子内连接， 例如二硫键 ； 酰胺键 ； 由烷基酸和烷基胺形成的环内酰胺 ； 通过 缩合和还原烷基醛或烷基卤化物和烷基胺而形成的烷基胺或亚胺桥 ； 和通过侧链的连接形 成的烷基、 链烯基、 炔基、 醚或硫醚键 ；
b) 含有序列 X1Xaa8Xaa9Xaa10R Xaa12Xaa13Xaa14Xaa15Xaa16Xaa17Xaa18Xaa19Xa a20Xaa21Xaa22P Xaa24T N T X1(SEQ ID NO ： 73) 的 II 型 α 螺旋区域， 其中
Xaa8 是 Ala 或 Val ；
Xaa9 是 Thr、 Met 或 Leu ；
Xaa10 是 Gln、 Gly、 His ；Xaa12 是 Leu 或 Thr ； Xaa13 是 Ala、 Thr、 Asn、 Phe、 Tyr、 Ser 或 Thr ； Xaa14 是 Asn、 Arg、 Ala、 Asp、 Glu、 Gln、 Thr 或 Gly ； Xaa15 是 Phe、 Leu、 Ser、 Glu、 Ala、 Asp 或 Tyr ； Xaa16 是 Leu 或 Asp ； Xaa17 是 Val、 His、 Ser、 Phe 或 Aib ； Xaa18 是 His、 Arg、 Lys、 Orn、 hArg、 Cit、 hLys、 Lys(for) 或 Lys(PEG5000) ； Xaa19 是 Leu、 Ser 或 Phe ； Xaa20 是 Gln 或 His ； Xaa21 是 Thr 或 Asn ； Xaa22 是 Tyr、 Val、 Phe、 Leu 或 Met ； Xaa24 是 Arg 或 Pro ； 和 X1 不存在或包含 1-4 个附加的氨基酸 ； 和 c) 含有序列 Xaa28Xaa29Xaa30Xaa31Xaa32Xaa33G Xaa35 Xaa36Xaa37Xaa38(SEQ ID NO ： 74) 的 C- 末端尾部， 其中 Xaa28 是 Lys、 Tyr 或不存在 ； Xaa29 是 Ser、 Pro 或不存在 ； Xaa30 是 Ser、 Pro、 Arg 或不存在 ； Xaa31 是 Thr 或不存在 ； Xaa32 是 Asn 或不存在 ； Xaa33 是 Val、 Thr 或不存在 ； Xaa35 是 Ser 或 Glu Xaa36 是 Asn、 Lys 或 Gly ； Xaa37 是 Thr、 Phe 或 Ala ； Xaa38 是 Tyr、 Phe、 Pro 或不存在。 再一方面， 用于本发明的 LHC 肽包括 ： (SEQ ID NO ： 75)KCNTATCVLGKLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO ： 76)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLPRTNTGSNTY (SEQ ID NO ： 77)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPPTNTGSNTY (SEQ ID NO ： 78)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNVGSNTY (SEQ ID NO ： 79)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLPPTNVGSNTY (SEQ ID NO ： 80)KCNTATCVLGRLANFLHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO ： 81)ACNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO ： 82)KCNAATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO ： 83)KCNTAACVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO ： 84)CANLSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO ： 85) 异己酰基 -STAVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO ： 86)CSNASTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO ： 87)CSNLATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO ： 88)CSNLSACVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO ： 89)KCNTATCVLGRLSQELHKLQTYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO ： 90)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSGTP
(SEQ ID NO ： 91)CSALSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO ： 92)Ac-(Agy)SNLST(Agy)VLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO ： 92)Ac-K(Agy)NTAT(Agy)VLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO ： 93) 异己酰基 -STAVL(Aib)RLSQELRLQTYPRTNTGSGTP
(SEQ ID NO ： 94) 异己酰基 -STAVLG[K(For)]LSQELH[K(For)]LQTYPRTNTGSGTP
(SEQ ID NO ： 95) 异 己 酰 基 -STAVL(Aib)[K(For)]LSQEL(Aib)[K(For)] LQTYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO ： 96) 异 己 酰 基 -STAVL(Aib)[K(For)]LSQEL(Aib)[K(For)] LQTYPRTNVGSNTY
(SEQ ID NO ： 97)KCNTATCLLQQLQKLLQKLKQYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO ： 98)KCNTASCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID IDNO ： 99)KCNTAVCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 100)KCNTATCVLGRLSQELHRYPRTNTGSNTY NO ： 101)KCNTATCVLGK(For)LSQELHK(For)LQTYPRTNTGSNTY NO ： 102)KCNTA(d-Thr)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 103)KCNTA(dAh)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 104)Ac-ACNTATCVLGRLSQELHK(PEG5000)LQTYPRTNTGSNTY NO ： 105)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLQTYPRTNTGSNTY NO ： 106)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLLQTYPRTNTGSNTY NO ： 107)KCNTATCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSNTY NO ： 108)KCNTSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 109)KCNTATCATQRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 110)KCNTATCATQRLSQELHRLQTYPRTNVGSNTY NO ： 111)KCNTSTCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSNTY NO ： 112)KCNTA(Hse)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 113)KCNTA(Ahb)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 114)KCNTA(Ahp)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 115)KCNTAT(OPO3H2)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 116)KCNTATCVLG(Orn)LSQELH(Orn)LQTYPRTNTGSNTY NO ： 117)KCNTATCVLG(Cit)LSQELH(Cit)LQTYPRTNTGSNTY NO ： 118)KCNTATCVLG(homoK)LSQELH(homoK)LQTYPRTNTGSNTY NO ： 119)L- 辛基甘氨酸 KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO ： 120)N-3， 6- 二氧杂辛酰基 -CNTATCVLGRLSQELHRLQTVPRTNTGSNTY (SEQ ID NO ： 121)KCNTATCMLGRYTQDFHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO ： 122)DSNLSTKVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY43101939022 A CN 101939025
说ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID明书39/58 页(SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQ (SEQNO ： 123)KDNTATKVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 124)CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 125)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(9Anc) NO ： 126)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(L- 辛基甘氨酸 ) NO ： 127)N 异己酰基 -KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 128)KCNTATCVLG(homoR)LSQELH(homoR)LQTYPRTNTGSNTY NO ： 129)FCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 130)KCNTATCVLGRLSQELH(Cit)LQTYPRTNTGSNTY NO ： 131)KCNTATCVLGRLSQELH(Orn)LQTYPRTNTGSNTY NO ： 132)ICNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 133)1- 辛基甘氨酸 -CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 134) 异己酰基 -CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 135)KCNTATCVLG(Cit)LSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 36)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(4ABU) NO ： 137) 异己酰基 -KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(4ABU) NO ： 138)KCNTSTCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSEAF NO ： 139)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPTNVGSEAF NO ： 140)KCNTATCVLGRLSRSLH RLQTYPRTNTGSNTY NO ： 141)KCNTATCVTHRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 142)KCNTATCVLGRLADFLHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 143)CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNT NO ： 144)KCNTATCVLGRLSQELHRLQNFVPRTNTGSNTY NO ： 145)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSETF NO ： 146)ACDTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 147)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSKAF NO ： 148)KCDTATCVTHRLAGLLSRSQTYPRTNTGSNTY NO ： 149)KCNTATCVLGRLADALHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 150)KCNTATCVLGRLAAFLHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 151)SCNTATCVLGRLADFLHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 152)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTMPRTNTGSNTY NO ： 153)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTVPRTNTGSNTY NO ： 154)KCNTATCVLGRLNEYLHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 155)SCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 156)KCNTATCVLGRLTEFLHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 157)KCNTATCVLGRLAEFLHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 158)KCNTATCVLGRLTDYLHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 159)KCNTATCVLGRLAQFLHRLQTYPRTNTGSNTY NO ： 160)KCNTATCVLGRLADFLHRFQTFPRTNTGSNTY NO ： 161)KCNTATCVLGRLADFLHRFHTFPRTNTGSNTY(SEQ ID NO ： 162)KCNTATCVLGRLADFLHRFQTFPRTNTGSGTP
(SEQ ID NO ： 163)CNTATCVLGRLADFLHRLQTYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO ： 164)KCDTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO ： 165)KCNTATCVLGRLFDFLHRLQTYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO ： 166)KCNTATCVLGRLAAALHRLQTYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO ： 167)TCDTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO ： 168)C SNLSTCATQRLANELVRLQTYPRTNVG SNTY
(SEQ ID NO ： 169)KCNTATCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSNTY
(SEQ ID NO ： 170)CSNLSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(SEQ ID NO ： 171)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
又一方面， 用于本发明的 LHC 肽包括 SEQ ID NO ： 75 至 171 的生物活性片段。生 物活性片段可包含 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、 13、 14、 15 或更多个氨基酸的缺失。在某 些实施方案中， SEQID NO ： 75 至 171 的氨基酸序列包含至少 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10 或更多 个诸如取代、 插入、 缺失和 / 或衍生的修饰。在其它实施方案中， SEQ ID NO ： 75 至 171 的氨 基酸序列具有不超过 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9 或 10 个诸如取代、 插入、 缺失和 / 或衍生的修饰。 在本发明的又一方面， 本发明的化合物包括与 SEQ ID NO ： 75 至 171 中的任一个氨基酸序列 具有至少 75％、 80％、 85％、 90％、 95％或 97％序列同一性的那些氨基酸序列。同一性百分 的 模块 (Invitrogen ； Carlsbad CA) 分析测定。需要说数通过用 Vector明的是， 描述各同一性百分率或生物活性片段或修饰均适用于每一 SEQ ID NO。例如， 所描 述的各实施方案、 片段、 修饰或同一性百分率均适用于 SEQID NO ： 75、 76、 77、 78、 44 等， 或任 何一组 SEQ ID NOs。
通常， 胰淀素激动剂或胰淀素激动剂类似物被视为指通过直接或间接与一个或多 个受体相互作用或结合来模拟胰淀素的作用的化合物。因此， 本发明的化合物可作为本文 所公开的降钙素、 胰淀素、 CGRP 或这三种的任意组合的至少一种生物学作用的激动剂起作 用， 或者可与胰淀素、 降钙素或 CGRP 的受体的至少一种结合。相反， 胰淀素拮抗剂通过直接 或间接地与一种或多种受体相互作用或结合， 抑制胰淀素的作用。这样的相互作用或结合 事件包括影响生长素释放肽水平的那些。
设想在本发明中使用的胰淀素拮抗剂包括 AC66(sCT[8-32])(SEQ ID NO ： 172) 和诸如 AC 187(Ac 30Asn， 32Tyr-sCT[8-32])(SEQ IDNO ： 173) 的 25 氨基酸鲑鱼降钙素肽 片段的衍生物， 开发为 CGRP 受体的选择性胰淀素受体拮抗剂。其它有用的拮抗剂包括第 5,625,032 和 5,580,953 号美国专利所述的拮抗剂， 这些专利通过引用结合到本文中。这 样的拮抗剂化合物包括含有式 (VII) ： X-R 1-Thr-Gln-R2-Leu-Ala-Asn-R3-Leu-Val-ArgLeu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-R4-Asn-Thr-Tyr-NH2(SEQ ID NO ： 174) 的那 些，
其中 R1 是 Ala 或某种键 ； R2 是 Arg、 Gln、 Lys、 Asn 或 Leu ； R3 是 Gln、 Glu、 Asn、 Asp 或 Phe ； R4 是 Ala 或 Ser ； 和X 是氢或乙酰基。
胰淀素拮抗剂可以是 N- 末端乙酰化的或非乙酰化的， 且包括该分子的酸形式以 及酰胺形式。 胰淀素拮抗剂的实例包括但不限于乙酰基 -AlaThr Gln Arg Leu Ala Asn Glu Leu Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro ArgThr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr(SEQ ID NO ： 175)、 Ala Thr Gln GlnLeu Ala Asn Gln Leu Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val GlySer Asn Thr Tyr(SEQ ID NO ： 176)、 Ala Thr Gln Leu Leu Ala Asn GlnLeu Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr(SEQ ID NO ： 177)、 Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Gln Leu Val Arg LeuGln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr(SEQ IDNO ： 178)、 Ala Thr Gln Leu Leu Ala Asn Glu Leu Val Arg Leu Gln ThrTyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr(SEQ ID NO ： 179)、 Ala ThrGln Gln Leu Ala Asn Glu Leu Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr AsnVal Gly Ser Asn Thr Tyr(SEQ ID NO ： 180)。
测试化合物的胰淀素活性的方法是本领域已知的。测试胰淀素激动剂或拮抗 剂的示例性筛选方法和测定描述于本文实施例中， 特别是实施例 4， 以及第 5,264,372 和 5,686,411 号美国专利， 所述专利通过引用结合到本文中。
通过进行各种筛选测定可以证实并定量作为胰淀素激动剂和 / 或类似物的活性， 所述测定包括伏隔核受体结合测定， 之后进行比目鱼肌测定、 胃排空测定， 或通过诱导哺乳 动物低血钙症或降低哺乳动物餐后高血糖的能力。
受体结合测定是一种测量化合物与膜结合的胰淀素受体特异性结合的能力的竞 争性测定， 描述于美国专利号 5,264,372 和 5,686,411， 这些专利的公开文本通过引用结合 到本文中。该测定中所使用的膜制剂的优选来源是基底前脑， 其包含来自伏隔核及其周围 区域的膜。所测定的化合物与 125I Bolton Hunter 大鼠胰淀素竞争结合这些受体制剂。 其中结合量 (B) 根据配体浓度对数作图的竞争曲线借助计算机利用对 4- 参数逻辑方程 的非线性回归分析 (INPLOT program ； GraphPadSoftware， San Diego， Calif.) 或 DeLean 等人的 ALLFIT 程序 (ALLFIT， 版本 2.7(NIH， Bethesda， Md.20892)) 进行分析。Munson 和 Rodbard(1980)Anal.Biochem.107 ： 220-239。
可 以 使 用 前 述 方 法 (Leighton 等 人 (1988)Nature 335 ： 632-635 ； Cooper 等 人 (1988)Proc.Natl.Acad. Sci.USA 85 ： 7763-7766) 进行比目鱼肌中的胰淀素激动剂 / 类似 物的生物活性测定， 其中可以通过测量对胰岛素 - 刺激的糖原合成的抑制作用来评估胰淀 素激动剂活性。 简言之， 示例性方法包括从禁食 12 小时的雄性 Wistar 大鼠制得的比目鱼肌 条。在附着到不锈钢夹子上之前将肌腱结扎。将肌肉条在含有 3.5mlKrebs-Ringer 碳酸氢 盐缓冲液、 7mM N-2- 羟乙基 - 哌嗪 (peperazine)-N’ -2- 乙磺酸， pH 7.4 和 5.5mM 丙酮酸盐 的锥形瓶中预温育。密封瓶， 并持续充入比率为 19 ∶ 1( 体积 / 体积 ) 的 O2 和 CO2。肌肉于 37℃在置于振荡水浴的该培养基中预温育 30 分钟后， 将肌肉条转移到含有添加了 [U-14C] 葡萄糖 (0.5μCi/ml) 和胰岛素 (100μU/ml) 的相同培养基 ( 除丙酮酸盐外 ) 的类似小瓶 中。密封瓶， 并在 1 小时温育的初始 15 分钟内再次充气。温育阶段结束时， 将肌肉吸干， 并 在液氮中快速冷冻。温育培养基中的乳酸盐浓度可通过分光光度法测定， 并测量糖原中掺 入的 [U-14C] 葡萄糖。胰淀素拮抗剂活性可在 100nM 大鼠胰淀素和胰淀素拮抗剂存在下， 测量胰岛素 - 刺激的糖原合成的恢复水平来评估。测定胃排空率的方法公开于例如 Young 等人中。在酚红法中， 清醒大鼠通过管饲 接受含有甲基纤维素和酚红指示剂的 acoloric gel。管饲后二十分钟， 用三氟溴氯乙烷麻 醉动物， 使胃部暴露， 并在幽门和食道下端括约肌处夹住， 取出并置入碱性溶液中。胃容量 可得自碱性溶液中的酚红强度， 后者可通过 560nm 波长处的吸光度来测量。在氚标记葡萄 糖法中， 用氚标记的葡萄糖的水溶液管饲清醒大鼠。 在尾部轻柔束缚大鼠， 尾尖用利多卡因 麻醉。在各个时间点收集从尾血中分离的血浆中的氚， 并以 β 计数器检测。测试化合物通 常在管饲前约一分钟给予。
胰淀素激动剂和拮抗剂化合物在受体结合测定中可表现出小于约 1 至 5nM 数量级 的活性， 优选小于约 1nM， 更优选小于约 50pM。在比目鱼肌测定中， 胰淀素激动剂化合物可 表现小于约 1 至 10 微摩尔数量级的 EC50 值。在比目鱼肌测定中， 胰淀素拮抗剂可表现小于 约 1 至 2 微摩尔数量级的 IC50 值。 在胃排空测定中， 优选的激动剂化合物显示小于 100μg/ 大鼠数量级的 ED50 值。拮抗剂化合物在胃排空测定中显示没有作用或显示相反的效果。
在制备化合物的一种示例方法中， 本发明的化合物可使用标准的固相肽合成技术 来制备， 并优选使用自动或半自动肽合成仪。通常， 使用这样的技术， 在偶联剂如二环己基 碳二亚胺和 1- 羟基苯并三唑以及碱如二异丙基乙胺存在下， 在惰性溶剂如二甲基甲酰胺、 N- 甲基吡咯烷酮或二氯甲烷中于室温下， 使 α-N- 氨基甲酰基保护的氨基酸和树脂上的生 长肽链连接的氨基酸偶联。用诸如三氟乙酸或哌啶的药剂从所得肽 - 树脂上除去 α-N- 氨 基甲酰基保护基， 并重复偶联反应， 将下一个所需 N- 保护氨基酸添加到肽链上。适宜的 N- 保护基团是本领域众所周知的， 其中叔丁氧羰基 (tBoc) 和芴基甲氧羰基 (Fmoc) 是本文 优选的。其它合成或表达胰淀素和胰淀素激动剂以及纯化它们的方法是技术人员已知的。
用于本发明的抗肥胖剂还包括毒蜥外泌肽激素和毒蜥外泌肽激动剂。 天然毒蜥外 泌肽激素是本领域已知的， 功能性的肽类似物和衍生物也是本领域已知的。本文描述了某 些天然肽、 肽类似物和衍生物， 然而应当认识到， 任何已知的表现出本领域已知的激素活性 的毒蜥外泌肽均可用于本发明。示例性的毒蜥外泌肽包括毒蜥外泌肽 -3(His SerAsp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala ValArg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala ProPro Pro Ser(SEQ ID NO ： 181)) 和毒 蜥外泌肽 -4(His Gly Glu Gly ThrPhe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu PheIle Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser(SEQ ID NO ： 182))。
本领域已知的任何毒蜥外泌肽类似物或衍生物均可用于本发明。 在某些实施方案 中， 毒蜥外泌肽类似物和衍生物具有天然毒蜥外泌肽的至少一种激素活性。在某些实施方 案中， 该毒蜥外泌肽类似物是天然毒蜥外泌肽能特异性结合的受体的激动剂。毒蜥外泌肽 化合物包括毒蜥外泌肽类似物， 其中一个或多个天然存在的氨基酸被除去或者被另一种氨 基酸替代。如本领域已知的， 这样的毒蜥外泌肽类似物可以是酰胺化形式或者可以为酸形 式。
在某些实施方案中， 毒蜥外泌肽类似物与天然或天然存在的毒蜥外泌肽相比可具 有一个或多个氨基酸取代、 缺失、 颠换或添加。因此， 与天然存在的毒蜥外泌肽 ( 例如毒蜥 外泌肽 -4) 相比， 毒蜥外泌肽类似物的氨基酸序列可具有一个或多个氨基酸取代、 添加或 缺失。在某些实施方案中， 与诸如毒蜥外泌肽 -4 的天然毒蜥外泌肽相比， 毒蜥外泌肽类似物具有的氨基酸序列所带有的取代、 添加或缺失为 ： 约 30 或更少、 25 或更少、 20 或更少、 15 或更少、 10 或更少、 5 或更少、 4 或更少、 3 或更少、 2 或更少、 或 1 或更少。
示例性毒蜥外泌肽化合物包括毒蜥外泌肽 -4 的激动剂类似物， 其包括但不限于 ： 14 25 Leu， Phe- 毒蜥外泌肽 -4(His Gly Glu Gly Thr Phe ThrSer Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile GluPhe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly 5 14 25 Ala Pro Pro Pro Ser(SEQ IDNO ： 183)、 Ala， Leu， Phe- 毒蜥外泌肽 -4(His Gly Glu Gly Ala Phe ThrSer Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile GluPhe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser(SEQ IDNO ： 184)) 和 14Leu， 22 25 Ala， Phe- 毒蜥外泌肽 -4(His Gly Glu Gly Thr PheThr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Ala IleGlu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser(SEQID NO ： 185))。 其它的示例性毒蜥外泌肽类似物包括但不限于毒 蜥外泌肽 -4(1-30)(His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln MetGlu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly(SEQID NO ： 186))、 毒蜥外 泌肽 -4(1-28) 酰胺 (His Gly Glu Gly Thr Phe Thr SerAsp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu TrpLeu Lys Asn-NH2(SEQ ID NO ： 187))、 14Leu， 25Phe 毒蜥外泌肽 -4(1-28) 酰胺 (His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu GluGlu Ala V al Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2(SEQ IDNO ： 188)) 和 14Leu， 22Ala， 25Phe 毒蜥外泌肽 -4(1-28) 酰胺 (His Gly GluGly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val ArgLeu Ala Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2(SEQ ID NO ： 189))。
另外的示例性毒蜥外泌肽激动剂描述于美国专利申请序号 10/181,102 和 PCT 申 请号 PCT/US98/16387， 这二者都要求 1997 年 8 月 8 日申请的美国专利申请序号 60/055,404 的权益， 所有申请均通过引用结合到本文中。示例性的毒蜥外泌肽激动剂包括美国专利申 请序号 10/181,102 和 PCT 申请号 PCT/US98/16387 中的式 (I)、 式 (II) 和式 (III) 的化合 物。
其它的毒蜥外泌肽激动剂描述于美国专利申请序号 09/554,533 和 PCT 申请序号 PCT/US98/24210， 两者都要求 1997 年 11 月 14 日申请的美国临时申请序号 60/065,442 的 权益， 所有申请均通过引用结合到本文中。其它的毒蜥外泌肽激动剂描述于美国专利申请 序号 09/554,531 和 PCT 申请序号 PCT/US98/24273， 两者都要求 1997 年 11 月 14 日申请的 美国临时申请序号 60/066,029 的权益， 所有申请均通过引用结合到本文中。其它的毒蜥外 泌肽激动剂描述于 1997 年 8 月 8 日申请的 PCT 申请序号 PCT/US97/14199， 它是 1996 年 8 月 8 日申请的美国专利申请序号 08/694,954 的部分继续申请， 两者均通过引用结合到本文 中。其它的毒蜥外泌肽激动剂描述于第 6,956,026 号美国专利， 其要求 1997 年 1 月 7 日申 请的第 60/034,905 号美国临时申请的优先权， 两者均通过引用结合到本文中。其它的毒蜥 外泌肽类似物和衍生物描述于 2003 年 12 月 19 日申请的 US 2004/0209803A1 中， 其通过引 用结合到本文中。
本发明中的抗肥胖剂还包括睫状神经营养因子 (CNTF)、 CNTF 相关多肽、 修饰的 CNTF 多肽、 CNTF 激动剂和 CNTF 类似物， 包括但不限于 (Regeneron)。适用于 本发明方法的含有 CNTF、 CNTF 相关多肽和 CNTF 和 / 或 CNTF 相关多肽的组合物是本领域已知的。CNTF 多肽、 CNTF 相关多肽、 修饰的 CNTF 多肽、 CNTF 激动剂、 类似物、 衍生物、 制品、 制 剂、 药物组合物、 剂量和给予途径以前已描述于例如第 6,680,291 和 6,767,894 号美国专利 和 PCT 申请公开号 WO 94/09134、 WO 98/22128 和 WO 99/43813， 这些文献整体通过引用结 合到本文中。
本发明的抗肥胖剂还包括 5- 羟色胺 (5HT) 转运抑制剂， 包括但不限于帕罗西汀、 氟西汀、 氟苯丙胺、 氟伏沙明、 舍曲林和依米帕明。本发明的抗肥胖剂还包括选择性 5- 羟色 胺重摄取抑制剂， 包括但不限于右旋氟苯丙胺、 氟西汀、 西布曲明 ( 例如 )和 第 6,365,633 号美国专利以及 PCT 专利申请公开号 WO 01/27060 和 WO 01/162341 中描述 的那些， 这些文献整体通过引用结合到本文中。这样的 5HT 转运抑制剂和 5- 羟色胺重摄取 抑制剂、 类似物、 衍生物、 制品、 制剂、 药物组合物、 剂量和给予途径在之前已描述过。
用于本发明的抗肥胖剂还包括选择性 5- 羟色胺激动剂和选择性 5-HT2C 受体 激 动 剂， 包 括 但 不 限 于 第 3,914,250 号 美 国 专 利 ； 和 PCT 申 请 公 开 号 WO 02/36596、 WO 02/48124、 WO 02/10169、 WO 01/66548、 WO 02/44152 ； WO 02/51844、 WO 02/40456 和 WO 02/40457， 这些文献整体通过引用结合到本文中。 这样的选择性 5- 羟色胺激动剂和 5-HT2C 受体激动剂、 含有这样的激动剂的组合物、 以及适用于本发明方法的给予途径是本领域已 知的。参见例如 Halford 等人 (2005)Curr.Drug Targets 6 ： 201-213 和 Weintraub 等人 (1984)Arch.Intern.Med.144 ： 1143-1148。
用于本发明的抗肥胖剂还包括中央大麻素受体 (CB-1 受体 ) 的拮抗剂 / 逆激动 剂， 包 括 但 不 限 于 利 莫 那 班 (Sanofi Synthelabo) 和 SR-147778(Sanofi Synthelabo)。 CB-1 拮抗剂 / 逆激动剂、 衍生物、 制品、 制剂、 药物组合物、 剂量和给予途径之前已描述于 例 如 第 6,344,474、 6,028,084、 5,747,524、 5,596,106、 5,532,237、 4,973,587、 5,013,837、 5,081,122、 5,112,820、 5,292,736、 5,624,941 号美国专利 ； 欧洲专利申请号 EP-656354 和 EP-658546 ； 和 PCT 申 请 公 开 号 WO96/33159、 WO 98/33765、 WO 98/43636、 WO 98/43635、 WO 01/09120、 WO 98/31227、 WO 98/41519、 WO 98/37061、 WO 00/10967、 WO00/10968、 WO 97/29079、 WO 99/02499、 WO 01/58869 和 WO02/076949， 这些文献整体通过引用结合到本文 中。
用于本发明的抗肥胖剂还包括黑皮质素和黑皮质素激动剂。 黑皮质素是来自阿黑 皮素原基因的肽， 其包括 α- 黑素细胞 - 刺激激素 (α-MSH) 和促肾上腺皮质激素 (ACTH)， 且五种黑皮质素受体 MC1-5R 是已知的。MC4R 似乎在能量平衡和肥胖中起作用。参见例 如 Anderson 等人 (2001)Expert Opin.Ther.Patents 11 ： 1583-1592， Speake 等人 (2002) Expert Opin.Ther.Patents 12 ： 1631-1638， Bednarek 等 人 (2004)ExpertOpin.Ther. Patents 14 ： 327-336。黑皮质素激动剂包括但不限于 MC4R 激动剂， 且适用于本发明方 法的含有这样的激动剂的组合物是本领域已知的。MCR 激动剂、 MC4R 激动剂、 衍生物、 制 品、 制剂、 药物组合物、 剂量和给予途径之前已描述于例如以下 PCT 专利申请 ( 它们整体 通过引用结合到本文中 ) ： WO 03/007949、 WO 02/068388、 WO02/068387、 WO 02/067869、 WO 03/040117、 WO 03/066587、 WO03/068738、 WO 03/094918 和 WO 03/031410。
用于本发明的抗肥胖剂还包括代谢型谷氨酸受体第 5 亚型 (mGluR5) 拮抗剂， 包括 但不限于诸如 2- 甲基 -6-( 苯乙炔基 )- 吡啶 (MPEP) 和 (3-[(2- 甲基 -1， 3- 噻唑 -4- 基 ) 乙炔基 ] 吡啶 )(MTEP) 的化合物和描述于 Anderson 等人 (2003)J. Eur.J.Pharmacol.473 ：35-40 ； Cosford 等 人 (2003)Bioorg.Med. Chem.Lett.13(3) ： 351-4 ； and Anderson 等 人 (2002)J.Pharmacol.Exp.Ther.303 ： 1044-1051 的那些化合物。
用于本发明的抗肥胖剂还包括托吡酯( (OrthoMcNeil Pharmaceuticals)， 其标示抗痉挛剂， 但也显示能增强体重减轻。
用于本发明的抗肥胖剂还包括神经肽 Y1(NPY1) 拮抗剂和 NPY5 拮抗剂。NPY1 和 NPY5 拮抗剂是本领域已知的。参见例如 Duhault 等人 (2000)Can.J Physiol. Pharm.78 ： 173-185， 和第 6,124,331、 6,214,853 和 6,340,683 号美国专利。NPY1 和 NPY5 拮抗剂、 衍 生物、 制品、 制剂、 药物组合物、 剂量和给予途径之前已描述过。可用于本发明的 NPY1 拮 抗剂包括 ： 第 6,001,836 号美国专利 ； 和 PCT 申请公开号 WO 96/14307、 WO 01/23387、 WO 99/51600、 WO 01/85690、 WO 01/85098、 WO 01/85173 和 WO 01/89528， 这些文献整体通过引 用结合到本文中。可用于本发明的 NPY5 拮抗剂包括但不限于 ： 第 6,140,354、 6,191,160、 6,258,837、 6,313,298、 6,337,332、 6,329,395、 6,340,683、 6,326,375 和 6,335,345 号 美国专利 ； 欧洲专利号 EP-01010691 和 EP-01044970 ； 和 PCT 专利公开号 WO 97/19682、 WO97/20820、 WO 97/20821、 WO 97/20822、 WO 97/20823、 WO 98/27063、 WO 00/64880、 WO 00/68197、 WO 00/69849、 WO 01/09120、 WO01/85714、 WO 01/85730、 WO 01/07409、 WO 01/02379、 WO 01/02379、 WO 01/23388、 WO， 01/23389、 WO 01/44201、 WO 01/62737、 WO01/62738、 WO 01/09120、 WO 02/22592、 WO 0248152、 WO 02/49648 和 WO 01/14376 中描述 的那些化合物。
用 于 本 发 明 的 抗 肥 胖 剂 还 包 括 黑 色 素 浓 缩 激 素 (MCH) 拮 抗 剂， 其包括诸如 T-226296(Takeda) 的 黑 色 素 浓 缩 激 素 1 受 体 (MCH1R) 拮 抗 剂 和 黑 色 素 浓 缩 激 素 2 受 体 (MCH2R) 拮抗剂。MCH 受体拮抗剂， 衍生物、 制品、 制剂、 药物组合物、 剂量和给予途径 之 前 已 描 述 于 例 如 美 国 专 利 申 请 公 开 号 2005/0009815、 2005/0026915、 2004/0152742、 2004/0209865 ； PCT 专 利 申 请 公 开 号 WO 01/82925、 WO 01/87834、 WO 02/06245、 WO 02/04433 和 WO 02/51809 ； 和日本专利申请号 JP13226269， 这些文献整体通过引用结合到 本文中。
用于本发明的抗肥胖剂还包括阿片样物质拮抗剂， 包括但不限于描述于 PCT 申 请号 WO 00/21509 中的那些。可用于本发明的特定阿片样物质拮抗剂包括但不限于 ： 纳 美芬 3- 甲氧基纳曲酮纳洛酮 (3-methoxynaltrexone naloxone)、 纳曲酮 (naltrexone)、 纳洛肼 (naloxonazine)、 β- 富纳曲胺 (funaltrexamine)、 δ1([D-Ala2， Leu5， Cys6]- 脑 啡 肽 (DALCE)、 异 硫 氰 酸 纳 屈 吲 哚 (naltrindole isothiocyanate) 和 nor-binaltorphamine。
用于本发明的抗肥胖剂还包括食欲素拮抗剂， 包括但不限于描述于 PCT 专利申请 号 WO 01/96302、 WO 01/68609、 WO 02/51232 和 WO 02/51838 中的那些。可用于本发明的特 定食欲素拮抗剂包括但不限于 SB-334867-A。
用 于 本 发 明 的 抗 肥 胖 剂 还 包 括 神 经 肽 Y2(NPY2) 激 动 剂， 包括但不限于诸如 PYY3-36( 例 如 Batterham 等 人 (2003)Nature 418 ： 650-654)、 NPY3-36 的 化 合 物， 和其 它 诸 如 N 乙 酰 基 [Leu(28， 31)]NPY 24-36(White-Smith 等 人 (1999)Neuropeptides 33 ： 526-533)、 TASP-V(Malis 等人 (1999) Br.J. Pharmacol. 126 ： 989-996)、 环 -(28/32)-Ac -[Lys28-Glu32]-(25-36)-pNPY(Cabrele 等人 (2000)J. Pept.Sci.6 ： 97-122) 的 Y2 激动剂。本发明的抗肥胖剂还包括神经肽 Y4(NPY4) 激动剂， 包括但不限于诸如胰肽 (PP)( 例 如 Batterham 等人 (2003)J. Clin.Endocrinol. Metab.88 ： 3989-3992) 的化合物和诸如 1229U91(Raposinho 等人 (2000)Neuroendocrinology 71 ： 2-7) 的其它 Y4 激动剂。NPY2 激 动剂和 NPY4 激动剂、 衍生物、 制品、 制剂、 药物组合物、 剂量和给予途径之前已描述于例如 美国专利公开号 2002/0141985 和 PCT 申请公开号 WO 2005/077094。
用于本发明的抗肥胖剂还包括组胺 3(H3) 拮抗剂 / 逆激动剂， 包括但不限于 描述于 PCT 申请号 WO 02/15905 中的那些、 O-[3-(1H- 咪唑 -4- 基 ) 丙醇 ] 氨基甲酸酯 (Kiec-Kononowicz 等 人 (2000)Pharmazie55 ： 349-355)、 含 哌 啶 的 组 胺 H3- 受 体 拮 抗 剂 (Lazewska 等人 (2001)Pharmazie 56 ： 927-932)、 二苯酮衍生物和相关化合物 (Sasse 等 人 (2001)Arch.Pharm.(Weinheim)334 ： 45-52)、 取代的 N- 苯基氨基甲酸酯 (Reidemeister 等 人 (2000)Pharmazie 55 ： 83-86) 和 proxifan 衍 生 物 (Sasse 等 人 (2000)J. Med. Chem.43 ： 3335-3343)。用于本发明的特定 H3 拮抗剂 / 逆激动剂包括但不限于硫丙咪胺 (thioperamide)、 3-(1H- 咪唑 -4- 基 ) 丙基 N-(4- 戊烯基 ) 氨基甲酸酯、 clobenpropit、 iodophenpropit、 imoproxifan 和 GT2394(Gliatech)。
用于本发明的抗肥胖剂还包括缩胆囊肽 (CCK) 和 CCK 激动剂。用于本发明的缩 胆囊肽 -A(CCK-A) 激动剂包括但不限于描述于第 5,739,106 号美国专利中的那些。特定 的 CCK-A 激 动 剂 包 括 但 不 限 于 AR-R 15849、 GI 181771、 JMV-180、 A-71378、 A-71623 和 SR146131。
用于本发明的抗肥胖剂还包括诸如描述于 PCT 申请公开号 WO01/87335 和 WO 02/08250 中的那些生长素释放肽拮抗剂。生长素释放肽拮抗剂也称为 GHS( 生长激素促分 泌素受体 ) 拮抗剂。因此， 本发明的组合物和方法包括用 GHS 拮抗剂取代生长素释放肽拮 抗剂。
剂量 / 制剂
抗肥胖剂和体重诱导剂 ( 本文中的本章节称作 “化合物” ) 可以以单剂或多剂单独 给予或与药学可接受载体或赋形剂组合给予。 这些药物化合物可与药学可接受载体或稀释 剂以及任何其它已知的佐剂和赋形剂根据诸如 W.Martin 的 Remington’ s Pharmaceutical Sciences 公开的常规技术配制。 另参见 Wang 等人 (1988)J.of Parenteral Sci.andTech.， 第 10 号技术报告， 增刊 42 ： 2S。
通常， 化合物可配制成向患者给予的稳定安全的药物组合物。设想用于本发明方 法的药物制剂可包含约 0.01％至 1.0％ ( 重量 / 体积 )、 在特定情况中 0.05％至 1.0％的 所述化合物， 使最终组合物的 pH 为约 3.0 至约 7.0 的约 0.02％至 0.5％ ( 重量 / 体积 ) 乙 酸盐、 磷酸盐、 柠檬酸盐或谷氨酸盐缓冲液 ； 约 1.0％至 10％ ( 重量 / 体积 ) 的碳水化合物 或多元醇渗透压剂 (tonicifier)， 和任选地， 约 0.005％至 1.0％ ( 重量 / 体积 ) 选自间甲 酚， 苄醇， 对羟基苯甲酸甲酯、 乙酯、 丙酯和丁酯和苯酚的防腐剂。 如果所配制的肽包括在多 次使用的制品中， 则这样的防腐剂通常包括在内。
在本发明的具体实施方案中， 本发明的药物制剂可包含一定浓度范围的化合物， 例如在这些实施方案中为约 0.01％至约 98％ ( 重量 / 重量 )， 或为约 1％至约 98％ ( 重量 / 重量 )， 或优选 80％至 90％ ( 重量 / 重量 )， 或优选约 0.01％至约 50％ ( 重量 / 重量 )， 或更优选约 10％至约 25％ ( 重量 / 重量 )。可以使用足量的注射用水获得所需的溶液浓度。 如果需要的话， 还可以存在诸如氯化钠等另外的渗透压剂， 以及其它的已知赋形 剂。在某些情况下， 这样的赋形剂可用于维持化合物的整体渗透压。目前描述的制剂中可 包含各种浓度的赋形剂。例如， 可包括浓度范围为约 0.02％至约 20％ ( 重量 / 重量 )、 优选 约 0.02％至 0.5％ ( 重量 / 重量 )、 约 0.02％至约 10％ ( 重量 / 重量 ) 或约 1％至约 20％ ( 重量 / 重量 ) 的赋形剂。此外， 与目前的制剂本身相似， 可以包括为固体 ( 包括粉末 )、 液 体、 半固体或凝胶形式的赋形剂。
药物制剂可以以各种形式组成， 例如固体、 液体、 半固体或液体。本文所使用的术 语 “固体” 意指包括该术语的所有正常用途， 包括例如粉末和冻干制剂。当前描述的制剂可 以是冻干的。
术语缓冲剂、 缓冲溶液和缓冲后的溶液， 在提及氢离子浓度或 pH 使用时， 是指系 统 ( 尤其是水性溶液 ) 在添加酸或碱或用溶剂稀释时抵抗 pH 变化的能力。在加入酸或碱 后， 缓冲溶液的 pH 发生微小变化， 缓冲溶液的特征是存在弱酸及弱酸的盐、 或者是存在弱 碱及弱碱的盐。前述系统的实例是乙酸和乙酸钠。pH 的改变是轻微的， 只要所加入的水合 氢离子或羟离子的量不超过缓冲系统将其中和的能力。
如本文所述， 各种液体载体适用于配制肽类抗肥胖剂， 例如水或水性 / 有机溶剂 混合物或悬浮液。
当是液体形式时， 用于本发明的肽制剂的稳定性通过将制剂的 pH 维持在约 3.0 至 约 7.0 的范围内而得到增强。在某些实施方案中， 制剂的 pH 被维持在约 3.5 至 5.0， 或约 3.5 至 6.5 的范围内， 在某些实施方案中， 为约 3.7 至 4.3， 或约 3.8 至 4.2。在某些实施方 案中， pH 可以是约 4.0。尽管不希望受该理论限制， 但目前知道的是， 在药物制剂的 pH 超过 5.5 的情况下， 肽的化学降解可能加速， 使得保存期限小于约两年。
在某些实施方案中， 抗肥胖剂的缓冲液是乙酸盐缓冲液 ( 优选终制剂浓度为约 1-5mM 至约 60mM)、 磷酸盐缓冲液 ( 优选终制剂浓度为约 1-5mM 至约 30mM) 或谷氨酸盐缓冲 液 ( 优选终制剂浓度为约 1-5mM 至约 60mM)。在某些实施方案中， 缓冲液是乙酸盐 ( 优选终 制剂浓度为约 5mM 至约 30mM)。
抗肥胖剂制剂中可包括稳定剂， 但重要的是， 它不是必需的。 然而， 如果包括的话， 则用于本发明实践的稳定剂是碳水化合物或多元醇。 可用于本发明实践的合适稳定剂是约 1.0％至 10％ ( 重量 / 体积 ) 的碳水化合物和多元醇。多元醇和碳水化合物的主链具有相 同的特征， 即 -CHOH-CHOH-， 其具有稳定蛋白质的作用。多元醇包括诸如山梨糖醇、 甘露糖 醇、 甘油和聚乙二醇 (PEG) 的化合物。这些化合物是直链分子。另一方面， 诸如甘露糖、 核 糖、 蔗糖、 果糖、 海藻糖、 麦芽糖、 肌醇和乳糖这样的碳水化合物是可包含酮基或醛基的环形 分子。已证实这两类化合物对于稳定蛋白质抵抗由温度升高和冻融或冷冻干燥过程引起 的变性有效。适宜的碳水化合物包括 ： 半乳糖、 阿拉伯糖、 乳糖或其它任何对糖尿病患者没 有不利作用的碳水化合物， 即碳水化合物不被代谢而在血液中形成不可接受的高浓度葡萄 糖。这样的碳水化合物在本领域中众所周知适于糖尿病患者。蔗糖和果糖是适用于非糖尿 病患者应用 ( 例如用于治疗肥胖 ) 的化合物。
在某些实施方案中， 如果包括了稳定剂， 就用诸如山梨糖醇、 甘露糖醇、 肌醇、 甘 油、 木糖醇和聚丙二醇 / 乙二醇共聚物以及分子量为 200、 400、 1450、 3350、 4000、 6000 和
8000 的各种聚乙二醇的多元醇来稳定化合物。在某些实施方案中， 甘露糖醇是优选的多元 醇。本发明的冻干制剂的另一个有用特征是， 采用用于维持其稳定性的相同制剂组分来维 持本文所述冻干制剂的渗透压。 在某些实施方案中， 甘露糖醇是用于此目的的优选多元醇。
美国药典 (USP) 规定， 多剂量容器所含的制品中必须添加抑菌或抑真菌浓度的抗 微生物剂。抗微生物剂必须在使用时以足够的浓度存在， 以预防在用皮下注射针和注射器 或用其它的诸如笔式注射器的侵入性送递方式抽出部分内容物时使不小心引入制品中的 微生物繁殖。 应当对抗微生物剂进行评估， 以确保其与制剂中所有其它组分的相容性， 也要 评估它们在总制剂中的活性， 以确保在一种制剂中有效的特定药剂在另一种制剂中不会无 效。特定抗微生物剂在一种制剂中有效而在另一种制剂中无效的现象是常见的。
在通常的药学领域中， 防腐剂是能阻止或抑制微生物生长并因此添加到药物制剂 中的物质， 以避免由微生物对该制剂带来的损害。 尽管防腐剂的量不大， 但它仍然会影响肽 的总体稳定性。
尽管用于药物组合物的防腐剂可为 0.005 ％至 1.0 ％ ( 重量 / 体积 )， 但在某 些实施方案中， 各防腐剂单独或与其它防腐剂组合的范围是 ： 苄醇 (0.1-1.0 ％ ) 或间 甲 酚 (0.1-0.6 ％ ) 或 苯 酚 (0.1-0.8 ％ ) 或 甲 基 (0.05-0.25 ％ ) 和 乙 基 或 丙 基 或 丁 基 (0.005％ -0.03％ ) 对羟基苯甲酸酯的组合。对羟基苯甲酸酯是对羟基苯甲酸的低级烷基 酯。各防腐剂的详细描述列于 Martin 的 Remington’ s Pharmaceutical Sciences。
普兰林肽以液体形式存在于玻璃容器中时不具有吸附至玻璃上的倾向， 因此， 不 需要表面活性剂来进一步稳定该药物制剂。然而， 对于处于液体形式时确实具有这种倾向 的化合物， 在其制剂中就应当使用表面活性剂。这些制剂之后可被冻干。表面活性剂常导 致疏水破坏和盐桥分离的蛋白质变性。 由于表面活性剂部分与蛋白质的活性位点之间的强 烈的相互作用， 相对低浓度的表面活性剂都会产生强变性作用。 然而， 谨慎利用这一相互作 用可使蛋白质抵抗界面或表面变性而被稳定。 能够进一步稳定肽的表面活性剂可任选地以 总制剂的约 0.001％至 0.3％ ( 重量 / 体积 ) 存在， 包括聚山梨醇酯 80( 即聚氧乙烯 (20) 山梨糖醇酐单油酸酯 )、 ( 即 3-[(3- 胆酰胺基丙基 ) 二甲氨基 ]1- 丙磺酸盐 )、 ( 例如 Brij 35， 其为 ( 聚氧乙烯 (23) 十二烷基醚 )、 泊洛沙姆或另一种非离子表面 活性剂。
还可能根据所选择的渗透压剂， 加入氯化钠或其它盐来调节药物制剂的渗透压。 然而， 这是任选的， 且依赖于所选择的具体制剂。肠胃外制剂优选是等渗的或基本等渗的。 肠胃外产品的优选载体是水。质量适于肠胃外给予的水可通过蒸馏或反渗制备。 注射用水是用于药物制剂的优选水性溶媒。
药物制剂中有可能存在其它成分。这样的附加成分可包括例如湿润剂、 乳化剂、 油、 抗氧化剂、 填充剂、 渗透压调节剂、 螯合剂、 金属离子、 油质溶媒、 蛋白质 ( 例如人血清清 蛋白、 明胶或蛋白质 ) 和两性离子 ( 例如， 诸如甜菜碱、 牛磺酸、 精氨酸、 甘氨酸、 赖氨酸和组 氨酸的氨基酸 )。 此外， 聚合物溶液或与聚合物的混合物提供了控释肽的机会。 这样的其它 成分对本发明药物制剂的总体稳定性应当没有不利影响。
容器也可是注射制剂的整体部分， 且可被考虑为组成部分， 因为没有容器是完全 惰性的， 或者没有容器不会以某种方式影响其所包装的液体， 尤其是该液体为水性时。因 此， 对特定注射用容器的选择必须考虑到容器和溶液组成以及将用于的治疗。如果需要的
话， 还可以利用硼硅酸盐玻璃， 例如 I 型 Wheaton 硼硅酸盐玻璃 #33(Wheaton TypeI-33) 或 其等同物 (Wheaton Glass Co.) 使肽对小瓶玻璃表面的吸附最小化。能合格生产类似的硼 硅酸盐玻璃小瓶和药筒的其它商家包括 Kimbel Glass Co.、 West Co.、 Bünder Glas GMBH 和 Forma Vitrum。可通过在 Wheaton Type I-33 硼硅酸盐血清小瓶中在 5％甘露糖醇和 0.02％ Tween 80 存在下， 配制和冻干终浓度为 0.1mg/ml 和 10mg/ml 的化合物， 来稳定化合 物的生物学和化学特性。
对于通过注射送递的制剂， 为了使皮下注射器的针插入多剂量小瓶中， 并且在抽 出针后立即再次密封， 各小瓶的开口端优选用被铝带定位的橡胶塞密封。
玻 璃 小 瓶 的 塞 子， 诸 如 West 4416/50， 4416/50( 特 氟 隆 贴 面 的 ) 和 4406/40， Abbott 5139， 或任何等同塞子， 可用作注射用药物的闭塞物。对于含有肽类抗肥胖剂的制 剂， 这些塞子与肽以及制剂中的其它组分相容。 本发明人还已发现， 利用患者使用模式测试 时这些塞子通过了塞子完整性测试， 例如塞子可承受至少约 100 次注射。或者， 为之后的复 溶， 肽可在小瓶、 注射器或药筒中冻干。本发明的液体制剂可填充入一室或两室的药筒中， 或一室或两室的注射器中。
上 述 药 物 制 剂 的 各 组 分 是 本 领 域 已 知 的， 且 描 述 于 PharmaceuticalDosage Forms ： Parenteral Medications， 第 1 卷， 第 2 版， Avis 等 人 编 辑， Mercel Dekker， New York， N.Y.1992， 其整体通过引用结合到本文中。
以上液体制剂的生产过程通常涉及混合、 除菌过滤和分装步骤。混合步骤包括将 成分以特定顺序 ( 防腐剂， 之后是稳定剂 / 渗透压剂、 缓冲液和肽 ) 溶解或同时溶解。
可替代的制剂， 例如非肠胃外的， 可能无需灭菌。然而， 如果灭菌是需要的或者必 需的， 则任何适宜的灭菌方法均可用于开发本发明的肽药物制剂。一般的灭菌方法包括过 滤、 蒸汽 ( 湿热 )、 干热、 充气 ( 例如环氧乙烷、 甲醛、 二氧化氯、 氧化丙烯、 β- 丙醇酸内酯、 臭氧、 三氯硝基甲烷、 过乙酸甲基溴等 )、 暴露于辐射源以及无菌操作。过滤是本发明液体 制剂的优选灭菌方法。除菌过滤包括通过可串联连接的 0.45μm 和 0.22μm(1 或 2 个 ) 过 滤。过滤后， 将溶液分装入适宜的小瓶或容器中。
在某些实施方案中， 抗肥胖剂外周给予患者。 在某些实施方案中， 本发明的液体药 物制剂预计肠胃外给予。 适宜的给予途径包括肌内、 静脉内、 皮下、 皮内、 关节内、 鞘内等。 在 某些实施方案中， 皮下给予途径是优选的。在某些实施方案中， 粘膜送递也是优选的。这些 途径包括但不限于经口、 经鼻、 经舌下、 经肺和经口腔途径， 这些途径可包括给予液体、 半固 体或固体形式的肽。 对于含有肽类抗肥胖剂的制剂， 由于与肠胃外送递相比， 通过这些途径 的给予具有降低的生物利用率， 所以通过这些途径的给予实际上需要更多的肽， 以获得所 需的生物学效果。此外， 通过形成聚合微囊、 基质、 溶液、 植入体和装置， 并将它们通过肠胃 外途径或外科手术途径给予， 可实现肠胃外的受控释放送递。受控释放制剂的例子描述于 第 6,368,630、 6,379,704 和 5,766,627 号美国专利， 这些专利通过引用结合到本文中。这 些制剂形式可能由于一些肽在聚合物基质和装置中的截留使生物利用率较低。 参见例如第 6,379,704、 6,379,703 和 6,296,842 号美国专利。
本发明化合物可以以剂量单位的形式提供， 该剂量单位形式包含一定量的本发明 化合物， 其可以含有或不含有胰岛素或葡萄糖 ( 或葡萄糖源 )， 所述量以一剂或多剂有效控 制生长素释放肽的作用。所述化合物用于治疗生长素释放肽 - 相关疾病或病症的治疗有效量， 是足以用来治疗、 预防或改善不需要的生长素释放肽水平的生理学作用的量。
如同将被本领域人员所认识到的， 抗肥胖剂的有效量将随着包括患者年龄和体 重、 患者的身体条件、 所治疗的病症以及其它因素在内的许多因素而变化。 抗肥胖剂的有效 量还将随着所给予的特定组合而变化。如本文所述， 药剂的组合给予可使任一所给予药剂 的有效量能够降低。
然而， 所述药物化合物的通常日剂量包括从约 1μg、 5μg、 10μg、 50μg 至 100μg 的下限至约 100μg、 500μg、 1mg、 5mg、 10mg、 50mg 或 100mg 的上限。 还设想了其它剂量范围， 诸如每剂 0.1μg 至 1mg 化合物。 每日剂量可以以不连续的单位剂量送递， 24 小时持续提供 或者是在所述 24 小时的任何部分内持续提供。每日的给药数可为每日 1 次至约 4 次， 不过 可以更多次。连续送递可以是连续输注的形式。术语 “QID” 、 “TID” 、 “BID” 和 “QD” 是指每 天分别给予 4、 3、 2 和 1 次。示例性的剂量和输注率包括 0.005nmol/kg 至约 20nmol/kg/ 不 连续剂量或约 0.01/pmol/kg/ 分钟至约 10pmol/kg/ 分钟连续输注。这些剂量和输注可通 过静脉内给予 (i.v.) 或皮下给予 (s.c.) 来送递。示例性的经静脉内给予的药物组合物的 总剂量 / 送递可为每日约 2μg 至约 8mg， 而经皮下给予的药物组合物的总剂量 / 送递可为 每日约 6μg 至约 6mg。
苗条蛋白和苗条蛋白衍生物例如可以约 0.01mg/kg 至约 20mg/kg( 在某些情况下 约 0.01mg/kg 至约 0.3mg/kg) 的日剂量给予。给予可以是通过单剂或分剂次注射。
西 布 曲 明 例 如 可 以 约 0.01mg/kg 至 约 10mg/kg 的 日 剂 量 ( 在 某 些 情 况 下 约 0.01mg/kg 至约 1mg/kg 的日剂量 )， 以单剂或每日 2 至 3 次的分剂次或以持续释放形式给 予。在某些情况下， 西布曲明可以以 5mg、 10mg、 15mg、 20mg 或 30mg 的单次日剂量经口给予。
利莫那班例如可以约 0.01mg/kg 至约 8mg/kg 体重的日剂量 ( 在某些情况下为约 0.3mg/kg 至约 3mg/kg 体重的日剂量 ) 以单剂或每日 2 至 3 次的分剂次或以持续释放形式 给予。
提供以下实施例是为了阐述本发明， 而不是限制本发明。 实施例 实施例 1
Sprague-Dawley 大鼠中饮食诱导型肥胖 (DIO) 是进行肥胖研究和能量稳态调 节研究的一种有价值的模型。这样的大鼠来源于饲以脂肪和能量相对较高的饮食的易于 发生肥胖的 ( (SD)BR) 大鼠品系。参见例如 Levin(1994)Am.J. Physiol.267 ： R527-R535， Levin 等人 (1997)Am.J.Physiol.273 ： R725-R730。DIO 雄性大鼠获自 Charles RiverLaboratories， Inc.(Wilmington， MA)。将这些大鼠在 22℃下单独圈养在鞋盒型育笼 里， 光暗周期为 12/12 小时。在进行药物治疗前， 大鼠随意进食中度高脂肪饮食 (32％ kcal 来自脂肪 ； Research DietsD1226B)6-7 周。该增肥时间段结束时 ( 给予药物之前 )， 动物的 平均体重通常达到约 500g。
将 DIO 动物分成四个治疗组。各组植入皮下渗透微泵 (DURECTCorp.， Cupertino， CA) 并送递溶媒、 苗条蛋白 (500μg/kg/ 天 )、 胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 或苗条蛋白 (500μg/ kg/ 天 )+ 胰淀素 (100μg/kg/ 天 )14 天。如本文所述， 胰淀素作用于后脑中参与食物摄入 和 / 或体重调节的结构， 且苗条蛋白作用于下丘脑中参与食物摄入和 / 或体重调节的结构。
每日记录食物摄入和体重。 在药物治疗前和治疗后用 NMR(Echo MedicalSystems， Houston， TX) 测量身体组成。在药物治疗第 4、 5 和 6 天用间接量热术测量能量消耗变化 (Oxymax ； Columbus Instruments， Columbus， OH)。所有数据均以平均值 ±SEM 表示。使用方差分 析 (ANOVA) 和事后比较检验 (post-hoc test) 检验组间差异。P- 值＜ 0.05 视为显著。用 Windows 版的 4(GraphPad Software， Inc.， SanDiego， CA) 进行统计学分析和 作图。在一些早期研究中， 用 Windows 版的 (Systat Software， Inc.， Point Richmond CA) 进行分析。
图 1 和 2 显示了胰淀素和苗条蛋白在药物给予 14 天后对累积食物摄入和体重总 变化的作用。尤其令人感兴趣的是， (1) 单独的前脑作用药剂苗条蛋白在该肥胖模型中无 效 ( 对食物摄入或体重均无效 )， 和 (2) 用胰淀素和苗条蛋白组合治疗的大鼠相对于单独 用溶媒或胰淀素或苗条蛋白治疗的大鼠， 消耗的食物显著减少而体重降低却显著增多 (p ＜ 0.05 ； 不同的字母表示这些组彼此显著不同 )。
对身体组成观察到类似作用。图 3 图示了由治疗产生的体脂肪变化， 图 4 图示了 由治疗产生的身体蛋白质的变化。用苗条蛋白 + 胰淀素组合治疗的动物中的脂肪减少显著 大于用各单独药剂或溶媒治疗的动物 (p ＜ 0.05)。 体脂肪的这些变化并不伴有显著的瘦组 织减少 (p ＞ 0.05 ； 图 4)。
图 5 图示了治疗组在暗周期中的能量消耗变化。尽管药物 ( 或饮食 )- 诱导的食 物摄入和体重减少常伴有代谢率减缓 ( 热量， kcal/h/kg)， 但用苗条蛋白和胰淀素组合治 疗的大鼠相对于其它组在暗周期中具有显著更高的代谢率 (p ＜ 0.05)。因此， 用胰淀素 + 苗条蛋白组合同时靶向后脑和前脑摄食中枢导致在提高代谢率的同时使食物摄入、 体重和 身体脂肪显著持续减少。此外， 体重和身体脂肪的减少并不伴有瘦组织量的减少。
实施例 2
进行了另一系列的试验来进一步探索胰淀素和苗条蛋白组合对体重和身体组成 变化的协同作用。 为进行这些研究从 Charles RiversLabs 获得了近交 DIO(Levin) 大鼠。 这 些大鼠由 Barry Levin 从饲以脂肪和能量相对高的饮食而易于发生肥胖的 (SD) BR 大鼠品系获得。它们被单独养在 22℃的鞋盒型育笼里， 光暗周期为 12/12 小时。除配 对喂饲对照 (PF) 之外， 药物治疗前以及在整个试验过程中大鼠随意进食中等高脂肪饮食 (32％ kcal 来自脂肪 ； Research Diets D1226B) 约 6 周。PF 大鼠限于任一胰淀素 - 治疗组 的摄入。给予药物前， 大鼠平均体重一般已达到 500g。
将动物分成体重平衡的治疗组， 并植入皮下渗透微泵 (DurectCorp.， Cupertino， CA)。各大鼠植入两个含有药物或适宜溶媒的微泵。大鼠胰淀素 (AC0128 ； 批号 28) 溶于 50％ DMSO 的无菌水溶液， 而鼠苗条蛋白 (Peprotech， 目录号 450-31) 溶于无菌水中。这些 泵被用于以 100μg/kg/ 天送递溶媒、 胰淀素或以 500μg/kg/ 天送递鼠苗条蛋白， 持续 14 天。
各组植入皮下渗透微泵 (DURECT Corp.， Cupertino， CA) 并送递溶媒、 苗条蛋白 (500μg/kg/ 天 )、 胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 或苗条蛋白 (500μg/kg/ 天 )+ 胰淀素 (100μg/ kg/ 天 )14 天。每日记录体重和食物摄入。在药物治疗前和治疗后用 NMR(Echo Medical Systems， Houston， TX) 测量身体组成。为测量身体组成， 将大鼠短暂 ( 约 1 分钟 ) 置于通 风良好的有机玻璃管中， 之后将该管插入专门的啮齿类动物 NMR 机器中。在泵植入之前以及在实验最后一天扫描大鼠。这样能够计算脂肪和干燥瘦体组织的实际克数的变化 ( 例如 治疗后身体脂肪的克数 - 基础体脂肪克数＝体脂肪变化克数 )， 并能够计算脂肪和干燥瘦 组织的身体组成变化百分率 ( 例如％治疗后的体脂肪 -％基础体脂肪＝％体脂肪变化 )。
图 6A 显示了在两周治疗过程中经溶媒校正的治疗组体重百分数的变化。在该实 验中， 苗条蛋白给予导致体重整体降低 2％， 而胰淀素给予导致体重整体降低 6％。特别地， 响应于组合给予胰淀素和苗条蛋白的体重百分数降低为约 12％， 该作用大于单独给予单一 药剂的作用的总和。因此， 胰淀素和苗条蛋白对于减轻体重起协同作用。图 6B 和 6C 分别 图示了治疗两周后产生的体脂肪变化和身体蛋白质变化。此外， 药剂组合产生的体脂肪减 少大于单独药剂产生的体脂肪减少的总和。 体脂肪的这些变化不但没有伴随有身体蛋白质 的减少， 反而伴有蛋白质百分率的增加。这些结果支持药剂组合的代谢作用以及体重减轻 作用。
已知胰淀素对接受者有厌食作用。为检查在胰淀素的厌食作用背景下的胰淀素 + 苗条蛋白的作用， 进行配对喂饲实验。如上述确立 DIO 大鼠和药物治疗组。溶媒、 胰淀素和 胰淀素 + 苗条蛋白治疗组的 DIO 大鼠可自由获得食物， 而配对喂饲的苗条蛋白治疗的摄入 限于胰淀素 - 治疗组所消耗的量。两周治疗内每日记录体重。如图 7 所示， 胰淀素治疗组 和配对喂饲的苗条蛋白治疗组相对于溶媒对照都有约 6％的体重下降。该结果与之前的苗 条蛋白对 DIO 动物体重几乎没有或没有作用的结果相一致。胰淀素 + 苗条蛋白的组合相对 于溶媒对照导致约 12％的体重下降。 因此， 该配对喂饲实验证实， 胰淀素 + 苗条蛋白组合减 少的体重超过由于热量限制所带来的体重下降。
实施例 3
如本文所述， 大多数肥胖病人中的血清苗条蛋白水平是高的， 且认为在这些个体 中存在苗条蛋白抗性状态。检查了正常 HarlanSprague-Dawley(HSD) 和 DIO 倾向大鼠中的 血浆苗条蛋白水平和苗条蛋白抗性。
将 DIO 倾向和正常 HSD 大鼠分成三个治疗组。两个治疗组植入皮下渗透微泵 (DURECT Corp.， Cupertino， CA) 并给予溶媒或胰淀素 (100μg/kg/ 天 )14 天， 而第三个 组以胰淀素治疗组所消耗的量配对喂饲 14 天。用商业药剂盒 (Linco Research， Inc.， St.Charles， MO) 通过免疫测定确定了血清苗条蛋白水平。如图 8 所示， DIO 倾向动物中的 血清苗条蛋白水平约为正常 HSD 动物的三倍高。因此， DIO 倾向大鼠的血液苗条蛋白是高 的。胰淀素治疗以及将热量限制于胰淀素治疗动物食入的食物量均显著降低 DIO 倾向和正 常动物中的血浆苗条蛋白水平。
通常， 将瘦 HSD 大鼠分成两个治疗组。各组植入皮下渗透微泵 (DURECT Corp.， Cupertino， CA) 并送递溶媒或苗条蛋白 (500μg/kg/ 天 )14 天， 每周记录体重。如图 9 所 示， 在 DIO 倾向动物中无效的苗条蛋白剂量 (500mg/kg/ 天 ) 在正常 HSD 大鼠中引发显著而 持续的体重下降。本文所述的 DIO 倾向动物表现出对苗条蛋白的体重减轻作用的抗性。
实施例 4
为证实胰淀素与 5- 羟色胺能 / 去甲肾上腺素能重摄取抑制剂的组合对体重和身 体组成变化的作用， 使 DIO 雄性大鼠增肥， 并分成四个治疗组， 如实施例 2 所述。将大鼠胰 淀素溶于 50％ DMSO 的无菌水溶液中， 并将西布曲明溶于无菌水中。各组植入皮下渗透微 泵并送递溶媒、 西布曲明 (3mg/kg/ 天 ) 或胰淀素 (100μg/kg/ 天 )14 天。每日记录体重和食物摄入。药物治疗之前和之后用 NMR(Echo Medical Systems， Houston， TX) 测量身体组 成。为测量身体组成， 将大鼠短暂 ( 约 1 分钟 ) 置于通风良好的有机玻璃管中， 之后将该管 插入专门的啮齿类动物 NMR 机器中。在泵植入之前以及在实验最后一天扫描大鼠。这样就 能够计算脂肪和干燥瘦组织的实际克数的变化 ( 例如治疗后体脂肪的克数 - 基础体脂肪克 数＝体脂肪克数的变化 )， 并能够计算身体组成中的脂肪和干燥瘦组织变化的百分率 ( 例 如％治疗后的身体脂肪 -％基础体脂肪＝％体脂肪变化 )。
图 10A 显示了两周治疗当中经溶媒校正的治疗组体重变化百分率。西布曲明单独 给予和胰淀素单独给予导致约 6％的体重下降。响应于组合给予胰淀素和西布曲明的体重 百分数降低为约 12％。 图 10B 和 10C 分别图示了治疗两周后产生的体脂肪的变化以及身体 蛋白质的变化。单独用胰淀素或单独用西布曲明治疗的脂肪量减少是明显的， 组合给予胰 淀素和西布曲明时得到了协同作用 ( 图 10B)。单独给予胰淀素导致瘦组织 ( 蛋白质 ) 量 增加。相对来说， 西布曲明在单独给予或与胰淀素组合给予时未改变瘦组织 ( 蛋白质 ) 量 ( 图 10C)。这些结果支持药剂组合的代谢作用以及体重减轻作用。
还测试了胰淀素与儿茶酚胺能激动剂苯丁胺的组合对体重和身体组成的变化的 作用。由于苯丁胺实际上命中 NA/5-HT 受体， 所以它通常被称作儿茶酚胺能激动剂。使 DIO 雄性大鼠增肥， 并分成四个治疗组， 如上所述。各组植入皮下渗透微泵和 / 或插入口饲管， 送递溶媒、 苯丁胺 (10mg/kg/ 天 )、 胰淀素 (100μg/kg/ 天 ) 或苯丁胺 (10mg/kg/ 天 )+ 胰淀 素 (100μg/kg/ 天 )14 天。微泵包含溶媒 (50％ DMSO 的水溶液 ) 或胰淀素， 而口管饲给予 无菌水或苯丁胺。每日记录体重， 且药物治疗之前和之后用 NMR 测量身体组成。
图 11A 图示了两周治疗当中经溶媒校正的治疗组的体重变化百分率。苯丁胺单独 给予导致约 5％的体重下降， 胰淀素单独给予导致约 7％的体重下降。响应于组合给予胰淀 素和苯丁胺的体重百分数降低为约 12％。图 11B 和 11C 分别图示了治疗两周后产生的身 体脂肪的变化以及身体蛋白质的变化。单独用苯丁胺治疗时明显有适当量的脂肪量减少， 而单独用胰淀素治疗时明显有较大量的脂肪量减少。当胰淀素与苯丁胺组合给予时， 可获 得协同作用 ( 图 11B)。单独给予苯丁胺时， 瘦组织 ( 蛋白质 ) 量不变或有减少倾向。单独 给予胰淀素时保持了瘦组织 ( 蛋白质 ) 量， 而胰淀素和苯丁胺的组合却有使瘦组织 ( 蛋白 质 ) 量提高到最大的倾向， 甚至是在动物体重减轻约 12％时 ( 图 11C)。这些结果支持了药 剂组合的代谢作用以及体重减轻作用。
实施例 5
为证实胰淀素和 CB-1 拮抗剂组合对于体重和身体组成变化的作用， 从 Charles Rivers Labs 获得了近交 DIO(Levin)。 这些大鼠由 BarryLevin 从饲以脂肪和能量相对高的 饮食而易于发生肥胖的 (SD)BR 大鼠品系获得。它们被单独养在 22C 的鞋盒型育 笼里， 光暗周期为 12/12 小时。药物治疗前以及在整个试验过程中大鼠维持随意进食中度 高脂肪饮食 (32％ kcal 来自脂肪 ； Research DietsD1226B) 约 6 周。给予药物前， 大鼠平均 体重一般达到 500g。治疗前使大鼠习惯经口管饲 1 周。经口管饲给予一定剂量范围 (0.1、 0.3、 1.0、 3.0、 10mg/kg/ 天 ) 的利莫那班。通过微泵给予胰淀素 ( 溶于 50％ DMSO 的无菌水 溶液中 ) 或溶媒 (100μg/kg/ 天 )。利莫那班总是在临熄灯前送递。于治疗后的 1 和 2 周 测量食物摄入和体重。药物治疗之前和之后用 NMR(Echo Medical Systems， Houston， TX) 测量身体组成。为测量身体组成， 将大鼠短暂 ( 约 1 分钟 ) 置于通风良好的有机玻璃管中，之后将该管插入专门的啮齿类动物 NMR 机器中。在泵植入之前以及在实验最后一天扫描大 鼠。这样就能够计算脂肪和干燥瘦组织的实际克数的变化 ( 例如治疗后体脂肪的克数 - 基 础体脂肪克数＝体脂肪变化克数 )， 并且能计算身体组成的脂肪和干燥瘦组织的变化百分 数 ( 例如％治疗后的身体脂肪 -％基础体脂肪＝％体脂肪变化 )。
图 12A 图示了在两周治疗当中经溶媒校正的体重百分数的变化。利莫那班单独给 予导致约 4％的体重下降， 而胰淀素单独给予导致约 6％的体重下降。响应于组合给予胰淀 素和利莫那班的体重百分数降低为约 11％。图 12B 和 12C 分别图示了治疗两周后产生的 体脂肪的变化以及身体蛋白质的变化。 单独用胰淀素或单独用利莫那班的治疗所产生的脂 肪量减少是明显的， 而当胰淀素与利莫那班组合给予时能获得协同作用 ( 图 12B)。单独给 予胰淀素、 单独给予利莫那班和组合给予胰淀素 + 利莫那班导致相对等量的瘦组织 ( 蛋白 质 ) 增加 ( 图 12C)。这些结果支持了药剂组合的代谢作用以及体重减轻作用。
在另一个测定中， CB-1 拮抗剂利莫那班 (rimonanbant)(AC163720) 与胰淀素组合 给予。 DIO 倾向大鼠在药物治疗前随意进食中度高脂肪饮食 (32％ kcal 来自脂肪 ； Research Diets D1226B)6 周。 增肥期结束时， 它们的平均体重一般为 500g。 之后将大鼠分成治疗组， 并植入一个皮下微泵 (Durect Corp)， 插入口饲管。微泵包含溶媒 (50％ DMSO 的水溶液 ) 或胰淀素 (100μg/kg/ 天 )， 而口饲管给予无菌水或一定剂量范围的利莫那班 (AC 163720) (0.1、 0.3、 1.0、 3.0、 10.0mg/kg/ 天 )。两周后的体重变化示于图 13， 且这些组合中有两个 ( 加圆圈的 ) 在图 14A 和 14B 中更详细地突出显示。
实施例 6
为证实胰淀素和毒蜥外泌肽类似物 14Leu- 毒蜥外泌肽 -4 ： HisGly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu AlaVal Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly AlaPro Pro Pro Ser(SEQ ID NO ： 190) 组合对于体 重和身体组成变化的作用， 使 DIO 雄性大鼠增肥并将其分作四个治疗组， 如上所述。药物给 予之前， 大鼠平均体重一般达到 500g。用微泵给予一定剂量范围 (0.3、 1、 3、 10、 30μg/kg/ 天 ) 的毒蜥外泌肽 -4 类似物。胰淀素 ( 溶于 50％ DMSO 的水溶液中 ) 或溶媒通过微泵给予 (100μg/kg/ 天 )。每日记录体重和食物摄入。药物治疗之前和之后用 NMR(Echo Medical Systems， Houston， TX) 测量身体组成。为测量身体组成， 将大鼠短暂 ( 约 1 分钟 ) 置于通 风良好的有机玻璃管中， 之后将该管插入专门的啮齿类动物 NMR 机器中。在泵植入之前以 及在实验最后一天扫描大鼠。这样就能够计算脂肪和干燥瘦组织的实际克数的变化 ( 例如 治疗后体脂肪的克数 - 基础体脂肪克数＝体脂肪变化克数 )， 并能够计算脂肪和干燥瘦体 组织的身体组成变化百分率 ( 例如％治疗后的身体脂肪 -％基础身体脂肪＝％身体脂肪变 化 )。
图 15A 图示了在两周治疗当中经溶媒校正的治疗组体重变化百分率。单独给予毒 蜥外泌肽 -4 类似物和单独给予胰淀素， 各导致约 6％的体重下降。响应于组合给予胰淀素 和毒蜥外泌肽 -4 类似物的体重百分数降低为约 12％。图 15B 和 15C 分别显示了治疗两周 后产生的体脂肪变化以及身体蛋白质的变化。单独用毒蜥外泌肽 -4 类似物治疗时， 脂肪量 减少是明显的。单独给予胰淀素和胰淀素 + 毒蜥外泌肽 -4 类似物组合给予导致相对等量 的脂肪量下降 ( 图 15B)。 单独给予胰淀素、 单独给予毒蜥外泌肽 -4 类似物以及组合给予胰 淀素 +AC3174， 导致相对等量的瘦组织 ( 蛋白质 ) 量增加 ( 图 15C)。这些结果支持药剂组合的代谢作用以及体重减轻作用。
实施例 7
为证实胰淀素和 PYY 激动剂组合对于体重和身体组成变化的作用， 使 DIO 雄性大 鼠增肥并将其分作四个治疗组， 如上所述。各组植入皮下渗透微泵并送递溶媒、 PYY(3-36) (1000μg/kg/ 天 )、 胰 淀 素 (100μg/kg/ 天 ) 或 PYY(3-36)(1000μg/kg/ 天 )+ 胰 淀 素 (100μg/kg/ 天 )14 天。用微泵给予一定剂量范围 (100、 200、 400、 800、 1000μg/kg/ 天 ) 的 PYY(3-36)。胰淀素 100μg/kg/ 天 ( 溶于 50％ DMSO 的无菌水溶液中 )、 PYY(3-36)( 溶于 50％ DMSO 的无菌水溶液中 ) 或溶媒通过微泵给予。每日记录食物摄入和体重。药物给予 之前和之后用 NMR(EchoMedical Systems， Houston， TX) 测量身体组成。为测量身体组成， 将大鼠短暂 ( 约 1 分钟 ) 置于通风良好的有机玻璃管中， 之后将该管插入专门的啮齿类动 物 NMR 机器中。在泵植入之前以及在实验最后一天扫描大鼠。这就能够计算脂肪和干燥瘦 组织的实际克数的变化 ( 例如治疗后体脂肪的克数 - 基础体脂肪克数＝体脂肪变化克数 )， 并能够计算脂肪和干燥瘦组织的身体组成变化百分率 ( 例如％治疗后的身体脂肪 -％基础 身体脂肪＝％身体脂肪变化 )。
图 16A 图 示 了 在 两 周 治 疗 当 中 经 溶 媒 校 正 的 治 疗 组 的 体 重 变 化 百 分 率。 PYY(3-36) 单独给予导致约 9％的体重下降， 胰淀素单独给予导致约 7％的体重下降。响应 于组合给予胰淀素和 PYY(3-36) 的体重百分数降低为约 15％。图 16B 和 16C 分别图示了治 疗两周后产生的体脂肪的变化以及身体蛋白质的变化。用 PYY(3-36) 单独治疗、 用胰淀素 单独治疗和用胰淀素 +PYY(3-36) 组合治疗， 脂肪量的减少量明显逐渐增加 ( 图 16B)。 胰淀 素的单独给予以及胰淀素 +PYY(3-36) 的组合给予导致瘦组织 ( 蛋白质 ) 量增加 ( 图 16C)。 这些结果支持药剂组合的代谢作用以及体重减轻作用。
实施例 8
为评价胰淀素激动剂 ( 普兰林肽 ) 和苗条蛋白 ( 美曲普汀 ) 组合的安全性、 耐受性 和对体重变化的作用， 按照 USFDA 批准的方案进行 24 周的随机双盲的活性药物控制的多中 心研究。 研究的次要目的是确定普兰林肽和苗条蛋白的药代动力学、 腰围、 体重变化速率和 患者报告的结果， 包括例如但不限于与重量变化和心情相关的康乐感觉。研究选用具有限 定 BMI(27-35mg/m2) 的超重和肥胖患者， 入选者统计数据见表 2。在 24 周研究结束时， 普兰 林肽 / 美曲普汀组合治疗平均降低体重 12.7％， 显著高于单独采用普兰林肽治疗 (8.4％， p ＜ 0.001)。用普兰林肽 / 美曲普汀治疗的患者相对于 24 周研究开始时平均减轻 25 磅， 相 比之下， 单独用普兰林肽治疗的患者平均减轻 17 磅。而且， 接受普兰林肽 / 美曲普汀的患 者至研究结束时体重连续减轻， 相比之下， 单独用普兰林肽治疗的患者的体重至 24 周研究 结束时已经稳定。患者人群数据统计见表 3。
在初始的引导期， 所有患者都接受饮食指导， 并采用普兰林肽以 180mcg BID 治疗 2 周， 之后采用普兰林肽以 360mcg BID 治疗 2 周。完成 4 周引导期的患者和在该阶段减轻 2-8％体重的患者有资格继续该研究。术语 “入选者” ( 表 2) 是指在引导期接受至少 1 剂普 兰林肽的患者 (N ＝ 177)。术语 “非随机者” 是指过了引导期而未继续进行研究的患者。术 语 “可评价者” 是指完成第 9 次随访 (16 周 ) 研究程序的患者， 他们充分遵循研究方案。 在 4 周引导期之后， 对于余下的 20 周研究， 患者以 2 ∶ 2 ∶ 1 比率随机进入采用61
101939022 A CN 101939025说明书57/58 页BID 治疗的 3 组之一 ： 1) 普兰林肽 360μg/ 美曲普汀 5mg(“苗条蛋白 + 普兰林肽” )； 2) 普 兰林肽 360μg/ 安慰剂 (“普兰林肽” )； 或 3) 美曲普汀 5mg/ 安慰剂 (“苗条蛋白” )。
入选患者在 4 周引导期内的变化提供于表 4。
剂量选择和时间选择由例如在图 17 所示的药代动力学研究获知， 图 17 表明了分 别以 5mg BID 和 360mcg BID 给予的美曲普汀和普兰林肽的平均血浆浓度， 在早餐和晚餐前 15 分钟之内服药。
相对于入选时体重的平均变化的 24 周研究的结果提供于图 18。相对于入选时体 重的最小平方平均变化的 24 周研究的结果提供于图 19。相对于入选时体重的中值变化 的 24 周研究的结果提供于图 20。相对于基础体重的均值变化的 24 周研究的结果提供于 图 21。从入选至 20 周的体重的分类变化的 24 周研究的结果提供于图 22。从入选至 20 周 的体重的分类变化的 24 周研究的结果的另一种表示方法提供于图 23， 其中在该图的分图 中使用体重降低分级 ( 例如≥ 5％、 10％、 15％ )。早期速率 (0-12 周 ) 和晚期速率 (12-20 周 ) 的体重变化速率结果提供于图 24。图 24 表明， 尽管在 24 周研究中单独的美曲普汀和 普兰林肽的体重减轻作用晚期接近速率 0， 但美曲普汀 + 普兰林肽组合至 24 周研究结束时 仍导致体重降低。不同性别的相对于入选时体重的平均绝对变化的 24 周研究结果提供于 图 25。依据性别的相对于入选时体重的平均变化百分率的 24 周研究结果提供于图 26。女 性和男性组别的平均 BMI 分别为 28.97 和 27.32。依据 BMI 分类的相对于入选时体重的平 均绝对变化的 24 周研究结果提供于图 27。依据 BMI 分类的相对于入选时体重的平均变化 百分率的 24 周研究结果提供于图 28。依据初始体重减轻的相对于入选时体重的平均绝对
变化的 24 周研究结果提供于图 29。依据初始体重减轻的相对于入选时体重的平均变化百 分率的 24 周研究结果提供于图 30。 相对于入选时的总过量体重的平均变化百分率的 24 周 研究的结果提供于图 31。术语 “ITT” 是指接受研究干预的随机化患者。与接受研究干预 的随机化患者相关的术语 “LOCF” 是指 “沿用末次观测值结转 (last observation carried forward)” 。 针对可评价患者， 相对于入选腰围的平均变化的 24 周研究的结果提供于图 32。
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