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1、(10)申请公布号 CN 103086888 A (43)申请公布日 2013.05.08 CN 103086888 A *CN103086888A* (21)申请号 201210543631.9 (22)申请日 2012.12.03 C07C 69/732(2006.01) C07C 67/48(2006.01) C07C 67/56(2006.01) (71)申请人 长沙理工大学 地址 410004 湖南省长沙市 （雨花区） 万家丽 南路 2 段 960 号 (72)发明人 舒孝顺 卿婉华 许凯扬 (54) 发明名称 一种红腺忍冬叶绿原酸的超声提取方法 (57) 摘要 本发明公开了一种红腺。
2、忍冬叶绿原酸的超声 提取方法， 以红腺忍冬叶片为原料， 获取了绿原酸 的超声提取方法和工艺参数， 为今后红腺忍冬叶 资源的开发利用和绿原酸工业化生产提供了一定 的参考借鉴的作用 ； 据实验结果分析可知 ： 红腺 忍冬叶中绿原酸的超声提取最佳工艺条件是最佳 工艺条件为 A2B2C3D1， 即提取温度为 50， 乙醇浓 度为 60。提取次数为 3 次， 提取料液比为 8 倍。 根据文献报道， 用其他方法提取红腺忍冬叶中的 绿原酸， 得率在 1 -2之间， 超声波提取法的提 取率为可达 1.7以上， 由此可见超声提取法较 传统方法收率高， 而且提取时间短， 条件温和， 是 一种较好的提取方法。 (5。
3、1)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 10 页 附图 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书10页 附图3页 (10)申请公布号 CN 103086888 A CN 103086888 A *CN103086888A* 1/2 页 2 1. 一种红腺忍冬叶绿原酸的超声提取方法， 其特征在于， 该超声提取方法包括以下步 骤 ： 步骤 1， 进行绿原酸含量测定， 主要包括 ： (1) 最大吸收波长的确定 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液适量， 置 10mL 量瓶中， 再加水至刻度， 摇匀， 放 置 15min， 以相应试剂为空白， 在。
4、分光光度计上于 200-400nm 扫描 ； 对照品溶液与供试品溶 液在 328nm 处均有最大吸收， 故将 328nm 作为测定波长 ； (2) 对照品溶液的制备 精密称取对照品 10mg， 加适量 70乙醇， 置水浴上微热使溶解， 放冷后定容至 50ml， 摇 匀， 即得， 每 1ml 含红腺忍冬叶 0.2mg ； (3) 标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液 2、 4、 6、 8、 10、 12mL， 分别置于 50mL 量瓶中， 加水适量， 摇匀 . 再加 水至刻度， 摇匀， 放置15min， 以相应试剂为空白.在328nm波长处测定吸光度。 以绿原酸标 品的浓度为横坐标， 以在 328。
5、nm 下测得不同浓度的绿原酸标准品的吸光值为纵坐标， 做标 准曲线， 得回归方程 ； 步骤 2， 进行红腺忍冬叶中绿原酸超声提取的单因素试验， 主要包括 ： 药材红腺忍冬叶片经 60烘干， 再粉碎过 60 目筛， 称取一定量粉碎的红腺忍冬叶与一 定量的溶剂于烧杯中， 放入超声波清洗器一定时间， 过滤， 再将溶液放入烧瓶， 用旋转蒸发 仪进行浓缩提取， 干燥得到提取粗品， 在紫外分光光度计下测定吸光值， 并计算绿原酸的提 取率 ； 分别对影响超声提取的每一因素， 设计 5 个水平进行试验， 通过比较提取率确定对提 取率影响较大的 4 个因数进行正交试验 ； (1) 溶剂乙醇浓度 按乙醇浓度40，。
6、 50， 60， 70， 80， 其它提取条件为提取1次、 提取时间10分钟、 溶剂体积为药材重量 8 倍和提取温度 60的情况下进行超声提取。比较提取率， 得出最佳 溶剂乙醇浓度 ； (2) 溶剂体积 ( 药材重量倍数 ) 按溶剂体积为 6 倍、 8 倍、 10 倍、 12 倍、 14 倍， 其它提取条件为提取 1 次、 提取时间 10 分钟、 最佳乙醇浓度和提取温度 60情况下， 进行超声提取， 比较提取率， 得出最佳溶剂体 积 ； (3) 提取温度 按提取温度 40、 50、 60、 70、 80， 其它提取条件 ： 提取 1 次、 提取时间 10 分钟、 最佳乙醇浓度、 最佳溶剂体积情。
7、况下， 进行超声提取， 比较提取率， 得出最佳提取温度 ； (4) 提取时间 ( 分钟 ) 按提取时间 15min、 20min、 25min、 30min、 35min， 其它提取条件为提取 1 次、 最佳乙醇浓 度、 最佳溶剂体积和最佳提取温度的情况下， 进行超声提取， 比较提取率， 得出最佳提取时 间 ； (5) 提取次数 按提取次数 1 次、 2 次、 3 次、 4 次、 5 次， 其它提取条件为最佳提取时间、 最佳乙醇浓度、 权 利 要 求 书 CN 103086888 A 2 2/2 页 3 最佳溶剂体积和最佳提取温度的情况下， 进行加热回流提取， 比较提取率， 得出最提取次 数。。
8、 2. 如权利要求 1 所述的红腺忍冬叶绿原酸的超声提取方法， 其特征在于， 该提取方法 进一步包括红腺忍冬叶中提取物的 TCL 检测方法 ： 步骤 1， 硅胶 G 薄层的制备 将3.5g羧甲基纤维素钠用100ml加热溶解， 在研钵中将硅胶碾匀， 均匀铺在玻片上， 自 然风干， 待用 ； 在 108烘箱内活化半个小时待用 ； 步骤 2， TCL 检测 用毛细管吸取红腺忍冬叶提取物的乙醇溶解液和对照品乙醇溶解液， 在距硅胶薄层板 下边缘8mm的位置进行点样， 点样斑点的直径为1-2mm。 以正丁醇-冰醋酸-水(712) 为展开剂展开。待展开 8cm 时， 自然晾干， 放于紫外灯下观察， 记录显色。
9、荧光点的颜色， 并计 算比移值 (Rf)。 3. 如权利要求 1 所述的红腺忍冬叶绿原酸的超声提取方法， 其特征在于， 该提取方法 得到的红腺忍冬叶中绿原酸提取的最佳工艺条件为 ： 乙醇的体积为红腺忍冬叶质量的 8 倍， 提取次数 3 次， 乙醇浓度为 60， 提取温度为 50。 权 利 要 求 书 CN 103086888 A 3 1/10 页 4 一种红腺忍冬叶绿原酸的超声提取方法 技术领域 0001 本发明属于红腺忍冬叶绿原酸提取领域， 尤其涉及一种红腺忍冬叶绿原酸的超声 提取方法。 背景技术 0002 红腺忍冬花 1， 2 是忍冬科植物红腺忍冬 Lonicera hypoglauca 。
10、Miq. 的干燥花 蕾或带初开的花， 列在 2005 年版中国药典 “山银花” 项下， 红腺忍冬资源丰富， 主产于河南、 山东、 云南及广西等地， 是山银花药材商品的主要来源之一。红腺忍冬为临床常用中药， 其 味甘、 性寒， 用于痈肿疗疮、 喉痹、 丹毒、 热血毒痢、 风热感冒、 瘟病发热等症， 属清热解毒之 要药， 山银花对多种致病菌均有抑制作用， 是一种广谱抗菌中药， 有 “中药之中的青霉素” 之 美称。化学和药理研究证实其主要化学成分有挥发油类、 有机酸类、 黄酮类和苷类， 绿原酸 是其主要有效成分， 药理作用主要有抗菌、 抗病毒、 解热和抗氧化， 其抗菌作用的主要活性 成分为绿原酸， 。
11、但品种与产地不同而不同， 因此金银花山及山银花中绿原酸含量的高低， 是 其质量优劣的重要标志。 0003 长期以来提取绿原酸以金银花为工业原料， 但价格昂贵， 对同属其它植物开发利 用不够， 尤其是对红腺忍冬植物叶的重视和研究程度不够， 红腺忍冬各部位中都有一定 的绿原酸， 但含量高低不同， 依次为花叶茎根， 且叶中的绿原酸含量较高， 是花的 69.63， 大大超过了根茎， 而忍冬茎， 叶的药源远比红腺忍冬丰富， 采集容易， 价格便宜， 应 该充分利用。因此研究红腺忍冬叶片绿原酸的提取， 为充分利用红腺忍冬资源提供一定的 理论和应用基础。 发明内容 0004 本发明实施例的目的在于提供一种红腺。
12、忍冬叶绿原酸的超声提取方法， 旨在解决 长期以来提取绿原酸以金银花为工业原料， 但价格昂贵， 对同属其它植物开发利用不够， 尤 其是对红腺忍冬植物叶的重视和研究程度不够， 红腺忍冬各部位中都有一定的绿原酸， 但 含量高低不同， 依次为花叶茎根， 且叶中的绿原酸含量较高， 是花的 69.63， 大大超 过了根茎， 而忍冬茎， 叶的药源远比红腺忍冬丰富， 采集容易， 价格便宜， 应该充分利用的问 题。 0005 本发明实施例是这样实现的， 一种红腺忍冬叶绿原酸的超声提取方法， 该超声提 取方法包括以下步骤 ： 0006 步骤 1， 进行绿原酸含量测定， 主要包括 ： 0007 (1) 最大吸收波长。
13、的确定 0008 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液适量， 置 10mL 量瓶中， 再加水至刻度， 摇 匀， 放置 15min， 以相应试剂为空白， 在分光光度计上于 200-400nm 扫描 ； 对照品溶液与供试 品溶液在 328nm 处均有最大吸收， 故将 328nm 作为测定波长 ； 0009 (2) 对照品溶液的制备 说 明 书 CN 103086888 A 4 2/10 页 5 0010 精密称取对照品 10mg， 加适量 70乙醇， 置水浴上微热使溶解， 放冷后定容至 50ml， 摇匀， 即得， 每 1ml 含红腺忍冬叶 0.2mg ； 0011 (3) 标准曲线的绘制 0012 。
14、精密量取对照品溶液 2、 4、 6、 8、 10、 12mL， 分别置于 50mL 量瓶中， 加水适量， 摇 匀 . 再加水至刻度， 摇匀， 放置 15min， 以相应试剂为空白 . 在 328nm 波长处测定吸光度。以 绿原酸标品的浓度为横坐标， 以在 328nm 下测得不同浓度的绿原酸标准品的吸光值为纵坐 标， 做标准曲线， 得回归方程 ； 0013 步骤 2， 进行红腺忍冬叶中绿原酸超声提取的单因素试验， 主要包括 ： 0014 药材与一定量的溶剂于烧杯中， 放入超声波清洗器一定时间， 过滤， 再将溶液放入 烧瓶， 用旋转蒸发仪进行浓缩提取， 干燥得到提取粗品， 在紫外分光光度计下测定吸。
15、光值， 并计算绿原酸的提取率 ； 0015 分别对影响超声提取的每一因素， 设计 5 个水平进行试验， 通过比较提取率确定 对提取率影响较大的 4 个因数进行正交试验 ； 0016 (1) 溶剂乙醇浓度 0017 按乙醇浓度 40， 50， 60， 70， 80， 其它提取条件为提取 1 次、 提取时间 10 分钟、 溶剂体积为药材重量8倍和提取温度60的情况下进行超声提取。 比较提取率， 得出 最佳溶剂乙醇浓度 ； 0018 (2) 溶剂体积 ( 药材重量倍数 ) 0019 按溶剂体积为 6 倍、 8 倍、 10 倍、 12 倍、 14 倍， 其它提取条件为提取 1 次、 提取时间 10 分。
16、钟、 最佳乙醇浓度和提取温度 60情况下， 进行超声提取， 比较提取率， 得出最佳溶剂 体积 ； 0020 (3) 提取温度 0021 按提取温度 40、 50、 60、 70、 80， 其它提取条件 ： 提取 1 次、 提取时间 10 分钟、 最佳乙醇浓度、 最佳溶剂体积情况下， 进行超声提取， 比较提取率， 得出最佳提取温 度 ； 0022 (4) 提取时间 ( 分钟 ) 0023 按提取时间 15min、 20min、 25min、 30min、 35min， 其它提取条件为提取 1 次、 最佳乙 醇浓度、 最佳溶剂体积和最佳提取温度的情况下， 进行超声提取， 比较提取率， 得出最佳提 。
17、取时间 ； 0024 (5) 提取次数 0025 按提取次数 1 次、 2 次、 3 次、 4 次、 5 次， 其它提取条件为最佳提取时间、 最佳乙醇浓 度、 最佳溶剂体积和最佳提取温度的情况下， 进行加热回流提取， 比较提取率， 得出最提取 次数。 0026 进一步， 该提取方法进一步包括红腺忍冬叶中提取物的 TCL 检测方法 ： 0027 步骤 1， 硅胶 G 薄层的制备 0028 将 3.5g 羧甲基纤维素钠用 100ml 加热溶解， 在研钵中将硅胶碾匀， 均匀铺在玻片 上， 自然风干， 待用 ； 在 108烘箱内活化半个小时待用 ； 0029 步骤 2， TCL 检测 0030 用毛细。
18、管吸取红腺忍冬叶提取物的乙醇溶解液和对照品乙醇溶解液， 在距硅胶 说 明 书 CN 103086888 A 5 3/10 页 6 薄层板下边缘 8mm 的位置进行点样， 点样斑点的直径为 1-2mm。以正丁醇 - 冰醋酸 - 水 (7 1 2) 为展开剂展开。待展开 8cm 时， 自然晾干， 放于紫外灯下观察， 记录显色荧光点 的颜色， 并计算比移值 (Rf)。 0031 进一步， 该提取方法得到的红腺忍冬叶中绿原酸提取的最佳工艺条件为 ： 乙醇的 体积为红腺忍冬叶质量的 8 倍， 提取次数 3 次， 乙醇浓度为 60， 提取温度为 50。 0032 本发明以红腺忍冬叶片为原料， 获取了绿原酸。
19、的超声提取方法和工艺参数。为今 后红腺忍冬叶资源的开发利用和绿原酸工业化生产提供了一定的参考借鉴的作用， 对推动 我国红腺忍冬叶的产业化发展有着积极的意义。 此实验只对红腺忍冬叶粗产品作了一些研 究， 至于其纯化还有待进一步研究。 据实验结果分析可知 ： 红腺忍冬叶中绿原酸的超声提取 最佳工艺条件是最佳工艺条件为A2B2C3D1， 即提取温度为50， 乙醇浓度为60， ， 提取次数 为 3 次， 提取料液比为 8 倍。根据文献报道， 用其他方法提取红腺忍冬叶中的绿原酸， 得率 在 1 -2之间， 超声波提取法的提取率为可达 1.7以上， 由此可见超声提取法较传统方 法收率高， 而且提取时间短，。
20、 条件温和， 是一种较好的提取方法。 附图说明 0033 图 1 是本发明实施例提供的绿原酸的标准曲线 ； 0034 图 2 是本发明实施例提供的溶剂浓度对提取率的影响曲线 ； 0035 图 3 是本发明实施例提供的溶剂体积对提取率的影响曲线 ； 0036 图 4 是本发明实施例提供的提取温度对提取率的影响曲线 ； 0037 图 5 是本发明实施例提供的提取次数对提取率的影响曲线 ； 0038 图 6 是本发明实施例提供的 TCL 结果色斑图。 具体实施方式 0039 为了使本发明的目的、 技术方案及优点更加清楚明白， 以下结合附图及实施例， 对 本发明进行进一步详细说明。 应当理解， 此处所。
21、描述的具体实施例仅仅用以解释本发明， 并 不用于限定本发明。 0040 本发明实施例提供了一种红腺忍冬叶绿原酸的超声提取方法， 具体步骤如下 ： 0041 1 材料的选取 0042 1.1 实验材料 0043 红腺忍冬叶， 产自河南， 经过粉碎处理。 0044 1.2 实验仪器 0045 98-II-B 磁力搅拌电热套 ( 天津市泰斯特仪器有限公司 ) ； KQ2200 型超声波清 洗器 ( 昆山市超声仪器有限公司 ) ； HH 数显恒温水浴锅 ( 金坛市金城国胜实验仪器厂 ) ； WFJ 7200 型可见分光光度计 ( 尤尼柯 ( 上海 ) 仪器有限公司 ) ； AY220 电子天平 (SH。
22、IMADZU CORPORATION JAPAN)。 0046 1.3 实验试剂 0047 乙醇 ( 均为分析醇、 95的工业乙醇 )， 冰醋酸， 正丁醇， 硅胶。 0048 2 实验方法 0049 2.1. 绿原酸含量测定方法 说 明 书 CN 103086888 A 6 4/10 页 7 0050 2.1.1 最大吸收波长的确定 0051 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液适量， 置 10mL 量瓶中， 再加水至刻度， 摇 匀， 放置15min， 以相应试剂为空白， 在分光光度计上于200-400nm扫描。 对照品溶液与供试 品溶液在 328nm 处均有最大吸收。故将 328nm 作为测定。
23、波长。 0052 2.1.2 对照品溶液的制备 0053 精密称取对照品 10mg， 加适量 70乙醇， 置水浴上微热使溶解， 放冷后定容至 50ml， 摇匀， 即得。( 每 1ml 含红腺忍冬叶 0.2mg) 0054 2.1.3 标准曲线的绘制 0055 精密量取对照品溶液 2、 4、 6、 8、 10、 12mL， 分别置于 50mL 量瓶中， 加水适量， 摇 匀 . 再加水至刻度， 摇匀， 放置 15min， 以相应试剂为空白 . 在 328nm 波长处测定吸光度。以 绿原酸标品的浓度为横坐标， 以在 328nm 下测得不同浓度的绿原酸标准品的吸光值为纵坐 标， 做标准曲线， 得回归方。
24、程。 0056 2.2 红腺忍冬叶中绿原酸超声提取的单因素试验 0057 药材与一定量的溶剂于烧杯中， 放入超声波清洗器一定时间， 过滤， 再将溶液放入 烧瓶， 用旋转蒸发仪进行浓缩提取， 干燥得到提取粗品， 在紫外分光光度计下测定吸光值， 并计算绿原酸的提取率。 0058 分别对影响超声提取的每一因素 ( 提取温度、 提取时间、 提取次数、 溶剂体积、 溶 剂乙醇浓度， 由于此次实验条件所限， 无法控制超声功率， 故忽略此单因素 ) 设计 5 个水平 进行试验， 通过比较提取率确定对提取率影响较大的 4 个因数进行正交试验。 0059 2.2.1 溶剂乙醇浓度 0060 按乙醇浓度 40， 。
25、50， 60， 70， 80， 其它提取条件为提取 1 次、 提取时间 10 分钟、 溶剂体积为药材重量8倍和提取温度60的情况下进行超声提取。 比较提取率， 得出 最佳溶剂乙醇浓度。 0061 2.2.2 溶剂体积 ( 药材重量倍数 ) 0062 按溶剂体积为 6 倍、 8 倍、 10 倍、 12 倍、 14 倍， 其它提取条件为提取 1 次、 提取时间 10 分钟、 最佳乙醇浓度和提取温度 60情况下， 进行超声提取， 比较提取率， 得出最佳溶剂 体积。 0063 2.2.3 提取温度 0064 按提取温度 40、 50、 60、 70、 80， 其它提取条件 ： 提取 1 次、 提取时间。
26、 10 分钟、 最佳乙醇浓度、 最佳溶剂体积情况下， 进行超声提取， 比较提取率， 得出最佳提取温 度。 0065 2.2.4 提取时间 ( 分钟 ) 0066 按提取时间 15min、 20min、 25min、 30min、 35min， 其它提取条件为提取 1 次、 最佳乙 醇浓度、 最佳溶剂体积和最佳提取温度的情况下， 进行超声提取， 比较提取率， 得出最佳提 取时间。 0067 2.2.5 提取次数 0068 按提取次数 1 次、 2 次、 3 次、 4 次、 5 次， 其它提取条件为最佳提取时间、 最佳乙醇浓 度、 最佳溶剂体积和最佳提取温度的情况下， 进行加热回流提取， 比较提取。
27、率， 得出最提取 次数。 说 明 书 CN 103086888 A 7 5/10 页 8 0069 2.3 红腺忍冬叶中绿原酸超声提取的正交试验 0070 依据上述单因数实验结果， 确定4个主要因数进行正交试验(4因数3水平)， 根据 绿原酸提取率通过实验获取最佳提取条件。 0071 因素水平表 0072 0073 正交实验设计表 0074 0075 说 明 书 CN 103086888 A 8 6/10 页 9 0076 2.4 红腺忍冬叶中提取物的 TCL 检测 0077 2.4.1 硅胶 G 薄层的制备 0078 将 3.5g 羧甲基纤维素钠用 100ml 加热溶解， 在研钵中将硅胶碾匀。
28、， 均匀铺在玻片 上， 自然风干， 待用。在 108烘箱内活化半个小时待用。 0079 2.4.2TCL 检测 0080 用毛细管吸取红腺忍冬叶提取物的乙醇溶解液和对照品乙醇溶解液， 在距硅胶 薄层板下边缘 8mm 的位置进行点样， 点样斑点的直径为 1-2mm。以正丁醇 - 冰醋酸 - 水 (7 1 2) 为展开剂展开。待展开 8cm 时， 自然晾干， 放于紫外灯下观察， 记录显色荧光点 的颜色， 并计算比移值 (Rf)。 0081 3 实验结果与分析 0082 3.1 标准曲线的绘制 0083 以绿原酸样品的浓度为横坐标， 以在 328nm 下测得不同浓度的标准品的吸光值为 纵坐标， 做标。
29、准曲线， 得到回归方程为 ： Y 0.0446x+0.0893， r 0.9950。结果表明， 绿原 酸在 2-16g/mL 范围内线性关系良好。 0084 3.2 红腺忍冬叶中绿原酸加热回流提取的单因素试验 0085 3.2.1 溶剂乙醇浓度 0086 其它提取条件为提取 1 次、 提取时间 30 分钟、 溶剂体积为药材重量 8 倍和提取温 度 60。 0087 表溶剂浓度的实验结果 0088 0089 由图表可以看出， 当乙醇浓度达到 60时， 随着乙醇浓度的增大比较提取率反而 减小， 可以得出最佳溶剂乙醇浓度为 60。 0090 3.2.2 溶剂体积 ( 药材重量倍数 ) 说 明 书 C。
30、N 103086888 A 9 7/10 页 10 0091 其它提取条件为提取 1 次、 提取时间 30 分钟、 最佳乙醇浓度和提取温度 60。 0092 表溶剂体积实验结果 0093 0094 由图表可以看出当溶剂体积倍数达到 8 倍后， 随着溶液体积的增大， 提取率基本 不再增大， 且会给后续浓缩工序带来困难， 所以从经济方面考虑， 得出最佳溶剂体积为 8 倍 体积。 0095 3.2.3 提取温度 0096 其它提取条件 ： 提取 1 次、 提取时间 10 分钟、 最佳乙醇浓度、 最佳溶剂体积。 0097 表提取温度实验结果 0098 0099 0100 由表和图可以看出， 随着温度的。
31、不断提高， 绿原酸的提取率也跟着上升， 在 50时 达到最高点， 温度再提高得率可是下降了， 所以最佳提取温度为 50。 0101 3.2.4 提取时间 ( 分钟 ) 0102 其它提取条件 ： 提取 1 次、 最佳乙醇浓度、 最佳溶剂体积和最佳提取温度。 0103 表提取时间实验结果 0104 说 明 书 CN 103086888 A 10 8/10 页 11 0105 由表和图可以比较看出， 绿原酸提取率随时间增加不断增长， 在 30 分钟时达到最 大， 说明此时绿原酸容易完全提取， 若继续提取， 首先是对资源的浪费， 其次是提取时间过 长可能会造成绿原酸分解或得到杂质， 从而降低了得率，。
32、 因此最佳提取时间为 30 分钟。 0106 3.2.5 提取次数 0107 其它提取条件 ： 提取时间 10 分钟、 最佳乙醇浓度、 最佳溶剂体积和最佳提取温度 0108 表提取次数实验结果 0109 0110 0111 由表和图可以比较得出， 当提取次数为 3 次时， 提取率达到一个最大值， 但当提取 次数为 5 次时， 提取率反而变大， 这是因为提取次数多了， 加热回流的时间变长， 提取出了 类绿原酸物质， 提取率变大， 但是绿原酸含量却变低。综合考虑， 最佳提取次数为 3 次。 0112 3.3 红腺忍冬叶中绿原酸加热回流提取的正交试验 0113 依据上述单因数实验结果， 可以得出， 。
33、因素影响大小为 ： 乙醇浓度提取次数容 积体积温度加热时间， 因此可以确定乙醇浓度、 提取次数、 容积体积、 温度 4 个为主要 因数， 来进行正交试验 (4 因数 3 水平 )， 根据绿原酸提取率通过实验获取最佳提取条件。 0114 表因数水平表 0115 说 明 书 CN 103086888 A 11 9/10 页 12 0116 表绿原酸提取正交实验表 0117 0118 0119 由表 4-2 直观分析可得 ： 因素影响的显著性依次为 D C B A， 即提取因子中 料液比对红腺忍冬叶中绿原酸的提取得率的影响最大， 提取温度对绿原酸提取得率的影响 最小。 说 明 书 CN 103086。
34、888 A 12 10/10 页 13 0120 综合考虑以上的分析结果与实际运用中的效率， 优选出的最佳工艺条件为 A2B2C3D1， 即提取温度为 50， 乙醇浓度为 60， ， 提取次数为 3 次， 提取料液比为 8 倍。 0121 3.4 红腺忍冬叶中提取物的 TLC 检测 0122 3.4.1TLC 捡测的结果与分析 0123 本试验以正丁醇冰醋酸水 (7 1 2) 为展开剂， 对红腺忍冬叶提取物进行 TLC 检测， 在紫外灯照射下观察其色斑情况， 并测定其 Rf 值在 0.4-0.5 之间， 与纯品绿原酸 的文献报道一致。(Rf B/A) 0124 表 TCL 检测结果 0125 。
35、1 板2 板3 板平均值 A3.63.73.63.6 B7.67.87.87.7 Rf0.473 0.474 0.462 0.469 0126 0127 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已， 并不用以限制本发明， 凡在本发明的精 神和原则之内所作的任何修改、 等同替换和改进等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 CN 103086888 A 13 1/3 页 14 图 1 图 2 图 3 说 明 书 附 图 CN 103086888 A 14 2/3 页 15 图 4 图 5 说 明 书 附 图 CN 103086888 A 15 3/3 页 16 图 6 说 明 书 附 图 CN 103086888 A 16 。