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1、(10)申请公布号 CN 103160512 A (43)申请公布日 2013.06.19 CN 103160512 A *CN103160512A* (21)申请号 201110421565.3 (22)申请日 2011.12.15 C12N 15/115(2010.01) A61K 47/48(2006.01) A61K 47/26(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 国家纳米科学中心 地址 100190 北京市海淀区中关村北一条 11 号 (72)发明人 梁兴杰 马会利 柳娟 魏妥 (74)专利代理机构 北京润平知识产权代理有限 公司 11283 代。
2、理人 王浩然 周建秋 (54) 发明名称 一种核酸及药物载体和药物组合物及其制备 方法 (57) 摘要 本发明提供了一种核酸， 其特征在于， 该核酸 的结构如式 (1) 所示 ： 其中， V、 W、 X、 Y 和 Z 各自为 单链核酸片段且通过磷酸二酯键依次连接 ； Z 为 核酸适配体 ； V的碱基序列和X的碱基序列反向互 补。 本发明还提供了一种药物载体的制备方法， 该 方法包括 ： 将如上所述的核酸进行变性和退火。 本发明还提供了一种药物载体， 该药物载体为根 据如上所述的药物载体的制备方法制备得到的药 物载体。本发明还提供了一种药物组合物的制备 方法， 该方法包括 ： 在如上所述的药物载。
3、体上负 载药物化合物。本发明还提供了根据如上所述的 药物组合物的制备方法制备得到药物组合物。本 发明提供的核酸既具有靶向性又能够负载药物。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 7 页 序列表 3 页 附图 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书7页 序列表3页 附图5页 (10)申请公布号 CN 103160512 A CN 103160512 A *CN103160512A* 1/1 页 2 1. 一种核酸， 其特征在于， 该核酸的结构如式 (1) 所示 ： VWXYZ 式 (1) 其中， V、 W、 X、 Y 和 Z 各自。
4、为单链核酸片段且通过磷酸二酯键依次连接 ； Z 为核酸适配 体 ； V 的碱基序列和 X 的碱基序列反向互补， V 的核苷酸长度为 4-20nt， X 的核苷酸长度为 4-20nt ； W 的核苷酸长度为 4-10nt 且不能与 V、 X、 Y 或 Z 互补 ； Y 的核苷酸长度为 4-15nt 且 不能与 V、 W、 X 或 Z 互补。 2. 根据权利要求 1 所述的核酸， 其中， V 中的碱基各自独立地为鸟嘌呤或胞嘧啶， X 中 的碱基各自独立地为鸟嘌呤或胞嘧啶。 3. 根据权利要求 1 或 2 所述的核酸， 其中， Z 的序列为 SEQ ID NO ： 1、 SEQ ID NO ： 2 。
5、或 SEQ ID NO ： 3。 4. 根据权利要求 1-3 中任意一项所述的核酸， 其中， W 的序列为 SEQ ID NO ： 7、 SEQ ID NO ： 8 或 SEQ ID NO ： 9 ； Y 的序列为 SEQ ID NO ： 10、 SEQ ID NO ： 11 或 SEQ ID NO ： 12。 5. 根据权利要求 1 所述的核酸， 其中， 该核酸的序列为 SEQ ID NO ： 4、 SEQ ID NO ： 5 或 SEQ ID NO ： 6。 6. 一种药物载体的制备方法， 其特征在于， 该方法包括 ： 将权利要求 1-5 中任意一项所 述的核酸进行变性和退火。 7. 根据。
6、权利要求 6 所述的药物载体的制备方法， 其中， 所述变性和所述退火均在缓 冲液中进行， 所述缓冲液中， 钾离子的含量为 150-250mM， 镁离子的含量为 3-5mM， Tris 的 含量为 26-30mM， pH 值为 7.2-7.8 ； 相对于每重量份的所述核酸， 所述缓冲液的用量为 100-100000 重量份。 8. 根据权利要求 6 或 7 所述的药物载体的制备方法， 其中， 所述变性的温度为 95-105， 变性的时间为 4-6 分钟 ； 所述退火的降温速度为 10-30 / 分钟， 所述退火的结 束温度为 15-25。 9. 一种药物载体， 该药物载体为根据权利要求 6-8 。
7、中任意一项所述的药物载体的制备 方法制备得到的药物载体。 10. 一种药物组合物的制备方法， 该方法包括 ： 在权利要求 9 所述的药物载体上负载药 物化合物， 所述药物化合物为能够与双螺旋 DNA 结合的药物化合物。 11. 根据权利要求 10 所述的药物组合物的制备方法， 其中， 负载的条件包括 ： 温度为 0-4， 时间为 2-5 小时， 相对于每重量份的药物化合物， 所述药物载体的用量为 0.001-100 重量份。 12. 根据权利要求 10 或 11 所述的药物组合物的制备方法， 其中， 所述药物化合物为阿 霉素、 柔红霉素、 喜树碱、 表阿霉素和米托蒽醌中的至少一种。 13. 一。
8、种药物组合物， 该药物组合物为根据权利要求 10-11 中任意一项所述的方法制 备得到药物组合物， 且该药物组合物的粒径为 5-20nm。 权 利 要 求 书 CN 103160512 A 2 1/7 页 3 一种核酸及药物载体和药物组合物及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及药学领域， 具体涉及一种核酸、 一种药物载体的制备方法、 一种药物载 体、 一种药物组合物的制备方法和一种药物组合物。 背景技术 0002 核酸适配体是指能与特定靶分子特异性结合的 DNA 或 RNA。1990 年 Tuerk 和 Ellingto 报道了一种在体外应用随机单链寡核苷酸文库筛选、 扩增特定配体的技术。
9、， 此 种技术可以得到与非核酸靶分子具有高亲和力、 高特异性结合的寡核苷酸序列， 此技术 称为指数富集配基的系统进化技术 (SELEX)， 筛选出来的寡核苷酸序列称为核酸适配体 (Aptamer)。由于核酸适配体与抗体类似， 与靶物质结合的特异性亲和力可甚至优于抗体， 加上其靶分子广、 稳定性强、 易改造修饰等特点， 可在基础研究、 临床诊断、 药物研发等方面 得以广泛应用。 0003 但是， 现有的核酸适配体虽然具有与靶物质结合的特异性亲和力而具有靶向性， 但是并不具有负载药物的能力。 发明内容 0004 本发明的目的是克服现有的靶核酸适配体不能负载药物的缺陷， 提供一种既具有 核酸适配体靶。
10、向性又能够负载药物的药物载体。 0005 本发明提供了一种核酸， 其特征在于， 该核酸的结构如式 (1) 所示 ： 0006 VWXYZ 式 (1) 0007 其中， V、 W、 X、 Y 和 Z 各自为单链核酸片段且通过磷酸二酯键依次连接 ； Z 为核酸适 配体 ； V 的碱基序列和 X 的碱基序列反向互补， V 的核苷酸长度为 4-20nt， X 的核苷酸长度 为 4-20nt ； W 的核苷酸长度为 4-10nt 且不能与 V、 X、 Y 或 Z 互补 ； Y 的核苷酸长度为 4-15nt 且不能与 V、 W、 X 或 Z 互补。 0008 另一方面， 本发明还提供了一种药物载体的制备方。
11、法， 其特征在于， 该方法包括 ： 将如上所述的核酸进行变性和退火。 0009 另一方面， 本发明还提供了一种药物载体， 该药物载体为根据如上所述的药物载 体的制备方法制备得到的药物载体。 0010 另一方面， 本发明还提供了一种药物组合物的制备方法， 该方法包括 ： 在如上所述 的药物载体上负载药物化合物， 所述药物化合物为能够与双螺旋 DNA 结合的药物化合物。 0011 另一方面， 本发明还提供了一种药物组合物， 该药物组合物为根据如上所述的药 物组合物的制备方法制备得到药物组合物， 且该药物组合物的粒径为 5-20nm。 0012 本发明提供的核酸既具有靶向性又能够负载药物。 0013。
12、 本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。 附图说明 说 明 书 CN 103160512 A 3 2/7 页 4 0014 附图是用来提供对本发明的进一步理解， 并且构成说明书的一部分， 与下面的具 体实施方式一起用于解释本发明， 但并不构成对本发明的限制。在附图中 ： 0015 图 1 表示实施例 1 制备的药物载体的 DNA 琼脂糖凝胶电泳图。 0016 图 2 表示实施例 1、 4 和 5 制备的药物组合物 ( 相对于阿霉素溶液中的每 mg 的阿 霉素， 第二步得到的含有本发明所述的药物载体的溶液中的核酸用量分别为 0mg、 0.17mg、 1mg、 1.67mg。
13、、 6.67mg 和 16.7mg) 和本底样品的荧光图谱。 0017 图 3 表示实施例 1 制备的药物载体载药前后的圆二色光谱扫描图。 0018 图 4 表示实施例 1 制备的药物组合物的透射电镜图。 0019 图 5 表示实施例 1 制备的药物组合物的粒径分布图。 0020 图 6 表示实施例 1 制备的药物组合物的稳定性荧光扫描图。 0021 图 7 表示实施例 1 制备的药物组合物的细胞毒性实验结果图。 0022 图 8 表示实施例 2 制备的药物组合物的细胞毒性实验结果图。 0023 图 9 表示实施例 3 制备的药物组合物的细胞毒性实验结果图。 具体实施方式 0024 以下结合附。
14、图对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解， 此处所描述的 具体实施方式仅用于说明和解释本发明， 并不用于限制本发明。 0025 本发明提供了一种核酸， 其特征在于， 该核酸的结构如式 (1) 所示 ： 0026 VWXYZ 式 (1) 0027 其中， V、 W、 X、 Y 和 Z 各自为单链核酸片段且通过磷酸二酯键依次连接 ； Z 为核酸适 配体 ； V 的碱基序列和 X 的碱基序列反向互补， V 的核苷酸长度为 4-20nt， X 的核苷酸长度 为 4-20nt 且不能与 V、 X、 Y 或 Z 互补 ； W 的核苷酸长度为 4-10nt ； Y 的核苷酸长度为 4-15nt 且不能。
15、与 V、 W、 X 或 Z 互补。 0028 其中， 式 (1) 中， 左端表示单链核酸的 5 羟基位置， 右端表示单链核酸的 3 羟基 位置。V、 W、 X、 Y 和 Z 之间的的磷酸二酯键自左向右为 5 到 3 的方向。 0029 其中， V 的核苷酸长度为 4-20nt， 例如可以为 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19 或 20nt。 0030 其中， X 的核苷酸长度为 4-20nt， 例如可以为 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19。
16、 或 20nt。 0031 其中， W 的核苷酸长度为 4-10nt， 例如可以为 4、 6、 8、 或 10nt。 0032 其中， Y 的核苷酸长度为 4-10nt， 例如可以为 4、 5、 6、 7、 8、 9 或 10nt。 0033 其中， nt 是指核苷酸 (nucleotide) 的数目。 0034 根据本发明所述的核酸， 其中， V中的碱基各自独立地为鸟嘌呤(G)或胞嘧啶(C)， X 中的碱基各自独立地为鸟嘌呤 (G) 或胞嘧啶 (C)。 0035 其中， V 的碱基序列和 X 的碱基序列反向互补， 即经过变性和退火后， V 和 X 能够形 成双螺旋结构， 且该双螺旋结构中的碱。
17、基对均为鸟嘌呤与胞嘧啶配对形成的。 0036 根据本发明所述的核酸， 其中， Z 的序列可以为核酸适配体的各种序列， Z 可以为 DNA 或 RNA， 也可以为 DNA 和 RNA 的杂合分子， 还可以带有本领域公知的各种核酸修饰， 优选 情况下， Z 的序列可以为 SEQ ID NO ： 1(GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG)、 SEQ ID NO ： 2(GCAG 说 明 书 CN 103160512 A 4 3/7 页 5 TTGATCCTTTGGATACCCTGGCGGGGTCACATG) 或 SEQ ID NO ： 3(GGCGTACGGTAGGCGGGGTCAA。
18、CTG)。 0037 根据本发明所述的核酸， 其中， W 能够连接 V 和 X 即可， 优选情况下， W 的序列可以 为 SEQ ID NO ： 7(TTGT)、 SEQ ID NO ： 8(ATTGTT) 或 SEQ ID NO ： 9(TATTGTTA)。 0038 根据本发明所述的核酸， 其中， Y能够连接X和Z即可， 优选情况下， Y的序列为SEQ ID NO ： 10(TTTT)、 SEQ ID NO ： 11(TTTTTT) 或 SEQ ID NO ： 12(TTTTTTTT)。 0039 根据本发明所述的核酸， 其中， 优选情况下该核酸的序列为SEQ ID NO ： 4(CCCC。
19、CCT TGTGGGGGGTTTTTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG)、 SEQ ID NO ： 5(GGCGGCGGCTTGTGCCGCCGCCT TTTTTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG) 或 SEQ ID NO ： 6(CGCGCGCGTTTGTACGCGCGCGTTTTTTTT GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG)。 0040 本发明所述的核酸可以通过常规的核酸合成方法来制备。 0041 本发明还提供了一种药物载体的制备方法， 其特征在于， 该方法包括 ： 将如上所述 的核酸进行变性和退火。即， 本发明所述的药物载体是经过变性。
20、和退火后形成了由其核苷 酸序列属性所决定的三维结构的核酸。 0042 其中， 所述变性和所述退火均可以按照本领域公知的方法进行， 例如， 按照文献 ( 分子克隆实验指南， 科学出版社， 2002 年出版 ) 中的方法进行。 0043 根据本发明所述的药物载体的制备方法， 其中， 优选情况下， 所述变性和所述退火 均在缓冲液中进行。 0044 其中， 相对于每重量份的所述核酸， 所述缓冲液的用量可以为 100-100000 重量 份， 优选为 1000-10000 重量份。 0045 其中， 优选情况下， 所述缓冲液中， 钾离子的含量为 150-250mM， 镁离子的含量为 3-5mM， Tri。
21、s 的含量为 26-30mM， pH 值为 7.2-7.8。在该优选情况下， 所述药物载体具有靶向 性更好的优异性能。 0046 根据本发明所述的药物载体的制备方法， 其中， 优选情况下， 所述变性的温度为 95-105， 变性的时间为 4-6 分钟 ； 所述退火的降温速度为 10-30 / 分钟， 所述退火的结 束温度为15-25。 在该优选情况下， 所述药物载体具有靶向性更好且稳定性更好的优异性 能。 0047 本发明还提供了一种药物载体， 该药物载体为根据如上所述的药物载体的制备方 法制备得到的药物载体。 0048 本发明还提供了一种药物组合物的制备方法， 该方法包括 ： 在如上所述的药。
22、物载 体上负载药物化合物， 所述药物化合物为能够与双螺旋 DNA 结合的药物化合物。 0049 根据本发明所述的药物组合物的制备方法， 其中， 负载的条件可以为能使 DNA 与 药物化合物结合的条件， 优选情况下， 负载的条件包括 ： 温度为 0-4， 时间为 2-5 小时。 0050 其中， 典型地， 相对于每重量份的药物化合物， 所述药物载体的用量可以为 0.001-100 重量份， 优选为 0.01-50 重量份， 更优选为 0.1-40 重量份， 更进一步优选为 0.5-20重量份。 其中， 所述药物载体的用量是以所述药物载体中的核酸的量计算的。 其中， 可以通过将所述药物载体的溶液与。
23、所述药物化合物的溶液混合的方法进行负载， 所述药物 载体的溶液中， 所述药物载体的浓度可以为 0.001-10mg/ml， 所述药物化合物的溶液中， 所 述药物化合物的浓度可以为 0.001-10mg/ml。 0051 根据本发明所述的药物组合物的制备方法， 其中， 能够与双螺旋 DNA 结合的药物 说 明 书 CN 103160512 A 5 4/7 页 6 化合物已为本领域公知。 典型地， 所述药物化合物可以为阿霉素、 柔红霉素、 喜树碱、 表阿霉 素和米托蒽醌中的至少一种。 0052 本发明还一种药物组合物， 该药物组合物为根据如上所述的所述的药物组合物的 制备方法制备得到药物组合物， 。
24、且该药物组合物的粒径为 5-20nm。 0053 以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中， 核酸均由三博远志 公司进行合成 ； DNA 琼脂糖凝胶电泳采用的是 EB 染色的方法， 其中 EB 溶液为 TIANGEN 公 司的市售品， 琼脂糖为 invtrogen 公司的市售品 ； 荧光萃灭图谱是通过多功能连续酶标仪 测得， 所用酶标仪为 TECAN 公司出产， 型号为 Infinite M200 ； 圆二色光谱图通过 JASCO 公 司的 J-810 型号的圆二色光谱仪扫描测得 ； 透射电镜图通过 FEI 公司的透射电镜 (Tecnai G2 20S-TWIN， 200kV) 观察。
25、得到 ； 粒径分析图谱通过 Malvern 公司的激光粒度仪动态光散射 (Zetasizer NanoZS) 测定。 0054 实施例 1 0055 本实施例通过包括如下步骤的方法制备药物组合物。 0056 第一步 ： 合成序列为SEQ ID NO ： 4(5 -CCCCCCTTGTGGGGGGTTTTTGGTGGTGGTGGTTGTG GTGGTGGTGG-3 ) 的 DNA( 由三博远志公司提供商业化 DNA 合成服务 )， 即为本发明所述的核 酸。 0057 第二步 ： 将 30OD(1000g) 的序列为 SEQ ID NO ： 4 的 DNA 与 1000l( 约 1000mg) 缓。
26、冲液 (150mM 的 KCl、 3mM 的 MgCl2和 26mM 的 Tris-HCl 的水溶液 ) 混合， 然后在 95水浴 中保持 4 分钟后以 10 / 分钟的降温速度降至室温， 即得到含有本发明所述的药物载体的 溶液 ( 核酸浓度为 1mg/ml)。 0058 此溶液即为通过本发明提供的药物载体制备方法制备得到的药物载体的溶液状 态。 0059 第三步 ： 将第二步得到的含有本发明所述的药物载体的溶液 ( 含有 1mg 的核酸 ) 与浓度为 10M(5.79mg/ml) 阿霉素溶液 ( 含有 1mg 的阿霉素 ) 混合， 2下， 孵育 2 小时， 即得到含有本发明所述的药物组合物的。
27、溶液。 0060 此溶液即为通过本发明提供的药物组合物制备方法制备得到的药物组合物的溶 液状态。 0061 实施例 2 0062 本实施例通过包括如下步骤的方法制备药物组合物。 0063 第一步 ： 合成序列为SEQ ID NO ： 5(5 -GGCGGCGGCTTGTGCCGCCGCCTTTTTTGGTGGTGGT GGTTGTGGTGGTGGTGG-3 ) 的 DNA( 由三博远志公司提供商业化 DNA 合成服务 )， 即为本发明 所述的核酸。 0064 第二步 ： 将 2OD(66g) 的序列为 SEQ ID NO ： 5 的 DNA 与 230l( 约 230mg) 缓冲 液 (200。
28、mM 的 KCl、 4mM 的 MgCl2和 28mM 的 Tris-HCl 的水溶液 ) 混合， 然后在 100水浴中 保持 5 分钟后以 20 / 分钟的降温速度降至室温， 即得到含有本发明所述的药物载体的溶 液 ( 核酸浓度为 0.29mg/ml)。 0065 此溶液即为通过本发明提供的药物载体制备方法制备得到的药物载体的溶液状 态。 0066 第三步 ： 将第二步得到的含有本发明所述的药物载体的溶液 ( 含有 0.066mg 的核 说 明 书 CN 103160512 A 6 5/7 页 7 酸 ) 与浓度为 10M(5.27mg/ml) 柔红霉素溶液 ( 含有 1.21mg 的柔红霉。
29、素 ) 混合， 4下， 孵育 2 小时， 即得到含有本发明所述的药物组合物的溶液。 0067 此溶液即为通过本发明提供的药物组合物制备方法制备得到的药物组合物的溶 液状态。 0068 实施例 3 0069 本实施例通过包括如下步骤的方法制备药物组合物。 0070 第一步 ： 合成序列为SEQ ID NO ： 6(5 -CGCGCGCGTTTGTACGCGCGCGTTTTTTTTGGTGGTG GTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3 ) 的 DNA( 由三博远志公司提供商业化 DNA 合成服务 )， 即为本发 明所述的核酸。 0071 第二步 ： 将 1OD(33g) 的序列为 SEQ ID。
30、 NO ： 6 的 DNA 与 230l( 约 230mg) 缓冲 液 (200mM 的 KCl、 4mM 的 MgCl2和 28mM 的 Tris-HCl 的水溶液 ) 混合， 然后在 95水浴中保 持 4 分钟后以 30 / 分钟的降温速度降至室温， 即得到含有本发明所述的药物载体的溶液 ( 核酸浓度为 0.14mg/ml)。 0072 此溶液即为通过本发明提供的药物载体制备方法制备得到的药物载体的溶液状 态。 0073 第三步 ： 将第二步得到的含有本发明所述的药物载体的溶液 ( 含有 0.033mg 的核 酸 ) 与浓度为 8M(4.34mg/ml) 表阿霉素溶液 ( 含有 0.99m。
31、g 的表阿霉素 ) 混合， 1下， 孵 育 3 小时， 即得到含有本发明所述的药物组合物的溶液。 0074 此溶液即为通过本发明提供的药物组合物制备方法制备得到的药物组合物的溶 液状态。 0075 实施例 4 0076 按照实施例 1 的方法制备药物组合物， 所不同的是， 在第三步中， 相对于阿霉素溶 液中的每 mg 的阿霉素， 第二步得到的含有本发明所述的药物载体的溶液中的核酸用量分 别为 0.17mg、 1.67mg、 6.67mg 和 16.7mg。 0077 实施例 5 0078 按照实施例 1 的方法制备药物组合物， 所不同的是， 在第三步中， 用水替代阿霉素 的溶液， 水的用量与第。
32、二步得到的含有本发明所述的药物载体的溶液的体积相等。 0079 测试实施例 1 0080 将实施例 1-3 得到的纳米药物组合物分别按如下方法进行凝胶电泳分析、 负载药 物荧光萃灭检测、 圆二色光谱分析、 显微形态观察、 粒径分布测试和稳定性测试。 0081 按照文献(分子克隆实验指南， 科学出版社， 2002年出版)中的方法， 通过1(重 量体积比)的琼脂糖凝胶电泳分析， EB染色分析， 测得实施例1中的药物载体如图1所示的 条带， 图 1 中的电泳条带亮度明显较强， 说明实施例 1 中的药物载体形成了 DNA 双链结构。 0082 通过 Tecan 公司的 M200 连续光谱多功能酶标仪，。
33、 按照其说明书中的方法， 扫描实 施例 1、 4 和 5 制备的药物组合物 ( 相对于阿霉素溶液中的每 mg 的阿霉素， 第二步得到的含 有本发明所述的药物载体的溶液用量(以核酸的量计算)分别为0mg、 0.17mg、 1mg、 1.67mg、 6.67mg 和 16.7mg) 和本底样品的荧光图谱， 结果如图 2 所示。其中， 以实施例 1 中的缓冲液 作为本底 ( 基线 ) 样品。图 2 的结果表明阿霉素的荧光随着核酸浓度的升高而减低， 说明 阿霉素能够嵌插到核酸分子结构中， 进而引起荧光的萃灭。 说 明 书 CN 103160512 A 7 6/7 页 8 0083 通过JASCO公司的。
34、J-810圆二色光谱分析仪， 按照其说明书中的方法， 检测实施例 1 制备的药物载体和药物组合物的圆二色光谱图， 结果如图 3 所示， 图 3 的结果说明经过退 火得到得药物载体负载药物前后， 结构并未发生变化， 都能得到四链体的结构。 0084 通过 FEI 公司的透射电镜 (Tecnai G220S-TWIN， 200kV) 按照其说明书中的方法， 观察实施例 1 制备的药物组合物， 可见实施例 1 制备的药物组合物如图 4 所示的显微形态， 其粒径为 20nm 左右。 0085 通过 Malvern 公司的激光粒度仪按照其说明书中的方法， 对实施例 1 制备的药物 组合物进行动态光散射(。
35、Zetasizer NanoZS)测定， 测得实施例1制备的药物组合物具有如 图 5 所示的粒径分布。图 5 的结果说明所制备的药物组合物粒径分布较为均一。 0086 通过 Tecan 公司的连续光谱多功能酶标仪按照其说明书中的方法， 扫描实施例 1 制备的药物组合物在 PBS 溶液中分别放置 0、 2、 5、 12、 24、 48、 72 小时后的荧光扫描图谱， 其 中， 以游离态的阿霉素作为参照， 以显示其稳定性。图 6 的结果说明所制备的药物组合物具 有极强的稳定性， 在体外环境中药物不易从所制备的药物载体中逃逸出来， 便于保存， 而在 体内环境下， 随着核酸被内源性的核酸酶降解， 药物。
36、化合物即可得到释放。 0087 对实施例 2 和 3 制备的药物组合物进行如上相同的测试， 得到与如上基本相同的 检测结果， 本发明在此不再赘述。 0088 测试实施例 2 0089 将实施例 1 得到的纳米药物组合物按如下方法进行细胞毒性试验。 0090 已知人源乳腺癌细胞高表达核仁素受体， 但人源正常肝细胞低表达或不表达核仁 素受体， 实施例 1 制备的药物组合物中的核酸适配体部分靶向于核仁素受体。 0091 选用两株不同的细胞进行检测实施例 1 制备的药物组合物的靶向性的实验， 其中 一株为人源乳腺癌细胞 (MCF-7)， 另一株为人源正常肝细胞 (L02)。按照文献 ( 细胞培养， 司。
37、徒镇强， 世界图书出版公司， 1996 年 ) 中的方法将上述两株细胞分别进行培养， 而后分别 加入实施例 1 制备的药物组合物 ( 以阿霉素的量计， 药物组合物在细胞培养液中的浓度如 图所示 )， 加药 72 小时后按照文献 ( 细胞培养， 司徒镇强， 世界图书出版公司， 1996 年 ) 中 的方法 (MTT 法 ) 检测细胞存活率 ( 阳性对照为含相同浓度的游离阿霉素的培养基， 阴性对 照为不含阿霉素的空白培养基 )。结果如图 7 所示， 图 7 的结果表明， 实施例 1 所制备的药 物组合物对正常细胞基本无杀伤作用 ( 但游离阿霉素对正常细胞的杀伤作用较为明显 )， 并且能够特异性的杀。
38、伤肿瘤细胞 ( 比单独用游离阿霉素具有更强的杀伤作用 )， 因而实施 例 1 所制备的药物组合物具有针对人源乳腺癌细胞的靶向性。 0092 对实施例 2 和 3 制备的药物组合物进行如上相同的测试， 得到与如上基本相同的 检测结果， 结果如图 8 和图 9 所示。 0093 图 8 的结果表明， 实施例 2 所制备的药物组合物对正常细胞基本无杀伤作用 ( 但 游离柔红霉素对正常细胞的杀伤作用较为明显 )， 并且能够特异性的杀伤肿瘤细胞 ( 比单 独用游离柔红霉素具有更强的杀伤作用 )， 因而实施例 2 所制备的药物组合物具有针对人 源乳腺癌细胞的靶向性。 0094 图 9 的结果表明， 实施例。
39、 3 所制备的药物组合物对正常细胞基本无杀伤作用 ( 但 游离表阿霉素对正常细胞的杀伤作用较为明显 )， 并且能够特异性的杀伤肿瘤细胞 ( 比单 独用游离表阿霉素具有更强的杀伤作用 )， 因而实施例 3 所制备的药物组合物具有针对人 说 明 书 CN 103160512 A 8 7/7 页 9 源乳腺癌细胞的靶向性。 0095 以上结合附图详细描述了本发明的优选实施方式， 但是， 本发明并不限于上述实 施方式中的具体细节， 在本发明的技术构思范围内， 可以对本发明的技术方案进行多种简 单变型， 这些简单变型均属于本发明的保护范围。 另外需要说明的是， 在上述具体实施方式 中所描述的各个具体技术。
40、特征， 在不矛盾的情况下， 可以通过任何合适的方式进行组合， 为 了避免不必要的重复， 本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。 此外， 本发明的各种不 同的实施方式之间也可以进行任意组合， 只要其不违背本发明的思想， 其同样应当视为本 发明所公开的内容。 说 明 书 CN 103160512 A 9 1/3 页 10 0001 0002 序 列 表 CN 103160512 A 10 2/3 页 11 0003 序 列 表 CN 103160512 A 11 3/3 页 12 序 列 表 CN 103160512 A 12 1/5 页 13 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103160512 A 13 2/5 页 14 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 103160512 A 14 3/5 页 15 图 5 图 6 说 明 书 附 图 CN 103160512 A 15 4/5 页 16 图 7 图 8 说 明 书 附 图 CN 103160512 A 16 5/5 页 17 图 9 说 明 书 附 图 CN 103160512 A 17 。