通过氢亚磷酸单酯中间体合成糖1单磷酸的方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103509067 A (43)申请公布日 2014.01.15 CN 103509067 A (21)申请号 201310469014.3 (22)申请日 2013.10.10 C07H 11/04(2006.01) C07H 1/02(2006.01) (71)申请人 江西科技师范大学 地址 330013 江西省南昌市昌北经济开发区 枫林大道 605 号 (72)发明人 孙麒 龚珊珊 李星见 蒲守智 刘刚 刘国栋 (74)专利代理机构 南昌新天下专利商标代理有 限公司 36115 代理人 施秀瑾 (54) 发明名称 通过氢亚磷酸单酯中间体合成糖 -1- 单磷酸 的。

2、方法 (57) 摘要 本发明属于化学合成领域， 涉及糖 -1- 单磷 酸合成。本发明方法包括 1） 咪唑与三氯化磷反 应得亚磷酸三咪唑， 取亚磷酸三咪唑与端位脱保 护的乙酰化糖原料反应， 原位水解得到相应的糖 基 -1- 氢亚磷酸单酯 ； 2） 用N,O- 双 （三甲基硅基） 乙酰胺对糖基 -1- 氢亚磷酸单酯进行硅基化得到 亚磷酸三酯中间体， 有机碱 / 碘单质体系氧化， 原 位水解得到乙酰基保护的糖 -1- 单磷酸 ； 3） 甲醇 钠脱除乙酰基保护基， 经过葡聚糖凝胶色谱纯化， 及离子交换得到相应的高纯度糖 -1- 单磷酸。本 发明方法经过三个步骤得到糖 -1- 单磷酸， 总产 率可以达到。

3、 75%-85%。避免了以往方法中通过氢 化脱除苄基带来的损失， 特别适用于糖 -1- 单磷 酸的大量制备。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103509067 A CN 103509067 A 1/1 页 2 1. 通过氢亚磷酸单酯中间体合成糖 -1- 单磷酸的方法， 其特征包括如下步骤 ： 1） 咪唑 与三氯化磷反应得亚磷酸三咪唑， 取亚磷酸三咪唑与端位脱保护的 L- 型或 D- 型乙酰化糖 原料反应， 原位水解得到相应的糖基。

4、 -1- 氢亚磷酸单酯 ； 所述端位脱保护的 L- 乙酰化糖原 料为， 其中 R1=OAc， R2=H 或 R1=H， R2=OAc ； D- 乙酰化糖原料为 ， 其中R5=OAc, R6=H, R7=OAc, R8=H或R5=H, R6=OAc, R7=H, R8=OAc 或R5=H, R6=OAc, R7=OAc, R8=H ； 2） 用N,O- 双 （三甲基硅基） 乙酰胺 BSA 对糖基 -1- 氢亚磷酸单酯进行硅基化得到亚 磷酸三酯中间体， 有机碱 / 碘单质体系氧化， 原位水解得到乙酰基保护的糖 -1- 单磷酸 ； 3） 甲醇钠脱除乙酰基保护基， 经过葡聚糖凝胶色谱纯化， 及离子交换。

5、得到相应的高纯度 糖 -1- 单磷酸。 2. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于所述步骤 1） 中， 三氯化磷与咪唑的摩尔比例 为 1 ： 6， 端位脱保护的乙酰化糖原料与亚磷酰三咪唑的摩尔比例为 1 ： 5 至 1 ： 10， 反应溶剂 选自无水二氯甲烷、 乙腈， 乙醚、 四氢呋喃、 或 1,2- 二氯乙烷任一种， 反应温度为 0-30， 反应时间为 2 小时至 4 小时。 3.如权利要求1所述的方法， 其特征在于所述步骤1） 中， 原位水解时， 端位脱保护的乙 酰化糖原料与水的摩尔比例为 1 ： 5 至 1 ： 20， 反应温度在 0-30之间， 反应时间是 5 分钟至 15 分钟。。

6、 4. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于所述步骤 2） 中， 硅基化试剂使用N,O- 双 （三 甲基硅基） 乙酰胺BSA， 糖基-1-氢亚磷酸单酯与BSA的摩尔比例为1 ： 3至1 ： 5， 反应溶剂选 自无水吡啶， 四氢呋喃， 二氯甲烷， 或乙腈任一种， 反应温度在 0-30之间， 反应时间为 10 分钟至 30 分钟。 5. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于所述步骤 2）中， 有机碱 / 碘单质体系氧 化时， 有机碱选自三甲胺、 三乙胺、 三正丙胺、 三异丙胺、 三正丁胺、 或二异丙基乙基胺， 糖 基 -1- 氢亚磷酸单酯与有机碱的摩尔比例为 1 ： 3 至 1 ： 5， 。

7、与碘单质的摩尔比例为 1 ： 1 至 1 ： 1.5， 反应温度在 0-30之间， 反应时间为 10 分钟至 30 分钟。 6. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于所述步骤 2） 中， 水解时， 糖基 -1- 氢亚磷酸 单酯与水的摩尔比例为 1 ： 10 至 1 ： 20， 反应温度在 0-30之间， 反应时间为 5 分钟至 30 分 钟。 7.如权利要求1所述的方法， 其特征在于所述步骤3） 中， 使用甲醇钠脱除乙酰基， 甲醇 钠与乙酰化糖 -1- 单磷酸的摩尔比例为 6 ： 1 至 10 ： 1， 反应溶剂为无水甲醇或乙醇， 反应温 度在 0-30之间， 反应时间为 2 小时至 6 。

8、小时。 8. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于整个合成反应在氩气保护下进行。 权 利 要 求 书 CN 103509067 A 2 1/5 页 3 通过氢亚磷酸单酯中间体合成糖 -1- 单磷酸的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种通过糖基-1-氢亚磷酸单酯中间体合成糖-1-单磷酸的新型合成 方法。 技术背景 0002 糖是细胞结构的重要组成部分和生物体内能量贮存的主要形式， 参与生物体内很 多重要的信号传递过程。糖进入细胞后在磷酸化酶作用下成为糖单磷酸， 它是糖代谢过程 中重要的中间体， 如葡萄糖 -6- 磷酸是许多糖代谢途径 （无氧酵解、 有氧氧化、 磷酸戊糖途 径、 糖原合成、。

9、 糖原分解） 的中间体。此外， 在酶化学合成中利用糖基转移酶制备各种寡糖、 糖缀合物和含糖基天然产物时使用的糖基供体必须为活化的核苷二磷酸糖。而糖 -1- 单 磷酸则是合成核苷二磷酸糖的重要原料。但是， 由于缺乏对这类化合物有效的化学合成方 法， 其市场售价非常昂贵， 且供应量少， 大部分的糖 -1- 单磷酸需要通过多步骤合成， 产率 很低。 0003 目前， 化学合成糖 -1- 单磷酸主要有四种方法。第一种是 Wong 等人报道使用端位 脱保护糖原料与亚磷酰胺二苄酯在酸催化条件下发生醇解反应得到亚磷酸三酯， 然后原位 氧化得到双苄基保护的糖-1-单磷酸， 最后脱保护得到糖-1-单磷酸的方法。。

10、 该方法总产率 通常为50%左右， 但亚磷酰胺二苄酯需要特殊制备。 第二种是Nikolaev等人报道使用1-卤 代糖原料与磷酸二苄酯反应得到双苄基保护的糖 -1- 单磷酸， 然后脱保护得到糖 -1- 单磷 酸的方法。 该方法总产率较低， 一般在40%左右。 第三种是Fairbanks等人报道使用端位脱 保护糖原料与二异丙基氨基锂以及焦磷酸四苄酯反应， 得到双苄基保护的糖 -1- 单磷酸， 然后脱保护得到糖 -1- 单磷酸的方法。该方法反应总产率通常为 60% 左右， 但是反应条件 苛刻， 而且焦磷酸四苄酯价格非常昂贵。第四种是通过糖基 -1- 氢亚磷酸二酯， 然后原位氧 化， 脱保护得到糖 -。

11、1- 单磷酸的方法， Brockhausen 等报道的产率仅为 8%。因此， 以上方法 在实际应用中大量制备糖 -1- 单磷酸时都存在一定的限制。因此， 建立通用、 简单和高效的 糖 -1- 单磷酸化学合成方法具有重要的实际应用价值和意义。 发明内容 0004 本发明的目的是为一系列糖 -1- 单磷酸的化学合成提供一种新颖、 通用和高效的 方法。 0005 本发明涉及的糖基 -1- 单磷酸的合成包括以下三个步骤 ： 1） 咪唑与三氯化磷反应 得亚磷酸三咪唑， 取亚磷酸三咪唑与端位脱保护的乙酰化糖原料 （1-2， 9-11） 反应， 原位水 解得到糖基 -1- 氢亚磷酸单酯 （3-4， 12-1。

12、4） ， 产率为 90-95% ； 2） 用N,O- 双 （三甲基硅基） 乙 酰胺 （BSA） 对糖基 -1- 氢亚磷酸单酯进行硅基化得到亚磷酸三酯中间体， 有机碱 / 碘单质 体系氧化， 原位水解得到乙酰基保护的糖 -1- 单磷酸 （5-6， 15-17） ， 产率为 85-89% ； 3） 甲醇 钠脱除乙酰基保护基， 经过葡聚糖凝胶色谱纯化， 及离子交换得到5种高纯度糖-1-单磷酸 （7-8， 18-20） ， 产率为 96-98%。 说 明 书 CN 103509067 A 3 2/5 页 4 0006 如图 1、 图 2 所示， 本方法步骤一中， 三氯化磷与咪唑的摩尔比例为 1 ： 6。

13、， 端位脱保 护的乙酰化糖原料 （1-2， 9-11） 与亚磷酰三咪唑的摩尔比例为 1 ： 5 至 1 ： 10， 反应溶剂选自 无水二氯甲烷、 乙腈、 乙醚、 四氢呋喃、 或 1,2- 二氯乙烷任一种， 反应温度为 0-30， 反应 时间为 2 小时至 4 小时 ； 水解时， 端位脱保护的乙酰化糖原料与水的摩尔比例为 1 ： 5 至 1 ： 20， 反应温度在 0-30之间， 反应时间是 5 分钟至 15 分钟。 0007 本方法步骤二中， 硅基化试剂使用N,O-双 （三甲基硅基） 乙酰胺 （BSA） ， 糖基-1-氢 亚磷酸单酯 （3-4， 12-14） 与BSA的摩尔比例为1 ： 3至1。

14、 ： 5， 反应溶剂为无水吡啶， 四氢呋喃， 二氯甲烷， 乙腈， 反应温度在 0-30之间， 反应时间为 10 分钟至 30 分钟。有机碱 / 碘单质 体系氧化时， 有机碱可以使用三甲胺、 三乙胺、 三正丙胺、 三异丙胺、 三正丁胺或二异丙基乙 基胺， 糖基-1-氢亚磷酸单酯与有机碱的摩尔比例为1 ： 3至1 ： 5， 与碘单质的摩尔比例为1 ： 1 至 1 ： 1.5， 反应温度在 0-30之间， 反应时间为 10 分钟至 30 分钟 ； 水解时， 糖基 -1- 氢亚 磷酸单酯与水的摩尔比例为 1 ： 10 至 1 ： 20， 反应温度在 0-30之间， 反应时间为 5 分钟至 30 分钟。。

15、 0008 本方法步骤三中， 使用甲醇钠脱除乙酰基， 甲醇钠与乙酰化糖 -1- 单磷酸 （5-6， 15-17） 的摩尔比例为 6 ： 1 至 10 ： 1， 反应溶剂为无水甲醇或乙醇， 反应温度在 0-30之间， 反应时间为 2 小时至 6 小时。 0009 为了达到更好的技术效果， 整个合成反应在氩气保护下进行。 0010 本发明专利预先使用廉价的三氯化磷与咪唑反应合成亚磷酸三咪唑， 不需纯化直 接与乙酰化糖原料反应高产率的得到糖基 -1- 氢亚磷酸单酯中间体， 与以往文献报道的方 法相比， 糖基 -1- 氢亚磷酸单酯的合成产率由 62% 提高到 90% 以上。糖基 -1- 氢亚磷酸单 酯。

16、原位一锅硅基化， 碘氧化， 水解得到保护的糖-1-单磷酸， 反应时间在1小时左右， 且反应 分离产率可以达到 85-89%。最后利用甲醇钠脱除乙酰基高产率的得到糖 -1- 单磷酸。该新 方法经过三个步骤得到糖-1-单磷酸， 总产率可以达到75%-85%。 该方法可以避免了以往方 法中通过氢化脱除苄基带来的损失， 特别适用于糖 -1- 单磷酸的大量制备。 附图说明 0011 图 1. L- 糖 -1- 单磷酸的合成方法。 0012 图 2. D- 糖 -1- 单磷酸的合成方法。 具体实施方式 0013 实施例 1: -L- 鼠李糖 -1- 单磷酸二钠盐 7 的合成 ： 1） 在氩气保护下， 将咪。

17、唑 （14.1 g， 207 mmol） 溶于干燥的二氯甲烷 （100 mL） ， 在 0 C 下加入三氯化磷 （3.0 mL， 34.5 mmol） ， 反应 0.5 小时得到亚磷酸三咪唑， 然后向反应瓶中 滴入 2,3,4-O- 三乙酰基 -L- 鼠李糖 （2.0 g， 6.9 mmol） 的干燥二氯甲烷溶液 （20 mL） ， 升至 30 C 继续搅拌 2 小时， 加入 H2O（0.62 mL） 搅拌 5 分钟， 用二氯甲烷 （70 mL） 稀释 反应液， 然后用 pH 值为 5 的氯化铵水溶液 （50 mL2） 洗， 再用二氯甲烷 （70 mL2） 萃取水 相， 收集并合并有机相， 用。

18、无水 Na2SO4干燥， 减压浓缩得到 2,3,4-O- 三乙酰基 -L- 鼠李 糖-1-氢亚磷酸单酯粗品， 柱层析分离 （二氯甲烷 ： 甲醇 = 20 ： 1加入0.5% 三乙胺） ， 得到无 说 明 书 CN 103509067 A 4 3/5 页 5 色油状的 2,3,4-O- 三乙酰基 -L- 鼠李糖 -1- 氢亚磷酸单酯 2.98 g， 产率为 95%。 0014 2） 在氩气保护下， 将 2,3,4-O- 三乙酰基 -L- 鼠李糖 -1- 氢亚磷酸单酯 （2.5 g， 5.5 mmol） 溶于干燥的吡啶 （30 mL） ， 加入 BSA（6.75 mL， 27.5 mmol） ， 。

19、30 C 硅基化 10 分钟， 然后加入三乙胺 （3.8 mL， 27.5 mmol） ， 再加入碘单质 （2.1 g， 8.25 mmol） ， 当反应液 的颜色不再褪色时， 继续反应 5 分钟， 最后加入 H2O（2 mL） 搅拌 5 分钟后， 减压浓缩反应 液， 得到2,3,4-O-三乙酰基-L-鼠李糖-1-单磷酸粗品， 柱层析分离 （二氯甲烷 ： 甲醇 = 20 ： 1 至 5 ： 1 加入 0.5% 三乙胺） 得到 2,3,4-O- 三乙酰基 -L- 鼠李糖 -1- 单磷酸三乙胺 盐 2.3 g， 产率为 89%。 0015 3） 在氩气保护下， 将 2,3,4-O- 三乙酰基 -L。

20、- 鼠李糖 -1- 单磷酸三乙胺盐 （2.0 g， 4.25 mmol） 溶于干燥的甲醇 （30 mL） ， 加入甲醇钠 （1.38 g， 25.5 mmol） 配制的甲醇钠甲 醇溶液 （20 mL） ， 30 C 反应 2 小时， 用盐酸甲醇溶液 （0.1 M） 中和至 pH 为 7， 减压浓缩反 应液， 得到 -L- 鼠李糖 -1- 单磷酸粗品， 葡聚糖凝胶 （Sephadex LH-20） 柱层析分离 （去离 子水） 得到 -L- 鼠李糖 -1- 单磷酸纯品， 最后经钠离子型阳离子交换树脂交换洗脱， 合并 含产物洗脱液， 减压浓缩得到 -L- 鼠李糖 -1- 单磷酸二钠盐白色固体 1.2。

21、 g， 产率为 98%。 0016 实施例 2: 6- 脱氧 -L- 塔罗糖 -1- 单磷酸二钠盐 8 的合成 ： 1） 在氩气保护下， 将咪唑 （14.1 g， 207 mmol） 溶于干燥的 1,2- 二氯乙烷 （100 mL） ， 在 0 C 下加入三氯化磷 （3.0 mL， 34.5 mmol） ， 反应 0.5 小时得到亚磷酸三咪唑， 然后向反 应瓶中滴入 2,3,4-O- 三乙酰基 -6- 脱氧 -L- 塔罗糖 （2.0 g， 6.9 mmol） 的干燥 1,2- 二 氯乙烷溶液 （20 mL） ， 在 0 C 下继续搅拌 4 小时， 加入 H2O（1.24 mL） 搅拌 15 分。

22、钟， 用 1,2- 二氯乙烷 （70 mL） 稀释反应液， 然后用 pH 值为 5 的氯化铵水溶液 （50 mL2） 洗， 再 用二氯甲烷 （70 mL2） 萃取水相， 收集并合并有机相， 用无水 Na2SO4干燥， 减压浓缩得到 2,3,4-O-三乙酰基-6-脱氧-L-塔罗糖-1-氢亚磷酸单酯粗品， 柱层析分离 （二氯甲烷 ： 甲醇 = 20 ： 1 加入 0.5% 三乙胺） ， 得到无色油状的 2,3,4-O- 三乙酰基 -6- 脱氧 -L- 塔 罗糖 -1- 氢亚磷酸单酯 2.92 g， 产率为 93%。 0017 2） 在氩气保护下， 将 2,3,4-O- 三乙酰基 -6- 脱氧 -L。

23、- 塔罗糖 -1- 氢亚磷酸单 酯 （2.5 g， 5.5 mmol） 溶于干燥的四氢呋喃 （30 mL） ， 加入 BSA（4.05 mL， 16.5 mmol） ， 30 C 硅基化 10 分钟， 然后加入三正丙胺 （3.2 mL， 16.5 mmol） ， 再加入碘单质 （1.68 g， 6.6 mmol） ， 当反应液的颜色不再褪色时， 继续反应 5 分钟， 最后加入 H2O （2 mL） 搅拌 5 分钟后， 减压浓缩反应液， 得到 2,3,4-O- 三乙酰基 -6- 脱氧 -L- 塔罗糖 -1- 单磷酸粗品， 柱层析 分离 （二氯甲烷 ： 甲醇 = 20 ： 1 至 5 ： 1 加入。

24、 0.5% 三乙胺） 得到 2,3,4-O- 三乙酰基 -6- 脱 氧 -L- 塔罗糖 -1- 单磷酸三乙胺盐 2.25 g， 产率为 87%。 0018 3） 在氩气保护下， 将 2,3,4-O- 三乙酰基 -6- 脱氧 -L- 塔罗糖 -1- 单磷酸三乙 胺盐 （2.0 g， 4.25 mmol） 溶于干燥的甲醇 （30 mL） ， 加入甲醇钠 （2.3 g， 42.5 mmol） 配制的 甲醇钠甲醇溶液 （30 mL） ， 20 C 反应 3 小时， 用盐酸甲醇溶液 （0.1 M） 中和至 pH 为 7， 减 压浓缩反应液， 得到6-脱氧-L-塔罗糖-1-单磷酸粗品， 葡聚糖凝胶 （Se。

25、phadex LH-20） 柱层析分离 （去离子水） 得到 6- 脱氧 -L- 塔罗糖 -1- 单磷酸纯品， 最后经钠离子型阳离 子交换树脂交换洗脱， 合并含产物洗脱液， 减压浓缩得到 6- 脱氧 -L- 塔罗糖 -1- 单磷酸 二钠盐白色固体 1.19 g， 产率为 97%。 说 明 书 CN 103509067 A 5 4/5 页 6 0019 实施例 3: -D- 甘露糖 -1- 单磷酸二钠盐 18 的合成 ： 1） 在氩气保护下， 将咪唑 （28.2 g， 414 mmol） 溶于干燥的乙腈 （150 mL） ， 在 0 C 下 加入三氯化磷 （6.0 mL， 69 mmol） ， 反。

26、应 0.5 小时得到亚磷酸三咪唑， 然后向反应瓶中滴 入 2,3,4,6-O- 四乙酰基 -D- 甘露糖 （2.4 g， 6.9 mmol） 的干燥乙腈溶液 （20 mL） ， 升至 30 C 继续搅拌 2 小时， 加入 H2O（0.62 mL） 搅拌 5 分钟。减压浓缩反应液， 用二氯甲烷 （150 mL） 溶解残余物， 然后用 pH 值为 5 的氯化铵水溶液 （50 mL2） 洗， 再用二氯甲烷 （70 mL2） 萃取水相， 收集并合并有机相， 用无水 Na2SO4干燥， 减压浓缩得到 2,3,4,6-O- 四乙 酰基-D-甘露糖-1-氢亚磷酸单酯粗品， 柱层析分离 （二氯甲烷 ： 甲醇 。

27、= 20 ： 1加入0.5% 三乙胺） ， 得到无色油状的 2,3,4,6-O- 四乙酰基 -D- 甘露糖 -1- 氢亚磷酸单酯 3.26 g， 产率为 92%。 0020 2） 在氩气保护下， 将2,3,4,6-O-四乙酰基-D-甘露糖-1-氢亚磷酸单酯 （2.82 g， 5.5 mmol） 溶于干燥的乙腈 （40 mL） ， 加入 BSA（5.4 mL， 22.0 mmol） ， 在 0 C 下硅基化 30 分钟， 然后加入三乙胺 （3.1 mL， 22.0 mmol） ， 再加入碘单质 （1.54 g， 6.0 mmol） ， 当反应 液的颜色不再褪色时， 继续反应 30 分钟。最后在 。

28、0 C 下加入 H2O （1 mL） 搅拌 30 分钟， 减压浓缩反应液， 得到 2,3,4,6-O- 四乙酰基 -D- 甘露糖 -1- 单磷酸粗品， 柱层析分离 （二氯甲烷 ： 甲醇 = 20 ： 1 至 5 ： 1 加入 0.5% 三乙胺） 得到 2,3,4,6-O- 四乙酰基 -D- 甘 露糖 -1- 单磷酸三乙胺盐 2.5 g， 产率为 86%。 0021 3）在氩气保护下， 将 2,3,4,6-O- 四乙酰基 -D- 甘露糖 -1- 单磷酸三乙胺盐 （2.25 g， 4.25 mmol） 溶于干燥的乙醇 （30 mL） ， 加入甲醇钠 （1.84 g， 34 mmol） 配制的甲醇 。

29、钠乙醇溶液 （25 mL） ， 0 C 反应 6 小时， 用盐酸乙醇溶液 （0.1 M） 中和至 pH 为 7， 减压浓 缩反应液， 得到 -D- 甘露糖 -1- 单磷酸粗品， 葡聚糖凝胶 （Sephadex LH-20） 柱层析分离 （去离子水） 得到 -D- 甘露糖 -1- 单磷酸纯品， 最后经钠离子型阳离子交换树脂交换洗脱， 合并含产物洗脱液， 减压浓缩得到-D-甘露糖-1-单磷酸二钠盐白色固体1.25 g， 产率为 97%。 0022 实施例 4: D- 半乳糖 -1- 单磷酸二钠盐 19 的合成 ： 1） 在氩气保护下， 将咪唑 （14.1 g， 207 mmol） 溶于干燥的四氢呋。

30、喃 （100 mL） ， 在 0 C 下加入三氯化磷 （3.0 mL， 34.5 mmol） ， 反应 0.5 小时得到亚磷酸三咪唑， 然后向反应瓶中 滴入 2,3,4,6-O- 四乙酰基 -D- 半乳糖 （2.4 g， 6.9 mmol， := 2.2:1） 的干燥四氢呋喃 溶液 （20 mL） ， 在 0 C 下继续搅拌 4 小时， 加入 H2O（1.24 mL） 搅拌 15 分钟。减压浓缩 反应液， 用二氯甲烷 （150 mL） 溶解残余物， 然后用 pH 值为 5 的氯化铵水溶液 （50 mL2） 洗， 再用二氯甲烷 （70 mL2） 萃取水相， 收集并合并有机相， 用无水 Na2SO。

31、4干燥， 减压浓缩 得到2,3,4,6-O-四乙酰基-D-半乳糖-1-氢亚磷酸单酯粗品， 柱层析分离 （二氯甲烷 ： 甲醇 = 20 ： 1 加入 0.5% 三乙胺） ， 得到无色油状的 2,3,4,6-O- 四乙酰基 -D- 半乳糖 -1- 氢亚磷 酸单酯 3.29 g， 产率为 93%。 0023 2） 在氩气保护下， 将2,3,4,6-O-四乙酰基-D-半乳糖-1-氢亚磷酸单酯 （2.82 g， 5.5 mmol） 溶于干燥的吡啶 （30 mL） ， 30 C 加入 BSA （6.75 mL， 27.5 mmol） ， 硅基化 10 分 钟， 然后加入二异丙基乙基胺 （4.8 mL， 2。

32、7.5 mmol） ， 再加入碘单质 （1.8 g， 7.15 mmol） ， 当 说 明 书 CN 103509067 A 6 5/5 页 7 反应液的颜色不再褪色时， 继续反应 10 分钟， 最后加入 H2O（2 mL） 搅拌 5 分钟后， 减压浓 缩反应液， 得到 2,3,4,6-O- 四乙酰基 -D- 半乳糖 -1- 单磷酸粗品， 柱层析分离 （二氯甲烷 ： 甲醇 = 20 ： 1 至 5 ： 1 加入 0.5% 三乙胺） 得到 2,3,4,6-O- 四乙酰基 -D- 半乳糖 -1- 单磷酸 三乙胺盐 2.53 g， 产率为 87%。 0024 3） 在氩气保护下， 将 2,3,4,6。

33、-O- 四乙酰基 -D- 半乳糖 -1- 单磷酸三乙胺盐 （2.25 g， 4.25 mmol） 溶于干燥的甲醇 （30 mL） ， 加入甲醇钠 （2.3 g， 42.5 mmol） 配制的甲醇钠甲醇 溶液 （30 mL） ， 30 C 反应 2 小时， 用盐酸甲醇溶液 （0.1 M） 中和至 pH 为 7， 减压浓缩反应 液， 得到 D- 半乳糖 -1- 单磷酸粗品， 葡聚糖凝胶 （Sephadex LH-20） 柱层析分离 （去离子水） 得到 D- 半乳糖 -1- 单磷酸纯品， 最后经钠离子型阳离子交换树脂交换洗脱， 合并含产物洗 脱液， 减压浓缩得到 D- 半乳糖 -1- 单磷酸二钠盐白。

34、色固体 1.25 g（ ： = 2.2 ： 1） ， 产率 为 97%。 0025 实施例 5: D- 葡萄糖 -1- 单磷酸二钠盐 20 的合成 ： 1） 在氩气保护下， 将咪唑 （14.1 g， 207 mmol） 溶于干燥的二氯甲烷 （50 mL） ， 在 0 C 下加入三氯化磷 （3.0 mL， 34.5 mmol） ， 反应 0.5 小时得到亚磷酸三咪唑， 然后向反应瓶中 滴入 2,3,4,6-O- 四乙酰基 -D- 葡萄糖 （2.4 g， 6.9 mmol， ： = 3 ： 1） 的干燥二氯甲烷 溶液 （20 mL） ， 升至 30 C 继续搅拌 2 小时， 加入 H2O（0.62。

35、 mL） 搅拌 5 min， 用二氯甲烷 （70 mL） 稀释反应液， 然后用 pH 值为 5 的氯化铵水溶液 （50 mL2） 洗， 再用二氯甲烷 （70 mL2） 萃取水相， 收集并合并有机相， 用无水 Na2SO4干燥， 减压浓缩得到 2,3,4,6-O- 四乙 酰基-D-葡萄糖-1-氢亚磷酸单酯粗品， 柱层析分离 （二氯甲烷 ： 甲醇 = 20 ： 1加入0.5% 三 乙胺） ， 得到无色油状的2,3,4,6-O-四乙酰基-D-葡萄糖-1-氢亚磷酸单酯3.19 g， 产率为 90%。 0026 2） 在氩气保护下， 将2,3,4,6-O-四乙酰基-D-葡萄糖-1-氢亚磷酸单酯 （2.8。

36、2 g， 5.5 mmol） 溶于干燥的四氢呋喃 （30 mL） ， 加入 BSA（6.75 mL， 27.5 mmol） ， 在 0 C 下硅 基化 30 分钟， 然后加入三正丁胺 （6.5 mL， 27.5 mmol） ， 再加入 I2（1.68 g， 6.6 mmol） ， 当 反应液的颜色不再褪色时， 继续反应 30 min， 最后加入 H2O（2 mL） 搅拌 20 分钟后， 减压浓 缩反应液， 得到 2,3,4,6-O- 四乙酰基 -D- 葡萄糖 -1- 单磷酸粗品， 柱层析分离 （二氯甲烷 ： 甲醇 = 20 ： 1 至 5 ： 1 加入 0.5% 三乙胺） 得到 2,3,4,6。

37、-O- 四乙酰基 -D- 葡萄糖 -1- 单磷酸 三乙胺盐 2.47 g， 产率为 85%。 0027 3） 在氩气保护下， 将 2,3,4,6-O- 四乙酰基 -D- 葡萄糖 -1- 单磷酸三乙胺盐 （2.25 g， 4.25 mmol） 溶于干燥的甲醇 （30 mL） ， 加入甲醇钠 （1.84 g， 34 mmol） 配制的甲醇钠甲醇 溶液 （25 mL） ， 0 C 反应 6 小时， 用盐酸甲醇溶液 （0.1 M） 中和至 pH 为 7， 减压浓缩反应 液， 得到 D- 葡萄糖 -1- 单磷酸粗品， 葡聚糖凝胶 （Sephadex LH-20） 柱层析分离 （去离子水） 得到 D- 葡萄糖 -1- 单磷酸纯品， 最后经钠离子型阳离子交换树脂交换洗脱， 合并含产物洗 脱液， 减压浓缩得到 D- 葡萄糖 -1- 单磷酸二钠盐白色固体 1.24 g（: = 3:1） ， 产率为 96%。 说 明 书 CN 103509067 A 7 1/1 页 8 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103509067 A 8 。