用于改变黏膜内衬的生物物理特性的柠檬酸钙及乳酸钙调 配物 相关的申请
本申请要求受益于 2009 年 3 月 26 日提交的美国临时申请案 61/163,772 以及 2009 年 12 月 8 日提交的美国临时申请案 61/267,747。上述所有申请的揭示内容在此全文引入 以供参考。
背景技术
全世界有数百万人类遭受可经由改变黏膜内衬来治疗或预防的疾病或病症。许 多器官都有液体黏膜内衬， 且其生物物理特性可有助于或阻止正常的功能。在广泛与粘膜 内衬的性质有关的损害健康的效应中， 例如， 在正常的呼气期间从上呼吸道粘膜内衬液体 (UAL)“脱落” 的颗粒可携带可生存的、 感染性的细菌或病毒病原体， 像是严重急性呼吸道症 候群 (SARS) 冠状病毒、 流行性感冒及结核病， 其能够通过吸入传播到健康个体 ； UAL 的表面 张力已显示对阻塞性睡眠呼吸中止症候群扮演重要角色 ； 以及由于病毒 / 分枝杆菌而改变 肠道的黏膜内衬可能导致延长发炎性肠病。 经控制的黏膜内衬的生物物理特性的改变可有 效地治疗 / 预防许多这些损害健康的效应。
之前， 改变肺黏膜内衬液体的物理特性的非 - 表面活性剂已显示用于治疗及预防 一些疾病及病症的传染。 主要将含有等张性生理食盐水溶液或高张性生理食盐水溶液的喷 雾化调配物用于限制生物性喷雾形成和 / 或感染的传播。干燥粉体提供比液体调配物更实 质的优点 ( 例如容易传送等等 )。 然而， 许多这些调配物却有使它们不适于作为干燥粉体的 争议， 例如有关将盐类处理成可吸入型式的干燥粉体、 许多盐类的低溶解度、 易溶盐类的高 吸湿性、 以及限制吸入剂治疗的放热定性的挑战。
因此， 亟需发展一种能够改变黏膜内衬的额外调配物， 且不会有上述列示不欲有 的性质。因而需要继续进行额外制定工作 ( 亦即， 组合氯化钙与其它赋形剂， 以降低最终产 品的负载量 ) 以及鉴定其它盐类， 以达成在所述调配物中所要的钙、 钠及氯离子含量。理想 地， 这些新颖的调配物可包括大量呈安定干燥粉体的钙盐， 其能够喷雾化而用于肺部传递。 发明内容
本发明是关于医药组合物， 包括以选自乳酸钙和柠檬酸钙所组成群组的钙盐作为 活性成分， 其中， 所述医药组合物适合用于吸入剂。
在一些具体实施例中， 所述医药组合物进一步包括钠盐。 所述钠盐可为氯化钠、 醋 酸钠、 碳酸氢钠、 碳酸钠、 硫酸钠、 硬脂酸钠、 抗坏血酸钠、 苯甲酸钠、 磷酸二氢钠、 磷酸钠、 亚 硫酸氢钠、 柠檬酸钠、 乳酸钠、 硼酸钠、 葡萄糖酸钠或偏硅酸钠。在优选的具体实施例中， 所 述钠盐是氯化钠。
在一些具体实施例中， 所述医药组合物包括呈 8 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 比率的钙与 钠。在其它具体实施例中， 所述医药组合物包括呈 1 ∶ 2( 摩尔∶摩尔 ) 比率的钙与钠。在 其它具体实施例中， 所述医药组合物包括呈 1 ∶ 1.3( 摩尔∶摩尔 ) 比率的钙与钠。在一些具体实施例中， 所述医药组合物是调配来传递约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量的钙剂量到肺部。在其它具体实施例中， 所述医药组合物是调配来提供 约 0.001 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量的钠剂量到肺部。在一些 具体实施例中， 所述医药组合物是调配来传递约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量的钙剂量到鼻腔。在其它具体实施例中， 所述医药组合物是调配来提供约 0.001 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量的钠剂量到鼻腔。
在一些具体实施例中， 所述组合物是液体调配物。所述液体调配物可为溶液或悬 浮液。在一些具体实施例中， 所述乳酸钙是以约 0.1％至约 20％ (w/v) 存在。
在其它具体实施例中， 所述医药组合物是干燥粉体。 钙盐可为乳酸钙或柠檬酸钙。 在一些具体实施例中， 所述钙盐是以约 0.5％至约 90％ (w/w) 存在。
医药组合物可进一步包括额外的治疗剂。所述医药组合物可为单位剂量组合物。
本发明亦关于用于治疗呼吸道感染的方法， 包括投予患有呼吸道感染、 或呈现呼 吸道感染的病征的个体有效量的医药组合物， 其系适合的包括以乳酸钙或柠檬酸钙作为活 性成分的吸入剂。
本发明亦关于用于预防呼吸道感染的方法， 包括投予处于接触呼吸道感染风险的 个体有效量的医药组合物， 其系适合的包括以乳酸钙或柠檬酸钙作为活性成分的吸入剂。
本发明亦关于用于降低呼吸道感染传播的方法， 包括投予患有呼吸道感染、 或呈 现呼吸道感染的病征的个体有效量的医药组合物， 其系适合的包括以乳酸钙或柠檬酸钙作 为活性成分的吸入剂。
在一些具体实施例中， 所述呼吸道感染是选自下列所组成群组的细菌所产生 的感染 ： 肺 炎链 球菌 (Streptococcus pneumoniae)、 金 黄色 葡萄 球菌 (Staphylococcus aureus)、 葡 萄 球 菌 属 (Staphylococcus spp.)、 链 球 菌 属 (Streptococcus spp.)、 无 乳 链 球 菌 (Streptococcus agalactiae)、 流 感 嗜 血 杆 菌 (Haemophilus influenzae)、 克雷白氏肺炎杆菌 (Klebsiella pneumoniae)、 大肠杆菌 (Escherichia coli)、 绿脓杆 菌 (Pseudomonas aeruginosa)、 黏 膜 莫 拉 克 氏 菌 (Moraxella catarrhalis)、 肺炎披衣 菌 (Chlamydophila pneumoniae)、 肺 炎 霉 浆 菌 (Mycoplasma pneumoniae)、 嗜肺性退伍 军 人 杆 菌 (Legionella pneumophila)、 肠 产 气 杆 菌 属 (Enterobacter spp.)、 不动杆菌 属 (Acinetobacter spp.)、 鲍 氏 不 动 杆 菌 (Acinetobacter baumannii)、 抗甲氧西林 金 黄 色 葡 萄 球 菌 (methicillin-resistant Staphylococcus aureus)、 嗜麦芽窄食单 胞 菌 (Stenotrophomonas maltophilia)、 伯 克 霍 德 菌 属 (Burkholderia spp) 及 其 组 合。在其它具体实施例中， 所述感染是选自下列所组成群组的病毒所产生的感染 ： 流感 病 毒 (influenza virus)、 呼 吸 道 融 合 病 毒 (respiratory syncytial virus)、 腺病毒 (adenovirus)、 间质肺炎病毒 (metapneumovirus)、 巨细胞病毒 (cytomegalovirus)、 副流 感病毒 (para influenza virus)、 鼻病毒 (rhinovirus)、 单纯性疱疹病毒 (herpes simplex virus)、 SARS 冠状病毒 (SARS- 冠状病毒 ) 及天花病毒 (smallpox)。
本发明亦关于用于治疗慢性肺部疾病的方法， 所述疾病包括哮喘 (asthma)( 例 如， 过敏性 / 异位性、 幼童性、 晚期、 咳嗽变异性或慢性阻塞性 )、 气道过度反应性、 过敏性鼻 炎 ( 周期性或非 - 周期性 )、 支气管扩张症、 慢性支气管炎、 肺气肿、 慢性阻塞性肺部疾病、 囊 性纤维化、 初期喘鸣等。所述盐调配物在个体中对阻断慢性肺部疾病的急性发作有效。例示性肺部疾病包括哮喘 ( 例如， 过敏性 / 异位性、 幼童性、 晚期、 咳嗽变异性或慢性阻塞性 )、 气道过度反应性、 过敏性鼻炎 ( 周期性或非 - 周期性 )、 支气管扩张症、 慢性支气管炎、 肺气 肿、 慢性阻塞性肺部疾病、 囊性纤维化、 初期喘鸣等。本发明进一步关于用于阻断慢性肺部 疾病的急性发作及预防支气管收缩和支气管痉挛的方法， 其是由于抗原暴露 ( 例如， 过敏 原、 病源体及及其它环境刺激 ) 所致。 附图说明 图 1 是显示暴露在柠檬酸钙干燥粉体的细胞降低流行性感冒效价的图表， 其是比 较给药后 24 小时与未处理的细胞控制组 ( 空气 ) 及暴露在白氨酸干燥粉体的细胞控制组。
图 2 是显示乳酸钙的液体调配物抑制流行性感冒感染的图表。与未处理的控制组 ( 空气 ) 比较， 乳酸钙调配物显着降低病毒感染。
图 3 是显示经乳酸钙干燥粉体处理的细胞降低流行性感冒传染的图表， 其显示比 较未处理的控制组 ( 空气 )， 给药后 24 小时具有降低的病毒效价。
图 4 是传递 (pass-through) 模型的示意图。
图 5A 是显示暴露在干燥粉体的细菌的传递模型结果图示。硫酸钙 (4.5μg Ca/ 2 cm 传递剂量 ) 降低细菌移动通过海藻酸钠模拟物。
图 5B 是显示暴露在干燥粉体的细菌的再传递模型的结果图示。
硫酸钙 (4.5μg Ca/cm2 传递剂量 ) 降低细菌移动通过海藻酸钠模拟物。 经测试的 2 钙盐调配物包含 0μg、 4.3μg、 6.4μg 或 10μg 的钙。硫酸钙 (4.3μg Ca/cm 传递剂量 )， 2 醋酸钙 (10μg Ca/cm 传递剂量 ) 及乳酸钙 (6.4μg Ca/cm2 传递剂量 ) 盐类降低细菌移动 通过海藻酸钠模拟物。
图 6 是显示乳酸钙以剂量反应方式降低流行性感冒传染的图示。与空气控制组比 较， 各别乳酸钙干燥粉体浓度皆降低病毒效价。
图 7 是显示乳酸钙的液体调配物在浓度为 0.116M 下适度地降低肺炎感染的细菌 负载量的图示。
图 8A 至 C 是显示钙干燥粉体调配物对抗不同病毒病源体的抗病毒活性的图示。 使 用暴露在没有调配物的 Calu-3 细胞作为控制组， 并与暴露在 PUR111、 PUR112 和 PUR113 的 Calu-3 细胞比较。 定量暴露到各喷雾剂调配物的细胞所释出的病毒浓度。 线条表示个别测 试重复孔的平均值及标准差。
具体实施方式
本发明是关于乳酸钙及柠檬酸钙调配物。所述调配物亦可包括钠盐。具体地， 调 配物可包括具有或不具有钠盐 ( 例如氯化钠 ) 的柠檬酸钙和 / 或乳酸钙。调配物可为液体 ( 例如， 溶液、 悬浮液 ) 或干燥粉体。 所述调配物是经处理及调配， 以使它们的物理及空气动 力学性质适用于传递到呼吸道 ( 例如， 上呼吸道、 呼吸气道、 肺 )。如本文所述， 研究结果显 示抑制、 预防及防止呼吸道感染的传播。
术语 “呼吸道感染” 是本领域的术语， 意指上呼吸感染 ( 例如， 鼻腔、 咽、 喉的感染 ) 及下呼吸感染 ( 例如， 气管、 主支气管、 肺的感染 ) 及其组合。与呼吸道感染有关的典型病 征包括 ： 鼻充血、 咳嗽、 流鼻水、 喉咙痛、 发烧、 面部内压、 打喷嚏、 胸痛及呼吸困难。术语 “肺炎” 是本领域的术语， 意指肺部的发炎病状。肺炎可能有多种原因造成， 包括细菌、 病毒、 真菌或寄生虫的感染、 以及对肺部的化学或物理伤害。与肺炎有关的典型 病征包括 ： 咳嗽、 胸痛、 发烧和呼吸困难。肺炎的临床诊断在所属领域中是周知的， 可包括 x 光和 / 或痰液检查。
术语 “细菌性肺炎”意指细菌性感染所造成的肺炎， 例如包括下列所致呼吸道 的感染 ： 肺 炎链球 菌 (Streptococcus pneumoniae)、 金 黄色 葡 萄球菌 (Staphylococcus aureus)、 葡 萄 球 菌 属 (Staphylococcus spp.)、 链 球 菌 属 (Streptococcus spp.)、 无乳 链 球 菌 (Streptococcus agalactiae)、 流 感 嗜 血 杆 菌 (Haemophilus influenzae)、 克 雷 白 氏 肺 炎 杆 菌 (Klebsiella pneumoniae)、 大 肠 杆 菌 (Escherichia coli)、 绿脓杆 菌 (Pseudomonas aeruginosa)、 黏 膜 莫 拉 克 氏 菌 (Moraxella catarrhalis)、 肺炎披衣 菌 (Chlamydophila pneumoniae)、 肺 炎 霉 浆 菌 (Mycoplasma pneumoniae)、 嗜肺性退伍 军 人 杆 菌 (Legionella pneumophila)、 肠 产 气 杆 菌 属 (Enterobacter spp.)、 不动杆菌 属 (Acinetobacter spp.)、 鲍 氏 不 动 杆 菌 (Acinetobacter baumannii)、 抗甲氧西林金 黄色葡萄球菌 (methicillin-resistant Staphylococcus aureus)、 嗜麦芽窄食单胞菌 (Stenotrophomonas maltophilia)、 伯克霍德菌属 (Burkholderia spp) 及其组合。 术语 “病毒性肺炎” 意指病毒性感染所造成的肺炎。主要造成病毒性肺炎的病毒 例如包括 ： 流感病毒 (influenza virus)、 呼吸道融合病毒 (respiratory syncytial virus (RSV))、 腺病毒 (adenovirus)、 及间质肺炎病毒 (metapneumovirus)。单纯性疱疹病毒 (herpes simplex virus) 对一般群众而言是少见的肺炎起因， 但却常见于新生儿。免疫系 统减弱的人们也会处于由巨细胞病毒 (CMV) 造成的肺炎的风险中。
本文所用的术语 “喷雾剂” 意指颗粒 ( 包括液体及非 - 液体颗粒， 例如干燥粉体 ) 的细水雾的任何制剂， 典型具有体积中质几何直径为约 0.1 至约 30 微米 (microns)， 或具有 质量中质空气流动力学直径为介于约 0.5 至约 10 微米。优选地， 喷雾剂颗粒的体积中质几 何直径为小于约 10 微米。喷雾剂颗粒的优选体积中质几何直径为约 5 微米。例如， 所述喷 雾剂可含有体积中质几何直径为下列范围的颗粒 ： 介于约 0.1 至约 30 微米、 介于约 0.5 至 约 20 微米、 介于约 0.5 至约 10 微米、 介于约 1.0 至约 3.0 微米、 介于约 1.0 至 5.0 微米、 介 于约 1.0 至 10.0 微米、 介于约 5.0 至 15.0 微米。优选的质量中质空气流动力学直径为介 于约 0.5 至约 10 微米、 介于约 1.0 至约 3.0 微米、 和介于约 1.0 至 5.0 微米。
本文所用的术语 “呼吸道” 包括上呼吸道 ( 例如， 鼻道、 鼻腔、 喉咙、 咽 )、 呼吸信道 ( 例如， 喉、 气管、 支气管、 细支气管 ) 及肺 ( 例如， 呼吸细支气管、 肺泡管、 肺泡囊、 肺泡 )。
至于本文所用 “1X” 张力意指相对于正常人类血液与细胞为等渗透压的溶液。相 对于 1X， 使用适当乘数溶液来记载相比于正常人类血液与细胞为低渗透压或高渗透压的溶 液。例如， 低渗透压溶液可具有 0.1X、 0.25X 或 0.5X 张力， 而高渗透压溶液可具有 2X、 3X、 4X、 5X、 6X、 7X、 8X、 9X 或 10X 张力。
本文所用术语 “干燥粉体” 意指含有细微经分散可吸入的干燥颗粒的组成物， 且能 够分散于吸入剂装置， 接着被受试者吸入。所述干燥粉体或干燥颗粒可含有高达约 15％水 或其它溶剂， 或实质上不含水或其它溶剂， 或为无水的。
调配物
本发明是关于盐调配物， 包括以乳酸钙和 / 或柠檬酸钙作为活性成分， 且可视需
要地含有额外的盐类或试剂。用于投予到呼吸道的盐调配物例如作为喷雾剂。所述盐调配 物对于治疗、 预防和 / 或降低呼吸道感染疾病的接触传染 ( 例如， 病毒感染、 细菌感染 ) 有 效。 所述盐调配物对于治疗慢性肺部疾病亦有效。 例示性肺部疾病包括哮喘 ( 例如， 过敏性 / 异位性、 幼童性、 晚期、 咳嗽变异性或慢性阻塞性 )、 气道过度反应性、 过敏性鼻炎 ( 周期性 或非 - 周期性 )、 支气管扩张症、 慢性支气管炎、 肺气肿、 慢性阻塞性肺部疾病、 囊状纤维化、 初期喘鸣等。所述盐调配物在个体中对于阻断慢性肺部疾病的急性发作有效。所述盐调配 物对于预防支气管收缩及支气管痉挛有效， 其是由于抗原 ( 例如， 过敏原、 病源体及其它环 境刺激 ) 所致。
所述盐调配物对于改变呼吸道的粘膜内衬的生物物理特性有效。 这些特性包括例 如： 黏液表面处的凝胶化、 黏膜内衬的表面张力、 黏膜内衬的表面弹性和 / 或黏度、 黏膜内 衬的体积弹性和 / 或黏度。不欲受限于特定理论， 咸相信通过本文所述盐调配物及方法所 产生的优点 ( 例如， 治疗及预防的优点 ) 是由于在投予所述盐调配物后， 增加呼吸道 ( 例如 肺粘液或呼吸道内衬液体 ) 中钙阳离子 ( 通过盐调配物中钙盐所提供的 Ca2+) 的量。所述 盐调配物减缓抗原通过呼吸道内衬液体， 因而降低暴露于由于免疫反应可能引发发炎作用 及后续支气管收缩及支气管痉挛的抗原。 对于以液体及干燥粉体两种型式的钙的肺部投药， 柠檬酸钙及乳酸钙有一些优点 以供用于调配物的选择性钙盐。特别是， 柠檬酸钙及乳酸钙具有充足的水溶性以允许通过 喷雾 - 干燥使他们处理成可吸入的干燥粉体， 且当他们沉积于肺部时有助于溶解， 以及具 有够低的吸湿性以允许用于制造含有高钙盐负载的干燥粉体， 其暴露到正常及升高的湿度 时为相对物理安定性。另外， 氯化钙 ( 例如氯化钙脱水物 ) 使溶液放出大量的热， 且当溶解 时实质产生热。当将氯化钙投予到黏液膜时有发热的风险。柠檬酸钙及乳酸钙也没有关于 氯化钙盐对于使溶液为放热方面的限制。最后， 柠檬酸盐及乳酸盐离子被认为对包含在医 药组合物中是安全且可接受的。
再者， 有关干燥粉体调配物， 柠檬酸钙及乳酸钙具有优选于那些其它钙盐型式 ( 包含氯化钙盐型式 ) 的组合特性。柠檬酸钙及乳酸钙是 ： (i) 能够被处理成适合于肺部投 药的颗粒尺寸分布的干燥粉体型式， (ii) 在干燥粉体型式中具有充足物理化学安定性， 以 利于制造在宽幅范围情况下 ( 包括当暴露到升高的湿度情况 ) 为可分散及物理安定性的干 燥粉体， (iii) 当沉积于肺时能够进行快速溶解， 以及 (iv) 不具有导致不佳耐受性或不良 反应的特性， 例如不具有混合的显着放热， 等。
除乳酸钙或柠檬酸钙外， 所述盐调配物可包括下列元素的任何无毒性盐型式 ： 钠、 钾、 镁、 钙、 铝、 硅、 钪、 钛、 钒、 铬、 钴、 镍、 铜、 锰、 锌、 锡、 银及相似元素。所述盐调配物可为任 何所欲的型式， 例如溶液、 乳液、 悬浮物或干燥粉体。优选的盐调配物， 例如可经雾化的溶 液及干燥粉体。除了乳酸钙或柠檬酸钙外， 优选的盐调配物含有钠盐 ( 例如， 盐水 (0.15M NaCl 或 0.9％溶液 ))。当调配物包括乳酸钙及钠盐， 或柠檬酸钙及钠盐， 若有需要， 亦可包 含一种或多种其它盐类。所述盐调配物可包括多剂量或为所欲的单位剂量组合物。
适合的钠盐包括， 例如 ； 氯化钠、 醋酸钠、 碳酸氢钠、 碳酸钠、 硫酸钠、 硬脂酸钠、 抗 坏血酸钠、 苯甲酸钠、 磷酸二氢钠、 磷酸钠、 亚硫酸氢钠、 柠檬酸钠、 乳酸钠、 硼酸钠、 葡萄糖 酸钠、 偏硅酸钠等、 或其组合。
适合的钙盐包括， 例如 ： 氯化钙、 碳酸钙、 醋酸钙、 磷酸钙、 海藻酸钙、 硬脂酸钙、 山
梨酸钙、 硫酸钙、 葡萄糖酸钙、 柠檬酸钙、 乳酸钙等、 或其组合。
适合的镁盐包括， 例如 ： 碳酸镁、 醋酸镁、 磷酸镁、 海藻酸镁、 山梨酸镁、 硫酸镁、 葡 萄糖酸镁、 硬脂酸镁、 三硅酸镁、 氯化镁、 柠檬酸镁、 乳酸镁等、 或其组合。
适合的钾盐包括， 例如 ： 碳酸氢钾、 氯化钾、 柠檬酸钾、 硼酸钾、 亚硫酸氢钾、 磷酸二 氢钾、 海藻酸钾、 苯甲酸钾等、 或其组合。额外适合的盐类包括硫酸铜、 氯化铬、 氯化锡及相 似盐类。
其它适合的盐类包括氯化锌、 氯化铝及氯化银。
所述盐调配物一般制得或包括生理上可接受的载剂或赋形剂。对于溶液型式中 的盐调配物， 可包括悬浮液或乳液、 任何适合的载剂或赋形剂。适合的载剂包括， 例如 ： 水 性、 醇 / 水性、 及醇溶液、 乳液或悬浮液， 包括水、 盐水、 乙醇 / 水溶液、 乙醇溶液、 缓冲的介 质、 推进剂等。对于干燥粉体型式中的盐调配物， 适合的载剂或赋形剂包括， 例如 ： 糖类 ( 例如， 乳糖、 海藻糖 )、 糖醇类 ( 例如， 甘露醇、 木糖醇、 山梨醇 )、 胺基酸类 ( 例如， 甘氨酸、 丙氨酸、 白氨酸、 异白氨酸 )、 二棕榈酸磷脂酰胆碱 (DPPC)、 双磷脂酰甘油 (DPPG)、 1， 2- 二 软脂羟基 -sn- 甘油 -3- 磷 -L- 丝氨酸 (DPPS)、 1， 2- 二软脂羟基 -sn- 甘油 -3- 磷酰胆碱 (DSPC)、 1， 2- 二硬脂酰基 -sn- 甘油 -3- 磷酰乙醇胺 (DSPE)、 1- 棕榈酰基 -2- 油酰磷脂 胆碱 (POPC)、 脂肪醇、 聚环氧化乙烷 -9- 月桂基醚、 表面活性的脂肪、 酸类、 三油酸山梨坦 (Span 85)、 甘氨胆酸盐、 表面活性肽、 泊洛沙姆 (poloxomers)、 山梨糖醇酐脂肪酸酯、 泰洛 沙泊 (tyloxapol)、 磷酸脂质、 烷基化糖类、 磷酸钠、 麦芽糊精、 人类血清白蛋白 ( 例如， 重 组人类血清白蛋白 )、 生物可降解的聚合物 ( 例如， PLGA)、 右旋糖酐、 糊精等。若有需要， 盐调配物亦可包括添加剂、 保存剂或流体、 营养剂或电解质补充剂 ( 参见， Remington′ s Pharmaceutical Sciences， 17th Edition， Mack Publishing Co.， PA， 1985)。
盐调配物优选含有乳酸钙或柠檬酸钙浓度， 以允许方便投予有效量的所述调配物 到呼吸道。 例如， 为了传递有效量的调配物到受试者的呼吸道， 一般希望液体调配物不稀释 以便有大量的调配物成为喷雾状。长期投药是不利的， 且一般的调配物应该要浓缩足以允 许投予有效量到呼吸道 ( 例如， 通过雾化调配物的吸入剂， 如喷雾状的液体或雾化的干燥 粉体 ) 或鼻腔， 其是在不超过约 120 分钟、 不超过约 90 分钟、 不超过约 60 分钟、 不超过约 45 分钟、 不超过约 30 分钟、 不超过约 25 分钟、 不超过约 20 分钟、 不超过约 15 分钟、 不超过约 10 分钟、 不超过约 7.5 分钟、 不超过约 5 分钟、 不超过约 4 分钟、 不超过约 3 分钟、 不超过约 2 分钟、 不超过约 1 分钟、 不超过约 45 秒、 或不超过约 30 秒。例如， 液体乳酸钙或柠檬酸钙 调配物可含有约 0.01％至约 30％的乳酸钙或柠檬酸钙 (w/v)、 介于 0.1％至约 20％的乳酸 钙或柠檬酸钙 (w/v)、 或介于 0.1％至约 10％的乳酸钙或柠檬酸钙 (w/v)。液体调配物可含 有约 0.001M 至约 1.5M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.01M 至约 1.0M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.01M 至约 0.9M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.01M 至约 0.8M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.01M 至约 0.7M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.01M 至约 0.6M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.01M 至约 0.5M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.01M 至约 0.4M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.01M 至约 0.3M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.01M 至约 0.2M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.1M 至约 1.0M 的乳酸 钙或柠檬酸钙、 约 0.1M 至约 0.9M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.1M 至约 0.8M 的乳酸钙或柠檬 酸钙、 约 0.1M 至约 0.7M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.1M 至约 0.6M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.1M 至约 0.5M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.1M 至约 0.4M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 0.1M 至约0.3M 的乳酸钙或柠檬酸钙、 或约 0.1M 至约 0.2M 的乳酸钙或柠檬酸钙。柠檬酸钙及乳酸钙 的溶解度会限制溶液的制备。 在所述情况中， 液体调配物可为悬浮液的型式， 其含有相同量 的钙盐以能达到所欲的摩尔浓度。
干燥粉体调配物可含有至少约 5 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 10 重量％的 乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 15 重量％的钙盐乳酸盐或柠檬酸钙、 至少约 19.5 重量％的乳酸 钙或柠檬酸钙、 至少约 20 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 22 重量％的乳酸钙或柠檬 酸钙、 至少约 25.5 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 30 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至 少约 35 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 40 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 45 重 量％乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 50 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 55 重量％的乳酸钙 或柠檬酸钙、 至少约 60 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 65 重量％的乳酸钙或柠檬酸 钙、 至少约 70 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 75 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 80 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 85 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 90 重量％ 的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 95 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 96 重量％的乳酸钙或 柠檬酸钙、 至少约 97 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 98 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 至少约 99 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙。例如， 一些干燥粉体调配物含有约 20 重量％至约 80 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 20 重量％至约 70 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙、 约 20 重 量％至约 60 重量％的乳酸钙或柠檬酸钙， 或实质上由乳酸钙或柠檬酸钙组成。 此外或者， 上述干燥粉体调配物可含有钙盐， 其提供如下列量的 Ca+2 ： 至少约 5 重 +2 +2 +2 +2 量％ Ca 、 至少约 7 重量％ Ca 、 至少约 10 重量％ Ca 、 至少约 11 重量％ Ca 、 至少约 12 重 +2 +2 +2 量％ Ca 、 至少约 13 重量％ Ca 、 至少约 14 重量％ Ca 、 至少约 15 重量％ Ca+2、 至少约 17 +2 +2 +2 +2 重量％ Ca 、 至少约 20 重量％ Ca 、 至少约 25 重量％ Ca 、 至少约 30 重量％ Ca 、 至少约 35 +2 +2 +2 +2 重量％ Ca 、 至少约 40 重量％ Ca 、 至少约 45 重量％ Ca 、 至少约 50 重量％ Ca 、 至少约 55 +2 +2 +2 +2 重量％ Ca 、 至少约 60 重量％ Ca 、 至少约 65 重量％ Ca 或至少约 70 重量％ Ca 。
当干燥粉体盐调配物含有乳酸钙或柠檬酸钙， 且在所述干燥粉体调配物中的钠 盐， 钠盐量可依所欲的钙∶钠比率而定。例如， 所述干燥粉体调配物可含有至少约 1.6 重 量％钠盐、 至少约 5 重量％钠盐、 至少约 10 重量％钠盐、 至少约 13 重量％钠盐、 至少约 15 重量％钠盐、 至少约 20 重量％钠盐、 至少约 24.4 重量％钠盐、 至少约 28 重量％钠盐、 至少 约 30 重量％钠盐、 至少约 30.5 重量％钠盐、 至少约 35 重量％钠盐、 至少约 40 重量％钠盐、 至少约 45 重量％钠盐、 至少约 50 重量％钠盐、 至少约 55 重量％钠盐、 或至少约 60 重量％ 钠盐。
此外或者， 干燥粉体盐调配物可含有钠盐， 其提供如下列量的 Na+ ： 至少约 0.1 + + + + 量％ Na 、 至少约 0.5 量％ Na 、 至少约 1 重量％ Na 、 至少约 2 重量％ Na 、 至少约 3 重量％ + + + + Na 、 至少约 4 重量％ Na 、 至少约 5 重量％ Na 、 至少约 6 重量％ Na 、 至少约 7 重量％ Na+、 至 + + + + 少约 8 重量％ Na 、 至少约 9 重量％ Na 、 至少约 10 重量％ Na 、 至少约 11 重量％ Na 、 至少 + + + + 约 12 重量％ Na 、 至少约 14 重量％ Na 、 至少约 16 重量％ Na 、 至少约 18 重量％ Na 、 至少约 + + + + 20 重量％ Na 、 至少约 22 重量％ Na 、 至少约 25 重量％ Na 、 至少约 27 重量％ Na 、 至少约 29 + + + + 重量％ Na 、 至少约 32 重量％ Na 、 至少约 35 重量％ Na 、 至少约 40 重量％ Na 、 至少约 45 重 + + + 量％ Na 、 至少约 50 重量％ Na 、 或至少约 55 重量％ Na 。
某些钙盐溶解后于每摩尔钙盐提供两摩尔或更多摩尔 Ca+2。上述钙盐可为特定适
合于制造富含钙的液体或干燥粉体调配物， 因而可传递有效量的阳离子 ( 例如， Ca2+、 Na+、 或 2+ + + Ca 及 Na )。例如， 一摩尔的柠檬酸钙溶解后提供三摩尔的 Ca2 。一般优选的钙盐也是具 有低分子量的盐和 / 或含有低分子量的阴离子。低分子量的钙盐 ( 例如含有钙离子及低分 子量阴离子的钙盐 ) 相对于高分子量盐及含有高分子量阴离子的钙盐是富含钙的。一般优 选的钙盐具有如下列分子量 ： 小于约 1000g/mol、 小于约 950g/mol、 小于约 900g/mol、 小于 约 850g/mol、 小于约 800g/mol、 小于约 750g/mol、 小于约 700g/mol、 小于约 650g/mol、 小于 约 600g/mol、 小于约 550g/mol、 小于约 510g/mol、 小于约 500g/mol、 小于约 450g/mol、 小于 约 400g/mol、 小于约 350g/mol、 小于约 300g/mol、 小于约 250g/mol、 小于约 200g/mol、 小于 约 150g/mol、 小于约 125g/mol、 或小于约 100g/mol。 此外或者， 一般优选为总重量的钙盐中 钙离子供予实质部分的重量。一般优选为钙离子重量是总钙盐的至少 10％、 总钙盐的至少 16％、 至少 20％、 至少 24.5％、 至少 26％、 至少 31％、 至少 35％、 或至少 38％。
一些盐调配物含有钙盐， 其中， 钙与所述钙盐的总重的重量比率是介于约 0.1 至 约 0.5。例如， 钙与所述钙盐的总重的重量比率是介于约 0.15 至约 0.5、 介于约 0.18 至约 0.5、 介于约 0.2 至约 0.5、 介于约 0.25 至约 0.5、 介于约 0.27 至约 0.5、 介于约 0.3 至约 0.5、 介于约 0.35 至约 0.5、 介于约 0.37 至约 0.5、 或介于约 0.4 至约 0.5。 一些盐调配物含有乳酸钙及钠盐， 例如 0.15M 氯化钙中有 0.12M 乳酸钙或柠檬酸 钙、 或 0.90％盐水中有 3.7％ (w/v) 乳酸钙。一些盐调配物含有乳酸钙或柠檬酸钙， 且钠盐 的特征为钙∶钠的比率 ( 摩尔∶摩尔 )。适合的钙∶钠 ( 摩尔∶摩尔 ) 比率的范围是从约 0.1 ∶ 1 至约 32 ∶ 1、 约 0.5 ∶ 1 至约 16 ∶ 1、 约 2 ∶ 1 至约 16 ∶ 1、 约 4 ∶ 1 至约 12 ∶ 1、 约 1 ∶ 1 至约 8 ∶ 1。例如， 钙∶钠 ( 摩尔∶摩尔 ) 的比率可为约 0.77 ∶ 1、 约 1 ∶ 1、 约 1 ∶ 1.3、 约 1 ∶ 2、 约 2 ∶ 1、 约 4 ∶ 1、 约 8 ∶ 1 或约 16 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )。在特定的实 例中， 所述盐调配物含有乳酸钙或柠檬酸钙及氯化钙， 且钙∶钠比率为约 8 ∶ 1( 摩尔∶摩 尔 )。 此类型的水性液体盐调配物可依张力及存在于调配物中的钙盐与钠盐的浓度而变化。 例如， 所述盐调配物可含有在表 1 所列示的张力和摩尔浓度下的乳酸钙及氯化钙。
表 1 液体乳酸钙及氯化钙调配物
在 某 些 态 样 中， 所 述 盐 调 配 物 含 有 钙 盐 及 钠 盐， 且 Ca+2 比 Na+ 的 比 率 是 从 约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 16 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )。例如， 所述调配物可含有 Ca+2 与 Na+ 的 比率是从约 5 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 16 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 6 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )至约 16 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 7 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 16 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 8 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 16 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 9 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 16 ∶ 1( 摩 尔∶摩尔 )、 从约 10 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 16 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 11 ∶ 1( 摩尔∶摩 尔 ) 至约 16 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 12 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 16 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 13 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 16 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 14 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 16 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 15 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 16 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )。
在 某 些 态 样 中， 所 述 盐 调 配 物 含 有 钙 盐 及 钠 盐， 且 Ca+2 与 Na+ 的 比 率 是 从 约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 5 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 6 ∶ 1( 摩 尔∶摩尔 )、 从约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 7 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩 尔 ) 至约 8 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 9 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 10 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 11 ∶ 1( 摩 尔∶摩尔 )、 从约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 12 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩 尔 ) 至约 13 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 14 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从 约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 15 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )。
所述盐调配物可含有 Ca+2 与 Na+ 的比率是从约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 12 ∶ 1( 摩 尔∶摩尔 )、 从约 5 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 11 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 6 ∶ 1( 摩尔∶摩 尔 ) 至约 10 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 从约 7 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 9 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )。 在特定实例中， Ca+2 与 Na+ 的比率是约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 4.5 ∶ 1( 摩尔∶ 摩尔 )、 约 5 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 5.5 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 6 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 6.5 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 7 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 7.5 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 8 ∶ 1( 摩尔∶ 摩尔 )、 约 8.5 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 9 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 9.5 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 10 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 10.5 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 11 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 11.5 ∶ 1( 摩 尔∶摩尔 )、 约 12 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 12.5 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 13 ∶ 1( 摩尔∶摩 尔 )、 约 13.5 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 14 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 14.5 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 15 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 约 15.5 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )、 或约 16 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )。 +2 +
在更特定实例中， Ca 与 Na 的比率是约 8 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 或约 16 ∶ 1( 摩尔∶ 摩尔 )。
所述盐调配物可为所欲的低渗透压、 等渗透压或高渗透压。 例如， 本文所述盐调配 物各自可具有约 0.1X 张力、 约 0.25X 张力、 约 0.5X 张力、 约 1X 张力、 约 2X 张力、 约 3X 张力、 约 4X 张力、 约 5X 张力、 约 6X 张力、 约 7X 张力、 约 8X 张力、 约 9X 张力、 约 10X 张力、 至少约 1X 张力、 至少约 2X 张力、 至少约 3X 张力、 至少约 4X 张力、 至少约 5X 张力、 至少约 6X 张力、 至少约 7X 张力、 至少约 8X 张力、 至少约 9X 张力、 至少约 10X 张力、 介于约 0.1X 至约 1X、 介 于约 0.1X 至约 0.5X、 介于约 0.5X 至约 2X、 介于约 1X 至约 4X、 介于约 1X 至约 2X、 介于约 2X 至约 10X、 或介于约 4X 至约 8X。
若有需要， 所述盐调配物可包括一种或多种添加剂， 例如祛痰 (mucoactive) 或化 痰 (mucolytic) 剂、 表面活性剂、 抗生素、 抗病毒剂、 抗组织胺、 咳嗽抑制剂、 支气管扩张剂、 抗发炎剂、 类固醇、 疫苗、 佐剂、 祛痰剂 (expectorant)、 高分子、 有助于慢性维持 CF 的治疗 剂。
适合的祛痰或化痰剂的实例包括 MUC5AC 及 MUC5B 黏蛋白、 DNA- 酶、 N- 乙酰半胱
胺酸 (NAC)、 半胱氨酸、 N- 乙酰半胱胺酸的离胺酸盐 (nacystelyn)、 α- 脱氧核糖核酸酶 (dornase alfa)、 凝溶胶蛋白 (gelsolin)、 肝素、 硫酸乙酰肝素、 P2Y2 促效剂 ( 例如 UTP、 INS365)、 高渗透压盐水、 及甘露醇。
适合的表面活性剂包括 L-α- 磷脂酰胆碱二软脂羟基 (″ DPPC″ )、 双磷脂酰甘 油 (DPPG)、 1， 2- 二软脂羟基 -sn- 甘油 -3- 磷 -L- 丝氨酸 (DPPS)、 1， 2- 二软脂羟基 -sn- 甘 油 -3- 磷酰胆碱 (DSPC)、 1， 2- 二硬脂酰基 -sn- 甘油 -3- 磷酰乙醇胺 (DSPE)、 1- 棕榈酰 基 -2- 油酰磷脂胆碱 (POPC)、 脂肪醇、 聚环氧化乙烷 -9- 月桂基醚、 表面活性脂肪酸、 三油酸 山梨坦 (Span 85)、 甘氨胆酸盐、 表面活性肽、 泊洛沙姆、 山梨糖醇酐脂肪酸酯、 泰洛沙泊、 磷 脂、 及烷基化糖。
若有需要， 所述盐调配物可含有抗生素。例如， 用于治疗细菌性肺炎或 VAT 的盐调 配物， 可进一步包括抗生素， 诸如巨环内酯 (macrolide)( 例如， 阿奇霉素 (azithromycin)、 克拉霉素 (clarithromycin) 及红霉素 (erythromycin))、 四环素类 (tetracycline)( 例如， 四环霉素 (doxycycline)、 老虎霉素 (tigecycline))、 氟化奎林酮类 (fluoroquinolone) ( 例 如，吉 米 沙 星 (gemifloxacin)、左 氧 氟 沙 星 (levofloxacin)、环 丙 沙 星 (ciprofloxacin) 及莫西沙星 (mocifloxacin))、 头芽孢菌素抗生素 (cephalosporin)( 例 如， 头孢曲松 (ceftriaxone)、 头孢噻肟酸 (defotaxime)、 头孢噻甲羧肟 (ceftazidime)、 头 孢 吡 肟 (cefepime))、 盘 尼 西 林 (penicillin)( 例 如， 阿 莫 西 林 (amoxicillin)、 含 有 克 拉 维 酸 钾 (clavulanate)、 青 霉 素 (ampicillin)、 必 达 霉 素 (piperacillin) 及 替 卡 西 林 (ticarcillin) 的 阿 莫 西 林 ) 视 需 要 含 有 β- 内 酰 胺 酶 抑 制 剂 ( 例 如， 舒巴坦 (sulbactam)、 他 佐 巴 坦 (tazobactam) 及 (clavulanic acid))， 例 如， 青 霉 素 - 舒 巴 坦、 必达霉素 - 他佐巴坦及含有克拉维酸钾的替卡西林、 氨基糖苷 (aminoglycoside)( 例 如， 氨丁卡霉素 (amikacin)、 阿贝卡星 (arbekacin)、 见大霉素 (gentamicin)、 卡那霉素 (kanamycin)、 新霉素 (neomycin)、 奈替米星 (netilmicin)、 巴龙霉素 (paromomycin)、 红链 霉素 (rhodostreptomycin)、 链霉素 (streptomycin)、 托普霉素 (tobramycin) 及安痢霉素 (apramycin))、 青霉烯 (penem) 或类抗生素 (carbapenem)( 例如， 多利培南 (doripenem)、 厄 他 培 南 (ertapenem)、 亚 胺 培 南 (imipenem) 及 美 罗 培 南 (meropenem))、 卡巴青霉素 (monobactam)( 例 如， 氨 曲 南 (aztreonam))、 恶 唑 烷 酮 (oxazolidinone)( 例 如， 奈唑胺 (linezolid))、 万古霉素 (vancomycin)、 糖肽 (glycopeptide) 抗生素 ( 例如， 万古霉素衍生 物抗生素 (telavancin))、 结核 - 分枝杆菌抗生素等。
若有需要， 所述盐调配物可含有治疗分枝杆菌 ( 例如结核分枝杆菌 ) 感染用试 剂。适合用于治疗分枝杆菌 ( 例如结核分枝杆菌 ) 感染用的试剂包括 ： 氨基糖苷 ( 例如， 卷曲霉素 (capreomycin)、 卡那霉素、 链霉素 )、 氟化奎林酮类 ( 例如， 环丙沙星、 左氧氟沙 星、 莫西沙星 (moxifloxacin))、 异烟肼 (isozianid) 及异烟肼类似物 ( 例如， 乙硫异烟胺 (ethionamide))、 氨基水杨酸盐 (aminosalicylate)、 环丝氨酸、 二芳基喹啉、 乙胺丁醇、 吡 嗪酰胺、 丙硫异烟胺、 福霉素 (rifampin) 等。
若 有 需 要， 所 述 盐 调 配 物 可 含 有 适 合 的 抗 病 毒 试 剂， 例如： 奥司他韦 (oseltamivir)、 扎 那 米 韦 (zanamavir) 金 刚 胺 或 金 刚 乙 胺 (rimantadine)、 利巴韦 林 (ribavirin)、 丙 氧 鸟 苷 (gancyclovir)、 缬 更 昔 洛 韦 (valgancyclovir)、 膦甲酸钠 (foscavir)、 Cytogam ( 巨 细 胞 病 毒 免 疫 球 蛋 白 )、 普 乐 康 尼 (pleconaril)、 芦平曲韦 (rupintrivir)、 帕 利 珠 单 抗 (palivizumab)、 莫 维 珠 单 抗 (motavizumab)、 阿糖胞苷 (cytarabine)、 二十二烷醇、 地诺替韦 (denotivir)、 西多福韦 (cidofovir)、 及阿塞克楼佛 (acyclovir)。所述盐调配物可含有适合的抗 - 流行性感冒试剂， 例如 ： 扎那米韦、 奥司他 韦、 金刚胺、 或金刚乙胺。
适合的抗组织胺包括 ： 可利汀 (clemastine)、 氮卓斯汀 (asalastine)、 罗拉他定 (loratadine)、 非索非那定 (fexofenadine) 等。
适合的咳嗽抑制剂包括 ： 苯佐那酯 (benzonatate)、 苯丙哌林 (benproperine)、 氯 丁替诺 (clobutinal)、 苯海拉明 (diphenhydramine)、 右旋美索芬 (dextromethorphan)、 双 - 甲 乙 基 萘 磺 酸 (dibunate)、 非 决 酯 (fedrilate)、 海 罂 粟 碱 (glaucine)、 奥索拉明 (oxolamine)、 二乙哌啶二酮 (piperidione)、 类罂粟碱 (opioids) 例如可待因 (codeine) 等。
适合的支气管扩张剂包括 ： 短效 β2 促效剂、 长效 β2 促效剂 (LABA)、 长效毒蕈 碱拮抗剂 (LAMA)、 LABAs 及 LAMAs 的组合、 甲黄嘌呤 (methylxanthines) 等。适合的短活 性 β2 促效剂包括 ： 阿布帖醇 (albuterol)、 肾上腺素、 吡布特罗 (pirbuterol)、 左旋沙丁 胺醇 (levalbuterol)、 二羟苯基异丙氨基乙醇 (metaproteronol)、 吡布特罗 (maxair) 等。 适合的 LABAs 包括沙美特罗 (salmeterol)、 福莫特若 (formoterol) 及异构物 ( 例如福莫 特罗 (arformoterol))、 双氯醇胺 (clenbuterol)、 妥洛特 - 加龙省 - 加龙省 - 加龙省罗 TM (tulobuterol)、 维兰特罗 (vilanterol)(Revolair )、 茚达特罗 (indacaterol) 等。LAMAs 的实例包括 ： 噻托铵 (tiotroprium)、 吡咯糖 (glycopyrrolate)、 阿地铵 (aclidinium)、 异 丙托品 (ipratropium) 等。LABAs 及 LAMAs 的组合的实例包括 ： 含有吡咯糖的茚达特罗、 含 有噻托铵的茚达特罗等。甲黄嘌呤的实例包括 (theophylline) 等。
适合的抗发炎试剂包括白三烯 (leukotriene) 抑制剂、 PDE4 抑制剂、 其它抗发炎 试剂等。适合的白三烯抑制剂包括孟鲁司特 (montelukast)( 半胱氨酸白三烯抑制剂 )、 马 鲁司特 (masilukast)、 那氟斯特 (zafirleukast)( 白三烯 D4 及 E4 受体抑制剂 )、 齐留通 (zileuton)(5- 脂氧酶抑制剂 ) 等。适合的 PDE4 抑制剂包括西洛司特 (cilomilast)、 罗氟 司特 (roflumilast) 等。其它抗发炎试剂包括奥马珠单抗 (omalizumab)( 抗 IgE 免疫球蛋 白 )、 IL-13 及 IL-13 受体抑制剂 ( 例如， AMG-317、 MILR1444A、 CAT-354、 QAX576、 IMA-638、 安芦珠单抗 (Anrukinzumab)、 IMA-026、 MK-6105、 DOM-0910 等 )、 IL-4 及 IL-4 受体抑制剂 ( 例如， Pitrakinra、 AER-003、 AIR-645、 APG-201、 DOM-0919 等 )、 IL-1 抑制剂例如单克隆抗 体 (canakinumab)、 CRTh2 体拮抗剂例如 AZD1981( 购自 AstraZeneca)、 嗜中性球弹性蛋白 酶抑制剂例如 AZD9668( 购自 AstraZeneca)、 P38 激酶抑制剂例如 losmapimed 等。
适合的类固醇包括皮质类固醇、 皮质类固醇与 LABAs 的组合、 皮质类固醇与 LAMAs 的组合等。适合的皮质类固醇包括亚丁皮质醇 (budesonide)、 氟替皮质醇 (fluticasone)、 氟尼缩松 (flunisolide)、 特安皮质醇 (triamcinolone)、 贝可皮质醇 (beclomethasone)、 莫美他松 (mometasone)、 环索奈德 (ciclesonide)、 糖皮质固醇 (dexamethasone) 等。皮质 类固醇与 LABAs 的组合包括含有氟替皮质醇的沙美特罗 (salmeterol)、 含有亚丁皮质醇的 福莫特若 (formoterol)、 含有氟替皮质醇的福莫特若、 含有莫美他松的福莫特若、 含有莫美 他松的茚达特罗 (indacaterol) 等。
适 合 的 祛 痰 剂 包 括 呱 芬 那 辛 (guaifenesin)、愈 创 木 酚 横 酸 酯(guaiacolculfonate)、 氯化铵、 碘化钾、 泰洛沙泊、 五硫化二锑等。
适合的疫苗包括经鼻吸入用流行性感冒疫苗等。
适合的高分子包括蛋白质及大分子胜肽、 多醣及寡醣、 及 DNA 和 RNA 核酸分子及其 具有治疗、 预防或诊断活性的类似物。蛋白质可包括抗体， 例如单株抗体。核酸分子包括基 因、 反义分子 (antisense molecules) 例如结合至互补 DNA、 RNA 或核糖体以抑制转录或转 译的 siRNAs。
有助于慢性维持 CF 的经选择的治疗剂包括抗生素 / 巨环抗生素、 支气管扩张剂、 吸入式 LABAs、 及用以促进呼吸道分泌物清除的试剂。 适合的抗生素 / 巨环抗生素实例包括 托普霉素、 阿奇霉素、 环丙沙星、 可利斯汀 (colistin) 等。适合的支气管扩张剂实例包括吸 入式短效 β2 促效剂例如阿布帖醇等。适合的吸入式 LABAs 实例包括沙美特罗、 福莫特若 等。用以促进呼吸道分泌物清除的试剂的适合实例包括 α- 脱氧核糖核酸酶、 高渗透压盐 水等。
干燥粉体调配物是使用适当的颗粒直径、 表面粗糙度及密度而制备， 以传递到呼 吸道欲选择区域的位置。例如， 对于上呼吸道的传递可使用较高密度或较大颗粒。同样地， 在一次投药中， 可投予不同尺寸的颗粒的混合物， 以到达肺的不同区域。 至于本文所用的词组 “空气动力学轻颗粒” 意指具有敲紧密度 (tap density) 小于 3 约 0.4g/cm 的颗粒。 干燥粉体的颗粒的敲紧密度可通过标准的 USP 敲紧密度测量方法来获 得。敲紧密度是壳层 (envelope) 质量密度的一般测量。均质颗粒 (isotropic particle) 的壳层质量密度定义为通过能包住的最小球壳体积 (sphere envelope volume) 所分出颗 粒的质量。低敲紧密度提供的特性包括不规则表面架构及多孔性结构。
含有较大颗粒尺寸的干燥粉体调配物 (“DPFs” ) 具有改善的流动性特征， 例如较 少聚集作用 (Visser， J.， Powder Technology 58 ： 1-10(1989))， 较易喷雾化， 及可能较少 吞噬作用 .Rudt， S.and R.H.Muller.J.Controlled Release， 22 ： 263-272(1992) ； Tabata Y.， and Y.Ikada.J.Biomed.Mater.Res.22 ： 837-858(1988)。然而， 若希望沉积于口腔更 远处的肺部腔道， 咸了解 DPFs 应该具有质量中质空气流动力学直径为小于 10 微米， 且更 优选为小于 5 微米。因而用于吸入剂治疗的干燥粉体喷雾剂一般是使用体积平均几何直 径主要在小于 10 微米， 且优选为小于 5 微米的范围来制造， 虽然干燥粉体是可在具有任 何所欲空气动力直径范围中制造。Ganderton D.， J.Biopharmaceutical Sciences， 3： 101-105(1992) ； Gonda， I.″ Plysico-Chemical Principles in Aerosol Delivery.″ in Topics in Pharmaceutical Sciences 1991， Crommelin， D.J.and K.K.Midha， Eds.， Medpharm Scientific Publishers， Stuttgart， pp.95-115(1992)。大 “载体” 颗粒 ( 不含 盐调配物 ) 可与治疗性喷雾剂共 - 传递， 以在其它可能的优势中有助于达到有效喷雾化。 French， D.L.， Edwards， D.A.and Niven， R.W.， J.Aerosol Sci.27 ： 769-783(1996)。使用本 领域所建立的方法可设计及制造降解及释放时间范围从数秒到数月的颗粒。
一般而言， 为干燥粉体的盐调配物可通过喷雾干燥法、 冷冻干燥法、 喷射研磨法、 单一及两倍乳液溶剂蒸发及超临界流体来制造。优选地， 盐调配物可通过喷雾干燥法来制 造， 其是准备含有所述调配物的盐及其它组份的液体馈送原料， 将所述液体馈送原料喷进 密封的腔室， 以及利用加热气流来移除溶剂。一般而言， 由于对颗粒尺寸分布的不良控制， 对于制造可吸入的干燥粉体来说研磨法不是优选的。
含有能充分溶解于水中或水性溶剂中的盐 ( 例如氯化钙及乳酸钙 ) 的经喷雾干燥 的粉体可使用传统方法而易于制得。一些盐类 ( 例如柠檬酸钙及碳酸钙 ) 在水中或其它水 性溶剂中具有相对低的溶解度。 含有上述盐类的经喷雾干燥的粉体可使用任何适合的方法 来制造。一适合的方法是涉及在溶液中组合其它更易溶解的盐类并允许反应 ( 沉淀反应 ) 能制造用于干燥粉体调配物的所欲盐。例如， 若希望干燥粉体调配物包括柠檬酸钙及氯化 钠， 则可制备含有高溶解度盐类氯化钙及柠檬酸钠的溶液。所述沉淀反应生成柠檬酸钙 ： 3CaCl2+2Na3Cit → Ca3Cit2+6NaCl。 优选为， 在添加钙盐之前使钠盐完全溶解， 并连续搅拌溶 液。所述沉淀反应能够完全进行或是在完成之前停止， 例如若有需要， 通过喷雾干燥溶液。
或者， 将两种饱和或不完全饱和的溶液进料到静态搅拌机， 以获得饱和或过饱和 的溶液后静态的混合。优选地， 所述后喷雾干燥溶液是过饱合的。所述两种溶液可为水性 溶液或有机溶液， 但优选为实质上水性。然后将后静态混合溶液进料到喷雾干燥机的雾化 单元。在优选的具体实施例中， 所述后静态混合溶液是立即进料到雾化单元。所述雾化单 元的一些实例包括二流体喷嘴、 旋转喷雾器、 或加压喷嘴。优选地， 所述雾化单元是二流体 喷嘴。 在一具体实施例中， 所述二流体喷嘴是内混式喷嘴， 意为在气体离开最向外的出孔口 之前， 使气体在液体馈料喷射撞击。在另一具体实施例中， 所述二流体喷嘴是外混式喷嘴， 意为在气体离开最向外的出孔口之后， 使气体在液体馈料喷射撞击。 所得溶液可彻底溶解盐且呈现出清彻或为沉淀形式。取决于反应条件， 可快速形 成沉淀或随着时间形成沉淀。 含有轻质沉淀的溶液导致形成的稳定同质悬浮液可以经喷雾 干燥。
也可以通过将个别组份掺混到最终调配物来制造干燥粉体调配物。例如， 含有钙 盐的第一干燥粉体可与含有钠盐的第二干燥粉体掺混， 以制得含有钙盐及钠盐的干燥粉体 盐调配物。若有需要， 含有赋形剂 ( 例如乳糖 ) 和 / 或其它活性成分 ( 例如抗生素、 抗病毒 剂 ) 的额外干燥粉体可包含在所述掺混物中。所述掺混物可包含任何所欲相对量或比率的 盐类、 赋形剂及其它成分 ( 例如抗生素、 抗病毒剂 )。
若有需要， 可使用特定的聚合物来制造干燥粉体， 以最佳化颗粒特征， 包括 ： i) 试 剂 ( 例如盐 ) 之间的交互作用以被传递， 且所述聚合物在传递期间提供试剂的稳定性并维 持活性 ； ii) 聚合物降解的速率， 因而使试剂释出量变曲线 (profile) ； iii) 通过化学修饰 的表面特征及标定性能 ； 以及 iv) 颗粒多孔性。 聚合的颗粒可使用下列方法来制造 ： 单一及 两倍乳液溶剂蒸发、 喷雾干燥法、 溶剂萃取、 溶剂蒸发、 相分离、 简单及复杂凝块作用、 界面 聚合法、 喷射研磨法及本领域中熟习此技艺者所周知的其它方法。可使用本领域中所知用 于制造微球或微胶囊的方法来制得颗粒。
含有钙盐的干燥粉体盐调配物一般包含至少约 3 重量％钙盐、 至少约 5 重量％钙 盐、 10 重量％钙盐、 约 15 重量％钙盐、 至少约 19.5 重量％钙盐、 至少约 20 重量％钙盐、 至少 约 22 重量％钙盐、 至少约 25.5 重量％钙盐、 至少约 30 重量％钙盐、 至少约 37 重量％钙盐、 至少约 40 重量％钙盐、 至少约 48.4 重量％钙盐、 至少约 50 重量％钙盐、 至少约 60 重量％钙 盐、 至少约 70 重量％钙盐、 至少约 75 重量％钙盐、 至少约 80 重量％钙盐、 至少约 85 重量％ 钙盐、 至少约 90 重量％钙盐、 或至少约 95 重量％钙盐。
此外或者， 所述干燥粉体调配物可含有钙盐， 其提供下列量的 Ca+2 ： 至少约 3 重 +2 +2 +2 +2 量％ Ca 、 至少约 5 重量％ Ca 、 至少约 7 重量％ Ca 、 至少约 10 重量％ Ca 、 至少约 11 重
量％ Ca+2、 至少约 12 重量％ Ca+2、 至少约 13 重量％ Ca+2、 至少约 14 重量％ Ca+2、 至少约 15 +2 +2 +2 +2 重量％ Ca 、 至少约 17 重量％ Ca 、 至少约 20 重量％ Ca 、 至少约 25 重量％ Ca 、 至少约 30 +2 +2 +2 +2 重量％ Ca 、 至少约 35 重量％ Ca 、 至少约 40 重量％ Ca 、 至少约 45 重量％ Ca 、 至少约 50 +2 +2 +2 +2 重量％ Ca 、 至少约 55 重量％ Ca 、 至少约 60 重量％ Ca 、 至少约 65 重量％ Ca 、 或至少约 +2 70 重量％ Ca 。
当干燥粉体盐调配物含有钙盐及钠盐时， 所述干燥粉体调配物中的钠盐的量可取 决于所欲钙∶钠 ( 摩尔∶摩尔 ) 比率。 例如， 所述干燥粉体调配物可含有至少约 1.6 重量％ 钠盐、 至少约 5 重量％钠盐、 至少约 10 重量％钠盐、 至少约 13 重量％钠盐、 至少约 15 重量％ 钠盐、 至少约 20 重量％钠盐、 至少约 24.4 重量％钠盐、 至少约 28 重量％钠盐、 至少约 30 重 量％钠盐、 至少约 30.5 重量％钠盐、 至少约 35 重量％钠盐、 至少约 40 重量％钠盐、 至少约 45 重量％钠盐、 至少约 50 重量％钠盐、 至少约 55 重量％钠盐、 或至少约 60 重量％钠盐。
此外或者， 所述干燥粉体盐调配物可含有钠盐， 其提供下列量的 Na+ ： 至少约 0.1 + + + + 重量％ Na 、 至少约 0.5 重量％ Na 、 至少约 1 重量％ Na 、 至少约 2 重量％ Na 、 至少约 3 重 + + + + 量％ Na 、 至少约 4 重量％ Na 、 至少约 5 重量％ Na 、 至少约 6 重量％ Na 、 至少约 7 重量％ + + + + Na 、 至少约 8 重量％ Na 、 至少约 9 重量％ Na 、 至少约 10 重量％ Na 、 至少约 11 重量％ Na+、 至少约 12 重量％ Na+、 至少约 14 重量％ Na+、 至少约 16 重量％ Na+、 至少约 18 重量％ Na+、 至 + + + + 少约 20 重量％ Na 、 至少约 22 重量％ Na 、 至少约 25 重量％ Na 、 至少约 27 重量％ Na 、 至少 + + + + 约 29 重量％ Na 、 至少约 32 重量％ Na 、 至少约 35 重量％ Na 、 至少约 40 重量％ Na 、 至少约 + + + 45 重量％ Na 、 至少约 50 重量％ Na 、 或至少约 55 重量％ Na 。
用于干燥粉体盐调配物的优选赋形剂 ( 例如甘露醇、 麦芽糊精或白氨酸 ) 可以约 50％或更少 (w/w) 的量存在于调配物中。例如， 所述干燥粉体调配物可含有下列量的胺基 酸白氨酸 ： 约 50 重量％或更少、 约 45 重量％或更少、 约 40 重量％或更少、 约 35 重量％或更 少、 约 30 重量％或更少、 约 25 重量％或更少、 约 20 重量％或更少、 约 18 重量％或更少、 约 16 重量％或更少、 约 15 重量％或更少、 约 14 重量％或更少、 约 13 重量％或更少、 约 12 重量％ 或更少、 约 11 重量％或更少、 约 10 重量％或更少、 约 9 重量％或更少、 约 8 重量％或更少、 约 7 重量％或更少、 约 6 重量％或更少、 约 5 重量％或更少、 约 4 重量％或更少、 约 3 重量％ 或更少、 约 2 重量％或更少、 或约 1 重量％或更少。例示性赋形剂可包括白氨酸、 麦芽糊精、 甘露醇、 白氨酸、 麦芽糊精与甘露醇的任意组合、 或本文所揭露或本领域中常用的其它赋形 剂。
在一具体实施例中， 麦芽糊精可以约 50％或更少 (w/w) 的量存在于干燥粉体盐调 配物中。例如， 所述干燥粉体调配物可含有下列量的麦芽糊精 ： 约 50 重量％或更少、 约 45 重量％或更少、 约 40 重量％或更少、 约 35 重量％或更少、 约 30 重量％或更少、 约 25 重量％ 或更少、 约 20 重量％或更少、 约 18 重量％或更少、 约 16 重量％或更少、 约 15 重量％或更 少、 约 14 重量％或更少、 约 13 重量％或更少、 约 12 重量％或更少、 约 11 重量％或更少、 约 10 重量％或更少、 约 9 重量％或更少、 约 8 重量％或更少、 约 7 重量％或更少、 约 6 重量％或 更少、 约 5 重量％或更少、 约 4 重量％或更少、 约 3 重量％或更少、 约 2 重量％或更少、 或约 1 重量％或更少。
在另一具体实施例中， 所述干燥粉体可含有两种不同的赋形剂 ( 例如白氨酸、 麦 芽糊精、 甘露醇、 乳糖， 等 )。赋形剂可以约 4 ∶ 1、 约 3 ∶ 1、 约 2 ∶ 1、 或约 1 ∶ 1 的比率存在于调配物中。优选地， 所述干燥粉体调配物包括呈 1 ∶ 1 比率赋形剂的白氨酸与麦芽糊 精。
例如， 液体医药调配物可含有从约 0.115M 至 1.15M 的 Ca2+ 离子、 从约 0.116M 至 2+ 2+ 1.15M 的 Ca 离子、 从约 0.23M 至 1.15M 的 Ca 离子、 从约 0.345M 至 1.15M 的 Ca2+ 离子、 从 2+ 2+ 约 0.424M 至 1.15M 的 Ca 离子、 从约 0.46M 至 1.15M 的 Ca 离子、 从约 0.575M 至 1.15M 的 2+ 2+ Ca 离子、 从约 0.69M 至 1.15M 的 Ca 离子、 从约 0.805M 至 1.15M 的 Ca2+ 离子、 从约 0.849M 2+ 2+ 至 1.15M 的 Ca 离子、 或从约 1.035M 至 1.15M 的 Ca 离子。某些钙盐 ( 例如， 碳酸钙、 柠檬 酸钙 ) 的溶解度会限制溶液的制备。在此种情况中， 液体调配物可为含有要求达到的所欲 摩尔浓度的等钙盐量的悬浮液的形式。
当所述盐调配物含有钠盐， 例如含有钙盐及钠盐的调配物， 在液体医药调配物中 + 2+ + 的 Na 离子取决于所欲的 Ca ∶ Na ( 摩尔∶摩尔 ) 比率。例如， 所述液体调配物可含有从 + + 约 0.053M 至 0.3M 的 Na 离子、 从约 0.075M 至 0.3M 的 Na 离子、 从约 0.106M 至 0.3M 的 Na+ 离子、 从约 0.15M 至 0.3M 的 Na+ 离子、 从约 0.225M 至 0.3M 的 Na+ 离子、 从约 0.008M 至 0.3M + + 的 Na 离子、 从约 0.015M 至 0.3M 的 Na 离子、 从约 0.016M 至 0.3M 的 Na+ 离子、 从约 0.03M + + + 至 0.3M 的 Na 离子、 从约 0.04M 至 0.3M 的 Na 离子、 从约 0.08M 至 0.3M 的 Na 离子、 从约 + + 0.01875M 至 0.3M 的 Na 离子、 从约 0.0375M 至 0.3M 的 Na 离子、 从约 0.075M 至 0.6M 的 Na+ 离子、 从约 0.015M 至 0.6M 的 Na+ 离子、 或从约 0.3M 至 0.6M 的 Na+ 离子。
表 2 显示一些优选的乳酸钙或柠檬酸钙调配物的组合物。表 2 中所揭露的组合物 是本发明的乳酸钙或柠檬酸钙调配物非限制性实施例。
方法
感染性疾病的治疗
本发明提供用于治疗、 预防和 / 或降低呼吸道的感染性疾病 ( 例如， 病毒性感染、 细菌性感染 ) 的接触传染的方法。 将有效量的乳酸钙或柠檬酸钙调配物投予到个体 ( 例如， 哺乳动物 ( 诸如人类 ) 或其它灵长类动物、 或经驯养的动物诸如猪、 牛、 羊、 鸡 ) 的呼吸道。 优选地， 通过吸入喷雾剂投予乳酸钙或柠檬酸钙调配物。所述方法可用于治疗、 预防和 / 或 降低呼吸道的细菌性或病毒性感染的接触传染， 例如 ： 病毒性肺炎、 细菌性肺炎、 流行性感 冒、 咽炎、 支气管炎、 喉气管支气管炎、 细支气管炎等。
本发明提供用于治疗 ( 包括预防性治疗 ) 肺部疾病的方法， 所述疾病例如哮喘 ( 例如， 过敏性 / 异位性、 幼童性、 晚期、 咳嗽变异性、 或慢性阻塞性 )、 气道过度反应性、 过
敏性鼻炎 ( 周期性或非 - 周期性 )、 支气管扩张症、 慢性支气管炎、 肺气肿、 慢性阻塞性肺 部疾病、 囊性纤维化、 初期喘鸣等 ； 以及用于治疗 ( 包括预防性治疗 ) 这些慢性疾病的急 性发作的方法， 例如由下列所致的恶化 ： 病毒性感染 ( 例如， 流行性感冒病毒如流行性感 冒病毒 A 或流行性感冒病毒 B、 副流行性感冒病毒、 呼吸道融合病毒、 鼻病毒、 腺病毒、 间质 肺炎病毒、 柯萨奇病毒 (coxsackie virus)、 孤儿病毒 (echo virus)、 冠状病毒、 单纯性疱 疹病毒、 巨细胞病毒等 ) ； 细菌性感染 ( 例如， 肺炎链球菌， 其常称为肺炎球菌、 金黄色葡萄 球菌、 无乳链球菌、 化脓链球菌 (Streptococcus pyogenes)、 流感嗜血杆菌、 副流感嗜血杆 菌、 克雷白氏肺炎杆菌、 大肠杆菌、 绿脓杆菌、 粘膜莫拉克氏菌、 肺炎披衣菌、 肺炎霉浆菌、 嗜 肺性退伍军人杆菌、 粘质塞氏杆菌 (Serratia marcescens)、 洋葱伯克氏菌 (Burkholderia cepacia)、 类 鼻 疽 伯 克 氏 菌 (Burkholderia pseudomallei)、 炭 疽 杆 菌、 仙人掌杆菌 (Bacillus cereus)、 嗜麦芽窄食单胞菌、 源自柠檬酸杆菌属家族 (citrobacter family) 的细菌、 源自不动杆菌属家族 (ecinetobacter family) 的细菌、 结核分枝杆菌、 百日咳博 德氏杆菌 (Bordetella pertussis) 等 ) ； 真菌感染 ( 例如， 荚膜组织浆菌 (Histoplasma capsulatum)、 新 型 隐 球 菌 (Cryptococcus neoformans)、 杰 氏 肺 囊 虫 (Pneumocystis jiroveci)、 粗球芽生菌 (Coccidioides immitis)、 白色念珠菌 (Candida albicans)、 杰氏 肺囊肺炎 ( 其造成肺孢子菌肺炎 (PCP)， 亦称为肺囊虫病 (pneumocystosis)) 等 ) ； 寄生虫 感染 ( 例如， 弓型虫 (Toxoplasma gondii)、 粪拟圆虫 (Strongyloides stercoralis) 等 )， 或环境过敏原及刺激 ( 例如， 气源性致敏原包含花粉、 居家尘螨、 动物皮屑诸如猫皮屑、 霉 菌、 蟑螂、 空中悬浮颗粒等 )。
在一态样中， 本发明是用于治疗患有细菌性呼吸道感染或呈现细菌性呼吸道感染 病征的个体的方法， 包括将有效量的本发明乳酸钙或柠檬酸钙调配物投予到所述个体的呼 吸道。
在一些具体实施例中， 所述个体是被选自下列所组成群组的细菌感染 ： 肺炎链球 菌、 金黄色葡萄球菌、 葡萄球菌属、 链球菌属、 无乳链球菌、 流感嗜血杆菌、 克雷白氏肺炎杆 菌、 大肠杆菌、 绿脓杆菌、 粘膜莫拉克氏菌、 肺炎披衣菌、 肺炎霉浆菌、 嗜肺性退伍军人杆菌、 肠产气杆菌属、 不动杆菌属、 鲍氏不动杆菌、 伯克霍德菌属、 抗甲氧西林金黄色葡萄球菌、 嗜 麦芽窄食单胞菌及其组合， 其全部皆会导致肺炎。 在特定具体实施例中， 所述个体是被肺炎 链球菌、 克雷白氏肺炎杆菌或绿脓杆菌感染。 在更特定的具体实施例中， 所述个体是被肺炎 链球菌感染。在其它具体实施例中， 所述个体是被炭疽杆菌或结核分枝杆菌感染。
在某些具体实施例中， 所述呼吸道感染是细菌性感染， 例如细菌性肺炎。 在某些具 体实施例中， 所述细菌性感染是被选自下列所组成群组的细菌感染 ： 肺炎链球菌 ( 亦称为 肺炎球菌 )、 金黄色葡萄球菌、 无乳链球菌、 化脓链球菌、 流感嗜血杆菌、 副流感嗜血杆菌、 克 雷白氏肺炎杆菌、 大肠杆菌、 绿脓杆菌、 粘膜莫拉克氏菌、 肺炎披衣菌、 肺炎霉浆菌、 嗜肺性 退伍军人杆菌、 粘质塞氏杆菌、 洋葱伯克氏菌、 类鼻疽伯克氏菌、 炭疽杆菌、 仙人掌杆菌、 百 日咳博德氏杆菌、 嗜麦芽窄食单胞菌、 源自柠檬酸杆菌属家族的细菌、 源自不动杆菌属家族 的细菌及结核分枝杆菌。
在某些具体实施例中， 所述呼吸道感染是病毒性感染， 例如流行性感冒或病毒性 肺炎。在某些具体实施例中， 所述病毒性感染是被选自下列所组成群组的病毒感染 ： 流行 性感冒病毒 ( 例如， 流行性感冒病毒 A、 流行性感冒病毒 B)、 呼吸道融合病毒、 腺病毒、 间质肺炎病毒、 巨细胞病毒、 副流行性感冒病毒 ( 例如， hPIV-1、 hPIV-2、 hPIV-3、 hPIV-4)、 鼻病 毒、 腺病毒、 柯萨奇病毒、 孤儿病毒、 冠状病毒、 单纯性疱疹病毒、 SARS- 冠状病毒、 以及天花 病毒。
在某些具体实施例中， 所述呼吸道感染是真菌感染。 在某些具体实施例中， 所述真 菌感染是被选自下列所组成群组的真菌感染 ： 荚膜组织浆菌、 新型隐球菌、 杰氏肺囊虫、 粗 球芽生菌、 白色念珠菌、 及杰氏肺囊虫 ( 其造成肺孢子菌肺炎 (PCP)， 亦称为肺囊虫病 )。
在某些具体实施例中， 所述呼吸道感染是寄生虫感染。 在某些具体实施例中， 所述 寄生虫感染是被选自下列所组成群组的寄生虫感染 ： 弓型虫及粪拟圆虫。
在另一态样中， 本发明提供用于治疗 ( 包括预防性治疗 ) 患有肺部疾病的个体 ( 例如， 有肺部疾病、 呈现肺部疾病的病征、 或易受肺部疾病侵袭的个体 ) 的方法， 包括对所 +2 + 述个体的呼吸道投予有效量的医药调配物， 包括钙盐及钠盐， 其中， Ca 与 Na 的比率是从 约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 16 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 )。
在另一态样中， 本发明提供用于治疗 ( 包括预防性治疗 ) 个体中慢性肺部疾病的 急性发作的方法， 包括对其有需要的个体 ( 例如， 有急性发作的肺部疾病、 呈现急性发作肺 部疾病的病征、 或易受急性发作肺部疾病侵袭的个体 ) 的呼吸道投予有效量的医药调配 物， 包括钙盐及钠盐， 其中， Ca+2 与 Na+ 的比率是从约 4 ∶ 1( 摩尔∶摩尔 ) 至约 16 ∶ 1( 摩 尔∶摩尔 )。 例示性肺部疾病包括哮喘 ( 例如， 过敏性 / 异位性、 幼童性、 晚期、 咳嗽变异性、 或慢性阻塞性 )、 气道过度反应性、 过敏性鼻炎 ( 周期性或非 - 周期性 )、 支气管扩张症、 慢 性支气管炎、 肺气肿、 慢性阻塞性肺部疾病、 囊性纤维化、 初期喘鸣等。
在某些具体实施例中， 流行性感冒是流行性感冒 A 或流行性感冒 B 病毒所导致的。
在某些具体实施例中， 类流感 (influenza-like illness) 是由 RSV、 鼻病毒、 腺病 毒、 副流行性感冒、 人类冠状病毒 ( 包括引起严重急性呼吸系统综合症的病毒 ) 及间质肺炎 病毒所导致的。
在某些具体实施例中， 人工呼吸器相关肺炎感染 (VAP)、 人工呼吸器相关细支气管 支气管炎感染 (VAT)、 或医院内获得的肺炎 (HAP) 是由肺炎菌、 肺炎链球菌、 金黄色葡萄球 菌、 非分型流感嗜血杆菌 (NTHI)、 铜绿假单胞菌 (psuedominas aeruginosa)、 不动杆菌属、 大肠杆菌、 假丝酵母属 (Candida spp)( 真菌 )、 沙雷氏菌属 (Serratia)、 肠产气杆菌属、 及 嗜麦芽窄食单胞菌所导致的。或者， VAP 或 VAT 可能是由引起肺炎的革兰氏阳性菌或革兰 氏阴性菌所导致的。
在某些具体实施例中， 小区内相关的肺炎感染 (CAP) 是由下列细菌的至少一种所 导致的 ： 卡他莫拉菌 (Moraxella catarralis)、 肺炎霉浆菌、 肺炎披衣菌 (Chlamydophila pneumoniae 或 Chlamydophila pneumoniae)、 肺炎链球菌、 流感嗜血杆菌、 披衣菌、 霉浆菌、 及退伍军人病菌。或者， 除了前述及的细菌外， CAP 亦可由下列真菌的至少一种所导致的 ： 球霉菌 (Coccidiomycosis)、 组织浆菌 (histoplasmosis)、 及隐球菌 (cryptococcocus)。 或 者， CAP 可能是由引起肺炎的革兰氏阳性或革兰氏阴性菌所导致的。
在某些具体实施例中， 患有哮喘的病患的急性发作是上呼吸道病毒感染或与肺炎 ( 包括 CAP) 有关的革兰氏阳性或革兰氏阴性菌所导致的。 或者， 除此之外， 急性发作可以是 由过敏原或环境因子例如居家尘螨、 卵子或花粉所导致的。患有 COPD 的病患的急性发作是 由哮喘的相同原因， 且另外还有流感嗜血杆菌、 肺炎球菌、 及摩氏菌 (moraxella) 所导致。CF 的中度发作可以是由上述全部者所导致的， 除此之外， 包括机会性的细菌性病源体， 例如 绿脓杆菌、 洋葱伯克氏菌、 类鼻疽伯克氏菌等， 其特征为 CF 呼吸道菌落 (colonization)， 且 亦可由非典型的分枝杆菌及嗜麦芽窄食单胞菌所导致。
在另一态样中， 本发明是用于治疗患有病毒性呼吸道感染的个体或呈现病毒性呼 吸道感染病征的个体的方法， 包括投予有效量的本发明乳酸钙或柠檬酸钙调配物到所述个 体的呼吸道。 在一些具体实施例中， 所述个体是被选自下列所组成群组的病毒感染 ： 流行性 感冒病毒、 呼吸道融合病毒、 腺病毒、 间质肺炎病毒、 巨细胞病毒、 副流行性感冒病毒、 鼻病 毒、 冠状病毒 ( 例如， SARS- 冠状病毒 )、 痘病毒 ( 例如， 天花病毒 )、 以及单纯性疱疹病毒。
优选地， 治疗呼吸道感染的方法包括投予有呼吸道感染或呈现呼吸道感染的病征 的个体， 有效量的乳酸钙或柠檬酸钙调配物。 更优选地， 所述乳酸钙或柠檬酸钙调配物亦包 括钠盐， 例如氯化钠。适合的乳酸钙及柠檬酸钙调配物包括含有本文所揭露的乳酸钙及钠 盐或柠檬酸钙及钠盐的调配物。
预防
在另一态样中， 本发明是用于预防或防止呼吸道感染的方法， 包括投予处于接触 病源体 ( 例如， 细菌、 病毒 ) 呼吸道感染风险的个体有效量的乳酸钙或柠檬酸钙调配物。所 述方法可用于防止或降低被病源体 ( 例如， 细菌、 病毒 ) 感染而造成呼吸道感染的比率或发 生率。 经治疗的个体可能在被选自下列所组成群组的细菌感染的风险 ： 肺炎链球菌、 金 黄色葡萄球菌、 葡萄球菌属、 链球菌属、 无乳链球菌、 流感嗜血杆菌、 克雷白氏肺炎杆菌、 大 肠杆菌、 绿脓杆菌、 粘膜莫拉克氏菌、 肺炎披衣菌、 肺炎霉浆菌、 嗜肺性退伍军人杆菌、 肠产 气杆菌属、 不动杆菌属、 鲍氏不动杆菌、 伯克霍德菌属、 抗甲氧西林金黄色葡萄球菌、 嗜麦芽 窄食单胞菌及其组合。 在特定的具体实施例中， 所述个体是处于被肺炎链球菌、 克雷白氏肺 炎杆菌或绿脓杆菌所感染的风险。在更特定具体实施例中， 所述个体是处于被肺炎链球菌 感染的风险。
在另一态样中， 本发明是用于预防或防止被选自下列所组成群组的病毒感染的方 法： 流行性感冒病毒、 呼吸道融合病毒、 腺病毒间质肺炎病毒、 巨细胞病毒、 单纯性疱疹病 毒、 冠状病毒 ( 例如， SARS- 冠状病毒 )、 鼻病毒、 副流行性感冒、 及痘病毒 ( 例如， 天花病 毒 )。
一般而言， 当个体比一般群众更频繁暴露至上述病源体时， 则所述个体处于被引 起呼吸道感染的病源体 ( 例如， 病毒、 细菌 ) 风险， 或有减少的抵抗感染能力。处于上述感 染风险的个体例如包括 ： 健康照护工作人员、 免疫抑制 ( 例如， 医药上由于其它感染， 或其 它原因 ) 的个体、 加护病房中的病患、 年老或年轻 ( 例如， 未成年人 ) 的个体、 患有慢性潜在 呼吸疾病 ( 例如， 哮喘， 慢性支气管炎、 慢性阻塞性肺部疾病、 囊性纤维化 ) 的个体、 有手术 以及受感染病人的照护者及家庭成员。 或外伤性损伤的个体、
优选地， 防止呼吸道感染的方法包括投予处于呼吸道感染风险的个体有效量的乳 酸钙或柠檬酸钙调配物。更优选地， 所述乳酸钙或柠檬酸钙调配物亦包括钠盐， 例如氯化 钠。 适合的乳酸钙及柠檬酸钙调配物包括含有本文所揭露的乳酸钙及钠盐或柠檬酸钙及钠 盐的调配物。
降低接触传染
本发明提供用于降低呼吸道感染 ( 例如， 病毒性感染、 细菌性感染 ) 的接触传染 ( 例如降低传染 ) 的方法， 包括将有效量的乳酸钙或柠檬酸钙调配物投予到被造成呼吸道 感染、 呈现呼吸道感染的病征、 处于呼吸道感染风险的病源体感染 ； 或处于被造成呼吸道感 染的病源体 ( 例如， 细菌、 病毒 ) 感染风险的个体的呼吸道 ( 例如， 肺、 鼻腔 )。
在一些具体实施例中， 所述个体可能是细菌性感染所致的呼吸道感染、 呈现呼吸 道感染的病征或是处于被本文所揭露的感染的风险。例如， 所述个体可能是被选自下列所 组成群组的细菌所感染或是处于被选自下列所组成群组的细菌感染的风险的个体 ： 肺炎 链球菌、 金黄色葡萄球菌、 葡萄球菌属、 链球菌属、 无乳链球菌、 流感嗜血杆菌、 克雷白氏肺 炎杆菌、 大肠杆菌、 绿脓杆菌、 粘膜莫拉克氏菌、 肺炎披衣菌、 肺炎霉浆菌、 嗜肺性退伍军人 杆菌、 肠产气杆菌属、 不动杆菌属、 鲍氏不动杆菌、 伯克霍德菌属、 抗甲氧西林金黄色葡萄球 菌、 嗜麦芽窄食单胞菌及其组合。在特定的具体实施例中， 所述个体是被肺炎链球菌、 克雷 白氏肺炎杆菌或绿脓杆菌感染或是处于被肺炎链球菌、 克雷白氏肺炎杆菌或绿脓杆菌感染 的风险。在更特定的具体实施例中， 所述个体是被肺炎链球菌感染或处于被肺炎链球菌感 染的风险。
在其它具体实施例中， 所述个体可能是被选自下列所组成群组的病毒所感染或是 处于被选自下列所组成群组的病毒感染的风险 ： 流行性感冒病毒、 呼吸道融合病毒、 腺病 毒、 间质肺炎病毒、 巨细胞病毒、 单纯性疱疹病毒、 冠状病毒 ( 例如， SARS- 冠状病毒 )、 鼻病 毒、 副流行性感冒、 及痘病毒 ( 例如， 天花病毒 )。
优选地， 用于降低呼吸道感染的接触传染的方法包括投予有呼吸道感染或呈现呼 吸道感染的病征的个体有效量的乳酸钙或柠檬酸钙调配物。更优选地， 所述乳酸钙或柠檬 酸钙调配物亦包括钠盐， 例如氯化钠。适合的乳酸钙及柠檬酸钙调配物包括含有本文所述 的乳酸钙及钠盐或柠檬酸钙及钠盐的调配物。
慢性疾病的治疗
本发明提供用于治疗慢性呼吸及肺部疾病的方法， 包括哮喘 ( 例如， 过敏性 / 异 位性、 幼童性、 晚期、 咳嗽变异性或慢性阻塞性 )、 气道过度反应性、 过敏性鼻炎 ( 周期性或 非 - 周期性 )、 支气管扩张症、 慢性支气管炎、 肺气肿、 慢性阻塞性肺部疾病、 囊性纤维化、 初 期喘鸣等。 将有效量的乳酸钙或柠檬酸钙调配物投予到个体 ( 例如， 哺乳动物 ( 诸如人类 ) 或其它灵长类动物、 或经驯养的动物诸如猪、 牛、 羊、 鸡 ) 的呼吸道。优选地， 通过喷雾剂的 吸入投予乳酸钙或柠檬酸钙调配物。所述方法可用于治疗慢性呼吸及肺部疾病， 例如囊性 纤维化。
优选地， 治疗慢性肺部或呼吸疾病的方法包括将有效量的乳酸钙或柠檬酸钙调配 物投予到有慢性疾病的个体。 更优选地， 所述乳酸钙或柠檬酸钙调配物亦包括钠盐， 例如氯 化钠。 适合的乳酸钙及柠檬酸钙调配物包括含有本文所述的乳酸钙及钠盐或柠檬酸钙及钠 盐的调配物。
急性发作的预防
本发明提供用于预防个体慢性肺部疾病的急性发作的方法， 包括以有效量包括柠 檬酸钙或乳酸钙的调配物作为活性成分投予到有需要个体 ( 例如， 有肺部疾病急性发作、 呈现肺部疾病急性发作、 或易受肺部疾病急性发作侵袭的个体 ) 的呼吸道。例示性肺部疾 病包括哮喘 ( 例如， 过敏性 / 异位性、 幼童性、 晚期、 咳嗽变异性或慢性阻塞性 )、 气道过度反应性、 过敏性鼻炎 ( 周期性或非 - 周期性 )、 支气管扩张症、 慢性支气管炎、 肺气肿、 慢性阻塞 性肺部疾病、 囊性纤维化、 初期喘鸣等。
本发明亦提供用于预防慢性肺部疾病的急性发作及预防支气管收缩和支气管痉 挛的方法， 其是由于抗原暴露 ( 例如， 过敏原、 病源体及其它环境刺激 ) 于患有慢性肺部病 症的病患所致。将有效量的乳酸钙或柠檬酸钙调配物投予到个体 ( 例如， 哺乳动物 ( 诸如 人类 ) 或其它灵长类动物、 或经驯养的动物诸如猪、 牛、 羊、 鸡 ) 的呼吸道。优选地， 通过吸 入喷雾剂投予乳酸钙或柠檬酸钙调配物。所述方法可用于治疗慢性呼吸及肺部疾病， 例如 囊性纤维化。
优选地， 治疗或预防由于气源性致敏原所致的急性发作的方法包括投予个体有效 量的乳酸钙或柠檬酸钙调配物， 所述个体由于抗原暴露 ( 例如， 过敏原、 病源体及其它环境 刺激 ) 所致而提高支气管收缩及支气管痉挛。更优选地， 所述乳酸钙或柠檬酸钙调配物亦 包括钠盐， 例如氯化钠。适合的乳酸钙及柠檬酸钙调配物包括含有本文所述的乳酸钙及钠 盐或柠檬酸钙及钠盐的调配物。
含有钙的盐类通过调控 ALF 的粘弹性减缓过敏原及病源体通过肺的呼吸道内衬 液体 (ALF)。根据黏膜纤毛活动梯 (mucociliary escalator) 以及在呼吸道中的其它清除 机制， 含有钙的盐类有利于异物的自然清除。 通过减少过敏原和病源体承载在上皮， 可降低 发炎作用。 降低发炎作用会降低产生毒性双产物， 其已知会导致支气管收缩和支气管痉挛。 因此， 在患有慢性肺部病症的病患中， 投予含有钙的盐类降低支气管收缩和支气管痉挛的 频率和 / 或病程的严重度。
投予乳酸钙及柠檬酸钙调配物
预期将乳酸钙调配物及柠檬酸钙调配物用于投予到呼吸道 ( 例如， 投予到呼吸道 的粘膜表面 )， 且可以任何适合的形式 ( 利如溶液、 悬浮物、 喷雾剂、 薄雾、 泡沫、 凝胶、 蒸气、 小滴、 颗粒 ) 或干燥粉体型式来投予。优选乳酸钙调配物及柠檬酸钙调配物是经雾化而投 予到呼吸道。乳酸钙调配物及柠檬酸钙调配物可使用任何适合的方法和 / 或装置来雾化， 且许多适合的方法及装置是本领域中传统且已知的。例如， 乳酸钙调配物及柠檬酸钙调配 物可经雾化而使用具有或不具有间隔器 (spacer) 或储药腔 (holding chamber) 的剂量刻 度吸入器 ( 例如， 压力式剂量刻度吸入器 (pMDI) 如 HFA 推进剂或非 -HFA 推进剂 )、 喷雾器、 喷注器 (atomizer)、 连续气压喷雾器、 口用喷雾器或干燥粉体吸入器 (DPI)， 通过口呼吸道 投予。盐调配物可经雾化以使用鼻用泵或气压喷雾器、 具有间隔器或储药腔的剂量刻度吸 入器 ( 例如， 压力式剂量刻度吸入器 (pMDI) 如 HFA 推进剂或非 -HFA 推进剂 )、 具有或不具 有鼻用接合器 (adapter) 或分支器 (prongs) 的喷雾器、 喷注器、 连续气压喷雾器、 或干燥粉 体吸入器 (DPI)， 通过鼻呼吸道投予。盐调配物亦可传递至鼻黏膜表面 ( 例如通过鼻清洗 ) 及传递至口黏膜表面 ( 例如通过口清洗 )。 盐调配物可传递至窦室的黏膜表面， 例如通过具 有鼻用接合器的喷雾器及具有振动式或脉动式气流的鼻用喷雾器。
当选择适合的方法以制造及传递盐调配物的喷雾到肺时， 呼吸道的几何学是 重 要 的 考 虑 点。 所 述 肺 是 经 设 计 以 诱 使 吸 入 异 物 捕 获 颗 粒， 例 如 灰 尘。 有 三 个 沉 积 作用的基本机制 ： 阻 塞 (impaction)、 沉 降 (sedimentation)、 及 布 朗 运 动 (Brownian motion)(J.M.Padfield.1987.In ： D.Ganderton&T.Jones eds.Drug Delivery to the Respiratory， Ellis Harwood， Chicherster， U.K.)。当颗粒不能在气流内停留， 特别是呼吸道分支时会发生阻塞。阻塞的颗粒被吸附到覆盖粘液层的支气管壁， 且最后通过粘液纤 毛作用从肺清除。上呼吸道中的阻塞大多发生在气体动力直径超过 5 微米的颗粒。更小的 颗粒 ( 那些气体动力直径小于 3 微米的颗粒 ) 倾向在气流内停留且通过沈降经平流输送到 肺。沉降较常发生在气流较慢的下呼吸系统。极小颗粒 ( 那些小于 0.6 微米的颗粒 ) 可通 过布朗运动而堆积。
对于投药而言， 选择适合的方法 ( 例如， 喷雾法、 干燥粉体吸入器 ) 来制造具有适 当颗粒尺寸的喷雾剂， 以用于优先传递到呼吸道的所欲区域例如肺深层 ( 一般颗粒直径介 于约 0.6 微米至 5 微米 )、 上呼吸道 ( 一般颗粒直径为约 3 微米或更大 )、 或肺深层及上呼 吸道。
有效量的乳酸钙或柠檬酸钙调配物是投予到对其有需要的个体， 例如有呼吸道感 染、 呈现呼吸道感染的病征或处于呼吸道感染风险的个体。住院治疗的个体， 且特别是使 用呼吸器的个体有处于被造成呼吸道感染的病源体传染的风险。所述有效量是足以达到 所欲治疗或预防效果的用量， 例如足以降低感染病征、 减少复原时间、 降低个体中病源体、 抑制病源体通过肺粘液或呼吸道内衬液体、 减少造成呼吸道感染的病源体感染的发病率 或速率、 增加粘膜纤毛清洁速率 ( 例如， 经扫描法 (sinticraphy) 所测量 )(Groth et al， Thorax， 43(5) ： 360-365(1988)) 和 / 或降低含有造成呼吸道感染的病源体的颗粒被散发出 去的用量。因为乳酸钙或柠檬酸钙调配物通过吸入被投予到呼吸道， 所以投予的剂量是与 乳酸钙或柠檬酸钙调配物的组合物 ( 例如， 钙盐浓度 )、 喷雾化作用的速率及效果 ( 例如， 喷 雾速率及效果 ) 以及暴露时间 ( 例如， 喷雾时间 ) 有关。例如， 实质上等效剂量可经使用浓 缩的乳酸钙或柠檬酸钙液体调配物且短 ( 例如， 5 分钟 ) 喷雾时间， 或使用稀释液体盐调配 物且长 ( 例如， 30 分钟或更多 ) 喷雾时间， 或使用干燥粉体调配物及干燥粉体吸入器来投 予。 具有普通技能的临床医生可以基于这些考虑点与其它因素决定适当剂量， 例如， 基于个 体的年龄、 敏感性、 耐受性、 容忍度及整体利益。可如指示以单一剂量或多剂量来投予盐调 配物。
如本文所示， 咸相信盐调配物的治疗及预防效果是随着所述盐调配物的投予而增 加呼吸道 ( 例如肺 ) 中阳离子 ( 盐阳离子， 例如 Ca2+) 的量。因此， 由于所提供的阳离子的 量是依选择特定的盐玵而定， 可根据所欲传递至肺的阳离子量给药。 例如， 一摩尔的氯化钙 2+ (CaCl2) 分为提供一摩尔的 Ca ， 但一摩尔的磷酸三钙 (Ca3(PO4)2) 可提供三摩尔的 Ca2+。一 般而言， 有效量的盐调配物将会传递下列的剂量 ： 约 0.001 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.002 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.005 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 +2 +2 +2 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量 +2 +2 至约 60 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 50 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量至约 40 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 +2 +2 +2 0.01 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 30 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca / 公斤 +2 +2 体重 / 剂量至约 20 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 10 +2 +2 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 5 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.02 毫克 +2 +2 +2 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.03 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.04 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.05 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 +2 +2 +2 0.1 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.1 毫克 Ca / 公斤体 +2 +2 重 / 剂量至约 1 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.1 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 0.5 毫 +2 +2 克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.2 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 0.5 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.18 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.001 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.005 毫 +2 +2 +2 克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.02 毫克 Ca / 公斤体重 +2 / 剂量、 或约 0.5 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量。在一些具体实施例中， 包括钙盐的盐调配物 ( 例如， 氯化钙、 乳酸钙、 柠檬酸钙 ) 是以足以传递的下列剂量来投予 ： 约 0.1 毫克 Ca2+/ 公 斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca2+/ 公斤体重 / 剂量、 或约 0.1 毫克 Ca2+/ 公斤体重 / 剂量至约 1 毫克 Ca2+/ 公斤体重 / 剂量、 或约 0.1 毫克 Ca2+/ 公斤体重 / 剂量至约 0.5 毫克 Ca2+/ 公斤 体重 / 剂量、 或约 0.18 毫克 Ca2+/ 公斤体重 / 剂量。
在一些具体实施例中， 传递至呼吸道 ( 例如， 肺、 呼吸气道 ) 的钙量为约 0.005 毫 克 / 公斤体重至约 60 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 50 毫 克 / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 40 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 30 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂 量至约 20 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 约 0.1 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 约 0.2 毫克 / 公斤体 重 / 剂量至约 0.5 毫克 / 公斤体重 / 剂量或约 1 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公 斤体重 / 剂量、 或约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 1 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.1 2+ 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 1 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.1 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量 2+ 2+ 至约 2 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.1 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 0.5 毫克 Ca2+/ 公斤体重 / 剂量、 或约 0.18 毫克 Ca2+ 公斤体重 / 剂量。
在其它具体实施例中， 传递至上呼吸道 ( 例如， 鼻腔 ) 的钙的量为约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 60 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 50 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 40 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 30 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂 量至约 20 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 约 0.1 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 1 毫克 / 公斤体 重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 1 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.1 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 1 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 约 0.001 +2 +2 +2 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.002 毫克 Ca / 公斤体 +2 +2 重 / 剂量至约 2 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.005 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 2 毫 +2 +2 克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量至约 60 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 +2 +2 +2 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 50 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂 +2 +2 量至约 40 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 30 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量至约 20 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 +2 +2 +2 0.01 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 5 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.02 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.03 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.04 毫克 +2 +2 +2 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.05 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂 +2 +2 量至约 2 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.1 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 2 毫克 Ca+2/ 公 斤体重 / 剂量、 约 0.1 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量至约 1 毫克 Ca+2/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.1 +2 +2 +2 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量至约 0.5 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.2 毫克 Ca / 公斤体重 +2 +2 / 剂量至约 0.5 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.18 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.001 毫 +2 +2 +2 克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.005 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 约 0.01 毫克 Ca / 公斤体重 +2 +2 / 剂量、 约 0.02 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.5 毫克 Ca / 公斤体重 / 剂量。
在一些具体实施例中， 包括钠盐的盐调配物 ( 例如， 氯化钠 ) 是以足以传递下列剂 + 量的量来投予 ： 约 0.001 毫克 Na / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 Na+/ 公斤体重 / 剂量、 或约 + + + 0.01 毫克 Na / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 Na / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.1 毫克 Na / 公斤 + + 体重 / 剂量至约 10 毫克 Na / 公斤体重 / 剂量、 或约 1.0 毫克 Na / 公斤体重 / 剂量至约 10 + + 毫克 Na / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.001 毫克 Na / 公斤体重 / 剂量至约 1 毫克 Na+/ 公斤体 重 / 剂量、 或约 0.01 毫克 Na+/ 公斤体重 / 剂量至约 1 毫克 Na+/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.1 毫 克 Na+/ 公斤体重 / 剂量至约 1 毫克 Na+/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.2 毫克 Na+/ 公斤体重 / 剂 量至约 0.8 毫克 Na+/ 公斤体重 / 剂量、 约 0.3 毫克 Na+/ 公斤体重 / 剂量至约 0.7 毫克 Na+/ 公斤体重 / 剂量、 或约 0.4 毫克 Na+/ 公斤体重 / 剂量至约 0.6 毫克 Na+/ 公斤体重 / 剂量。
在一些具体实施例中， 传递至呼吸道 ( 例如， 肺、 呼吸气道 ) 的钠量为约 0.001 毫 克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至 约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.1 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 1 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.001 毫克 / 公 斤体重 / 剂量至约 1 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 1 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.1 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 1 毫克 / 公斤体重 / 剂量。
在其它具体实施例中， 传递至上呼吸道 ( 例如， 鼻腔 ) 的钠量为约 0.001 毫克 / 公 斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫 克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.1 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或 约 1 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 10 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.001 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 1 毫克 / 公斤体重 / 剂量、 或约 0.01 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 1 毫克 / 公斤体 重 / 剂量、 或约 0.1 毫克 / 公斤体重 / 剂量至约 1 毫克 / 公斤体重 / 剂量。
供所欲治疗量的剂量的适合间隔可根据病况的严重度 ( 例如， 感染 )、 受试者的整 体利益及所述受试者对盐调配物的耐受性及其它考虑点来决定。基于这些及其它考虑点， 临床医生可以决定剂量之间的适当间隔。一般而言， 若需要， 可一天一次、 一天二次或一天 三次来投予盐调配物。
若有需要或指示， 乳酸钙或柠檬酸钙调配物可与下列一种或多种其它的治疗剂来 投予， 例如， 如本文所述下列的任何一种或多种 ： 祛痰剂、 表面活性剂、 咳嗽抑制剂、 祛痰剂、 类固醇、 气管扩张药 (brochodilators)、 抗组织胺、 抗生素、 抗病毒剂。其它治疗剂可通过 任何适合的途径来投予， 例如经口服、 非经肠胃 ( 例如， 经静脉、 经动脉、 经肌肉、 或皮下注射 )、 局部地、 通过吸入 ( 例如， 内支气管、 鼻内或口用吸入剂、 滴鼻剂 )、 经直肠、 经阴道等。 所述乳酸钙或柠檬酸钙调配物可在投予之前、 实质上同时地或随后与其它治疗剂来投予。 优选地， 可投予所述乳酸钙或柠檬酸钙调配物及其它治疗剂， 以便于提供他们实质上重复 的药理学上活性作用。
实施例
实施例 1 柠檬酸钙 ： 干燥粉体
a. 调配物
干燥粉体调配物包括 50.0％白氨酸、 19.5％氯化钙及 30.5％柠檬酸钠 ( 重量百分 比 (％ ))。此相当于钙与钠为 1 比 2 摩尔比率 (Ca ∶ Na ＝ 1 ∶ 2)。
b. 方法
i. 材料
氯化钙二水合物及 L- 白氨酸是购自 Sigma-Aldrich Co.(St.Louis， MO)， 柠檬酸 钠二水合物是购自 J.T.Baker(Phillipsburg， NJ)。去离子 (DI) 水是取自 Milli-Q 水纯化 系统 (Millipore Corp.， Billerica， MA)。液体馈料是使用可溶的盐氯化钙及柠檬酸钠作 为起始材料所制得。以喷雾干燥法使液体蒸发后， 溶液进行沉淀反应以产生柠檬酸钙及氯 化钠。所述调配物包含有 50.0％白氨酸、 19.5％氯化钙及 30.5％柠檬酸钠 ( 重量百分比 (％ ))。此制备首先将 2.51 克的白氨酸溶于 1.0 公升的 DI 水， 接着溶于 1.74 克的柠檬酸 钠二水合物， 且最后溶于 1.30 克的氯化钙二水合物。在室温中持续搅拌下使上述材料完 全溶解于水中。使用尼鲁移动式小型喷雾干燥机 (Niro Mobile Minor spray dryer)(GEA Process Engineering Inc.， Columbia， MD)。利用氮为处理干燥气体。气体入口温度设定 为 140℃， 出口温度降低约 72℃。气体速率为 97 至 101 公斤 / 小时， 液体馈料速率的范围 是从约 28 至约 30 毫升 / 分钟。在整个生产过程中持续剧烈搅拌所述溶液。在反应槽中的 气旋出口处收集经喷雾干燥的粉体， 产率为约 62％。
c. 体外特性
i. 材料
使用流行性感冒病毒感染的细胞培养模型来研究不同喷雾化溶液对病毒性感染 的效果。将 Calu-3 细胞 (American Type Culture Collection， Manassas， VA) 培养于可渗 透的膜 (12mm 穿孔 ； 0.4μm 孔径， Corning， Lowell， MA) 上直到细胞长满 ( 膜完全被细胞覆 盖 )， 移除顶培养介质并在 37℃ /5％ CO2 中培养以建立气 - 液界面 (ALI) 培养。在各实验 之前， 使细胞在 ALT 中培养＞ 2 周。在各实验前， 各个穿孔的顶表面以 PBS 清洗 3 次。
为 了 传 递 调 配 物， 装 填 胶 囊 (QUALI-V-I， 羟 丙 甲 纤 维 素， 尺寸 2 ； Qualicaps， Europe S.A.， Madrid， Spain)， 并纪录暴露前及暴露后各胶囊的重量以决定用于各胶囊制 备的喷射剂量。将胶囊以 2- 分支器穿刺叉刺孔后立即承载于干燥粉体吸入器到干燥粉体 沉降腔。 使用自动化真空系统从胶囊将干燥粉体吸入沉降腔， 其中， 在三个顺序的间隔中以 1 分钟相间隔地持续运转真空 0.3 秒。如上所述， 使液体调配物进行感染及清洗。
在暴露到调配物不久后， 以新鲜培养介质置换基底侧的培养介质 ( 穿孔底部侧面 的培养介质 )。在每个测试中使三个孔暴露在各调配物。使第二个细胞培养板暴露到相 同调配物， 以定量传递至细胞的总盐或钙。暴露后一小时， 以 10μL 的流行性感冒病毒 A/ WSN/33/1 在 0.1 至 0.01( 每个细胞 0.1 至 0.01 病毒粒子 ) 的感染复数 (multiplicity ofinfection) 感染细胞。喷雾剂治疗后四小时， 清洗顶表面以移除过量调配物及未黏着的病 毒， 且细胞在 37℃与 5％ CO2 下额外的培养 20 小时。次日 ( 喷雾治疗后的 24 小时 )， 在培 养介质或 PBS 中收集释出到被感染细胞顶表面的病毒， 且在顶部清洗中的病毒浓度是通过 TCID50(50％组织培养感染剂量 ) 试验来定量。TCID50 试验是标准终点稀释试验， 其用于定 量有多少给定的病毒存在于样品中。
ii. 柠檬酸钙干燥粉体抑制流行性感冒感染
将 Calu-3 细胞暴露于 Ca- 柠檬酸盐干燥粉体调配物或 100％白氨酸组成的干燥粉 体。与未经处理的控制组细胞 (p ＜ 0.01) 及暴露至控制的白氨酸干燥粉体的细胞相比， 在 给药后的顶部清洗 24 小时中， 暴露于 Ca- 柠檬酸盐干燥粉体的细胞具有降低的流行性感冒 病毒效价 [p ＜ 0.05 ； ( 图 1， 单因子变异数分析 (One-way ANOVA) 及多重比较检定 (Tukey’ s Multiple Comparison Test))]。因此， 含有 Ca- 柠檬酸盐的干燥粉体调配物可有效地用于 限制体外流行性感冒感染。
实施例 2 乳酸钙 ： 液体
a. 调配物
液体调配物包含有 3.0％ (w/v) 乳酸钙 ( 或 0.14M 乳酸钙 ) 及 0.90％ (w/v) 氯化 钠 ( 或 0.15M 氯化钠 )。此相当于钙与钠为 1.0 比 1.1 摩尔比率 (Ca ∶ Na ＝ 1 ∶ 1.1)。
b. 溶液制备
i. 材料
乳 酸 钙 五 水 合 物 是 自 Spectrum Chemicals(Gardena， CA) 购 得， 氯化钙是自 Sigma-Aldrich Co.(St.Louis， MO) 购 得。 去 离 子 (DI) 水 是 取 自 Milli-Q 水 纯 化 系 统 (Millipore Corp.， Billerica， MA)。
ii. 液体调配物制备
乳酸钙液体调配物是使用乳酸钙及氯化钠的原液来制备。 0.14M[3.0％ (wt/vol)] 乳酸钙于 0.15M NaCl[0.90％ (w/v)NaCl] 的溶液是通过将 0.853 克的乳酸钙五水合物溶于 20 毫升的 0.15M NaCl 中所调配。NaCl 溶液首先是将 3 毫升的 1M NaCl 原液稀释于 17 毫 升的无菌水而制得。剧烈搅拌溶液直到所有固体溶解， 并储存于室温中。
c. 体外特性
i. 材料
使用流行性感冒病毒感染的细胞培养模型来研究不同喷雾化溶液对病毒性感染 的效果。将 Calu-3 细胞 (American Type Culture Collection， Manassas， VA) 培养于可 渗透的膜 (12mm 穿孔 ； 0.4μm 孔径， Corning， Lowell， MA) 上直到细胞长满 ( 膜完全被细胞 覆盖 )， 移除顶培养介质并在 37℃ /5％ CO2 中培养以建立气 - 液界面 (ALI) 培养。在各实 验之前， 使细胞在 ALT 中培养＞ 2 周。在各实验前， 各个穿孔的顶表面以 PBS 清洗 3 次。接 着使用内部建造的沉淀腔及系列 8900 喷雾器 (Slater Labs， Arvin， CA) 将细胞暴露于喷 雾化调配物。在暴露后不久， 以新鲜培养介质置换基底侧的培养介质 ( 穿孔底部侧面的培 养介质 )。在每个测试中使三个孔暴露在各调配物。使第二个细胞培养板暴露到相同调配 物， 以定量传递至细胞的总盐或钙。 暴露后一小时， 以 10μL 的流行性感冒病毒 A/WSN/33/1 在 0.1 至 0.01( 每个细胞 0.1 至 0.01 病毒粒子 ) 的感染复数感染细胞。喷雾剂治疗后四 小时， 清洗顶表面以移除过量调配物及未黏着的病毒， 且细胞在 37℃与 5％ CO2 下额外的培养 20 小时。次日 ( 喷雾治疗后的 24 小时 )， 在培养介质或 PBS 中收集释出到被感染细胞顶 表面的病毒， 且在顶部清洗中的病毒浓度是通过 TCID50(50％组织培养感染剂量 ) 试验来定 量。TCID50 试验是标准终点稀释试验， 其用于定量有多少给定的病毒存在于样品中。
ii. 乳酸钙液体调配物抑制流行性感冒感染
将 Calu-3 细胞暴露于 Ca- 乳酸盐 (0.14M) 于等渗透压盐水 (0.15M) 的液体调配 物， 并以流行性感冒病毒 A/WSN/33/1 感染。 在给药后的 24 小时决定细胞顶部表面的病毒效 价。与未经处理的控制组相比， Ca- 乳酸盐调配物显着降低病毒性感染 ( 图 2 ； p ＜ 0.01 与 未经处理 ( 空气 ) 控制组相比 ； 非成对的 t 值检定 (unpaired t-test test))， 显示 Ca- 乳 酸盐类可有效地抑制流行性感冒感染。
3. 乳酸钙 ： 干燥粉体
a. 调配物
制备包括有 50％白氨酸、 37％乳酸钙及 13％氯化钠 ( 重量％ ) 的干燥粉体调配 物。此相当于钙与钠为 1.0 比 1.3 摩尔比率 (Ca ∶ Na ＝ 1 ∶ 1.3)。
b. 方法
i. 材料
乳酸钙五水合物是购自 Spectrum Chemicals(Gardena， CA)， 而 L- 白氨酸及氯化 钠是购自 Sigma-Aldrich Co.(St.Louis， MO)。去离子 (DI) 水是取自 Milli-Q 水纯化系统 (Millipore Corp.， Billerica， MA)。液体馈料是以可溶的盐类乳酸钙及氯化钠而制得。所 述调配物含有 50％白氨酸、 37％乳酸钙及 13％氯化钠 ( 重量％ )。此制备首先将 2.51 克的 白氨酸溶于 1.0 公升的 DI 水， 接着溶于 0.65 克的氯化钠， 且最后溶于 2.62 克的乳酸钙五 水合物。在室温中持续搅拌下使上述材料完全溶解于水中。使用尼鲁移动式小型喷雾干燥 机 (GEA Process Engineering Inc.， Columbia， MD)。利用氮为处理干燥气体。气体入口 温度设定为 140℃， 出口温度降低约 75℃。气体速率为 97 至 101 公斤 / 小时， 液体馈料速 率从约 29 至约 32 毫升 / 分钟的范围。在整个生产过程中持续剧烈搅拌所述溶液。在反应 槽中的气旋出口处收集经喷雾干燥的粉体， 产率为约 65％。
c. 体外特性
使用 Calu-3 细胞感染试验评估干燥粉体调配物的活性。
为 了 传 递 调 配 物， 装 填 胶 囊 (QUALI-V-I， 羟 丙 甲 纤 维 素， 尺寸 2 ； Qualicaps， Europe S.A.， Madrid， Spain)， 并纪录暴露前及暴露后各胶囊的重量以决定用于各胶囊制 备的喷射剂量。将胶囊以 2- 分支器穿刺叉刺孔后立即承载于干燥粉体吸入器到干燥粉体 沉降腔。 使用自动化真空系统从胶囊将干燥粉体吸入沉降腔， 其中， 在三个顺序的间隔中以 1 分钟相间隔地持续运转真空 0.3 秒。如上所述， 使液体调配物进行感染及清洗。
在暴露到调配物后不久， 以新鲜培养介质置换基底侧的培养介质 ( 穿孔底部侧面 的培养介质 )。在每个测试中使三个孔暴露在各调配物。使第二个细胞培养板暴露到相 同调配物， 以定量传递至细胞的总盐或钙。暴露后一小时， 以 10μL 的流行性感冒病毒 A/ WSN/33/1 在 0.1 至 0.01( 每个细胞 0.1 至 0.01 病毒粒子 ) 的感染复数感染细胞。喷雾剂 治疗后四小时， 清洗顶表面以移除过量调配物及未黏着的病毒， 且细胞在 37℃与 5％ CO2 下 额外的培养 20 小时。次日 ( 喷雾治疗后的 24 小时 )， 在培养介质或 PBS 中收集释出到被感 染细胞顶表面的病毒， 且在顶部清洗中的病毒浓度是通过 TCID50(50％组织培养感染剂量 )试验来定量。TCID50 试验是标准终点稀释试验， 且用于定量有多少给定的病毒存在于样品 中。
ii.Ca- 乳酸盐干燥粉体调配物抑制流行性感冒感染
在给药后 24 小时具有降低的病毒效价显示经 Ca- 乳酸盐干燥粉体处理组降低流 行性感冒感染 ( 图 3 ； p ＜ 0.001 非成对的 t 值检定 )。与液体调配物结合所得的数据显示， Ca- 乳酸盐在液体及干燥粉体型式中皆对降低流行性感冒感染有作用。
实施例 4 细菌再传递分析
方法
使用再传递模型来测试雾化的干燥粉体调配物对于细菌移动穿过黏液模拟物的 效果。此试验是细菌性呼吸道感染的模型， 因为细菌需穿过呼吸道粘液以建立感染。在此 模型中， 将 200μL 的 4％海藻酸钠 (Sigma-Aldrich， St.Louis， MO) 加入 12 毫米的 Costar 穿孔膜 (Corning， Lowell， MA ； 3.0μm pore size) 的顶表面， 随后暴露于干燥粉体调配物。 使用干燥粉体吹入器 (Penn-Century， Inc.， Philadelphia， PA) 将干燥粉体雾化至腔室内 并在 5 分钟周期间使其经重力沉淀下来。在此暴露后， 将 10μL 的克雷白氏肺炎杆菌 ( ～ 7 10 CFU/mL 于盐水中 ) 加入模拟物的顶表面。在添加细菌后的多个时间点， 等分 (aliquot) 移除底侧缓冲液并通过系列稀释及画菌 (plating) 血琼脂盘来决定各等分的细菌数目。此 方法的图式显示在图 4。传递至各穿孔的盐浓度通过 HPLC 定量。为达此目的， 以无菌水润 洗在各穿孔旁且暴露在相同调配物剂量的 12 孔细胞培养盘的空孔及与醋酸呈 1 ∶ 1 稀释， 以溶解各干燥粉体。
在细菌再传递模型中将具有不同溶解度曲线的钙盐组成的干燥粉体调配物与白 氨酸和氯化钠一起筛选活性。 测试下列干燥粉体 (wt％ ) ： 50％白氨酸 /22％氯化钙 /28％硫 酸钠 ； 50％白氨酸 /25.5％氯化钙 /24.5％碳酸钠 ； 50％白氨酸 /19.5％氯化钙 /30.5％柠 檬酸钠 ； 50％白氨酸 /37％乳酸钙 /13％氯化钠 ； 及 50％白氨酸 /33.75％醋酸钙 /16.25％ 氯化钠。此研究的结果显示在图 5A 及 5B。含有硫酸盐、 醋酸盐类及乳酸盐类的干燥粉 体降低细菌移动穿过模拟物 ( 图 5B)， 反之， 柠檬酸盐及碳酸盐干燥粉体效果较小 ( 图 5A)。这些与水中钙盐的已知溶解度相关的发现指出在海藻酸钠模拟物的表面， 碳酸盐 类及柠檬酸盐类无法抑制与这些干燥粉体的溶解度有关的海藻酸钠的克雷白氏肺炎杆菌 (K.pneumoniae) 的移动。这些盐类从最佳可溶的到最少可溶的溶解度为 ： 碳酸钙＜柠檬酸 钙＜硫酸钙＜乳酸钙＜醋酸钙。
实施例 6 ： 用于降低流行性感冒感染的干燥粉体调配物
将 Calu-3 细胞培养于可渗透的膜 (12mm 穿孔 ； 0.4μm 孔径， Corning， Lowell， MA) 上直到细胞长满， 移除顶培养介质并在 37℃ /5％ CO2 中培养以建立气 - 液界面 (ALI) 培养。 在各实验之前， 使细胞在 ALT 中培养＞ 2 周。在各实验前， 各个穿孔的顶表面以 500μL/ 孔 PBS 清洗 3 次且底侧培养介质 ( 穿孔底部侧面的培养介质 ) 在干燥粉体暴露后以 1.5 毫升 / 孔新鲜培养介质置换。使用内建的沉降腔室将干燥粉体调配物暴露于细胞。在每个测试 中使三个孔暴露在各调配物。在 1 小时暴露于干燥粉体调配物后， 将细胞以 10μL/ 孔的 流行性感冒病毒 A/WSN/33/1 在 0.1 至 0.01 的感染复数顶部感染细胞。暴露后四小时， 以 500μL/ 孔 PBS 清洗顶表面以移除过量调配物及未黏着的病毒， 且细胞在 37℃与 5％ CO2 下 额外的培养 20 小时。次日 ( 感染后的 24 小时 )， 收集释出到被感染细胞顶表面的病毒并通过 TCID50(50％组织培养感染剂量 ) 试验来定量顶部清洗中的病毒浓度。
使胶囊以 DPI 沉降腔室暴露后， 纪录各胶囊的最终重量以决定百分比产率。记录 各实验新 Qualicap 胶囊的重量。为测试各干燥粉体条件， 将这些胶囊的两个装填适当填 充重量。这些胶囊中的一个用于细胞暴露， 另一个则用于定量。经测试的干燥粉体条件为 100％白氨酸的 15 毫克填充重量及乳酸钙干燥粉体的低、 中、 高 ( 分别为 5 毫克、 15 毫克、 60 毫克 ) 填充重量。
A： Ca- 乳酸盐以剂量反应方式降低流行性感冒感染
将 Calu-3 细胞暴露在 Ca- 乳酸盐 (50 ％白氨酸、 37 ％乳酸钙及 13 ％氯化钠 ) 干 燥粉体或白氨酸控制干燥粉体 (100％白氨酸 ) 的剂量反应以测试钙干燥粉体相对于液体 调配物是否表现可比较的效果。治疗后 24 小时， 通过 TCID50 试验决定自 Calu-3 细胞顶部 清洗中病毒的效价。如图 6 所示， 与空气控制组比较， 各 Ca- 乳酸盐干燥粉体浓度以剂量 反应方式降低病毒效价 (p ＜ 0.001 单因子变异数分析 (One-way ANOVA) 及多重比较检定 (Tukey’ s Multiple Comparison Test)) 决定 )。
实施例 7 ： 乳酸钙调配物有效地降低细菌负载
从在 37℃与 5％ CO2 下过夜生长培养的胰化蛋白大豆培养基 (tryptic soy agar， TSA) 血琼脂盘获得细菌。将单一菌落悬浮于 OD600 为约 0.3 的无菌 PBS 中， 接着以 1 ∶ 4 稀释于无菌 PBS[ ～ 2x107 菌落形成单位 (CFU)/ 毫升 ]。小鼠在麻醉下通过气管内滴注以 50μL 的细菌悬浮液 ( ～ 1x106CFU) 感染。
使用连接有独立捉住至多 11 只动物的圆室笼的高输出原型 Pulmatrix 喷雾器或 Pari LC Sprint 喷雾器， 使 C57BL6 小鼠暴露在全身暴露系统中的雾化液体调配物。 进行治 疗 2 小时前以血清型 3 肺炎链球菌感染。除非特别描述， 否则暴露时间为持续 3 分钟。感 染后 24 小时， 小鼠以戊巴比妥注射牺牲并将肺收集及均质化于无菌 PBS 中。将肺均质样品 系列稀释于无菌 PBS 中并置于 TSA 血琼脂盘。第二天计数 CFU。
小鼠在以肺炎链球菌感染之前先以等渗透压盐水或 PUR003(0.116M CaCl2 于 0.15M NaCl 中 ； 1 ∶ 1.3Ca ∶ Na 比率 ) 处理 2 小时。与控制组动物相比， 感染后 24 小时经 PUR003 处理的动物 ( 接近剂量 1.9 毫克 / 公斤 CaCl2) 呈现 5 倍较低的细菌效价 ( 图 7)， 指出治疗剂有益于治疗。为了确定此效果是否对含有氯化钙的调配物为专一性， 我们测试 相似的调配物， 其包括溶解于等渗透压盐水中的乳酸钙 (0.116M)。
实施例 8 ：： 病毒复制试验
此实施例证实包括钙盐、 乳酸钙、 硫酸钙或柠檬酸钙干燥粉体的干燥粉体调配物 对于治疗流行性感冒病毒、 副流行性感冒病毒或鼻病毒的效果。
通过喷雾干燥法利用移动式小型喷雾干燥机 (Niro， GEA Process Engineering Inc.， Columbia， MD) 制得 PUR111、 PUR112 及 PUR113 粉体。所有溶液有 10g/L 的固体浓 度且以表 3 所列组份制备。将白氨酸及钙盐溶解于 DI 水， 且所述白氨酸及钠盐分别溶于 含有维持于分离槽中的两种溶液的 DI 水。使用顺流式二流体喷嘴 (Niro， GEA Process Engineering Inc.， Columbia， MD) 进行液体馈料的喷雾化。在将液体馈料导入二流体喷嘴 之前， 使用齿轮泵 (Cole-Parmer Instrument Company， Vernon Hills， IL) 立即将所述液 体馈料进料到静态搅拌器 (Charles Ross&Son Company， Hauppauge， NY)。使用氮作为干燥 气体并将经干燥压缩的空气作为喷雾气体进料到所述二流体喷嘴。处理气体入口温度为282℃， 出口温度为 98℃， 有 70 毫升 / 分钟的液体原料速率。 气体供应所述二流体喷注器近 似于 14.5 公斤 / 小时。干燥腔室内压为 -2“WC。从过滤装置中将喷雾干燥的产物收集于 容器中。
表3： 用于评估功效的调配物
使用流行性感冒病毒 A/Panama/2007/99、 人类副流行性感冒病毒第 3 型 (hPIV3) 或鼻病毒 (Rv16) 感染的细胞培养模型来评估干燥粉体调配物的功效。此模型利用气 - 液 界面给定的 Calu-3 细胞作为流行性感冒感染呼吸道上皮细胞的模型。使用干燥粉体沉降 腔室将 Calu-3 细胞暴露于干燥粉体。通过 HPLC 使用取自细胞培养盘中空孔回收的干燥粉 体来决定传递至各孔的钙离子 (Ca2+) 量。各研究所沉积的钙浓度显示于表 4。
表4： 钙沉积暴露后一小时， 以 10μL 的流行性感冒病毒 A/Panama/99/2007 在 0.1 至 0.01( 每 个细胞 0.1 至 0.01 病毒粒子 ) 感染的重复性下进行感染、 人类副流行性感冒病毒第 3 型 (hPIV3) 在 0.1 至 0.01( 每个细胞 0.1 至 0.01 病毒粒子 ) 的感染复数感染细胞、 或 10μL 的鼻病毒 (Rv16) 在 0.1 至 0.01( 每个细胞 0.1 至 0.01 病毒粒子 ) 的感染复数感染系帮。 干燥粉体治疗后四小时， 清洗顶表面以移除过量调配物及未黏着的病毒， 且细胞在 37℃与 5％ CO2 下额外的培养 20 小时。次日 ( 感染后的 24 小时 )， 在培养介质中收集释出到被感 染细胞顶表面的病毒， 且在顶部清洗中的病毒浓度是通过 TCID50(50％组织培养感染剂量 ) 试验来定量。TCID50 试验是标准终点稀释试验， 且用于定量有多少给定病的毒存在于样品 中。对于三种干燥粉体的各者， 将 Calu-3 细胞暴露在三种不同 Ca2+ 剂量， 并评估各病毒的 复制。
流行性感冒
在流行性感冒模型中， 三种干燥粉体皆显着降低病毒效价至可比较的浓度， 其 最 高 剂 量 测 试 的 PUR111、 PUR112 及 PUR113 降 低 的 病 毒 效 价 分 别 为 至 多 3.25、 3.80 及 3.95log10TCID50/ 毫升 ( 图 8A)。注意到在最高剂量测试时， 这些干燥粉体呈现相似的抗 流行性感冒活性， 在较低剂量的数据指出最有效的干燥粉体是 PUR113( 由白氨酸、 乳酸钙 及氯化钠组成 )。PUR113 在低及中剂量下分别降低病毒效价 3.70 及 3.75log10TCID50/ 毫 升， 反之， PUR111 及 PUR112 的低剂量分别降低病毒效价 2.50 及 2.95log10TCID50/ 毫升， 且 PUR111 及 PUR112 的中剂量分别降低病毒效价 2.65 及 3.30log10TCID50/ 毫升。
副流行性感冒
以相似剂量范围测试 PUR111、 PUR112 及 PUR113 抗副流行性感冒。 在相似于彼等用 于流行性感冒实验的钙剂量下， 与控制组细胞比较， 经 PUR112 处理的细胞的副流行性感冒 病毒效价 ( 图 8B) 指出以硫酸钙为主的调配物仅对专一性病源体呈现活性。 相反， PUR111 及 PUR113 处理导致副流行性感冒感染以剂量依赖降低。 在高剂量， 与控制组细胞相比， PUR111 及 PUR113 分别降低感染为 2.70 及 4.10log10TCID50/ 毫升。相似地， PUR113 在中剂量呈现 比 PUR111 更大功效， 然而， PUR113 与 PUR111 调配物在较低剂量测试时皆降低感染 ( 图 8B ； 表 4)。这些数据皆证实， 以钙为主的干燥粉体调配物有效地降低副流行性感冒的感染性。 这些效果为对某些钙盐为专一性， 且有效剂量范围显着与流行性感冒的观察不同。
鼻病毒
流行性感冒病毒及副流行性感冒病毒是有套膜 (enveloped) 的病毒。为了测试钙 干燥粉体调配物的宽幅光谱活动及将这些研究结果延伸到无套膜的病毒， 测试相同的干燥 粉体以抗鼻病毒。所有三种调配物在某种程度上都降低鼻病毒， 含有 PUR113 干燥粉体证实 有最大的活性。 PUR113 处理导致在最高剂量测试时显着的病毒降低量为 2.80log10TCID50/ 毫升。与控制组细胞相比， 此干燥粉体的低及中剂量分别降低 1.15 及 2.10log10TCID50/ 毫 升的效价。尽管比 PUR113 程度较少， PUR111 及 PUR112 处理亦降低鼻病毒感染。在最高剂 量测试， PUR111 降低感染 1.7log10TCID50/ 毫升， PUR112 降低感染 1.6log10TCID50/ 毫升。 汇集这些结果指出， 以钙为主的干燥粉体调配物能广泛应用于变异的病毒性感染。
上述数据建议， 通过增加钙干燥粉体调配物的传递剂量比之前在较低剂量所观察 到的呈现具有更多的活性。虽然以乳酸钙为主的调配物 (PUR113) 比硫酸钙 (PUR112) 和 柠檬酸钙 (PUR112) 调配物呈现更大效果， 但通过所有三种干燥粉体的测试皆降低流行性 感冒感染。此外， 在所有三种病毒株系间， PUR113 处理组有最大的病毒效价降低量。在所 有三种病毒株中， PUR111 在较高的剂量中最有效降低病毒效价， 但效果在流行性感冒和副 流行性感冒更为显着， 建议可能是与病毒株专一性机制的差别有关。PUR112 处理对抗副流 行性感冒有活性， 但对抗流行性感冒和抗鼻病毒呈现较佳活性， 建议专一性的钙相对离子 (counterions) 可能在调配物的最理想活性中有某种角色。
此处所引用的所有参考文献的揭示内容于此并入本文作为参考文献。