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1、(10)申请公布号 CN 102302528 A (43)申请公布日 2012.01.04 CN 102302528 A *CN102302528A* (21)申请号 201110285508.7 (22)申请日 2011.09.23 A61K 36/232(2006.01) A61K 9/107(2006.01) A61K 9/12(2006.01) A61P 11/06(2006.01) (71)申请人 甘肃中医学院 地址 730000 甘肃省兰州市定西东路 35 号 甘肃中医学院 (72)发明人 任远 王志旺 吴国泰 刘峰林 (74)专利代理机构 甘肃省知识产权事务中心 62100 代理。
2、人 田玉兰 (54) 发明名称 一种防治哮喘的喷雾剂及其制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种防治哮喘的喷雾剂及其制 备方法， 该喷雾剂包含当归挥发油， 并以当归挥发 油为平喘的有效部位， 还包含制剂允许的辅料， 经 过称量、 混合定容、 乳化等步骤， 将其制成喷雾剂 乳状液 ； 以 100 毫升喷雾剂乳状液计， 含当归挥发 油 0.2 15 毫升。当归挥发油易于挥发、 局部刺 激性较小， 更适合于局部喷雾吸入的方式给药， 使 药物直接到达病变部位而起效快、 疗效好 ； 吸收 进入血液循环的药量比较少而全身不良反应比较 轻， 更适合于哮喘间歇期预防性长期用药。 当归挥 发油克服了 2 受体。
3、激动药与黄嘌呤类药物的不 良反应的同时对慢性哮喘引起的肺动脉高压、 肺 心病以及心律失常等并发症具有治疗作用。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 7 页 CN 102302529 A1/1 页 2 1. 一种防治哮喘的喷雾剂， 其特征是 ： 它包含当归挥发油， 并以当归挥发油为平喘的 有效部位， 还包含制剂允许的辅料， 由其制成喷雾剂乳状液 ； 以 100 毫升喷雾剂乳状液计， 含当归挥发油 0.2 15 毫升。 2. 根据权利要求 1 所述的喷雾剂， 其特征是 ： 以 100 毫升喷雾剂乳状液计， 含当归挥发 油 。
4、0.5 10 毫升。 3. 根据权利要求 1 所述的喷雾剂， 其特征是 ： 所述的辅料是指常规技术中喷雾剂所选 用的乳化剂、 抗氧剂和娇嗅剂。 4.根据权利要求3所述的喷雾剂， 其特征是 ： 所述的乳化剂是选自于泊洛沙姆-188、 大 豆磷脂、 蛋黄磷脂和吐温 -80 中的一种或一种以上的混合物。 5. 根据权利要求 3 所述的喷雾剂， 其特征是 ： 所述的抗氧剂除了维生素 E， 还包括维生 素 C 和亚硫酸氢钠中的一种或两种组成的混合物。 6. 根据权利要求 3 所述的喷雾剂， 其特征是 ： 所述的娇嗅剂是香蕉香精、 苹果香精和玉 米香精中的一种或一种以上的混合物。 7. 一种制备防治哮喘的。
5、喷雾剂的方法， 其特征是 ： 准确称取泊洛沙姆 -188、 大豆磷脂、 蛋黄磷脂和吐温 -80 的一种、 两种或多种共计 0.4 8.0g 置于研钵中， 准确称量当归挥发 油 0.2 15mL 及维生素 E 0.05 0.07g 加入上述研钵中， 研磨混合均匀， 之后边加入与 挥发油等量的 30 40蒸馏水边研磨至混合均匀得初乳， 将上述初乳转移至高速组织捣 碎匀浆机中 ； 准确称取维生素 C 和亚硫酸氢钠的一种或两种共计 0.1 0.3g， 以及香蕉香 精、 苹果香精和玉米香精的一种、 两种或三种共计 0.02 0.2g， 加入到高速组织捣碎匀浆 机中 ； 之后加蒸馏水于高速组织捣碎匀浆机中。
6、， 将其定容至100mL， 1800028000转/分钟 搅拌速度下乳化 3 8 分钟后将其转移至高压均质机中， 于 150MPa 压力下循环均化 3 次， 得白色均一乳状液， 将制备的乳剂封装于喷雾器中， 置于凉暗处储存。 权 利 要 求 书 CN 102302528 A CN 102302529 A1/7 页 3 一种防治哮喘的喷雾剂及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种中药制剂及其制备方法， 具体涉及到用于预防和治疗支气管哮喘 （简称哮喘） 的一种以中药当归挥发油为主要成分的喷雾剂及其制备方法。 背景技术 0002 2006 版全球哮喘防治创议 (The Global Init。
7、iative for Asthma, GINA) 提出全 球哮喘发病率为 1%-18%， 全世界约有三亿哮喘患者 ； 在我国哮喘的患病率约为 2%， 儿童可 达 4%， 据测算全国约有二千万以上哮喘患者， 哮喘已成为严重威胁公众健康的一种主要慢 性疾病。 0003 目前， 治疗哮喘的化学药品主要有糖皮质激素、 2受体激动药和黄嘌呤类等药 物， 虽疗效确切可靠， 但不良反应较大。 糖皮质激素疗效显著， 但作用广泛， 长期使用易引起 多种严重不良反应。 2受体激动药是哮喘急性发作的常用药， 黄嘌呤类药物适用于各型哮 喘， 但它们在发挥治疗作用的同时可兴奋心脏， 甚至引起心律失常 ； 同时， 哮喘患。
8、者由于不 同程度肺循环阻力增加可引起右心肥厚， 右心功能障碍而致肺心病、 心律失常， 所以 2受 体激动药和黄嘌呤类等药物在治疗哮喘， 特别是慢性哮喘患者时因其不良反应而限制其临 床应用。另一方面， 近二十年来尽管已经采取包括吸入糖皮质激素在内的综合抗炎治疗方 案， 但流行病学调查发现哮喘的发病率、 死亡率并没有随之而降低 （苏奎国 , 姜良铎 , 郭勇 英 , 等 . 桑苏饮对哮喘模型大鼠气道重塑及肺组织上皮细胞 ICAM-1 表达的影响 J. 山东 中医药大学学报 ,2010,34(4):354-357.） ， 仍然迫切需要去寻找新的方法来防治哮喘。 0004 中草药来源于天然， 在治疗疾。
9、病 （特别是慢性疾病） 的过程中具有明显的优势。中 药治疗哮喘已有几千年的临床应用历史， 形成了一系列临床有效的经典方药。中药当归为 伞形科植物当归Angelica Sinensis(oliv.) Diels的干燥根， 为活血、 养血之要药， 历代医 家对当归治疗哮喘均有阐述和临床应用， 大多数医学认为 “血和则气自降、 血畅而气自行” 是当归治疗哮喘的主要原因。如 神农本草经 谓当归 “， 为补血活血要药， 故主咳逆上 气也” 。 本草纲目 谓 “当归血药， 可治胸中咳逆上气，” 。中药传统用药以复方为主， 治疗哮喘的复方中多配伍有当归， 如 慎斋医书 中的百合固金汤 （当归、 地黄、 熟地。
10、黄、 百 合、 玄参、 麦冬、 白芍） 、医学入门 中的加味益母丸 （当归、 益母草、 赤芍、 木香） 、和剂局方 中治疗下虚上实挟痰的咳喘气促之苏子降气汤 （当归、 苏子、 半夏、 前胡、 厚朴、 肉桂、 ） 等。 0005 实验研究已证实中药当归及其复方治疗哮喘的临床有效性。如咳喘速平胶囊 （当 归、 四季青、 紫花前胡、 枇杷叶、 川芎、 葶苈子、 橘皮） 治疗慢性支气管炎 （迁延期） 52 例， 用药 3 个疗程的有效率为 98.1%（宋俊 , 胡建平 , 唐荣芳 , 等 . 咳喘速平胶囊治疗性支气管炎迁 延期52例J. 中国民间疗法,2005,13(10):33-34.） 。 刘德恒。
11、用自拟人参五味散 （人参、 五 味子、 当归、 地龙、 橘红、 半夏、 茯苓、 甘草、 猪肺、 猪肾） 预防支气管哮喘发作60例， 用药35 个疗程的总有效率为95% （刘德恒.自拟人参五味散预防支气管哮喘发作60例J.中医中 药,2006,3(17):126-126.） 。 当归主要含有挥发油和水溶性部位， 药理学研究表明当归挥发 油是当归平喘的主要有效部位。王锁才等用当归精油丸 （当归挥发油） 口服治疗支气管哮喘 说 明 书 CN 102302528 A CN 102302529 A2/7 页 4 51 例， 总有效率为 90.2% （王锁才 , 彭长福 , 唐敏章 , 等 . 当归精油丸。
12、对支气管哮喘止喘作 用的临床观察J.天津中医,1986,(1):4-5.） 。 马慧等用当归喘痛宁治疗喘息型支气管炎 及支气管哮喘61例， 总有效率为85.3% （马慧,董惠芸.当归喘痛宁治疗喘息型支气管炎及 支气管哮喘疗效观察 J. 甘肃中医 ,1998,11(4):17-17.） 。研究表明， 当归及其挥发油治 疗哮喘的药理学机理除了平喘作用以外， 尚有抗炎 （叶丽红,蔡梅芳,许德金,等.当归、 红 花防治支气管哮喘的实验研究 J. 江苏中医 ,1998,19(7):311-312.） 、 抗变态反应 （胡慧 娟 , 李佩珍 , 杭秉茜 . 当归对变态反应性炎症的影响 J. 中药材 ,19。
13、93,16(1):39-42.） 、 抑制肺纤维化 （朱建伟 , 李贵海 . 丹参、 当归对小鼠肺纤维化的抑制作用 J. 山东中医 学院学报 ,1995,19(4):267-270.） 、 抗心律失常 （查力 , 黄文菊 , 吕富华 . 与强心甙相互 作用的中药当归、 汉防己 J. 华中科技大学学报 ( 医学版 ),1980,9(2):55. 庄学煊 , 李 长潮 , 陈少如 . 当归注射液对大鼠心肌缺血再灌注时心律失常的保护作用 J. 中西医 结合杂志 ,1991,11(6):360-362.）以及扩张肺血管降低肺动脉压而缓解肺心病 （郑凌 , 段生福 , 张珍祥 , 等 . 当归对肺血管扩。
14、张作用的实验和临床研究 J. 同济医科大学学 报 ,1991,16(6):398-402.） 等作用。 0006 但是， 目前当归等中药治疗哮喘仍多停留在汤剂的应用上， 且由于实际应用中多 为十味药以上的复方制剂， 制剂成形难度较大， 质量难以控制 ； 同时由于剂量太大， 给病人 的服用带来很大困难。另一方面， 以当归挥发油为主的滴丸等口服制剂必须经机体吸收进 入血液循环并到达相应的部位才能发挥治疗作用， 这样到达作用部位的药物量比较少， 起 效慢而疗效差 ； 同时其他部位药物浓度相对较高而容易出现不良反应。 发明内容 0007 本发明的目的是提供一种能够使药物直接到达病变部位发挥局部治疗作用。
15、、 用药 剂量小、 起效快而疗效好， 同时全身的不良反应比较轻的防治哮喘的喷雾剂。 0008 本发明的另一个目的是提供一种制备所述防治哮喘的喷雾剂的方法。 0009 为实现上述目的， 本发明采取的技术方案是 ： 一种防治哮喘的喷雾剂， 包含当归挥发油， 并以当归挥发油为平喘的有效部位， 还包 含制剂允许的辅料， 由其制成喷雾剂乳状液 ； 以 100 毫升喷雾剂乳状液计， 含当归挥发油 0.2 15 毫升。优选以 100 毫升喷雾剂乳状液计， 含当归挥发油 0.5 10 毫升。 0010 所述的辅料是指常规技术中喷雾剂所选用的乳化剂、 抗氧剂和娇嗅剂。 0011 所述的乳化剂是选自于泊洛沙姆 -。
16、188、 大豆磷脂、 蛋黄磷脂和吐温 -80 中的一种 或一种以上的混合物。 0012 所述的抗氧剂除了维生素 E， 还包括维生素 C 和亚硫酸氢钠中的一种或两种组成 的混合物。 0013 所述的娇嗅剂是香蕉香精、 苹果香精和玉米香精中的一种或一种以上的混合物。 0014 一种制备上述防治哮喘的喷雾剂的方法， 准确称取泊洛沙姆 -188、 大豆磷脂、 蛋 黄磷脂和吐温 -80 的一种、 两种或多种共计 0.4 8.0g 置于研钵中， 准确称量当归挥发油 0.2 15mL 及维生素 E 0.05 0.07g 加入上述研钵中， 研磨混合均匀， 之后边加入与挥发 油等量的 30 40蒸馏水边研磨至混。
17、合均匀得初乳， 将上述初乳转移至高速组织捣碎匀 浆机中 ； 准确称取维生素 C 和亚硫酸氢钠的一种或两种共计 0.1 0.3g， 以及香蕉香精、 苹 说 明 书 CN 102302528 A CN 102302529 A3/7 页 5 果香精和玉米香精的一种、 两种或多种共计 0.02 0.2g， 加入到高速组织捣碎匀浆机中 ； 之后加蒸馏水于高速组织捣碎匀浆机中， 将其定容至 100mL， 18000 28000 转 / 分钟搅拌 速度下乳化 3 8 分钟后将其转移至高压均质机中， 于 150MPa 压力下循环均化 3 次， 得白 色均一乳状液， 将制备的乳剂封装于喷雾器中， 置于凉暗处储存。
18、。 0015 本发明提供的上述防治哮喘的喷雾剂及其制备方法， 由于其由一味中药的有效部 位当归挥发油制成， 当归挥发油易于挥发、 局部刺激性较小， 更适合于局部喷雾吸入的 方式给药， 使药物直接到达病变部位， 由于局部药物浓度比较高而起效快、 疗效好 ； 吸收进 入血液循环的药量比较少， 全身不良反应也相应比较轻。 与目前常用的化学药品相比， 避免 了 2 受体激动药与黄嘌呤类药物在治疗哮喘时引起的心脏兴奋、 甚至心律失常的不良反 应， 与此相反， 对慢性哮喘所致的肺动脉高压诱发的肺心病以及心律失常等哮喘常见的并 发症， 当归挥发油还有较好的治疗作用 ； 同时， 本发明克服了长期使用糖皮质激素。
19、引起的多 种严重不良反应， 更适合于哮喘间歇期预防性长期用药。 0016 下面结合实施例及主要药效学实验对本发明作进一步说明。 具体实施方式 0017 实施例 1 ： 喷雾剂的制备 准确称取吐温 -80 0.4g 置于研钵中， 准确称量当归挥发油 0.2mL 及维生素 E 0.05g 加 入上述研钵中， 研磨混合均匀， 之后边加入与挥发油等量的 35蒸馏水边研磨至混合均匀 得初乳， 将上述初乳转移至高速组织捣碎匀浆机中 ； 准确称取维生素 C 0.1g 以及香蕉香精 0.02g 加入到高速组织捣碎匀浆机中 ； 之后加蒸馏水于高速组织捣碎匀浆机中， 将其定容 至 100mL， 18000 转 /。
20、 分钟搅拌速度下乳化 3 分钟后将其转移至高压均质机中， 于 150MPa 压 力下循环均化 3 次， 得白色均一乳状液 ； 将制备的乳剂封装于喷雾器中， 每瓶 20mL， 含当归 挥发油 0.04mL， 置于凉暗处储存。 0018 实施例 2 ： 喷雾剂的制备 准确称取泊洛沙姆 -188 0.5g 置于研钵中， 准确称量当归挥发油 0.5mL 及维生素 E 0.05g 加入上述研钵中， 研磨混合均匀， 之后边加入与挥发油等量的 35蒸馏水边研磨至 混合均匀得初乳， 将上述初乳转移至高速组织捣碎匀浆机中 ； 准确称取维生素 C 0.1g， 以 及香蕉香精 0.01g、 苹果香精 0.01g 和。
21、玉米香精 0.01g 加入到高速组织捣碎匀浆机中 ； 之后 加蒸馏水于高速组织捣碎匀浆机中， 将其定容至 100mL， 20000 转 / 分钟搅拌速度下乳化 5 分钟后将其转移至高压均质机中， 于150MPa压力下循环均化3次， 得白色均一乳状液 ； 将制 备的乳剂封装于喷雾器中， 每瓶 20mL， 含当归挥发油 0.1mL， 置于凉暗处储存。 0019 实施例 3 ： 喷雾剂的制备 准确称取泊洛沙姆 -188 0.5g 和吐温 -80 0.5g 置于研钵中， 准确称量当归挥发油 1.0mL及维生素E 0.05g加入上述研钵中， 研磨混合均匀， 之后边加入与挥发油等量的35 蒸馏水边研磨至混。
22、合均匀得初乳， 将上述初乳转移至高速组织捣碎匀浆机中 ； 准确称取亚 硫酸氢钠 0.15g， 以及香蕉香精 0.03g 和玉米香精 0.03g 加入到高速组织捣碎匀浆机中 ； 之 后加蒸馏水于高速组织捣碎匀浆机中， 将其定容至100mL， 25000转/分钟搅拌速度下乳化 6 分钟后将其转移至高压均质机中， 于 150MPa 压力下循环均化 3 次， 得白色均一乳状液 ； 将 制备的乳剂封装于喷雾器中， 每瓶 20mL， 含当归挥发油 0.2mL， 置于凉暗处储存。 说 明 书 CN 102302528 A CN 102302529 A4/7 页 6 0020 实施例 4 ： 喷雾剂的制备 准。
23、确称取大豆磷脂 2.0g 和蛋黄磷脂 2.0g 置于研钵中， 准确称量当归挥发油 5.0mL 及 维生素 E 0.06g 加入上述研钵中， 研磨混合均匀， 之后边加入与挥发油等量的 35蒸馏水 边研磨至混合均匀得初乳， 将上述初乳转移至高速组织捣碎匀浆机中 ； 准确称取维生素 C 0.1g 和亚硫酸氢钠 0.1g， 以及苹果香精 0.05g 和玉米香精 0.05g 加入到高速组织捣碎匀浆 机中 ； 之后加蒸馏水于高速组织捣碎匀浆机中， 将其定容至 100mL， 25000 转 / 分钟搅拌速 度下乳化 8 分钟后将其转移至高压均质机中， 于 150MPa 压力下循环均化 3 次， 得白色均一 。
24、乳状液 ； 将制备的乳剂封装于喷雾器中， 每瓶 20mL， 含当归挥发油 1.0mL， 置于凉暗处储存。 0021 实施例 5 ： 喷雾剂的制备 准确称取泊洛沙姆 -188 2.0g、 大豆磷脂 2.0g 和蛋黄磷脂 2.0g 置于研钵中， 准确称 量当归挥发油 10mL 及维生素 E 0.07g 加入上述研钵中， 研磨混合均匀， 之后边加入与挥发 油等量的 35蒸馏水边研磨至混合均匀得初乳， 将上述初乳转移至高速组织捣碎匀浆机 中 ； 准确称取维生素 C0.15g 和亚硫酸氢钠 0.1g， 以及香蕉香精 0.05g、 苹果香精 0.05g 和 玉米香精 0.05g， 加入到高速组织捣碎匀浆机。
25、中 ； 之后加蒸馏水于高速组织捣碎匀浆机中， 将其定容至 100mL， 28000 转 / 分钟搅拌速度下乳化 6 分钟后将其转移至高压均质机中， 于 150MPa 压力下循环均化 3 次， 得白色均一乳状液 ； 将制备的乳剂封装于喷雾器中， 每瓶 20mL， 含当归挥发油 2.0mL， 置于凉暗处储存。 0022 实施例 6 ： 喷雾剂的制备 准确称取大豆磷脂 3.0g、 蛋黄磷脂 3.0g 和吐温 -80 2.0g 置于研钵中， 准确称量当归 挥发油 15mL 及维生素 E 0.07g 加入上述研钵中， 研磨混合均匀， 之后边加入与挥发油等量 的 35蒸馏水边研磨至混合均匀得初乳， 将上述。
26、初乳转移至高速组织捣碎匀浆机中 ； 准确 称取维生素 C 0.15g 和亚硫酸氢钠 0.15g， 以及香蕉香精 0.08g、 苹果香精 0.06g 和玉米香 精 0.06 g 加入到高速组织捣碎匀浆机中 ； 之后加蒸馏水于高速组织捣碎匀浆机中， 将其定 容至100mL， 28000转/分钟搅拌速度下乳化8分钟后将其转移至高压均质机中， 于150MPa 压力下循环均化 3 次， 得白色均一乳状液 ； 将制备的乳剂封装于喷雾器中， 每瓶 20mL， 含当 归挥发油 3.0mL， 置于凉暗处储存。 0023 以下为本发明喷雾剂实施例的主要药效学动物实验 ： 1实施例 1、 实施例 3 和实施例 4 。
27、制备的当归挥发油对豚鼠离体气管平滑肌作用的实 验研究 1.1 实验材料 ： 受试药 ： 利用 CO2超临界提取法提取当归挥发油， 提取率为 1.6% ； 采用 实施例 1（0.2%） 、 实施例 3（1.0%） 和实施例 4（5.0%） 的方法来制备受试药， 即每 100mL 乳 状液所含挥发油相当于12.5g、 62.5g和312.5g当归原药材中所含的挥发油。 当归水溶性部 位 ： 将提取挥发油的当归药材用水煎煮法提取水溶性部位， 提取率为 19.2% ； 将水溶性部位 用蒸馏水配制成12%的溶液， 即每100mL相当于62.5g当归原药材中所含的水溶性部位。 组 胺 ： Sigma 化学。
28、试剂公司， 批号 ： 951007 ； 乙酰胆碱 ： Sigma 化学试剂公司， 批号 ： 951209。豚 鼠， 兼用， 体重 35050 克， 由兰州生物制品所提供， 动物合格证 ： 医动字第 14-003 号。 0024 1.2 实验方法 1.2.1 实验系统的装配 ： 参考气管容积法 （陈奇 . 中药药理研究方法学 M. 北京 : 人 民卫生出版社 ,1996:646-648.） ， 取豚鼠用棒击其后脑至昏， 立即刨开颈至胸部皮肤肌肉， 说 明 书 CN 102302528 A CN 102302529 A5/7 页 7 取下从喉以下至气管分叉处的完整气管段， 放入克氏液中， 剥去外附。
29、组织， 用营养液冲洗净 管腔内容物。 用棉线将气管段一端固定在型管底端， 一端固定于直行厚壁毛细管一端， 将 整个系统充满营养液并放入 20ml 恒温 （370.5） 麦氏浴管中， 浴管底端通氧气， 每分钟 约 15 20 个气泡。 0025 1.2.2 实施例 1 制备的当归挥发油乳状液对气管平滑肌的作用 ： 在上述条件下稳 定 30 分钟后， 记下营养液在毛细管中的高度， 先向麦氏浴管中加 0.05% 组胺 0.1ml， 记录 5 分钟之内毛细管中液面上升的最高值， 之后加入实施例 1 制备的当归挥发油乳状液 0.5mL， 记录 5 分钟之内液面的下降值。用 37营养液冲洗气管 2 3 次。
30、， 稳定 20 分钟左右重复上 述操作， 记录 0.05% 组胺使毛细管液面上升的毫米数和 12% 当归水溶性部位与 0.5% 泊洛沙 姆 -188 使液面下降的毫米数。同样， 如上述操作记录实施例 1 制备的当归挥发油乳状液对 0.05% 乙酰胆碱引起气管痉挛的解痉作用。按下式计算受试药对痉挛气管的抑制百分率。 0026 1.2.3 实施例 3 和实施例 4 制备的当归挥发油乳状液对气管平滑肌的作用 ： 按 1.2.1 和 1.2.2 项下的方法就实施例 3 和实施例 4 制备的当归挥发油乳状液对气管平滑肌 的作用进行实验研究， 结果见表 1。 0027 1.3 统计方法 ： 各组实验数据以。
31、s表示， 采用SPSS12.0统计软件进行分析， 组 间比较采用 t 检验， 以P 0.05 和P 0.01 表示有统计学意义。 0028 1.4 实验结果 ： 与 0.5% 泊洛沙姆 -188 组比较， 按实施例 1、 实施例 3 和实施例 4 所述的方法制备的当归挥发油乳状液对豚鼠气管痉挛性收缩的抑制作用有统计学意义 （P 0.05） ， 而当归水溶性部位的解痉作用不明显。结果见表 1。 0029 表 1 实施例 1、 实施例 3 和实施例 4 制备的当归挥发油乳状液 对豚鼠离体气管平滑肌作用的实验研究 (s，n 10) 注 ： 与 0.5% 泊洛沙姆 -188 组比较， *P 0.05，。
32、*P 0.01 2实施例 2 与实施例 3 制备的当归挥发油喷雾剂雾化吸入对豚鼠引喘潜伏期影响的 实验研究 说 明 书 CN 102302528 A CN 102302529 A6/7 页 8 2.1 试验材料 ： 受试药 ： 利用 CO2超临界提取法提取当归挥发油， 提取率为 1.6% ； 采用 实施例 2（0.5%） 与实施例 3（1.0%） 的方法来制备当归挥发油乳状液， 即每 100mL 乳状液 所含挥发油相当于 31.3g 与 62.5g 当归原药材中所含的挥发油 ； 当归水溶性部位 ： 将提取 挥发油的当归药材用水煎煮法提取水溶性部位， 提取率为 19.2% ； 用蒸馏水配制成 1。
33、2% 的 溶液， 即每 100mL 相当于 62.5g 当归原药材中所含的水溶性部位。组胺 ： Sigma 化学试剂 公司， 批号 ： 951007 ； 乙酰胆碱 ： Sigma 化学试剂公司， 批号 ： 951209。豚鼠， 兼用， 体重 15030 克， 由兰州生物制品所提供， 动物合格证 ： 医动字第 14-003 号。 0030 2.2 实验方法 2.2.1 筛选分组 ： 参考整体动物药物引喘法 （徐淑云 . 药理实验方法学 M. 北京 : 人 民卫生出版社 ,1982:911-913.） ， 取体重 150g30g 的健康豚鼠， 兼用。先放入玻璃钟 罩 （容积约 4L） 内熟悉环境，。
34、 待其安静后以 400mmHg 的压力喷入 2% 乙酰胆碱与 0.1% 组胺 1:1 混合液 15 秒钟。观测豚鼠出现哮喘发作、 呼吸极度困难、 甚至抽搐翻滚的时间， 即引喘 潜伏期， 超过 120 秒仍无反应者为不敏感豚鼠， 弃之不用。将预选合格的豚鼠按体重性别随 机分为 5 组 ： 即 0.5% 泊洛沙姆 -188 组、 舒喘灵组、 当归水溶性部位组、 实施例 2 制备的当归 挥发油喷雾剂组与实施例 3 制备的当归挥发油喷雾剂组。 0031 2.2.2 动物给药 ： 上述各组实验动物每天每只雾化 （400mmHg）药物 5mL， 吸入 15min ： 0.5% 泊洛沙姆 -188 组吸入 。
35、0.5% 泊洛沙姆 -188、 舒喘灵组吸入 0.02mg/mL 舒喘灵、 当归水溶性部位组吸入 12% 当归水溶性部位、 实施例 2 制备的当归挥发油喷雾剂组与实施 例 3 制备的当归挥发油喷雾剂组吸入 0.5% 与 1.0% 当归挥发油乳状液。每天 1 次， 连续 10 天。 0032 2.2.3 测定引喘潜伏期 ： 实验第 10 天动物雾化吸入药物 15min 后， 按筛选动物的 方法重新测定引喘潜伏期。如果超过 6min 仍无抽搐翻滚的症状时按 6min 计算。 0033 2.3 统计方法 ： 各组实验数据以s表示， 采用SPSS12.0统计软件进行分析， 组 间比较采用 t 检验， 。
36、以P 0.05 和P 0.01 表示有统计学意义。 0034 表 2 实施例 2 与实施例 3 制备的当归挥发油喷雾剂雾化吸入 对豚鼠引喘潜伏期的影响 (s，n 8) 注 ： 与 0.5% 泊洛沙姆 -188 组比较， *P 0.01 2.4 实验结果 ： 由表 2 可见， 舒喘灵、 按实施例 2 制备的当归挥发油喷雾剂与按实施例 3 制备的当归挥发油喷雾剂均能显著延长豚鼠的哮喘发作潜伏期 （P 0.01） ， 当归水溶性 说 明 书 CN 102302528 A CN 102302529 A7/7 页 9 部位对豚鼠引喘潜伏期无明显影响。实验表明按实施例 2 制备的当归挥发油喷雾剂和按实 施例 3 制备的当归挥发油喷雾剂具有缓解乙酰胆碱和组胺诱发豚鼠气管痉挛的作用。 说 明 书 CN 102302528 A 。