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1、(10)申请公布号 CN 102920715 A (43)申请公布日 2013.02.13 CN 102920715 A *CN102920715A* (21)申请号 201210420939.4 (22)申请日 2012.10.29 A61K 31/60(2006.01) A61K 31/4174(2006.01) A61K 31/047(2006.01) A61K 47/04(2006.01) A61K 9/14(2006.01) A61P 31/10(2006.01) (71)申请人 上海海洋大学 地址 201306 上海市浦东新区沪城环路 999 号 (72)发明人 吕利群 张楠 (5。
2、4) 发明名称 一种防治水霉病的复方干粉剂及其制备方法 (57) 摘要 本发明涉及一种淡水养殖鱼类真菌病药物 配方。本发明提供的防治水霉病的复方干粉 剂， 按重量百分比由以下组分组成 ： 磺基水杨酸 20-35， 溴硝醇 8-20， 硝酸咪康唑 2-5， 硅藻 土 55-70。本发明提供的复方干粉剂配方简单， 成本低， 使用方便， 安全高效， 是 “后孔雀石绿时 代” 治疗水霉病的特效药物。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 1/1 页 2 1. 一种防治水霉病的复方干粉剂。
3、， 按重量百分比由以下组分组成 ： 磺基水杨酸 20-35 ； 溴硝醇 8-20 ； 硝酸咪康唑 2-5 ； 硅藻土 55-70。 2. 根据权利要求 1 所述的复方干粉剂， 其特征在于， 按重量百分比由以下组分组成 ： 磺基水杨酸 20 ； 溴硝醇 17 ； 硝酸咪康唑 3 ； 硅藻土 60。 3. 一种制备如权利要求 1 和 2 所述的复方干粉剂的方法， 包括如下步骤 ： a) 按配比将磺基水杨酸和溴硝醇进行预混， 得到两组分混合物 ； b) 按配比将硝酸咪康唑加入上述预混物， 充分混合， 过 100 目筛网 ； c) 按配比将硅藻土加入上述混合物中， 过 200 目筛网， 制成防治水产动。
4、物水霉病的复 方干粉剂。 权 利 要 求 书 CN 102920715 A 2 1/5 页 3 一种防治水霉病的复方干粉剂及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及水产养殖病害防控技术领域， 涉及一种淡水养殖鱼类水霉病药物配方 及应用方法， 具体涉及一种含磺基水杨酸为主要成分的杀菌剂， 适合于所有淡水养殖鱼类 及鱼卵水霉病的防治。 。 背景技术 0002 水霉病是一种真菌水霉菌寄生所感染的疾病， 水霉菌对寄主无严格选择性， 各种水产动物， 从卵到各龄成体都可感染， 在换水或搬运时鱼类体表受伤， 水霉菌便乘机入 侵， 极易发生水霉病的传染并迅速蔓延， 造成大量鱼死亡， 危害特别严重， 已成为水。
5、产养殖 的主要疾病之一， 给我国渔业生产造成了重大损失。长期以来， 生产中一直以廉价的 “孔雀 石绿” 作为有效地防治水霉病的药物。 0003 孔雀石绿是一种合成的三苯甲烷类工业染料， 自从证实孔雀石绿具有抗菌、 杀虫 等药效以来， 许多国家将其广泛用作杀虫和杀菌剂。但自上世纪九十年代以来发现其具有 致畸、 致癌、 致突变、 高残留和高毒性等问题， 我国于2002年5月将孔雀石绿列入 食品动物 禁用的兽药及其化合物清单 中， 但是由于其抗菌效果好、 价格低廉、 对其副作用宣传力度 不够等原因， 在水产养殖中仍有违规使用的情况。没有在疗效和经济上与之相媲美的无公 害药物一直不能问世， 导致水产养。
6、殖中水霉病防治药物长期处于空白， 使得我国淡水养殖 生产上对该病的防治遇到了极大困难， 而孔雀石绿的屡禁不止也给国人食品安全带来了极 大的隐患。 0004 因此， 开发出安全、 高效、 经济的替代 “孔雀石绿” 的药物迫在眉睫， 我们在国家大 宗淡水鱼岗位体系支持下， 经过试验研究， 发现了由磺基水杨酸、 咪康唑、 溴硝醇组成的复 方药物对水霉菌具有很好的抑制和杀灭效果。 发明内容 0005 本发明的目的是寻找一种利用现有技术的单品种药剂与辅料相互复配成为一种 新型复方干粉剂， 解决现有药物存在的上述问题， 提供一种配方简单， 成本低， 使用方便， 安 全高效的药物， 对水产动物在养殖中所出现。
7、的对水霉病起到预防和治疗的作用。生产符合 食品药品安全要求的含磺基水杨酸为主要成分的复方干粉剂， 成为 “后孔雀石绿时代” 防治 水霉病的安全高效经济型药物。 0006 本发明的另一目的是提供了防治水霉病复方干粉剂的制备方法。 0007 本发明提供一种含有磺基水杨酸为主要成分的复方干粉剂， 按重量百分比由以下 组分组成 ： 磺基水杨酸 20-35， 溴硝醇 8-20， 硝酸咪康唑 2-5， 硅藻土 55-70。 0008 本发明提供一种制备防治水产动物水霉病的复方干粉剂的方法， 包括如下步骤 ： 将 20-35磺基水杨酸和 8-20溴硝醇进行预混， 得到两组分混合物 ； 再将 2-5硝酸咪康 。
8、唑加入上述预混物， 充分混合， 过100目筛网 ； 最后将硅藻土加入上述混合物中， 过200目筛 网， 制成防治水产动物水霉病的复方干粉剂。 说 明 书 CN 102920715 A 3 2/5 页 4 具体实施方式 0009 磺基水杨酸， 是一种常见的医药中间体， 作为一种有效的消毒防霉药， 能使蛋白质 凝固或变性， 腐蚀组织， 对霉菌效果极佳。 0010 溴硝醇， (2- 溴 -2- 硝基 -1， 3- 丙二醇 )， 又称布罗波尔、 溴硝丙醇、 抑菌醇、 皮乐宝 等， 国外商品名为 Bronopol， 是白色至淡黄色结晶性粉末， 它是一种广谱、 高效、 低毒性杀菌 防腐剂， 它在较宽的 p。
9、H 范围内发挥抗菌活性， 对酵母菌、 霉菌有较好的抑制作用。 0011 硝酸咪康唑作为人工合成的 I- 苯乙基咪唑衍生物， 为人畜广谱抗真菌药。它能作 用于菌体细胞膜， 改变其通透性， 阻止营养物摄取， 导致其死亡。目前尚未有硝酸咪康唑应 用于水产上的报道。 0012 硅藻土的容重轻、 比表面大、 吸附性能好、 悬浮性能高， 而且 PH 显中性的特点， 作 为药物增量剂或稀释剂。 硅藻土在晶体结构中电荷的不平衡， 又存在丰富的空隙， 具有较强 的阳离子交换性以及某些气体成份的良好的吸附特性， 从而在水中达到药效均匀吸附和稀 释分散的目的， 并使药效延长， 而且在水中能起到净化水体的效果。 00。
10、13 本发明中采用的磺基水杨酸， 溴硝醇， 硝酸咪康唑均具有抑菌杀菌等作用， 三者配 伍用药相互协同， 可用于水霉真菌病的防治 0014 将磺基水杨酸和溴硝醇进行预混， 得到两组分混合物 ； 再将硝酸咪康唑加入上述 预混物， 充分混合， 过 100 目筛网 ； 最后将硅藻土加入上述混合物中， 过目筛网。 0015 试验过程中， 研究人员发现其中各组分重量百分含量为磺基水杨酸 20-35， 溴 硝醇 8-20， 硝酸咪康唑 2-5， 硅藻土 55-70时干粉剂具有最佳效果， 并以磺基水杨酸 20， 溴硝醇 17， 硝酸咪康唑 3， 硅藻土 60为例给出具体试验数据。 0016 1 草鱼水霉病预防。
11、实验 0017 材料与方法 0018 1.1 试验药物 0019 复方干粉剂， 按重量百分比由以下组分组成 ： 磺基水杨酸 20， 溴硝醇 17， 硝酸 咪康唑 3， 硅藻土 60。 0020 1.2 试验用鱼 0021 试验用草鱼购自上海金山良种场， 草鱼规格为 ： 体重 40-55g/ 尾、 体长 18-26cm/ 尾。体表和解剖观察健康， 暂养一周。 0022 1.3 菌株来源 0023 水霉菌株为本实验室分离于江苏省吴江水产养殖良种场发病的草鱼头部 ( 编号 GH1)， 保存于上海海洋大学国家水生动物病原库。 0024 1.4 饲养管理 0025 用 200L 容积暂养缸饲养， 增氧器。
12、 24 小时增氧 ； 水源为经曝气、 消毒和去氯处理后 的自来水， pH 为 6.5 6.8， 平均水温 25， 溶氧为 9 12mg/L， 其他指标符合渔业水质标 准。饲养配制参照 NRC 营养标准。 0026 1.5 草鱼水霉病人工感染 0027 挑取保藏于试管内的水霉菌丝接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基 ( 购自国药集团 ) 培养皿上， 25培养 72 小时， 使其铺满整个培养皿。取适量培养好的水霉用用研钵研碎倒 说 明 书 CN 102920715 A 4 3/5 页 5 入用于感染的玻璃缸 (20L) 水中。将若干事先用水煮开的玉米粒放入该玻璃缸水体内观察 72 小时， 观察到的 90玉。
13、米粒有水霉生长， 及判定玻璃缸水体中有水霉存在， 待用于感染 试验， 有手术刀片将草鱼背鳍下方两侧鳞片去掉， 在肌肉出刮开一厘米左右的小口， 将刮伤 后的草鱼放入有水霉存在的用于感染的玻璃缸水中， 每个感染缸放入 10 尾草鱼。养殖水温 由 25降至 18左右， 进行水霉病人工感染。 0028 1.6 草鱼水霉病预防实验 0029 1.6.1 泼洒方式用药预防水霉病 0030 上述草鱼进行人工感染前， 对草鱼进行泼洒方式用药预防水霉病实验。根据体外 实验设置 3 个复方干粉制剂药物泼洒浓度 ： 0.5、 1.0、 1.5mg/L。每个药物浓度设三个组， 同 时设置三个空白平行组及孔雀石绿 0.。
14、2mg/L 浓度组三个平行组。每个组放用于感染的草鱼 10 尾， 观察一周。 0031 1.6.2 浸泡方式用药预防水霉病 0032 上述草鱼进行人工感染前， 对草鱼进行浸泡方式用药预防水霉病实验。根据体外 实验结果设置 3 个复方干粉制剂药物浸泡浓度 ： 5、 10、 15mg/L， 每次浸泡一小时， 每天浸泡 两次。每个药物浓度设三个平行组， 同时设置三个空白平行组及孔雀石绿 2mg/L 浓度浸泡 0.5 小时组三个平行组。每组放置用于感染的草鱼 10 尾， 观察一周。 0033 1.7 数据分析 0034 根据农业部 渔药临床实验技术规范 进行药效 ( 保护率 ) 评价。保护率公式如 下。
15、 ： 0035 保护率 ( 阳性对照组发病死亡数 - 药物试验组发病死亡数 )/ 阳性对照组发病 死亡数 100。 0036 结果 ： 0037 预防实验结果表明复方干粉制剂的两种用药方式无论是泼洒还是浸泡对水霉病 均有较好预防作用。泼洒方式用药浓度在仅有 1.0mg/L 对草鱼水霉病平均保护率为 98。 浸泡方式用药在 10mg/L 浓度时对草鱼的平均保护率也可达到 96。见表 1、 表 2 0038 0039 表 1 复方干粉制剂泼洒方式用药对草鱼水霉病的预防效果 说 明 书 CN 102920715 A 5 4/5 页 6 0040 0041 表 2 复方干粉制剂浸泡方式用药对草鱼水霉病。
16、的预防效果 0042 2 草鱼水霉病治疗试验 0043 2.1 投药方式 ： (1) 直接泼洒到水体中， 浓度为 15ppm ； (2) 药物浸泡治疗， 浓度为 25-40ppm。 。 0044 在上海市金山区选取池塘分别为 ： 对照组 20 亩、 治疗组 23 亩。在同一个养殖场分 别设置对照组、 治疗组。治疗组选在 5 月水霉病爆发的池塘。治疗组在试验前已经进行采 样， 送至上海海洋大学国家水生动物病原库进行分子生物学和形态学检测确定为真菌性水 霉病， 治疗组发病面积在 60以上。 0045 实验结果表明， 直接泼洒对照池塘在疾病高发季节， 平均发病率为 40-70， 死亡 率在 50以上。
17、 ； 治疗组池塘经过两次药物泼洒后， 症状基本消失， 体表水霉菌消退恢复为 正常体色， 治愈率达到 90以上， 死亡率为 0， 有效率 100。治疗组池塘水体利用水霉菌 LAMP 快速检测方法检测水中水霉孢子数， 水霉孢子定量为小于 10 个 /ml， 明显低于水霉病 爆发所需孢子。 0046 治疗组经每天药物浸泡两次， 每次半小时， 连续 3 天后， 症状消失， 治愈率达到 95以上， 死亡率为 0， 有效率 100。 0047 对比例 0048 为了更好的评价该复方制剂的疗效， 试验选择了孔雀石绿作为对照的药物。在预 防方面， 由于无法准确判断鱼塘水霉病的爆发， 我们选择了实验室条件感染水。
18、霉病并进行 预防实验 ： 泼洒方式复方制剂 0.5mg/L 浓度时对草鱼保护率为 73， 孔雀石绿 0.2mg/L 浓 度时保护率为 76。浸泡方式复方制剂和孔雀石绿在浓度分别为 15mg/L 和 5mg/L 时保护 率均可达到 100； 在治疗方面我们选择了水霉爆发鱼塘进行实际治疗实验， 复方制剂的治 愈率在直接泼洒和浸泡两种给药方式下均可达到 90以上， 与孔雀石绿治疗水霉病效果相 当。 0049 综上可见， 在预防和治疗的两种用药方式上复方制剂的保护率和治愈率均接近或 达到孔雀石绿的水平， 同时克服了孔雀石绿具有致畸、 致癌、 致突变、 高残留和高毒性等的 缺点。本发明提供的药物以磺基水杨酸为主要成分， 添加抗真菌药物硝酸咪康唑和溴硝醇 相互复配成为干粉剂， 解决了硝酸咪康唑不易溶解的问题， 其成分稳定性高， 杀菌力强， 安 说 明 书 CN 102920715 A 6 5/5 页 7 全， 有效， 稳定 ； 且生产工艺流程简单， 推广成本和使用成本低。 0050 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已， 并不用以限制本发明， 凡在本发明的精 神和原则之内， 所做的任何修改、 等同替换、 改进等， 均应包含在本发明保护的范围之内。 说 明 书 CN 102920715 A 7 。