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1、(10)申请公布号 CN 102965358 A (43)申请公布日 2013.03.13 CN 102965358 A *CN102965358A* (21)申请号 201210491225.2 (22)申请日 2012.11.28 C12N 9/26(2006.01) (71)申请人 广西诺方生物技术有限公司 地址 546500 广西壮族自治区合山市经济转 型工业园 7# 楼 (72)发明人 黄熙 杨红梅 (74)专利代理机构 北京远大卓悦知识产权代理 事务所 ( 普通合伙 ) 11369 代理人 李韵 (54) 发明名称 一种从黄豆中提取 - 淀粉酶的方法 (57) 摘要 本发明公开了一。
2、种从黄豆中提取 - 淀粉酶 的方法， 该方法包括以下步骤 ： 原料预处理、 原料 组织破碎、 酶液提取、 渣浆分离、 沉淀分离、 助滤澄 清、 超滤浓缩、 调配、 无菌分装等工艺步骤获得酶 活力高于50万单位的液态 - 淀粉酶产品。 本发 明生产的 - 淀粉酶活力高、 纯度高， 稳定性好， 产品特性广泛适用于麦芽糖类产品的工业生产。 工艺过程中分离出的渣料富含蛋白质， 是优良的 饲料原料。 本发明突出了对原料的充分利用， 产品 效益显著， 市场前景良好。该生产方法可以获得 较高含量的粗酶液并实现了酶和蛋白质的较好分 离， 提高了产品的酶活力。 该方法特别适于处理豆 类， 同时又方便了酶的进一步。
3、纯化。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 6 页 1/1 页 2 1. 一种从黄豆中提取 - 淀粉酶的方法， 其特征在于， 该方法包括以下步骤 ： （1） 原料预处理 ： 将黄豆清洗后浸泡 6 8 小时， 浸泡用水的水温为 30 37， 排干水 后放置在通风潮湿的环境中， 湿度保持 70 85%， 直至出芽为止， 即得豆芽 ； （2） 原料组织破碎 ： 将豆芽放入磨浆设备中， 边加水边磨碎， 豆芽和水的比例为 1:1， 得 180 220 目的浆液 ； （3） 酶液提取 ： 将得到。
4、的浆液按 1:30 加入水 , 再加入提取剂， 温度保持在 50 60， 将其搅拌使物料充分混合均匀 ； （4） 渣浆分离 ： 将得到的混合物料通过 200 300 目的过滤机加压过滤 , 使豆渣和浆 液分离 ； （5） 沉淀分离 ： 将过滤得到的浆液加入 0.15% 氯化钙， 搅拌 15 25 分钟后， 将其静置 6 8 小时， 待浆液沉淀分层后， 收集上清液 ； （6） 助滤澄清 ： 将得到的上清液加入助滤剂， 通过过滤机过滤得澄清液， 过滤得到的澄 清液的温度为 40 45 ； （7） 超滤浓缩 ： 将澄清液通过热交换器使温度下调到 40以下， 再通过超滤膜进行超 滤浓缩， 得到酶液 ；。
5、 （8） 调配 ： 将得到的酶液加入稳定剂并搅拌均匀 ； （9） 无菌分装 ： 将得到的酶液通过孔径为 0.15 0.25 的微管过滤机进行过滤除菌 后 , 进行无菌罐装， 即得到 - 淀粉酶成品。 2. 根据权利要求 1 所述的从黄豆中提取 - 淀粉酶的方法， 其特征在于， 步骤 （3） 中所 述加入的提取剂包括 ： 0.1% 硫酸氢二钠 ,0.1% 硫酸二氢钠和 0.2% 焦亚硫酸钠。 3. 根据权利要求 1 所述的从黄豆中提取 - 淀粉酶的方法， 其特征在于， 步骤 （6） 中所 述的助滤剂包括 ： 硅土和珍珠岩。 4. 根据权利要求 1 所述的从黄豆中提取 - 淀粉酶的方法， 其特征在。
6、于， 步骤 （7） 中所 述对澄清液进行超滤浓缩的超滤膜截流分子量为 6000 10000K， 所述酶液的酶活力在 50 万单位以上。 5. 根据权利要求 1 所述的从黄豆中提取 - 淀粉酶的方法， 其特征在于， 步骤 （8） 中所 述的稳定剂包括 ： 5 10% 丙三醇， 0.5% 山梨酸钾和 1% 海藻糖。 权 利 要 求 书 CN 102965358 A 2 1/6 页 3 一种从黄豆中提取 - 淀粉酶的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种提取淀粉酶的方法， 尤其涉及一种从黄豆中提取 - 淀粉酶的方 法。 背景技术 0002 - 淀粉酶广泛存在于大麦、 小麦、 大豆、 甘薯等高的呢过。
7、植物和一些水解生物中。 大麦和小麦种含量最高， 甘薯含量仅为大麦的1/2左右， 由于微生物发酵法生产的-淀粉 酶活力低， 成本高， 而且， 从细菌大规模生产 是很困难的。为此工业上使用的 淀粉酶 都为植物来源。 0003 -淀粉酶是一种淀粉降解酶， 能够水解-1,4键。 它存在于细菌和植物中， 能够 从这种淀粉链的非还原端将淀粉分解为麦芽糖。如在谷粒中含有丰富的 - 淀粉酶， 在需 要时它将谷物中的营养储备， 即淀粉转化为糖。谷类中的淀粉主要以直链淀粉和支链淀粉 的形式储存。- 淀粉酶将所有的直链淀粉转化为麦芽糖而将大约 60% 的支链淀粉转化为 麦芽糖而将剩下的转化为糊精。 0004 -淀粉。
8、酶是商业上重要的酶， 如在淀粉工业中它可以用来生产麦芽糖。 含有麦芽 糖的产品可以用于如糖果和食品工业。人们已经从细菌和植物中分离出 - 淀粉酶。如已 经从芽孢杆菌属 （Bacillus） 细菌 （US 4 970 158 和 JP60 126 080） 和耐热梭状芽孢杆菌属 （Clostridium） (US 4 647 538) 中得到 - 淀粉酶。如从细菌中得到 - 淀粉酶除了将淀 粉酶转化为麦芽糖之外， ， 还产生相当大的麦芽三糖， 而来自植物的 - 淀粉酶产生相对较 多的麦芽糖， 因此更适于用在目的得到尽可能甜的和 / 或可发酵的产品的方法里。而且， 从 细菌大规模生产 - 淀粉酶是。
9、很困难的。工业上的 - 淀粉酶是植物来源的， 通常谷物， 特 别是大麦或小麦， 以及大豆都可以用作酶源。 发明内容 0005 本发明提供了一种从黄豆中提取 - 淀粉酶的方法， 该方法可以获得较高含量的 粗酶液并实现了酶和蛋白质的较好分离， 提高了产品的酶活力。 该方法特别适于处理豆类， 同时又方便了酶的进一步纯化。 0006 本发明通过以下技术方案予以实现 ： 0007 一种从黄豆中提取 - 淀粉酶的方法， 该方法包括以下步骤 ： 0008 （1） 原料预处理 ： 将黄豆清洗后浸泡 6 8 小时， 浸泡用水的水温为 30 37， 排 干水后放置在通风潮湿的环境中， 湿度保持 70 85%， 直。
10、至出芽为止， 即得豆芽 ； 0009 （2） 原料组织破碎 ： 将豆芽放入磨浆设备中， 边加水边磨碎， 豆芽和水的比例为 1:1， 得 180 220 目的浆液 ； 0010 （3） 酶液提取 ： 将得到的浆液按 1:30 加入水 , 再加入提取剂， 温度保持在 50 60， 将其搅拌使物料充分混合均匀 ； 0011 （4） 渣浆分离 ： 将得到的混合物料通过 200 300 目的过滤机加压过滤 , 使豆渣 说 明 书 CN 102965358 A 3 2/6 页 4 和浆液分离 ； 0012 （5） 沉淀分离 ： 将过滤得到的浆液加入 0.15% 氯化钙， 搅拌 15 25 分钟后， 将其 。
11、静置 6 8 小时， 待浆液沉淀分层后， 收集上清液 ； 0013 （6） 助滤澄清 ： 将得到的上清液加入助滤剂， 通过过滤机过滤得澄清液， 过滤得到 的澄清液的温度为 40 45 ； 0014 （7） 超滤浓缩 ： 将澄清液通过热交换器使温度下调到 40以下， 再通过超滤膜进 行超滤浓缩， 得到酶液 ； 0015 （8） 调配 ： 将得到的酶液加入稳定剂并搅拌均匀 ； 0016 （9） 无菌分装 ： 将得到的酶液通过孔径为 0.15 0.25 的微管过滤机进行过滤 除菌后 , 进行无菌罐装， 即得到 - 淀粉酶成品。 0017 优选的是， 步骤 （3） 中所述加入的提取剂包括 ： 0.1%。
12、硫酸氢二钠,0.1%硫酸二氢钠 和 0.2% 焦亚硫酸钠。 0018 优选的是， 步骤 （6） 中所述的助滤剂包括 ： 硅土和珍珠岩。 0019 优选的是， 步骤 （7） 中所述对澄清液进行超滤浓缩的超滤膜截流分子量为 6000 10000K， 所述酶液的酶活力在 50 万单位以上。 0020 优选的是， 步骤 （8） 中所述的稳定剂包括 ： 5 10% 丙三醇， 0.5% 山梨酸钾和 1% 海 藻糖。 0021 本发明具有以下有益效果 ： 0022 本发明生产的 - 淀粉酶活力高、 纯度高， 稳定性好， 产品特性广泛适用于麦芽糖 类产品的工业生产。工艺过程中分离出的渣料富含蛋白质， 是优良的。
13、饲料原料。本发明突 出了对原料的充分利用， 产品效益显著， 市场前景良好。 该生产方法可以获得较高含量的粗 酶液并实现了酶和蛋白质的较好分离， 提高了产品的酶活力。 该方法特别适于处理豆类， 同 时又方便了酶的进一步纯化。 具体实施方式 0023 下面结合具实施例对本发明作进一步详细的描述， 但本发明的实施方式并不局限 于实施例表示的范围。 0024 实施例 1 0025 一种从黄豆中提取 - 淀粉酶的方法， 该方法包括以下步骤 ： 0026 （1） 原料预处理 ： 将黄豆清洗后浸泡 6 小时， 浸泡用水的水温为 30， 排干水后放 置在通风潮湿的环境中， 湿度保持 70%， 直至出芽为止， 。
14、即得豆芽 ； 0027 （2） 原料组织破碎 ： 将豆芽放入磨浆设备中， 边加水边磨碎， 豆芽和水的比例为 1:1， 得 180 目的浆液 ； 0028 （3） 酶液提取 ： 将得到的浆液按 1:30 加入水 , 再加入提取剂， 温度保持在 50， 将 其搅拌使物料充分混合均匀 ； 0029 （4） 渣浆分离 ： 将得到的混合物料通过 200 目的过滤机加压过滤 , 使豆渣和浆液 分离 ； 0030 （5） 沉淀分离 ： 将过滤得到的浆液加入 0.15% 氯化钙， 搅拌 15 分钟后， 将其静置 6 小时， 待浆液沉淀分层后， 收集上清液 ； 说 明 书 CN 102965358 A 4 3/。
15、6 页 5 0031 （6） 助滤澄清 ： 将得到的上清液加入助滤剂， 通过过滤机过滤得澄清液， 过滤得到 的澄清液的温度为 40 ； 0032 （7） 超滤浓缩 ： 将澄清液通过热交换器使温度下调到 20， 再通过超滤膜进行超 滤浓缩， 得到酶液 ； 0033 （8） 调配 ： 将得到的酶液加入稳定剂并搅拌均匀 ； 0034 （9） 无菌分装 ： 将得到的酶液通过孔径为 0.15 的微管过滤机进行过滤除菌后 , 进行无菌罐装， 即得到 - 淀粉酶成品。 0035 上述步骤 （3） 中所述加入的提取剂包括 ： 0.1% 硫酸氢二钠 ,0.1% 硫酸二氢钠和 0.2% 焦亚硫酸钠。 0036 上。
16、述步骤 （6） 中所述的助滤剂包括 ： 硅土和珍珠岩。 0037 上述步骤 （7） 中所述对澄清液进行超滤浓缩的超滤膜截流分子量为 6000K， 所述 酶液的酶活力在 50 万单位以上。 0038 上述步骤 （8） 中所述的稳定剂包括 ： 5% 丙三醇， 0.5% 山梨酸钾和 1% 海藻糖。 0039 实施例 2 0040 一种从黄豆中提取 - 淀粉酶的方法， 该方法包括以下步骤 ： 0041 （1） 原料预处理 ： 将黄豆清洗后浸泡 7 小时， 浸泡用水的水温为 34， 排干水后放 置在通风潮湿的环境中， 湿度保持 80%， 直至出芽为止， 即得豆芽 ； 0042 （2） 原料组织破碎 ： 。
17、将豆芽放入磨浆设备中， 边加水边磨碎， 豆芽和水的比例为 1:1， 得 200 目的浆液 ； 0043 （3） 酶液提取 ： 将得到的浆液按 1:30 加入水 , 再加入提取剂， 温度保持在 55， 将 其搅拌使物料充分混合均匀 ； 0044 （4） 渣浆分离 ： 将得到的混合物料通过 250 目的过滤机加压过滤 , 使豆渣和浆液 分离 ； 0045 （5） 沉淀分离 ： 将过滤得到的浆液加入 0.15% 氯化钙， 搅拌 20 分钟后， 将其静置 7 小时， 待浆液沉淀分层后， 收集上清液 ； 0046 （6） 助滤澄清 ： 将得到的上清液加入助滤剂， 通过过滤机过滤得澄清液， 过滤得到 的澄。
18、清液的温度为 42 ； 0047 （7） 超滤浓缩 ： 将澄清液通过热交换器使温度下调到 25， 再通过超滤膜进行超 滤浓缩， 得到酶液 ； 0048 （8） 调配 ： 将得到的酶液加入稳定剂并搅拌均匀 ； 0049 （9） 无菌分装 ： 将得到的酶液通过孔径为 0.20 的微管过滤机进行过滤除菌后 , 进行无菌罐装， 即得到 - 淀粉酶成品。 0050 上述步骤 （3） 中所述加入的提取剂包括 ： 0.1% 硫酸氢二钠 ,0.1% 硫酸二氢钠和 0.2% 焦亚硫酸钠。 0051 上述步骤 （6） 中所述的助滤剂包括 ： 硅土和珍珠岩。 0052 上述步骤 （7） 中所述对澄清液进行超滤浓缩的。
19、超滤膜截流分子量为 8000K， 所述 酶液的酶活力在 50 万单位以上。 0053 上述步骤 （8） 中所述的稳定剂包括 ： 7% 丙三醇， 0.5% 山梨酸钾和 1% 海藻糖。 0054 实施例 3 说 明 书 CN 102965358 A 5 4/6 页 6 0055 一种从黄豆中提取 - 淀粉酶的方法， 该方法包括以下步骤 ： 0056 （1） 原料预处理 ： 将黄豆清洗后浸泡 8 小时， 浸泡用水的水温为 37， 排干水后放 置在通风潮湿的环境中， 湿度保持 85%， 直至出芽为止， 即得豆芽 ； 0057 （2） 原料组织破碎 ： 将豆芽放入磨浆设备中， 边加水边磨碎， 豆芽和水的。
20、比例为 1:1， 得 220 目的浆液 ； 0058 （3） 酶液提取 ： 将得到的浆液按 1:30 加入水 , 再加入提取剂， 温度保持在 60， 将 其搅拌使物料充分混合均匀 ； 0059 （4） 渣浆分离 ： 将得到的混合物料通过 300 目的过滤机加压过滤 , 使豆渣和浆液 分离 ； 0060 （5） 沉淀分离 ： 将过滤得到的浆液加入 0.15% 氯化钙， 搅拌 25 分钟后， 将其静置 8 小时， 待浆液沉淀分层后， 收集上清液 ； 0061 （6） 助滤澄清 ： 将得到的上清液加入助滤剂， 通过过滤机过滤得澄清液， 过滤得到 的澄清液的温度为 45 ； 0062 （7） 超滤浓缩。
21、 ： 将澄清液通过热交换器使温度下调到 38， 再通过超滤膜进行超 滤浓缩， 得到酶液 ； 0063 （8） 调配 ： 将得到的酶液加入稳定剂并搅拌均匀 ； 0064 （9） 无菌分装 ： 将得到的酶液通过孔径为 0.25 的微管过滤机进行过滤除菌后 , 进行无菌罐装， 即得到 - 淀粉酶成品。 0065 上述步骤 （3） 中所述加入的提取剂包括 ： 0.1% 硫酸氢二钠 ,0.1% 硫酸二氢钠和 0.2% 焦亚硫酸钠。 0066 上述步骤 （6） 中所述的助滤剂包括 ： 硅土和珍珠岩。 0067 上述步骤 （7） 中所述对澄清液进行超滤浓缩的超滤膜截流分子量为 10000K， 所述 酶液的酶。
22、活力在 50 万单位以上。 0068 上述步骤 （8） 中所述的稳定剂包括 ： 10% 丙三醇， 0.5% 山梨酸钾和 1% 海藻糖。实 施例 4 0069 一种从黄豆中提取 - 淀粉酶的方法， 该方法包括以下步骤 ： 0070 （1） 原料预处理 ： 将黄豆清洗后浸泡 6 小时， 浸泡用水的水温为 37， 排干水后放 置在通风潮湿的环境中， 湿度保持 80%， 直至出芽为止， 即得豆芽 ； 0071 （2） 原料组织破碎 ： 将豆芽放入磨浆设备中， 边加水边磨碎， 豆芽和水的比例为 1:1， 得 220 目的浆液 ； 0072 （3） 酶液提取 ： 将得到的浆液按 1:30 加入水 , 再加。
23、入提取剂， 温度保持在 58， 将 其搅拌使物料充分混合均匀 ； 0073 （4） 渣浆分离 ： 将得到的混合物料通过 280 目的过滤机加压过滤 , 使豆渣和浆液 分离 ； 0074 （5） 沉淀分离 ： 将过滤得到的浆液加入 0.15% 氯化钙， 搅拌 20 分钟后， 将其静置 6 小时， 待浆液沉淀分层后， 收集上清液 ； 0075 （6） 助滤澄清 ： 将得到的上清液加入助滤剂， 通过过滤机过滤得澄清液， 过滤得到 的澄清液的温度为 40 ； 0076 （7） 超滤浓缩 ： 将澄清液通过热交换器使温度下调到 35， 再通过超滤膜进行超 说 明 书 CN 102965358 A 6 5/。
24、6 页 7 滤浓缩， 得到酶液 ； 0077 （8） 调配 ： 将得到的酶液加入稳定剂并搅拌均匀 ； 0078 （9） 无菌分装 ： 将得到的酶液通过孔径为 0.18 的微管过滤机进行过滤除菌后 , 进行无菌罐装， 即得到 - 淀粉酶成品。 0079 上述步骤 （3） 中所述加入的提取剂包括 ： 0.1% 硫酸氢二钠 ,0.1% 硫酸二氢钠和 0.2% 焦亚硫酸钠。 0080 上述步骤 （6） 中所述的助滤剂包括 ： 硅土和珍珠岩。 0081 上述步骤 （7） 中所述对澄清液进行超滤浓缩的超滤膜截流分子量为 6500K， 所述 酶液的酶活力在 50 万单位以上。 0082 上述步骤 （8） 中。
25、所述的稳定剂包括 ： 6% 丙三醇， 0.5% 山梨酸钾和 1% 海藻糖。实施 例 5 0083 一种从黄豆中提取 - 淀粉酶的方法， 该方法包括以下步骤 ： 0084 （1） 原料预处理 ： 将黄豆清洗后浸泡 6 小时， 浸泡用水的水温为 35， 排干水后放 置在通风潮湿的环境中， 湿度保持 78%， 直至出芽为止， 即得豆芽 ； 0085 （2） 原料组织破碎 ： 将豆芽放入磨浆设备中， 边加水边磨碎， 豆芽和水的比例为 1:1， 得 200 目的浆液 ； 0086 （3） 酶液提取 ： 将得到的浆液按 1:30 加入水 , 再加入提取剂， 温度保持在 56， 将 其搅拌使物料充分混合均匀。
26、 ； 0087 （4） 渣浆分离 ： 将得到的混合物料通过 220 目的过滤机加压过滤 , 使豆渣和浆液 分离 ； 0088 （5） 沉淀分离 ： 将过滤得到的浆液加入 0.15% 氯化钙， 搅拌 18 分钟后， 将其静置 7.5 小时， 待浆液沉淀分层后， 收集上清液 ； 0089 （6） 助滤澄清 ： 将得到的上清液加入助滤剂， 通过过滤机过滤得澄清液， 过滤得到 的澄清液的温度为 45 ； 0090 （7） 超滤浓缩 ： 将澄清液通过热交换器使温度下调到 40， 再通过超滤膜进行超 滤浓缩， 得到酶液 ； 0091 （8） 调配 ： 将得到的酶液加入稳定剂并搅拌均匀 ； 0092 （9）。
27、 无菌分装 ： 将得到的酶液通过孔径为 0.22 的微管过滤机进行过滤除菌后 , 进行无菌罐装， 即得到 - 淀粉酶成品。 0093 上述步骤 （3） 中所述加入的提取剂包括 ： 0.1% 硫酸氢二钠 ,0.1% 硫酸二氢钠和 0.2% 焦亚硫酸钠。 0094 上述步骤 （6） 中所述的助滤剂包括 ： 硅土和珍珠岩。 0095 上述步骤 （7） 中所述对澄清液进行超滤浓缩的超滤膜截流分子量为 8000K， 所述 酶液的酶活力在 50 万单位以上。 0096 上述步骤 （8） 中所述的稳定剂包括 ： 7% 丙三醇， 0.5% 山梨酸钾和 1% 海藻糖。实施 例 6 0097 一种从黄豆中提取 -。
28、 淀粉酶的方法， 该方法包括以下步骤 ： 0098 （1） 原料预处理 ： 将黄豆清洗后浸泡 6.5 小时， 浸泡用水的水温为 35， 排干水后 放置在通风潮湿的环境中， 湿度保持 80%， 直至出芽为止， 即得豆芽 ； 说 明 书 CN 102965358 A 7 6/6 页 8 0099 （2） 原料组织破碎 ： 将豆芽放入磨浆设备中， 边加水边磨碎， 豆芽和水的比例为 1:1， 得 185 目的浆液 ； 0100 （3） 酶液提取 ： 将得到的浆液按 1:30 加入水 , 再加入提取剂， 温度保持在 50， 将 其搅拌使物料充分混合均匀 ； 0101 （4） 渣浆分离 ： 将得到的混合物。
29、料通过 270 目的过滤机加压过滤 , 使豆渣和浆液 分离 ； 0102 （5） 沉淀分离 ： 将过滤得到的浆液加入 0.15% 氯化钙， 搅拌 23 分钟后， 将其静置 8 小时， 待浆液沉淀分层后， 收集上清液 ； 0103 （6） 助滤澄清 ： 将得到的上清液加入助滤剂， 通过过滤机过滤得澄清液， 过滤得到 的澄清液的温度为 40 ； 0104 （7） 超滤浓缩 ： 将澄清液通过热交换器使温度下调到 32， 再通过超滤膜进行超 滤浓缩， 得到酶液 ； 0105 （8） 调配 ： 将得到的酶液加入稳定剂并搅拌均匀 ； 0106 （9） 无菌分装 ： 将得到的酶液通过孔径为 0.25 的微管。
30、过滤机进行过滤除菌后 , 进行无菌罐装， 即得到 - 淀粉酶成品。 0107 上述步骤 （3） 中所述加入的提取剂包括 ： 0.1% 硫酸氢二钠 ,0.1% 硫酸二氢钠和 0.2% 焦亚硫酸钠。 0108 上述步骤 （6） 中所述的助滤剂包括 ： 硅土和珍珠岩。 0109 上述步骤 （7） 中所述对澄清液进行超滤浓缩的超滤膜截流分子量为 9000K， 所述 酶液的酶活力在 50 万单位以上。 0110 上述步骤 （8） 中所述的稳定剂包括 ： 10% 丙三醇， 0.5% 山梨酸钾和 1% 海藻糖。 0111 尽管本发明的实施方案已公开如上， 但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列 运用， 它完全可以被适用于各种适合本发明的领域， 对于熟悉本领域的人员而言， 可容易地 实现另外的修改， 因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下， 本发明并不限 于特定的细节和这里所描述的例子。 说 明 书 CN 102965358 A 8 。