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1、(10)申请公布号 CN 103071144 A (43)申请公布日 2013.05.01 CN 103071144 A *CN103071144A* (21)申请号 201310045683.8 (22)申请日 2013.02.05 A61K 38/01(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 13/08(2006.01) C07K 1/12(2006.01) (71)申请人 浙江国际海运职业技术学院 地址 316021 浙江省舟山市临城新区海天大 道 268 号 (72)发明人 李丽 朱亚珠 黄芳芳 丁国芳 (74)专利代理机构 金华科源专利事务所有限公 司 3。
2、3103 代理人 胡杰平 (54) 发明名称 一种能抑制前列腺癌的海洋功能食品及其制 备方法 (57) 摘要 本发明属于海洋功能食品类， 具体是一种能 抑制前列腺癌的海洋功能食品， 它是由鱿鱼墨 酸法提取制成的鱿鱼墨多肽活性物， 具体方法 是将预处理过的鱿鱼墨加入盐酸， 盐酸浓度为 0.02-0.03mol/L、 酸提料液比 ( 双蒸水 ： 原料鱿 鱼墨体积比 )1 ： 1-2、 酸解时间 2-3 小时、 酸解温 度 35 -40浸提， 并最后对浸提液离心得到的 清液即为粗制的鱿鱼墨多肽活性物。本发明采用 丰富的海洋生物鱿鱼墨， 用酸法提取、 浓缩等方法 提纯鱿鱼墨多肽， 并通过正交试验得到最。
3、佳酸解 工艺， 得到最多的鱿鱼墨多肽活性物。本发明通 过 CCK-8 法检测表明鱿鱼墨多肽对前列腺癌的 DU-145、 PC-3 细胞有显著的增殖抑制作用， 本发 明的鱿鱼墨多肽能抑制 DU-145、 PC-3 细胞增殖， 并诱导其凋亡的发生， 从而抑制前列腺癌。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书2页 (10)申请公布号 CN 103071144 A CN 103071144 A *CN103071144A* 1/1 页 2 1. 一种能抑制前列腺癌的海洋功能食品， 其特征为 ： 它是。
4、由鱿鱼墨酸法提取制成的鱿 鱼墨多肽活性物。 2. 如权利要求 1 所述的能抑制前列腺癌的海洋功能食品的制备方法， 其特征为 ： 将预 处理过的鱿鱼墨加入盐酸， 盐酸浓度为 0.02-0.03mol/L、 酸提料液比 1 ： 1-2、 酸解时间 2-3 小时、 酸解温度 35 -40浸提， 并最后对浸提液离心得到的清液即为粗制的鱿鱼墨多肽 活性物。 3. 根据权利要求 2 所述的能抑制前列腺癌的海洋功能食品的制备方法， 其特征为 ： 酸 法提取中加入丙酮脱脂， 丙酮的加入量为原料鱿鱼墨体积 1-2 倍。 权 利 要 求 书 CN 103071144 A 2 1/2 页 3 一种能抑制前列腺癌的海。
5、洋功能食品及其制备方法 技术领域 0001 本发明属于海洋功能食品类， 具体是一种能抑制前列腺癌的海洋功能食品及其制 备方法。 背景技术 0002 在欧美国家前列腺癌(prostate cancer， PCa)的发病率处于男性恶性肿瘤的第一 位， 死亡率仅次于肺癌， 居第二位。近几年来， 我国随着人口老龄化， PCa 的发病率也有明显 上升趋势， 己成为影响老年男性健康的一大疾患， 虽然 PCa 的发病率低于欧美国家， 但死亡 率却远高于欧美国家。 对于雄激素非依赖型前列腺癌， 目前还是没有效的治疗方法， 且容易 复发， 抗雄激素治疗无效。所以对雄激素非依赖型前列腺癌缺乏有效的治疗是临床前列腺。
6、 癌治疗的最大难题， 研究者一直寻找有效治疗雄激素非依赖型前列腺癌的活性物。从理论 上讲， 肿瘤的发生是一个复杂过程， 其中细胞增殖与凋亡失衡是重要因素之一， 所以抑制肿 瘤细胞的增殖、 诱导凋亡是探索抗肿瘤药物的重要思路之一， 前列腺癌也是如此。 海洋是生 命的起源地， 海洋环境又具有高盐、 高压、 低温等迥异于陆地环境的特点， 许多海洋生物在 这种极端环境中产生了大量不同于陆地生物的活性物质， 其结构新颖， 具有抗肿瘤、 抗菌、 抗病毒、 抗衰老、 增强机体免疫力等活性物质。其中抗肿瘤活性物质最为引人瞩目， 已经成 为全世界科学家们研究的热点。 发明内容 0003 本发明的目的是针对现有技。
7、术的不足， 提供一种从海洋鱿鱼墨中提取的对 DU-145 和 PC-3 细胞有增殖抑制作用、 能诱导 DU-145 和 PC-3 细胞早期凋亡的从而能抑制前列腺癌 的海洋功能食品， 并公开其制备方法。 0004 本发明是通过以下技术方案实现的 ： 0005 本发明一种能抑制前列腺癌的海洋功能食品， 其特征为 ： 它是由鱿鱼墨酸法提取 制成的鱿鱼墨多肽活性物。 0006 本发明所述鱿鱼墨多肽活性物的制备方法是 ： 将预处理过的鱿鱼墨加入盐酸， 盐 酸浓度为0.02-0.03mol/L、 酸提料液比(双蒸水 ： 原料鱿鱼墨体积比)1 ： 1-2、 酸解时间2-3 小时、 酸解温度 35 -40浸提。
8、， 并最后对浸提液离心得到的清液即为粗制的鱿鱼墨多肽 活性物。 0007 本发明酸法提取中可加入丙酮脱脂， 丙酮的加入量为原料鱿鱼墨体积 1-2 倍。 0008 本发明采用丰富的海洋生物鱿鱼墨， 用酸法提取、 浓缩等方法提纯鱿鱼墨多肽， 并 通过正交试验得到最佳酸解工艺， 得到最多的鱿鱼墨多肽活性物。通过 CCK-8 法检测表 明鱿鱼墨多肽对前列腺癌的 DU-145、 PC-3 细胞有显著的增殖抑制作用， 且随着鱿鱼墨多 肽浓度的增加， 其抑制率逐渐升高， 存在明显的剂量依赖性。本发明的鱿鱼墨多肽能抑制 DU-145、 PC-3 细胞增殖， 并诱导其凋亡的发生， 从而抑制前列腺癌。 说 明 书。
9、 CN 103071144 A 3 2/2 页 4 具体实施方式 0009 一、 酸法提取鱿鱼墨多肽的工艺方法的选择 0010 从鱿鱼墨中酸法提取鱿鱼墨多肽的影响因素有酸提料液比、 酸的种类、 酸解温度、 酸解时间， 由于氨基氮含量越高， 酸解程度越大， 所以可以以氨基氮含量为指标， 通过酸的 选择、 反应时间、 酸浓度以及反应温度对氨基氮含量影响规律， 确定单因素的最佳取值， 再 通过正交试验对酸解条件参数进行进一步优化， 得出各因素对酸法提取鱿鱼墨多肽酸法提 取鱿鱼墨多肽最佳组合为盐酸浓度为 0.02-0.03mol/L、 酸提料液比 ( 双蒸水 ： 原料鱿鱼墨 体积比 )1 ： 1-2、。
10、 酸解时间 2-3 小时、 酸解温度 35 -40， 尤其是在 0.02mol/L 盐酸、 酸提 料液比 1 ： 1、 酸解时间 2h、 酸解温度 35 C 条件下， 酸解程度最高， 制得的鱿鱼墨多肽最佳。 0011 另外， 由于鱿鱼墨在酸解中有无脱脂对酸解度的影响显著， 鱿鱼墨被脱脂后的酸 解度明显降低， 所以可以在酸解过程中加入丙酮脱脂， 丙酮加入量为原料鱿鱼墨体积 1-2 倍。 0012 二、 通过 CCK-8 法检测所提取得鱿鱼墨多肽对 DU-145 和 PC-3 的生长抑制作用。 0013 不同浓度的鱿鱼墨多肽作用于PC-3和DU-145细胞24h， 采用CCK-8法测定其对细 胞增。
11、殖的抑制率， 结果显示鱿鱼墨多肽对 DU-145、 PC-3 细胞有显著的增殖抑制作用， 且随 着鱿鱼墨多肽浓度的增加， 其抑制率逐渐升高， 存在明显的剂量依赖性。 0014 三、 采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测和AO/EB双染法， 观察所提取 的鱿鱼墨多肽对 DU-145 和 PC-3 细胞的早期凋亡情况。 0015 鱿鱼墨多肽作用 DU-145 和 PC-3 细胞 24h 后， PC-3 和 DU-145 细胞对照组可见大 量绿色的正常细胞， 无明显凋亡细胞， 细胞边界清楚， 核形态规则。但鱿鱼墨多肽处理 24h 后， 细胞染成桔红色， 细胞膜发生皱缩， 细胞核。
12、或细胞质内可见致密浓染的黄绿色或桔红色 荧光， 可见桔红色碎片， 剂量增加， 早期凋亡细胞增多， 表现为核浓缩， 边聚、 破裂等细胞凋 亡特征， 且呈亮黄绿色荧光 ； 随着剂量的增加， 晚期凋亡细胞和死亡细胞也逐渐增多， 晚期 凋亡细胞被染成桔红色， 而死亡细胞被染成均一的桔黄色。 0016 由此说明， 本发明用酸法提取的鱿鱼墨多肽具有对 DU-145、 PC-3 细胞有显著的增 殖抑制作用， 且随着鱿鱼墨多肽浓度的增加， 其抑制率逐渐升高， 存在明显的剂量依赖性 ； 本发明之中的鱿鱼墨多肽能抑制 DU-145、 PC-3 细胞增殖， 并诱导其凋亡的发生。本发明用 酸法提取的鱿鱼墨多肽能抑制前列腺癌。 说 明 书 CN 103071144 A 4 。