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1、(10)申请公布号 CN 103360354 A (43)申请公布日 2013.10.23 CN 103360354 A *CN103360354A* (21)申请号 201310308796.2 (22)申请日 2013.07.22 201210516456.4 2012.12.04 CN C07D 307/88(2006.01) A61K 9/08(2006.01) A61K 31/343(2006.01) A61P 27/14(2006.01) (71)申请人 广东中科药物研究有限公司 地址 510600 广东省广州市萝岗区科学城掬 泉路 3 号 A 区 1105 (72)发明人 王伟 。
2、杨威 王茜莎 刘亚楠 周亚耀 王如刚 谭进辉 (54) 发明名称 一种用于制备滴眼液的新化合物 (57) 摘要 一种新的化合物， 结构如式 I 所示。这种 化合物易溶于水， 采用这种化合物所制成的滴 眼液经过药理实验证明， 没有眼部的刺激性， 能够治疗结膜炎， 并且经过溶血性试验和血 管刺激性试验证明具有较好的耐受性， 能够 用于临床上治疗结膜炎等眼部的炎症反应。 (66)本国优先权数据 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 12 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书12页 (10)申请公布号 CN 103360354 A CN 。
3、103360354 A *CN103360354A* 1/1 页 2 1. 如下所示的化合物在制备滴眼液药物中的用途 ： 。 2. 一种用于制备滴眼液的新化合物， 化学式为 ： 。 3. 权利要求 3 所述化合物在制备用于治疗眼部炎症反应的药物中的用途。 4. 根据权利要求 4 所述的用途， 其特征在于， 所述眼部炎症反应为结膜炎， 优选为变态 反应性结膜炎。 5. 一种用于治疗眼部炎症的滴眼液， 所述滴眼液包含权利要求 1 所述化合物、 水和 pH 调节剂。 6. 根据权利要求 1 和 3 所述的滴眼液， 其特征在于， 含权利要求 1 和 3 所述的浓度为 0.05-0.5。 7. 根据权利。
4、要求 4 所述的滴眼液， 其特征在于， 所述 pH 调节剂为碳酸钠和 / 或氢氧化 钠 ； 优选地， 所述滴眼液的 pH 为 7-9。 8. 根据权利要求 4 至 6 中任一项所述的滴眼液的制备方法， 所述制备方法包括下述步 骤 ： 将权利要求 1 化合物溶解于水中， 用 pH 调节剂调节 pH 为 7-8.5， 过滤除菌， 灌装， 封盖， 包装。 9.根据权利要求4至7中任一项所述的滴眼液在制备用于治疗眼部炎症反应的药物中 的用途。 10. 根据权利要求 8 所述的用途， 其特征在于， 所述眼部炎症反应为结膜炎， 优选为变 态反应性结膜炎。 权 利 要 求 书 CN 103360354 A 。
5、2 1/12 页 3 一种用于制备滴眼液的新化合物 技术领域 ： 0001 本发明涉及一种用于制备滴眼液的新化合物及其制备方法和用途。 背景技术 ： 0002 变态反应性结膜炎是最常见的免疫性眼病之一， 据统计世界上约有 5以上的人 因变态反应性眼病而就诊， 而其中变态反应性结膜炎的比例超过50。 近年来， 由于眼部化 妆品的使用和某些地区空气污染的加重， 变态反应性结膜炎的发病率进一步上升， 因此研 究变态反应性结膜炎的治疗方法意义重大。 0003 一种药物成分能否制成滴眼液， 需要具备三个主要条件 ： 1、 水溶性满足制备所需 浓度的水溶液 ； 2、 具有相应的药效 ； 3、 局部 ( 眼。
6、部 ) 刺激性为动物或人所能耐受。很多药 物虽然具有水溶性及有效性的特点， 但因为眼部刺激性不能够耐受， 达不到制备滴眼液的 要求。局部刺激性取决于多种因素， 包括化合物本身的结构、 辅料、 溶液的 PH 值等条件， 多 种助溶剂辅料具有刺激性， 如吐温 80、 有机溶媒甲醇、 乙醇和甘油、 羟丙基环糊精等等， 很多 非甾类抗炎镇痛药虽然具有较好的药效， 但刺激性依然是一个很难解决的问题， 如布洛芬 精氨酸盐， 虽然具有较好的溶解性， 但各种 PH 条件下都具有较大的眼部刺激性及血管刺激 性， 而不能制备成滴眼液。 发明内容 ： 0004 本发明的另一个目的是提供式 I 化合物的制备方法， 所。
7、述的合成方法简单、 收率 高、 产品纯度高， 可以直接得到。 0005 本发明式 I 化合物的制备方法依照下述路线获得 ： 0006 0007 合成步骤 ： 0008 1、 化合物 3 的合成 ： 0009 将32.0克化合物2溶于100mL乙酸酐中， 在120下反应5小时， 停止反应， 冷却反 应液至室温， 减压蒸馏除去乙酸酐， 加入 10mL 饱和碳酸氢钠溶液和 90mL 水， 搅拌 2 小时， 抽 滤， 后得到 17.3 克粗品， 用乙醇重结晶后得到 12.8 克化合物 2， 产率为 35。HNMR(400Hz， CDC13) ： 5.85(t， J 8.4Hz， 1H)， 5.58(s。
8、， 2H)， 3.72(s， 3H)， 3.31(d， J 8.4Hz， 2H)， 2.35(s， 3H)， 2.26-2.22(m， 4H)， 2.08(s， 3H)， 1.72(s， 3H) ； MS(m/z) ： 363.3。 0010 2、 化合物 1 的合成 ： 0011 将 12.0 克化合物 3 加入到 50mL 乙醇中， 在室温下搅拌溶解完全， 4.05 克氨丁三 说 明 书 CN 103360354 A 3 2/12 页 4 醇溶于 5.0mL 蒸馏水中， 滴加到上述反应液中， 在 50下反应过夜。停止反应， 减压蒸馏除 去溶剂后得到粗品， 粗品用10mL的甲醇溶解完全， 在。
9、室温下滴加100mL四氢呋喃， 这时有大 量的固体析出， 搅拌一小时， 抽滤得到 13， 6 克化合物 1， 产率为 81。HNMR(400Hz， DMSO) ： 5.85(t， J 8.4Hz， 1H)， 5.58(s， 2H)， 3.72(s， 3H)， 3.70(s， 6H)， 3.31(d， J 8.4Hz， 2H)， 2.35(s， 3H)， 2.26-2.22(m， 4H)， 2.08(s， 3H)， 1.72(s， 3H) ； MS(m/z) ： 363.1。 0012 我们在实验中发现式 I 化合物， 具有较好的水溶性， 经过动物实验证明具有较好 的治疗豚鼠结膜炎的作用， 并且。
10、没有眼部的刺激性， 适宜于制备滴眼液治疗动物及人的结 膜炎疾病， 而同时进行试验的式 II 化合物则具有中度的刺激性， 而不能制备成滴眼液， 我 们同时进行了溶血性试验、 血管刺激性试验以及注射的急性毒性试验， 证明该化合物具有 较好的耐受性及安全性， 可以用于制备治疗眼部炎症反应的滴眼液。 0013 0014 0015 具体而言， 本发明人设计了一系列不同浓度的式 I 化合物的药效和刺激性实验， 其中配制了浓度分别为 0.04、 0.08、 0.16、 0.32、 0.48、 0.96的式 I 化合物溶 液， 并调节 pH 值至 7-9， 进行了 “不同浓度滴眼液对豚鼠结膜炎的影响试验研究”。
11、 及刺激 性试验， 结果发现， 0.04的式 I 溶液对豚鼠结膜炎症状就具有良好的改善作用， 0.08、 0.16、 0.32、 0.48、 0.96对豚鼠结膜炎症状的改善具有剂量相关性， 并且优于 0.1 的普拉洛芬滴眼液 ( 市售 )。另外刺激性试验发现浓度达到 0.5时对新西兰兔眼睛未见 刺激性反应， 而相同浓度的式 II 化合物的溶液则具有一定刺激性。 0016 综上所述， 本发明人通过大量实验发现， 式 I 化合物或包含其的滴眼液可以用于 治疗眼部炎症反应， 并且该滴眼剂抗炎效果显著， 且对眼部无刺激， 受试者可以良好耐受， 因此具有优良的应用前景。 具体实施例 ： 0017 实施例。
12、 1 ： 式 I 化合物的制备 说 明 书 CN 103360354 A 4 3/12 页 5 0018 合成路线 ： 0019 0020 合成步骤 ： 0021 (1)、 化合物 3 的合成 ： 0022 将32.0克化合物2溶于100mL乙酸酐中， 在120下反应5小时， 停止反应， 冷却反 应液至室温， 减压蒸馏除去乙酸酐， 加入 10mL 饱和碳酸氢钠溶液和 90mL 水， 搅拌 2 小时， 抽 滤， 后得到 17.3 克粗品， 用乙醇重结晶后得到 12.8 克化合物 2， 产率为 35。HNMR(400Hz， CDC13) ： 5.85(t， J 8.4Hz， 1H)， 5.58(s。
13、， 2H)， 3.72(s， 3H)， 3.31(d， J 8.4Hz， 2H)， 2.35(s， 3H)， 2.26-2.22(m， 4H)， 2.08(s， 3H)， 1.72(s， 3H) ； MS(m/z) ： 363.3。 0023 (2)、 化合物 1 的合成 ： 0024 将 12.0 克化合物 3 加入到 50mL 乙醇中， 在室温下搅拌溶解完全， 4.05 克氨丁三 醇溶于 5.0mL 蒸馏水中， 滴加到上述反应液中， 在 50下反应过夜。停止反应， 减压蒸馏除 去溶剂后得到粗品， 粗品用10mL的甲醇溶解完全， 在室温下滴加100mL四氢呋喃， 这时有大 量的固体析出， 搅。
14、拌一小时， 抽滤得到 13， 6 克化合物 1， 产率为 81。HNMR(400Hz， DMSO) ： 5.85(t， J 8.4Hz， 1H)， 5.58(s， 2H)， 3.72(s， 3H)， 3.70(s， 6H)， 3.31(d， J 8.4Hz， 2H)， 2.35(s， 3H)， 2.26-2.22(m， 4H)， 2.08(s， 3H)， 1.72(s， 3H) ； MS(m/z) ： 363.1。 0025 实施例 2、 式 I 化合物样品溶解度的测定 ： 0026 按中国药典 2005 年版二部凡例试验， 研究本品在氯仿、 甲醇、 丙酮、 水、 甲酸和 0.1mol/L 氢。
15、氧化钠溶液等溶剂中的溶解情况， 结果见表 1。 0027 表 1 溶解度试验 0028 0029 结论 ： 本品在水中易溶， 在丙酮中易溶 ； 在 0.1mol/L 氢氧化钠溶液中易溶 0030 在甲醇中微溶 ； 在甲酸中极微溶解 ； 在氯仿中不溶。 0031 * 溶解度代表 1g 样品需在多少 ml 的溶剂中溶解 0032 实施例 3 ： 含不同浓度式 I 化合物的滴眼液 1-3 的制备 0033 制备不同浓度式 I 化合物滴眼液原料组分和用量 说 明 书 CN 103360354 A 5 4/12 页 6 0034 0035 按本发明技术方案， 配制式 I 化合物滴眼液可选用的辅料不限于上。
16、表所列品种， 还可以有多种选择， 例如抑菌剂， 可以使用药剂学上所称的任何抑菌剂， 其用量按药剂学上 常规剂量。如， 0.002 0.005硫柳汞 ； 季铵盐类 ( 包括苯扎氯铵、 苯扎溴铵 )、 杜 米芬、 冼必泰等， 有效浓度为 0.002 0.01 ； 醇类， 常用 0.3 0.6三氯叔丁醇 ； 尼泊金类， 常用 0.03 0.06羟苯乙酯 ； 酸类， 如 0.01 0.08三梨酸。以上各物质浓 度均为容积 - 重量百分比， 即每百毫升含有克数。 0036 制备方法 ： 用注射用水溶解式 I 化合物全量， 另用注射用水溶解缓释系统、 渗透压 调节剂、 金属离子络合剂、 抑茵剂， 搅匀过滤。
17、， 合并二液， 再加入已溶解好的式 I 化合物， 加 注射用水至全量， 使用 pH 调节剂调节成品滴眼液的 pH 值为 7.0 9.O， 过滤， 分装， 即得。 0037 实施例 4 ： 式 I 化合物不同浓度滴眼液对豚鼠结膜炎的影响试验研究 0038 试验方法 ： 0039 豚鼠 【广东省实验动物中心】 120 只， 除溶媒对照组 (10 只 ) 外， 其余各组按文献报 说 明 书 CN 103360354 A 6 5/12 页 7 道的方法 【 药理实验方法学 M.徐叔云， 卞如濂， 陈修等， 第3版， 北京 ： 人民卫生出版社， 2002 ： 236-917】 制备变应性结膜炎动物模型。。
18、 0040 致敏 ： 每只豚鼠分别给予腹腔注射 OVA( 卵清白蛋白 ) 混悬液 (OVAO.1mg 与 AL(OH)， 5mg， 溶于1mL生理盐水配成)， 同时给溶媒对照组每只注射生理盐水1ml， 14天后再 次注射。 0041 模型评价及分组 ： 腹腔注射完成以后第 7 天， 进行被动皮肤免疫反应 (PCA) 试 验， 确定 OVA-IgE 抗体效价升高为造模成功。 0042 随机选取造模成功动物80只， 其中有60只分为模型组 ； 10只分为阳性对照组 ； 10 只分为模型对照组。此外， 选取溶媒对照组 10 只。共 90 只小鼠， 每组雌雄各半。 0043 激发及给药 ： 0044 。
19、将OVA生理盐水稀释液(5mg/mL)用微量加样器滴入双眼球结膜囊内， 每眼20L， 每日 1 次， 间隔一天激发一次， 持续一周。同时， 按照下表 1 给每组小鼠双眼给予相应药液 或生理盐水， 每眼 20L， 每日 1 次， 连续一周。 0045 表 1 各组小鼠给药情况 0046 组给药 模型组 1滴眼液 1( 式 I 化合物浓度为 0.04 ) 模型组 2滴眼液 2( 式 I 化合物浓度为 0.08 ) 模型组 3滴眼液 3( 式 I 化合物浓度为 0.16 ) 模型组 4滴眼液 4( 式 I 化合物浓度为 0.32 ) 模型组 5滴眼液 5( 式 I 化合物浓度为 0.48 ) 模型组。
20、 6滴眼液 6( 式 I 化合物浓度为 0.96 ) 阳性对照组普拉洛芬滴眼液 ( 浓度为 0.1 ) 模型对照组生理盐水 溶媒对照组生理盐水 0047 0048 症状观察及指标测定 ： 0049 (1) 眼部症状观察和评分 0050 于末次抗原攻击后 30min， 用裂隙灯对豚鼠眼部症状进行观察评分， 评分标准如 下 ： 0051 A. 结膜充血 ( 指睑结膜、 球结膜部位 ) ： 0052 说 明 书 CN 103360354 A 7 6/12 页 8 0053 B. 结膜水肿 ： 0054 0055 C. 分泌物 ： 0056 0057 评分的结果为 3 项分值累计， 即为充血、 水肿和。
21、分泌物得分的合计得分。 0058 (2) 搔抓反应计数 0059 抗原攻击后连续观察 20min， 记录搔抓次数， 眼部搔抓反应以豚鼠前肢移向眼部超 过 2 次为一次进行定义。 0060 试验结果 ： 0061 2.1 眼部症状观察评分 0062 试验结果 ( 表 2) 表明 ： 模型组症状评分明显高于溶媒对照组 (p 0.001)， 各用 药组的症状评分均低于模型组 (p 0.05 或 p 0.01 或 0.001)。式 I 化合物系列滴眼液 剂量 2- 剂量 6 均优于普拉洛芬滴眼液组 (p 0.05 或 p 0.01 或 0.001)。 0063 2.2 搔抓反应计数 0064 试验结果。
22、 ( 表 2) 表明 ： 模型组豚鼠搔抓反应次数明显高于溶媒对照组 (p 0.001)， 各用药组豚鼠搔抓反应次数均低于模型组 (p 0.05)， 式 I 化合物系列滴眼液 剂量 2- 剂量 6 均优于普拉洛芬滴眼液组 (p 0.05 或 p 0.01 或 0.001)。 0065 表 2 式 I 化合物系列滴眼液对豚鼠结膜炎症状评分及搔抓反应的影响 0066 说 明 书 CN 103360354 A 8 7/12 页 9 0067 与模型组比较 ： *p 0.05， *p 0.01， *p 0.001 0068 与普拉洛芬滴眼液组比较 ： #p 0.05， #p 0.01， #p 0.001。
23、 0069 试验结论 ： 式 I 化合物系列不同浓度滴眼液对豚鼠结膜炎症状具有良好的改善作 用， 并且优于普拉洛芬滴眼液。 0070 实施例 5、 式 I 化合物滴眼液溶血性试验 0071 取式I化合物采用生理盐水稀释为10mg/ml的溶液。 取大耳白兔1只， 耳缘静脉取 血 10ml， 用竹签搅拌去除纤维蛋白， 然后将血移入刻度离心管内， 加生理盐水注射液 10ml， 混匀后2000rpm离心5分钟， 去除上清液， 加生理盐水注射液10ml混匀后2000rpm再离心5 分钟， 反复 4 次， 将所得红细胞按体积用生理盐水稀释成 2混悬液备用。再取试管 12 支， 按表4加入各种溶液， 其中第。
24、6、 7管分别为溶血的阳性对照管和生理盐水注射液对照管。 将 各管摇匀， 37水浴内温育 3 小时， 按表 5 标准判断各管在 0.5-3 小时内是否出现溶血或凝 集。 0072 表 4 体外溶血试验加样表 说 明 书 CN 103360354 A 9 8/12 页 10 0073 0074 表 5 体外溶血结果判定 0075 0076 试验结果表明 ： 在 0.2mg/ml 的浓度时， 在体外对家兔红细胞无溶血反应。 0077 实施例 6 ： 式 I 化合物滴眼液血管刺激性试验 0078 取式I化合物滴眼液(制成94mg/4ml/支)用生理盐水稀释为1.88mg/ml的溶液。 取大耳白兔 9。
25、 只， 体重 2.0-2.4kg， 均分成 3 组， 每组 3 只。给药组采用一次性灭菌输液装 置将药液经左侧耳缘静脉以 5ml/kg( 给药剂量为 9.4mg/kg) 滴注， 滴速为 2-3ml/min， 对照 组经左侧耳缘静脉以 5ml/kg 滴注， 滴速为 2-3ml/min， 每日一次， 连续 3 天。给药期间每日 观察血管注射部位及整个外耳壳有无变化。在末次给药后 48 小时处死动物， 取给药处血管 及周围组织， 进行大体解剖及病理组织学检查， 观察有无血栓形成、 内皮损伤及其他病理变 化。 0079 试验结果表明 ： 给药组动物给药处血管及周围组织和血管均无充血、 出血、 水肿、 。
26、血栓、 坏死等病理改变， 对照组动物给药处血管及周围组织和血管也未见异常病理改变。 病 理检查结果表明对照组动物耳缘静脉血管结构正常， 无充血， 血管内皮细胞无损伤及炎性 病变， 周围组织也未见炎性病变、 水肿、 坏死等异常改变 ； 给药组动物耳缘静脉血管与对照 组相比均无异常发现。表明式 I 化合物滴眼液 (94mg/4ml) 对大耳白兔耳缘静脉血管无明 显刺激作用。 0080 实施例 7 ： 式 I 化合物滴眼液对新西兰兔眼刺激性试验研究 0081 方法 ： 说 明 书 CN 103360354 A 10 9/12 页 11 0082 (1) 试验方法 ： 0083 a)选用检疫合格并且用。
27、0.5荧光素钠及裂隙灯显微镜进行双眼检查合格(无眼 睛刺激症状、 角膜缺陷和结膜损伤 ) 的 12 只动物用于本试验专题研究。荧光素钠染色后 1 小时才能进行试验。采用同体左右侧眼自身对比法， 6 只兔左侧给予 2 滴浓度为 0.5式 I 化合物滴眼液 ( 每滴体积约为 50uL， 每次给药体积为 100uL)， 使兔眼睑被动闭合约 10 秒， 右侧给予等体积的 0.9氯化钠注射液。给药顺序为先左侧后右侧 ； 另 6 只动物左侧给予 2 滴浓度为 0.5式 II 化合物滴眼液 ( 每滴体积约为 50uL， 每次给药体积为 100uL)， 使兔眼 睑被动闭合约 10 秒， 右侧给予等体积的 0.。
28、9氯化钠注射液。给药顺序为先左侧后右侧。 0084 b) 荧光素钠检查方法 ： 将试验眼的眼睑拉低呈杯状， 滴入一滴 0.5荧光素钠溶 液到角膜表面， 约 10 秒后， 用 0.9氯化钠注射液充分冲洗， 在暗室内用手握式长波紫外照 明灯照明， 如果出现角膜损伤， 表现为亮的黄绿色荧光区域。 0085 c) 裂隙灯检查方法 ： 打开主电源开关， 将照明亮度调节适当。调节裂隙宽度调节 旋钮， 使裂隙宽度为 2-3mm。用双手向两边掰动显微镜棱镜盒， 调节瞳距至双眼同时通过目 镜观察到瞄靶上的图像， 即获得立体图像。把动物固定在颌托架前， 调节颌托高度调节手 柄， 使动物的眼角大致在瞄靶的中心水平线。
29、上。移动滑盘， 使光斑和显微镜大致对准目标。 通过目镜边观察边调节， 以准确对准目标， 得到清晰得观察像。 在水平面内转动滤色片选择 杆， 可在光路中分别转换四种不同的滤色片。首先使用隔热滤色片 ( 白光 )， 这样可以使动 物感觉更舒适， 检查角膜表面及虹膜并拍照， 然后使用蓝色滤色片(蓝光)进行荧光素检查 并拍照。拍照时， 用 USB 连接线使显微镜与计算机连接起来， 打开 Phmias 图像采集软件进 行图像采集。 0086 (2) 观察指标 ： 0087 动物称重 ： 检疫结束期、 给药的第8天、 第15天、 第22天、 第28天和末次给药后72 小时进行称重。 0088 动物状态观察。
30、 ： 给药期及停药期间， 每天观察 1 次每例动物的状态。 0089 动物眼部观察 ： 0090 a) 观察兔眼的局部反应情况 ： 每天每次给药前， 第 8 天、 第 15 天、 第 22 天末次给 药后约 1 小时及第 28 天末次给药后 1、 2、 4、 24、 48 及 72 小时观察动物双眼的局部反应情况 和对眼部反应进行评分， 评分标准详见表 2。按表 2 的要求， 将每一个观察时间点每一动物 的眼角膜、 虹膜和结膜的刺激反应分值相加得总积分， 将一组的积分总和除以动物数， 即得 最后均值。除了观察所列出的结膜、 角膜和虹膜损伤外， 其他所观察到的损伤也应记录。 0091 表 2 眼。
31、刺激反应评分 说 明 书 CN 103360354 A 11 10/12 页 12 0092 0093 0094 b) 荧光素染色检查 ： 每天第一次给药前、 第 8 天、 第 15 天、 第 22 天末次给药后约 1 小时及第 28 天末次给药后 1、 2、 4、 24、 48 及 72 小时均对兔双眼进行荧光素染色检查。 0095 c) 裂隙灯检查 ： 检疫结束期、 给药的第 8 天、 第 15 天、 第 22 天和末次给药后 72 小 说 明 书 CN 103360354 A 12 11/12 页 13 时均对兔双眼进行裂隙灯检查。 0096 (3) 动物处理方法 ： 试验结束后， 动物。
32、移交至动物管理组用于试验技能培训。 0097 (4) 结果判定 ： 按表 3 判断式 I 化合物滴眼液的眼刺激程度， 对所有肉眼观察结果 进行综合评价。 0098 表 3 眼刺激性评价标准 0099 0100 结果 0101 (1) 动物一般状况观察 ： 0102 式 I 化合物滴眼液组新西兰兔试验期间各例动物外观特征、 行为活动、 呼吸及粪 便性状等均未见明显异常。 0103 式 II 化合物滴眼液组新西兰兔每天给药后动物均出现躁动， 抓眼等反应。(2) 肉 眼观察 ： 0104 眼刺激反应评分结果 ： 0105 式 I 化合物滴眼液组各例动物左右眼分别给予式 I 化合物滴眼液和 0.9氯化。
33、钠 注射液后， 在各个观察时间点内分别观察眼角膜、 虹膜和结膜刺激反应情况， 结果表明各例 动物左右眼在各个观察时间点内角膜、 虹膜的刺激性反应评分值均为 0， 但部分动物左右眼 出现结膜血管轻微充血现象， 评分值较小， 均为 1 分， 左眼评分均值在 0-1.00 范围， 右眼评 分均值在 0-0.83 范围， 提示左右眼均未见刺激性反应。 0106 式 II 化合物滴眼液组各例动物左右眼分别给予式 II 化合物滴眼液和 0.9氯化 钠注射液后， 在各个观察时间点内分别观察眼角膜、 虹膜和结膜刺激反应情况， 结果表明 ： 右眼 ( 对照眼 ) 在各个观察时间点内角膜、 虹膜的刺激性反应评分值。
34、均为 0， 但部分动物右 眼出现结膜血管轻微充血现象， 评分值较小， 均为1分， 提示右眼未见刺激性反应 ； 左眼(式 II化合物滴眼液)在各个观察时间点内角膜评分均大于2分， 虹膜评分均大于1分， 结膜充 血反应大于 2 分， 结膜水肿反应大于 2 分， 结膜分泌物评分大于 2 分， 随着给药时间延长， 给 药 15 天后总评分平均分能够大于 13 分。提示式 II 化合物滴眼液给药眼有极强的刺激性 反应。 0107 荧光素钠眼部检查结果 ： 0108 观察期间， 式 I 化合物滴眼液组各例动物左右眼角膜区域仅个别动物个别点出现 不同程度的浅绿色或亮绿色荧光区域或荧光点现象。 0109 式 。
35、II 化合物滴眼液组各例动物左眼 ( 给药眼 ) 角膜区域全部出现荧光区域， 提示 说 明 书 CN 103360354 A 13 12/12 页 14 角膜明显受损。 0110 裂隙灯检查 ： 0111 给药前、 给药第 8、 15、 22 天及第 28 天末次给药后 72 小时均对兔双眼裂隙灯检查 及拍照。式 I 化合物滴眼液组各例动物白光检查结果为 ： 各检查时间点内， 双眼角膜， 虹膜 及结膜均未见明显异常变化， 蓝光检查结果 ： 个别动物出现不同程度的浅绿色或亮绿色荧 光区域或荧光点现象。 0112 式 II 化合物滴眼液组各例动物白光检查结果为 ： 各检查时间点内， 双眼角膜， 虹。
36、 膜及结膜均可见明显损伤， 蓝光检查结果 ： 全部动物左眼(给药眼)均出现明显的亮绿色荧 光区域或荧光点现象， 提示药物对眼睛有明显的刺激性。 0113 结论 0114 1、 在本试验条件下， 式 I 化合物滴眼液 ( 给药浓度 ： 0.5 ) 连续 28 天多次滴眼， 对兔眼未见引起刺激性反应。 0115 2、 在本试验条件下， 式 II 化合物滴眼液 ( 给药浓度 ： 0.5 ) 连续 28 天多次滴眼， 对兔眼可引起强度的刺激性反应。 0116 实施例 8 ： 式 I 化合物溶液尾静脉注射急性毒性试验研究 0117 NIH小鼠40只， 19-21g， 雌雄各半， 随机均衡分为两组， 给药组对NIH小鼠尾静脉注 射一次性给予最大浓度的式 I 化合物溶液 (94mg/4ml)， 给药容积 ： 0.2ml/10g 体重， 给药剂 量为 ： 600mg/kg， 对照组给予等量的空白辅料， 观察记录给药后小鼠急性毒性反应及累积死 亡数。 试验结果表明 ： 给药后14天内， 给药组及辅料对照组动物均未见死亡例， 体重增长良 好， 观察结束进行尸体解剖， 肉眼未见异常变化， 研究结果提示式 I 化合物溶液最大耐受量 应该大于 600mg/kg。 说 明 书 CN 103360354 A 14 。