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1、10申请公布号CN102077904A43申请公布日20110601CN102077904ACN102077904A21申请号201010122147X22申请日20100311A23K1/16200601A23K1/14200601A23K1/1020060171申请人哈尔滨龙猪科技开发有限公司地址150000黑龙江省哈尔滨市南岗区嵩山路666号盟科时代小区E栋2号门市72发明人陈丽秋王淼曾广伟54发明名称乳酸菌生物饲料添加剂的制备方法57摘要本发明涉及一种乳酸菌生物饲料添加剂的制备方法，利用乳酸菌中的优质乳杆菌和乳球菌经培养得到高活性的乳酸菌发酵液，利用脱脂乳等作为保护剂利用真空冷冻干燥机。
2、制成活菌数高达1011/克的活菌添加剂。本生物饲料添加剂的优点在于经过真空冷冻干燥所得到的乳酸菌活菌添加剂活性高活力强，发酵产物生物学功能稳定，适于工业连续培养且成本低，便于操作等优点。此外经过此饲料添加剂发酵的饲料能促进动物生长、调节胃畅道正常菌群、维持微生态平衡、而且降解内毒素、抑制肠道内腐败菌生长、提高机体免疫力等，同时对于致病菌如痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌、葡萄球蔺等有拮抗作用，因此应用于养殖业中即可以降低养殖成本，又有效的杜绝了抗生素滥用。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页CN102077907A1/1页21一种乳酸菌。
3、生物饲料添加剂的制备方法，其特征是1短乳杆菌LACTOBACILLUSBREVIS、德氏乳杆菌DELBRUECKIISUBSPLACTIS、干酪乳杆菌PARACASEI、乳酸乳球菌LACTOBACILL、戊糖乳杆菌LACTOBACILLUSPENTOSACEUS、布氏乳杆菌LACTOBACILLUS、植物乳杆菌LACTOBACILLUSPLANTARUM、耐酸乳杆菌LACTOBACILLUSACETOTOLERANS的菌种斜面备用；2制备一次活化培养培养基，其培养基的配方如下大豆蛋白胨50G，牛肉粉30G，酵母粉30G，葡萄糖200G，乳糖20G，番茄汁50ML，去离子水1000ML，将以上组。
4、份溶解于去离子水中，将其装入21的三角瓶中，在121的条件下高压蒸汽灭菌20MIN后，放入4的冰箱中待用；3一次活化培养将一次活化培养的培养基20ML，分装到100ML培养瓶中，挑取短乳杆菌LACTOBACILLUSBREVIS、德氏乳杆菌DELBRUECKIISUBSPLACTIS、干酪乳杆菌PARACASEI、乳酸乳球菌LACTOBACILL、戊糖乳杆菌LACTOBACILLUSPENTOSACEUS、布氏乳杆菌LACTOBACILLUS、植物乳杆菌LACTOBACILLUSPLANTARUM、耐酸乳杆菌LACTOBACILLUSACETOTOLERANS菌种斜面上的一个单菌落，将各个单菌。
5、转种到一次活化培养的培养基中，在温度为361条件下，厌氧静止培养1618H，待测定PH值为3845为时，表明一次活化培养状态达到要求。4配制二次扩大培养大豆蛋白胨200G，棉籽糖20G，番茄汁100ML，氯化钠10克，去离子水2000ML，将以上各组分溶解在去离子水中，加入到容量为41的小型发酵罐中，在121条件下高压蒸汽灭菌20MIN待用；5二次扩大培养将各个菌株的一次活化培养的发酵液同时接种到二次扩大培养培养的培养液中，将温度调到40恒温厌养静止培养1214H，待发酵液的PH达到3845时，表明二次扩大培养状态达到要求；6配制冻干保护剂脱脂乳720G，甘油30ML，乳糖200G，葡萄糖20。
6、0G，去离子水6000ML，将以上组份溶解到去离子水中，搅拌均匀后装到101的三角瓶中，在118条件下高压蒸汽灭菌15MIN后放入4的冰箱中待用；7收集发酵菌泥将二次扩大培养得到的发酵液在无菌条件下装入离心机的离心管中，在10000RPM/MIN条件下，离心5MIN后，在无菌的超净工作台内，倒掉上清液，所得到的干物质为菌泥，收集菌泥后立即加入到装有动感保护记的101的三角瓶中待用；8将收集的菌泥与冻干保护剂混匀，其中发酵后菌泥与保护剂的比例为13；9冻干将混合均匀的菌泥和冻干保护剂装入冻干瓶中，冻干瓶转入40的冰箱中预冻4H，然后将冻干瓶转入真空冷冻干燥机，冻干24H，即可以得到活菌数达到10。
7、11/克的乳酸菌饲料添加剂。权利要求书CN102077904ACN102077907A1/3页3乳酸菌生物饲料添加剂的制备方法0001技术领域本发明涉及一种乳酸菌生物饲料添加剂的制备方法。技术背景0002进入21世纪人民对肉产品的质量有要求越来越高，其对营养品质的要求也越来越高，提高肉质产品的质量其源头在于饲料的质量。因此提高饲料的营养质量和营养成分对于养殖业极为重要。目前，一些禽畜饲料已经实现产品化、标准化，含有氨基酸的饲料；含维生素饲料含抗生素饲料含中草药饲料，这些添加剂对禽畜的利用率低，含有副作用，有害残留进入生物链直接进入人体，即会危害人类健康又会对环境造成危害。0003发明内容本发明。
8、的目的是提供一种促进动物肠道消化功能，减少药物使用，降低饲料成本，降低出栏时间，提高肉质质量。本发明技术方案为一种乳酸菌生物饲料添加剂的制备方法1从国家微生物菌种保藏中心购买短乳杆菌LACTOBACILLUSBREVIS、德氏乳杆菌DDLBRUECKIISUBSPLACTIS、干酪乳杆菌PARACASEI、乳酸乳球菌LACTOBACILL、戊糖乳杆菌LACTOBACILLUSPENTOSACEUS、布氏乳杆菌LACTOBACILLUS、植物乳杆菌LACTOBACILLUSPLANTARUM、耐酸乳杆菌LACTOBACILLUSACETOTOLERANS的菌种斜面备用；00042制备一次活化培养。
9、培养基，其培养基的配方如下大豆蛋白胨50G，牛肉粉30G，酵母粉30G，葡萄糖200G，乳糖20G，番茄汁50ML，去离子水1000ML，将以上组份溶解于去离子水中，将其装入2L的三角瓶中，在121的条件下高压蒸汽灭菌20MIN后，放入4的冰箱中待用；00053一次活化培养将一次活化培养的培养基20ML，分装到100ML培养瓶中，挑取短乳杆菌LACTOBACILLUSBREVIS、德氏乳杆菌DELBRUECKIISUBSPLACTIS、干酪乳杆菌PARACASEI、乳酸乳球菌LACTOBACILL、戊糖乳杆菌LACTOBACILLUSPENTOSACEUS、布氏乳杆菌LACTOBACILLUS。
10、、植物乳杆菌LACTOBACILLUSPLANTARUM、耐酸乳杆菌LACTOBACILLUSACETOTOLERANS菌种斜面上的一个单菌落，将各个单菌转种到一次活化培养的培养基中，在温度为361条件下，厌氧静止培养1618H，待测定PH值为3845为时，表明一次活化培养状态达到要求。00064配制二次扩大培养大豆蛋白胨200G，棉籽糖20G，番茄汁100ML，氯化钠10克，去离子水2000ML，将以上各组分溶解在去离子水中，加入到容量为4L的小型发酵罐中，在121条件下高压蒸汽灭菌20MIN待用；00075二次扩大培养将各个菌株的一次活化培养的发酵液同时接种到二次扩大培养培养的培养液中，将。
11、温度调到40恒温厌养静止培养1214H，待发酵液的PH达到3845时，表明二次扩大培养状态达到要求；00086配制冻干保护剂脱脂乳720G，甘油30ML，乳糖200G，葡萄糖200G，去离子水6000ML，将以上组份溶解到去离子水中，搅拌均匀后装到10L的三角瓶中，在118条件下高压蒸汽灭菌15MIN后放入4的冰箱中待用；00097收集发酵菌泥将二次扩大培养得到的发酵液在无菌条件下装入离心机的离说明书CN102077904ACN102077907A2/3页4心管中，在10000RPM/MIN条件下，离心5MIN后，在无菌的超净工作台内，倒掉上清液，所得到的干物质为菌泥，收集菌泥后立即加入到装有。
12、动感保护记的10L的三角瓶中待用；00108将收集的菌泥与冻干保护剂混匀，其中发酵后菌泥与保护剂的比例为13；00119冻干将混合均匀的菌泥和冻干保护剂装入冻干瓶中，冻干瓶转入40的冰箱中预冻4H，然后将冻干瓶转入真空冷冻干燥机，冻干24H，即可以得到活菌数达到1011/克的乳酸菌饲料添加剂。0012本发明的优点在于0013利用国内外研究比较成熟的乳酸菌菌株作微生物饲料添加剂的发酵菌株，其理化指标稳定，生物学功能稳定安全，在禽畜肠道内的作用透彻，易于在肠道内粘附并发挥起作用，且有较强的繁殖能力和生物活性，便于工厂化培养的优质菌株。而且在生产工艺方面操作简单，成本低量可以连续操作，且使用该饲料添。
13、加剂可以促进动物肠道消化功能，减少药物使用，降低饲料成本，降低出栏时间，提高肉质质量。上述生物饲料添加剂的制备方法，其特点在于三个方面，一是菌种选择的优化；二是发酵工艺的简单低成本；三是冻干工艺的高效0014本发明的特点在于利用乳酸菌中的优质菌株短乳杆菌LACTOBACILLUSBREVIS、德氏乳杆菌DELBRUECKIISUBSPLACTIS、干酪乳杆菌PARACASEI、乳酸乳球菌LACTOBACILL戊糖乳杆菌LACTOBACILLUSPENTOSACEUS布氏乳杆菌LACTOBACILLUS植物乳杆菌LACTOBACILLUSPLANTARUM耐酸乳杆菌LACTOBACILLUSAC。
14、ETOTOLERANS纯化后经过一次扩大培养，二次扩大培养用脱脂乳甘油葡萄糖乳糖蔗糖作为保护剂经过真空冷冻干燥而得到的活菌数109/克的饲料添加剂。0015而乳酸菌是禽畜肠道的正常有益微生物与饲料的消化吸收有着密切的关系。保持超岛内益生菌群正常时，即可以提高食物消化率和生物效价；控制内毒素；抑制肠道内腐败菌生长。同时益生菌代谢产生的生物菌素对于致病菌如痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌、葡萄球蔺等有拮抗作，提高机体免疫力等。0016具体实施方式0017一种乳酸菌生物饲料添加剂的制备方法00181从国家微生物菌种保藏中心购买短乳杆菌LACTOBACILLUSBREVIS、德氏乳杆菌DELB。
15、RUECKIISUBSPLACTIS、干酪乳杆菌PARACASEI、乳酸乳球菌LACTOBACILL、戊糖乳杆菌LACTOBACILLUSPENTOSACEUS、布氏乳杆菌LACTOBACILLUS、植物乳杆菌LACTOBACILLUSPLANTARUM、耐酸乳杆菌LACTOBACILLUSACETOTOLERANS的菌种斜面备用；00192制备一次活化培养培养基，其培养基的配方如下大豆蛋白胨50G，牛肉粉30G，酵母粉30G，葡萄糖200G，乳糖20G，番茄汁50ML，去离子水1000ML，将以上组份溶解于去离子水中，将其装入2L的三角瓶中，在121的条件下高压蒸汽灭菌20MIN后，放入4的。
16、冰箱中待用；00203一次活化培养将一次活化培养的培养基20ML，分装到100ML培养瓶中，挑取短乳杆菌LACTOBACILLUSBREVIS、德氏乳杆菌DELBRUECKIISUBSPLACTIS、干酪乳杆说明书CN102077904ACN102077907A3/3页5菌PARACASEI、乳酸乳球菌LACTOBACILL、戊糖乳杆菌LACTOBACILLUSPENTOSACEUS、布氏乳杆菌LACTOBACILLUS、植物乳杆菌LACTOBACILLUSPLANTARUM、耐酸乳杆菌LACTOBACILLUSACETOTOLERANS菌种斜面上的一个单菌落，将各个单菌转种到一次活化培养的培。
17、养基中，在温度为361条件下，厌氧静止培养1618H，待测定PH值为3845为时，表明一次活化培养状态达到要求。00214配制二次扩大培养大豆蛋白胨200G，棉籽糖20G，番茄汁100ML，氯化钠10克，去离子水2000ML，将以上各组分溶解在去离子水中，加入到容量为4L的小型发酵罐中，在121条件下高压蒸汽灭菌20MIN待用；00225二次扩大培养将各个菌株的一次活化培养的发酵液同时接种到二次扩大培养培养的培养液中，将温度调到40恒温厌养静止培养1214H，待发酵液的PH达到3845时，表明二次扩大培养状态达到要求；00236配制冻干保护剂脱脂乳720G，甘油30ML，乳糖200G，葡萄糖2。
18、00G，去离子水6000ML，将以上组份溶解到去离子水中，搅拌均匀后装到10L的三角瓶中，在118条件下高压蒸汽灭菌15MIN后放入4的冰箱中待用；00247收集发酵菌泥将二次扩大培养得到的发酵液在无菌条件下装入离心机的离心管中，在10000RPM/MIN条件下，离心5MIN后，在无菌的超净工作台内，倒掉上清液，所得到的干物质为菌泥，收集菌泥后立即加入到装有动感保护记的10L的三角瓶中待用；00258将收集的菌泥与冻干保护剂混匀，其中发酵后菌泥与保护剂的比例为13；00269冻干将混合均匀的菌泥和冻干保护剂装入冻干瓶中，冻干瓶转入40的冰箱中预冻4H，然后将冻干瓶转入真空冷冻干燥机，冻干24H，即可以得到活菌数达到1011/克的乳酸菌饲料添加剂。说明书CN102077904A。