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1、(10)申请公布号 CN 103113372 A (43)申请公布日 2013.05.22 CN 103113372 A *CN103113372A* (21)申请号 201310080834.3 (22)申请日 2013.03.14 C07D 475/04(2006.01) G01N 30/02(2006.01) (71)申请人 山西普德药业股份有限公司 地址 037010 山西省大同市经济技术开发区 湖滨大街 55 号 (72)发明人 王勇 李立忠 解晓荣 李润宝 昝建强 姚荷云 闫洁 胡成伟 (74)专利代理机构 北京鼎佳达知识产权代理事 务所 ( 普通合伙 ) 11348 代理人 侯蔚。
2、寰 (54) 发明名称 一种高收率的左亚叶酸钙的制备方法 (57) 摘要 本发明属于药物合成领域， 涉及一种抗肿瘤 药物的制备方法， 具体涉及一种高收率的左亚叶 酸钙的制备方法 ； 其发明特点在于 ： 通过拆分工 艺制备左亚叶酸钙， 拆分过程中加入了含有左亚 叶酸钙的溶液， 左亚叶酸钙溶液中左亚叶酸钙占 到亚叶酸钙总量的 70以上， 该方法既提高了拆 分收率， 又回收利用了拆分工艺产生的母液， 在工 业生产中有较大意义。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 (10)申请公布号 CN 。
3、103113372 A CN 103113372 A *CN103113372A* 1/1 页 2 1. 一种通过拆分工艺制备左亚叶酸钙的方法， 其特征在于 ： 拆分过程中加入了含有左 亚叶酸钙的溶液。 2. 根据权利要求 1 所述左亚叶酸钙的制备方法， 其特征在于 ： 左亚叶酸钙溶液中左亚 叶酸钙占到亚叶酸钙总量的 70以上。 3. 根据权利要求 2 所述左亚叶酸钙的制备方法， 其特征在于 ： 左亚叶酸钙溶液是拆分 工艺制备左亚叶酸钙中产生的溶液。 4. 根据权利要求 3 所述左亚叶酸钙的制备方法， 其制备方法包括 ：（6R， S） - 亚叶酸钙 与其90100倍 （W/V） 蒸馏水混合加热。
4、溶解， 加入摩尔量为亚叶酸钙67倍的无水CaCl2， 再加入含有左亚叶酸钙的溶液， 溶液中左亚叶酸钙占到亚叶酸钙总量的 70以上， 溶液的 体积是蒸馏水体积的 1/2 1/3, 混合加热至 60， 恒温 1 小时， 然后缓慢降温至 30， 滴 加 25% 氨水 , 调 pH 值至 10, 滴加完毕， 将温度缓慢降温至 18， 恒温 18 小时， 过滤沉淀， 用 5% 氯化钙溶液及无水乙醇洗涤， 干燥， 得淡黄色固体， 该固体 （6S） - 亚叶酸钙含量 85 以上， 可进一步拆分至纯品。 5. 一种通过拆分工艺制备左亚叶酸钙的方法， 其特征在于 ： 左亚叶酸钙的含量是用高 效液相色谱法测定， 。
5、用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 以磷酸氢二钠为缓冲溶液， 检测波 长为 254nm。 6. 根据权利要求 5 所述左亚叶酸钙的制备方法， 其特征在于 ： 左亚叶酸钙的含量测定 包括 ： （1） 左亚叶酸钙的含量 ： 照高效液相色谱法测定 ； （2） 色谱条件与系统适用性 ： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 以磷酸氢二钠缓冲 溶液 （水 950ml， 加入 10% 四丁基氢氧化铵 10.25ml 和磷酸氢二钠 7.1g， 溶解后用磷酸调 pH 至 7.8， 加水至 1000ml） - 甲醇 (78 ： 22) 为流动相， 柱温 40， 检测波长为 254nm， 精密称取 亚叶酸钙对照品与甲。
6、酰叶酸对照品适量， 置同一量瓶中， 加水溶解并稀释制成每 1ml 含亚 叶酸钙与甲酰叶酸各5g的系统适用性溶液， 取10l注入液相色谱仪， 记录色谱图， 亚叶 酸钙与甲酰叶酸的分离度不得低于 2.2 ； （3） 测定法 ： 取本品适量， 精密称定， 加水溶解并稀释制成每 1ml 约含 1mg 的溶液， 精密 量取 10l 注入液相色谱仪， 记录色谱图 ； 另取亚叶酸钙对照品， 同法测定， 按外标法以峰 面积计算， 即得。 权 利 要 求 书 CN 103113372 A 2 1/4 页 3 一种高收率的左亚叶酸钙的制备方法 技术领域 0001 本发明属于药物合成领域， 涉及一种抗肿瘤药物的制备。
7、方法， 具体涉及一种高收 率的左亚叶酸钙的制备方法。 背景技术 0002 左亚叶酸钙为左亚叶酸的钙盐， 左亚叶酸为5-甲酰四氢叶酸 （即亚叶酸） 的同分异 构体。 左亚叶酸不需要被二氢叶酸还原酶还原即可参加利用叶酸盐作为一碳单位来源的反 应， 且左亚叶酸可以主动或被动地通过细胞膜， 左亚叶酸基本作用和叶酸相同， 但效果优于 叶酸， 因为叶酸在肝及骨髓中先变为亚叶酸才能起作用， 而本品为亚叶酸的活性形式， 本品 也具有刺激白细胞生长成熟的作用， 能改善巨幼细胞性贫血。 0003 本品除用于各种原因引起的巨幼细胞性贫血外， 主要用于肿瘤化疗的辅助用药。 （1） 高剂量甲氨喋呤结合左亚叶酸钙的解救疗。
8、法， 用于对抗肿瘤细胞对甲氨蝶呤的抗药性， 也能拮抗甲氨喋呤对正常细胞的毒性 ；（2） 左亚叶酸钙与 5-Fu 合用加强其治疗作用， 延长 姑息治疗晚期结肠直肠癌的生存时间。在日本， 以往是亚叶酸钙与 5-Fu 有效组合， 作为结 直肠癌的标准治疗， 99年10月， 公共福利部批准左亚叶酸钙与5-Fu治疗胃癌， 结直肠癌， 疗 效确切， 已广泛推广。 左亚叶酸钙由美国惠氏药品公司首先研制成功， 于 1994 年首先 在英国上市， 现已在包括意大利、 加拿大、 日本、 南非、 芬兰、 冰岛等 10 几个国家上市， 其制 剂有片剂、 水针剂及冻干针剂， 国外临床应用已充分证实了该药的安全有效性。 。
9、0004 左亚叶酸钙具有工业生产价值的制备方法是基于亚叶酸钙中存在的6R及6S两种 非对映异构体， 可以根据两者在水中溶解度的差异分离出 6S 构型的左亚叶酸钙。其详细的 制备方法中国专利 CN1401647A 公开地很清楚， 如下描述 ： 160g（6R， S） - 亚叶酸钙与 540 690ml 蒸馏水混合加热溶解， 加入摩尔量为亚叶 酸钙 6.5 倍的无水 CaCl2 降温至 30， 滴加 25% 氨水 , 调 pH 值至 10, 滴加完毕， 将温度缓 慢降温至 18， 恒温 18 小时， 过滤沉淀， 用 5% 氯化钙溶液及无水乙醇洗涤， 干燥， 得淡黄色 固体 25 克， D 20=-。
10、12 0（c=1， H2O， 浓度以无水盐计） 。 0005 2第一步拆分产物 60g 与 540 690ml 蒸馏水混合加热至 60左右， 用 20% 的 HCl 调 pH 至 5.5 左右， 固体全溶， 再用 5% 的 NaOH 调 pH 至 7.0 7.5， 加入摩尔量为亚叶酸 钙3.5倍的无水CaCl2 ， 溶解完全后静置， 缓慢降温至22， 恒温24小时， 过滤沉淀， 得到产 物 33 克， D 20=-16 0（c=1， H 2O， 浓度以无水盐计） 。高效毛细管电泳测定左旋亚叶酸 钙含量在 95% 左右。 0006 3第二步拆分产物 60g 与 600ml 水混合加热至 60左右。
11、， 用 20% 的 HCl 调 pH 至 5.5 左右， 待固体全溶， 再用 5% 的 NaOH 调 pH 至 7.0 7.5， 加入摩尔量为亚叶酸钙 ,3.5 倍 的无水 CaCl2 ， 溶解完全后静置， 降温至 22， 恒温 40 小时后， 过滤沉淀， 得到产物 56 克， D 20=-18.3 0（c=1， H 2O， 浓度以无水盐计） 。 说 明 书 CN 103113372 A 3 2/4 页 4 0007 从上述制备方法可以看出 ： 该工艺虽然具有工业生产价值， 且可以得到高纯度的 左旋亚叶酸钙， 但是， 拆分收率不高， 特别是第 2 步骤中， 拆分损失较大， 收率低。提高收率， 。
12、在工业生产中有很重要的意义， 因此， 进一步提高生产左旋亚叶酸钙的收率， 是我们急待解 决的课题。 发明内容 0008 本发明的目的就是进一步提高生产左旋亚叶酸钙的收率。 0009 我们发现 ： 拆分过程中加入含有左亚叶酸钙的溶液， 溶液中左亚叶酸钙占到亚叶 酸钙总量的 70以上， 溶液可以是拆分工艺制备左亚叶酸钙中产生的溶液， 可以提高生产 左旋亚叶酸钙的收率。 0010 我们发现 ： 拆分过程第 2 步骤中， 产生的母液中， 左亚叶酸钙占到亚叶酸钙总量的 78左右。 0011 具体地， 拆分过程中加入含有左亚叶酸钙的溶液的工艺可作如下描述 ： （6R， S） - 亚叶酸钙与其 90 100。
13、 倍 （W/V） 蒸馏水混合加热溶解， 加入摩尔量为亚叶酸 钙67倍的无水CaCl2，再加入含有左亚叶酸钙的溶液， 溶液中左亚叶酸钙占到亚叶酸钙总 量的70以上， 溶液的体积是蒸馏水体积的1/21/3,混合加热至60， 恒温1小时， 然后 缓慢降温至 30， 滴加 25% 氨水 , 调 pH 值至 10, 滴加完毕， 将温度缓慢降温至 18， 恒温 18小时， 过滤沉淀， 用5%氯化钙溶液及无水乙醇洗涤， 干燥， 得淡黄色固体， 该固体 （6S） -亚 叶酸钙含量 85以上， 可进一步拆分至纯品。 0012 更具体地， 拆分过程中加入含有左亚叶酸钙的溶液的工艺可进一步作如下描述 ： 拆分过程中。
14、加入含有左亚叶酸钙的溶液的工艺如下 ： 1首先， 按通常工艺生产 ： （1a） 60g（6R， S） - 亚叶酸钙与 540-600ml 蒸馏水混合加热溶解， 加入摩尔量为亚叶酸 钙 6 7 倍的无水 CaCl2 降温至 30， 滴加 25% 氨水 , 调 pH 值至 10, 滴加完毕， 将温度缓 慢降温至 18， 恒温 18 小时， 过滤沉淀， 用 5% 氯化钙溶液及无水乙醇洗涤， 干燥， 得淡黄色 固体 24-25 克， 其中 （6S） - 亚叶酸钙含量 86 87%。 0013 （1b） 第一步拆分产物 25g 与 250ml 蒸馏水混合加热至 60左右， 用 20% 的 HCl 调 p。
15、H至5.5左右， 固体全溶， 再用5%的NaOH调pH至7.07.5， 加入摩尔量为亚叶酸钙34 倍的无水CaCl2 ， 溶解完全后静置， 缓慢降温至22， 恒温24小时， 过滤沉淀， 得到产物8 9 克，（6S） - 亚叶酸钙含量在 95 96%。滤液中亚叶酸钙总量 16 17 克，（6S） - 亚叶酸钙 含量占到亚叶酸钙总量的 75 78。 0014 （1c） 第二步拆分产物 9g 与 90ml 蒸馏水混合加热至 60左右， 用 20% 的 HCl 调 pH 至 5.5 左右， 待固体全溶， 再用 5% 的 NaOH 调 pH 至 7.0 7.5， 加入摩尔量为亚叶酸钙 3 4倍的无水Ca。
16、Cl2 ， 溶解完全后静置， 降温至22， 恒温40小时结晶后， 过滤， 得到产物8克， （6S） - 亚叶酸钙含量 99%。 0015 2套用母液的生产工艺 ： （2a） 首先， 将上述 （1b） 步骤产生的滤液减压浓缩到原体积的约 1/3, 至饱和 , 备用 ； 60g（6R， S） - 亚叶酸钙与 540 600ml 蒸馏水混合加热溶解， 加入摩尔量为亚叶酸 钙 6 7 倍的无水 CaCl2，加入备用的滤液， 混合加热至 60， 恒温 1 小时， 然后缓慢降温至 说 明 书 CN 103113372 A 4 3/4 页 5 30， 滴加 25% 氨水 , 调 pH 值至 10, 滴加完毕。
17、， 将温度缓慢降温至 18， 恒温 18 小时， 过滤 沉淀， 用 5% 氯化钙溶液及无水乙醇洗涤， 干燥， 得淡黄色固体 38 39 克， 其中 （6S） - 亚叶 酸钙含量 87 88%。 0016 （2b） 第一步拆分产物 39g 与 390ml 蒸馏水混合加热至 60左右， 用 20% 的 HCl 调 pH 至 5.5 左右， 固体全溶， 再用 5% 的 NaOH 调 pH 至 7.0 7.5， 加入摩尔量为亚叶酸钙 3 4 倍的无水 CaCl2 ， 溶解完全后静置， 缓慢降温至 22， 恒温 24 小时， 过滤沉淀， 得到产物 12 13 克，（6S） - 亚叶酸钙含量在 95 96。
18、%。滤液中亚叶酸钙总量 27 28 克，（6S） - 亚 叶酸钙含量占到亚叶酸钙总量的7578。 该步骤产生的滤液继续可以套入下一批产品。 0017 （2c） 第二步拆分产物 13g 与 130ml 蒸馏水混合加热至 60左右， 用 20% 的 HCl 调 pH 至 5.5 左右， 待固体全溶， 再用 5% 的 NaOH 调 pH 至 7.0 7.5， 加入摩尔量为亚叶酸钙 3 4 倍的无水 CaCl2 ， 溶解完全后静置， 降温至 22， 恒温 40 小时结晶后， 过滤， 得到产物 12 克，（6S） - 亚叶酸钙含量 99% 上述制备方法可以得到有益的效果 ： 1原工艺投料 60g（6R，。
19、 S） - 亚叶酸钙， 得到纯品 （6S） - 亚叶酸钙 （6S） - 亚叶酸钙仅 8 克， 而套用母液的生产工艺， 投料 60g （6R， S） - 亚叶酸钙， 得到纯品 （6S） - 亚叶酸钙 （6S） - 亚 叶酸钙 12 克， 收率提升了 50%。 0018 2套用母液的生产工艺， 第一步拆分产物 6S） - 亚叶酸钙含量 87 88%， 比原工 艺提升了 1% 。 0019 3套用母液工艺简单， 与原工艺融为一体。 0020 我们还发明了左亚叶酸钙的含量测定方法， 即用高效液相色谱法测定， 方法如 下 ： 色谱条件与系统适用性 ： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 以磷酸氢二钠缓冲。
20、溶液 （水 950ml， 加入 10% 四丁基氢氧化铵 10.25ml 和磷酸氢二钠 7.1g， 溶解后用磷酸调 pH 至 7.8， 加水至 1000ml） - 甲醇 (78 ： 22) 为流动相， 柱温 40， 检测波长为 254nm， 精密称取亚 叶酸钙对照品与甲酰叶酸对照品适量， 置同一量瓶中， 加水溶解并稀释制成每 1ml 含亚叶 酸钙与甲酰叶酸各5g的系统适用性溶液， 取10l注入液相色谱仪， 记录色谱图， 亚叶酸 钙与甲酰叶酸的分离度不得低于 2.2 ； 测定法 ： 取本品适量， 精密称定， 加水溶解并稀释制成每 1ml 约含 1mg 的溶液， 精密量 取 10l 注入液相色谱仪，。
21、 记录色谱图 ； 另取亚叶酸钙对照品， 同法测定， 按外标法以峰面 积计算， 即得。 具体实施方式 0021 下面实施例用于进一步叙述本发明， 但不作任何限制。 0022 实施例 1 左亚叶酸钙的制备 工艺过程如下 ： 1首先， 按通常工艺生产 （1a） 60g（6R， S） - 亚叶酸钙与 600ml 蒸馏水混合加热溶解， 加入 72g 无水 CaCl2 降温 至 30， 滴加 25% 氨水 , 调 pH 值至 10, 滴加完毕， 将温度缓慢降温至 18， 恒温 18 小时， 过滤沉淀， 用 5% 氯化钙溶液 100ml 及无水乙醇 50ml 洗涤， 干燥， 得淡黄色固体 25 克， 其中 。
22、说 明 书 CN 103113372 A 5 4/4 页 6 （6S） - 亚叶酸钙含量 86%。 0023 （1b） 第一步拆分产物 25g 与 250ml 蒸馏水混合加热至 60左右， 用 20% 的 HCl 调 pH 至 5.5 左右， 固体全溶， 再用 5% 的 NaOH 调 pH 至 7.0 7.5， 加入 16g 无水 CaCl2 ， 溶解 完全后静置， 缓慢降温至 22， 恒温 24 小时， 过滤沉淀， 得到产物 9 克，（6S） - 亚叶酸钙含 量在 95.5%。滤液中亚叶酸钙总量 17 克，（6S） - 亚叶酸钙含量占到亚叶酸钙总量的 78。 0024 （1c） 第二步拆分产。
23、物 9g 与 90ml 蒸馏水混合加热至 60左右， 用 20% 的 HCl 调 pH 至 5.5 左右， 待固体全溶， 再用 5% 的 NaOH 调 pH 至 7.0 7.5， 加入 6g 无水 CaCl2 ， 溶解 完全后静置， 降温至 22， 恒温 40 小时结晶后， 过滤， 得到产物 8 克，（6S） - 亚叶酸钙含量 99.5%。 0025 2套用母液的生产工艺 ： （2a） 首先， 将上述 （1b） 步骤产生的滤液减压浓缩到原体积的约 1/3, 至饱和 , 备用 ； 60g（6R， S） - 亚叶酸钙与 600ml 蒸馏水混合加热溶解， 加入 72 g 的无水 CaCl2，加入备 。
24、用的滤液， 混合加热至 60， 恒温 1 小时， 然后缓慢降温至 30， 滴加 25% 氨水 , 调 pH 值至 10, 滴加完毕， 将温度缓慢降温至 18， 恒温 18 小时， 过滤沉淀， 用 5% 氯化钙溶液 150ml 及 无水乙醇 70ml 洗涤， 干燥， 得淡黄色固体 39 克， 其中 （6S） - 亚叶酸钙含量 87%。 0026 （2b） 第一步拆分产物 39g 与 390ml 蒸馏水混合加热至 60左右， 用 20% 的 HCl 调 pH 至 5.5 左右， 固体全溶， 再用 5% 的 NaOH 调 pH 至 7.0 7.5， 加入 25g 无水 CaCl2 ， 溶解 完全后静。
25、置， 缓慢降温至 22， 恒温 24 小时， 过滤沉淀， 得到产物 13 克，（6S） - 亚叶酸钙含 量在 96%。滤液中亚叶酸钙总量 28 克，（6S） - 亚叶酸钙含量占到亚叶酸钙总量的 78。该 步骤产生的滤液继续可以套入下一批产品。 0027 （2c） 第二步拆分产物 13g 与 130ml 蒸馏水混合加热至 60左右， 用 20% 的 HCl 调 pH 至 5.5 左右， 待固体全溶， 再用 5% 的 NaOH 调 pH 至 7.0 7.5， 加入 8g 无水 CaCl2 ， 溶解 完全后静置， 降温至 22， 恒温 40 小时结晶后， 过滤， 得到产物 12 克，（6S） - 亚叶酸钙含量 99.6%。 说 明 书 CN 103113372 A 6 。