聚乙二醇与纳洛酮的结合物及其药物组合物和应用.pdf

摘要
申请专利号：	CN201210040133.2	申请日：	2012.02.22
公开号：	CN103289075A	公开日：	2013.09.11
当前法律状态：	授权	有效性：	有权
法律详情：	授权\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):C08G 65/48申请日:20120222\|\|\|公开
IPC分类号：	C08G65/48; C07D519/00; A61K31/485; A61K31/787; A61K47/48; A61P1/00; A61P1/10	主分类号：	C08G65/48
申请人：	天津键凯科技有限公司
发明人：	郭志雄; 冯泽旺; 徐立华; 赵宣
地址：	300457 天津市塘沽区天津开发区第四大街5号B座5层
优先权：
专利代理机构：	北京嘉和天工知识产权代理事务所(普通合伙) 11269	代理人：	甘玲
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内容摘要

提供如通式(II)的聚乙二醇-纳洛酮结合物以及包含该结合物的药物组合物。在所述结合物中，n是1-20的整数。还提供了三分支或四分支聚乙二醇与纳洛酮的结合物。通过亲水性聚合物对纳洛酮进行结构改造，改善了药物的药代动力学性质，增加纳洛酮本身的水溶性，改善药物在体内的分布，减低纳洛酮对中枢系统的毒副作用，减轻由于长期使用阿片类药物引起的肠功能紊乱及便秘。还提供了包含本发明结合物的药物组合物以及该结合物的应用。

权利要求书

权利要求书
1.   一种如通式(II)的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐：

其中，n是1‑20的整数。

2.   如权利要求1所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，n是1‑15的整数。

3.   如权利要求1所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，n是2‑15的整数。

4.   如权利要求1所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物的构型为(α，α)、(β，β)、(α，β)或它们的混合物。

5.   如权利要求4所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物的构型为(α，α)。

6.   如权利要求4所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物的构型为(β，β)。

7.   如权利要求1所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，所述结合物选自具有如下结构的结合物：

其中，f为4、6或12。

8.   一种如通式(III)的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐：

其中，x、y、w相同或不同，分别是0‑20的整数。

9.   如权利要求8所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，x、y、w相同或不同，分别是0‑15的整数。

10.   如权利要求8所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，x、y、w相同，且是0‑10的整数。

11.   如权利要求8所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物的构型为(α，α，α)、(β，β，β)、(α，β，β)、(α，α，β)或者它们的混合物。

12.   如权利要求11所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物构型为(α，α，α)。

13.   如权利要求11所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物构型为(β，β，β)。

14.   如权利要求8所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，所述结合物选自具有如下结构的结合物

15.   一种如通式(IV)的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐：

其中，a、b、c、d相同或不同，分别是0‑20的整数。

16.   如权利要求14所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，a、b、c、d相同或不同，分别是0‑15的整数。

17.   如权利要求14所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，a、b、c、d相同，且是0‑10的整数。

18.   如权利要求14所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物的构型为(α，α，α，α)、(β，β，β，β)、(α，β，β，β)、(α，α，β，β)、(α，α，α，β)或者它们的混合物。

19.   如权利要求18所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物的构型为(α，α，α，α)。

20.   如权利要求18所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物的构型为(β，β，β，β)。

21.   如权利要求15所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，所述结合物选自具有如下结构的结合物：

22.   如前述任一项权利要求所述的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中所述的盐选自由盐酸盐，氢溴酸盐、硫酸盐，硝酸盐、磷酸盐、枸橼酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苯磺酸盐、泛酸盐、抗坏血酸盐或其组合组成的组。

23.   包含如权利要求1至22之任一项所述的结合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。

24.   如权利要求23所述的药物组合物，其中，所述药物组合物构成片剂、注射剂、栓剂、丸剂、软和硬明胶胶囊剂、散剂、溶液剂、混悬剂或气雾剂。

25.   如权利要求1至22之任一项所述的结合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗由于长期使用阿片类药物引起的肠功能紊乱及便秘的药物中的应用。

说明书

说明书聚乙二醇与纳洛酮的结合物及其药物组合物和应用
技术领域
本发明涉及亲水性聚合物‑纳络酮结合物，尤其是小分子低聚乙二醇与纳洛酮的结合物及其药物组合物。
背景技术
阿片类镇痛药物，如吗啡等，已广泛应用于临床，是目前不可替代的强力止痛药物。数据显示，仅2007年一年，美国共有2亿3千万阿片类药物处方。阿片类药物主要作用于阿片受体。阿片受体包括μ、δ、κ三种受体，每种受体分别还有不同的亚型，除中枢神经系统外，脊髓，外周如胃、小肠、外分泌腺等都有阿片受体。所以，阿片类镇痛药物，除了其中枢神经系统的强力止痛效果以外，其作用于外周的阿片受体则产生副作用。主要副作用之一是阿片类药物引起的肠功能紊乱及便秘。尤其对于慢性疼痛患者，因为长期使用阿片类药物缓解疼痛，这一副作用一直影响着患者的生活质量。
纳洛酮(结构式如I)，为羟二氢吗啡酮的衍生物，为阿片受体特异性拮抗剂，对机体内各类型阿片受体均有竞争性拮抗作用，能与体内的阿片受体结合，以对抗释放过多的β内啡肽，在体内吸收迅速、代谢快、拮抗作用也强，易透过血脑屏障，并取代吗啡样物质与受体结合，解除中枢抑制作用，迅速恢复脑、心、肺等脏器的正常功能，而且不产生吗啡样物质的依赖性、戒断症状和呼吸抑制作用。纳洛酮是吗啡类药物过量的特效解毒剂，也是吗啡、海洛因依赖者的诊断用药。近年来，国内外临床医生也将它试用于急性酒精、安定中毒，脑梗塞、急慢性呼吸衰竭及各种危重症休克的治疗，已取得了较好的效果。自2002年至今，SFDA批准的纳洛酮生产批文有近百条，2008‑2009年期间，共有18家生产企业为北京、浙江、吉林、云南四个地区供应纳洛酮产品，产量很大。

尽管纳洛酮已是目前临床应用最广的阿片受体拮抗剂，但纳洛酮肝脏首过效应大，片剂口服基本无效，目前临床上使用的剂型仅有注射液和舌下片两种剂型。同时，由于纳洛酮血脑屏障透过率高，在减少慢性疼痛患者长期使用阿片类药物引起的肠功能紊乱及阿片类药物引起的便秘的同时，也抵消了阿片类药物的止痛作用。
聚乙二醇(PEG)修饰技术是近年来迅速发展起来的一项新型给药技术，主要应用于注射给药系统。它是一种将聚乙二醇活化后链接到药物分子或表面的技术。药物小分子经过聚乙二醇修饰后，主要具有以下优点：1、增加药物的水溶性；2、降低毒性；3、延长药物循环半衰期，减少用药次数，提高病人依从性，提高生活质量，降低治疗费用；4、减少酶降解作用，提高生物利用度；5、降低血脑屏障透过率，减少中枢副作用。与聚乙二醇链接后，药物的药代动力学发生了改变，进而改变药效学。特别是聚乙二醇能使血药浓度维持或接近目标浓度的时间延长，保持药物的药效得以充分地发挥。目前，在国际市场上聚乙二醇修饰的药物产品的代表有：PEG‑MICERA。目前，聚乙二醇修饰的小分子药物在国际市场还没有批准上市，但是几个产品已经进入二、三期临床，代表有Nektar的NKTE‑102和NKTR‑118。
本实验组一直致力于聚乙二醇化修饰小分子药物的研究(ZL03 8 01109.3，ZL 2004 10029615.3，ZL 2004 8 0005763.X，ZL 2008 1 0093688.7，ZL 02 1 07842.4，ZL 02 1 08778.4)。主要是采用聚乙二醇与小分子药物进行链接，得到的产物在增溶减毒方面有很好的改善。
采用聚乙二醇化技术对纳洛酮进行结构改造的产品(NKTR‑118)已于2011年3月进入三期临床(参见http://www.nektar.com/pdf/pipeline/NKTR‑118/pr_20110315.pdf)。在NKTR‑118中，聚乙二醇只与一个活性基团连接。
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，实现每个聚乙二醇与多个纳洛酮结合的问题。本发明采用聚乙二醇化技术对纳洛酮进行结构改造，利用低分子量的聚乙二醇与纳洛酮进行链接，改善药物的药代动力学性质，增加纳洛酮本身的水溶性，改善药物在体内的分布，减低纳洛酮对中枢系统的毒副作用，减轻由于长期使用阿片类药物引起的肠功能紊乱及便秘，并将其开发成针剂或适合口服的制剂。本实验组利用自身优势，合成并筛选出数个聚乙二醇‑纳洛酮衍生物。与NKTR‑118不同，本发明中的化合物每个聚乙二醇结构与两个或多个活性基团连接。所以，这些化合物的阿片受体拮抗活性要优于同等分子量的NKTR‑118。
发明内容
本发明提供一种如通式(II)的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐：

其中，n是1‑20的整数；优选地，n是1‑15的整数；更优选地，n是2‑15的整数。更优选地，n可以是2‑14的整数、3‑13的整数或4‑12的整数。
在一些实施方案中，结合物的构型为(α，α)、(β，β)、(α，β)或它们的混合物；优选的构型为(α，α)或(β，β)。
本发明的另一个方面提供一种如通式(III)的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐：

其中，x、y、w相同或不同，分别是0‑20的整数；优选地，x、y、w相同或不同，分别是0‑15的整数；更优选地，x、y、w相同，且是0‑10的整数。更优选地，x、y、w可以相同或不同，分别是0‑9、0‑8、0‑7或0‑6的整数。
在一些实施方案中，其中，结合物的构型为(α，α，α)、(β，β，β)、(α，β，β)、(α，α，β)或者它们的混合物；优选的构型为(α，α，α)或(β，β，β)。
本发明的另一个方面提供一种如通式(IV)的聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐：

其中，a、b、c、d相同或不同，分别是0‑20的整数；优选地，a、b、c、d相同或不同，分别是0‑15的整数；更优选地，a、b、c、d相同，且是0‑10的整数。更优选地，a、b、c、d可以相同或不同，分别是0‑8、0‑7、0‑6或0‑5的整数。
在一些实施方案中，其中，结合物的构型为(α，α，α，α)、(β，β，β，β)、(α，β，β，β)、(α，α，β，β)、(α，α，α，β)或者它们的混合物；优选的构型为(α，α，α，α)或(β，β，β，β)。
上述药学上可接受的盐，可以是盐酸盐，氢溴酸盐、硫酸盐，硝酸盐、磷酸盐、枸橼酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苯磺酸盐、泛酸盐、抗坏血酸盐等，也可以是这些盐的组合。
本发明的另一个方面提供包含聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。所述的药物组合物可以进一步包括药学上可接受的载体或赋形剂。
在一些实施方案中，其中，药物组合物可以构成片剂、注射剂、栓剂、丸剂、软和硬明胶胶囊剂、散剂、溶液剂、混悬剂或气雾剂。
本发明的另一个方面提供聚乙二醇‑纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗由于长期使用阿片类药物引起的肠功能紊乱及便秘的药物中的应用。
本发明的优点是通过亲水性聚合物聚乙二醇的改性可对纳洛酮提供保护，改善药物吸收，改变药物体内分布，降低血脑屏障透过率及避免毒副作用。
具体实施方式
通过聚乙二醇修饰技术在纳洛酮分子中引入低分子量聚乙二醇，增加其亲水性，改善药物体内分布，降低其血脑屏障透过率，从而降低其毒性的目的。
本发明的结合物按如下方法制备：对亲水性低聚乙二醇进行改性，引入卤素或者甲磺酰基、对苯甲磺酰基等易离去基团，然后碱性条件下与纳洛酮结合。通过引入低聚乙二醇，改变药物在体内的分布，改善血脑屏障透过，改善由于长期服用阿片受体药物引起的肠功能紊乱及便秘。
对低聚乙二醇而言，采用乙二醇聚合单元予以表示，一般采用含有乙二醇单元的数目来表示，乙二醇单元数目范围为0‑20，优选为0‑10。
本发明的聚乙二醇也包括聚乙二醇的衍生物和类似物，也可以被下述亲水性聚合物替换，所述的亲水性聚合物选自由聚乙二醇、聚谷氨酸、聚天门冬氨酸、聚丙二醇、聚乙烯醇、聚丙烯吗啉、聚噁唑啉以及它们的共聚物所组成的组。
本发明的结合物可以纯化合物形式或适宜的药物组合物形式进行给药，可采用任何可接受的给药方式或用于类似的用途的试剂进行。因此，采用的给药方式可选择通过口、鼻内、非肠道、局部、透皮或直肠方式，其形式为固体、半固体或液体药剂形式给药，例如，片剂、栓剂、丸剂、软和硬明胶胶囊剂、散剂、溶液剂、混悬剂或气雾剂等，优选采用适用于精确剂量的简单给药的单元剂量形式。组合物可包含常规药用载体或赋形剂和作为活性成分(一种或多种)的本发明的结合物，此外，还可包含其它药剂、载体、辅剂等。
通常，根据所需给药方式，药学上可接受的组合物将包含约1至约99重量％的本发明结合物、以及99至1重量％的适宜的药用赋形剂。优选组合物包含约5至75重量％的本发明结合物，其余为适宜的药用赋形剂。
可采用液体形式给药的药物组合物例如可通过溶解、分散等手段将本发明的结合物(约0.5至约20％)和选择性存在的药用辅剂溶解、分散于载体中，载体的实例为水、盐水、含水葡萄糖、甘油、乙醇等，从而形成溶液剂或混悬剂。
如果需要的话，本发明的药物组合物还可包含少量的辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、抗氧化剂等，例如：柠檬酸、脱水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、丁基化羟基甲苯等。
以下实施例用来说明本发明，但不用来限制本发明。
实施例
实施例中所用的盐酸纳洛酮由北京屹东博杰科技有限责任公司提供，甲氧基乙氧基甲基氯(MEMCL)从alfa Aesar购得，对甲苯磺酰氯从山东亿龙实业有限公司购得，氢化钠从梯希爱(上海)化成工业发展有限公司购得，H(OCH2CH2)4‑OH、H(OCH2CH2)6‑OH以及H(OCH2CH2)12‑OH从嘉兴博美生物技术有限公司购得。本发明实施例中所用的其他试剂均为商业化学纯试剂。
实施例1双端取代的六乙二醇‑纳洛酮(α，α)‑NAL26和(β，β)‑NAL26(化合物E2和E1，其中f＝6)的合成

化合物B的合成：
圆底烧瓶中加入盐酸纳洛酮A 6g，溶于二氯甲烷30mL中，全部溶解后，加入二异丙基乙胺(DIPEA)11.7g，氮气保护下搅拌15min，缓慢递加MEMCL 7.6g，滴毕后室温反应24h。TLC检测反应完全后，停止搅拌，加入水萃取三次(30mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥。浓缩，柱层析得到化合物B 5.37g，收率为87％。
化合物C1(α构型)和C2(β构型)的合成：
圆底烧瓶中加入化合物B 5.37g，乙醇180mL，0.2N氢氧化钠溶液90mL，搅拌15min。分批加入硼氢化钠2.3g，室温搅拌过夜。TLC检测反应完全后，停止搅拌，浓缩后，用二氯甲烷萃取三次(100mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥2h。浓缩得粗品4.7g。柱层析得到化合物C1(α构型)1.66g，收率为31％，C2(β构型)1.80g，收率为33％。
化合物D1(β，β)和D2(α，α)的合成：
500mL三口瓶中加入22.9g对甲苯磺酰氯，80mL吡啶，冷却至0℃。将14.1gH‑(OCH2CH2)6‑OH与40mL吡啶混匀，滴加到三口瓶中，控制温度为0‑10℃。继续在此温度下搅拌反应两小时。TLC监测反应完全。向反应液中加入300mL冷水及120mL浓盐酸，缓慢搅拌半小时，将反应液转移入1000mL分液漏斗中，加入乙酸乙酯萃取两次(300mL+200mL)。有机层合并，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥两小时。旋转蒸发仪蒸出溶剂。得到粘稠状液体(Ms‑(OCH2CH2)6‑OMs)共28.7g，直接用于下一步反应。
取柱层析得到的化合物C1 801mg置于圆底烧瓶中，加入二甲基甲酰胺(DMF)3mL全部溶解后，加入Ms‑(OCH2CH2)6‑OMs 421mg，分批加入氢化钠384mg，30℃反应过夜。TLC检测反应完全后，停止搅拌，加入100mL水，用二氯甲烷萃取三次(100mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥。浓缩得粗品，经柱层析得到化合物D1(β，β)335mg，收率为23.2％。
化合物D2(α，α)的合成同D1。
化合物E1(β，β)和E2(α，α)的合成：
将化合物D1(β，β)150mg溶解在5ml无水甲醇中，通入氯化氢气体，TLC监测反应完成后，停止搅拌，浓缩后，缓慢加入碳酸钾水溶液调节pH为9，用乙酸乙酯萃取三次(100mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥2h。浓缩得粗品，经柱层析得到化合物E1(β，β)98mg，收率为91％。m/z[MH]+907.2。1H‑NMR(DMSO‑d6)：1.25‑1.35(m，4H)，1.45(d，2H)，1.55‑1.60(m，2H)，1.75‑1.88(m，4H)，2.1‑2.2(m，4H)，2.49‑2.59(m，4H)，2.88(d，2H)，3.00‑3.10(m，6H)，3.22(m，2H)，3.62‑3.77(m，24H)，4.52(d，2H)，5.12‑5.20(m，4H)，5.77(m，2H)，6.53(d，J＝8.16Hz，2H)，6.70(d，J＝8.1Hz，2H)。
化合物E2(α，α)的合成同E1(β，β)。m/z[MH]+907.2。1H‑NMR(CDCl3)：1.15‑1.25(m，4H)，1.45‑1.59(m，8H)，2.1‑2.26(m，4H)，2.52‑2.61(m，4H)，2.88(d，2H)，3.00‑3.10(m，6H)，3.55‑3.77(m，24H)，3.86‑3.88(m，2H)，4.71(d，2H)，5.14‑5.22(m，4H)，5.76‑5.84(m，2H)，6.49(d，J＝8.16Hz，2H)，6.70(d，J＝8.1Hz，2H)。
实施例2双端取代的四乙二醇‑纳洛酮(α，α)‑NAL24(化合物E2，其中f＝4)的合成
用四乙二醇代替六乙二醇，重复实施例1的步骤得到双端取代的四乙二醇‑纳洛酮(α，α)‑NAL24。m/z[MH]+817。1H‑NMR(CDCl3)：1.14‑1.24(m，4H)，1.46‑1.58(m，8H)，2.1‑2.23(m，4H)，2.52‑2.62(m，4H)，2.89(d，2H)，3.00‑3.11(m，6H)，3.55‑3.78(m，16H)，3.86‑3.89(m，2H)，4.72(d，2H)，5.15‑5.21(m，4H)，5.77‑5.85(m，2H)，6.50(d，J＝8.16Hz，2H)，6.71(d，J＝8.1Hz，2H)。
实施例3双端取代的十二乙二醇‑纳洛酮(α，α)‑NAL212(化合物E2，其中f＝12)的合成
用H(OCH2CH2)12‑OH代替六乙二醇，重复实施例1的步骤得到双端取代的十二乙二醇‑纳洛酮(α，α)‑NAL212。m/z[MH]+1169。1H‑NMR(CDCl3)：1.12‑1.24(m，4H)，1.45‑1.589(m，8H)，2.11‑2.24(m，4H)，2.50‑2.61(m，4H)，2.89(d，2H)，3.02‑3.11(m，6H)，3.50‑3.78(m，48H)，3.86‑3.90(m，2H)，4.71(d，2H)，5.14‑5.20(m，4H)，5.75‑5.85(m，2H)，6.51(d，J＝8.17Hz，2H)，6.70(d，J＝8.1Hz，2H)。
实施例4三分支的乙二醇‑纳洛酮结合物(NAL31)(化合物K)的合成
三分支乙二醇(H)的合成：参考US2006/0047167。
化合物I的合成：
250mL三口瓶中加入17.2g对甲苯磺酰氯，40mL吡啶，冷却至0℃。将7.14g化合物H与20mL吡啶混匀，滴加到三口瓶中，控制温度为0‑10℃。继续在此温度下搅拌反应两小时。TLC监测反应完全。向反应液中加入100mL冷水及60mL浓盐酸，缓慢搅拌半小时，将反应液转移入1000mL分液漏斗中，加入乙酸乙酯萃取两次(300mL+200mL)。有机层合并，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥两小时。旋转蒸发仪蒸出溶剂。得到粘稠状液体共13.7g，直接用于下一步反应。
化合物J的合成：
取柱层析得到的化合物C1626mg置于圆底烧瓶中，加入DMF 3mL全部溶解后，加入化合物I 236mg，分批加入氢化钠284mg，30℃反应过夜。TLC检测反应完全后，停止搅拌，加入100mL水，用二氯甲烷萃取三次(100mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥2h。浓缩得粗品，经柱层析得到化合物J 243mg，收率为16.9％。
化合物K的合成：
将化合物J 243mg溶解在5ml无水甲醇中，通入氯化氢气体，TLC监测反应完成后，停止搅拌，浓缩后，缓慢加入碳酸钾水溶液调节pH为9，用二氯甲烷萃取三次(100mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥2h。浓缩得粗品，经柱层析得到化合物K 168mg，收率为84.8％。m/z[MH]+1171.6。1H‑NMR(DMSO‑d6)：1.24‑1.35(m，6H)，1.46(d，3H)，1.57‑1.62(m，3H)，1.77‑1.88(m，6H)，2.0‑2.2(m，6H)，2.50‑2.59(m，6H)，2.66(m，1H)，2.86(d，3H)，3.00‑3.09(m，9H)，3.23(m，3H)，3.60‑3.77(m，18H)，4.51(d，3H)，5.12‑5.18(m，6H)，5.78(m，3H)，6.53(d，J＝8.16Hz，3H)，6.70(d，J＝8.1Hz，3H)。

实施例5三分支的乙二醇‑纳洛酮结合物(NAL37)(化合物N)的合成

化合物L的合成：参考文献：J.Org.Chem.2006，71，9884‑9886.
化合物M的合成与实施例4中化合物I的合成相似，其中用化合物L代替化合物H。
化合物N(NAL37)的合成：
用化合物L代替化合物H，重复实施例4的步骤得到三分支取代的乙二醇‑纳洛酮(α，α)‑NAL37。m/z[MH]+1963.6。1H‑NMR(DMSO‑d6)：1.22‑1.35(m，6H)，1.47(d，3H)，1.57‑1.64(m，3H)，1.74‑1.88(m，6H)，2.0‑2.22(m，6H)，2.50‑2.57(m，6H)，2.68(m，1H)，2.88(d，3H)，3.01‑3.08(m，9H)，3.24(m，3H)，3.55‑3.78(m，90H)，4.52(d，3H)，5.11‑5.18(m，6H)，5.77(m，3H)，6.54(d，J＝8.16Hz，3H)，6.71(d，J＝8.1Hz，3H)。
实施例6四分支乙二醇与纳洛酮结合物(NAL41)(化合物Q)的合成
四分支乙二醇(M1)的合成：参考Bulletin of Academy of Sciences of the USSR，Division of Chemical Science(English Translation)；vol.38；nb.10；(1989)；p.2207。
化合物N1的合成：
250mL三口瓶中加入19.06g对甲苯磺酰氯，40mL吡啶，冷却至0℃。将7.8g化合物M1与20mL吡啶混匀，滴加到三口瓶中，控制温度为0‑10℃。继续在此温度下搅拌反应两小时。TLC监测反应完全。向反应液中加入100mL冷水及60mL浓盐酸，缓慢搅拌半小时，将反应液转移入1000mL分液漏斗中，加入乙酸乙酯萃取两次(300mL+200mL)。有机层合并，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥两小时。旋转蒸发仪蒸出溶剂。得到粘稠状液体共14.7g，直接用于下一步反应。
化合物P的合成：
取柱层析得到的化合物C1 834mg置于圆底烧瓶中，加入DMF 3mL全部溶解后，加入化合物N1312mg，分批加入氢化钠389mg，30℃反应过夜。TLC检测反应完全后，停止搅拌，加入100mL水，用二氯甲烷萃取三次(100mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥。浓缩得粗品，经柱层析得到化合物P 136mg，收率为16.3％。
化合物Q的合成：
将化合物P 136mg溶解在5ml无水甲醇中，通入氯化氢气体，TLC监测反应完成后，停止搅拌，浓缩后，缓慢加入碳酸钾水溶液调节pH为9，用乙酸乙酯萃取三次(100mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥。浓缩得粗品，经柱层析得到化合物Q 85mg，收率为76.6％。m/z[MH]+1556.7。1H‑NMR(DMSO‑d6)：1.24‑1.33(m，8H)，1.47(d，4H)，1.55‑1.60(m，4H)，1.74‑1.89(m，8H)，2.1‑2.22(m，8H)，2.47‑2.61(m，8H)，2.89(d，4H)，3.01‑3.11(m，12H)，3.23(m，4H)，3.61‑3.79(m，24H)，4.54(d，4H)，5.11‑5.18(m，8H)，5.79(m，4H)，6.54(d，J＝8.16Hz，4H)，6.70(d，J＝8.1Hz，4H)。

实施例7四分支乙二醇与纳洛酮结合物(NAL46)(化合物T)的合成
化合物R的合成：参考文献：J.Org.Chem.2006，71，9884‑9886.
化合物S的合成与实施例6中化合物N1的合成相似，其中用化合物R代替化合物M1。
化合物T(NAL46)的合成：
用化合物R代替化合物M1，重复实施例6的步骤得到三分支取代的乙二醇‑纳洛酮(α，α)‑NAL46。m/z[MH]+2436.9。1H‑NMR(DMSO‑d6)：1.24‑1.35(m，8H)，1.43(d，4H)，1.55‑1.64(m，4H)，1.74‑1.89(m，8H)，2.1‑2.20(m，8H)，2.47‑2.60(m，8H)，2.87(d，4H)，3.01‑3.15(m，12H)，3.25(m，4H)，3.55‑3.79(m，104H)，4.58(d，4H)，5.11‑5.20(m，8H)，5.78(m，4H)，6.56(d，J＝8.16Hz，4H)，6.72(d，J＝8.1Hz，4H)。

实施例8聚乙二醇‑纳洛酮结合物对MOR受体的拮抗作用。
受试物：
双端取代的六乙二醇‑纳洛酮(α，α)‑NAL26和(β，β)‑NAL26)、双端取代的四乙二醇‑纳洛酮(α，α)‑NAL24、单端取代的五乙二醇‑纳洛酮α‑m‑NAL5和β‑m‑NAL5(北京键凯科技有限公司提供)及纳洛酮共六个样品作为受试物。
阳性对照物：
Beta‑FNA，是由国家新药筛选中心提供，临用时用钙缓冲液配制成所需浓度。
盐酸纳洛酮由北京屹东博杰科技有限责任公司提供，临用时用钙缓冲液配制成所需浓度。
实验原理：
通过建立了共转MOR和Gα16的细胞系，使得受体被激活后能引起Gα16蛋白的活化，进而激活磷脂酶C(PLC)产生IP3和DAG，IP3可与细胞内内质网和线粒体上的IP3受体结合，从而引起胞内钙的释放。因此，测定胞内钙的变化可以作为检测MOR活化状态的方法。Fluo‑4/AM是一种钙荧光探针指示剂用来测量钙离子，作为非极性脂溶性的化合物，进入细胞后在细胞脂解酶的作用下，AM基团解离，释出Fluo‑4；由于Fluo‑4是极性分子，不易通过脂质双分子膜，它可使Fluo‑4长时间保留在细胞内。最终可以通过测量被激发的荧光强度来反映Gα蛋白被激活的水平。如果筛选的化合物能够拮抗MOR受体，则可以使钙流反应大大降低。
实验步骤：
1.将稳定表达MOR/Gα16的CHO细胞种于96孔板，培养过夜。
2.吸去种有细胞的孔内的培液，加入新鲜配制的染料40μl/孔，37℃培养箱内恒温孵育40分钟。
3.用钙缓冲液将待测的药物稀释并混匀。
4.将染料吸尽弃去，用新鲜配制的钙缓冲液洗一遍后，换上50μl溶解有待测药物的钙缓冲液。
5.用FlexStation II仪检测，第15秒开始由仪器自动加入25μl溶解有MOR受体已知激动剂的钙缓冲液，最终读取525nm处荧光值。
6.数据处理：
％response＝(D‑B)/(S‑B)*100％；
其中D为待测药物引起的钙流峰值，B为空白的钙缓冲液引起的钙流峰值，S为已知激动剂DAMGO引起的钙流峰值。
实验结果：
六个受试物在MOR受体上都有拮抗效应；
化合物 Mw IC50(M) 95％可信限(M) Beta‑FNA 2.619e‑009 1.370e‑009至5.008e‑009 NAL 365.85 1.524e‑008 8.488e‑009至2.737e‑008 (α，α)‑NAL26 905.08 9.555e‑009 4.225e‑009至2.161e‑008 (β，β)‑NAL26 905.08 2.344e‑008 1.289e‑008至4.186e‑008 (α，α)‑NAL24 816.98 7.156e‑009 3.799e‑009至1.348e‑008 α‑m‑NAL5 579.72 3.369e‑009 8.702e‑009至1.305e‑007 β‑m‑NAL5 579.72 7.814e‑008 3.140e‑008至1.945e‑007

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1、(10)申请公布号 CN 103289075 A (43)申请公布日 2013.09.11 CN 103289075 A *CN103289075A* (21)申请号 201210040133.2 (22)申请日 2012.02.22 C08G 65/48(2006.01) C07D 519/00(2006.01) A61K 31/485(2006.01) A61K 31/787(2006.01) A61K 47/48(2006.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 1/10(2006.01) (71)申请人天津键凯科技有限公司地址 300457 天津市塘沽区天津开发区第。

2、四大街 5 号 B 座 5 层 (72)发明人郭志雄冯泽旺徐立华赵宣 (74)专利代理机构北京嘉和天工知识产权代理事务所 ( 普通合伙 ) 11269 代理人甘玲 (54) 发明名称聚乙二醇与纳洛酮的结合物及其药物组合物和应用 (57) 摘要提供如通式 (II) 的聚乙二醇 - 纳洛酮结合物以及包含该结合物的药物组合物。在所述结合物中， n 是 1-20 的整数。还提供了三分支或四分支聚乙二醇与纳洛酮的结合物。通过亲水性聚合物对纳洛酮进行结构改造，改善了药物的药代动力学性质，增加纳洛酮本身的水溶性，改善药物在体内的分布，减低纳洛酮对中枢系统的毒副作用，。

3、减轻由于长期使用阿片类药物引起的肠功能紊乱及便秘。还提供了包含本发明结合物的药物组合物以及该结合物的应用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 6 页说明书 17 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书6页说明书17页 (10)申请公布号 CN 103289075 A CN 103289075 A *CN103289075A* 1/6 页 2 1. 一种如通式 (II) 的聚乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐：其中， n 是 1-20 的整数。 2. 如权利要求 1 所述的聚乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中， n 。

4、是 1-15 的整数。 3. 如权利要求 1 所述的聚乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中， n 是 2-15 的整数。 4.如权利要求1所述的聚乙二醇-纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物的构型为 (， )、 (， )、 (， ) 或它们的混合物。 5.如权利要求4所述的聚乙二醇-纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物的构型为 (， )。 6.如权利要求4所述的聚乙二醇-纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物的构型为 (， )。 7. 如权利要求 1 所述的聚乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，所述结合物选。

5、自具有如下结构的结合物：其中， f 为 4、 6 或 12。权利要求书 CN 103289075 A 2 2/6 页 3 8. 一种如通式 (III) 的聚乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐：其中， x、 y、 w 相同或不同，分别是 0-20 的整数。 9. 如权利要求 8 所述的聚乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中， x、 y、 w 相同或不同，分别是 0-15 的整数。 10. 如权利要求 8 所述的聚乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中， x、 y、 w 相同，且是 0-10 的整数。 11. 如权利要求 8 所述的聚。

6、乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物的构型为 (，， )、 (，， )、 (，， )、 (，， ) 或者它们的混合物。 12.如权利要求11所述的聚乙二醇-纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物构型为 (，， )。 13.如权利要求11所述的聚乙二醇-纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物构型为 (，， )。 14.如权利要求8所述的聚乙二醇-纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，所述结合物选自具有如下结构的结合物权利要求书 CN 103289075 A 3 3/6 页 4 15. 一种如通式 (IV) 。

7、的聚乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐：权利要求书 CN 103289075 A 4 4/6 页 5 其中， a、 b、 c、 d 相同或不同，分别是 0-20 的整数。 16. 如权利要求 14 所述的聚乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中， a、 b、 c、 d 相同或不同，分别是 0-15 的整数。 17. 如权利要求 14 所述的聚乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中， a、 b、 c、 d 相同，且是 0-10 的整数。 18.如权利要求14所述的聚乙二醇-纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物的构型为 (。

8、，，， )、 (，，， )、 (，，， )、 (，，， )、 (，，， ) 或者它们的混合物。 19.如权利要求18所述的聚乙二醇-纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物的构型为 (，，， )。 20.如权利要求18所述的聚乙二醇-纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中，所述结合物的构型为 (，，， )。 21. 如权利要求 15 所述的聚乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，所述结合物选自具有如下结构的结合物：权利要求书 CN 103289075 A 5 5/6 页 6 22. 如前述任一项权利要求所述的聚乙二醇 -。

9、纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐，其中所述的盐选自由盐酸盐，氢溴酸盐、硫酸盐，硝酸盐、磷酸盐、枸橼酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苯磺酸盐、泛酸盐、抗坏血酸盐或其组合组成的组。权利要求书 CN 103289075 A 6 6/6 页 7 23.包含如权利要求1至22之任一项所述的结合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。 24. 如权利要求 23 所述的药物组合物，其中，所述药物组合物构成片剂、注射剂、栓剂、丸剂、软和硬明胶胶囊剂、散剂、溶液剂、混悬剂或气雾剂。 25.如权利要求1至22之任一项所述的结合物或其药学上可接受的。

10、盐在制备用于治疗由于长期使用阿片类药物引起的肠功能紊乱及便秘的药物中的应用。权利要求书 CN 103289075 A 7 1/17 页 8 聚乙二醇与纳洛酮的结合物及其药物组合物和应用技术领域 0001 本发明涉及亲水性聚合物 - 纳络酮结合物，尤其是小分子低聚乙二醇与纳洛酮的结合物及其药物组合物。背景技术 0002 阿片类镇痛药物，如吗啡等，已广泛应用于临床，是目前不可替代的强力止痛药物。数据显示，仅 2007 年一年，美国共有 2 亿 3 千万阿片类药物处方。阿片类药物主要作用于阿片受体。阿片受体包括、、三种受体，每种受体分别还有不同的亚型，除中。

11、枢神经系统外，脊髓，外周如胃、小肠、外分泌腺等都有阿片受体。所以，阿片类镇痛药物，除了其中枢神经系统的强力止痛效果以外，其作用于外周的阿片受体则产生副作用。主要副作用之一是阿片类药物引起的肠功能紊乱及便秘。尤其对于慢性疼痛患者，因为长期使用阿片类药物缓解疼痛，这一副作用一直影响着患者的生活质量。 0003 纳洛酮 ( 结构式如 I)，为羟二氢吗啡酮的衍生物，为阿片受体特异性拮抗剂，对机体内各类型阿片受体均有竞争性拮抗作用，能与体内的阿片受体结合，以对抗释放过多的内啡肽，在体内吸收迅速、代谢快、拮抗作用也强，易透过血脑屏障，并取代吗啡样物质与。

12、受体结合，解除中枢抑制作用，迅速恢复脑、心、肺等脏器的正常功能，而且不产生吗啡样物质的依赖性、戒断症状和呼吸抑制作用。纳洛酮是吗啡类药物过量的特效解毒剂，也是吗啡、海洛因依赖者的诊断用药。近年来，国内外临床医生也将它试用于急性酒精、安定中毒，脑梗塞、急慢性呼吸衰竭及各种危重症休克的治疗，已取得了较好的效果。自 2002 年至今， SFDA 批准的纳洛酮生产批文有近百条， 2008-2009 年期间，共有 18 家生产企业为北京、浙江、吉林、云南四个地区供应纳洛酮产品，产量很大。 0004 0005 尽管纳洛酮已是目前临床应用最广的阿片受体拮抗剂，但。

13、纳洛酮肝脏首过效应大，片剂口服基本无效，目前临床上使用的剂型仅有注射液和舌下片两种剂型。同时，由于纳洛酮血脑屏障透过率高，在减少慢性疼痛患者长期使用阿片类药物引起的肠功能紊乱及阿片类药物引起的便秘的同时，也抵消了阿片类药物的止痛作用。 0006 聚乙二醇 (PEG) 修饰技术是近年来迅速发展起来的一项新型给药技术，主要应用于注射给药系统。它是一种将聚乙二醇活化后链接到药物分子或表面的技术。药物小分子经过聚乙二醇修饰后，主要具有以下优点： 1、增加药物的水溶性； 2、降低毒性； 3、延长药物循环半衰期，减少用药次数，提高病人依从性，提高生活质量，降低。

14、治疗费用； 4、减少酶降解作用，提高生物利用度； 5、降低血脑屏障透过率，减少中枢副作用。与聚乙二醇链接后，药说明书 CN 103289075 A 8 2/17 页 9 物的药代动力学发生了改变，进而改变药效学。特别是聚乙二醇能使血药浓度维持或接近目标浓度的时间延长，保持药物的药效得以充分地发挥。目前，在国际市场上聚乙二醇修饰的药物产品的代表有： PEG-MICERA。目前，聚乙二醇修饰的小分子药物在国际市场还没有批准上市，但是几个产品已经进入二、三期临床，代表有 Nektar 的 NKTE-102 和 NKTR-118。 0007 本实验组一直致。

15、力于聚乙二醇化修饰小分子药物的研究 (ZL03 8 01109.3， ZL 2004 10029615.3， ZL 2004 8 0005763.X， ZL 2008 1 0093688.7， ZL 02 1 07842.4， ZL 02 1 08778.4)。主要是采用聚乙二醇与小分子药物进行链接，得到的产物在增溶减毒方面有很好的改善。 0008 采用聚乙二醇化技术对纳洛酮进行结构改造的产品 (NKTR-118) 已于 2011 年 3 月进入三期临床 ( 参见 http:/ pdf)。在 NKTR-118 中，聚乙二醇只与一个活性基团连接。 0009 本发明的目的在于克服现有技术的缺。

16、陷，实现每个聚乙二醇与多个纳洛酮结合的问题。本发明采用聚乙二醇化技术对纳洛酮进行结构改造，利用低分子量的聚乙二醇与纳洛酮进行链接，改善药物的药代动力学性质，增加纳洛酮本身的水溶性，改善药物在体内的分布，减低纳洛酮对中枢系统的毒副作用，减轻由于长期使用阿片类药物引起的肠功能紊乱及便秘，并将其开发成针剂或适合口服的制剂。本实验组利用自身优势，合成并筛选出数个聚乙二醇 - 纳洛酮衍生物。与 NKTR-118 不同，本发明中的化合物每个聚乙二醇结构与两个或多个活性基团连接。所以，这些化合物的阿片受体拮抗活性要优于同等分子量的 NKTR-118。发明内容 0010 本。

17、发明提供一种如通式 (II) 的聚乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐： 0011 0012 其中， n 是 1-20 的整数；优选地， n 是 1-15 的整数；更优选地， n 是 2-15 的整数。更优选地， n 可以是 2-14 的整数、 3-13 的整数或 4-12 的整数。 0013 在一些实施方案中，结合物的构型为 (， )、 (， )、 (， ) 或它们的混合物；优选的构型为 (， ) 或 (， )。 0014 本发明的另一个方面提供一种如通式(III)的聚乙二醇-纳洛酮结合物或其药学说明书 CN 103289075 A 9 3/17 页 10。

18、上可接受的盐： 0015 0016 其中， x、 y、 w 相同或不同，分别是 0-20 的整数；优选地， x、 y、 w 相同或不同，分别是 0-15 的整数；更优选地， x、 y、 w 相同，且是 0-10 的整数。更优选地， x、 y、 w 可以相同或不同，分别是 0-9、 0-8、 0-7 或 0-6 的整数。 0017 在一些实施方案中，其中，结合物的构型为 (，， )、 (，， )、 (，， )、 (，， ) 或者它们的混合物；优选的构型为 (，， ) 或 (，， )。 0018 本发明的另一个方面提供一种如通式 (IV) 的聚乙二醇 -。

19、纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐： 0019 说明书 CN 103289075 A 10 4/17 页 11 0020 其中， a、 b、 c、 d 相同或不同，分别是 0-20 的整数；优选地， a、 b、 c、 d 相同或不同，分别是 0-15 的整数；更优选地， a、 b、 c、 d 相同，且是 0-10 的整数。更优选地， a、 b、 c、 d 可以相同或不同，分别是 0-8、 0-7、 0-6 或 0-5 的整数。 0021 在一些实施方案中，其中，结合物的构型为 (，，， )、 (，，， )、 (，，， )、 (，，， )、 (，，。

20、， ) 或者它们的混合物；优选的构型为 (，，， ) 或 (，，， )。 0022 上述药学上可接受的盐，可以是盐酸盐，氢溴酸盐、硫酸盐，硝酸盐、磷酸盐、枸橼酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苯磺酸盐、泛酸盐、抗坏血酸盐等，也可以是这些盐的组合。 0023 本发明的另一个方面提供包含聚乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。所述的药物组合物可以进一步包括药学上可接受的载体或赋形剂。 0024 在一些实施方案中，其中，药物组合物可以构成片剂、注射剂、栓剂、丸剂、软和硬明胶胶囊剂、散剂、溶液剂、混悬剂或。

21、气雾剂。 0025 本发明的另一个方面提供聚乙二醇 - 纳洛酮结合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗由于长期使用阿片类药物引起的肠功能紊乱及便秘的药物中的应用。 0026 本发明的优点是通过亲水性聚合物聚乙二醇的改性可对纳洛酮提供保护，改善药说明书 CN 103289075 A 11 5/17 页 12 物吸收，改变药物体内分布，降低血脑屏障透过率及避免毒副作用。具体实施方式 0027 通过聚乙二醇修饰技术在纳洛酮分子中引入低分子量聚乙二醇，增加其亲水性，改善药物体内分布，降低其血脑屏障透过率，从而降低其毒性的目的。 0028 本发明的结合物按如下方法制备：对亲水。

22、性低聚乙二醇进行改性，引入卤素或者甲磺酰基、对苯甲磺酰基等易离去基团，然后碱性条件下与纳洛酮结合。通过引入低聚乙二醇，改变药物在体内的分布，改善血脑屏障透过，改善由于长期服用阿片受体药物引起的肠功能紊乱及便秘。 0029 对低聚乙二醇而言，采用乙二醇聚合单元予以表示，一般采用含有乙二醇单元的数目来表示，乙二醇单元数目范围为 0-20，优选为 0-10。 0030 本发明的聚乙二醇也包括聚乙二醇的衍生物和类似物，也可以被下述亲水性聚合物替换，所述的亲水性聚合物选自由聚乙二醇、聚谷氨酸、聚天门冬氨酸、聚丙二醇、聚乙烯醇、聚丙烯吗啉、聚噁唑啉以及它们。

23、的共聚物所组成的组。 0031 本发明的结合物可以纯化合物形式或适宜的药物组合物形式进行给药，可采用任何可接受的给药方式或用于类似的用途的试剂进行。因此，采用的给药方式可选择通过口、鼻内、非肠道、局部、透皮或直肠方式，其形式为固体、半固体或液体药剂形式给药，例如，片剂、栓剂、丸剂、软和硬明胶胶囊剂、散剂、溶液剂、混悬剂或气雾剂等，优选采用适用于精确剂量的简单给药的单元剂量形式。组合物可包含常规药用载体或赋形剂和作为活性成分 ( 一种或多种 ) 的本发明的结合物，此外，还可包含其它药剂、载体、辅剂等。 0032 通常，根据所需给药方式，药学上。

24、可接受的组合物将包含约 1 至约 99 重量的本发明结合物、以及 99 至 1 重量的适宜的药用赋形剂。优选组合物包含约 5 至 75 重量的本发明结合物，其余为适宜的药用赋形剂。 0033 可采用液体形式给药的药物组合物例如可通过溶解、分散等手段将本发明的结合物 ( 约 0.5 至约 20 ) 和选择性存在的药用辅剂溶解、分散于载体中，载体的实例为水、盐水、含水葡萄糖、甘油、乙醇等，从而形成溶液剂或混悬剂。 0034 如果需要的话，本发明的药物组合物还可包含少量的辅助物质，如润湿剂或乳化剂、 pH 缓冲剂、抗氧化剂等，例如：柠檬酸、脱水山梨醇单月桂。

25、酸酯、三乙醇胺油酸酯、丁基化羟基甲苯等。 0035 以下实施例用来说明本发明，但不用来限制本发明。 0036 实施例 0037 实施例中所用的盐酸纳洛酮由北京屹东博杰科技有限责任公司提供，甲氧基乙氧基甲基氯 (MEMCL) 从 alfa Aesar 购得，对甲苯磺酰氯从山东亿龙实业有限公司购得，氢化钠从梯希爱 ( 上海 ) 化成工业发展有限公司购得， H(OCH2CH2)4-OH、 H(OCH2CH2)6-OH 以及 H(OCH2CH2)12-OH 从嘉兴博美生物技术有限公司购得。本发明实施例中所用的其他试剂均为商业化学纯试剂。 0038 实施例 1 双端取代的六乙二醇 -。

26、纳洛酮 (， )-NAL26 和 (， )-NAL26( 化合物 E2 和 E1，其中 f 6) 的合成 0039 说明书 CN 103289075 A 12 6/17 页 13 0040 说明书 CN 103289075 A 13 7/17 页 14 0041 化合物 B 的合成： 0042 圆底烧瓶中加入盐酸纳洛酮 A 6g，溶于二氯甲烷 30mL 中，全部溶解后，加入二异丙基乙胺 (DIPEA)11.7g，氮气保护下搅拌 15min，缓慢递加 MEMCL 7.6g，滴毕后室温反应 24h。TLC 检测反应完全后，停止搅拌，加入水萃取三次 (30mL*3)。

27、，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥。浓缩，柱层析得到化合物 B 5.37g，收率为 87。 0043 化合物 C1( 构型 ) 和 C2( 构型 ) 的合成： 0044 圆底烧瓶中加入化合物 B 5.37g，乙醇 180mL， 0.2N 氢氧化钠溶液 90mL，搅拌 15min。分批加入硼氢化钠 2.3g，室温搅拌过夜。TLC 检测反应完全后，停止搅拌，浓缩后，用二氯甲烷萃取三次 (100mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥 2h。浓缩得粗品 4.7g。柱层析得到化合物 C1( 构型 )1.66g，收率为 31， C2。

28、( 构型 )1.80g，收率为 33。 0045 化合物 D1(， ) 和 D2(， ) 的合成： 0046 500mL 三口瓶中加入 22.9g 对甲苯磺酰氯， 80mL 吡啶，冷却至 0 。将 14.1gH-(OCH2CH2)6-OH与40mL吡啶混匀，滴加到三口瓶中，控制温度为0-10。继续在此温度下搅拌反应两小时。 TLC监测反应完全。向反应液中加入300mL冷水及120mL浓盐酸，缓慢搅拌半小时，将反应液转移入 1000mL 分液漏斗中，加入乙酸乙酯萃取两次 (300mL+200mL)。有机层合并，用水洗至中性，无水硫酸钠干。

29、燥两小时。旋转蒸发仪蒸出溶剂。得到粘稠状液体 (Ms-(OCH2CH2)6-OMs) 共 28.7g，直接用于下一步反应。 0047 取柱层析得到的化合物 C1 801mg 置于圆底烧瓶中，加入二甲基甲酰胺 (DMF)3mL 全部溶解后，加入 Ms-(OCH2CH2)6-OMs 421mg，分批加入氢化钠 384mg， 30反应过夜。TLC 检测反应完全后，停止搅拌，加入 100mL 水，用二氯甲烷萃取三次 (100mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥。浓缩得粗品，经柱层析得到化合物 D1(， )335mg，收率为 23.2。 0048 化合。

30、物 D2(， ) 的合成同 D1。说明书 CN 103289075 A 14 8/17 页 15 0049 化合物 E1(， ) 和 E2(， ) 的合成： 0050 将化合物 D1(， )150mg 溶解在 5ml 无水甲醇中，通入氯化氢气体， TLC 监测反应完成后，停止搅拌，浓缩后，缓慢加入碳酸钾水溶液调节 pH 为 9，用乙酸乙酯萃取三次 (100mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥 2h。浓缩得粗品，经柱层析得到化合物 E1(， )98mg，收率为 91。m/zMH+907.2。1H-NMR(DMSO-d6) ： 1.25-1.。

31、35(m， 4H)， 1.45(d， 2H)， 1.55-1.60(m， 2H)， 1.75-1.88(m， 4H)， 2.1-2.2(m， 4H)， 2.49-2.59(m， 4H)， 2.88(d， 2H)， 3.00-3.10(m， 6H)， 3.22(m， 2H)， 3.62-3.77(m， 24H)， 4.52(d， 2H)， 5.12-5.20(m， 4H)， 5.77(m， 2H)， 6.53(d， J 8.16Hz， 2H)， 6.70(d， J 8.1Hz， 2H)。 0051 化合物 E2(， ) 的合成同 E1(， )。m/zMH+907.2。1H-NMR(CD。

32、Cl3) ： 1.15-1.25(m， 4H)， 1.45-1.59(m， 8H)， 2.1-2.26(m， 4H)， 2.52-2.61(m， 4H)， 2.88(d， 2H)， 3.00-3.10(m， 6H)， 3.55-3.77(m， 24H)， 3.86-3.88(m， 2H)， 4.71(d， 2H)， 5.14-5.22(m， 4H)， 5.76-5.84(m， 2H)， 6.49(d， J 8.16Hz， 2H)， 6.70(d， J 8.1Hz， 2H)。 0052 实施例 2 双端取代的四乙二醇 - 纳洛酮 (， )-NAL24( 化合物 E2，其中 f 4) 的合成 0。

33、053 用四乙二醇代替六乙二醇，重复实施例 1 的步骤得到双端取代的四乙二醇 - 纳洛酮 (， )-NAL24。m/zMH+817。1H-NMR(CDCl3) ： 1.14-1.24(m， 4H)， 1.46-1.58(m， 8H)， 2.1-2.23(m， 4H)， 2.52-2.62(m， 4H)， 2.89(d， 2H)， 3.00-3.11(m， 6H)， 3.55-3.78(m， 16H)， 3.86-3.89(m， 2H)， 4.72(d， 2H)， 5.15-5.21(m， 4H)， 5.77-5.85(m， 2H)， 6.50(d， J 8.16Hz， 2H)， 6.71(。

34、d， J 8.1Hz， 2H)。 0054 实施例 3 双端取代的十二乙二醇 - 纳洛酮 (， )-NAL212( 化合物 E2，其中 f 12) 的合成 0055 用 H(OCH2CH2)12-OH 代替六乙二醇，重复实施例 1 的步骤得到双端取代的十二乙二醇 - 纳洛酮 (， )-NAL212。m/zMH+1169。1H-NMR(CDCl3) ： 1.12-1.24(m， 4H)， 1.45-1.589(m， 8H)， 2.11-2.24(m， 4H)， 2.50-2.61(m， 4H)， 2.89(d， 2H)， 3.02-3.11(m， 6H)， 3.50-3.78(m，。

35、 48H)， 3.86-3.90(m， 2H)， 4.71(d， 2H)， 5.14-5.20(m， 4H)， 5.75-5.85(m， 2H)， 6.51(d， J 8.17Hz， 2H)， 6.70(d， J 8.1Hz， 2H)。 0056 实施例 4 三分支的乙二醇 - 纳洛酮结合物 (NAL31)( 化合物 K) 的合成 0057 三分支乙二醇 (H) 的合成：参考 US2006/0047167。 0058 化合物 I 的合成： 0059 250mL 三口瓶中加入 17.2g 对甲苯磺酰氯， 40mL 吡啶，冷却至 0。将 7.14g 化合物 H 与 20mL 吡啶混匀，。

36、滴加到三口瓶中，控制温度为 0-10。继续在此温度下搅拌反应两小时。TLC 监测反应完全。向反应液中加入 100mL 冷水及 60mL 浓盐酸，缓慢搅拌半小时，将反应液转移入1000mL分液漏斗中，加入乙酸乙酯萃取两次(300mL+200mL)。有机层合并，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥两小时。旋转蒸发仪蒸出溶剂。得到粘稠状液体共 13.7g，直接用于下一步反应。 0060 化合物 J 的合成： 0061 取柱层析得到的化合物C1626mg置于圆底烧瓶中，加入DMF 3mL全部溶解后，加入化合物I 236mg，分批加入氢化钠284mg， 30反应过夜。 TLC检。

37、测反应完全后，停止搅拌，加说明书 CN 103289075 A 15 9/17 页 16 入 100mL 水，用二氯甲烷萃取三次 (100mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥 2h。浓缩得粗品，经柱层析得到化合物 J 243mg，收率为 16.9。 0062 化合物 K 的合成： 0063 将化合物J 243mg溶解在5ml无水甲醇中，通入氯化氢气体， TLC监测反应完成后，停止搅拌，浓缩后，缓慢加入碳酸钾水溶液调节 pH 为 9，用二氯甲烷萃取三次 (100mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥 2h。浓。

38、缩得粗品，经柱层析得到化合物 K 168mg，收率为 84.8。m/zMH+1171.6。1H-NMR(DMSO-d6) ： 1.24-1.35(m， 6H)， 1.46(d， 3H)， 1.57-1.62(m， 3H)， 1.77-1.88(m， 6H)， 2.0-2.2(m， 6H)， 2.50-2.59(m， 6H)， 2.66(m， 1H)， 2.86(d， 3H)， 3.00-3.09(m， 9H)， 3.23(m， 3H)， 3.60-3.77(m， 18H)， 4.51(d， 3H)， 5.12-5.18(m， 6H)， 5.78(m， 3H)， 6.53(d， J 8.1。

39、6Hz， 3H)， 6.70(d， J 8.1Hz， 3H)。 0064 说明书 CN 103289075 A 16 10/17 页 17 0065 实施例 5 三分支的乙二醇 - 纳洛酮结合物 (NAL37)( 化合物 N) 的合成 0066 说明书 CN 103289075 A 17 11/17 页 18 0067 化合物 L 的合成：参考文献： J.Org.Chem.2006， 71， 9884-9886. 0068 化合物 M 的合成与实施例 4 中化合物 I 的合成相似，其中用化合物 L 代替化合物 H。 0069 化合物 N(NAL37) 的合成： 0070 用化。

40、合物 L 代替化合物 H，重复实施例 4 的步骤得到三分支取代的乙二醇 - 纳洛酮 (， )-NAL37。m/zMH+1963.6。1H-NMR(DMSO-d6) ： 1.22-1.35(m， 6H)， 1.47(d， 3H)， 1.57-1.64(m， 3H)， 1.74-1.88(m， 6H)， 2.0-2.22(m， 6H)， 2.50-2.57(m， 6H)， 2.68(m， 1H)， 2.88(d， 3H)， 3.01-3.08(m， 9H)， 3.24(m， 3H)， 3.55-3.78(m， 90H)， 4.52(d， 3H)， 5.11-5.18(m， 6H)， 5.77(。

41、m， 3H)， 6.54(d， J 8.16Hz， 3H)， 6.71(d， J 8.1Hz， 3H)。 0071 实施例 6 四分支乙二醇与纳洛酮结合物 (NAL41)( 化合物 Q) 的合成 0072 四分支乙二醇 (M1) 的合成：参考 Bulletin of Academy of Sciences of the USSR， Division of Chemical Science(English Translation) ； vol.38 ； nb.10 ； (1989) ； p.2207。 0073 化合物 N1的合成： 0074 250mL 三口瓶中加入 19.06g 对甲苯。

42、磺酰氯， 40mL 吡啶，冷却至 0。将 7.8g 化合物 M1与 20mL 吡啶混匀，滴加到三口瓶中，控制温度为 0-10。继续在此温度下搅拌反应两说明书 CN 103289075 A 18 12/17 页 19 小时。TLC 监测反应完全。向反应液中加入 100mL 冷水及 60mL 浓盐酸，缓慢搅拌半小时，将反应液转移入1000mL分液漏斗中，加入乙酸乙酯萃取两次(300mL+200mL)。有机层合并，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥两小时。旋转蒸发仪蒸出溶剂。得到粘稠状液体共 14.7g，直接用于下一步反应。 0075 化合物 P 的合成： 0076 取。

43、柱层析得到的化合物 C1 834mg 置于圆底烧瓶中，加入 DMF 3mL 全部溶解后，加入化合物 N1312mg，分批加入氢化钠 389mg， 30反应过夜。TLC 检测反应完全后，停止搅拌，加入 100mL 水，用二氯甲烷萃取三次 (100mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥。浓缩得粗品，经柱层析得到化合物 P 136mg，收率为 16.3。 0077 化合物 Q 的合成： 0078 将化合物P 136mg溶解在5ml无水甲醇中，通入氯化氢气体， TLC监测反应完成后，停止搅拌，浓缩后，缓慢加入碳酸钾水溶液调节pH为9，用乙酸乙。

44、酯萃取三次(100mL*3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗一次后，加入无水硫酸钠干燥。浓缩得粗品，经柱层析得到化合物 Q 85mg，收率为 76.6。m/zMH+1556.7。1H-NMR(DMSO-d6) ： 1.24-1.33(m， 8H)， 1.47(d， 4H)， 1.55-1.60(m， 4H)， 1.74-1.89(m， 8H)， 2.1-2.22(m， 8H)， 2.47-2.61(m， 8H)， 2.89(d， 4H)， 3.01-3.11(m， 12H)， 3.23(m， 4H)， 3.61-3.79(m， 24H)， 4.54(d， 4H)， 5.11-5.18(m。

45、， 8H)， 5.79(m， 4H)， 6.54(d， J 8.16Hz， 4H)， 6.70(d， J 8.1Hz， 4H)。 0079 说明书 CN 103289075 A 19 13/17 页 20 0080 说明书 CN 103289075 A 20 14/17 页 21 0081 实施例 7 四分支乙二醇与纳洛酮结合物 (NAL46)( 化合物 T) 的合成 0082 化合物 R 的合成：参考文献： J.Org.Chem.2006， 71， 9884-9886. 0083 化合物 S 的合成与实施例 6 中化合物 N1的合成相似，其中用化合物 R 代替化合物 M1。。

46、0084 化合物 T(NAL46) 的合成： 0085 用化合物 R 代替化合物 M1，重复实施例 6 的步骤得到三分支取代的乙二醇 - 纳洛酮 (， )-NAL46。m/zMH+2436.9。1H-NMR(DMSO-d6) ： 1.24-1.35(m， 8H)， 1.43(d， 4H)， 1.55-1.64(m， 4H)， 1.74-1.89(m， 8H)， 2.1-2.20(m， 8H)， 2.47-2.60(m， 8H)， 2.87(d， 4H)， 3.01-3.15(m， 12H)， 3.25(m， 4H)， 3.55-3.79(m， 104H)， 4.58(d， 4H)， 5.。

47、11-5.20(m， 8H)， 5.78(m， 4H)， 6.56(d， J 8.16Hz， 4H)， 6.72(d， J 8.1Hz， 4H)。 0086 说明书 CN 103289075 A 21 15/17 页 22 0087 实施例 8 聚乙二醇 - 纳洛酮结合物对 MOR 受体的拮抗作用。 0088 受试物： 0089 双端取代的六乙二醇 - 纳洛酮 (， )-NAL26 和 (， )-NAL26)、双端取代的四乙二醇-纳洛酮(， )-NAL24、单端取代的五乙二醇-纳洛酮-m-NAL5和-m-NAL5(北京键凯科技有限公司提供 ) 及纳洛酮共六个样品作为受试物。 00。

48、90 阳性对照物： 0091 Beta-FNA，是由国家新药筛选中心提供，临用时用钙缓冲液配制成所需浓度。说明书 CN 103289075 A 22 16/17 页 23 0092 盐酸纳洛酮由北京屹东博杰科技有限责任公司提供，临用时用钙缓冲液配制成所需浓度。 0093 实验原理： 0094 通过建立了共转 MOR 和 G16 的细胞系，使得受体被激活后能引起 G16 蛋白的活化，进而激活磷脂酶 C(PLC) 产生 IP3 和 DAG， IP3 可与细胞内内质网和线粒体上的 IP3 受体结合，从而引起胞内钙的释放。因此，测定胞内钙的变化可以作为检测 MOR 活化状态的方法。Fluo-4/AM 是一种钙荧光探针指示剂用来测量钙离子，作为非极性脂溶性的化合物，进入细胞后在细胞脂解酶的作用下， AM基团解离，释出Fluo-4 ；由于Fluo-4是极性分子，不易通过脂质双分子膜，它可使。

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