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1、(10)申请公布号 CN 103554309 A (43)申请公布日 2014.02.05 CN 103554309 A (21)申请号 201310544809.6 (22)申请日 2013.11.07 C08F 8/32(2006.01) C08F 8/24(2006.01) C07D 471/20(2006.01) (71)申请人 中南大学 地址 410083 湖南省长沙市岳麓区麓山南路 932 号 (72)发明人 刘佳佳 刘雄 杨栋梁 任娜 王倩文 (54) 发明名称 一种用于它波宁分离纯化的树脂及其应用 (57) 摘要 一种用于它波宁分离纯化的树脂及其应用。 以商业树脂为起始树脂， 。
2、经氯甲基化后与氨基酸 反应得到新型树脂 ； 该新型树脂对马铃果种子提 取酸液中它波宁的吸附能力极低， 但能选择性的 吸附提取酸液中的杂质 ； 将新型树脂用于它波宁 分离纯化时， 先将马铃果种子预处理、 粉碎， 用有 机溶剂加热回流提取、 酸化， 酸液经新型树脂纯化 后， 目标产物它波宁富集于上柱余液和水洗液中， 收集液经碱化、 萃取、 浓缩后得产物它波宁。该新 型树脂用于它波宁的分离纯化， 提高了它波宁的 回收率， 且上柱纯化过程无需高浓度的醇洗， 降低 了生产成本和溶剂用量。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申。
3、请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 103554309 A CN 103554309 A 1/1 页 2 1. 一种用于它波宁纯化分离的树脂， 其特征在于 ： 包括如下步骤 ： (1)商业树脂经预处理后， 在体积为树脂质量510倍的二氯甲烷溶液中溶胀， 加入质 量为树脂质量 0.5 2 倍的氯化钠、 质量为树脂质量 0.5 2 倍的氯化锌、 体积为树脂质量 0.3 1 倍的氯甲基甲醚后， 回流搅拌 10 40 小时， 过滤、 洗涤、 干燥， 得氯甲基化树脂 ； (2) 将步骤 (1) 中得到的氯甲基化树脂于体积为树脂质量 1 10 倍的醇溶液中溶胀， 加入质量为树脂质量 。
4、0.5 4 倍的氨基酸、 质量为树脂质量 0.5 4 倍的吡啶及体积为树 脂质量 10 40 倍的水， 回流搅拌 8 30 小时， 过滤、 洗涤、 干燥得氨基酸修饰的新型树脂。 2. 根据权利要求 1 所述的树脂， 其特征在于 ： 所述商业树脂为 D101。 3. 根据权利要求 1 所述的树脂， 其特征在于 ： 所述氨基酸是丙氨酸、 缬氨酸、 亮氨酸、 异 亮氨酸、 脯氨酸、 苯丙氨酸、 色氨酸、 蛋氨酸、 甘氨酸、 丝氨酸、 苏氨酸、 半胱氨酸、 酪氨酸、 天 冬酰胺、 谷氨酰胺、 赖氨酸、 精氨酸、 组氨酸、 天冬氨酸、 谷氨酸中的一种。 4. 一种用权利要求 1 所述的树脂分离纯化它波宁。
5、的方法， 其特征在于 ： 包括如下步 骤 ： a. 马铃果种子预处理， 粉碎 ； b. 有机溶剂加热回流提取、 酸化 ； c. 酸液经新型树脂纯化 ； d. 上柱余液和水洗液碱化、 萃取、 浓缩， 得产物它波宁。 5. 根据权利要求 4 所述的方法， 其特征在于 ： 所述新型树脂用于分离纯化过程中的上 柱纯化阶段。 6. 根据权利要求 4 所述的方法， 其特征在于 ： 酸液经新型树脂纯化后， 它波宁富集于上 柱余液和水洗液中。 7. 根据权利要求 4 所述的方法， 其特征在于 ： 所述萃取所用的溶剂为石油醚、 乙酸乙 酯、 二氯甲烷、 三氯甲烷、 苯、 甲苯中的一种。 权 利 要 求 书 CN。
6、 103554309 A 2 1/3 页 3 一种用于它波宁分离纯化的树脂及其应用 技术领域 0001 本发明涉及天然产物提取分离技术领域， 具体涉及一种分离纯化用的树脂及其应 用。 背景技术 0002 它波宁， 又称柳叶水甘草碱 (Tabersonine， CAS NO.44289-63-4)， 是非洲马 铃果中一种重要生物碱， 分子式为 C21H24N2O2， 相对分子质量为 336.42， 其化学名称为 Aspidospermidine-3-carboxylic acid， 2， 3， 6， 7 tetradehydro-(5， 12， 19) methylseter。研究表明， 它波宁。
7、具有降压作用， 是目前用于合成抗癌药物长春西汀的主要 原料。 0003 专利 US3758478 中报道了它波宁的提取分离方法， 采用有机溶剂提取， 多次酸水 洗涤、 碱化， 有机溶剂萃取， 重结晶等步骤来分离纯化它波宁， 该方法操作过程复杂， 它波宁 收率低， 不利于工业化生产， 并且采用苯和氯仿等有毒溶剂， 对生产人员有较大的伤害。 0004 公开号为 CN101250188A、 名称为一种柳叶水甘草碱的制备工艺的发明专利， 其中 介绍了用大孔树脂分离纯化它波宁， 该方法在实际生产中切实可行， 但是该专利方法采用 的 D101、 XDA-6、 XDA-7 等商业树脂缺乏对它波宁和酸提液杂质。
8、的吸附选择性， 导致了树脂 用量大、 它波宁回收率降低、 溶剂用量大、 所用萃取溶剂如正己烷， 昂贵等问题， 增大了生产 成本。 发明内容 0005 本发明所要解决的技术问题是提供一种低成本、 高选择性的用于高效分离纯化它 波宁的新型树脂， 以及用该树脂来分离纯化它波宁的方法， 该方法树脂用量少， 它波宁回收 率高， 溶剂用量少， 能有效降低生产成本。 0006 为了解决上述技术问题， 本发明以商业树脂为起始树脂， 将起始树脂首先经氯甲 基化， 然后与氨基酸反应得到新型树脂。 研究表明， 该类树脂能高效选择性的吸附马铃果种 子提取酸液中的杂质， 酸液中的它波宁直接收集于上柱余液和水洗液中。将它。
9、波宁收集液 碱化后经乙酸乙酯等低毒低成本溶剂萃取， 可得高纯度的它波宁。 0007 该新型树脂的具体制作步骤如下 ： 0008 (1) 商业树脂经预处理后， 在体积为树脂质量 5 10 倍的二氯甲烷溶液中充分溶 胀， 加入质量为树脂质量 0.5 2 倍的氯化钠、 质量为树脂质量 0.5 2 倍的氯化锌、 体积 为树脂质量 0.3 1 倍的氯甲基甲醚后回流搅拌 10 40 小时， 过滤、 洗涤、 干燥， 得氯甲基 化树脂 ； 商业树脂优选 D101 ； 0009 (2)将步骤(1)中得到的氯甲基化树脂于体积为树脂质量110倍的醇溶液中充 分溶胀， 加入质量为树脂质量 0.5 4 倍的氨基酸、 质。
10、量为树脂质量 0.5 4 倍的吡啶及体 积为树脂质量1040倍的水， 回流搅拌830小时， 过滤、 洗涤、 干燥得氨基酸修饰的新型 树脂 ； 氨基酸可以是丙氨酸、 缬氨酸、 亮氨酸、 异亮氨酸、 脯氨酸、 苯丙氨酸、 色氨酸、 蛋氨酸、 说 明 书 CN 103554309 A 3 2/3 页 4 甘氨酸、 丝氨酸、 苏氨酸、 半胱氨酸、 酪氨酸、 天冬酰胺、 谷氨酰胺、 赖氨酸、 精氨酸、 组氨酸、 天冬氨酸、 谷氨酸中的任一种 ； 醇溶液优选甲醇溶液。 0010 该新型树脂用于分离纯化马铃果种子中它波宁的步骤如下 ： 0011 a. 马铃果种子预处理， 粉碎 ； 0012 b. 有机溶剂加。
11、热回流提取、 酸化 ： 用有机溶剂多次提取， 合并提取液， 减压除去有 机溶剂， 在浓缩液中加入酸水酸化 ； 有机溶剂优选 90的甲醇 ； 0013 c. 酸液经新型树脂纯化 ： 酸液上新型树脂， 收集上柱余液和水洗液 ； 0014 d. 上柱余液和水洗液经碱化 pH 为 9 11， 用有机溶剂萃取、 浓缩， 得产物它波宁 ； 萃取所用的溶剂为石油醚、 乙酸乙酯、 二氯甲烷、 三氯甲烷、 苯、 甲苯中的一种。 0015 与现有专利相比， 本发明的特点和优点在于 ： 采用高选择性的新型树脂对马铃果 种子提取酸液进行分离纯化， 商业树脂中引入氨基酸官能团成为新型树脂后对提取酸液中 它波宁的吸附量由。
12、引入之前的 246mg/g 降至为 6mg/g， 且新型树脂仍保留了对酸液中杂质 成分的高吸附能力， 提取酸液经新型树脂选择性吸附后， 目标产物它波宁直接收集于上柱 余液和水洗液中， 酸液中的杂质吸附于新型树脂上。新型树脂的高选择性吸附有效的减少 树脂用量， 处理 1Kg 马铃果种子， 需要的新型树脂干重约为 140g ； 新型树脂对它波宁极弱的 吸附能力， 提高了它波宁的回收率和减少了溶剂用量， 回收率大于90。 由于杂质和它波宁 经新型树脂纯化后得到了有效的分离， 后处理的碱化萃取过程无需昂贵的正己烷作为萃取 溶剂， 可采用经济低毒的石油醚、 乙酸乙酯等溶剂作为萃取溶剂。 具体实施方式 0。
13、016 本发明中涉及到的部分新型树脂及其用于分离纯化它波宁的方法， 用下列实施例 说明， 但本发明的保护范围不局限于此。 0017 实施例 1 ： 0018 (1)将预处理好的150gD101干树脂加入三颈瓶中， 加入1000ml二氯甲烷浸泡溶胀 24 小时， 后分别加入 200g 氯化钠、 150g 氯化锌、 700ml 氯甲基甲醚， 于 50条件下回流搅拌 15 小时， 后经去离子水、 甲醇洗涤， 干燥， 得氯甲基化树脂 ； 0019 (2) 称取 100g 氯甲基化树脂加入三颈瓶中， 再加入 350ml 甲醇浸泡溶胀 12 小时。 将 72g 甘氨酸、 75g 吡啶加入 2000ml 水。
14、溶液中， 然后再加入三颈瓶中， 90回流搅拌 24 小 时， 过滤， 洗涤， 干燥， 得甘氨酸修饰的新型树脂 ； 0020 (3) 称取 100g 马铃果种子粉碎， 用质量比为 90的甲醇溶液 400ml 回流提取五 次， 合并提取液， 浓缩去除醇溶液 ； 再加入 250ml 质量比为 1的盐酸溶液酸化， 过滤， 得马 铃果种子提取酸液 ； 0021 (4) 将步骤 (2) 中 20g 甘氨酸修饰的干新型树脂用水溶胀 ； 将步骤 (3) 得到的酸 液直接上样， 收集上柱余液和水洗液 ； 0022 (5) 将步骤 (4) 得到的上柱余液和水洗液用氨水调节 pH 至 9， 用 150ml 乙酸乙酯。
15、 萃取， 浓缩得到纯度大于 98的它波宁 1.71g。 0023 实施例 2 ： 0024 (1)将预处理好的150g D101干树脂加入三颈瓶中， 加入800ml二氯甲烷浸泡溶胀 24 小时， 然后分别加入 150g 氯化钠、 170g 氯化锌、 400ml 氯甲基甲醚， 于 50条件下回流搅 说 明 书 CN 103554309 A 4 3/3 页 5 拌 20 小时， 后经去离子水、 甲醇洗涤， 干燥， 得到氯甲基化树脂 ； 0025 (2) 称取 100g 氯甲基化树脂加入三颈瓶中， 加入 350ml 甲醇浸泡溶胀 12 小时。称 取 110g 缬氨酸、 70g 吡啶加入 1700ml。
16、 水溶液中， 然后再加入三颈瓶中， 90回流搅拌 20 小 时， 过滤， 洗涤， 干燥， 得缬氨酸修饰的新型树脂 ； 0026 (3) 称取 100g 马铃果种子粉碎， 用质量比为 90的甲醇溶液 400ml 回流提取五 次， 合并提取液， 浓缩去除醇溶液， 加入 250ml 质量比为 3的硫酸溶液酸化， 过滤， 得马铃 果种子提取酸液 ； 0027 (4) 将步骤 (2) 中 15g 缬氨酸修饰的干新型树脂用水溶胀 ； 将步骤 (3) 得到的酸 液直接上样， 收集上柱余液和水洗液 ； 0028 (5) 将步骤 (4) 得到的上柱余液和水洗液用氨水调节 pH 至 10， 用 150ml 二氯甲烷 萃取， 浓缩得到纯度大于 98的它波宁 1.65g。 说 明 书 CN 103554309 A 5 。