一种活性姜黄素衍生物及其制备方法.pdf

摘要
申请专利号：	CN201210525212.2	申请日：	2012.12.10
公开号：	CN103044443A	公开日：	2013.04.17
当前法律状态：	终止	有效性：	无权
法律详情：	未缴年费专利权终止IPC(主分类):C07D 495/04申请日:20121210授权公告日:20141210终止日期:20151210\|\|\|授权\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):C07D 495/04申请日:20121210\|\|\|公开
IPC分类号：	C07D495/04; A61P31/04	主分类号：	C07D495/04
申请人：	山东大学（威海）
发明人：	怀其勇; 马庆林
地址：	264209 山东省威海市文化西路180号
优先权：
专利代理机构：	青岛高晓专利事务所 37104	代理人：	宋文学
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内容摘要

本发明是关于一种活性姜黄素衍生物及其制备方法，活性姜黄素衍生物是利用前药设计原理，选用纯天然无毒害的生物素和姜黄素进行拼合，生物素分子内含有两个氮原子和一个硫原子，得到的生物素化姜黄素，其稳定性好，生物利用度高，毒副作用小，其具体结构式如下：。

权利要求书

权利要求书一种活性姜黄素衍生物，其特征在于：所述衍生物是生物素化姜黄素，其具有下列结构式：
。
一种制备权利要求1所述的活性姜黄素衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）生物素酰氯化：称取5mmol姜黄素，溶解于30‑60mL的三氯甲烷中，加入3‑5mL酰化试剂，在35‑50℃反应4‑10小时，得到蜡黄色产物；
2）去杂：将上述产物用旋转蒸发仪去溶剂后用三氯甲烷洗涤数次，旋转蒸发去除溶剂和杂质；
3）生物素化姜黄素的制备：称取2mmol姜黄素，溶解于30‑50mL的三氯甲烷中，加入2‑4mL有机碱，将上一步得到生物素酰氯溶解于15‑35mL三氯甲烷中滴加至姜黄素溶液中，在35‑45℃反应15‑30小时；
4）过滤，干燥：过滤，将滤液旋干，干燥得到粗产物生物素化姜黄素；
5）纯化：将上述生物素化姜黄素衍生物的粗产物转移至硅胶柱中，使用1:10的甲醇和三氯甲烷洗脱，收集目标产物，真空干燥得生物素化姜黄素。
根据权利要求1所述的活性姜黄素衍生物的制备方法，其特征在于：步骤1）中酰化试剂是指二氯亚砜、双光气或五氯化磷。
根据权利要求1所述的活性姜黄素衍生物的制备方法，其特征在于：步骤3）中采用氮气保护，通过TLC检测反应进程。
根据权利要求1所述的活性姜黄素衍生物的制备方法，其特征在于：步骤3）中所述有机碱是三乙胺或吡啶。

说明书

说明书一种活性姜黄素衍生物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种姜黄素衍生物，特别是涉及一种活性姜黄素衍生物及其制备方法。
背景技术
    姜黄素( Curcumin)是多年生草本植物姜黄的主要有效成分之一, 是一种黄色略显酸性的二苯基庚烃物质。近年来，大量研究发现姜黄素具有抗氧化、抗菌及免疫调节、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化等生理和药理作用。而且,姜黄素作为一种天然药物，并对人畜几乎无毒，其药用价值已经拓展到现代医学的各个领域而倍受关注。且国内外对姜黄素衍生物的研究主要集中在活泼亚甲基上，对酚羟基的研究还很少，故对这一空白的研究意义重大。
生物素即维生素H，在医药方面除了用于生物素缺乏症的治疗外还可以辅助治疗糖尿病，并且有良好的耐受性和生物兼容性。通过人和各种动物实验发现即使大量的用药也不会产生副作用。汪雪峰，丁绍民曾分别对急性，亚慢性的毒性给药情况做了实验，结果显示，生物素对心率、血压、血循环、呼吸及胃分泌均没有影响（Wang XF(汪雪峰)，The total synthesis of biotin.[D]Beijing: Beijing Institute of Technology University.2003）。此外，国内外对生物素的研究主要集中在生物素‑亲和素系统，以及新材料的发展上。最近研究发现生物素对林可霉素的生物合成起到了积极地作用，其生物效价是原来的136.62%（LiX(李啸)，ChuJ(储炬)etal，Effects of biotinandaminoacids on biosynthesisof lincomycin， Chinese Journal of  Antibiotics(中国抗生素志)[J].2009,33(1):6‑10）；生物素化白藜芦醇保持了原有的抗癌活性并具有剂量依赖关系（FengL(冯磊) etal，Preparation and Pharmacodynamic Evaluation of Biotinylated Resveratrol，NatProd ResDev(天然产物研究与开发).[J].2009(21):988‑991）。据文献报道，含有杂原子的姜黄素酯化物在药效上要强于姜黄素本身（HuangSF(黄淑芳), etal. Synthesis and antitumor activity study of nitrogen containing curcumin derivatives.Chinese Journal of Medicinal Chemistry(中国药物化学杂志)[J].2011 21,(2):88‑95）。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种新的活性姜黄素衍生物及其制备方法，本发明是在保证安全性、无毒副作用的基础上，增强姜黄素的生物活性，以获得稳定性好，生物利用度高，毒副作用小的新型药物。
本发明的技术方案是：一种活性姜黄素衍生物，是生物素化姜黄素，其具有下列结构式：

本发明中生物素姜黄素的制备是以生物素、姜黄素等为原料，所用原料均可购买得到，实验原理如下：

生物素                        生物素酰氯

本发明中的活性姜黄素衍生物的制备方法，包括以下步骤：
1）生物素酰氯化：称取5mmol姜黄素，溶解于30‑60mL的三氯甲烷中，加入3‑5mL酰化试剂，在35‑50℃反应4‑10小时，得到蜡黄色产物；
2）去杂：将上述产物用旋转蒸发仪去溶剂后用三氯甲烷洗涤数次，旋转蒸发去除溶剂和杂质；
3）生物素化姜黄素的制备：称取2mmol姜黄素，溶解于30‑50mL的三氯甲烷中，加入2‑4mL有机碱，将上一步得到生物素酰氯溶解于15‑35mL三氯甲烷中滴加至姜黄素溶液中，在35‑45℃反应15‑30小时；
4）过滤，干燥：过滤，将滤液旋干，干燥得到粗产物生物素化姜黄素；
5）纯化：将上述生物素化姜黄素衍生物的粗产物转移至硅胶柱中，使用1:10的甲醇和三氯甲烷洗脱，收集目标产物，真空干燥得生物素化姜黄素。
本发明还可以采用以下技术措施进一步实现：
步骤1）中酰化试剂是指二氯亚砜、双光气或五氯化磷。
步骤3）中采用氮气保护，通过TLC检测反应进程。
步骤3）中所述有机碱是三乙胺或吡啶。
本发明中姜黄素衍生物是利用前药设计原理，选用纯天然无毒害的生物素和姜黄素进行拼合，生物素分子内含有两个氮原子和一个硫原子，得到的生物素化姜黄素，其稳定性好，生物利用度高，毒副作用小。
附图说明
图1本发明红外检测谱图；
图2本发明核磁共振检测图谱；
图3本发明质谱图谱。
具体实施方式
实施例1
生物素化姜黄素，其制备方法包括以下步骤：
1）生物素酰氯化：称取5mmol姜黄素，溶解于30‑60mL的三氯甲烷中，加入3‑5mL二氯亚砜，在35‑50℃反应4‑10小时，得到蜡黄色产物；
2）去杂：将上述产物用旋转蒸发仪去溶剂后用三氯甲烷洗涤数次，旋转蒸发去除溶剂和杂质；
3）生物素化姜黄素的制备：称取2mmol姜黄素，溶解于30‑50mL的三氯甲烷中，加入2‑4mL三乙胺，将上一步得到生物素酰氯溶解于15‑35mL三氯甲烷中滴加至姜黄素溶液中，在35‑45℃反应15‑30小时，对体系进行氮气保护， TLC检测反应进程；
4）过滤，干燥：过滤，将滤液旋干，干燥得到粗产物生物素化姜黄素；
5）纯化：将上述生物素化姜黄素衍生物的粗产物转移至硅胶柱中，使用1:10的甲醇和三氯甲烷洗脱，收集目标产物，真空干燥得生物素化姜黄素。
测定了生物素姜黄素熔点，比旋光度，其结构通过红外光谱，质谱及核磁共振谱确证数据如下：
MP：174‑175℃  [α]D22  = +87°
IR（KBr, ν/cm‑1）: 1762(C=O), 1701(C=O), 1628, 1511（Ar‑H）, 3536‑3290（br, Ar‑OH），其图谱如图1所示；
1H NMR(500MHz,CDCl3)：δ  0.89‑1.37（m, 8H, ‑CH2CH2CH2CH2‑), 3.95(s, 6H, 2×OCH3）, 4.21 ( m, 1H, CH), 4.36(m, 3H, CH‑CH2), 4.81(s, 1H, NH),  4.9(s, 2H, CH2) , 5.92(s, 1H, NH), 6.94(d, 2H, J=15.0Hz, C2‑C6), 7.11‑7.26 (m, 6H, Ar‑H), 7.64(d, 2H, J=15.0Hz, C1‑C7), 13.96（s, 1H, ArOH），其图谱如图2所示；
MS(ESI,m/z): [M+H]+=595.2，其图谱如图3所示。

实施例2
生物素化姜黄素，其制备方法包括以下步骤：
1）生物素酰氯化：称取5mmol姜黄素，溶解于30‑60mL的三氯甲烷中，加入3‑5mL双光气，在35‑50℃反应4‑10小时，得到蜡黄色产物；
2）去杂：将上述产物用旋转蒸发仪去溶剂后用三氯甲烷洗涤数次，旋转蒸发去除溶剂和杂质；
3）生物素化姜黄素的制备：称取2mmol姜黄素，溶解于30‑50mL的三氯甲烷中，加入2‑4mL三乙胺，将上一步得到生物素酰氯溶解于15‑35mL三氯甲烷中滴加至姜黄素溶液中，在35‑45℃反应15‑30小时，对体系进行氮气保护， TLC检测反应进程；
4）过滤，干燥：过滤，将滤液旋干，干燥得到粗产物生物素化姜黄素；
5）纯化：将上述生物素化姜黄素衍生物的粗产物转移至硅胶柱中，使用1:10的甲醇和三氯甲烷洗脱，收集目标产物，真空干燥得生物素化姜黄素。
测定了生物素姜黄素熔点，比旋光度，其结构通过红外光谱，质谱及核磁共振谱确证数据如下：
MP：174‑175℃  [α]D22  = +87°
IR（KBr, ν/cm‑1）: 1762(C=O), 1701(C=O), 1628, 1511（Ar‑H）, 3536‑3290（br, Ar‑OH），其图谱如图1所示；
1H NMR(500MHz,CDCl3)：δ  0.89‑1.37（m, 8H, ‑CH2CH2CH2CH2‑), 3.95(s, 6H, 2×OCH3）, 4.21 ( m, 1H, CH), 4.36(m, 3H, CH‑CH2), 4.81(s, 1H, NH),  4.9(s, 2H, CH2) , 5.92(s, 1H, NH), 6.94(d, 2H, J=15.0Hz, C2‑C6), 7.11‑7.26 (m, 6H, Ar‑H), 7.64(d, 2H, J=15.0Hz, C1‑C7), 13.96（s, 1H, ArOH），其图谱如图2所示；
MS(ESI,m/z): [M+H]+=595.2，其图谱如图3所示。
实施例3
生物素化姜黄素，其制备方法包括以下步骤：
1）生物素酰氯化：称取5mmol姜黄素，溶解于30‑60mL的三氯甲烷中，加入3‑5mL五氯化磷，在35‑50℃反应4‑10小时，得到蜡黄色产物；
2）去杂：将上述产物用旋转蒸发仪去溶剂后用三氯甲烷洗涤数次，旋转蒸发去除溶剂和杂质；
3）生物素化姜黄素的制备：称取2mmol姜黄素，溶解于30‑50mL的三氯甲烷中，加入2‑4mL吡啶，将上一步得到生物素酰氯溶解于15‑35mL三氯甲烷中滴加至姜黄素溶液中，在35‑45℃反应15‑30小时，对体系进行氮气保护， TLC检测反应进程；
4）过滤，干燥：过滤，将滤液旋干，干燥得到粗产物生物素化姜黄素；
5）纯化：将上述生物素化姜黄素衍生物的粗产物转移至硅胶柱中，使用1:10的甲醇和三氯甲烷洗脱，收集目标产物，真空干燥得生物素化姜黄素。
测定了生物素姜黄素熔点，比旋光度，其结构通过红外光谱，质谱及核磁共振谱确证数据如下：
MP：174‑175℃  [α]D22  = +87°
IR（KBr, ν/cm‑1）: 1762(C=O), 1701(C=O), 1628, 1511（Ar‑H）, 3536‑3290（br, Ar‑OH），其图谱如图1所示；
1H NMR(500MHz,CDCl3)：δ  0.89‑1.37（m, 8H, ‑CH2CH2CH2CH2‑), 3.95(s, 6H, 2×OCH3）, 4.21 ( m, 1H, CH), 4.36(m, 3H, CH‑CH2), 4.81(s, 1H, NH),  4.9(s, 2H, CH2) , 5.92(s, 1H, NH), 6.94(d, 2H, J=15.0Hz, C2‑C6), 7.11‑7.26 (m, 6H, Ar‑H), 7.64(d, 2H, J=15.0Hz, C1‑C7), 13.96（s, 1H, ArOH），其图谱如图2所示；
MS(ESI,m/z): [M+H]+=595.2，其图谱如图3所示。
实施例4：生物素姜黄素体外抑菌活性作用
菌液的制备：将金色葡萄球菌于最适温度活化2h再接入新鲜配制的活化培养基中，摇床培养24h,将所得菌液稀释成108cfu/mL。
最小抑菌浓度的测定：在培养皿中接入108cfu/mL金色葡萄球菌的试验菌种0.1mL，取0.1‑16mg/mL的浓度梯度姜黄素溶液，以及0.1‑8mg/mL浓度梯度的生物素化姜黄素溶液涂于各个培养皿，其中每个浓度做三个平行实验，以无菌生理盐水为空白对照实验，于金色葡萄球菌最佳培养温度培养一个生长周期。
抑菌圈的测定：以经过无菌过滤的漱口水为阳性对照，以无菌生理盐水为阴性对照。于各培养皿中分别接入108cfu/mL实验菌种0.1mL，将6mm灭菌滤纸片分别蘸取等量的姜黄素溶液，生物素化姜黄素溶液，漱口水，无菌生理盐水，贴于以接入试验菌种的平板上，于最佳培养温度培养一个生长周期，测量各抑菌圈的直径。
抑菌实验结果：姜黄素浓度为14mg/mL（0.038mmol/mL），生物素化姜黄素浓度为4mg/mL（0.0067mmol/mL）时，对金色葡萄球菌有明显的抑菌效果，抑菌圈直径为10mm和12mm，其抑菌活性是姜黄素的5.67倍。

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1、(10)申请公布号 CN 103044443 A (43)申请公布日 2013.04.17 CN 103044443 A *CN103044443A* (21)申请号 201210525212.2 (22)申请日 2012.12.10 C07D 495/04(2006.01) A61P 31/04(2006.01) (71)申请人山东大学（威海）地址 264209 山东省威海市文化西路 180 号 (72)发明人怀其勇马庆林 (74)专利代理机构青岛高晓专利事务所 37104 代理人宋文学 (54) 发明名称一种活性姜黄素衍生物及其制备方法 (57) 摘要本发明是关于一种活性。

2、姜黄素衍生物及其制备方法，活性姜黄素衍生物是利用前药设计原理，选用纯天然无毒害的生物素和姜黄素进行拼合，生物素分子内含有两个氮原子和一个硫原子，得到的生物素化姜黄素，其稳定性好，生物利用度高，毒副作用小，其具体结构式如下：。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页说明书 5 页附图 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书 1 页说明书 5 页附图 3 页 1/1 页 2 1. 一种活性姜黄素衍生物，其特征在于：所述衍生物是生物素化姜黄素，其具有下列结构式：。 2. 一种制备权利要求 1 所述的活性姜。

3、黄素衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1）生物素酰氯化：称取 5mmol 姜黄素，溶解于 30-60mL 的三氯甲烷中，加入 3-5mL 酰化试剂，在 35-50反应 4-10 小时，得到蜡黄色产物； 2）去杂：将上述产物用旋转蒸发仪去溶剂后用三氯甲烷洗涤数次，旋转蒸发去除溶剂和杂质； 3）生物素化姜黄素的制备：称取 2mmol 姜黄素，溶解于 30-50mL 的三氯甲烷中，加入 2-4mL 有机碱，将上一步得到生物素酰氯溶解于 15-35mL 三氯甲烷中滴加至姜黄素溶液中，在 35-45反应 15-30 小时； 4）过滤，干燥。

4、：过滤，将滤液旋干，干燥得到粗产物生物素化姜黄素； 5）纯化：将上述生物素化姜黄素衍生物的粗产物转移至硅胶柱中，使用 1:10 的甲醇和三氯甲烷洗脱，收集目标产物，真空干燥得生物素化姜黄素。 3. 根据权利要求 1 所述的活性姜黄素衍生物的制备方法，其特征在于：步骤 1）中酰化试剂是指二氯亚砜、双光气或五氯化磷。 4. 根据权利要求 1 所述的活性姜黄素衍生物的制备方法，其特征在于：步骤 3）中采用氮气保护，通过 TLC 检测反应进程。 5. 根据权利要求 1 所述的活性姜黄素衍生物的制备方法，其特征在于：步骤 3）中所述有机碱是三乙胺或。

5、吡啶。权利要求书 CN 103044443 A 2 1/5 页 3 一种活性姜黄素衍生物及其制备方法技术领域 0001 本发明涉及一种姜黄素衍生物，特别是涉及一种活性姜黄素衍生物及其制备方法。背景技术 0002 姜黄素 ( Curcumin) 是多年生草本植物姜黄的主要有效成分之一 , 是一种黄色略显酸性的二苯基庚烃物质。近年来，大量研究发现姜黄素具有抗氧化、抗菌及免疫调节、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化等生理和药理作用。而且 , 姜黄素作为一种天然药物，并对人畜几乎无毒，其药用价值已经拓展到现代医学的各个领域而倍受关注。且国内外对姜黄素衍生物的研究主要集中在活泼亚。

6、甲基上，对酚羟基的研究还很少，故对这一空白的研究意义重大。 0003 生物素即维生素 H，在医药方面除了用于生物素缺乏症的治疗外还可以辅助治疗糖尿病，并且有良好的耐受性和生物兼容性。通过人和各种动物实验发现即使大量的用药也不会产生副作用。汪雪峰，丁绍民曾分别对急性，亚慢性的毒性给药情况做了实验，结果显示，生物素对心率、血压、血循环、呼吸及胃分泌均没有影响（Wang XF( 汪雪峰 )， The total synthesis of biotin.DBeijing: Beijing Institute of Technology University.2003）。。

7、此外，国内外对生物素的研究主要集中在生物素 - 亲和素系统，以及新材料的发展上。最近研究发现生物素对林可霉素的生物合成起到了积极地作用，其生物效价是原来的 136.62%（LiX( 李啸 )， ChuJ( 储炬 )etal， Effects of biotinandaminoacids on biosynthesisof lincomycin， Chinese Journal of Antibiotics( 中国抗生素志 ) J.2009,33(1):6-10）；生物素化白藜芦醇保持了原有的抗癌活性并具有剂量依赖关系（FengL( 冯磊 ) etal， Preparation 。

8、and Pharmacodynamic Evaluation of Biotinylated Resveratrol， NatProd ResDev( 天然产物研究与开发 ).J.2009(21):988-991）。据文献报道，含有杂原子的姜黄素酯化物在药效上要强于姜黄素本身（HuangSF( 黄淑芳 ), etal. Synthesis and antitumor activity study of nitrogen containing curcumin derivatives.Chinese Journal of Medicinal Chemistry( 中国药物化学杂志 )J.。

9、2011 21,(2):88-95）。发明内容 0004 本发明的目的在于，提供一种新的活性姜黄素衍生物及其制备方法，本发明是在保证安全性、无毒副作用的基础上，增强姜黄素的生物活性，以获得稳定性好，生物利用度高，毒副作用小的新型药物。 0005 本发明的技术方案是：一种活性姜黄素衍生物，是生物素化姜黄素，其具有下列结构式：说明书 CN 103044443 A 3 2/5 页 4 本发明中生物素姜黄素的制备是以生物素、姜黄素等为原料，所用原料均可购买得到，实验原理如下：生物素生物素酰氯本发明中的活性姜黄素衍生物的制备方法，包括以下步骤：。

10、1）生物素酰氯化：称取 5mmol 姜黄素，溶解于 30-60mL 的三氯甲烷中，加入 3-5mL 酰化试剂，在 35-50反应 4-10 小时，得到蜡黄色产物； 2）去杂：将上述产物用旋转蒸发仪去溶剂后用三氯甲烷洗涤数次，旋转蒸发去除溶剂和杂质； 3）生物素化姜黄素的制备：称取 2mmol 姜黄素，溶解于 30-50mL 的三氯甲烷中，加入 2-4mL 有机碱，将上一步得到生物素酰氯溶解于 15-35mL 三氯甲烷中滴加至姜黄素溶液中，在 35-45反应 15-30 小时； 4）过滤，干燥：过滤，将滤液旋干，干燥得到粗产物生物素化姜黄。

11、素； 5）纯化：将上述生物素化姜黄素衍生物的粗产物转移至硅胶柱中，使用 1:10 的甲醇和三氯甲烷洗脱，收集目标产物，真空干燥得生物素化姜黄素。 0006 本发明还可以采用以下技术措施进一步实现：步骤 1）中酰化试剂是指二氯亚砜、双光气或五氯化磷。 0007 步骤 3）中采用氮气保护，通过 TLC 检测反应进程。说明书 CN 103044443 A 4 3/5 页 5 0008 步骤 3）中所述有机碱是三乙胺或吡啶。 0009 本发明中姜黄素衍生物是利用前药设计原理，选用纯天然无毒害的生物素和姜黄素进行拼合，生物素分子内含有两个氮原子和一个硫原子，得。

12、到的生物素化姜黄素，其稳定性好，生物利用度高，毒副作用小。附图说明 0010 图 1 本发明红外检测谱图；图 2 本发明核磁共振检测图谱；图 3 本发明质谱图谱。具体实施方式 0011 实施例 1 生物素化姜黄素，其制备方法包括以下步骤： 1）生物素酰氯化：称取 5mmol 姜黄素，溶解于 30-60mL 的三氯甲烷中，加入 3-5mL 二氯亚砜，在 35-50反应 4-10 小时，得到蜡黄色产物； 2）去杂：将上述产物用旋转蒸发仪去溶剂后用三氯甲烷洗涤数次，旋转蒸发去除溶剂和杂质； 3）生物素化姜黄素的制备：称取 2mmol 姜黄素。

13、，溶解于 30-50mL 的三氯甲烷中，加入 2-4mL 三乙胺，将上一步得到生物素酰氯溶解于 15-35mL 三氯甲烷中滴加至姜黄素溶液中，在 35-45反应 15-30 小时，对体系进行氮气保护， TLC 检测反应进程； 4）过滤，干燥：过滤，将滤液旋干，干燥得到粗产物生物素化姜黄素； 5）纯化：将上述生物素化姜黄素衍生物的粗产物转移至硅胶柱中，使用 1:10 的甲醇和三氯甲烷洗脱，收集目标产物，真空干燥得生物素化姜黄素。 0012 测定了生物素姜黄素熔点，比旋光度，其结构通过红外光谱，质谱及核磁共振谱确证数据如下： MP ： 174-17。

14、5 D22 = +87 IR（KBr, /cm-1） : 1762(C=O), 1701(C=O), 1628, 1511（Ar-H） , 3536-3290（br, Ar-OH），其图谱如图 1 所示； 1H NMR(500MHz,CDCl3) ： 0.89-1.37（m, 8H, -CH2CH2CH2CH2-), 3.95(s, 6H, 2OCH3） , 4.21 ( m, 1H, CH), 4.36(m, 3H, CH-CH2), 4.81(s, 1H, NH), 4.9(s, 2H, CH2) , 5.92(s, 1H, NH), 6.94(d, 2H, J=15.0Hz, C2。

15、-C6), 7.11-7.26 (m, 6H, Ar-H), 7.64(d, 2H, J=15.0Hz, C1-C7), 13.96（s, 1H, ArOH），其图谱如图 2 所示； MS(ESI,m/z): M+H+=595.2，其图谱如图 3 所示。 0013 实施例 2 生物素化姜黄素，其制备方法包括以下步骤： 1）生物素酰氯化：称取 5mmol 姜黄素，溶解于 30-60mL 的三氯甲烷中，加入 3-5mL 双光气，在 35-50反应 4-10 小时，得到蜡黄色产物； 2）去杂：将上述产物用旋转蒸发仪去溶剂后用三氯甲烷洗涤数次，旋转蒸发去除溶剂和。

16、杂质；说明书 CN 103044443 A 5 4/5 页 6 3）生物素化姜黄素的制备：称取 2mmol 姜黄素，溶解于 30-50mL 的三氯甲烷中，加入 2-4mL 三乙胺，将上一步得到生物素酰氯溶解于 15-35mL 三氯甲烷中滴加至姜黄素溶液中，在 35-45反应 15-30 小时，对体系进行氮气保护， TLC 检测反应进程； 4）过滤，干燥：过滤，将滤液旋干，干燥得到粗产物生物素化姜黄素； 5）纯化：将上述生物素化姜黄素衍生物的粗产物转移至硅胶柱中，使用 1:10 的甲醇和三氯甲烷洗脱，收集目标产物，真空干燥得生物素化姜黄素。。

17、0014 测定了生物素姜黄素熔点，比旋光度，其结构通过红外光谱，质谱及核磁共振谱确证数据如下： MP ： 174-175 D22 = +87 IR（KBr, /cm-1） : 1762(C=O), 1701(C=O), 1628, 1511（Ar-H） , 3536-3290（br, Ar-OH），其图谱如图 1 所示； 1H NMR(500MHz,CDCl3) ： 0.89-1.37（m, 8H, -CH2CH2CH2CH2-), 3.95(s, 6H, 2OCH3） , 4.21 ( m, 1H, CH), 4.36(m, 3H, CH-CH2), 4.81(s, 1H, 。

18、NH), 4.9(s, 2H, CH2) , 5.92(s, 1H, NH), 6.94(d, 2H, J=15.0Hz, C2-C6), 7.11-7.26 (m, 6H, Ar-H), 7.64(d, 2H, J=15.0Hz, C1-C7), 13.96（s, 1H, ArOH），其图谱如图 2 所示； MS(ESI,m/z): M+H+=595.2，其图谱如图 3 所示。 0015 实施例 3 生物素化姜黄素，其制备方法包括以下步骤： 1）生物素酰氯化：称取 5mmol 姜黄素，溶解于 30-60mL 的三氯甲烷中，加入 3-5mL 五氯化磷，在 35-50反。

19、应 4-10 小时，得到蜡黄色产物； 2）去杂：将上述产物用旋转蒸发仪去溶剂后用三氯甲烷洗涤数次，旋转蒸发去除溶剂和杂质； 3）生物素化姜黄素的制备：称取 2mmol 姜黄素，溶解于 30-50mL 的三氯甲烷中，加入 2-4mL 吡啶，将上一步得到生物素酰氯溶解于 15-35mL 三氯甲烷中滴加至姜黄素溶液中，在 35-45反应 15-30 小时，对体系进行氮气保护， TLC 检测反应进程； 4）过滤，干燥：过滤，将滤液旋干，干燥得到粗产物生物素化姜黄素； 5）纯化：将上述生物素化姜黄素衍生物的粗产物转移至硅胶柱中，使用 1:10 的甲。

20、醇和三氯甲烷洗脱，收集目标产物，真空干燥得生物素化姜黄素。 0016 测定了生物素姜黄素熔点，比旋光度，其结构通过红外光谱，质谱及核磁共振谱确证数据如下： MP ： 174-175 D22 = +87 IR（KBr, /cm-1） : 1762(C=O), 1701(C=O), 1628, 1511（Ar-H） , 3536-3290（br, Ar-OH），其图谱如图 1 所示； 1H NMR(500MHz,CDCl3) ： 0.89-1.37（m, 8H, -CH2CH2CH2CH2-), 3.95(s, 6H, 2OCH3） , 4.21 ( m, 1H, CH), 。

21、4.36(m, 3H, CH-CH2), 4.81(s, 1H, NH), 4.9(s, 2H, CH2) , 5.92(s, 1H, NH), 6.94(d, 2H, J=15.0Hz, C2-C6), 7.11-7.26 (m, 6H, Ar-H), 7.64(d, 2H, J=15.0Hz, C1-C7), 13.96（s, 1H, ArOH），其图谱如图 2 所示； MS(ESI,m/z): M+H+=595.2，其图谱如图 3 所示。 0017 实施例 4 ：生物素姜黄素体外抑菌活性作用说明书 CN 103044443 A 6 5/5 页 7 菌液的制备：将金色葡。

22、萄球菌于最适温度活化 2h 再接入新鲜配制的活化培养基中，摇床培养 24h, 将所得菌液稀释成 108cfu/mL。 0018 最小抑菌浓度的测定：在培养皿中接入 108cfu/mL 金色葡萄球菌的试验菌种 0.1mL，取0.1-16mg/mL的浓度梯度姜黄素溶液，以及0.1-8mg/mL浓度梯度的生物素化姜黄素溶液涂于各个培养皿，其中每个浓度做三个平行实验，以无菌生理盐水为空白对照实验，于金色葡萄球菌最佳培养温度培养一个生长周期。 0019 抑菌圈的测定：以经过无菌过滤的漱口水为阳性对照，以无菌生理盐水为阴性对照。于各培养皿中分别接入 108cfu/mL 实验菌种。

23、 0.1mL，将 6mm 灭菌滤纸片分别蘸取等量的姜黄素溶液，生物素化姜黄素溶液，漱口水，无菌生理盐水，贴于以接入试验菌种的平板上，于最佳培养温度培养一个生长周期，测量各抑菌圈的直径。 0020 抑菌实验结果：姜黄素浓度为 14mg/mL（0.038mmol/mL），生物素化姜黄素浓度为 4mg/mL（0.0067mmol/mL）时，对金色葡萄球菌有明显的抑菌效果，抑菌圈直径为 10mm 和 12mm，其抑菌活性是姜黄素的 5.67 倍。说明书 CN 103044443 A 7 1/3 页 8 图 1 说明书附图 CN 103044443 A 8 2/3 页 9 图 2 说明书附图 CN 103044443 A 9 3/3 页 10 图 3 说明书附图 CN 103044443 A 10 。

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