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1、(10)申请公布号 CN 102920998 A (43)申请公布日 2013.02.13 CN 102920998 A *CN102920998A* (21)申请号 201210513861.0 (22)申请日 2012.12.05 A61K 38/16(2006.01) A61P 25/28(2006.01) (71)申请人 多力坤马木特 地址 830002 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 新华南路 496 号 (72)发明人 多力坤马木特 (74)专利代理机构 乌鲁木齐中科新兴专利事务 所 65106 代理人 李静 (54) 发明名称 山药糖蛋白在提高脑细胞线粒体氧化代谢酶 活性的用途 (5。
2、7) 摘要 本发明涉及一种山药糖蛋白在提高脑细胞线 粒体氧化代谢酶活性的用途， 通过动物实验进行 筛选和验证， 证明了山药糖蛋白具有显著提高脑 细胞线粒体中进行氧化代谢的关键酶即丙酮酸脱 氢酶和 - 酮戊二酸脱氢酶的活性， 从而使伴有这 些酶活性的降低所导致的氧化代谢效率的下降的 老年痴呆、 血管性痴呆、 脑梗塞、 脑瘫等脑细胞退 化和损伤类疾病得到有效治疗。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1 页 2 1. 一种山药糖蛋白在制备提高脑细胞线粒体氧化代谢酶活性的用途，。
3、 其特征在于该山 药糖蛋白在制备提高脑细胞线粒体中丙酮酸脱氢酶和 酮戊二酸脱氢酶活性的药物， 其 中所述的山药糖蛋白来自薯蓣科薯蓣属植物山药或薯蓣科其它属植物的干燥根茎， 所述的 山药糖蛋白的制备按下列步骤进行 ： a、 将山药干燥根茎粉碎成细粉后， 加入 2-5 倍量的水加热， 温度 50-100， 提取两次， 每次 2-3 小时， 过滤后合并两次提取液， 将提取液减压浓缩 ； b、 将步骤 a 所得的浓缩液中加入浓度为 95% 的乙醇， 使其含醇量达到 60-75% 静置， 出 现白色沉淀物， 静置了 3-6 小时， 将白色沉淀物与上清液分离 ； c、 将步骤 b 所得的上清液中继续加入浓。
4、度为 95-98% 的乙醇， 使其乙醇含量达到 90-95%， 出现棕色粘胶状沉淀， 静置 3-6 小时后除去上清液， 收集沉淀物， 干燥后即可得到 棕色或深棕色结晶状或粘胶状固体的山药糖蛋白。 2. 根据权利要求 1 所述的用途， 其特征在于所述的药物是以山药糖蛋白为活性成分， 加上药学上可接受的载体或辅助性成分制备而成的药物制剂。 3. 根据权利要求 1 所述的用途， 其特征在于所述的药物制剂是胶囊剂、 颗粒剂、 片剂、 散剂、 口服液或糖浆剂。 权 利 要 求 书 CN 102920998 A 2 1/4 页 3 山药糖蛋白在提高脑细胞线粒体氧化代谢酶活性的用途 技术领域 0001 本发。
5、明涉及一种山药糖蛋白在提高脑细胞线粒体氧化代谢酶活性的用途， 尤其涉 及山药糖蛋白在制备提高脑细胞线粒体中丙酮酸脱氢酶、 酮戊二酸脱氢酶活性类药物中 的用途。 背景技术 0002 脑细胞线粒体是脑细胞维持正常生理活动的主要细胞器之一， 同时也是控制脑细 胞凋亡的开关， 在正常情况下， 线粒体中的主要氧化代谢酶丙酮酸脱氢酶和 酮戊二酸脱 氢酶， 将产能物质氧化代谢后产生能量 （ATP） 供细胞维持正常的生理活动， 但如果由于脑细 胞的退行性病变使线粒体氧化代谢效率降低， 或由于脑血管梗赛导致脑组织缺血缺氧， 使 脑细胞无法产生足够的 ATP 来维持正常的生理功能， 就会产生一系列病理改变， 如老。
6、年痴 呆、 血管性痴呆、 中风等。 换言之， 在保持脑细胞基本血供、 氧供的前提下， 即便在缺血、 缺氧 的条件下， 如果能提高脑细胞线粒体主要氧化代谢酶的活性， 提高氧化产能的效率， 也会使 因退化和损伤的脑细胞功能得到一定程度的保护和恢复。 从而使因这些病理变化而产生的 疾病得到有效地治疗和控制。 0003 山药糖蛋白为薯蓣科薯蓣属植物山药根茎中所含有的一种天然活性成分， 在此 前公开的研究中证明此物质可以有效治疗睡眠呼吸暂停综合征、 具有抗缺氧、 抗疲劳等作 用 （ZL201010171536.1 和 ZL2010101715337） ， 本发明在此基础上进一步研究表明 ： 山药糖 蛋白。
7、能显著地提高脑细胞线粒体中丙酮酸脱氢酶和 酮戊二酸脱氢酶的活性， 从而使因缺 血、 缺氧和其它因素导致的脑细胞线粒体氧化代谢降低所致的损伤和功能障碍得到治疗和 恢复， 但到目前为止， 尚未见有相关报道。 发明内容 0004 本发明目的在于， 提供一种山药糖蛋白在提高脑细胞线粒体氧化代谢酶活性的用 途， 通过动物实验进行筛选和验证， 证明了山药糖蛋白具有显著提高脑细胞线粒体中进行 氧化代谢的关键酶即丙酮酸脱氢酶和 - 酮戊二酸脱氢酶的活性， 从而使伴有这些酶活性 的降低所导致的氧化代谢效率的下降的老年痴呆、 血管性痴呆、 脑梗塞、 脑瘫等脑细胞退化 和损伤类疾病得到有效治疗。 0005 本发明所。
8、述的一种山药糖蛋白在制备提高脑细胞线粒体氧化代谢酶活性的用途， 该山药糖蛋白在制备提高脑细胞线粒体中丙酮酸脱氢酶和 酮戊二酸脱氢酶活性的药 物， 其中所述的山药糖蛋白来自薯蓣科薯蓣属植物山药或薯蓣科其它属植物的干燥根茎， 所述的山药糖蛋白的制备按下列步骤进行 ： 0006 a、 将山药干燥根茎粉碎成细粉后， 加入 2-5 倍量的水加热， 温度 50-100， 提取两 次， 每次 2-3 小时， 过滤后合并两次提取液， 将提取液减压浓缩 ； 0007 b、 将步骤 a 所得的浓缩液中加入浓度为 95% 的乙醇， 使其含醇量达到 60-75% 静 置， 出现白色沉淀物， 静置了 3-6 小时， 将。
9、白色沉淀物与上清液分离 ； 说 明 书 CN 102920998 A 3 2/4 页 4 0008 c、 将步骤 b 所得的上清液中继续加入浓度为 95-98% 的乙醇， 使其乙醇含量达到 90-95%， 出现棕色粘胶状沉淀， 静置 3-6 小时后除去上清液， 收集沉淀物， 干燥后即可得到 棕色或深棕色结晶状或粘胶状固体的山药糖蛋白。 0009 所述的药物是以山药糖蛋白为活性成分， 加上药学上可接受的载体或辅助性成分 制备而成的药物制剂。 0010 所述的药物制剂是胶囊剂、 颗粒剂、 片剂、 散剂、 口服液或糖浆剂。 0011 本发明所述的山药糖蛋白及其制剂， 具有良好的提高脑细胞线粒体中丙酮。
10、酸脱氢 酶和 酮戊二酸脱氢酶的活性的作用， 可用于治疗因脑细胞线粒体氧化产能效率降低， 而 产生的各种急慢性脑损伤和因脑细胞氧化代谢降低而产生的脑功能退化类疾病， 其来源于 天然植物， 药源充足， 提取制备方法简便易行， 可将其制成胶囊、 片剂、 颗粒剂、 口服液等多 种剂型， 具有疗效显著， 使用安全方便等优点。 0012 根据本发明所述的内容， 按照本领域的普通技术和惯用手段， 在不脱离本发明上 述基本思想的前提下， 还可以作出其它多种形式的修改， 替换与变更。 以下通过实施例形式 的具体实施方式， 对本发明的上述内容再做进一步详细说明， 但不应将此理解为本发明上 述主题的范围仅限于以下的。
11、实例， 凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范 围。 具体实施方式 0013 实施例 1 ： 山药糖蛋白的制备 0014 取山药原生药 1000g 粉碎成细粉， 加入 2 倍量水加热， 温度 50， 提取两次， 每次 2 小时， 过滤后合并两次提取液， 将提取液浓缩至 50%， 将浓度为 95% 乙醇加入浓缩液中使其 含醇量达到 60%， 出现白色沉淀物后静置了 3-6 小时， 将沉淀物与上清液分离， 在上清液中 继续加入浓度为 95% 乙醇使其含醇量达到 90%， 出现棕色沉淀， 静置 3-6 小时后除去上清液 收集沉淀物， 烘干干燥， 即可得到棕色或深棕色粘胶状固体粗山药糖蛋白。。
12、 0015 实施例 2 ： 山药糖蛋白的制备 0016 取山药原生药1000g粉碎成粗粉， 加入3倍量水加热， 温度70， 提取2次， 每次时 间3小时， 过滤后合并两次提取液， 浓缩50%， 将浓度为95%乙醇加入浓缩液中使其含醇量达 到 70%， 出现白色沉淀， 静置 3-6 小时， 将沉淀物与上清液分离， 向上清液中继续加入浓度为 95% 乙醇， 使其含醇达到 90%， 出现棕色粘胶状沉淀， 除去上清液， 收集沉淀物， 真空干燥， 即 可得到棕色或深棕色固体状较纯的山药糖蛋白。 0017 实施例 3 ： 山药糖蛋白的制备 0018 取山药原生药 1000g 粉碎为大颗粒状， 加入 5 倍。
13、量水加热， 温度 100， 提取 3 次， 每次 2 小时， 过滤后合并两次提取液， 浓缩至 50%， 将浓度为 95% 乙醇加入浓缩液中， 使其含 醇量达到 75%， 出现白色沉淀后， 抽取上清液， 上清液中继续加入浓度为 98% 乙醇， 使其含醇 量达到 95%， 出现黄棕色粘胶状沉淀， 除去上清液， 收集沉淀物进行真空冷冻干燥， 即可得到 棕色结晶状较纯的山药糖蛋白。 0019 实施例 4 ： 山药糖蛋白对小鼠脑细胞线粒体中丙酮酸脱氢酶和 a 酮戊二酸脱氢酶 活性的作用研究 ： 0020 材料和方法 ： 说 明 书 CN 102920998 A 4 3/4 页 5 0021 材料 ： 小。
14、鼠 a 酮戊二酸脱氢酶酶联免疫分析试剂盒， 小鼠丙酮酸脱氢酶酶联免疫 分析试剂盒 ： 均购自北京永辉生物科技有限公司 ； 0022 动物 ： 昆明种小鼠 , 雄雌各半， 体重 (20 土 2)g， 由新疆医科大学实验动物中心提 供 ； 0023 动物分组 ： 将 27 只小鼠随机分为 3 组， 每组 9 只， 即对照组， 山药糖蛋白小剂量组 和山药糖蛋白大剂量组 ； 0024 药物 ： 将山药糖蛋白加入纯净水溶解， 配制成 0、 42g/mL 的溶液备用 ； 0025 方法 ： 山药糖蛋白大剂量小鼠组按 0， 42g/Kg 体重给予山药糖蛋白溶液灌胃， 山药 糖蛋白小剂量小鼠按 0， 21g/。
15、Kg 体重给予山药糖蛋白溶液灌胃， 每天一次 , 连续 10 天， 对 照组则给予纯净水灌胃， 第 10 天给药一小时后， 处死小鼠后， 取脑组织称重， 加入一定量的 PBS（pH7.4） ， 用匀浆器将标本充分匀浆， 离心 20 分钟 （2000 一 3000 转 / 分） ， 仔细收集上 清， 分装一份待检测， 其余冷冻备用， 用相应的试剂盒按说明书操作检测。 0026 结果 ： 0027 山药糖蛋白大小两个剂量组与对照组相比， 小鼠脑组织中， 丙酮酸脱氢酶与 酮 戊二酸脱氢酶的含量显著增加， 见表 1 ： 0028 表 1 对照组与糖蛋白组酶含量对比 （ 酮戊二酸脱氢酶 U/mg pro。
16、tein) 0029 对照组 小剂量组 大剂量组 1 25.21 1 32.45 1 25.48 2 22.17 2 24.56 2 35.47 3 16.45 3 25.13 3 26.16 4 29.57 4 35.24 4 39.25 5 22.59 5 26.35 5 32.47 6 26.75 6 24.14 6 34.27 7 29.23 7 31.24 7 21.48 8 18.17 8 21.14 8 28.37 9 19.67 9 23.54 9 29.48 23.31222 27.08778 30.27 4.450023 4.470548 5.268932 0030 表 2。
17、 对照组与糖蛋白组酶含量对比 （丙酮酸脱氢酶 U/mg protein) 0031 说 明 书 CN 102920998 A 5 4/4 页 6 对照组 小剂量组 大剂量组 1 15.26 1 19.57 1 14.21 2 12.56 2 15.68 2 20.47 3 16.24 3 15.48 3 16.89 4 9.23 4 14.21 4 19.54 5 12.58 5 11.24 5 12.47 6 16.54 6 10.47 6 14.63 7 19.47 7 16.57 7 11.24 8 11.14 8 21.47 8 18.54 9 12.47 9 16.32 9 19.47 13.94333 15.66778 16.38444 3.168442 3.516304 3.366497 0032 从表中可以看出 ： 山药糖蛋白及其制剂， 具有良好的提高脑细胞线粒体中丙酮酸 脱氢酶和 酮戊二酸脱氢酶的活性的作用， 可用于治疗因脑细胞线粒体氧化产能效率降 低， 而产生的各种急慢性脑损伤和因脑细胞氧化代谢降低而产生的脑功能退化类疾病。 说 明 书 CN 102920998 A 6 。