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1、(10)申请公布号 CN 103145652 A (43)申请公布日 2013.06.12 CN 103145652 A *CN103145652A* (21)申请号 201310067916.4 (22)申请日 2013.03.05 C07D 305/14(2006.01) (71)申请人 无锡紫熙生物科技有限公司 地址 214092 江苏省无锡市滨湖区马山梅梁 西路 88 号 (72)发明人 栾宏伟 张辉 (74)专利代理机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 代理人 楼高潮 (54) 发明名称 一种从红豆杉属植物中提取紫杉醇及其衍生 物的方法 (57) 摘要 本发明公布了一种从。
2、红豆杉属植物中提取紫 杉醇及其衍生物的方法， 该方法利用 N,N- 二甲基 甲酰胺和 / 或二甲基亚砜的水溶液为提取剂， 经 连续超声或加热搅拌提取， 提取液用大孔吸附树 脂吸附， 再用乙醇洗脱， 蒸干溶剂即得提取物。本 发明所提供的提取方法， 可以同时提取出紫杉醇、 10- 去乙酰巴卡亭 III、 10- 去乙酰紫杉醇、 7- 木 糖 -10- 去乙酰紫杉醇等有用紫杉烷化合物， 具有 提取率高， 成本低等特点 ； 同时大大降低有机溶 剂的使用量， 降低环境污染， 有利于大规模工业生 产。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12。
3、)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 (10)申请公布号 CN 103145652 A CN 103145652 A *CN103145652A* 1/1 页 2 1. 一种从红豆杉属植物中提取紫杉醇及其衍生物的方法， 其特征在于包括如下步骤 ： a、 将红豆杉枝叶或根须 50烘干后， 粉碎成 10-100 目的粉末 ； b、 用提取剂对红豆杉粉末进行超声或加热搅拌提取， 重复 2-5 次， 所述提取剂为溶剂 和水的混合物， 所述溶剂为 N,N- 二甲基甲酰胺或二甲基亚砜， 或二者任意比例的混合物， 所述溶剂与水的体积比为 1 ： 9 99， 红豆杉粉末干重与提取剂的体积比 （g:mL）。
4、 为 1 3 10， 提取温度为 20 50 度， 提取时间为 0.5 5h ； c、 合并提取液， 过滤后过大孔吸附树脂柱， 大孔吸附树脂重量与红豆杉粉末干重的比 例为 1 ： 2 20 ； d、 吸附完毕后， 先用水进行洗脱， 再用乙醇进行洗脱， 收集乙醇洗脱液， 减压蒸干即得 提取物， 所述乙醇的浓度为 70 100%， 体积为 3 10 个树脂柱体积。 2. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 所述步骤 a 中， 将红豆杉枝叶或根须烘干 后， 粉碎成 40-60 目的粉末。 3.如权利要求1所述的方法， 其特征在于 ： 所述步骤b中， 所述溶剂与水的体积比为1 ： 20 30。
5、。 4. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 所述步骤 b 中， 所述红豆杉粉末干重与提取 剂的体积比 （g:mL） 为 1 ： 5 8。 5. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 所述步骤 b 中， 所述提取时间为 2 3h。 6. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 所述步骤 c 中， 所述大孔吸附树脂为 AB-8、 D101、 HP20 或 XAD1600。 7. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 所述步骤 c 中， 所述大孔吸附树脂重量与红 豆杉粉末干重的比例为 1 ： 5 10。 8.如权利要求1所述的方法， 其特征在于 ： 所述步骤d中， 。
6、所述乙醇的浓度为8090%。 9. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 所述步骤 d 中， 所述乙醇的体积为 4 6 个 树脂柱体积。 权 利 要 求 书 CN 103145652 A 2 1/5 页 3 一种从红豆杉属植物中提取紫杉醇及其衍生物的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种从植物中分离提取天然有机化合物的方法， 具体地说是一种从红 豆杉属植物枝叶或根须中提取紫杉醇及其衍生物的方法。 背景技术 0002 紫杉醇 （简写 T， 式） 作为临床一线抗癌用药， 被广泛用于卵巢癌、 乳腺癌、 肺癌等 多种实体癌的治疗。 目前规模化生产紫杉醇的途径主要是从红豆杉属植物中直接提取或提。
7、 取其半合成前体10- 去乙酰巴卡亭 （简写 10-DAB ， 式） ， 再通过合成手段合成紫 杉醇。除以上两种化合物外， 在红豆杉属植物中， 还含有很多结构类似的紫杉烷化合物， 例 如10-去乙酰紫杉醇 （简写10-DAT） 、 7-木糖-10-去乙酰紫杉醇 （简写10-DAXT） 、 巴卡亭等， 利用这些化合物， 也可以合成紫杉醇或 10-DAB ， 进而再半合成紫杉醇。由于这些化合物 在红豆杉植物中含量是紫杉醇的几倍到几十倍， 因此实际生产中必须要将这些有用的紫杉 烷化合物充分提取并加以利用， 才能达到降低成本， 保护资源的目的。 0003 较为常用的从红豆杉属植物中提取制备紫杉醇方法，。
8、 其工艺路线一般为 ： 有机溶 剂浸出 ( 或超声波提取 )脱脂萃取得到粗提物， 并在此基础上发展了许多改进工 艺。但是， 这些现有工艺均大量使用溶剂， 容易造成环境污染， 成本也大大提高。 0004 0005 式 紫杉醇 式 10-DAB 0006 中国专利 200710178672.1 公开了一种新型提取方法， 即使用含有机酸的水溶液 作为提取溶剂， 通过超声方式， 可快速高效的从欧洲红豆杉枝叶中提取出 10-DAB ， 提取 率达到 85-90%， 该方法的优点是不直接使用溶剂进行提取， 大大降低了成本， 保护了环境。 但是， 由于溶解度的原因， 该方法无法应用于其他紫杉烷的提取， 造成。
9、了资源的浪费。 发明内容 0007 本发明的目的是克服现有从红豆杉中提取紫杉烷化合物方法中的缺陷， 提供了一 种溶剂用量极低、 收率高、 能一次性提取出多种有用紫杉烷化合物的的提取方法。 0008 本发明提供了如下的技术方案， 包括以下步骤 ： 0009 a、 将红豆杉枝叶或根须50烘干后， 粉碎成10-100目的粉末， 优选40-60目， 所述 红豆杉可以是欧洲红豆杉， 曼地亚红豆杉， 云南红豆杉和南方红豆杉等 ； 0010 b、 用提取剂对红豆杉粉末进行超声或加热搅拌提取， 重复 2-5 次， 所用提取剂为 溶剂和水的混合物， 所选溶剂为 N,N- 二甲基甲酰胺或二甲基亚砜， 或二者任意比。
10、例的混合 物， 溶剂与水的体积比为 1 ： 9 99， 优选 1 ： 20 30 ； 红豆杉粉末干重与提取剂的体积比 说 明 书 CN 103145652 A 3 2/5 页 4 （g:mL） 为 1 3 10， 优选 1 ： 5 8 ； 提取温度为 20 50 度， 优选 30 40 度 ； 提取时间 为 0.5 5h， 优选 2 3h ； 0011 c、 合并提取液， 过滤后过大孔吸附树脂柱， 大孔吸附树脂优选 AB-8、 D101、 HP20 或 XAD1600 ； 大孔吸附树脂重量与红豆杉粉末干重的比例为 1 ： 2 20， 优选 1 ： 5 10。 0012 d、 吸附完毕后， 先用。
11、水进行洗脱， 再用乙醇进行洗脱， 收集乙醇洗脱液， 减压蒸干， 得到褐色混合物， 用色谱级的甲醇定溶， 并进行 HPLC 含量测定。所用乙醇的浓度为 70 100%， 优选 80 90%， 体积为 3 10 个树脂柱体积， 优选 4 6 个柱体积。 0013 采用本发明所述的方法， 可同时提取出紫杉醇及其多种衍生物， 提取率均达到 90% 以上， 溶剂使用量低， 可有效地降低成本， 提高原料的利用率。 具体实施方式 0014 下面结合实施例， 对发明作进一步描述， 但不构成对本发明的限制。 0015 试验用试剂 ： 分析纯 N,N- 二甲基甲酰胺， 二甲基亚砜， 乙醇 ( 天津科密欧 )， 色。
12、谱 纯甲醇和乙腈， 水为超纯水， AB-8和D101大孔吸附树脂为南开大学化工厂产品， XAD1600树 脂为美国罗门哈斯公司产品， HP20 树脂为日本三菱公司产品。 0016 液相色谱检测条件 ： 色谱柱 ： Kromasil ODS（4.6200mm， 5m） ， 中国科学院大连 化学物理研究所。流动相 A 为乙腈， 流动相 B 为水， 洗脱梯度程序为 ； 0 10min， 流动相 B 的含量为 70% 60% ； 10 30min， 流动相 B 的含量为 60% 35% ； 30 44min， 流动相 B 的 含量为 35% 10% ； 44 54min， 流动相 B 的含量为 10%。
13、 10% ； 流速为 1.0mL/min ； 检测波 长 227nm ； 柱温 ： 30 度。 0017 实施例 1 0018 分别采集曼地亚、 欧洲红豆杉枝叶样品后， 置于 50烘箱内烘干， 粉碎成 10 目的 干粉， 分别称取 20g 粉末加入到 2 个圆底烧瓶中， 再加入 60mL 含 1%N,N- 二甲基甲酰胺的水 溶液， 超声处理 5h， 静置过滤， 滤渣再以 60mL 的提取液超声 5h， 如此重复 5 次， 合并 5 次的 提取液， 过 AB-8 大孔吸附树脂， 吸附完毕后， 用去离子水洗至流出液无色， 再用 3 倍柱体积 的无水乙醇进行洗脱， 洗脱液于旋转蒸发仪中， 40， -。
14、0.03Mpa 真空度， 减压蒸干得到提取 物浸膏。浸膏用色谱级甲醇溶解， 定溶 100mL， 进 HPLC 检测有用紫杉烷含量， 各成分含量如 下表 ： 0019 0020 0021 实施例 2 0022 分别采集云南、 南方红豆杉枝叶样品后， 置于 50烘箱内烘干， 粉碎成 80 目的干 粉， 分别称取 20g 粉末加入到 2 个圆底烧瓶中， 再加入 200mL 含 5%N,N- 二甲基甲酰胺的水 溶液， 超声处理 0.5h， 静置过滤， 滤渣再以 200mL 的提取液超声 0.5h， 如此重复 2 次， 合并 2 次的提取液， 过 D101 大孔吸附树脂， 吸附完毕后， 用去离子水洗至流。
15、出液无色， 再用 5 倍柱 说 明 书 CN 103145652 A 4 3/5 页 5 体积的 70% 乙醇进行洗脱， 洗脱液于旋转蒸发仪中 40， -0.03Mpa 真空度， 减压蒸干。固形 物用色谱级甲醇溶解， 定溶 100mL， 进 HPLC 检测有用紫杉烷含量， 各成分含量如下表 ： 0023 0024 0025 实施例 3 0026 分别采集曼地亚、 欧洲红豆杉根须样品后， 置于 50烘箱内烘干， 粉碎成 40 目的 干粉， 分别称取 20g 粉末加入到 2 个圆底烧瓶中， 再加入 100mL 含 3% 二甲基亚砜的水溶液， 超声处理 2h， 静置过滤， 滤渣再以 100mL 的提。
16、取液超声 2h， 如此重复 3 次， 合并 3 次的提取 液， 过XAD1600大孔吸附树脂， 吸附完毕后， 用去离子水洗至流出液无色， 再用3倍柱体积的 80% 乙醇进行洗脱， 洗脱液于旋转蒸发仪中 40， -0.03Mpa 真空度， 减压蒸干。固形物用色 谱级甲醇溶解， 定溶 100mL， 进 HPLC 检测有用紫杉烷含量， 各成分含量如下表 ： 0027 0028 0029 0030 实施例 4 0031 分别采集云南， 南方红豆杉根须样品后， 置于 50烘箱内烘干， 粉碎成 60 目的干 粉， 分别称取 20g 粉末加入到 2 个圆底烧瓶中， 再加入 120mL 含 2% 二甲基亚砜的。
17、水溶液， 超 声处理 1h， 静置过滤， 滤渣再以 100mL 的提取液超声 1h， 如此重复 4 次， 合并 4 次的提取液， 过 HP2O 大孔吸附树脂， 吸附完毕后， 用去离子水洗至流出液无色， 再用 4 倍柱体积的 90% 乙 醇进行洗脱， 洗脱液于旋转蒸发仪中 40， -0.03Mpa 真空度， 减压蒸干。固形物用色谱级甲 醇溶解， 定溶 100mL， 进 HPLC 检测有用紫杉烷含量， 各成分含量如下表 ： 说 明 书 CN 103145652 A 5 4/5 页 6 0032 0033 。 0034 实施例 6 0035 取南方红豆杉枝叶样品， 50烘干， 粉碎成 20 目的干粉。
18、， 取 50kg 粉末加入到 500L 提取罐中， 再加入 300L 含 2%N,N- 二甲基甲酰胺的水溶液， 40 度加热搅拌提取 2h， 静置过 滤， 滤渣再以 300L 的提取液提取 2h， 如此重复 4 次， 合并 4 次的提取液， 过 AB-8 大孔吸附 树脂， 吸附完毕后， 用去离子水洗至流出液无色， 再用4倍柱体积的95%乙醇进行洗脱， 洗脱 液于旋转蒸发仪中 40， -0.03Mpa 真空度， 减压蒸干， 共得到 1.08kg 固形物。称取固形物 100mg， 用色谱级甲醇溶解， 定溶 100mL， 进 HPLC 检测有用紫杉烷含量， 各成分含量如下表 : 0036 0037 。
19、0038 。 0039 实施例 6 0040 分别采集云南、 南方红豆杉根须样品后， 置于 50烘箱内烘干， 粉碎成 60 目的干 粉， 分别称取 20g 粉末加入到 2 个圆底烧瓶中， 再加入 120mL 含 2% 混合溶剂 （二甲基亚砜 ： N,N- 二甲基甲酰胺 =1:5， 体积比）的水溶液， 超声处理 1h， 静置过滤， 滤渣再以 100mL 的 提取液超声 1h， 如此重复 4 次， 合并 4 次的提取液， 过 HP2O 大孔吸附树脂， 吸附完毕后， 用 去离子水洗至流出液无色， 再用 4 倍柱体积的 90% 乙醇进行洗脱， 洗脱液于旋转蒸发仪中 40， -0.03Mpa 真空度， 。
20、减压蒸干。固形物用色谱级甲醇溶解， 定溶 100mL， 进 HPLC 检测有 用紫杉烷含量， 各成分含量如下表 ： 0041 说 明 书 CN 103145652 A 6 5/5 页 7 0042 0043 实施例 7 0044 取云南红豆杉枝叶样品， 50烘干， 粉碎成 50 目的干粉， 取 50kg 粉末加入到 500L 提取罐中， 再加入 300L 含 3% 混合溶剂 （二甲基亚砜 ： N,N- 二甲基甲酰胺 =5:1， 体积比） 的 水溶液， 40 度加热搅拌提取 2h， 静置过滤， 滤渣再以 300L 的提取液提取 2h， 如此重复 3 次， 合并3次的提取液， 过AB-8大孔吸附树脂， 吸附完毕后， 用去离子水洗至流出液无色， 再用4 倍柱体积的 95% 乙醇进行洗脱， 洗脱液于旋转蒸发仪中 40， -0.03Mpa 真空度， 减压蒸干， 共得到 0.96kg 固形物。称取固形物 100mg， 用色谱级甲醇溶解， 定溶 100mL， 进 HPLC 检测有 用紫杉烷含量， 各成分含量如下表 ： 0045 0046 说 明 书 CN 103145652 A 7 。