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1、(10)申请公布号 CN 102603849 A (43)申请公布日 2012.07.25 CN 102603849 A *CN102603849A* (21)申请号 201210030505.3 (22)申请日 2012.02.10 C07J 17/00(2006.01) C12P 33/20(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/66(2006.01) C12R 1/685(2006.01) (71)申请人 厦门华侨亚热带植物引种园 地址 361002 福建省厦门市思明区鼓浪屿鼓 声路 4 号 (72)发明人 陈良华 童庆宣 明艳林 郑志忠 郑国华 (74。
2、)专利代理机构 厦门南强之路专利事务所 35200 代理人 马应森 (54) 发明名称 一种绞股蓝次生皂苷及其制备方法与应用 (57) 摘要 一种绞股蓝次生皂苷及其制备方法与应用， 涉及一种绞股蓝。绞股蓝次生皂苷的化合物名 称 为 2， 3， 12， 20(S)- 四 羟 基 -24- 达 玛 烯 -3-O-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 2)-D- 吡 喃葡萄糖苷。制备绞股蓝皂苷 ； 用微生物转化绞 股蓝皂苷 ； 制备绞股蓝次生皂苷。经化合物的抗 癌活性测定， 证明绞股蓝次生皂苷可用于制备抗 癌活性剂。利用微生物转化法制备绞股蓝次生皂 苷， 以绞股蓝为原料， 在我国种植面积广， 廉价易 得， 资。
3、源丰富， 是生物药物和保健品开发应用的良 好材料 ； 工艺流程较简单， 采用大孔吸附树脂为 主要制备填料， 适合于工艺规模化放大 ； 制备方 法相对于化学酸碱裂解法， 设备条件要求简单， 制 备的产物副作用小。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 5 页 附图 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 5 页 附图 4 页 1/2 页 2 1. 一种绞股蓝次生皂苷， 其特征在于其化合物名称为 2， 3， 12， 20(S)- 四羟 基 -24- 达玛烯 -3-O-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 2)-D- 吡喃葡萄糖苷， 结构式。
4、为 ： 分子式为 C42H72O14， 分子量为 800。 2. 如权利要求 1 所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法， 其特征在于包括以下步骤 ： 1) 制备绞股蓝皂苷 ： 所述制备绞股蓝皂苷的具体方法为将绞股蓝粉末用乙醇溶液在 水浴锅中提取， 将提取液真空浓缩获得绞股蓝乙醇提取物， 再用乙醇溶液溶解后， 上样于大 孔吸附树脂柱， 先用乙醇溶液冲洗后， 再用乙醇溶液洗脱绞股蓝皂苷， 将洗脱液浓缩干燥， 获得绞股蓝皂苷 ； 2) 用微生物转化绞股蓝皂苷 ： 所述用微生物转化绞股蓝皂苷的具体方法为将转化培 养基装在 250ml 三角瓶中， 装液量 50ml， 在 121， 灭菌 20min ； 取。
5、活化后的微生物转入马铃 薯液体培养基培养， 培养至长出真菌孢子， 按15接种量接入转化瓶中， 在2537， 180 300r/min 摇床上培养 12 72h 后， 加入 2 20绞股蓝皂苷底物进行转化， 在 25 37， 180 300r/min 摇床上培养继续培养 1 5d 后， 收集转化菌液 ； 3) 制备绞股蓝次生皂苷 ： 微生物转化绞股蓝皂苷后， 菌液过滤， 取上清液， 菌体再用水 清洗， 上清液上样于大孔吸附树脂， 先用乙醇溶液冲洗后， 用乙醇溶液洗脱， 洗脱液浓缩干 燥， 获得绞股蓝次生皂苷。 3. 如权利要求 2 所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法， 其特征在于在步骤 1) 中。
6、， 所 述将绞股蓝粉末用乙醇溶液在水浴锅中提取时， 所述乙醇溶液的用量按质量比为绞股蓝粉 末的 10 30 倍。 4. 如权利要求 2 所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法， 其特征在于在步骤 1) 中， 所 述水浴锅的温度为 60 ； 所述提取提取 2 4 次， 每次提取时间为 24 72h。 5. 如权利要求 2 所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法， 其特征在于在步骤 1) 中， 所 述再用乙醇溶液溶解是用 10 30乙醇溶液溶解 ； 所述大孔吸附树脂柱可采用 HP20 大 孔吸附树脂柱。 6. 如权利要求 2 所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法， 其特征在于在步骤 1) 中， 所 述先用乙。
7、醇溶液冲洗是用1030乙醇溶液冲洗35个床体积 ； 所述再用乙醇溶液洗 脱绞股蓝皂苷可用 40 80乙醇溶液洗脱绞股蓝皂苷。 7. 如权利要求 2 所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法， 其特征在于在步骤 2) 中， 所 述微生物采用曲霉属真菌， 所述曲霉属真菌可选自黑曲霉、 构巢曲霉、 青霉、 灰绿曲霉中的 一种。 8. 如权利要求 2 所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法， 其特征在于在步骤 2) 中， 所 述转化培养基的组成为 ： 葡萄糖 5 50g/L， 蛋白胨 1 5g/L， 酵母膏 1 5g/L， 磷酸氢二 权 利 要 求 书 CN 102603849 A 2 2/2 页 3 钾 2 。
8、10g/L， 氯化钙 2 8g/L， 吐温 80(2 5)ml， 七水硫酸镁 1 5g/L， 四水硫酸锰 1 5g/L。 9. 如权利要求 2 所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法， 其特征在于在步骤 3) 中， 所 述过滤是采用 8 层纱布过滤 ； 所述清洗是清洗至少 2 次 ； 所述大孔吸附树脂可采用预处理 好的 HP20 大孔吸附树脂 ； 所述先用乙醇溶液冲洗可用 30 50乙醇溶液冲洗 3 5 个 床体积 ； 所述用乙醇溶液洗脱可用 60 100乙醇溶液洗脱。 10. 如权利要求 1 所述的一种绞股蓝次生皂苷在制备抗癌活性剂中的应用。 权 利 要 求 书 CN 102603849 A 3。
9、 1/5 页 4 一种绞股蓝次生皂苷及其制备方法与应用 技术领域 0001 本发明涉及一种绞股蓝， 尤其是涉及一种绞股蓝次生皂苷及其制备方法与应用。 背景技术 0002 绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum Thnmb Mak.)为葫芦科绞股蓝属植物， 绞股蓝 主要药效成分为绞股蓝皂甙 (gypenoside， GYP)， 其具有抑制肿瘤、 防止衰老、 降低血脂、 增 强免疫、 保护心脏和肝脏、 降低血糖、 镇静止痛及抗溃疡等药理作用。绞股蓝皂甙因具有与 人参皂甙类似主骨架的达玛烷型结构， 有 “南方人参” 和 “第二人参” 的美誉。 0003 近年来， 通过对皂苷生理活性的。
10、药效学和代谢动力学研究， 人们注意到皂苷中的 糖链与其生物活性之间有着密切的联系。许多研究证实， 糖链在皂苷的生物活性方面起到 重要的作用， 皂苷糖分子越少， 其活性越高。 国内外学者对人参皂苷单体与抗肿瘤活性的构 效关系研究表明， 低糖链的皂苷及苷元具有较强的抗肿瘤作用， 其规律如下 ： 原人参二醇型 原人参三醇型 ； 苷元单糖苷二糖苷三糖苷四糖苷， 因此目前国际很多学者都致 力于开发制备次生皂苷产品。次生皂苷的制备方法有酸碱水解法和生物转化法， 酸碱水解 化学方法反应剧烈， 副产物多， 更多还是倾向于条件要求温和的生物转化法， 尤其是微生物 转化法。 0004 皂苷微生物转化所用的微生物早。
11、期主要是肠道厌氧菌， 而其他微生物的研究比较 少。肠道厌氧菌发酵最初是以人排泄物中的总菌物进行发酵， 后来研究筛选单一肠道菌来 转化， 如采用肠道乳酸菌转化人参二醇型皂苷制备CK， 发现运用Bifidobacterium.minimum KK-1 和 B.choerinum KK-2 共发酵转化 Rb1 时效果最好， 但肠道菌多为厌氧菌， 培养条件苛 刻， 培养基成本高。另有研究筛选原始土壤微生物来降解人参皂苷， 但酶解能力低下， 目的 产物收率不高， 须通过优化发酵条件和菌种诱变等方法来提高转化能力。 0005 目前， 皂苷微生物转化研究较多的是天然人参皂苷和三七皂苷为前提物的微生物 转化制。
12、备次生皂苷， 如中国专利 CN101139562 公开利用弗氏链霉菌菌株规模化发酵转化各 种三七皂苷、 制备 Compound K 提供一株性状稳定、 营养要求简单、 生长良好的链霉菌菌株， 以及实用简便的全自动发酵罐发酵、 分离提取工艺。中国专利 CN101928671A 公开利用一种 链格孢属菌及其发酵人参茎叶总皂苷制备人参皂苷Rg3的方法， 中国专利CN1793320A公开 一株镰刀霉菌及其用于制备人参皂苷 Rh2 的方法。根据文献和专利检索， 尚未见利用微生 物转化法制备具有抗癌活性绞股蓝次生皂苷专利报道。 发明内容 0006 本发明的目的在于提供一种绞股蓝次生皂苷及其制备方法。 00。
13、07 本发明的另一目的在于提供绞股蓝次生皂苷在制备抗癌活性剂中的应用。 0008 所述绞股蓝次生皂苷的化合物名称为 2， 3， 12， 20(S)- 四羟基 -24- 达玛 烯 -3-O-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 2)-D- 吡喃葡萄糖苷， 结构式为 ： 0009 说 明 书 CN 102603849 A 4 2/5 页 5 0010 分子式为 C42H72O14， 分子量为 800。 0011 所述绞股蓝次生皂苷为绞股蓝皂苷与微生物共培养后的代谢产物。 0012 所述绞股蓝次生皂苷的制备方法包括以下步骤 ： 0013 1) 制备绞股蓝皂苷 ： 所述制备绞股蓝皂苷的具体方法为将绞股蓝粉末用乙。
14、醇溶 液在水浴锅中提取， 将提取液真空浓缩获得绞股蓝乙醇提取物， 再用乙醇溶液溶解后， 上样 于大孔吸附树脂柱， 先用乙醇溶液冲洗后， 再用乙醇溶液洗脱绞股蓝皂苷， 将洗脱液浓缩干 燥， 获得绞股蓝皂苷 ； 0014 2) 用微生物转化绞股蓝皂苷 ： 所述用微生物转化绞股蓝皂苷的具体方法为将转 化培养基装在 250ml 三角瓶中， 装液量 50ml， 在 121， 灭菌 20min ； 取活化后的微生物转入 马铃薯液体培养基培养， 培养至长出真菌孢子， 按 1 5接种量接入转化瓶中， 在 25 37， 180300r/min摇床上培养1272h后， 加入220绞股蓝皂苷底物进行转化， 在 25。
15、 37， 180 300r/min 摇床上培养继续培养 1 5d 后， 收集转化菌液 ； 0015 3) 制备绞股蓝次生皂苷 ： 微生物转化绞股蓝皂苷后， 菌液过滤， 取上清液， 菌体再 用水清洗， 上清液上样于大孔吸附树脂， 先用乙醇溶液冲洗后， 用乙醇溶液洗脱， 洗脱液浓 缩干燥， 获得绞股蓝次生皂苷。 0016 在步骤 1) 中， 所述将绞股蓝粉末用乙醇溶液在水浴锅中提取中， 所述乙醇溶液的 用量按质量比可为绞股蓝粉末的 10 30 倍 ； 所述水浴锅的温度可为 60 ； 所述提取可提 取 2 4 次， 每次提取时间可为 24 72h ； 所述再用乙醇溶液溶解可用 10 30乙醇溶 液溶。
16、解 ； 所述大孔吸附树脂柱可采用 HP20 大孔吸附树脂柱等 ； 所述先用乙醇溶液冲洗可用 1030乙醇溶液冲洗35个床体积 ； 所述再用乙醇溶液洗脱绞股蓝皂苷可用40 80乙醇溶液洗脱绞股蓝皂苷。 0017 在步骤 2) 中， 所述微生物可采用曲霉属真菌等， 所述曲霉属真菌可选自黑曲霉、 构巢曲霉、 青霉、 灰绿曲霉等中的一种 ； 所述转化培养基的组成可为 ： 葡萄糖 5 50g/L， 蛋 白胨 1 5g/L， 酵母膏 1 5g/L， 磷酸氢二钾 2 10g/L， 氯化钙 2 8g/L， 吐温 80(2 5) ml， 七水硫酸镁 1 5g/L， 四水硫酸锰 1 5g/L。 0018 在步骤3。
17、)中， 所述过滤可采用8层纱布过滤 ； 所述清洗可清洗至少2次 ； 所述大孔 吸附树脂可采用预处理好的 HP20 大孔吸附树脂 ； 所述先用乙醇溶液冲洗可用 30 50 乙醇溶液冲洗 3 5 个床体积 ； 所述用乙醇溶液洗脱可用 60 100乙醇溶液洗脱。 0019 经化合物的抗癌活性测定， 证明绞股蓝次生皂苷可用于制备抗癌活性剂。 0020 本发明具有如下的突出优点和技术效果 ： 0021 1) 本发明利用微生物转化法制备绞股蓝次生皂苷， 以绞股蓝为原料， 在我国种植 面积广， 廉价易得， 资源丰富， 是生物药物和保健品开发应用的良好材料 ； 说 明 书 CN 102603849 A 5 3。
18、/5 页 6 0022 2) 工艺流程较简单， 采用大孔吸附树脂为主要制备填料， 适合于工艺规模化放 大 ； 0023 3) 制备方法相对于化学酸碱裂解法， 设备条件要求简单， 制备的产物副作用小。 附图说明 0024 图1为化合物HPLC图谱。 在图1中， 横坐标为时间(min)， 纵坐标为吸光度(mAU)。 0025 图 2 为化合物 13C-NMR 的结构鉴定图。在图 2 中， 横坐标为化学位移 (ppm)， 纵坐 标为峰强度。 0026 图 3 为化合物 HMBC 的结构鉴定图。在图 3 中， 横坐标为化学位移 (ppm)， 纵坐标为 峰强度。 0027 图 4 为化合物 HSQC 的。
19、结构鉴定图。在图 4 中， 横坐标为化学位移 (ppm)， 纵坐标为 峰强度。 0028 图 5 为化合物 DEPT 的结构鉴定图。在图 5 中， 横坐标为化学位移 (ppm)， 纵坐标为 峰强度 ； 曲线 a 为 DEPT 图谱， 曲线 b 为氢图谱， 曲线 c 为碳图谱。 0029 图 6 为黑曲霉制备的次生皂苷对 SMMC7721 肝癌细胞的抑制作用。在图 6 中， 横坐 标为转化产物浓度 (g/ml)， 纵坐标为细胞抑制率 ( )。 0030 图 7 为黑曲霉制备的次生皂苷对 Bel7402 肝癌细胞的抑制作用。在图 7 中， 横坐 标为转化产物浓度 (g/ml)， 纵坐标为细胞抑制率。
20、 ( )。 0031 图 8 为构巢曲霉制备的次生皂苷对 SMMC7721 肝癌细胞的抑制作用。在图 8 中， 横 坐标为转化产物浓度 (g/ml)， 纵坐标为细胞抑制率 ( )。 0032 图 9 为构巢曲霉制备的次生皂苷对 Bel7402 肝癌细胞的抑制作用。在图 9 中， 横 坐标为转化产物浓度 (g/ml)， 纵坐标为细胞抑制率 ( )。 具体实施方式 0033 以下结合附图对本发明作进一步的详细描述。 0034 本发明利用生物转化法制备绞股蓝次生皂苷， 主要包括绞股蓝皂苷的制备、 微生 物转化绞股蓝皂苷和绞股蓝次生皂苷的制备。 以下提供黑曲霉和构巢曲霉制备绞股蓝次生 皂苷的实施例， 。
21、同时提供转化产物分离纯化， 化合物结构鉴定， 以及利用 MTT 法检测次生皂 苷对肝癌细胞的抑制作用来进一步说明本发明， 但并不表示本发明只限于该实施例。 0035 本发明所选用的材料为福建南靖种植区的绞股蓝， 为公开的生物材料。 0036 主要利用的试剂为乙醇、 三氯甲烷、 甲醇等， 均为分析纯试剂。 0037 一、 绞股蓝次生皂苷制备过程如下 ： 0038 1、 绞股蓝皂苷的制备 ： 绞股蓝粉末用 30 倍量乙醇溶液在 60水浴锅中提取 3 次， 每次提取时间 24h， 混合提取液真空浓缩获得绞股蓝乙醇提取物， 提取物用 30乙醇溶液 溶解， 上样于预处理好的 HP20 大孔吸附树脂柱， 。
22、先用 30乙醇溶液冲洗 3 个床体积后， 用 70乙醇溶液洗脱绞股蓝皂苷， 洗脱液浓缩干燥获得绞股蓝皂苷。 0039 2、 微生物转化绞股蓝皂苷 ： 以下为黑曲霉和构巢曲霉转化实施例 ； 0040 利用黑曲霉转化绞股蓝皂苷 ： 用接种环取活化后的黑曲霉， 接入 2 环含有 50ml 马 铃薯液体培养基的三角瓶中， 培养至长出少量真菌孢子。转化培养基 50ml 装在 250ml 三角 说 明 书 CN 102603849 A 6 4/5 页 7 瓶中， 在121， 灭菌20min ； 按5接种量接入转化瓶中， 在25， 230r/min摇床上培养48h 后， 加入 5绞股蓝皂苷底物进行转化， 继。
23、续在 25， 230r/min 摇床上培养培养 6d 后， 收集 转化菌液。菌液用 8 层纱布过滤取上清液， 菌体再用 100ml 水清洗 3 次， 上清液上样于预处 理好的 HP20 大孔吸附树脂， 先用 30乙醇溶液冲洗 5 个床体积后， 用 100乙醇溶液洗脱， 洗脱液浓缩干燥获得黑曲霉转化绞股蓝皂苷的次生皂苷。 0041 利用构巢曲霉转化绞股蓝皂苷 ： 用接种环取活化后的构巢曲霉， 接入 2 环含有 50ml 马铃薯液体培养基的三角瓶中， 培养至长出少量真菌孢子。转化培养基 50ml 装在 250ml三角瓶中， 在121， 灭菌20min ； 按2接种量接入转化瓶中， 在25， 230。
24、r/min摇床 上培养 24h 后， 加入 5绞股蓝皂苷底物进行转化， 继续在 25， 230r/min 摇床上培养培养 3d 后， 收集转化菌液。菌液用 8 层纱布过滤取上清液， 菌体再用 100ml 水清洗 3 次， 上清液 上样于预处理好的 HP20 大孔吸附树脂， 先用 30乙醇溶液冲洗 5 个床体积后， 用 100乙 醇溶液洗脱， 洗脱液浓缩干燥获得构巢曲霉转化绞股蓝皂苷的次生皂苷。 0042 3、 绞股蓝次生皂苷的制备 ： 微生物转化绞股蓝皂苷后， 菌液用 8 层纱布过滤取上 清液， 菌体再用100ml水清洗3次， 上清液上样于预处理好的HP20大孔吸附树脂， 先用30 乙醇溶液冲。
25、洗 5 个床体积后， 用 100乙醇溶液洗脱， 洗脱液浓缩干燥获得绞股蓝皂苷的次 生皂苷。 0043 二、 转化产物分离纯化和结构鉴定过程如下 ： 0044 1、 转化产物分离纯化 0045 转化产物通过硅胶柱分离其中的化合物， 常压柱层析采用干法装柱和硅胶拌样上 柱， 根据薄层展开情况选择洗脱溶剂系统， 最后得到分离的化合物。具体步骤为 ： 转化产物 冻干粉末 350mg 干法拌样 (100 200 目 )， 硅胶柱 (315cm) 湿法装柱硅胶 (200 300 目 )， 用氯仿 - 甲醇 - 水 (10 1 2) 下层为洗脱液， 等度洗脱， 每份洗脱液为 20ml， 减压 蒸馏浓缩， 薄。
26、层板检测分离组份， 收集获得化合物。 0046 将得到的化合物做薄层层析， 经紫外， 碘和硫酸 - 乙醇显色为单一斑点， 3 种溶剂 系统展开均为单一斑点， 可初步认定为单一化合物。 0047 2、 化合物纯度鉴定 0048 分离的化合物通过高效液相色谱 (HPLC) 鉴定其纯度， HPLC 色谱条件为 ： 色谱柱为 AgilentEclipse XDB-C18(1504.6mm) ； 柱温 ： 25 ； 检测波长 ： 203nm ； 流速 ： 1.0ml/min ； 进样量为20l， 流动相为 ： 水(A)/乙腈(B)梯度洗脱， 梯度洗脱条件为08min ： A， 80， B， 20； 8 。
27、20min ： A， 65， B， 35； 20 35min ： A， 30， B， 70； 35 40min ： A， 30， B， 70 ； 40 50min ： B， 100 ； 50 60min ： B， 100 ； 60 70min ： A， 80， B， 20。HPLC 图 谱见图 1， 由图可知纯化的化合物呈单峰， 纯度达 98。 0049 3、 化合物结构鉴定 0050 对分离到得化合物做碳谱， 氢谱以及二维核磁共振。化合物 (2， 3， 12， 20(S)- 四羟基 -24- 达玛烯 -3-O-D- 吡喃葡萄糖基 -(1 2)-D- 吡喃葡萄糖苷 ) 为 白色粉末， 可溶剂氯。
28、仿， 甲醇。由核磁共振数据 ( 见图 2 6) 得出分子式为 C42H72O14， 分子 量为 800， 查阅参考文献， 然后综合分析得到的数据， 并结合文献对照分析化合物的可能结 构类型， 最后确定化合物结构为 ： 0051 说 明 书 CN 102603849 A 7 5/5 页 8 0052 化合物经过数据库查新为已有文献报道的化合物， 但未发现有化合物抗癌活性应 用。 0053 三、 抗癌活性测定 0054 1、 测定方法 ： 肝癌细胞 (SMMC7721 和 Bel7402) 经胰酶消化与洗涤后悬浮于含 10胎牛血清的培养基中， 经台盼兰染色排除法计数活细胞后， 调节细胞悬浮液密度至。
29、 5104个 /ml。在平底 96 孔板中， 每孔接种 100l 肝癌细胞， 使的每孔中细胞总数约为 5000 个， 并于 37、 5 CO2的 Thermo 细胞培养箱中培养过夜。次日， 向每孔加入 200l 不 同浓度的测定样品作用于肿瘤细胞， 以 DMSO 作为对照， 每个浓度设 4 个重复孔 ； 将加药细 胞在 37， 5 CO2细胞培养箱中培养 72h 后， 吸去培养液， 向每孔中加入 100l 的 1mg/ml MTT 溶液， 继续在培养箱中培养 4 8h ； 吸去培养液， 每孔加入 200l DMSO， 置于摇床上以 500rpm 震荡 20min， 使生成的甲臢晶体充分溶解在 。
30、DMSO， 最后在 492nm 处测定光吸收值。 0055 2、 绞股蓝次生皂苷抗癌活性测定 0056 根据光吸收值计算药物作用后的细胞相对抑制率。计算公式如下 ： 细胞抑制率 (OD对照组-OD给药组)/OD对照组100， 并通过 SPSS 统计学软件计算抑制 50时药物的溶度 IC50值， 测定的黑曲霉和构巢曲霉制备的次生皂苷对 SMMC7721 和 Bel7402 肝癌细胞的抑制 曲线见图 7 9， 抗癌活性的半抑制率 IC50 值总结见表 1。 0057 表 1 绞股蓝次生皂苷抗癌活性 0058 0059 备注 ： HZ ： 黑曲霉制备的次生皂苷 ； GZ ： 构巢曲霉制备的次生皂苷 。
31、0060 3、 化合物的抗癌活性测定 0061 根据上述测定方法， 将不同浓度的化合物 (0， 6.25， 12.5， 25， 50， 100g/ml) 作用 于 SMCC7721 肝癌细胞 72h 后， MTT 法测定化合物对肝癌细胞抑制率， 结果表明该化合物对 肝癌细胞 SMMC7721 的半抑制率 IC50 为 91.66g/ml。 说 明 书 CN 102603849 A 8 1/4 页 9 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 102603849 A 9 2/4 页 10 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 102603849 A 10 3/4 页 11 图 5 图 6 图 7 说 明 书 附 图 CN 102603849 A 11 4/4 页 12 图 8 图 9 说 明 书 附 图 CN 102603849 A 12 。