抗IL6单克隆抗体及其用途.pdf

抗-IL-6单克隆抗体及其用途
发明背景
发明领域
[0001]本发明涉及单克隆抗体及其用于疾病和病症的治疗的领域。更特别地，本发明涉及特异性结合细胞因子IL-6的单克隆抗体，以及所述抗体用于治疗与IL-6活性或表达相关的疾病或病症的用途。
相关技术
[0002]白介素-6(IL-6)是一种22到27kDa的分泌的糖蛋白，其显示出生长刺激和促炎活性。IL-6还被称作干扰素-β2(IFN-β2)，IL-1可诱导26-kDa蛋白，肝细胞刺激因子，细胞毒性T-细胞分化因子，和B-细胞刺激因子(Trikha等，Clin.Cancer Res.P：4653-4665(2003))。IL-6被多种细胞类型分泌。IL-6通过结合高亲和性受体复合体而发挥其活性，所述高亲和性受体复合体由两种膜糖蛋白组成：一种以低亲和性结合IL-6的80kDa组成受体(IL-6R)和一种自身不结合IL-6但对于IL-6被复合体高亲和性结合必需的130kDa的单-转导组分(gp130)(见图11；BioCarta)。IL-6R可被跨膜金属蛋白酶剪切以产生可溶IL-6R。
[0003]在多种感染性，炎性和自身免疫疾病中和在与被感染，创伤和免疫学攻击刺激的其他细胞因子提高的合成相关的癌症中，IL-6血水平是提高的(Trikha等，Clin.Cancer Res.9：4653-4665(2003))。
[0004]IL-6与多种疾病或病症相关，例如多发性骨髓瘤(Rossi等，Bone Marrow Transplantation 36：111-119(2005))，淋巴瘤(Emilie等，Blood 84：2412-2419(1994))，神经病症例如神经变性，星形细胞增多症和脑血管发生(Campbell等，Proc.Natl.Acad.ScL 90：10061-10065(1993))，自身免疫病症(例如，类风湿性关节炎)，炎性疾病，阿尔茨海默氏疾病，心肌梗死，Paget′s疾病，骨质疏松症，实体肿瘤，前列腺和膀胱癌(Trikha等，Clin.Cancer Res.9：4653-4665(2003))，脓毒性休克，移植，中枢神经系统的急性感染，心脏粘液瘤(Wijdenes等，MoI.Immunol.25：1183-1192(1991))，肿瘤诱导恶病质(Cahlin等，Cancer Res.50：5488-5489(2000))，癌症相关抑郁症，和脑瘤续发的脑水肿(Musselman等，Am.J.Psychiatry 755：1252-1257(2001))。
[0005]另外，抗-IL-6抗体已经显示出在治疗几种疾病和病症中是有效的。例如，抗-IL-6单克隆抗体已经显示出在体内和体外阻断骨髓瘤细胞的增殖(Rossi等，Bone Marrow Transplantation 36：111-779(2005))。发现抗-IL-6抗体对慢性类风湿性关节炎患者的给药减轻了疾病的症状(Wendling等，J.Rheumatol.20：259-262(1993))。抗-IL-6抗体还已经显示出在治疗AIDS相关淋巴瘤(Emilie等，Blood 84：2472-2419(1994))，和肾细胞转移癌(Blay等，Int.J.Cancer 72：424-430(1997)中是有效的。涉及治疗多种其他疾病和病症的抗-IL-6抗体的给药的临床结果概述于Trikha等，Clin.Cancer Res.9：4653-4665(2003)。
[0006]抗-IL-6抗体是本领域已知的。例如，在美国专利号5,618,700和5,856,135中描述了源于小鼠单克隆抗体(SK2)的重组人(即，人化的)抗-IL-6单克隆抗体。其他的抗-IL-6抗体包括称作CLB-6/8(Brakenhoff等，J.Immunol.745：561-568(1990))的抗体，及其称作cCLB8(Van Zaanen等，J.Clin.Invest.95：1441-1448(1996)的嵌合形式。命名为B-E8的鼠抗-IL-6单克隆抗体(mAb)已经在临床上用于治疗多种IL-6相关疾病和病症(见例如，Bataille等，Blood 55：685-691(1995)，Rossi等，Bone Marrow Transplantation 36：111-119(2005)，Haddad等，Blood75：1590-1597(2001)，和Emilie等，Blood 84：2412-2419(1994))。
[0007]鼠抗体，包括鼠抗-IL-6抗体，的使用由于例如对于靶抗原可变的选择性，短的血清半衰期，和人抗-鼠抗体(HAMA)的发展而受阻。通过发展嵌合抗体(其中啮齿动物的恒定区被它们的人对应物取代)或人化/CDR-移植/重组抗体(其中仅仅CDRs是非人来源的)，这些问题在一定程度被降低(一般性地见Vaughan等，Nat.Biotech.75：535-539(1998))。然而，人化抗体涉及大量的实践限制，例如(1)有效构建人化mAbs途径的有限数量的选择，(2)对于抗体结构或造型的详细了解的需要，(3)由于亲和性保持和引入的外源氨基酸之间的妥协的不可预料的免疫原性，和(4)原始mAb起源的对于动物的抗体库的限制(Vaughan等，Nat.Biotechnol.76：535-539(1998))。这些限制可通过利用人单克隆抗体而解决(Lonberg，Nat.Biotechnol.23：1117-1125(2005))。
[0008]因此，在本领域中需要用于临床应用的另外的抗-IL-6单克隆抗体，包括人抗-IL-6mAbs。本发明解决了本领域中这种现存的需要。
发明概述
[0009]本发明提供了特异性结合IL-6的新的单克隆抗体。本发明的抗体包含选自本文公开的任何VH区及其氨基酸变体的可变重链(VH)区，和/或选自本文公开的任何VL区及其氨基酸变体的可变轻链(VL)区。
[0010]在本发明的一个示例性实施方式中，多个VH和VL区获自人VH和VL基因文库。包含获自文库的人VH区的抗体重链与来自已知鼠抗-IL-6mAb(即，B-E8)的轻链配对。类似地，包含获自文库的人VL区的抗体轻链与来自已知鼠抗-IL-6mAb(即，B-E8)的重链配对。筛选产生的抗体的特异性结合IL-6抗原的能力。从本方法，18种VL(SEQ IDNOs：1到18所代表)和7种人VH(SEQ ID NOs：19到25所代表)被鉴定。
[0011]所有的鉴定的VL与所有鉴定的VH交叉配对。通过ELISA测试产生的抗体的与IL-6的结合亲和性，以及阻断IL-6-诱导的细胞增殖的能力。从本方法，鉴定了显示出显著结合亲和性和阻断活性的33个人VH/VL对。
[0012]向通过上述方法鉴定的某些人VH和VL中引入氨基酸取代。变体VH和VL分别与人VL和VH配对，并且再次测试产生的抗体的IL-6结合亲和性和阻断活性。从这些实验，鉴定了具有与原始鼠B-E8抗体(或其嵌合体)相差不大的结合和阻断活性的几种抗体。因此本发明还包括包含通过上述和下面实施例详述的方法获得的变体VH和VL的任何组合的抗体。
[0013]本发明还包括编码本文公开的任何VH和/或VL区的核酸分子，以及包含所述核酸分子的载体和宿主细胞。
[0014]在某些实施方式中，本发明的新的单克隆抗体显示出种特异性，结合人IL-6或辅助其检测。在一些实施方式中，本发明的新的单克隆抗体结合人和猴IL-6或辅助其检测，但不结合鼠或大鼠IL-6或辅助其检测。
[0015]在一些实施方式中，本发明的新的单克隆抗体抑制IL-6-诱导的细胞增殖例如鼠B9(ECACC)骨髓瘤细胞或人U266骨髓瘤细胞的增殖。
[0016]在一些实施方式中，本发明的新的单克隆抗体结合IL-6但不结合其他IL-6超家族成员。
[0017]在一些实施方式中，本发明的新的单克隆抗体特异性结合IL-6，抑制IL-6结合它的受体。
[0018]本发明还包括生产本发明的抗体的方法，所述方法包括：(i)培养表达编码本发明抗体的一种或多种核酸序列的宿主细胞，和(ii)从培养基中回收抗体。
[0019]本发明还包括包含本发明的抗体的药物组合物。所述药物组合物可进一步包含药学上可接受的载体、佐剂或其组合。
[0020]本发明还包括预防或治疗与IL-6活性或表达相关的疾病和/或病症的方法，其中所述方法包含给予有此需要的患者本发明的抗体。在一个实施方式中，本方法包括给予有此需要的患者治疗或预防有效量的药物组合物，所述药物组合物包含本发明的抗体和药学上可接受的载体。在一些实施方式中，所述疾病或病症包括由IL-6的作用介导，与其相关，或由其引起的任何疾病或病症。在一些实施方式中，所述待治疗的疾病或病症选自自身免疫疾病或病症，与异常或不适当的血管发生相关的疾病或病症，癌症，骨关节炎，特发性青少年关节炎，和纤维变性病症。
[0021]本发明还包括本发明的抗体在制备用于治疗由IL-6的作用介导，与其相关，或由其引起的疾病或病症的药物中的用途。在特定实施方式中，本发明还涉及本发明的抗体在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途，所述疾病或病症选自自身免疫疾病或病症，与异常或不适当的血管发生相关的疾病或病症，癌症，骨关节炎，特发性青少年关节炎，和纤维变性病症。
[0022]本发明还包括用于治疗由IL-6的作用介导，与其相关，或由其引起的疾病或病症的本发明的抗体。在一个特定实施方式中，本发明还涉及本发明的抗体在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途，所述疾病或病症选自自身免疫疾病或病症，与异常或不适当的血管发生相关的疾病或病症，癌症，骨关节炎，特发性青少年关节炎，和纤维变性病症。

附图简述
[0023]图1显示了SEQ ID NOs：19-25代表的示例性的人VH区的比对，其可包括在本发明的抗体中。
[0024]图2显示了IL-6结合抑制测定结果，其中生物素化人重组IL-6与多种抗-IL-6抗体培养，然后添加包含IL-6受体的U266细胞。利用流式细胞术定量在多种抗-IL-6抗体浓度的IL-6结合的抑制百分比。
[0025]图3描绘了用于从定点突变产生的文库中的mAbs的亲和性选择的一般方法。
[0026]图4显示了IL-6结合抑制测定的结果，其中人重组IL-6与多种抗-IL-6抗体培养，然后添加包含IL-6受体的U266细胞。然后添加纯化的小鼠IL-6抗体和APC-缀合多克隆山羊-抗-小鼠二抗。利用流式细胞术定量测定在多种抗-IL-6抗体浓度的IL-6阻断活性。
[0027]图5A和5B显示了结合特异性实验的结果，其中通过ELISA测试对照mAb88(嵌合B-E8)(图5A)，或候选的亲和性提高的人mAb1339(图5B)与一组IL-6超家族成员的结合。
[0028]图6A和7A显示了实验结果，其中通过流式细胞术的分析测试了IL-6-特异性mAbs的抑制IL-6和在U266细胞上表达的IL-6受体的相互作用的能力。每个柱代表三个实验的平均值+/-标准偏差。
[0029]在图6A中，mAb的浓度是0.5μg/ml。对于每种mAb，从左到右的四个柱显示分别在IL-6浓度100.0、50.0、25.0和12.5ng/ml的对IL-6结合IL-6受体的抑制百分比。
[0030]在图7A中，IL-6浓度是500ng/ml。对于图7A中每种mAb，从左到右的8个柱显示了分别在mAb浓度5000、2500、1250、625.0、156.3、78.1和39.1ng/ml的对IL-6结合IL-6受体的抑制百分比。
[0031]图6B和7B显示了在100ng/ml IL-6的单个代表性实验的结果，其例示了通过流式细胞术的分析的多种抗-IL-6mAbs对于IL-6和U266细胞上表达的IL-6受体的相互作用的抑制效果。黑体实线代表在不存在mAb的情况下单独100ng/ml的IL-6；浅色实线代表在mAb存在的情况下100ng/ml的IL-6；虚线代表在不存在IL-6的情况下单独的mAb。在图6B中，mAb的浓度，如果存在的话，是0.5μg/ml mAb。在图7B中，mAb的浓度，如果存在的话，是0.3μg/ml mAb。
[0032]图8是显示三个独立的IL-6结合抑制测定的结果的示意图。
[0033]图9是mAb1339双基因载体(表达包含H1579重链可变区的重链和包含L298轻链可变区的轻链)的图谱。
[0034]图10显示了用表达mAb1339双基因载体的多种基于CHO的细胞系分离物获得的mAb产量。
[0035]图11是代表IL-6信号传导途径(可获自BioCarta)的示意图。
[0036]图12显示了实验结果，其中测试IL-6特异性mAb的抑制鼠B9(ECACC)骨髓瘤细胞系的IL-6-依赖的增殖的能力。IgGlκ和mB-Z1分别是人和小鼠同种型对照抗体。对于每种mAb，从左到右的七个柱分别显示了在mAb浓度100、10、1、0.1、0.01、0.001和0.0001ng/ml的IL-6(10pg/ml)-诱导的B9细胞增殖的抑制百分比。每个柱代表三个实验的平均值+/-标准偏差。
[0037]图13显示了实验结果，其中测试了IL-6-特异的mAb的抑制人U266骨髓瘤细胞系的IL-6-依赖的增殖的能力。对于每种mAb，从左到右的六个柱分别显示了在mAb浓度1000、333、111、37、12和4ng/ml的IL-6(500pg/ml)-诱导的U266细胞增殖的抑制百分比。每个柱代表三个实验的平均值+/-标准偏差。
[0038]图14和15显示了实验结果，其中通过ELISA测试了IL-6-特异的mAbs的检测鼠IL-6(图14)或大鼠IL-6(图15)的能力。生物素化多克隆抗体(pAb)对照是抗-人IL-6，抗-大鼠IL-6，和抗-人IL-2。例如，“0”，没有添加抗体。对于每个样品，从左到右的四个柱分别显示了在抗体浓度100、50、25和12.5ng/ml的与结合100ng/ml鼠或大鼠IL-6相关的光密度。每个柱代表两个实验的平均值+/-标准偏差。
[0039]图16显示了实验结果，其中测试了IL-6特异mAb的从用LPS活化24小时的外周血单核细胞(PBMNC)中检测人单核细胞中的天然胞浆内IL-6的能力。粗线代表从LPS-刺激的单核细胞的IL-6的mAb检测，而细线代表没有添加的抗体。
[0040]图17和18显示了实验结果，其中测试了IL-6-特异mAb从血浆中检测IL-6的能力。没有添加mAb的“仅仅血清”样品用作参考。与“仅仅血清”样品相比IL-6-特异抗体样品的光密度信号的下降意味着血清IL-6与抗体的相互作用。在5μg/ml测试抗体。
[0041]在图17中，四个柱从左到右显示了在血清稀释1、1/2、1/4和1/8的人血清中与人IL-6检测相关的光密度。每个柱代表两个实验的平均值+/-标准偏差。
[0042]在图18中，四个柱从左到右显示了在血清稀释1/10、1/20、1/40、1/80、1/160、1/320和1/640的猕猴血清中与猴IL-6检测相关的光密度。
发明详述
[0043]除非另外定义，本文使用的所有的技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常理解的意思。
抗体
[0044]本发明提供了特异性结合IL-6的单克隆抗体。
[0045]如本文所用，术语“抗体”包括免疫球蛋白分子，其包含四条多肽链，通过二硫键相互连接的两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链由重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域组成，CH1，CH2和CH3。每条轻链由轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定区组成。来自任何脊椎动物种的抗体(免疫球蛋白)的轻链可基于它们的恒定结构域的氨基酸序列分配为两种明显不同类型之一，称为kappa(K)和lambda(λ)。本文中kappa轻链可变区称作VK。如本文所用，表述VL意图包括来自kappa-型轻链(VK)和来自lambda-型轻链的可变区。轻链恒定区由一个结构域组成，VL。VH和VL区包括超变区，称为互补决定区(CDRs)，散布着更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDRs和四个FRs组成，从氨基末端到羧基末端以下列顺序排列：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
[0046]根据它们重链恒定区的氨基酸序列，抗体可分为不同类别。有五种主要类型的完整抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的几种可进一步分为亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。对应于不同类的抗体的重链恒定区分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类的免疫球蛋白的亚单位结构和三维构象是熟知的。本发明包括任何前述类或亚类(同种型)的抗体。
[0047]本文使用的术语“抗体”还意图包括抗体，其消化片段，特定部分和变体，包括抗体模拟物，或抗体部分，所述抗体部分包含模拟抗体或其特定片段或部分，包括单链抗体及其片段，每种包含至少一个CDR。功能性片段包括结合IL-6抗原的抗原结合片段。例如，能够结合IL-6或其部分的抗体片段，包括但不限于Fab(例如，被木瓜蛋白酶消化)，facb(例如，被血纤维蛋白溶酶消化)，pFc’(例如，被胃蛋白酶或血纤维蛋白溶酶消化)，Fd(例如，被胃蛋白酶消化，部分还原和重聚集)，Fv或scFc(例如，通过分子生物技术)，被本发明包括。抗体片段还意图包括，例如，结构域缺失的抗体，双价抗体(diabodies)，线性抗体，单链抗体分子，和从抗体片段中形成的多特异性抗体。
[0048]本文使用的术语“单克隆抗体”指获自基本上同源的抗体的群体的抗体，例如，包含除了可能的天然存在的突变或可能存在的微小的翻译后变异之外基本上同一的群体的个体抗体。单克隆抗体是高度特异的，针对单个抗原位点。而且，与典型地包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的普通(多克隆)抗体制剂相比，每种单克隆抗体针对抗原上单个决定簇。修饰语“单克隆”表示抗体的特征为获自基本上同源的抗体群体，并且不解释为需要通过任何特定方法产生抗体。本发明的单克隆抗体优选通过重组DNA方法产生，或通过本文别处描述的筛选方法获得。
[0049]本文使用的术语“单克隆抗体”包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，其中重和/或轻链的部分与源于特定种或属于特定抗体类或亚类的抗体的对应序列同一或同源，同时所述链的剩余部分与源于另一种(例如小鼠或大鼠)或属于另一抗体类或亚类的抗体的对应序列同一或同源，以及所述抗体的片段，只要它们显示出期望的生物学活性即可(Morrison等，Proc.Natl.Acad.ScL USA 57：6851-6855(1984))。本文中感兴趣的嵌合抗体包括“灵长类动物化”抗体，其包含源于非人灵长类动物(例如，旧大陆猴(Old World Monkey)，如狒狒，恒河猴或猕猴)的可变区抗原结合序列和人恒定区序列(美国专利号5,693,780)。
[0050]因此，本发明包括，例如，包含嵌合重链和/或嵌合轻链的嵌合单克隆抗体。嵌合重链可包含融合于非人抗体的重链恒定区的任何本文所述的重链可变(VH)区或其突变体或变体。嵌合轻链可包含融合于非人抗体的轻链恒定区的任何本文所述的轻链可变(VL)区或其突变体或变体。
[0051]本文使用的术语“人抗体”包括具有对应于如Kabat等所述的人种系免疫球蛋白序列(见Kabat等，(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest，Fifth Edition，U S.Department of Health和Human Services，NIH Publication No.91-3242)的可变和恒定区的抗体。本发明的人抗体可包括不被人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过在体外随机或点特异突变引入的突变，或通过在体内的体细胞突变)，例如在CDR中特别地在CDR3中。人抗体可具有用一个氨基酸残基，例如，不被人种系免疫球蛋白序列编码的活性增强氨基酸残基，取代的至少一个位点。在本发明的上下文中，人抗体可具有用不是人种系免疫球蛋白的部分的氨基酸残基取代的多至二十个位点。在其他实施方式中，多至十，多至三或多至两个位点被取代。然而，本文使用的术语“人抗体”不意图包括其中源于另一哺乳动物种例如小鼠的种系的CDR序列已被移植到人框架序列上的抗体。
[0052]短语“重组人抗体”包括通过重组方式制备，表达，创造或分离的人抗体，例如利用转染入宿主细胞的重组表达载体表达的抗体，分离自重组组合人抗体文库的抗体，分离自转基因了人免疫球蛋白基因的动物的抗体，或通过涉及将人免疫球蛋白基因序列与其他DNA序列拼接的任何其他方法制备，表达，创造或分离的抗体。所述重组人抗体具有源于人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区(见Kabat，E.A.，等，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，Fifth Edition，U.S.Department of Health和Human Services，NIH Publication No.91-3242)。根据本发明，重组人抗体包括已经进行了体外突变的人种系免疫球蛋白序列(或，当使用转基因了人Ig序列的动物时，体内体细胞突变)并且因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是当源于和涉及人种系VH和VL序列时可能不在体内天然存在于人抗体种系库中的序列。在某些实施方式中，然而，所述重组抗体是选择性突变方法或回复突变或两者的结果。
[0053]本发明的抗体可以是分离的抗体。本文使用的“分离的抗体”包括基本上没有具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体。而且，分离的抗体可以基本上没有其他细胞材料和/或化学制品。
[0054]本发明的抗体优选特异性结合IL-16抗原。本文使用的“IL-16抗原”意图包括，例如，完整IL-16蛋白或IL-16蛋白片段。术语“IL-16抗原”意图包括天然存在的IL-16(例如，纯化自在正常条件下表达IL-6的细胞的IL-6)以及重组IL-16和其变体和突变体。优选地，IL-6抗原能够结合IL-6受体。
[0055]本发明的抗体特异性结合IL-6抗原，也就是说，例如，本发明抗体结合IL-6抗原并且不显示对于非IL-6分子的任何显著结合。在某些实施方式中，抗体特异性结合IL-6抗原，也就是说，抗体以其结合IL-6抗原以外的抗原的亲和性的至少1000倍，至少500倍，至少200倍，至少100倍，至少90倍，至少80倍，至少70倍，至少60倍，至少50倍，至少40倍，至少30倍，至少20倍，至少10倍或至少2倍的亲和性结合IL-6抗原。
[0056]本发明的抗体是否特异性结合IL-6抗原可例如通过结合测定如ELISA利用一组包括IL-6抗原以及至少一种其他非IL-6抗原的抗原而确定。评价特异性的示例性方法在下面的实施例5中阐述。在此，通过ELISA测试本发明的人抗IL-6抗体(mAb1339)与非相关抗原例如人胰岛素，人血清白蛋白，人血红蛋白，和小牛血清白蛋白的结合。由于没有观察到与非IL-6抗原的结合，mAb1339被认为特异性结合IL-6。
[0057]在某些实施方式中，本发明的抗体特异性结合IL-6但不结合其他IL-6超家族成员。在某些实施方式中，本发明的抗体特异性结合IL-6抗原，也就是说，抗体以其结合IL-6超家族成员例如CNFT、制瘤素M、IL-11或NNT-1的亲和性的至少1000倍，至少500倍，至少200倍，至少100倍，至少90倍，至少80倍，至少70倍，至少60倍，至少50倍，至少40倍，至少30倍，至少20倍，至少10倍或至少2倍的亲和性结合IL-6抗原。例如，通过ELISA，mAb1339显示出结合IL-6，并且显示出结合CNFT、制瘤素M、IL-11或NNT-1的不显著水平(见实施例5和图5B)。可利用这种或类似的测定评价任何抗体是否特异性结合IL-6抗原。
[0058]在其他实施方式中，当解离常数(K_d)为大约10^-8M时，本发明的抗体特异性结合IL-6抗原。在某些实施方式中，当K_d为大约5×10^-9M时，抗体被认为以“高亲和性”特异性结合IL-6抗原，并且当K_d为大约5×10^-10M时，抗体被认为以“非常高的亲和性”特异性结合IL-6抗原。
[0059]在本发明的上下文中，抗体是否特异性结合IL-6抗原还可通过功能性测定而确定。例如，可利用其中表达IL-6受体的细胞在测试抗体存在下与IL-6一起培养的测定。在平行测定中，表达另一受体的细胞在测试抗体存在下与该受体的配体一起培养。如果抗体在第一测定(其包括IL-6和表达IL-6受体的细胞)中显示出抑制性效果但在第二测定(其包括不同的配体和表达该配体的受体的细胞)中不显示抑制性效果，这可得出结论该抗体特异性结合IL-6抗原。确定抗体是否抑制IL-6结合细胞上的IL-6受体的生物学效果的测定在本文别处进行讨论。例如，实施例5显示了本发明的人抗IL-6抗体抑制IL-6诱导的人骨髓瘤细胞增殖的能力。
[0060]在一些实施方式中，本发明的抗体抑制IL-6诱导的细胞增殖，例如鼠B9(ECACC)或人U266骨髓瘤细胞的增殖。在一些实施方式中，本发明的抗体以100％(即完全)的抑制水平抑制IL-6诱导的细胞增殖。例如鼠B9(ECACC)或人U266骨髓瘤细胞的增殖。在一些实施方式中，本发明的抗体以90％或更高的抑制水平抑制IL-6诱导的细胞增殖，例如鼠B9(ECACC)或人U266骨髓瘤细胞的增殖。在一些实施方式中，本发明的抗体以80％或更高的抑制水平抑制IL-6-诱导的细胞增殖，例如鼠B9(ECACC)或人U266骨髓瘤细胞的增殖。在一些实施方式中，本发明抗体以70％或更高，60％或更高，50％或更高，40％或更高，30％或更高，20％或更高，10％或更高，或5％或更高，或1％或更高的抑制水平抑制IL-6-诱导的细胞增殖，例如鼠B9(ECACC)或人U266骨髓瘤细胞的增殖。
[0061]在一些实施方式中，本发明的抗体特异性结合IL-6，抑制IL-6与其受体的结合。在一些实施方式中，本发明的抗体特异性结合IL-6，以100％的抑制水平(即，完全)抑制IL-6与其受体的结合。在一些实施方式中，本发明的抗体特异性结合IL-6，以90％或更高的抑制水平抑制IL-6与其受体的结合。在一些实施方式中，本发明的抗体特异性结合IL-6，以80％或更高的抑制水平抑制IL-6与其受体的结合。在一些实施方式中，本发明的抗体特异性结合IL-6，以70％或更高，60％或更高，50％或更高，40％或更高，30％或更高，20％或更高，10％或更高，5％或更高，或1％或更高的抑制水平抑制IL-6与其受体的结合。
[0062]在一些实施方式中，本发明的抗体显示出种特异性，结合人IL-6或辅助其的检测。在一些实施方式中，本发明新的单克隆抗体结合人或猴IL-6或辅助其的检测，但不结合鼠或大鼠IL-6或辅助其的检测。
[0063]本发明的人抗体可通过多种方法获得。例如，可选择结合IL-6的人单克隆抗体，例如通过用IL-6或其部分筛选一种或多种人VL和VH cDNA文库，例如通过噬菌体展示技术(McCafferty等，Nature348：552-554(1990))。本发明的人抗体还可以获自转基因动物例如转基因小鼠(Jakobovits，Curr.Opin.Biotechnol.5：561-566(1995))。本发明包括通过本领域用于制备人抗体的任何已知方法获得的人抗-IL-6抗体。
[0064]可用于产生本发明的抗体的示例性方法公开于，例如，美国专利申请公开号2005/0196755，其全部内容在此引入作为参考。
[0065]本发明因此包括了包含人重链可变区(VH)的单克隆抗体，其中人VH当与非人抗-IL-6单克隆抗体(例如，B-E8)的可变轻链区(VL)配对时产生了特异性结合IL-6抗原的抗体。
[0066]本发明还包括了包含人轻链可变区(VL)的单克隆抗体，其中人VL当与非人抗-IL-6单克隆抗体(例如，B-E8)的可变重链区(VH)配对时产生特异性结合IL-6抗原的抗体。在某些实施方式中，人VL为kappa亚型(即，VK)。
[0067]本发明还包括了包含人重链可变区(VH)和人轻链可变区(VL)的单克隆抗体，其中人VH当与非人抗-IL-6单克隆抗体(例如B-E8)的可变轻链区(VL)配对时产生特异性结合IL-6抗原的抗体，并且其中人VL当与非人抗-IL-6单克隆抗体(例如B-E8)的可变重链区(VH)配对时产生特异性结合IL-6抗原的抗体。
[0068]在某些实施方式中，本发明的单克隆抗体包含可变重链区(VH)，所述可变重链区包含选自下列的氨基酸序列：H415(SEQ IDNO：19)，H884(SEQ ID NO：20)，H1077(SEQ ID NO：21)，H1078(SEQ IDNO：22)，H1079(SEQ ID NO：23)，H1081(SEQ ID NO：24)，H1089(SEQ IDNO：25)，H1511(SEQ ID NO：26)，H1420(SEQ ID NO：27)，H1432(SEQ IDNO：28)，H1515(SEQ ID NO：29)，H1362(SEQ ID NO：30)，H1437(SEQ IDNO：31)，H1461(SEQ ID NO：32)，H1519(SEQ ID NO：38)，H1520(SEQ IDNO：39)，H1521(SEQ ID NO：40)，H1522(SEQ ID NO：41)，H1553(SEQ IDNO：42)和H1579(SEQ ID NO：43)，其中所述抗体特异性结合IL-6抗原。
[0069]在某些实施方式中，本发明的单克隆抗体包含可变轻链区(VL或VK)，所述可变轻链区包含选自下列的氨基酸序列：L112(SEQID NO：1)，L151(SEQ ID NQ：2)，L158(SEQ ID NO：3)，L159(SEQ IDNO：4)，L164(SEQ ID NO：5)，L165(SEQ ID NO：6)，L166(SEQ ID NO：7)，L167(SEQ ID NO：8)，L168(SEQ ID NO：9)，L169(SEQ ID NO：10)，L170(SEQ ID NO：11)，L171(SEQ ID NO：12)，L172(SEQ ID NO：13)，L173(SEQ ID NO：14)，L174(SEQ ID NO：15)，L175(SEQ ID NO：16)，L189(SEQ ID NO：17)，L198(SEQ ID NO：18)，L314(SEQ ID NO：33)，L305(SEQ ID NO：34)，L303(SEQ ID NO：35)，L298(SEQ ED NO：36)和L321(SEQ ID NO：37)，其中抗体特异性结合IL-6抗原。
[0070]本领域普通技术人员将理解本发明上下文所述的“包含可变重链区(VH)的抗体”和“包含可变轻链区(VL或VK)的抗体”可包括通常在抗体分子中发现的一种或多种另外的区域(或“结构域”)，例如，一种或多种恒定重链区(例如，CH1、CH2和/或CH3)，和/或恒定轻链区(CL)。
[0071]在某些实施方式中，本发明的抗体可包含可变重链区(VH)，所述可变重链区包含至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一于SEQ ID NOs：19到32或38到43中任一个的氨基酸序列，其中所述抗体特异性结合IL-6抗原。
[0072]在某些实施方式中，本发明的抗体可包含可变轻链区(VL或VK)，所述可变轻链区包含至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一于SEQ ID NOs：1到18或33到37中任一个的氨基酸序列，其中所述抗体特异性结合IL-6抗原。
[0073]本文使用的术语“同一”指如通过比对和比较序列确定的两种或更多种多肽分子的序列之间的关系。“同一性百分比”表示在比较的分子中的氨基酸序列之间同一的残基的百分比，并且基于最小的比较的分子的大小进行计算。对于这些计算，比对的缺口(gap)(如果有的话)必须通过特定的数学模型或计算机程序(即“算法”)解决。可用于计算比对的多肽的同一性的方法包括下述中所述的那些：ComputationalMolecular Biology，(Lesk，A.M.，ed.)，1988，New York：Oxford UniversityPress；Biocomputing Informatics和Genome Projects，(Smith，D.W.，ed.)，1993，New York：Academic Press；Computer Analysis of Sequence Data，Part I，(Griffin，A.M.，和Griffin，H.G.，eds.)，1994，New Jersey：HumanaPress；von Heinje，G.，1987，Sequence Analysis in Molecular Biology，NewYork：Academic Press；Sequence Analysis Primer，(GribskoV，M.和Devereux，J.，eds.)，1991，New York：M.Stockton Press；和Carillo等，1988，SIAM J.Applied Math.48：1073。
[0074]在计算同一性百分比中，被比较的序列以产生序列之间最大匹配的方式比对。用于确定同一性百分比的计算机程序可以是GCG程序包，其包括GAP(Devereux等，1984，Nucl Acid Res 12：387；GeneticsComputer Group，University of Wisconsin，Madison，Wise)。计算机算法GAP用于比对序列同一性百分比待确定的两种多肽。为它们各自氨基酸的最佳匹配比对序列(“匹配跨度”，如所述算法所确定)。缺口开放罚分(gap opening penalty)(其计算为3×平均对角(average diagonal)，其中“平均对角(average diagonal)”是使用的比较矩阵的对角平均值；“对角”是分配给每个通过特定比较矩阵的完美的氨基酸匹配的得分或数值)和缺口延伸罚分(gap extension penalty)(其通常是缺口开放罚分的1/10)，以及比较矩阵例如PAM250或BLOSUM 62与所述算法一起使用。在某些实施方式中，所述算法还使用标准比较矩阵(见Dayhoff等，1978，Atlas of Protein Sequence和Structure 5：345-352 for the PAM 250comparison matrix；Henikoff et al.，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915-10919 for the BLOSUM 62 comparison matrix)。
[0075]使用GAP程序确定多肽的同一性百分比的推荐参数如下：
算法：Needleman等，1970，J.MoL Biol.48：443-453；
比较矩阵：BLOSUM 62，来自Henikoff等，1992，上述；
缺口罚分：12(但对于末端缺口不罚分)；
缺口长度罚分：4；
类似性阈值：0。
[0076]用于比对两个氨基酸序列的某种比对方案可导致仅仅两个序列的一段短区域匹配，并且这段小的匹配区域可具有非常高的序列同一性，即使两个全长序列之间没有显著性的关系。相应地，如果期望产生跨越靶多肽的至少50个邻接氨基酸的比对，选择的比对方法(GAP程序)可被调整。
[0077]预期了本文所述的抗-IL-6抗体的氨基酸序列修饰。例如，可期望提高抗-IL-6抗体的结合亲和性和/或其他生物学性质。
[0078]通过向编码所述抗体的重或轻链的核酸中引入适当的核苷酸改变，或通过肽合成，可制备抗-IL-6抗体的氨基酸序列变体。示例性的修饰包括改变了所述抗体的重和/或轻链可变区的氨基酸序列的那些。特别优选的是改变本发明抗体的重和/或轻链的可变区的一种或多种CDR的氨基酸序列的修饰。
[0079]示例性的修饰包括例如，抗-IL-6抗体的氨基酸序列之内的残基的缺失，和/或插入和/或取代。进行了缺失，插入和取代的任何组合以获得最终的构建体，只要最终的构建体具有期望的性质即可(例如，形成特异性结合IL-6抗原的抗体部分的能力)。氨基酸改变还可改变抗-IL-6抗体翻译后的程序，例如改变糖基化位点的数量或位点。
[0080]引入氨基酸改变到本发明抗体的VH和VL区的示例性方法例示于下面的实施例2。根据该方法，NNK在特定位点引入，例如在VH或VL的CDR之内，其中N可以是A，T，G或C，并且K是T或G。利用NNK，所有20个氨基酸和1个终止密码子可在每个位点引入。
[0081]如Cunningham和Wells，Science 244：1081-1085(1989)所述，鉴定优选突变位点的抗-IL-6抗体可变重链区和可变轻链区的门某些残基或区域的另一有用的方法称为“丙氨酸扫描突变”。在此，靶残基的残基或基团被鉴定(例如，带电残基例如arg，asp，his，lys和glu)并被中性或带负电氨基酸(最优选丙氨酸或聚丙氨酸)取代。显示出对于取代功能性敏感的这些氨基酸位点然后通过在或为取代位点引入进一步或其他变体而被改进。因此，虽然引入氨基酸序列改变的位点是预定的，突变性质本身不需要预定。例如，为分析在给定位点的突变性能，在靶密码子或区域进行丙氨酸扫描或随机突变，并且为当与可变轻链或可变重链分别组合时的期望的活性筛选表达的VH变体和/或VL变体。
[0082]氨基酸序列插入包括长度范围在一个残基到包含一百或更多个残基的多肽的氨基-和/或羧基-末端融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有N-末端甲硫氨酰基的抗-IL-6VH或抗-IL-6VL，或融合于细胞毒性多肽的抗-IL-6VH或抗-IL-6VL。
[0083]另一变体类型是氨基酸取代变体。这些变体具有在VH或VL分子的至少一个氨基酸残基被不同的残基取代。本发明的抗-IL-6抗体的VH和VL区取代突变的最感兴趣位点包括超变区，但是FR改变也是预期的。
[0084]保守取代示于表1“优选取代”的标题之下。如果所述取代导致生物学活性的改变，则可引入在表1中称为“示例性取代”或参考氨基酸类别的下面进一步描述的更多实质性的改变，并且筛选产品。
表1

  原始残基 示例性取代  优选取代  Ala(A) val；leu；ile  val  Arg(R) lys；gln；asn  lys  Asn(N) gln；his；asp；lys；arg  gln  Asp(D) glu；asn  glu  Cys(C) ser；ala  ser  Gln(Q) asn；glu  asn  Glu(E) asp；gln  asp  Gly(G) ala  ala  His(H) asn；gln；lys；arg  arg  Ile(I) leu；val；met；ala；phe；正亮氨酸  leu  Leu(L) 正亮氨酸；ile；val；met；ala；phe  ile  Lys(K) arg；gln；asn  arg  Met(M) leu；phe；ile  leu  Phe(F) leu；val；ile；ala；tyr  tyr  Pro(P) ala  ala  Ser(S) thr  thr  Thr(T) ser  ser  Tpr(W) tyr；phe  tyr  Tyr(Y) trp；phe；thr；ser  phe  Val(V) ile；leu；met；phe；ala；正亮氨酸  leu
[0085]本发明的抗-IL-6抗体的生物学性质中的实质修饰可通过选择取代而完成，所述取代在它们对于保持(a)取代区域中的多肽骨架的结构，例如，作为折叠或螺旋构象，(b)在靶位点的分子的电荷或疏水性，或(c)侧链大小，的效果是显著不同的。天然存在的残基基于共同的侧链性质分为几组：
(1)疏水的：正亮氨酸，甲硫氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸；
(2)中性亲水的：半胱氨酸，丝氨酸，苏氨酸；
(3)酸性的：天冬氨酸，谷氨酸；
(4)碱性的：天冬酰胺，谷氨酰胺，组氨酸，赖氨酸，精氨酸；
(5)影响链定位的残基：甘氨酸，脯氨酸；和
(6)芳香族的：色氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸。
[0086]非保守取代将使得一种这些类中的成员替换为另一类。
[0087]不涉及保持抗-IL-6抗体的正确构象的半胱氨酸残基也可被取代，通常被丝氨酸，以提高分子的稳定性和防止异常交联。相反地，半胱氨酸键可添加到抗-IL-6抗体以提高其稳定性(特别地其中抗-IL-6抗体是抗体片段例如Fv片段)。
[0088]取代变体的一种特别优选类型涉及取代亲本抗体的一种或多种超变区残基。通常地，为进一步发展选择的产生的变体将具有相对于产生它们的亲本抗体提高的生物学性质(例如，提高的对IL-6抗原的亲和性)。为产生所述取代变体的示例性方法是利用噬菌体展示的亲和性突变。简短而言，几种超变区位点(例如，6-7个位点)被突变以在每个位点产生所有可能的氨基取代。由此产生的抗体变体当与包装在每个颗粒内的M13的基因III产物融合时，从细丝状噬菌体颗粒以单价形式展示。然后如本文所公开地为它们的生物学活性(例如，结合亲和性)筛选噬菌体展示变体。为鉴定候选用于修饰的超变区区域位点，可进行丙氨酸扫描突变以鉴定对于抗原结合显著起作用的超变区残基。替代地，或另外地，分析抗原-抗体复合体的晶体结构以鉴定抗体和抗原之间的接触点是有益的。根据本文所述技术，所述接触残基和邻近残基是用于取代的候选物。一旦产生了所述变体，如本文所述地筛选该组变体并且在一种或多种相关测定中具有优良性质的抗体可为进一步发展而选择。
[0089]本文所述的抗-IL-6抗体的另一类型的氨基酸变体改变了抗-IL-6抗体的原始糖基化模式。所述改变包括删除一种或多种在抗-IL-6抗体中发现的碳水化合物部分，和/或添加一种或多种不存在于抗-IL-6抗体中的糖基化位点。
[0090]多肽的糖基化典型地是N-连接或O-连接的。N-连接指碳水化合物部分附着于天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸，其中X是脯氨酸之外的任何氨基酸，是对于碳水化合物部分酶附着于天冬酰胺侧链的识别序列。因此，这些三肽序列的每种在多肽中的存在产生了潜在的糖基化位点。O-连接的糖基化指N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一种附着于羟氨酸，最常见为丝氨酸或苏氨酸，然而5-羟脯氨酸或5-羟赖氨酸也可被使用。
[0091]糖基化位点添加到抗-IL-6抗体通常通过改变氨基酸序列使得它包含一种或多种上述三肽序列而完成(用于N-连接的糖基化位点)。所述改变还可通过向原始抗-IL-6抗体序列添加一种或多种丝氨酸或苏氨酸残基，或被其取代而产生(用于O-连接糖基化位点)。
[0092]在某些实施方式中，包括在本发明抗体中的VH区可包含与SEQ ID NOs：19到32或38到43中的任一同一的氨基序列，除了1到20个氨基酸的取代之外。例如，VH可具有与SEQ ID NOs：19到32或38到43同一的氨基酸序列，除了1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸取代之外。取代可在SEQ ID NOs：19到32或38到43中发现的序列之内的任何位点上。在某些实施方式中，取代在VH区的一种或多种CDR之内。例如，取代可以在CDR1、CDR2和/或CDR3之内。
[0093]同样地，在某些实施方式中，包括在本发明抗体中的VL区可包含与SEQ ID NOs：1到18或33到37中的任一同一的氨基序列，除了1到20个氨基酸取代之外。例如，VL可具有与SEQ ID NOs：1到18或33到37同一的氨基酸序列，除了1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸取代之外。取代可以在SEQ ID NOs：1到18或33到37中发现的序列之内的任何位点上。在某些实施方式中，取代在VL区的一种或多种CDR之内。例如，取代可以在CDR1、CDR2和/或CDR3之内。
[0094]包含在一个或多个氨基酸残基中不同于SEQ ID NOs：19到32或38到43的VH区和/或在一个或多个氨基酸残基中不同于SEQ IDNOs：1到18或33到37的VL区的本发明的抗-IL-6抗体将优选保持特异性结合IL-6抗原的能力。
[0095]本发明包括包含VH区的抗-IL-6抗体，其中所述VH包含表2所述的任一CDR1：
表2：示例性VH CDR1序列
  VH CDR1序列  SEQ ID NO：  TSGMCVS  51  TSGVAVG  52  TSGVSVG  53  TSGVGVG  54  TSGVAVN  55
[0096]本发明包括包含VH区的抗-IL-6抗体，其中所述VH包含与SEQ ID NOs：51到55中任一个同一的氨基酸序列，除了一个或多个(例如，一，二，三，四，五，六或七个)来自SEQ ID NOs：51到55的氨基酸被任何其他氨基酸取代之外。优选包含变异的CDR1的抗-IL-6抗体将特异性结合IL-6抗原。
[0097]本发明还包括包含VH区的抗-IL-6抗体，其中所述VH包含表3所述任一的CDR2：
表3：示例性VH CDR2序列
  VH CDR2序列  SEQ ID NO：  LIYWDDDKRYNPSLRS  56  LIFWDDDKHYSPSLKS  57  LVYWDDDRRYNPSLKN  58  LIYWDDDKRYSPSLKN  59  FIFWDDDKYYSPSLES  60  VIYWDDDRRYSPSLSS  61  LIYWDDDKRYSPSLET  97
[0098]本发明包括包含VH区的抗-IL-6抗体，其中所述VH包含变异的CDR2，所述变异的CDR2具有与SEQ ID NOs：56到61或97中任一个同一的氨基酸序列，除了一个或多个(例如、一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五或十六个)来自SEQ ID NOs：56到61或97的氨基酸被任何其他氨基酸取代之外。优选包含变异的CDR2的抗-IL-6抗体将特异性结合IL-6抗原。
[0099]本发明还包括包含VH区的抗-IL-6抗体，其中所述VH包含表4所述任一CDR3：
表4：示例性VH CDR3序列
  VH CDR3序列  SEQ ID NO：  SYDDYLYYALDY  62  FYDDYLYYALDY  63  SADDYLYYALDY  64  SGDDYLYYALDY  65  SYDDYLMYALDY  66  SYDDYLYYSLDY  67  SYDDYLYYAFDY  68  SYDDYLYYALDT  69  SADDYLYYSLDY  70  SADDYLYYAFDY  71  SADDYLYYSFDY  72  SADDYLYYSFDT  73  SHDDYLYYALDY  98
[0100]本发明包括包含VH区的抗-IL-6抗体，其中所述VH包含变异的CDR3，所述变异的CDR3具有与SEQ ID NOs：62到73或98中任一个同一的氨基酸序列，除了一个或多个(例如，一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一或十二个)来自SEQ ID NOs：62到73或98的氨基酸被任何其他氨基酸取代。优选包含变异的CDR3的抗-IL-6抗体将特异性结合IL-6抗原。
[0101]另外，本发明包括包含VL区的抗-IL-6抗体，其中所述VL包含表5所述的任一CDR1：
表5：示例性VL CDR1序列
  VL CDR1序列  SEQ ID NO：  RASQTIDSSYLA  74  RASQDIDNFLA  75  RASQTISSYLN  76  RASQSISIYLN  77  RASQTISDFLN  78  WASQSINDYLN  79
[0102]本发明包括包含VL区的抗-IL-6抗体，其中所述VL包含变异的CDR1，所述变异的CDR1具有与SEQ ID NOs：74到79中任一个同一的氨基酸序列，除了一个或多个(例如、一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一或十二个)来自SEQ ID NOs：74到79的氨基酸被任何其他氨基酸取代之外。优选包含变体CDR1的抗-IL-6抗体将特异性结合IL-6抗原。
[0103]本发明还包括包含VL区的抗-IL-6抗体，其中所述VL包含表6所述的任一CDR2：
表6：示例性VL CDR2序列
  VL CDR2序列  SEQ ID NO：  GASSRAT  80  KVSSLRS  81  AASSLES  82  ATSTLQS  83  ASSNLQS  84  AASNLQI  85
[0104]本发明包括包含VL区的抗-IL-6抗体，其中所述VL包含变异的CDR2，所述变异的CDR2具有与SEQ ID NOs：80到85中任一个同一的氨基酸序列，除了一个或多个(例如，一，二，三，四，五，六，或七个)来自SEQ ID NOs：80到85的氨基酸被任何其他氨基酸取代之外。优选包含变异的CDR2的抗-IL-6抗体将特异性结合IL-6抗原。
[0105]本发明还包括包含VL区的抗-IL-6抗体，其中所述VL区包含表7所述任一的CDR3：
表7：示例性VL CDR3序列
  VL CDR3序列  SEQ ID NO：  QQYAKSPIT  86  QQTRRFPLT  87  QQANSFPLT  88  QQTYRNLFT  89  QQTYSTLGT  90  QNGHSFPLT  91  QSGHSFPLT  92  QHGHSFPLT  93  QLGHSFPLT  94  QNAHSFPLT  95  QNGWSFPLT  96
[0106]本发明包括包含VL区的抗-IL-6抗体，其中所述VL包含变异的CDR3，所述变异的CDR3具有与SEQ ID NOs：86到89中任一个同一的氨基酸序列，除了一个或多个(例如，一，二，三，四，五，六，七，八或九个)来自SEQ ID NOS：86到96的氨基酸被任何其他氨基酸取代之外。优选包含变异的CDR3的抗-IL-6的抗体特异性结合IL-6抗原。
[0107]如实施例1所示，通过筛选人VHs文库鉴定的第一代人可变重链区(VHs)互相共享显著的序列同一性。人VHs之间的氨基序列同一性显示于表10并且图解于图1。例如，鉴定的人VHs的CDR1s都共享氨基酸序列T-S-G-X₁-X₂-V-X₃(SEQ ED NO：99)。另外，鉴定的人VH的CDR2都共享氨基酸序列X₁-X₂-X₃-W-D-D-D-X₄-X₅-Y-X₆-P-S-L-X₇-X₈(SEQ ID NO：100)。
[0108]由此，本发明包括包含可变重链CDR1(VH-CDR1)的单克隆抗体，所述可变重链CDR1具有氨基酸序列T-S-G-X₁-X₂-V-X₃(SEQ IDNO：99)，其中X₁，X₂和X₃可以是任何氨基酸。例如，X₁，X₂和/或X₃可以是异亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，缬氨酸(V)，苯丙氨酸(P)，甲硫氨酸(M)，半胱氨酸(C)，丙氨酸(A)，甘氨酸(G)，脯氨酸(P)，苏氨酸(T)，丝氨酸(S)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W)，谷氨酰胺(Q)，天冬酰胺(N)，组氨酸(H)，谷氨酸(E)，天冬氨酸(D)，赖氨酸(W)，或精氨酸(R)。在一个示例性实施方式中，X₁是甲硫氨酸(M)或缬氨酸(V)。在另一示例性实施方式中，X₁是缬氨酸(V)。在另一示例性实施方式中，X₂是半胱氨酸(C)，丙氨酸(A)，丝氨酸(S)或甘氨酸(G)。在另一示例性实施方式中，X₃是丝氨酸(S)或甘氨酸(G)。优选地，包含具有氨基酸序列T-S-G-X₁-X₂-V-X₃(SEQ ID NO：99)的VH-CDR1的本发明的抗体特异性结合IL-6抗原。
[0109]本发明还包括包含可变重链CDR2(VH-CDR2)的单克隆抗体，所述可变重链CDR2具有氨基酸序列X₁-X₂-X₃-W-D-D-D-X₄-X₅-Y-X₆-P-S-L-X₇-X₈(SEQ ID NO：100)，其中X₁，X₂，X₃，X₄，X₅，X₆，X₇和X₈可以是任何氨基酸。例如，X₁，X₂，X₃，X₄，X₅，X₆，X₇和/或X₈可以是异亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，缬氨酸(V)，苯丙氨酸(P)，甲硫氨酸(M)，半胱氨酸(C)，丙氨酸(A)，甘氨酸(G)，脯氨酸(P)，苏氨酸(T)，丝氨酸(S)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W)，谷氨酰胺(Q)，天冬酰胺(N)，组氨酸(H)，谷氨酸(E)，天冬氨酸(D)，赖氨酸(W)，或精氨酸(R)。在一个示例性实施方式中，X₁是亮氨酸(L)，苯丙氨酸(F)或缬氨酸(V)。在另一示例性实施方式中，X₁是亮氨酸(L)。在另一示例性实施方式中，X₂是异亮氨酸(I)或缬氨酸(V)。在另一示例性实施方式中，X₂是异亮氨酸(I)。在另一示例性实施方式中，X₃是酪氨酸(Y)或苯丙氨酸(F)。在另一示例性实施方式中，X₄是赖氨酸(K)或精氨酸(R)。在另一示例性实施方式中，X₅是精氨酸(R)，酪氨酸(Y)，或组氨酸(H)。在另一示例性实施方式中，X₆是丝氨酸(S)或天冬酰胺(N)。在另一示例性实施方式中，其中X₆是丝氨酸(S)。在另一示例性实施方式中，X₇是精氨酸(R)，赖氨酸(K)，谷氨酸(E)或丝氨酸(S)。在另一示例性实施方式中，X₇是赖氨酸(K)。在另一示例性实施方式中，X₈是丝氨酸(S)或天冬酰胺(N)。优选地，包含具有氨基酸序列X₁-X₂-X₃-W-D-D-D-X₄-X₅-Y-X₆-P-S-L-X₇-X₈(SEQ ID NO：100)的VH-CDR2的本发明的抗体特异性结合IL-6抗原。
[0110]本发明还包括包含VL区的抗-IL-6抗体，其中所述VL与SEQID NOs：1到18或33到37中任一个同一，除了一个或多个来自SEQ IDNOs：1到18或33到37的非CDR(例如，框架区)氨基酸被任何其他氨基酸取代之外。本发明还包括包含VH区的抗-IL-6抗体，其中所述VH与SEQ ID NOs：19到32或38到43中任一个同一，除了一个或多个来自SEQ ID NOs：19到32或38到43的非CDR(例如，框架区)氨基酸被任何其他氨基酸取代之外。优选地，包含在VH和/或VK序列的框架区中一个或多个氨基酸改变的抗-IL-6抗体将特异性结合IL-6抗原。
[0111]本发明包括包含任何下面的组合的抗体：
(1)本文所述的可变重链区(VH)，或包含本文所述一个或多个CDR的VH；和
(2)本文所述的可变轻链区(VL)或包含本文所述一个或多个CDR的VL。
[0112]例如，本发明包括包含任一下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H415(SEQ ID NO：19)和L112(SEQ ID NO：1)；H415(SEQ IDNO：19)和L151(SEQ ID NO：2)；H415(SEQ BD NO：19)和L158(SEQ IDNO：3)；H415(SEQ TD NO：19)和L159(SEQ ID NO：4)；H415(SEQ IDNO：19)和L164(SEQ ID NO：5)；H415(SEQ ID NO：19)和L165(SEQ IDNO：6)；H415(SEQ ID NO：19)和L166(SEQ ID NO：7)；H415(SEQ ID NO：19)和L167(SEQ ID NO：8)；H415(SEQ ID NO：19)和L168(SEQ IDNO：9)；H415(SEQ ID NO：19)和L169(SEQ ID NO：10)；H415(SEQ IDNO：19)和L170(SEQ ID NO：11)；H415(SEQ ID NO：19)和L171(SEQ IDNO：12)；H415(SEQ ID NO：19)和L172(SEQ ID NO：13)；H4T5(SEQ IDNO：19)和L173(SEQ ID NO：14)；H415(SEQ ID NO：19)和L174(SEQ IDNO：15)；H415(SEQ ID NO：19)和L175(SEQ ID NO：16)；H415(SEQ IDNO：19)和L189(SEQ ID NO：17)；H415(SEQ ID NO：19)和L198(SEQ IDNO：18)；H415(SEQ ID NO：19)和L314(SEQ ID NO：33)；H415(SEQ IDNO：19)和L305(SEQ ID NO：34)；H415(SEQ ID NO：19)和L303(SEQ IDNO：35)；H415(SEQ ID NO：19)和L298(SEQ ID NO：36)；或H415(SEQ IDNO：19)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0113]本发明还包括包含任一下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H884(SEQ ID NO：20)和L112(SEQ ID NO：1)；H884(SEQ ID NO：20)和L151(SEQ ID NO：2)；H884(SEQ ID NO：20)和L158(SEQ ID NO：3)；H884(SEQ ID NO：20)和L159(SEQ ID NO：4)；H884(SEQ ID NO：20)和L164(SEQ ID NO：5)；H884(SEQ ID NO：20)和L165(SEQ ID NO：6)；H884(SEQ ID NO：20)和L166(SEQ ID NO：7)；H884(SEQ ID NO：20)和L167(SEQ ID NO：8)；H884(SEQ ID NO：20)和L168(SEQ ID NO：9)；H884(SEQ ID NO：20)和L169(SEQ ID NO：10)；H884(SEQ ID NO：20)和L170(SEQ ID NO：11)；H884(SEQ ID NO：20)和L171(SEQ ID NO：12)；H884(SEQ ID NO：20)和L172(SEQ ID NO：13)；H884(SEQ ID NO：20)和L173(SEQ ID NO：14)；H884(SEQ ID NO：20)和L174(SEQ ID NO：15)；H884(SEQ ID NO：20)和L175(SEQ ID NO：16)；H884(SEQ ID NO：20)和L189(SEQ ID NO：17)；H884(SEQ ID NO：20)和L198(SEQ ID NO：18)；H884(SEQ ED NO：20)和L314(SEQ ID NO：33)；H884(SEQ ID NO：20)和L305(SEQ ID NO：34)；H884(SEQ ID NO：20)和L303(SEQ ID NO：35)；H884(SEQ ID NO：20)和L298(SEQ ID NO：36)；或H884(SEQ ID NO：20)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0114]本发明还包括包含任一下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1077(SEQ ID NO：21)和L112(SEQ ID NO：1)；H1077(SEQ ID NO：21)和L151(SEQ ID NO：2)；H1077(SEQ ID NO：21)和L158(SEQ ID NO：3)；H1077(SEQ ID NO：21)和L159(SEQ ID NO4)；H1077(SEQ ID NO：21)和L164(SEQ ID NO：5)；H1077(SEQ ID NO：21)和L165(SEQ ID NO：6)；H1077(SEQ ID NO：21)和L166(SEQ ID NO：7)；H1077(SEQ ID NO：21)和L167(SEQ ID NO：8)；H1077(SEQ ID NO：21)和L168(SEQ ID NO：9)；H1077(SEQ ID N O：21)和L169(SEQ ID NO：10)；H1077(SEQ ID NO：21)和L170(SEQ ID NO：11)；H1077(SEQ ID NO：21)和L171(SEQ IDNO：12)；H1077(SEQ ID NO：21)和L172(SEQ ID NO：13)；H1077(SEQ IDNO：21)和L173(SEQ ID NO：14)；H1077(SEQ ID NO：21)和L174(SEQ IDNO：15)；H1077(SEQ ID NO：21)和L175(SEQ ID NO：16)；H1077(SEQ IDNO：21)和L189(SEQ ID NO：17)；H1077(SEQ ID NO：21)和L198(SEQ IDNO：18)；H1077(SEQ ID NO：21)和L314(SEQ ID NO：33)；H1077(SEQ IDNO：21)和L305(SEQ ID NO：34)；H1077(SEQ ID NO：21)和L303(SEQ IDNO：35)；H1077(SEQ ID NO：21)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1077(SEQID NO：21)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0115]本发明还包括包含任一下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1078(SEQ ID NO：22)和L112(SEQ ID NO：1)；H1078(SEQ ID NO：22)和L151(SEQ ID NO：2)；H1078(SEQ ID NO：22)和L158(SEQ ID NO：3)；H1078(SEQ ID NO：22)和L159(SEQ ID NO：4)；H1078(SEQ ID NO：22)和L164(SEQ ID NO：5)；H1078(SEQ ED NO：22)和L165(SEQ ED NO：6)；H1078(SEQ ED NO：22)和L166(SEQ ED NO：7)；H1078(SEQ ED NO：22)和L167(SEQ ID NO：8)；H1078(SEQ ED NO：22)和L168(SEQ ED NO：9)；H1078(SEQ ED NO：22)和L169(SEQ ID NO：10)；H1078(SEQ ID NO：22)和L170(SEQ ID NO：11)；H1078(SEQ ED NO：22)和L171(SEQ EDNO：12)；H1078(SEQ ED NO：22)和L172(SEQ ID NO：13)；H1078(SEQ IDNO：22)和L173(SEQ ED NO：14)；H1078(SEQ ID NO：22)和L174(SEQ IDNO：15)；H1078(SEQ ED NO：22)和L175(SEQ ID NO：16)；H1078(SEQED NO：22)和L189(SEQ ED NO：17)；H1078(SEQ ED NO：22)和L198(SEQ ED NO：18)；H1078(SEQ ED NO：22)和L314(SEQ ED NO：33)；H1078(SEQ ED NO：22)和L305(SEQ ED NO：34)；H1078(SEQ ID NO：22)和L303(SEQ ID NO：35)；H1078(SEQ ED NO：22)和L298(SEQ EDNO：36)；或H1078(SEQ ED NO：22)和L321(SEQ ED NO：37)。
[0116]本发明还包括包含任一下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1079(SEQ ID NO：23)和L112(SEQ ID NO：1)；H1079(SEQ ID NO：23)和L151(SEQ ID NO：2)；H1079(SEQ ID NO：23)和L158(SEQ ID NO：3)；H1079(SEQ ID NO：23)和L159(SEQ ID NO：4)；H1079(SEQ ID NO：23)和L164(SEQ ID NO：5)；H1079(SEQ ID NO：23)和L165(SEQ ID NO：6)；H1079(SEQ ID NO：23)和L166(SEQ ID NO：7)；H1079(SEQ ID NO：23)和L167(SEQ ID NO：8)；H1079(SEQ ID NO：23)和L168(SEQ ID NO：9)；H1079(SEQ ID NO：23)和L169(SEQ IDNO：10)；H1079(SEQ ID NO：23)和L170(SEQ ID NO：11)；H1079(SEQ ID NO：23)和L171(SEQ IDNO：12)；H1079(SEQ ID NO：23)和L172(SEQ ID NO：13)；H1079(SEQ IDNO：23)和L173(SEQ ID NO.14)；H1079(SEQ ID NO：23)和L174(SEQ IDNO：15)；H1079(SEQ ID NO：23)和L175(SEQ ID NO：16)；H1079(SEQ IDNO：23)和L189(SEQ ID NO：17)；H1079(SEQ ID NO：23)和L198(SEQ IDNO：18)；H1079(SEQ ID NO：23)和L314(SEQ ID NO：33)；H1079(SEQ IDNO：23)和L305(SEQ ED NO：34)；H1079(SEQ ID NO：23)和L303(SEQ IDNO：35)；H1079(SEQ ID NO：23)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1079(SEQID NO：23)和L321(SEQ ID NO：37).
[0117]本发明还包括包含任一下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1081(SEQ ID NO：24)和L112(SEQ ID NO：1)；H1081(SEQ ID NO：24)和L151(SEQ ID NO：2)；H1081(SEQ ID NO：24)和L158(SEQ ID NO：3)；H1081(SEQ ID NO：24)和L159(SEQ ID NO：4)；H1081(SEQ ID NO：24)和L164(SEQ ID NO：5)；H1081(SEQ ID NO：24)和L165(SEQ ID NO：6)；H1081(SEQ ID NO：24)和L166(SEQ ID NO：7)；H1081(SEQ ID NO：24)和L167(SEQ ID NO：8)；H1081(SEQ ID NO：24)和L168(SEQ ID NO：9)；H1081(SEQ ED NO：24)和L169(SEQ ED NO：10)；H1081(SEQ ID NO：24)和L170(SEQ ID NO：11)；H1081(SEQ ID NO：24)和L171(SEQ IDNO：12)；H1081(SEQ ID NO：24)和L172(SEQ ID NO：13)；H1081(SEQ IDNO：24)和L173(SEQ ID NO：14)；H1081(SEQ ID NO：24)和L174(SEQ IDNO：15)；H1081(SEQ ED NO：24)和L175(SEQ ID NO：16)；H1081(SEQ IDNO：24)和L 189(SEQ ID NO：17)；H1081(SEQ ID NO：24)和L198(SEQ IDNO：18)；H1081(SEQ ID NO：24)和L314(SEQ ID NO：33)；H1081(SEQ EDNO：24)和L305(SEQ ID NO：34)；H1081(SEQ ID NO：24)和L303(SEQ IDNO：35)；H1081(SEQ ID NO：24)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1081(SEQID NO：24)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0118]本发明还包括包含任何下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1089(SEQ ID NO：25)和L112(SEQ ID NO：1)；H1089(SEQ ID NO：25)和L151(SEQ ID NO：2)；H1089(SEQ ID NO：25)和L158(SEQ ID NO：3)；H1089(SEQ ID NO：25)和L159(SEQ ID NO：4)；H1089(SEQ ID NO：25)和L164(SEQ ID NO：5)；H1089(SEQ ID NO：25)和L165(SEQ ID NO：6)；H1089(SEQ ID NO：25)和L166(SEQ ID NO：7)；H1089(SEQ ID NO：25)和L167(SEQ ID NO：8)；H1089(SEQ ID NO：25)和L168(SEQ ID NO：9)；H1089(SEQ ID NO：25)和L169(SEQ ID NO：10)；H1089(SEQ ID NO：25)和L170(SEQ ID NO：11)；H1089(SEQ ID NO：25)和L171(SEQ IDNO：12)；H1089(SEQ ID NO：25)和L172(SEQ ID NO：13)；H1089(SEQ IDNO：25)和L173(SEQ ID NO：14)；H1089(SEQ ID NO：25)和L174(SEQ IDNO：15)；H1089(SEQ ID NO：25)和L175(SEQ ID NO：16)；H1089(SEQ IDNO：25)和L189(SEQ ID NO：17)；H1089(SEQ ID NO：25)和L198(SEQ IDNO：18)；H1089(SEQ ID NO：25)和L314(SEQ ID NO：33)；H1089(SEQ IDNO：25)和L305(SEQ ID NO：34)；H1089(SEQ ID NO：25)和L303(SEQ IDNO：35)；H1089(SEQ ID NO：25)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1089(SEQBD NO：25)和L321(SEQ ID NO：37)。
[01191本发明还包括包含任何下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1511(SEQ ID NO：26)和L112(SEQ ID NO：1)；H1511(SEQ ID NO：26)和L151(SEQ ID NO：2)；H1511(SEQ ID NO：26)和L158(SEQ ID NO：3)；H1511(SEQ ID NO：26)和L159(SEQ ID NO：4)；H1511(SEQ ID NO：26)和L164(SEQ ID NO：5)；H1511(SEQ ID NO：26)和L165(SEQ ID NO：6)；H1511(SEQ ID NO：26)和L166(SEQ ID NO：7)；H1511(SEQ ID NO：26)和L167(SEQ ID NO：8)；H1511(SEQ ID NO：26)和L168(SEQ ID NO：9)；H1511(SEQ ID NO：26)和L169(SEQ ID NO：10)；H1511(SEQ ID NO：26)和L170(SEQ ID NO：11)；H1511(SEQ ID NO：26)和L171(SEQ IDNO：12)；H1511(SEQ ID NO：26)和L172(SEQ ID NO：13)；H1511(SEQ IDNO：26)和L173(SEQ ID NO：14)；H1511(SEQ ID NO：26)和L174(SEQ IDNO：15)；H1511(SEQ ID NO：26)和L175(SEQ ID NO：16)；H1511(SEQ IDNO：26)和L189(SEQ ID NO：17)；H1511(SEQ ID NO：26)和L198(SEQ IDNO：18)；H1511(SEQ ID NO：26)和L314(SEQ ID NO：33)；H1511(SEQ IDNO：26)和L305(SEQ ID NO：34)；H1511(SEQ ID NO：26)和L303(SEQ IDNO：35)；H1511(SEQ ID NO：26)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1511(SEQID NO：26)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0120]本发明还包括包含任何下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1420(SEQ ID NO：27)和L112(SEQ ID NO：1)；H1420(SEQ ID NO：27)和L151(SEQ ID NO：2)；H1420(SEQ ID NO：27)和L158(SEQ ID NO：3)；H1420(SEQ ID NO：27)和L159(SEQ ID NO：4)；H1420(SEQ ID NO：27)和L164(SEQ ID NO：5)；H1420(SEQ ID NO：27)和L165(SEQ ID NO：6)；H1420(SEQ ID NO：27)和L166(SEQ DD NO：7)；H1420(SEQ ID NO：27)和L167(SEQ ED NO：8)；H1420(SEQ ID NO：27)和L168(SEQ ID NO：9)；H1420(SEQ ID NO：27)和L169(SEQ ID NO：10)；H1420(SEQ ID NO：27)和L170(SEQ ID NO：11)；H1420(SEQ ID NO：27)和L171(SEQ IDNO：12)；H1420(SEQ ID NO：27)和L172(SEQ ID NO：13)；H1420(SEQ IDNO：27)和L173(SEQ ID NO：14)；H1420(SEQ ID NO：27)和L174(SEQ IDNO：15)；H1420(SEQ ID NO：27)和L175(SEQ ID NO：16)；H1420(SEQ IDNO：27)和L189(SEQ ID NO：17)；H1420(SEQ ID NO：27)和L198(SEQ IDNO：18)；H1420(SEQ ID NO：27)和L314(SEQ ID NO：33)；H1420(SEQ IDNO：27)和L305(SEQ ID NO：34)；H1420(SEQ ID NO：27)和L303(SEQ IDNO：35)；H1420(SEQ ID NO：27)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1420(SEQID NO：27)和L321(SEQ ED NO：37)。
[01211本发明还包括包含任何下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1432(SEQ ID NO：28)和L112(SEQ ID NO：1)；H1432(SEQ ID NO：28)和L151(SEQ ID NO：2)；H1432(SEQ ID NO：28)和L158(SEQ ID NO：3)；H1432(SEQ ID NO：28)和L159(SEQ ID NO：4)；H1432(SEQ ID NO：28)和L164(SEQ ID NO：5)；H1432(SEQ ID NO：28)和L165(SEQ ID NO：6)；H1432(SEQ ID NO：28)和L166(SEQ ID NO：7)；H1432(SEQ ID NO：28)和L167(SEQ ID NO：8)；H1432(SEQ ID NO：28)和L168(SEQ ID NO：9)；H1432(SEQ ID NO：28)和L169(SEQ ID NO：10)；H1432(SEQ ID NO：28)和L170(SEQ ID NO：11)；H1432(SEQ ID NO：28)和L171(SEQ IDNO：12)；H1432(SEQ ID NO：28)和L172(SEQ ID NO：13)；H1432(SEQ IDNO：28)和L173(SEQ ID NO：14)；H1432(SEQ ED NO：28)和L174(SEQ IDNO：15)；H1432(SEQ ED NO：28)和L175(SEQ ID NO：16)；H1432(SEQID NO：28)和L189(SEQ ID NO：17)；H1432(SEQ ID NO：28)和L198(SEQID NO：18)；H1432(SEQ ID NO：28)和L314(SEQ ID NO：33)；H1432(SEQID NO：28)和L305(SEQ ID NO：34)；H1432(SEQ ID NO：28)和L303(SEQID NO：35)；H1432(SEQ ID NO：28)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1432(SEQ ID NO：28)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0122]本发明还包括包含任何下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1515(SEQ ID NO：29)和L112(SEQ ID NO：1)；H1515(SEQ ID NO：29)和L151(SEQ ID NO：2)；H1515(SEQ ID NO：29)和L158(SEQ ID NO：3)；H1515(SEQ ID NO：29)和L159(SEQ ID NO：4)；H1515(SEQ ID NO：29)和L164(SEQ ID NO：5)；H1515(SEQ ID NO：29)和L165(SEQ ID NO：6)；H1515(SEQ ID NO：29)和L166(SEQ ID NO：7)；H1515(SEQ ID NO：29)和L167(SEQ ID NO：8)；H1515(SEQ ID NO：29)和L168(SEQ ID NO：9)；H1515(SEQ ID NO：29)和L169(SEQ ID NO：10)；H1515(SEQ ID NO：29)和L170(SEQ ID NO：11)；H1515(SEQ ID NO：29)和L171(SEQ ID NO：12)；H1515(SEQ ID NO：29)和L172(SEQ ID NO：13)；H1515(SEQ IDNO：29)和L173(SEQ ID NO：14)；H1515(SEQ ID NO：29)和L174(SEQ IDNO：15)；H1515(SEQ ID NO：29)和L175(SEQ ID NO：16)；H1515(SEQID NO：29)和L189(SEQ ID NO：17)；H1515(SEQ ID NO：29)和L198(SEQID NO：18)；H1515(SEQ ID NO：29)和L314(SEQ ID NO：33)；H1515(SEQID NO：29)和L305(SEQ ID NO：34)；H1515(SEQ ID NO：29)和L303(SEQID NO：35)；H1515(SEQ ID NO：29)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1515(SEQ ID NO：29)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0123]本发明还包括包含任何下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1362(SEQ ID NO：30)和L112(SEQ ID NO：1)；H1362(SEQ ID NO：30)和L151(SEQ ID NO：2)；H1362(SEQ ID NO：30)和L158(SEQ ID NO：3)；H1362(SEQ ID NO：30)和L159(SEQ ID NO：4)；H1362(SEQ ID NO：30)和L164(SEQ ID NO：5)；H1362(SEQ ID NO：30)和L165(SEQ ID NO：6)；H1362(SEQ ID NO：30)和L166(SEQ ID NO：7)；H1362(SEQ ID NO：30)和L167(SEQ ID NO：8)；H1362(SEQ ID NO：30)和L168(SEQ ID NO：9)；H1362(SEQ ID NO：30)和L169(SEQ ID NO：10)；H1362(SEQ ID NO：30)和L170(SEQ ID NO：11)；H1362(SEQ ID NO：30)和L171(SEQ IDNO：12)；H1362(SEQ ID NO：30)和L172(SEQ ID NO：13)；H1362(SEQ IDNO：30)和L173(SEQ ID NO：14)；H1362(SEQ ID NO：30)和L174(SEQ IDNO：15)；H1362(SEQ ID NO：30)和L175(SEQ ID NO：16)；H1362(SEQ IDNO：30)和L189(SEQ ID NO：17)；H1362(SEQ ID NO：30)和L198(SEQ IDNO：18)；H1362(SEQ ID NO：30)和L314(SEQ ID NO：33)；H1362(SEQ IDNO：30)和L305(SEQ ID NO：34)；H1362(SEQ ID NO：30)和L303(SEQ IDNO：35)；H1362(SEQ ID NO：30)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1362(SEQID NO：30)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0124]本发明还包括包含任何下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1437(SEQ ID NO：31)和L112(SEQ ID NO：1)；H1437(SEQ ID NO：31)和L151(SEQ ID NO：2)；H1437(SEQ ID NO：31)和L158(SEQ ID NO：3)；H1437(SEQ ID NO：31)和L159(SEQ ID NO：4)；H1437(SEQ ID NO：31)和L164(SEQ ID NO：5)；H1437(SEQ ID NO：31)和L165(SEQ ID NO：6)；H1437(SEQ ID NO：31)和L166(SEQ ID NO：7)；H1437(SEQ ID NO：31)和L167(SEQ ED NO：8)；H1437(SEQ ID NO：31)和L168(SEQ ID NO：9)；H1437(SEQ ID NO：31)和L169(SEQ ID NO：10)；H1437(SEQ ID NO：31)和L170(SEQ ID NO：11)；H1437(SEQ ID NO：31)和L171(SEQ IDNO：12)；H1437(SEQ ID NO：31)和L172(SEQ ID NO：13)；H1437(SEQ IDNO：31)和L173(SEQ ID NO：14)；H1437(SEQ ID NO：31)和L174(SEQ IDNO：15)；H1437(SEQ ID NO：31)和L175(SEQ ID NO：16)；H1437(SEQ IDNO：31)和L189(SEQ ID NO：17)；H1437(SEQ ID NO：31)和L198(SEQ IDNO：18)；H1437(SEQ ID NO：31)和L314(SEQ ID NO：33)；H1437(SEQ IDNO：31)和L305(SEQ ID NO：34)；H1437(SEQ ED NO：31)和L303(SEQ IDNO：35)；H1437(SEQ ID NO：31)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1437(SEQID NO：31)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0125]本发明还包括包含任何下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1461(SEQ ID NO：32)和L112(SEQ ID NO：1)；H1461(SEQ ID NO：32)和L151(SEQ ID NO：2)；H1461(SEQ ID NO：32)和L158(SEQ ID NO：3)；H1461(SEQ ID NO：32)和L159(SEQ ID NO：4)；H1461(SEQ ID NO：32)和L164(SEQ ID NO：5)；H1461(SEQ ID NO：32)和L165(SEQ ID NO：6)；H1461(SEQ ID NO：32)和L166(SEQ ID NO：7)；H1461(SEQ ID NO：32)和L167(SEQ ID NO：8)；H1461(SEQ ID NO：32)和L168(SEQ ID NO：9)；H1461(SEQ ID NO：32)和L169(SEQ ID NO：10)；H1461(SEQ ID NO：32)和L170(SEQ ID NO：11)；H1461(SEQ ID NO：32)和L171(SEQ IDNO：12)；H1461(SEQ ID NO：32)和L172(SEQ ID NO：13)；H1461(SEQ IDNO：32)和L173(SEQ ID NO：14)；H1461(SEQ ID NO：32)和L174(SEQ IDNO：15)；H1461(SEQ ID NO：32)和L175(SEQ ID NO：16)；H1461(SEQ IDNO：32)和L189(SEQ ID NO：17)；H1461(SEQ ID NO：32)和L198(SEQ IDNO：18)；H1461(SEQ ID NO：32)和L314(SEQ ID NO：33)；H1461(SEQ IDNO：32)和L305(SEQ ID NO：34)；H1461(SEQ ID NO：32)和L303(SEQ IDNO：35)；H1461(SEQ ID NO：32)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1461(SEQID NO：32)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0126]本发明还包括包含任何下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1519(SEQ ID NO：38)和L112(SEQ ID NO：1)；H1519(SEQ ID NO：38)和L151(SEQ ID NO：2)；H1519(SEQ ID NO：38)和L158(SEQ ID NO：3)；H1519(SEQ ID NO：38)和L159(SEQ ID NO：4)；H1519(SEQ ID NO：38)和L164(SEQ ID NO：5)；H1519(SEQ ID NO：38)和L165(SEQ ID NO：6)；H1519(SEQ ID NO：38)和L166(SEQ ID NO：7)；H1519(SEQ ID NO：38)和L167(SEQ ID NO：8)；H1519(SEQ ID NO：38)和L168(SEQ ID NO：9)；H1519(SEQ ID NO：38)和L169(SEQ ID NO：10)；H1519(SEQ ID NO：38)和L170(SEQ ID NO：11)；H1519(SEQ ID NO：38)和L171(SEQ IDNO：12)；H1519(SEQ ID NO：38)和L172(SEQ ID NO：13)；H1519(SEQ IDNO：38)和L173(SEQ ID NO：14)；H1519(SEQ ID NO：38)和L174(SEQ IDNO：15)；H1519(SEQ ID NO：38)和L175(SEQ ID NO：16)；H1519(SEQ IDNO：38)和L189(SEQ ID NO：17)；H1519(SEQ ID NO：38)和L198(SEQ IDNO：18)；H1519(SEQ ID NO：38)和L314(SEQ ID NO：33)；H1519(SEQ IDNO：38)和L305(SEQ ID NO：34)；H1519(SEQ ID NO：38)和L303(SEQ IDNO：35)；H1519(SEQ ID NO：38)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1519(SEQID NO：38)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0127]本发明还包括包含任何下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1520(SEQ ID NO：39)和L112(SEQ ID NO：1)；H1520(SEQ ID NO：39)和L151(SEQ ID NO：2)；H1520(SEQ ID NO：39)和L158(SEQ ID NO：3)；H1520(SEQ ID NO：39)和L159(SEQ ID NO：4)；H1520(SEQ ID NO：39)和L164(SEQ ID NO：5)；H1520(SEQ ID NO：39)和L165(SEQ ID NO：6)；H1520(SEQ ID NO：39)和L166(SEQ ID NO：7)；H1520(SEQ ID NO：39)和L167(SEQ ID NO：8)；H1520(SEQ ID NO：39)和L168(SEQ ID NO：9)；H1520(SEQ ID NO：39)和L169(SEQ ID NO：10)；H1520(SEQ ID NO：39)和L170(SEQ ID NO：11)；H1520(SEQ ID NO：39)和L171(SEQ IDNO：12)；H1520(SEQ ID NO：39)和L172(SEQ ID NO：13)；H1520(SEQ IDNO：39)和L173(SEQ ID NO：14)；H1520(SEQ ID NO：39)和L174(SEQ IDNO：15)；H1520(SEQ ID NO：39)和L175(SEQ ID NO：16)；H1520(SEQ IDNO：39)和L189(SEQ ID NO：17)；H1520(SEQ ID NQ：39)和L198(SEQ IDNO：18)；H1520(SEQ ID NO：39)和L314(SEQ ID NO：33)；H1520(SEQ IDNO：39)和L305(SEQ ID NO：34)；H1520(SEQ ID NO：39)和L303(SEQ IDNO：35)；H1520(SEQ ID NO：39)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1520(SEQID NO：39)和L321(SEQ ED NO：37)。
[0128]本发明还包括包含任何下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1521(SEQ ID NO：40)和L112(SEQ ID NO：1)；H1521(SEQ ID NO：40)和L151(SEQ ID NO：2)；H1521(SEQ ID NO：40)和L158(SEQ ID NO：3)；H1521(SEQ ID NO：40)和L159(SEQ ID NO：4)；H1521(SEQ ID NO：40)和L164(SEQ ID NO：5)；H1521(SEQ ID NO：40)和L165(SEQ ID NO：6)；H1521(SEQ ID NO：40)和L166(SEQ ID NO：7)；H1521(SEQ ID NO：40)和L167(SEQ ID NO：8)；H1521(SEQ ID NO：40)和L168(SEQ ID NO：9)；H1521(SEQ ID NO：40)和L169(SEQ ID NO：10)；H1521(SEQ ID NO：40)和L170(SEQ ID NO：11)；H1521(SEQ ID NO：40)和L171(SEQ TDNO：12)；H1521(SEQ ID NO：40)和L172(SEQ ID NO：13)；H1521(SEQ IDNO：40)和L173(SEQ ID NO：14)；H1521(SEQ ID NO：40)和L174(SEQ IDNO：15)；H1521(SEQ ID NO：40)和L175(SEQ ID NO：16)；H1521(SEQ IDNO：40)和L189(SEQ ID NO：17)；H1521(SEQ ID NO：40)和L198(SEQ IDNO：18)；H1521(SEQ ID NO：40)和L314(SEQ ID NO：33)；H1521(SEQ IDNO：40)和L305(SEQ ID NO：34)；H1521(SEQ ID NO：40)和L303(SEQ IDNO：35)；H1521(SEQ ID NO：40)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1521(SEQID NO：40)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0129]本发明还包括包含任何下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1522(SEQ ID NO：41)和L112(SEQ ID NO：1)；H1522(SEQ EDNO：41)和L151(SEQ ID NO：2)；H1522(SEQ ID NO：41)和L158(SEQ IDNO：3)；H1522(SEQ ID NO：41)和L159(SEQ ID NO：4)；H1522(SEQ IDNO：41)和L164(SEQ ID NO：5)；H1522(SEQ ID NO：41)和L165(SEQ IDNO：6)；H1522(SEQ ID NO：41)和L166(SEQ ID NO：7)；H1522(SEQ IDNO：41)和L167(SEQ ID NO：8)；H1522(SEQ ID NO：41)和L168(SEQ IDNO：9)；H1522(SEQ ID NO：41)和L169(SEQ ID NO：10)；H1522(SEQ IDNO：41)和L170(SEQ ID NO：11)；H1522(SEQ ID NO：41)和L171(SEQ IDNO：12)；H1522(SEQ ID NO：41)和L172(SEQ ID NO：13)；H1522(SEQ IDNO：41)和L173(SEQ ID NO：14)；H1522(SEQ ID NO：41)和L174(SEQ IDNO：15)；H1522(SEQ ID NO：41)和L175(SEQ ID NO：16)；H1522(SEQ IDNO：41)和L189(SEQ ID NO：17)；H1522(SEQ ID NO：41)和L198(SEQ IDNO：18)；H1522(SEQ ID NO：41)和L314(SEQ ID NO：33)；H1522(SEQ IDNO：41)和L305(SEQ ID NO：34)；H1522(SEQ ID NO：41)和L303(SEQ IDNO：35)；H1522(SEQ ID NO：41)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1522(SEQID NO：41)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0130]本发明还包括包含任何下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1553(SEQ DD NO：42)和L112(SEQ ID NO：1)；H1553(SEQ IDNO：42)和L151(SEQ ID NO：2)；H1553(SEQ ID NO：42)和L158(SEQ IDNO：3)；H1553(SEQ ID NO：42)和L159(SEQ ID NO：4)；H1553(SEQ IDNO.42)和L164(SEQ ID NO：5)；H1553(SEQ ID NO：42)和L165(SEQ IDNO：6)；H1553(SEQ ID NO：42)和L166(SEQ ID NO：7)；H1553(SEQ IDNO：42)和L167(SEQ ID NO：8)；H1553(SEQ ED NO：42)和L168(SEQ IDNO：9)；H1553(SEQ ID NO：42)和L169(SEQ ID NO：10)；H1553(SEQ IDNO：42)和L170(SEQ ID NO：11)；H1553(SEQ ID NO：42)和L171(SEQ IDNO：12)；H1553(SEQ ID NO：42)和L172(SEQ ID NO：13)；H1553(SEQ IDNO：42)和L173(SEQ ID NO：14)；H1553(SEQ ID NO：42)和L174(SEQ IDNO：15)；H1553(SEQ ED NO：42)和L175(SEQ ID NO：16)；H1553(SEQ IDNO：42)和L189(SEQ ID NO：17)；H1553(SEQ ID NO：42)和L198(SEQ IDNO：18)；H1553(SEQ ID NO：42)和L314(SEQ ID NO：33)；H1553(SEQ IDNO：42)和L305(SEQ ID NO：34)；H1553(SEQ ID NO：42)和L303(SEQ IDNO：35)；H1553(SEQ ID NO：42)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1553(SEQID NO：42)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0131]本发明还包括包含任何下述VH区和VL区组合的抗-IL-6抗体：H1579(SEQ ID NO：43)和L112(SEQ ID NO：1)；H1579(SEQ ID NO：43)和L151(SEQ ID NO：2)；H1579(SEQ ID NO：43)和L158(SEQ DD NO：3)；H1579(SEQ ID NO：43)和L159(SEQ ID NO：4)；H1579(SEQ ID NO：43)和L164(SEQ ED NO：5)；H1579(SEQ ID NO：43)和L165(SEQ ID NO：6)；H1579(SEQ TD NO：43)和L166(SEQ ID NO：7)；H1579(SEQ ID NO：43)和L167(SEQ ED NO：8)；H1579(SEQ ID NO：43)和L168(SEQ ID NO：9)；H1579(SEQ ID NO：43)和L169(SEQ ID NO：10)；H1579(SEQ ID NO：43)和L170(SEQ ID NO：11)；H1579(SEQ ID NO：43)和L171(SEQ IDNO：12)；H1579(SEQ ID NO：43)和L172(SEQ ID NO：13)；H1579(SEQ IDNO：43)和L173(SEQ ID NO：14)；H1579(SEQ ID NO：43)和L174(SEQ IDNO：15)；H1579(SEQ ID NO：43)和L175(SEQ ID NO：16)；H1579(SEQ IDNO：43)和L189(SEQ ID NO：17)；H1579(SEQ ID NO：43)和L198(SEQ IDNO：18)；H1579(SEQ ID NO：43)和L314(SEQ ID NO：33)；H1579(SEQ IDNO：43)和L305(SEQ ID NO：34)；H1579(SEQ ID NO：43)和L303(SEQ IDNO：35)；H1579(SEQ ID NO：43)和L298(SEQ ID NO：36)；或H1579(SEQID NO：43)和L321(SEQ ID NO：37)。
[0132]本领域普通技术人员将理解包含VH区和VL区组合的任何前述抗体可包括通常发现于抗体分子中的一个或多个另外的区域(或“结构域”)，例如一个或多个恒定重链区(例如，CH1，CH2和/或CH3)，和/或恒定轻链区(CL)。优选，如本文所述，包含VH区和VL区组合的抗体将特异性结合IL-6抗原。
核酸分子，载体和细胞
[0133]本发明包括编码抗-IL-6抗体重链的核酸分子，所述抗-IL-6抗体重链包含任一本文所述VH区，包括VH区的任何氨基酸变体。本发明还包括编码抗-IL-6抗体轻链的核酸分子，所述抗-IL-6抗体轻链包含任一本文所述VL区，包括VL区的任何氨基酸变体。在某些实施方式中，所述核酸分子编码抗-IL-6抗体重链的部分或抗-IL-6抗体轻链的部分。例如，本发明包括编码多肽的核酸分子，所述多肽包含本文所述抗-IL-6VH的一个或多个CDR，包括SEQ ID NOs：51到73代表的任何CDR。本发明还包括编码多肽的核酸分子，所述多肽包含本文所述的抗-IL-6VL的一个或多个CDR，包括SEQ ID NOs：74到96代表的任何CDR。
[0134]本发明还包括编码任何本文所述VH区的核酸分子，所述VH区包括SEQ ID NOs：19到32和38到43代表的任何VH区。本发明包括编码VH区的核酸分子，所述VH区具有与SEQ ID NOs：19到32和38到43中的任一个至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的氨基酸序列，其中包含所述VH区的抗体特异性结合IL-6。
[0135]本发明还包括编码任何本文所述VL区的核酸分子，所述VL区包括SEQ ID NOs：1到18和33到37代表的任何VL区。本发明包括编码VL区的核酸分子，所述VL区具有与SEQ ID NOs：1到18和33到37中的任一个至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的氨基酸序列，其中包含所述VL区的抗体特异性结合IL-6。
[0136]本发明还包括包含任何本文所述的核酸分子的表达载体。示例性的载体包括质粒，噬菌粒，粘粒，病毒和噬菌体核酸或能够在原核或真核细胞中自主复制或被复制的其他核酸分子。在某些实施方式中，载体能够在哺乳动物细胞中复制。典型的表达载体包含用于调节本发明的核酸分子的表达的转录和翻译终止子，起始序列，和启动子。载体还包含基因表达盒，所述基因表达盒包含至少一种独立终止子序列，允许载体在真核生物和原核生物中的载体复制的序列，即穿梭载体，和用于原核和真核系统的选择标记。载体优选包含提供用于选择转化的宿主细胞的表型特性例如赋予对抗生素例如氨比西林或新霉素的抗性的标记。
[0137]本发明的核酸分子可在一种或多种启动子的控制之下。例如，核酸分子可在组成型启动子或可诱导启动子的控制之下。示例性的启动子包括源于人巨细胞病毒的启动子，金属硫蛋白启动子，SV-40早期启动子，SV-40晚期启动子，鼠乳房肿瘤病毒启动子，劳氏肉瘤病毒启动子，多角体蛋白启动子，或显示出对于在真核细胞中表达有效的其他启动子。
[0138]本发明还包括包含本发明的核酸分子或载体的宿主细胞。术语“宿主细胞”表示本发明的核酸分子或载体引入其中的细胞或细胞群。本发明的宿主细胞优选是真核细胞或细胞系，优选植物，动物，脊椎动物，哺乳动物，啮齿动物，小鼠，灵长类动物，或人细胞或细胞系。术语“宿主细胞群”表示本发明的核酸分子或载体可引入其中并在其中表达的培养的细胞群。任何支持从本发明的核酸分子或载体表达的宿主细胞是意图的。虽然优选宿主细胞群是单培养物，即群体中每个细胞是相同的细胞类型，混合细胞培养物也是预期的。本发明的宿主细胞可以是粘附的，即生长的宿主细胞粘附于固相基质，或替代地，宿主细胞可以在悬浮液中。宿主细胞可以是源于原发性肿瘤的细胞，源于转移性肿瘤的细胞，初级细胞，具有丧失的接触抑制的细胞，转化的初级细胞，永生化的初级细胞，可经历细胞凋亡的细胞，和源于其的细胞系。
[0139]本发明还包括产生本发明的抗体的方法，该方法包含：(i)培养表达编码本发明的抗体的一种或多种核酸序列的宿主细胞，和(ii)从培养基中回收抗体。
药物组合物
[0140]本发明的抗-IL-6抗体可引入适于给予受试者的药物组合物中。典型地，药物组合物包含本发明的抗体或抗体部分和药学上可接受的载体。如本文所用，“药学上可接受的载体”包括任何和所有的溶剂，分散介质，包衣，抗细菌和抗真菌试剂，等渗和吸收延迟试剂，和生理学上兼容的类似物。药学上可接受的载体可进一步包含少量的辅助物质例如湿润或乳化试剂，防腐剂或缓冲剂，其增强抗体或抗体部分的保存期限或有效性。
[0141]本发明的药物组合物可以是多种形式。这包括例如，液体，半固体和固体剂量形式，例如液体溶液(例如，可注射和可输注的溶液)，分散液或悬浮液，片剂，丸剂，粉剂，脂质体和栓剂。优选形式依赖于给药和治疗应用意图的模式。典型优选的组合物是可注射或可输注溶液的形式，例如类似于用于用其他抗体对人的被动免疫的组合物。给药的优选模式是肠胃外(例如，静脉内，皮下，腹膜内，肌肉内)。在一个优选的实施方式中，抗体通过静脉内输注或注射给药。在另一优选的实施方式中，抗体通过肌肉内或皮下注射给药。
[0142]治疗组合物典型地必须是无菌的和在制备和储存条件下是稳定的。组合物可制剂为溶液，微乳剂，分散液，脂质体，或适合于高药物浓度的其他规则结构。根据需要，可通过在具有一种或多种上面列举的成分的适当溶剂中引入需要量的活性化合物(即，抗体或抗体部分)，然后通过过滤灭菌，而制备无菌可注射溶液。通常，通过将活性化合物引入包含碱性分散培养基和来自上面列举的需要的其他成分的无菌载体而制备分散液。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉剂的例子中，制备的优选方法是制备无菌可注射溶液，制备的优选方法是产生活性成分加上来自其先前无菌过滤溶液的另外的期望成分的粉末的真空干燥和冷冻干燥。可保持溶液的适当的流动性，例如，通过利用包衣例如卵磷脂，在分散液的例子中通过保持期望的颗粒大小，并且通过利用表面活性剂。可注射组合物的延长吸收可通过在组合物中包括延迟吸收的试剂例如单硬脂酸盐和凝胶而产生。
[0143]本发明的抗-IL-6抗体可通过多种本领域已知的方法给予，尽管用于许多治疗用途，优选的给药途径/模式是静脉内注射或输注。如本领域熟练技术人员将理解的，给药途径和/或模式将根据期望的结果而改变。在某些实施方式中，活性化合物可与将保护化合物免于快速释放的载体一起制备，例如控释制剂，包括植入体，经皮贴片，和微胶囊化递送系统。生物可降解，生物兼容的聚合物可被利用，例如乙烯乙烯基醋酸酯，聚酐，聚乙醇酸，胶原蛋白，聚原酸酯，和聚乳酸。制备所述制剂的许多方法是专利方法并且对于本领域熟练技术人员是公知的。见例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，J.R.Robinson，ed.，Marcel Dekker，Inc.，New York，1978。
[0144]在某些实施方式中，本发明的抗-IL-6抗体可以是口服给药，例如与惰性稀释液或可吸收的食用载体一起。化合物(和其他成分，如果期望的话)还可包封在硬或软的壳凝胶胶囊中，压缩为片剂，或直接引入受试者的食物中。对于口服治疗给药，化合物可与赋形剂一起引入，并且以可消化片剂，口腔片剂，含片，胶囊，酏剂，悬浮液，糖浆，晶片等形式食用。为通过肠胃外给药之外的方法给予本发明的化合物，用预防其失活的材料包被化合物或与化合物共给药是必要的。
[0145]补充的活性化合物也可引入组合物中。在某些实施方式中，本发明的抗体或抗体部分与一种或多种另外的治疗试剂共制剂和/或共给药。在一些实施方式中，所述一种或多种另外的治疗试剂是用于治疗本文所述的疾病或病症的试剂，特别是在名为“本发明的抗-IL-6抗体”的部分中所述的疾病或病症。例如，本发明的抗-IL-6抗体可以与结合IL-6或其他靶标例如结合IL-6受体的抗体的一种或多种其他抗体共制剂和/或共给药。
[0146]如本文所用的，术语“治疗”指治疗性治疗，包括预防性措施，其中目标是预防或降低(减少)与疾病或病症相关的不期望的生理学改变。有益或期望的临床结果包括但不限于症状的缓解，疾病或病症程度的减轻，疾病或病症的稳定化(即，疾病或病症不恶化)，疾病或病症进展的延迟或减慢，疾病或病症的改善或减轻，和疾病或病症的免除(部分或全部)，可检测或不可检测地。“治疗”还可表示与当不接受治疗时预期的存活相比延长的存活。需要治疗的那些人包括已经具有疾病或病症的那些人以及具有疾病或病症的倾向的那些人或疾病或病症有待于预防的那些人。
[0147]本发明的药物组合物可包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明的抗-IL-6抗体。“治疗有效量”指足以获得期望的治疗结果的剂量和时期的有效数量。抗体的治疗有效量可根据因素例如个体的疾病状态，年龄，性别和体重，以及抗体或抗体部分在个体中产生期望的应答的能力，而改变。而且，在治疗有效量中抗体或抗体部分的毒性或有害效果被治疗有益效果超过。“预防有效量”指足以获得期望的预防结果的剂量和时期的有效数量。典型地，由于预防剂量在疾病之前或在疾病早期阶段用于受试者，预防有效量将小于治疗有效量。
[0148]可调整剂量方案以提供最佳期望的应答(例如，治疗或预防应答)。例如，可给予单个大丸剂，可随着时间给予几个分开的剂量，或者可如治疗环境的紧急所指示，适当地降低或提高剂量。为给药的方便和剂量的均匀，将肠胃外组合物制剂为剂量单元形式是特别优选的。本文所用的剂量单元形式指适于作为用于待治疗的哺乳动物受试者的单元剂量的物理上分离的单元；每个单元包含为与需要的药物载体联合产生预期治疗效果而计算出的预定量的活性化合物。本发明剂量单元形式的具体要求由以下因素规定并且直接依赖于以下因素：(a)活性化合物的独特性质和要获得的特定治疗或预防效果，和(b)本领域为处理个体中的敏感性的混合所述活性化合物的固有限制。
[0149]本发明抗-IL-6抗体的一个示例性，非限制性范围的治疗或预防有效量是0.1-20mg/kg，更优选1-10mg/kg。要足以剂量值可随待缓解的病症的类型和严重性而改变。需要进一步理解对于任何特定受试者，特定剂量方案硬根据个体需要和给予或减毒组合物给予的人的职业判断而随着时间调节，并且本文所述的剂量范围仅仅是示例性的并且不意图限制所请求的组合物的范围或实践。
本发明的抗-IL-6抗体的治疗用途
[0150]本发明的抗体可用于治疗由IL-6的作用介导，与其相关，或由其引起的任何疾病或病症。例如，本发明的抗体可用于治疗产生于IL-6与IL-6受体结合的疾病或病症。本发明的抗体可用于治疗由细胞内信号传导事件引起的疾病或病症，所述细胞内信号传导事件产生于，直接或间接地，IL-6与IL-6受体的结合。示例性的细胞内IL-6信号传导途径图示于图11。本发明的抗体可用于治疗由任何图11所示的分子引起或与其相关的任何疾病或病症，其活性被IL-6与IL-6受体的结合所影响。
[0151]因此，本发明包括用于治疗由IL-6的作用介导，与其相关，或由其引起的疾病或病症。本方法包含给予有此需要的患者本文所述的抗-IL-6抗体。表述“本文所述抗-IL-6抗体”意图表示包含任何本文所述VH区和/或VL区的任何抗-IL-6抗体，以及包含任何本文所述VH区的变体和/或任何本文所述VL区的变体的任何抗-IL-6抗体：“本文所述抗-IL-6抗体”还意图表示包含本文所述的一个或多个VH CDRs(例如，CDR1，CDR2和/或CDR3)和/或一个或多个VL CDRs(例如，CDR1，CDR2和/或CDR3)的任何抗-IL-6抗体。优选，所述抗体特异性结合IL-6抗原。
[0152]在一些实施方式中，待治疗的疾病或病症选自自身免疫疾病或病症，与异常或不适当的血管发生相关的疾病或病症，癌症，骨关节炎，特发性青少年关节炎，和纤维变性病症。
[0153]在一个示例性实施方式中，本发明提供了用于治疗自身免疫疾病或病症的方法，其中该方法包含给予有此需要的患者本文所述的抗-IL-6抗体。可用本发明的抗-IL-6抗体治疗的示例性的自身免疫疾病和病症包括，例如，同种异体移植排斥，自身免疫甲状腺疾病(例如，Graves′疾病和Hashimoto′s甲状腺炎)，自身免疫性葡萄膜炎(autoimmuneuveoretinitis)，巨细胞动脉炎，炎性肠疾病(包括例如，Crohn′s疾病，溃疡性结肠炎，局限性肠炎，肉芽肿性肠炎，末梢回肠炎，节段性回肠炎，和末端回肠炎)，胰岛素依赖性糖尿病，多发性硬化症，恶性贫血症，牛皮癣，关节炎，类风湿性关节炎，肉状瘤病，硬皮病，和全身性红斑狼疮。
[0154]本发明包括治疗与异常或不适当的血管发生相关的疾病或病症的方法，其中所述方法包含给予有此需要的患者本文公开的抗-IL-6抗体。可用本发明的抗-IL-6抗体治疗的与异常或不适当的血管发生相关的示例性的疾病和病症包括例如，心血管疾病例如血管瘤，血管纤维瘤，血管畸形，动脉硬化症，粘连性和水肿性硬化(synechia and edemicsclerosis)，和眼科疾病例如角膜移植后的新血管形成，新生血管性青光眼，糖尿病性视网膜病，晶体后纤维增生症，和颗粒状结膜炎。可被本发明的抗-IL-6抗体治疗的与不适当的血管生成相关的炎性疾病包括例如，关节炎，皮肤病学疾病例如牛皮癣，毛细管扩张，脓性肉芽瘤，脂溢性皮炎，静脉溃疡，痤疮，红斑痤疮(rosacea)(酒糟鼻(cne rosacea)或红斑(erythematosa))，疣(warts)(疣(verrucas))，湿疹，血管瘤，和淋巴管生成(lymphangiogenesis)。
[0155]本发明包括治疗癌症的方法，其中所述方法包含给予有此需要的患者本文所述的抗-IL-6抗体。可被本发明的抗-IL-6抗体治疗的示例性癌症包括例如，产生于免疫细胞异常的癌症，包括骨髓癌如多发性骨髓癌，和骨髓性白血病(CML)，以及淋巴细胞性白血病(CLL和ALL)和淋巴瘤，特别是非Hodgkin′s淋巴瘤(NHL)。本发明的抗体还可用于治疗例如，肾癌，乳癌，前列腺癌，淋巴瘤，移植后淋巴瘤，和移植后淋巴增生性疾病(也称为移植后淋巴增殖性病症)。
[0156]可被本发明的抗-IL-6抗体治疗的另外病症包括例如，骨关节炎，特发性青少年关节炎，类风湿性关节炎，和纤维变性病症(例如内部和外部器官瘢痕形成)。
[0157]本发明还包括本发明的抗体用于制备治疗本文所述的疾病或病症的药物中的用途。
[0158]本领域普通技术人员将容易地理解本文所述的组合物，方法和用途的其他适当的修饰和调整是显而易见的，并且可在不偏离本发明或其任何实施方式的范围的前提下作出。现在已经详细描述了本发明，参考下面实施例将更容易理解上述，所述实施例包括在此仅仅为了例示的目的，并且不意图限制本发明。
实施例
实施例1
特异性结合IL-6的第一代人单克隆抗体
[0159]本实施例的目的是从称为B-E8(也称为Elsilimomab)的鼠IL-6抗体产生人抗-IL-6单克隆抗体。
[0160]利用基于牛痘病毒的抗体筛选平台实施了筛选方法，以鉴定当与鼠B-E8抗体的VK或VH区配对时形成特异性结合IL-6的抗体的人VH和VK区。选择的人VH和VK然后分别用于选择特异性结合IL-6的人VK和VH。基于牛痘病毒的筛选平台的细节公开于例如，美国专利申请公开号2005/0196755中。从该筛选方法，利用鼠B-E8或人VH，鉴定了18种不同的人VK基因。确定了鉴定的人VK基因的核酸序列以及它们相应的氨基酸序列。鉴定的人VK基因的氨基酸序列示于下面的表8：
表8：鉴定的人VK区的氨基酸序列


下划线序列分别代表CDR 1-3。
[0161]另外，利用鼠B-E8或人VK，鉴定了7种不同的人VH基因。确定了鉴定的人VH基因和它们相应的氨基酸序列。鉴定的人VH基因的氨基酸序列示于下面的表9：
表9：鉴定的人VH区的氨基酸序列

下划线序列分别代表CDR 1-3。
[0162]如下表10所示，鉴定的人VH区的氨基酸序列互相显示出显著的序列同一性：
表10：在人VH中鉴定的氨基酸序列
H1079 H415 H1081 H1078 H1089 H1077 H1079 89 94 90 90 89 H1415 89 92 90 95 90 H1081 94 92 93 92 91 H1078 90 90 93 90 94 H1089 90 95 92 90 89 H1077 89 90 9l 94 89
[0163]鉴定的人VH区的比对描绘于图1中。
[0164]所有鉴定的人VK与所有鉴定的人VH交叉配对。通过ELISA测试了产生于这些交叉配对的抗体的结合IL-6的能力。还测试了所述抗体在阻断IL-6-诱导的细胞增殖或IL-6结合IL-6R的测定中的功能活性。
[0165]通过ELISA，基于J.of Immunology Methods 77(1985)305-319中所述的方法，测量了选择的抗体对于IL-6的亲和性。简短而言，用用包被缓冲剂中的2μg/ml的mBE4捕获抗体包被平板，每孔100μl。平板过夜培养。接下来，清洗平板3次并且轻敲干燥(tapped dry)。平板然后用每孔200μl的测定稀释液或PBS中10％FBS封闭，并且培养2小时。当平板封闭时，通过预培养大约2ng/ml浓度的65μl的Ab与65μl的不同浓度的rhIL6(从5.12μg/ml到5ng/ml以1∶2连续稀释，总共12种不同浓度，包括没有IL-6的一种)在溶液中建立起竞争反应。反应在RT下进行3-4小时。因此，根据作为单体的IL-6，在竞争溶液中最终的rhIL6是从98.46、49.23、24.62、12.31、6.15、3.08、1.54、0.77、0.38、0.19、0.10和0nM。接下来，平板清洗三次并且轻敲干燥。向BE4包被平板中每孔添加100μl中的50ng/ml的重组人IL-6。平板培养1-2小时。平板清洗三次并且轻敲干燥。接下来，来自上述的100μl的mAb样品添加到IL-6捕获平板中。平板在RT下培养2小时(因此，在此点任何未结合的mAb将通过ELISA测量)。平板人然后清洗5次并且轻敲干燥。以1∶20,000稀释液或1∶40,000稀释液(根据组(lot))添加100μl的检测Ab山羊抗-人IgG F(ab)′2-HRP(Jackson lab)，并且平板培养1-2小时。平板清洗7次并且轻敲干燥。接下来，显象底物(试剂盒中每种试剂等份)被预混合并且在使用前允许暖和到室温。然后向每孔中加入100μl的显象剂。平板允许在黑暗中的抽屉中非密封地显象15分钟。最后，通过添加100μl的2N H₂SO₄到每孔中而终止显象，并且平板在450nm-570nm的终点读数。
[0166]阻断测定如本文别处所述地进行。
[0167]从VH/VK交叉配对中，鉴定了33种第一代mAb。这些第一代mAb列于下表11：
表11：第一代人抗-IL-6抗体的概述
  mAb  VH  VK  亲和性(以nm的IC50)  对于IL-6-诱导的细胞  增殖的中断活性  88*  H383  L112  0.5  ++++  123  H884  L112  1.1  179  H415  L112  0.85-4.2  ++  181  H415  L159  12.9  182  H415  L164  6.3  183  H415  L165  1.75  ++  184  H415  L166  2.4  185  H415  L167  1.5  186  H415  L168  2.0  187  H415  L169  2.4  188  H415  L170  1.4  189  H415  L171  0.72  190  H415  L172  1.9  ++  191  H415  L173  1.5  192  H415  L174  2.3  193  H415  L175  2.7  197  H884  L167  3.7  201  H884  L171  2.0  202  H884  L172  2.4
  mAb  VH  VK  亲和性(以nm的IC50)  对于IL-6-诱导的细胞  增殖的中断活性  205  H884  L175  7.4  237  H1077  L158  6.5  239  H1078  L158  9.6  241  H1079  L158  6.5  242  H1079  L159  2.2  ++  246  H1081  L151  5.5  247  H1081  L158  4.0  248  H1081  L159  2.0  265  H415  L189  6.2  273  H884  L171  275  H415  L198  0.7  ++  285  H1089  L158  2.5  286  H1089  L159  2.5  297  H1081  L172  11.5  +  416  H1079  L198  0.6  +++
^*mAb 88是嵌合B-E8对照抗体
[0168]如上表所示，获得的所有第一代人抗-IL-6抗体显示出对于IL-6一定程度的亲和性和在阻断测定中的功能活性。简短而言，12.5ng/ml的生物素化人重组IL-6与抗-IL-6抗体一起在冰上在显示的浓度下培养20分钟。清洗之后，链霉亲和素-PE被添加以显示结合于细胞表面的IL-6。清洗之后，通过流式细胞术分析细胞。
[0169]某些示例性第一代mAb的阻断IL-6结合U266细胞上的IL-6受体的能力描绘于图2。
[0170]本实施例因此显示了几种生物学功能的人抗-IL-6单克隆抗体的生产。
实施例2
人抗-IL-6抗体的亲和性改进
[0171]利用突变以进一步改进实施例1中鉴定的第一代人mAb的功能活性。特别是，基于PCR的突变被利用以引入在mAb416的VH(H1079)和VK(L198)的CDR3中的氨基酸改变。
[0172]为引入可变性，在VH和VK基因的特定位点引入序列NNK，其中N可以是A，T，G或C，并且K是T或G。利用NNK，在每个位点可引入所有的20个氨基酸和1个终止密码子(在NNK序列中存在32种可能的组合4×4×2)。
[0173]在H1079和L198中所有的CDR3残基被改变，一次一个残基。轻链(VK)CDR3具有9个氨基酸，并且重链(VH)CDR3具有12个氨基酸。还利用本方法改变在H1079的CDR1和CDR2中选择的残基。
[0174]为产生突变，为PCR反应，将编码用NNK取代的氨基酸并且扩增CDR3和框架区4的反义引物与在感兴趣的链的框架区1中杂交的正义引物配对。每种PCR产物编码全部VK或VH链并且具有一个氨基酸位点转换为NNK。
[0175]PCR产物被克隆如入包含人γ1(对于VH突变体)或κ(对于VK突变体)的恒定区的哺乳动物表达载体中，由此产生全长重或轻链。
[0176]克隆置于96孔平板格式中，每孔1种克隆。质粒DNA从每种克隆中被纯化并且然后通过转染入CHO细胞每种克隆与补充链一起表达(例如，突变的VK将与VH一起表达)。选择并表征更高亲和性结合物。这种方法的概述示于图3。
[0177]当鉴定了更高亲和性突变体时，对突变体进行测序，通过转染入CHO细胞产生了获得的mAb，并且然后在基于流式细胞术的IL-6阻断测定中测试其特异性，亲和性和功能。
[0178]通过本方法，获得了下列H1079和L198变体：
表12：通过基于PCR的突变获得的H1079变体

^*氨基酸编号代表Kabat编号。
§方框中残基是已相对于H1079序列改变了的残基。
下划线残基分别代表CDR 1-3。
表13：通过基于PCR的突变获得的L198变体

^*氨基酸编号代表Kabat编号。
§方框内残基是相对于L198序列已改变的残基。
下划线序列分别代表CDR 1-3。
[0179]利用表12所述的H1079变体与L198配对产生了下列抗体：
表14：通过将H1079变体与L198配对产生的mAb


[0180]测试单克隆抗体416，926，810，963，968和992与对照mAb88的阻断IL-6结合IL-6R表达细胞的能力。简短而言，以1nM的人重组IL-6与1μg/ml-0.1μg/ml-10ng/ml-0ng/ml抗-IL-6抗体在冰上培养30分钟。FcR封闭的U266细胞(大约250,000细胞)然后被添加并且另外在冰上共培养30分钟。清洗之后，纯化的IL-6-特异的小鼠抗体(B-F6)被添加并且与细胞在冰上培养30分钟。最后，APC-缀合多克隆山羊-抗-小鼠Fcγ被添加并且在冰上培养30分钟。清洗之后，通过仅仅选择(gating on)活细胞通过流式细胞术分析细胞。每种样品开始于250,000细胞。所有的流式细胞术数据建立于10,000活(PI-阴性)细胞的最小值之上。这些试验的结果示于图4。
[0181]利用表13所述的L198变体与H1079配对产生下列抗体：
表15：通过将L198变体与L1079配对产生的mAbs
  mAb  命名  L198变体  VH  亲和性(以nM的IC50)  774  770  765  808  L314  L305  L298  L321  H1079  H1079  H1079  H1079  0.16  0.12  0.07  0.08
[0182]H1079中的多种突变也通过上述方法制备。
表16：通过基于PCR的突变获得的H1079多种突变体

^*氨基酸编号代表Kabat编号。
§方框内残基是相对于H1079序列已经改变的残基。
下划线序列分别代表CDR 1-3。
[0183]另外，命名为H1553的变异的重链通过在H1079的CDR2中进行单个氨基酸改变(F52W)而产生。H1553具有下述氨基酸序列：

[0185]而且，在H1553的CDR2中发现的氨基酸改变与在H1522中的四个CDR3氨基酸取代组合以产生H1579，其具有下述氨基酸序列：

[0187]如下表17所示，通过组合VH和VK变体获得下列mAb：
表17：通过组合VH和VK变体产生mAb
  mAb  命名  VH变体  VK变体  亲和性(以nM的IC50)  1154  1155  1156  1192  1259  1337  1338  1339  1340  H1522  H1522  H1522  H1553  H1579  H1579  H1579  H1579  H1579  L198  L305  L314  L198  L198  L305  L314  L298  L321  0.027  0.032  0.023  0.029  0.028  0.047  0.031  0.026  0.028
[0188]如表18所示，示例性mAbs对于IL-6的亲和性通过IC50ELISA和Biacore确定。如上所述进行IC50ELISA。利用HBS-EP缓冲剂(Biacore AB)根据制造商说明进行通过Biacore的亲和性分析。简短而言，100μg/ml的山羊抗-人IgG(Sigma-Aldrich Co.)固定在CM5传感器芯片的表面(Biacore AB)，对于每种IL-6mAb的亲和性通过在Biacore 2000系统(Biacore AB)上以5μl/分钟的流率注射15μl的5μg/ml的mAb然后以30μl/分钟的流率注射100μl的40nM到1.25nM的人IL-6(StrathmannBiotec GmbH & Co.KG)而确定。
表18：通过IC50ELISA和Biacore的mAb的亲和性
  mAb  通过IC50 ELISA的亲和性(nm)  通过Biacore的亲和性(nm)  88(嵌合B-E8)  1339  1259  1340  1338  1337  926  416  0.01  0.026  0.028  0.028  0.031  0.047  0.033  0.056  0.02  0.071  0.093  未确定  0.072  未确定  0.13  0.3
[0189]单克隆抗体1259、1337、1338、1339和1340是IgG1κ。所有的恒定区是相同的。恒定区在表达质粒中并且因此在mAb到mAb之间不改变。仅仅VH和VK区从文库中选择。
[0190]本实施例因此例示了通过基于PCR的突变获得的包含变异的VH和VK链的几种另外的人抗-IL-6单克隆抗体的产生。
实施例3
序列和载体
示例性的重和轻链序列
[0191]编码鼠mAb B-E8的重和轻链的核苷酸序列描绘于表19：
表19：B-E8的重和轻链序列

[0192]人mAb926的重和轻链的氨基酸序列描绘于表20：
表20：mAb 926的重和轻链序列
  mAb 926重链  MGWSCIILFLVATATGAHSQVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCSFSGFSLSTSGVG  VGWVRQPPGKALEWLAFIFWDDDKYYSPSLESRLTITKDTSKNQVVLTMTN  MDPVDTATYYCARSADDYLYYALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS  KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV  VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP  SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK  PREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ  PREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP  PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG  K(SEQ ID NO：46)  mAb 926轻链  MGWSCIILFLVATATGVHSDIQMTQSPSSLSAFVGDGVTMTCWASQSINDYL  NWYHQRPGEAPELLVFAASNLQIGVPSRFRGSGSETYFTLTINSLQPEDSGTYF  CQNGHSFPLTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP  REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY  ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：47)
[0193]人mAb1339的重和轻链的氨基酸序列描绘于表21：
表21：mAb 1339的重和轻链序列
  mAb 1339重链  MGWSCIILFLVATATGAHSQVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCSFSGFSLSTSGVG  VGWVRQPPGKALEWLAFIWWDDDKYYSPSLESRLTITKDTSKNQVVLTMTN  MDPVDTATYYCARSADDYLYYSFDTWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK  STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV  TVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPS  VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP  REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQP  REPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP  VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK  (SEQ ID NO：48)  mAb 1339轻链  MGWSCIILFLVATATGVHSDIQMTQSPSSLSAFVGDGVTMTCWASQSINDYL  NWYHQRPGEAPELLVFAASNLQIGVPSRFRGSGSETYFTLTINSLQPEDSGTYF  CQNAHSFPLTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP  REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY  ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：49)
表达MAB1339的重和轻链的双基因载体的构建
将重链H1579克隆入pCONG1中
[0194]H1579通过用BssHII和BstEII限制性酶消化可变区从原始表达载体亚克隆入HindIII/ApaI-切割pConGl。H1579.pConGl克隆被证实序列。
将轻链L298克隆入pCONK2
[0195]L298通过用ApaLl/XhoI消化可变区从原始表达载体亚克隆并连接入牛痘转移载体VKE中以提供编码对于接下来的双基因克隆必要的限制性位点的兼容序列。可变序列被PCR扩增以在5’末端添加HindIII位点并在3’末端添加BsiWI位点。PCR产物被克隆入TOPO以促进在接下来的克隆反应中用HindIII和BsiWI的完全消化。L298TOPO被证实序列，用Hindlll/BsiWI消化并且连接入Hindlll/BsiWI-切割pConK2。L298.pConK2被证实序列。
双基因载体的产生
[0196]利用H1579.pConGl消化24小时，重链表达盒被释放为Notl/Pvul片段。用AviII消化L298.pConK2以防止亲本克隆的再形成，并且利用Pvul和Notl消化，L298可变区盒被释放。凝胶纯化之后，重和轻链盒以1∶1的比例在14℃下的过夜连接反应中被连接。通过完整细胞PCR筛选集落中重和轻链同时插入的存在，通过测序确认阳性克隆。双基因载体的图谱描绘于图9。双基因载体的序列示于表22：
表22：mAb 1339双基因载体的核苷酸序列
  1    GCTTTCTCAT AGCTCACGCT GTAGGTATCT CAGTTCGGTG TAGGTCGTTC GCTCCAAGCT  61   GGGCTGTGTG CACGAACCCC CCGTTCAGCC CGACCGCTGC GCCTTATCCG GTAACTATCG  121  TCTTGAGTCC AACCCGGTAA GACACGACTT ATCGCCACTG GCAGCAGCCA CTGGTAACAG  181  GATTAGCAGA GCGAGGTATG TAGGCGGTGC TACAGAGTTC TTGAAGTGGT GGCCTAACTA  241  CGGCTACACT AGAAGAACAG TATTTGGTAT CTGCGCTCTG CTGAAGCCAG TTACCTTCGG  301  AAAAAGAGTT GGTAGCTCTT GATCCGGCAA ACAAACCACC GCTGGTAGCG GTGGTTTTTT  361  TGTTTGCAAG CAGCAGATTA CGCGCAGAAA AAAAGGATCT CAAGAAGATC CTTTGATCTT  421  TTCTACGGGG TCTGACGCTC AGTGGAACGA AAACTCACGT TAAGGGATTT TGGTCATGAG  481  ATTATCAAAA AGGATCTTCA CCTAGATCCT TTTAAATTAA AAATGAAGTT TTAAATCAAT  541  CTAAAGTATA TATGAGTAAA CTTGGTCTGA CAGTTACCAA TGCTTAATCA GTGAGGCACC  601  TATCTCAGCG ATCTGTCTAT TTCGTTCATC CATAGTTGCC TGACTCCCCG TCGTGTAGAT  661  AACTACGATA CGGGAGGGCT TACCATCTGG CCCCAGTGCT GCAATGATAC CGCGAGACCC  721  ACGCTCACCG GCTCCAGATT TATCAGCAAT AAACCAGCCA GCCGGAAGGG CCGAGCGCAG  781  AAGTGGTCCT GCAACTTTAT CCGCCTCCAT CCAGTCTATT AATTGTTGCC GGGAAGCTAG  841  AGTAAGTAGT TCGCCAGTTA ATAGTTTGCG CAACGTTGTT GCCATTGCTA CAGGCATCGT  901  GGTGTCACGC TCGTCGTTTG GTATGGCTTC ATTCAGCTCC GGTTCCCAAC GATCAAGGCG  961  AGTTACATGA TCCCCCATGT TGTGCAAAAA AGCGGTTAGC TCCTTCGGTC CTCCGATCGT  1021 TGTCAGAAGT AAGTTGGCCG CAGTGTTATC ACTCATGGTT ATGGCAGCAC TGCATAATTC  1081 TCTTACTGTC ATGCCATCCG TAAGATGCTT TTCTGTGACT GGTGAGTACT CAACCAAGTC  1141 ATTCTGAGAA TAGTGTATGC GGCGACCGAG TTGCTCTTGC CCGGCGTCAA CACGGGATAA  1201 TACCGCGCCA CATAGCAGAA CTTTAAAAGT GCTCATCATT GGAAAACGTT CTTCGGGGCG  1261 AAAACTCTCA AGGATCTTAC CGCTGTTGAG ATCCAGTTCG ATGTAACCCA CTCGTGCACC  1321 CAACTGATCT TCAGCATCTT TTACTTTCAC CAGCGTTTCT GGGTGAGCAA AAACAGGAAG  1381 GCAAAATGCC GCAAAAAAGG GAATAAGGGC GACACGGAAA TGTTGAATAC TCATACTCTT  1441 CCTTTTTCAA TATTATTGAA GCATTTATCA GGGTTATTGT CTCATGAGCG GATACATATT  1501 TGAATGTATT TAGAAAAATA AACAAATAGG GGTTCCGCGC ACATTTCCCC GAAAAGTGCC  1561 ACCTGACGTC TAAGAAACCA TTATTATCAT GACATTAACC TATAAAAATA GGCGTATCAC  1621 GAGGCCCTGA TGGCTCTTTG CGGCACCCAT CGTTCGTAAT GTTCCGTGGC ACCGAGGACA  1681 ACCCTCAAGA GAAAATGTAA TCACACTGGC TCACCTTCGG GTGGGCCTTT CTGCGTTTAT  1741 AAGGAGACAC TTTATGTTTA AGAAGGTTGG TAAATTCCTT GCGGCTTTGG CAGCCAAGCT  1801 AGATCCGGCT GTGGAATGTG TGTCAGTTAG GGTGTGGAAA GTCCCCAGGC TCCCCAGCAG
  1861 GCAGAAGTAT GCAAAGCATG CATCTCAATT AGTCAGCAAC CAGGTGTGGA AAGTCCCCAG  1921 GCTCCCCAGC AGGCAGAAGT ATGCAAAGCA TGCATCTCAA TTAGTCAGCA ACCATAGTCC  1981 CGCCCCTAAC TCCGCCCATC CCGCCCCTAA CTCCGCCCAG TTCCGCCCAT TCTCCGCCCC  2041 ATGGCTGACT AATTTTTTTT ATTTATGCAG AGGCCGAGGC CGCCTCGGCC TCTGAGCTAT  2101 TCCAGAAGTA GTGAGGAGGC TTTTTTGGAG GCCTAGGCTT TTGCAAAAAG CTAGCTTGGG  2161 GCCACCGCTC AGAGCACCTT CCACCATGGC CACCTCAGCA AGTTCCCACT TGAACAAAAA  2221 CATCAAGCAA ATGTACTTGT GCCTGCCCCA GGGTGAGAAA GTCCAAGCCA TGTATATCTG  2281 GGTTGATGGT ACTGGAGAAG GACTGCGCTG CAAAACCCGC ACCCTGGACT GTGAGCCCAA  2341 GTGTGTAGAA GAGTTACCTG AGTGGAATTT TGATGGCTCT AGTACCTTTC AGTCTGAGGG  2401 CTCCAACAGT GACATGTATC TCAGCCCTGT TGCCATGTTT CGGGACCCCT TCCGCAGAGA  2461 TCCCAACAAG CTGGTGTTCT GTGAAGTTTT CAAGTACAAC CGGAAGCCTG CAGAGACCAA  2521 TTTAAGGCAC TCGTGTAAAC GGATAATGGA CATGGTGAGC AACCAGCACC CCTGGTTTGG  2581 AATGGAACAG GAGTATACTC TGATGGGAAC AGATGGGCAC CCTTTTGGTT GGCCTTCCAA  2641 TGGCTTTCCT GGGCCCCAAG GTCCGTATTA CTGTGGTGTG GGCGCAGACA AAGCCTATGG  2701 CAGGGATATC GTGGAGGCTC ACTACCGCGC CTGCTTGTAT GCTGGGGTCA AGATTACAGG  2761 AACAAATGCT GAGGTCATGC CTGCCCAGTG GGAACTCCAA ATAGGACCCT GTGAAGGAAT  2821 CCGCATGGGA GATCATCTCT GGGTGGCCCG TTTCATCTTG CATCGAGTAT GTGAAGACTT  2881 TGGGGTAATA GCAACCTTTG ACCCCAAGCC CATTCCTGGG AACTGGAATG GTGCAGGCTG  2941 CCATACCAAC TTTAGCACCA AGGCCATGCG GGAGGAGAAT GGTCTGAAGC ACATCGAGGA  3001 GGCCATCGAG AAACTAAGCA AGCGGCACCG GTACCACATT CGAGCCTACG ATCCCAAGGG  3061 GGGCCTGGAG AATGCCCGTG GTCTGACTGG GTTCCACGAA ACGTCCAACA TCAACGACTT  3121 TTCTGCTGGT GTCGCCAATC GCAGTGCCAG CATCCGCATT CCCCGGACTG TCGGCCAGGA  3181 GAAGAAAGGT TACTTTGAAG ACCGCGGCCC CTCTGCCAAT TGTGACCCCT TTGCAGTGAC  3241 AGAAGCCATC GTCCGCACAT GCCTTCTCAA TGAGACTGGC GACGAGCCCT TCCAATACAA  3301 AAACTAATTA GACTTTGAGT GATCTTGAGC CTTTCCTAGT TCATCCCACC CCGCCCCAGA  3361 GAGATCTTTG TGAAGGAACC TTACTTCTGT GGTGTGACAT AATTGGACAA ACTACCTACA  3421 GAGATTTAAA GCTCTAAGGT AAATATAAAA TTTTTAAGTG TATAATGTGT TAAACTACTG  3481 ATTCTAATTG TTTGTGTATT TTAGATTCCA ACCTATGGAA CTGATGAATG GGAGCAGTGG  3541 TGGAATGCCT TTAATGAGGA AAACCTGTTT TGCTCAGAAG AAATGCCATC TAGTGATGAT  3601 GAGGCTACTG CTGACTCTCA ACATTCTACT CCTCCAAAAA AGAAGAGAAA GGTAGAAGAC  3661 CCCAAGGACT TTCCTTCAGA ATTGCTAAGT TTTTTGAGTC ATGCTGTGTT TAGTAATAGA  3721 ACTCTTGCTT GCTTTGCTAT TTACACCACA AAGGAAAAAG CTGCACTGCT ATACAAGAAA  3781 ATTATGGAAA AATATTCTGT AACCTTTATA AGTAGGCATA ACAGTTATAA TCATAACATA  3841 CTGTTTTTTC TTACTCCACA CAGGCATAGA GTGTCTGCTA TTAATAACTA TGCTCAAAAA  3901 TTGTGTACCT TTAGCTTTTT AATTTGTAAA GGGGTTAATA AGGAATATTT GATGTATAGT  3961 GCCTTGACTA GAGATCATAA TCAGCCATAC CACATTTGTA GAGGTTTTAC TTGCTTTAAA  4021 AAACCTCCCA CACCTCCCCC TGAACCTGAA ACATAAAATG AATGCAATTG TTGTTGTTAA  4081 CTTGTTTATT GCAGCTTATA ATGGTTACAA ATAAAGCAAT AGCATCACAA ATTTCACAAA
  4141 TAAAGCATTT TTTTCACTGC ATTCTAGTTG TGGTTTGTCC AAACTCATCA ATGTATCTTA  4201 TCATGTCTGG ATCTCTAGCT TCGTGTCAAG GACGGTGACT GCAGTGAATA ATAAAATGTG  4261 TGTTTGTCCG AAATACGCGT TTTGAGATTT CTGTCGCCGA CTAAATTCAT GTCGCGCGAT  4321 AGTGGTGTTT ATCGCCGATA GAGATGGCGA TATTGGAAAA ATCGATATTT GAAAATATGG  4381 CATATTGAAA ATGTCGCCGA TGTGAGTTTC TGTGTAACTG ATATCGCCAT TTTTCCAAAA  4441 GTGATTTTTG GGCATACGCG ATATCTGGCG ATAGCGCTTA TATCGTTTAC GGGGGATGGC  4501 GATAGACGAC TTTGGTGACT TGGGCGATTC TGTGTGTCGC AAATATCGCA GTTTCGATAT  4561 AGGTGACAGA CGATATGAGG CTATATCGCC GATAGAGGCG ACATCAAGCT GGCACATGGC  4621 CAATGCATAT CGATCTATAC ATTGAATCAA TATTGGCCAT TAGCCATATT ATTCATTGGT  4681 TATATAGCAT AAATCAATAT TGGCTATTGG CCATTGCATA CGTTGTATCC ATATCATAAT  4741 ATGTACATTT ATATTGGCTC ATGTCCAACA TTACCGCCAT GTTGACATTG ATTATTGACT  4801 AGTTATTAAT AGTAATCAAT TACGGGGTCA TTAGTTCATA GCCCATATAT GGAGTTCCGC  4861 GTTACATAAC TTACGGTAAA TGGCCCGCCT GGCTGACCGC CCAACGACCC CCGCCCATTG  4921 ACGTCAATAA TGACGTATGT TCCCATAGTA ACGCCAATAG GGACTTTCCA TTGACGTCAA  4981 TGGGTGGAGT ATTTACGGTA AACTGCCCAC TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA  5041 AGTACGCCCC CTATTGACGT CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC  5101 ATGACCTTAT GGGACTTTCC TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC  5161 ATGGTGATGC GGTTTTGGCA GTACATCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA CTCACGGGGA  5221 TTTCCAAGTC TCCACCCCAT TGACGTCAAT GGGAGTTTGT TTTGGCACCA AAATCAACGG  5281 GACTTTCCAA AATGTCGTAA CAACTCCGCC CCATTGACGC AAATGGGCGG TAGGCGTGTA  5341 CGGTGGGAGG TCTATATAAG CAGAGCTCGT TTAGTGAACC GTCAGATCGC CTGGAGACGC  5401 CATCCACGCT GTTTTGACCT CCATAGAAGA CACCGGGACC GATCCAGCCT CCGCGGCCGG  5461 GAACGGTGCA TTGGAACGCG GATTCCCCGT GCCAAGAGTG ACGTAAGTAC CGCCTATAGA  5521 GTCTATAGGC CCACCCCCTT GGCTTCTTAT GCATGCTATA CTGTTTTTGG CTTGGGGTCT  5581 ATACACCCCC GCTTCCTCAT GTTATAGGTG ATGGTATAGC TTAGCCTATA GGTGTGGGTT  5641 ATTGACCATT ATTGACCACT CCCCTATTGG TGACGATACT TTCCATTACT AATCCATAAC  5701 ATGGCTCTTT GCCACAACTC TCTTTATTGG CTATATGCCA ATACACTGTC CTTCAGAGAC  5761 TGACACGGAC TCTGTATTTT TACAGGATGG GGTCTCATTT ATTATTTACA AATTCACATA  5821 TACAACACCA CCGTCCCCAG TGCCCGCAGT TTTTATTAAA CATAACGTGG GATCTCACGC  5881 GAATCTCGGG TACGTGTTCC GGACATGGGC TCTTCTCCGG TAGCGGCGGA GCTTCTACAT  5941 CCGAGCCCTG CTCCCATGCC TCCAGCGACT CATGGTCGCT CGGCAGCTCC TTGCTCCTAA  6001 CAGTGGAGGC CAGACTTAGG CACAGCACGA TGCCCACCAC CACCAGTGTG CCGCACAAGG  6061 CCGTGGCGGT AGGGTATGTG TCTGAAAATG AGCTCGGGGA GCGGGCTTGC ACCGCTGACG  6121 CATTTGGAAG ACTTAAGGCA GCGGCAGAAG AAGATGCAGG CAGCTGAGTT GTTGTGTTCT  6181 GATAAGAGTC AGAGGTAACT CCCGTTGCGG TGCTGTTAAC GGTGGAGGGC AGTGTAGTCT  6241 GAGCAGTACT CGTTGCTGCC GCGCGCGCCA CCAGACATAA TAGCTGACAG ACTAACAGAC  6301 TGTTCCTTTC CATGGGTCTT TTCTGCAGTC ACCGTCCTTG ACACGAAGCT TAAGCCGCCA  6361 CCATGGGATG GAGCTGTATC ATCCTCTTCT TGGTAGCAAC AGCTACAGGC GTGCACTCCG
  6421 ACATCCAGAT GACCCAGTCT CCGTCCTCCC TGTCTGCTTT TGTGGGAGAC GGAGTCACCA  6481 TGACTTGTTG GGCAAGTCAG AGTATCAACG ACTATTTAAA TTGGTATCAC CAGAGGCCAG  6541 GGGAGGCCCC TGAGCTCCTG GTCTTTGCTG CCTCCAATTT GCAAATTGGA GTCCCGTCAA  6601 GGTTCAGGGG CAGTGGATCT GAGACGTATT TCACTTTAAC TATCAACAGT CTGCAACCTG  6661 AAGATAGTGG CACATACTTC TGTCAGAATG CTCACTCTTT CCCGCTTACT TTCGGCGGAG  6721 GGACCAAGCT CGAGATCAAA CGTACGGTGG CTGCACCATC TGTCTTCATC TTCCCGCCAT  6781 CTGATGAGCA GTTGAAATCT GGAACTGCCT CTGTTGTGTG CCTGCTGAAT AACTTCTATC  6841 CCAGAGAGGC CAAAGTACAG TGGAAGGTGG ATAACGCCCT CCAATCGGGT AACTCCCAGG  6901 AGAGTGTCAC AGAGCAGGAC AGCAAGGACA GCACCTACAG CCTCAGCAGC ACCCTGACGC  6961 TGAGCAAAGC AGACTACGAG AAACACAAAG TCTACGCCTG CGAAGTCACC CATCAGGGCC  7021 TGAGCTCGCC CGTCACAAAG AGCTTCAACA GGGGAGAGTG TTAGGAATTC ATTGATCATA  7081 ATCAGCCATA CCACATTTGT AGAGGTTTTA CTTGCTTTAA AAAACCTCCC ACACCTCCCC  7141 CTGAACCTGA AACATAAAAT GAATGCAATT GTTGTTGTTA ACTTGTTTAT TGCAGCTTAT  7201 AATGGTTACA AATAAAGCAA TAGCATCACA AATTTCACAA ATAAAGCATT TTTTTCACTG  7261 CATTCTAGTT GTGGTTTGTC CAAACTCATC AATGTATCTT ATCATGTCTG GCGGCCGCCG  7321 ATATTTGAAA ATATGGCATA TTGAAAATGT CGCCGATGTG AGTTTCTGTG TAACTGATAT  7381 CGCCATTTTT CCAAAAGTGA TTTTTGGGCA TACGCGATAT CTGGCGATAG CGCTTATATC  7441 GTTTACGGGG GATGGCGATA GACGACTTTG GTGACTTGGG CGATTCTGTG TGTCGCAAAT  7501 ATCGCAGTTT CGATATAGGT GACAGACGAT ATGAGGCTAT ATCGCCGATA GAGGCGACAT  7561 CAAGCTGGCA CATGGCCAAT GCATATCGAT CTATACATTG AATCAATATT GGCCATTAGC  7621 CATATTATTC ATTGGTTATA TAGCATAAAT CAATATTGGC TATTGGCCAT TGCATACGTT  7681 GTATCCATAT CATAATATGT ACATTTATAT TGGCTCATGT CCAACATTAC CGCCATGTTG  7741 ACATTGATTA TTGACTAGTT ATTAATAGTA ATCAATTACG GGGTCATTAG TTCATAGCCC  7801 ATATATGGAG TTCCGCGTTA CATAACTTAC GGTAAATGGC CCGCCTGGCT GACCGCCCAA  7861 CGACCCCCGC CCATTGACGT CAATAATGAC GTATGTTCCC ATAGTAACGC CAATAGGGAC  7921 TTTCCATTGA CGTCAATGGG TGGAGTATTT ACGGTAAACT GCCCACTTGG CAGTACATCA  7981 AGTGTATCAT ATGCCAAGTA CGCCCCCTAT TGACGTCAAT GACGGTAAAT GGCCCGCCTG  8041 GCATTATGCC CAGTACATGA CCTTATGGGA CTTTCCTACT TGGCAGTACA TCTACGTATT  8101 AGTCATCGCT ATTACCATGG TGATGCGGTT TTGGCAGTAC ATCAATGGGC GTGGATAGCG  8161 GTTTGACTCA CGGGGATTTC CAAGTCTCCA CCCCATTGAC GTCAATGGGA GTTTGTTTTG  8221 GCACCAAAAT CAACGGGACT TTCCAAAATG TCGTAACAAC TCCGCCCCAT TGACGCAAAT  8281 GGGCGGTAGG CGTGTACGGT GGGAGGTCTA TATAAGCAGA GCTCGTTTAG TGAACCGTCA  8341 GATCGCCTGG AGACGCCATC CACGCTGTTT TGACCTCCAT AGAAGACACC GGGACCGATC  8401 CAGCCTCCGC GGCCGGGAAC GGTGCATTGG AACGCGGATT CCCCGTGCCA AGAGTGACGT  8461 AAGTACCGCC TATAGAGTCT ATAGGCCCAC CCCCTTGGCT TCTTATGCAT GCTATACTGT  8521 TTTTGGCTTG GGGTCTATAC ACCCCCGCTT CCTCATGTTA TAGGTGATGG TATAGCTTAG  8581 CCTATAGGTG TGGGTTATTG ACCATTATTG ACCACTCCCC TATTGGTGAC GATACTTTCC  8641 ATTACTAATC CATAACATGG CTCTTTGCCA CAACTCTCTT TATTGGCTAT ATGCCAATAC
  8701  ACTGTCCTTC AGAGACTGAC ACGGACTCTG TATTTTTACA GGATGGGGTC TCATTTATTA  8761  TTTACAAATT CACATATACA ACACCACCGT CCCCAGTGCC CGCAGTTTTT ATTAAACATA  8821  ACGTGGGATC TCCACGCGAA TCTCGGGTAC GTGTTCCGGA CATGGGCTCT TCTCCGGTAG  8881  CGGCGGAGCT TCTACATCCG AGCCCTGCTC CCATGCCTCC AGCGACTCAT GGTCGCTCGG  8941  CAGCTCCTTG CTCCTAACAG TGGAGGCCAG ACTTAGGCAC AGCACGATGC CCACCACCAC  9001  CAGTGTGCCG CACAAGGCCG TGGCGGTAGG GTATGTGTCT GAAAATGAGC TCGGGGAGCG  9061  GGCTTGCACC GCTGACGCAT TTGGAAGACT TAAGGCAGCG GCAGAAGAAG ATGCAGGCAG  9121  CTGAGTTGTT GTGTTCTGAT AAGAGTCAGA GGTAACTCCC GTTGCGGTGC TGTTAACGGT  9181  GGAGGGCAGT GTAGTCTGAG CAGTACTCGT TGCTGCCGCG CGCGCCACCA GACATAATAG  9241  CTGACAGACT AACAGACTGT TCCTTTCCAT GGGTCTTTTC TGCAGTCACC GTCCTTGACA  9301  CGAAGCTTAA GCCGCCACCA TGGGATGGAG CTGTATCATC CTCTTCTTGG TAGCAACAGC  9361  TACAGGCGCG CACTCCCAAG TCACTTTGAA GGAGTCTGGT CCTACGCTGG TGAAACCCAC  9421  ACAGACCCTC ACGCTGACCT GCAGCTTCTC TGGGTTCTCA CTCAGCACTA GTGGAGTGGG  9481  TGTGGGCTGG GTCCGTCAGC CCCCAGGAAA GGCCCTGGAG TGGCTTGCAT TCATTTGGTG  9541  GGATGATGAT AAGTACTACA GCCCGTCTCT GGAGAGCAGG CTCACCATCA CCAAGGACAC  9601  CTCCAAAAAC CAGGTGGTCC TTACAATGAC CAACATGGAC CCTGTGGACA CAGCCACATA  9661  TTACTGTGCA CGATCCGCTG ATGACTATCT TTACTATTCT TTTGACACGT GGGGCCAGGG  9721  AACCCTGGTC ACCGTCTCCT CAGCCTCCAC CAAGGGCCCA TCGGTCTTCC CCCTGGCACC  9781  CTCCTCCAAG AGCACCTCTG GGGGCACAGC GGCCCTGGGC TGCCTGGTCA AGGACTACTT  9841  CCCCGAACCG GTGACGGTGT CGTGGAACTC AGGCGCCCTG ACCAGCGGCG TGCACACCTT  9901  CCCGGCTGTC CTACAGTCCT CAGGACTCTA CTCCCTCAGC AGCGTGGTGA CCGTGCCCTC  9961  CAGCAGCTTG GGCACCCAGA CCTACATCTG CAACGTGAAT CACAAGCCCA GCAACACCAA  10021 GGTGGACAAG AGAGTTGGTG AGAGGCCAGC ACAGGGAGGG AGGGTGTCTG CTGGAAGCCA  10081 GGCTCAGCGC TCCTGCCTGG ACGCATCCCG GCTATGCAGT CCCAGTCCAG GGCAGCAAGG  10141 CAGGCCCCGT CTGCCTCTTC ACCCGGAGGC CTCTGCCCGC CCCACTCATG CTCAGGGAGA  10201 GGGTCTTCTG GCTTTTTCCC CAGGCTCTGG GCAGGCACAG GCTAGGTGCC CCTAACCCAG  10261 GCCCTGCACA CAAAGGGGCA GGTGCTGGGC TCAGACCTGC CAAGAGCCAT ATCCGGGAGG  10321 ACCCTGCCCC TGACCTAAGC CCACCCCAAA GGCCAAACTC TCCACTCCCT CAGCTCGGAC  10381 ACCTTCTCTC CTCCCAGATT CCAGTAACTC CCAATCTTCT CTCTGCAGAG CCCAAATCTT  10441 GTGACAAAAC TCACACATGC CCACCGTGCC CAGGTAAGCC AGCCCAGGCC TCGCCCTCCA  10501 GCTCAAGGCG GGACAGGTGC CCTAGAGTAG CCTGCATCCA GGGACAGGCC CCAGCCGGGT  10561 GCTGACACGT CCACCTCCAT CTCTTCCTCA GCACCTGAAC TCCTGGGGGG ACCGTCAGTC  10621 TTCCTCTTCC CCCCAAAACC CAAGGACACC CTCATGATCT CCCGGACCCC TGAGGTCACA  10681 TGCGTGGTGG TGGACGTGAG CCACGAAGAC CCTGAGGTCA AGTTCAACTG GTACGTGGAC  10741 GGCGTGGAGG TGCATAATGC CAAGACAAAG CCGCGGGAGG AGCAGTACAA CAGCACGTAC  10801 CGTGTGGTCA GCGTCCTCAC CGTCCTGCAC CAGGACTGGC TGAATGGCAA GGAGTACAAG  10861 TGCAAGGTCT CCAACAAAGC CCTCCCAGCC CCCATCGAGA AAACCATCTC CAAAGCCAAA  10921 GGTGGGACCC GTGGGGTGCG AGGGCCACAT GGACAGAGGC CGGCTCGGCC CACCCTCTGC
  10981 CCTGAGAGTG ACCGCTGTAC CAACCTCTGT CCCTACAGGG CAGCCCCGAG AACCACAGGT  11041 GTACACCCTG CCCCCATCCC GGGAGGAGAT GACCAAGAAC CAGGTCAGCC TGACCTGCCT  11101 GGTCAAAGGC TTCTATCCCA GCGACATCGC CGTGGAGTGG GAGAGCAATG GGCAGCCGGA  11161 GAACAACTAC AAGACCACGC CTCCCGTGCT GGACTCCGAC GGCTCCTTCT TCCTCTATAG  11221 CAAGCTCACC GTGGACAAGA GCAGGTGGCA GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT GCTCCGTGAT  11281 GCATGAGGCT CTGCACAACC ACTACACGCA GAAGAGCCTC TCCCTGTCTC CGGGTAAATA  11341 GGAATTCATT GATCATAATC AGCCATACCA CATTTGTAGA GGTTTTACTT GCTTTAAAAA  11401 ACCTCCCACA CCTCCCCCTG AACCTGAAAC ATAAAATGAA TGCAATTGTT GTTGTTAACT  11461 TGTTTATTGC AGCTTATAAT GGTTACAAAT AAAGCAATAG CATCACAAAT TTCACAAATA  11521 AAGCATTTTT TTCACTGCAT TCTAGTTGTG GTTTGTCCAA ACTCATCAAT GTATCTTATC  11581 ATGTCTGGAT CCTCTACGCC GGACGCATCG TGGCCGGCAT CACCGGCGCC ACAGGTGCGG  11641 TTGCTGGCGC CTATATCGCC GACATCACCG ATGGGGAAGA TCGGGCTCGC CACTTCGGGC  11701 TCATGAGCGC TTGTTTCGGC GTGGGTATGG TGGCAGGCCC CGTGGCCGGG GGACTGTTGG  11761 GCGCCATCTC CTTGCATGCA CCATTCCTTG CGGCGGCGGT GCTCAACGGC CTCAACCTAC  11821 TACTGGGCTG CTTCCTAATG CAGGAGTCGC ATAAGGGAGA GCGTCGACCT CGGGCCGCGT  11881 TGCTGGCGTT TTTCCATAGG CTCCGCCCCC CTGACGAGCA TCACAAAAAT CGACGCTCAA  11941 GTCAGAGGTG GCGAAACCCG ACAGGACTAT AAAGATACCA GGCGTTTCCC CCTGGAAGCT  12001 CCCTCGTGCG CTCTCCTGTT CCGACCCTGC CGCTTACCGG ATACCTGTCC GCCTTTCTCC  12061 CTTCGGGAAG CGTGGC(SEQ ID NO：50)
实施例4
表达MAB 1339的CHO细胞系的产生
[0197]CHO-K1HD，一种改造为在高密度悬浮培养物中生长的细胞系，用mAb1339双基因载体(如上述实施例3所述)转染。CHO-K1HD细胞保持在悬浮液中直至转染时。转染前一天，悬浮系被接种入存在血清的6-孔平板以允许细胞的粘附。
[0198]利用CHO-K1HD细胞随后的传代和从独立的质粒DNA制剂新近纯化和消化的DNA，进行了四个独立的转染，每个分隔7天。每周，细胞接种入6-孔平板，一个平板2.5∶1的DNA∶lipofectamine比例，并且另一个为3.0∶1的比例。因此，在4周的进程中转染了总共48个库。观察每个库的生长和抗体产生水平；不是每个库都在药物筛选中存活。通过下述命名法表示库：mAb名称/转染编号，DNA∶lipofectamine比例，转染孔字母，和盘的编号。(例子：mAb 1339/12.5B2库)。
[0199]利用3-天分泌测定测量生长率。数据以mAb滴度(μg/ml)和特定生产率(μg/百万细胞/天)表示。通过ELISA确定抗体滴度和特异性。来自所有测试1339库的分泌测定的结果示于表23。
表23：转染的CHO细胞的生产率

[0200]来自小规模分泌实验的mAb产量描绘于图10。
实施例5
抗体特异性和生物活性
抗体特异性
[0201]测试纯化的mAb1339以确认对于IL-6的特异性。通过ELISA测试纯化的mAb1339的与一组对照抗原的结合，包括人胰岛素，人血清白蛋白，人血红蛋白，和牛血清白蛋白。对于这些抗原没有观察到非特异性结合(数据未显示)。
[0202]另外，通过ELISA测试了纯化的mAb1339和对照mAb88与一组IL-6超家族成员的结合：CNFT，制癌蛋白M，IL-1，和NNT-1。如图5A和5B所示，在ELISA中mAb1339和mAb88都不结合任何这些细胞因子。
IL-6诱导的鼠和人细胞增殖的抑制
[0203]为评价人抗-IL-6mAb的生物学活性，评价了它们抑制IL-6诱导的鼠B9骨髓瘤细胞增殖(图12)和IL-6诱导的人U266细胞增殖(图13)的能力。鼠B9细胞系是人IL-6敏感的。
[0204]如图12所示，mAb 926、1259、1337、1338、1339和1340都显示出对于IL-6诱导的鼠骨髓瘤细胞增殖的剂量依赖的抑制效果。例如，在100ng/ml的mAb浓度，用mAb 926、1337、1338和1339观察到的抑制水平非常接近于用鼠mAb B-E8观察到的抑制水平。
[0205]如图13所示，mAb 416、926和1339显示出对于IL-6诱导的人骨髓瘤细胞增殖的剂量依赖的抑制效果。
IL-6与IL-6R之间的相互作用的抑制
[0206]为进一步评价人抗-IL-6mAbs的生物学活性，利用流式细胞术评价了它们抑制IL-6和IL-6受体之间的相互作用的能力。
[0207]利用标准方法实施流式细胞术。首先，实施在U266细胞上的Fc-受体阻断。U266是一种生产IgE和IL-6的人浆细胞瘤系。U266细胞被收获并旋转沉淀(spun down)。细胞被计数并在流动缓冲剂中清洗两次并且调整到大概120％测定需要的最终细胞数量，96孔平板的每孔计算150,000细胞。细胞以5×10⁶细胞/ml重悬浮于FB中并且调整到0.1mg huIgG/ml。细胞被混合并在冰上培养20-30分钟。接下来，添加15体积的FB，并且旋转沉淀细胞。弃置上清液并且用20ml FB再清洗细胞两次。细胞然后重悬浮到1.5×10⁶细胞/ml的密度并且每孔添加100μl到预培养平板。接下来，重组人IL-6和抗-人IL-6mAb共培养。首先制备FB中的mAb和IL-6的所有必要稀释液。接下来，在平板涡旋(plate vortex)上以中度功率混合平板30s之后，用50μl的IL-6(优选最终为1nM)在冰上预培养50μl的mAb 30分钟。对于每种mAb包括在不存在抗体的情况下不具有IL-6和具有IL-6的对照细胞。接下来，U266细胞与IL-6和抗-IL-6mAb共培养。在100μl的FB中的阻断和清洗的细胞添加到来自上述的IL6/MAb混合物。最终培养体积是200μl。细胞在冰上培养30分钟。培养之间的清洗步骤如下所述进行：首先培养平板在设定为4℃的离心机上以250×g旋转4分钟。平板被小心地轻弹并且擦拭，而不使小球变位。接下来，通过以最大功率涡旋平板10s重悬浮细胞。添加220μl的FB并且平板被再次旋转。这一清洗步骤再重复一次并且涡旋的细胞小球最后重悬浮在100μl的相应抗体稀释液中。然后用小鼠抗-IL-6抗体B-F6培养这些细胞。100μl抗体(在FB中5μg/ml)被直接添加到来自上述的清洗的细胞小球中，其已经通过简短的涡旋而松弛，并且然后以中度功率再次小心地涡旋15s。细胞在冰上培养30分钟并且清洗。接下来用APC偶联的山羊抗-小鼠IgG1培养细胞。松弛的清洗的细胞小球重悬浮在100μl的标记抗体中(2.5μg别藻蓝蛋白/ml)。细胞保持在黑暗中并且涡旋并且在冰上培养30分钟。细胞被清洗并且重悬浮于200到400μl的FB中。然后进行通过流式细胞术的分析。首先，利用PI存料的150倍稀释添加碘化丙锭(PI)。设置了通过观察F1-3vs.FSC的基于排除PI的活门(live gate)。PI仅仅为接下来的细胞样品而添加以避免具有PI的细胞的延长培养。
[0208]如图6A和6B所示，在渐增浓度的IL-6而抗体浓度保持恒定在0.5μg/ml之下，mAb 926、1259、1337、1338、1339和1340都显示出对于IL-6结合U266细胞上的IL-6受体的抑制性效果。用mAb1339观察到显著高水平的抑制。类似地，图7A和7B显示了在渐增浓度的mAb而IL-6浓度保持恒定在500ng/ml的情况下，mAb 242、416、926和1339对于IL-6结合U266细胞上的IL-6受体的抑制性效果。
[0209]当使用生物素化IL-6时，mAb的抑制性效果也被证实(数据未显示)。
[0210]结果显示mAb 242、416、926、1259、1337、1338、1339和1340能够抑制IL-6和其受体之间的相互作用并且因此确认了这些mAb的生物学活性。
[0211]最后，利用mAb 416、926、1259、1337、1338、1339和1340以及对照mAb88，实施了图4的实施例2所述的竞争测定。如图8所示，所有测试的mAb显示出对于重组人IL-6结合IL-6受体的剂量依赖的抑制性效果。
实施例6
MABS926和1339的MAB特异性
[0212]如上所述通过ELISA为mAbs 926和1339确定了鼠和大鼠IL-6之间的交叉反应性。用100ng/ml鼠或大鼠IL-6(R&D Systems)以100μl/孔包被孔。对于利用人单克隆抗体的实验，IgG1κ(人骨髓瘤IgG1；Sigma-Aldrich Co.)mAb用作对照。为检测mAb，兔抗-人IgG-HRP(Dako)以1/10,000的稀释以100μl/孔添加。多克隆抗体(pAb)对照包括生物素化山羊抗-人IL-6(Peprotech)，生物素化山羊抗-鼠IL-6(Peprotech)，和生物素化山羊抗-人IL-2(Peprotech)。对于pAbs，链霉亲和素-HRP(Prozyme)以100μl/孔添加用于检测。抗体以12.5、25、50和100ng/ml的浓度应用。如图14和15分别所示，mAbs926和1339通过ELISA没有检测包被的重组鼠或大鼠IL-6。
实施例7
天然人和猴IL-6的检测
[0213]在活化的人单核细胞中分析mAbs 926和1339检测天然人IL-6的能力。用脂多糖(LPS；20μg/ml；Sigma-Aldrich Co.)活化来自外周血单核细胞的单核细胞24小时以诱导IL-6胞浆内的表达(数据未显示)。在LPS处理结束之前用1μg/ml的布雷菲尔德菌素A(Brefeldin A)(Sigma-Aldrich Co.)处理细胞6小时以抑制IL-6运送到上清液。如前所述用0.8μg/ml的生物素化mAbs 88，1339，926，B-E8(抗-鼠-IL-6；Diaclone)，B-Z1(小鼠IgGl；Diaclone)，和人IgGlκ(Sigma-Aldrich Co.)通过流式细胞术分析活化的细胞。对于每种抗体进行三个独立的实验。代表性的实验示于图16，显示出mAbS926和1339识别天然的胞浆内IL-6。
[0214]另外，利用Diaclone高敏感性人IL-6ELISA试剂盒根据制造商说明通过ELISA确定mAbs 926和1339检测来自人血清的天然人IL-6的能力。利用后一试剂盒，通过与包被在ELISA平板孔上的IL-6抗体的mAb竞争(5μg/ml)而确定人IL-6的检测。在不存在竞争抗体的情况下添加包含IL-6的血清(Serum AB batch 5；Blood Center，Besancon，France)导致通过ELISA试剂盒的IL-6检测。在竞争抗体存在下添加包含IL-6的血清导致ELISA检测血清中IL-6的能力的下降。对照抗体包括B-E8(抗-鼠-IL-6；Diaclone)，B-Z1(小鼠IgG1；Diaclone)，和人IgG1κ(Sigma-Aldrich Co.)。如图17所示，mAbs 926和1339检测来自健康供体血清的天然IL-6。
[0215]利用U-Cytech猴IL-6ELISA试剂盒(U-Cytech biosciences)根据制造商说明通过ELISA确定mAb1339检测来自猕猴血清(BPRC，TheNetherlands)的天然猴IL-6的能力。利用后一试剂盒，通过与包被在ELISA平板孔上的IL-6抗体的mAb竞争(5μg/ml)而确定猴IL-6的检测。在不存在竞争抗体的情况下添加包含IL-6的血清导致通过ELISA试剂盒的IL-6检测。在存在竞争抗体的情况下添加包含IL-6的血清导致ELISA试剂盒检测血清中的IL-6的能力的降低。猴IgG1κ用作对照抗体。如图18所示，mAb 1339检测来自猴血清的天然IL-6。
[0216]现在已经通过为清楚理解的目的的例示和实施例的方式完全详细地描述了本发明，对于本领域普通技术人员来说，通过在宽泛和等同范围的条件，制剂和其他参数之内修饰或改变本发明并且不影响本发明的范围或其任何特定实施方式而实施上述是显而易见的，并且所述修饰或改变意图包括在所附权利要求的范围之内。
[0217]说明书中提到的所有公开文献，专利和专利申请对于本领域熟练技术人员是指示性的，并且引入本文作为参考，如同每个独立公开文献，专利或专利申请被特别地和单独地指明引入作为参考一样。
序列表
<110>Vaccinex，Inc.
<120>抗-IL-6单克隆抗体及其用途
<130>2521.001PC01
<150>US 60/835,107
<151>2006-08-03
<160>100
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>1
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Lys Ser Val Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val G1u Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
                8                  590                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
            100                 105
<210>2
<211>106
<212>PRT
<213>智人
<400>2
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Asp Ser Ser
            20                  25                  30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
        35                  40                  45
Val Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Asp Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65                  70                  75                  80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Lys Ser Pro
                85                  90                  95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu
            100                 105
<210>3
<211>105
<212>PRT
<213>智人
<400>3
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asn Phe
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Lys Val Ser Ser Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg Arg Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu
            100                 105
<210>4
<211>105
<212>PRT
<213>智人
<400>4
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu
            100                 105
<210>5
<211>106
<212>PRT
<213>智人
<400>5
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Arg Pro Leu Thr
                85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105
<210>6
<211>105
<212>PRT
<213>智人
<400>6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Ser Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ile Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asp Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Arg Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Asp Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Arg Asn Leu Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu
            100                 105
<210>7
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>7
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Ser Va1 Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Lys Met Arg Thr Tyr
            20                  25                  30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Val Ser Phe Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Arg Ala Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Thr Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105
<210>8
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>8
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Asp Ser Trp
            20                  25                  30
Leu His Trp Tyr Gln Arg Glu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ile Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Thr Thr Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Phe Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Phe Pro Ile
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
            100                 105
<210>9
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>9
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Gly Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Gly Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Ile Val Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ala
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Ser Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105
<210>10
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>10
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ala Gly
1               5                   10                  15
Asp Thr Val Thr Ile Ala Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Thr Ala
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Asn Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Ser Glu Ala Tyr Arg Leu Gln Ser Gly Val Ser Pro Lys Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Asp Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105
<210>11
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>11
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Ser Lys Ala Ser Ser Leu Glu Tyr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ala Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Ala Val Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105
<210>12
<211>105
<212>PRT
<213>智人
<400>12
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Phe Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Gly Val Thr Met Thr Cys Trp Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr His Gln Arg Pro Gly Glu Ala Pro Glu Leu Leu Val
        35                  40                  45
Phe Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Glu Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Gly Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Ser Ser Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu
            100                 105
<210>13
<211>105
<212>PRT
<213>智人
<400>13
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Ser Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asp Phe
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
His Ala Ser Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Ser Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Leu Gly
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu
            100                 105
<210>14
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>14
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Gly Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Gly Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Ile Val Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Ser Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Phe Pro Leu
                 85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105
<210>15
<211>104
<212>PRT
<213>智人
<400>15
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Asn Ile Asn Thr Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val
        35                  40                  45
His Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ala Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ile Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Asn Thr Leu Thr
                85                  90                  95
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu
            100
<210>16
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>16
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Ile Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Val Pro Thr Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Ser Gly Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Gly Thr Pro Leu
                85                  90                  95
Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105
<210>17
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>17
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Met Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Gly Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ile Asn Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Ala Ala Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Ser Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105
<210>18
<211>106
<212>PRT
<213>智人
<400>18
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Phe Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Gly Val Thr Met Thr Cys Trp Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr His Gln Arg Pro Gly Glu Ala Pro Glu Leu Leu Val
        35                  40                  45
Phe Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Glu Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Gly Thr Tyr Phe Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105
<210>19
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>19
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Met Cys Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Leu Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Arg Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>20
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>20
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Met Cys Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Leu Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Arg Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser His Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>21
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>21
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Arg Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Ser Val Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Leu Val Tyr Trp Asp Asp Asp Arg Arg Tyr Asn Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>22
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>22
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ile Phe Ser Gly Phe Ser Phe Lys Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Leu Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>23
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>23
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Phe Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>24
<211>122
<212>PRT
<213>智人
<400>24
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Ala Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Leu Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys His Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>25
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>25
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Met Cys Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Thr Leu Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Thr Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>26
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人H1511变体
<400>26
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Phe Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Phe Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>27
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人H1420变体
<400>27
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Phe Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Ala Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
            100                  105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>28
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人H1432变体
<400>28
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Phe Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Gly Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>29
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人H1515变体
<400>29
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Phe Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>30
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人H1362变体
<400>30
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Phe Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>31
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人H1437变体
<400>31
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Phe Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Phe Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>32
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人H1461变体
<400>32
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Phe Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Thr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>33
<211>106
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人L314变体
<400>33
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Phe Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Gly Val Thr Met Thr Cys Trp Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr His Gln Arg Pro Gly Glu Ala Pro Glu Leu Leu Val
        35                  40                  45
Phe Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Glu Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Gly Thr Tyr Phe Cys Gln Ser Gly His Ser Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105
<210>34
<211>106
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人L305变体
<400>34
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Phe Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Gly Val Thr Met Thr Cys Trp Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr His Gln Arg Pro Gly Glu Ala Pro Glu Leu Leu Val
        35                  40                  45
Phe Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Glu Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Gly Thr Tyr Phe Cys Gln His Gly His Ser Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105
<210>35
<211>106
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人L303变体
<400>35
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Phe Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Gly Val Thr Met Thr Cys Trp Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr His Gln Arg Pro Gly Glu Ala Pro Glu Leu Leu Val
        35                  40                  45
Phe Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Glu Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Gly Thr Tyr Phe Cys Gln Leu Gly His Ser Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105
<210>36
<211>106
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人L298变体
<400>36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Phe Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Gly Val Thr Met Thr Cys Trp Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr His Gln Arg Pro Gly Glu Ala Pro Glu Leu Leu Val
        35                  40                  45
Phe Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Glu Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Gly Thr Tyr Phe Cys Gln Asn Ala His Ser Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105
<210>37
<211>106
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人L 321变体
<400>37
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Phe Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Gly Val Thr Met Thr Cys Trp Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr His Gln Arg Pro Gly Glu Ala Pro Glu Leu Leu Val
        35                  40                  45
Phe Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Glu Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Gly Thr Tyr Phe Cys Gln Asn Gly Trp Ser Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
            100                 105
<210>38
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人H1519变体
<400>38
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Phe Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Ala Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>39
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人H1520变体
<400>39
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Phe Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Ala Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Phe Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
115
<210>40
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人H1521变体
<400>40
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Phe Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Ala Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>41
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人H1522变体
<400>41
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Phe Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Ala Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ser Phe Asp Thr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>42
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人H1553变体
<400>42
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Phe Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>43
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人H1579变体
<400>43
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
            20                  25                  30
Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Leu Ala Phe Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Ser Ala Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ser Phe Asp Thr Trp
            100               105             110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        115
<210>44
<211>490
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>鼠mAb B-E8重链
<400>44
gtcgacccac gcgtccggac atggacaggc ttacttcttc attcctgctg ctgattgtcc     60
ctgcatatgt cttgtcccaa gttactctaa aagagtctgg ccctgggata ttgaagccct    120
cacagaccct cagtctgact tgttctttct ctgggttttc actgagcact tctggtatgg    180
gtgtaggctg gattcgtcag ccttcaggga agggtctgga gtggctggca cacatttggt    240
gggatgatga taagtactat aacccatccc tgaagagcca gctcacaatc tccaaggata    300
cctccagaaa ccaggtattc ctcaagatca ccagtgtgga cactgcagat actgccactt    360
actactgtgc tcgatcctat gatgactatc tttactatgc tttggactac tggggtcaag    420
gaacctcagt caccgtctcc tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc    480
ctggatctgc                                                           490
<210>45
<211>470
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>鼠mAb B-E8轻链
<400>45
gtcgacccac gcgtccggaa aatttgaaga tggtgtccac ttctcagctc cttggacttt     60
tgcttttctg gacttcagcc tccagatgtg acattgtgat gactcagtct ccagccaccc    120
tgtctgtgac tccaggagat agagtctctc tttcctgcag ggccagccag agtattagcg    180
actacttaca ctggtatcaa caaaaatcac atgagtctcc aaggcttctc atcaaatctg    240
tttcccaatc catctctggg atcccctcca ggttcagtgg cagtggatca gggtcagatt    300
tGactctcag tatcaacagt gtggaacctg aagatgttgg agtgtattac tgtcaaaatg    360
gtcacagctt tccgctcacg ttcggtgctg ggaccaagct ggagctgaaa cgggctgatg    420
ctgcaccaac tgtatccatc ttcccaccat catgcgagat tcgaacatct               470
<210>46
<211>471
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人mAb 926重链
<400>46
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1               5                   10                  15
Ala His Ser Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys
            20                  25                  30
Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu
        35                  40                  45
Ser Thr Ser Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Ala Leu Glu Trp Leu Ala Phe Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr
65                  70                  75                  80
Ser Pro Ser Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys
                85                  90                  95
Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala
            100                 105                 110
Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ala Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu
        115                 120                 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
    130                 135                 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
145                 150                 155                 160
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
                165                 170                 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
            180                 185                 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
        195                 200                 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
    210                 215                 220
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
225                 230                 235                 240
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
                245                 250                 255
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
            260                 265                 270
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
        275                 280                 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
    290                 295                 300
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
305                 310                 315                 320
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
                325                 330                 335
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
            340                 345                 350
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
        355                 360                 365
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
    370                 375                 380
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
385                 390                 395                 400
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
                405                 410                 415
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
            420                 425                 430
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
        435                 440                 445
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
    450                 455                 460
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465                 470
<210>47
<211>233
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人mAb 926轻链
<400>47
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1               5                   10                  15
Val His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
            20                  25                  30
Phe Val Gly Asp Gly Val Thr Met Thr Cys Trp Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
Asn Asp Tyr Leu Asn Trp Tyr His Gln Arg Pro Gly Glu Ala Pro Glu
    50                  55                  60
Leu Leu Val Phe Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ile Gly Val Pro Ser Arg
65                  70                  75                  80
Phe Arg Gly Ser Gly Ser Glu Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser
                85                  90                  95
Leu Gln Pro Glu Asp Ser Gly Thr Tyr Phe Cys Gln Asn Gly His Ser
            100                 105                 110
Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
     130                 135                 140
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145                 150                 155                 160
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
                165                 170                 175
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
            180                 185                 190
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
        195                 200                 205
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
    210                 215                 220
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230
<210>48
<211>471
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人mAb 1339重链
<400>48
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1               5                   10                  15
Ala His Ser Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys
            20                  25                  30
Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu
        35                  40                  45
Ser Thr Ser Gly Val Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Ala Leu Glu Trp Leu Ala Phe Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr
65                  70                  75                  80
Ser Pro Ser Leu Glu Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys
                85                  90                  95
Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala
            100                 105                 110
Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ala Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ser Phe
        115                 120                 125
Asp Thr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
    130                 135                 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
145                 150                 155                 160
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
                165                 170                 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
            180                 185                 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
        195                 200                 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
    210                 215                 220
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
225                 230                 235                 240
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
                245                 250                 255
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
            260                 265                 270
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
        275                 280                 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
    290                 295                 300
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
305                 310                 315                 320
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
                325                 330                 335
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
            340                 345                 350
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
        355                 360                 365
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
    370                 375                 380
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
385                 390                 395                 400
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
                405                 410                 415
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
            420                 425                 430
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
        435                 440                 445
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
    450                 455                 460
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465                 470
<210>49
<211>233
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人mAb 1339轻链
<400>49
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1               5                   10                  15
Val His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
            20                  25                  30
Phe Val Gly Asp Gly Val Thr Met Thr Cys Trp Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
Asn Asp Tyr Leu Asn Trp Tyr His Gln Arg Pro Gly Glu Ala Pro Glu
    50                  55                  60
Leu Leu Val Phe Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ile Gly Val Pro Ser Arg
65                  70                  75                  80
Phe Arg Gly Ser Gly Ser Glu Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser
                85                  90                  95
Leu Gln Pro Glu Asp Ser Gly Thr Tyr Phe Cys Gln Asn Ala His Ser
            100                 105                 110
Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
    130                 135                 140
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145                 150                 155                 160
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
                165                 170                 175
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
            180                 185                 190
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
        195                 200                 205
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
    210                 215                 220
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230
<210>50
<211>12076
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人mAb 1339双基因载体
<400>50
gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct     60
gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg    120
tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag    180
gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta    240
cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg    300
aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt    360
tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt    420
ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag    480
attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat    540
ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc     600
tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat     660
aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc     720
acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag     780
aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag     840
agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt     900
ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg     960
agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt    1020
tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc    1080
tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc    1140
attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtGaa cacgggataa    1200
taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg    1260
aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc    1320
caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag    1380
gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt    1440
cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt    1500
tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc    1560
acctgacgtc taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac    1620
gaggccctga tggctctttg cggcacccat cgttcgtaat gttccgtggc accgaggaca    1680
accctcaaga gaaaatgtaa tcacactggc tcaccttcgg gtgggccttt ctgcgtttat    1740
aaggagacac tttatgttta agaaggttgg taaattcctt gcggctttgg cagccaagct    1800
agatccggct gtggaatgtg tgtcagttag ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag    1860
gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac caggtgtgga aagtccccag    1920
gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accatagtcc    1980
cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc    2040
atggctgact aatttttttt atttatgcag aggccgaggc cgcctcggcc tctgagctat    2100
tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt ttgcaaaaag ctagcttggg    2160
gccaccgctc agagcacctt ccaccatggc cacctcagca agttcccact tgaacaaaaa    2220
catcaagcaa atgtacttgt gcctgcccca gggtgagaaa gtccaagcca tgtatatctg    2280
ggttgatggt actggagaag gactgcgctg caaaacccgc accctggact gtgagcccaa    2340
gtgtgtagaa gagttacctg agtggaattt tgatggctct agtacctttc agtctgaggg    2400
ctccaacagt gacatgtatc tcagccctgt tgccatgttt cgggacccct tccgcagaga    2460
tcccaacaag ctggtgttct gtgaagtttt caagtacaac cggaagcctg cagagaccaa    2520
tttaaggcac tcgtgtaaac ggataatgga catggtgagc aaccagcacc cctggtttgg    2580
aatggaacag gagtatactc tgatgggaac agatgggcac ccttttggtt ggccttccaa    2640
tggctttcct gggccccaag gtccgtatta ctgtggtgtg ggcgcagaca aagcctatgg    2700
cagggatatc gtggaggctc actaccgcgc ctgcttgtat gctggggtca agattacagg    2760
aacaaatgct gaggtcatgc ctgcccagtg ggaactccaa ataggaccct gtgaaggaat    2820
ccgcatggga gatcatctct gggtggcccg tttcatcttg catcgagtat gtgaagactt    2880
tggggtaata gcaacctttg accccaagcc cattcctggg aactggaatg gtgcaggctg    2940
ccataccaac tttagcacca aggccatgcg ggaggagaat ggtctgaagc acatcgagga    3000
ggccatcgag aaactaagca agcggcaccg gtaccacatt cgagcctacg atcccaaggg    3060
gggcctggac aatgcccgtg gtctgactgg gttccacgaa acgtccaaca tcaacgactt    3120
ttctgctggt gtcgccaatc gcagtgccag catccgcatt ccccggactg tcggccagga    3180
gaagaaaggt tactttgaag accgcggccc ctctgccaat tgtgacccct ttgcagtgac    3240
agaagccatc gtccgcacat gccttctcaa tgagactggc gacgagccct tccaatacaa    3300
aaactaatta gactttgagt gatcttgagc ctttcctagt tcatcccacc ccgccccaga    3360
gagatctttg tgaaggaacc ttacttctgt ggtgtgacat aattggacaa actacctaca    3420
gagatttaaa gctctaaggt aaatataaaa tttttaagtg tataatgtgt taaactactg    3480
attctaattg tttgtgtatt ttagattcca acctatggaa ctgatgaatg ggagcagtgg    3540
tggaatgcct ttaatgagga aaacctgttt tgctcagaag aaatgccatc tagtgatgat    3600
gaggctactg ctgactctca acattctact cctccaaaaa agaagagaaa ggtagaagac    3660
cccaaggact ttccttcaga attgctaagt tttttgagtc atgctgtgtt tagtaataga    3720
actcttgctt gctttgctat ttacaccaca aaggaaaaag ctgcactgct atacaagaaa    3780
attatggaaa aatattctgt aacctttata agtaggcata acagttataa tcataacata    3840
ctgttttttc ttactccaca caggcataga gtgtctgcta ttaataacta tgctcaaaaa    3900
ttgtgtacct ttagcttttt aatttgtaaa ggggttaata aggaatattt gatgtatagt    3960
gccttgacta gagatcataa tcagccatac cacatttgta gaggttttac ttgctttaaa    4020
aaacctccca cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg aatgcaattg ttgttgttaa    4080
cttgtttatt gcagcttata atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa    4140
taaagcattt ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta    4200
tcatgtctgg atctctagct tcgtgtcaag gacggtgact gcagtgaata ataaaatgtg    4260
tgtttgtccg aaatacgcgt tttgagattt ctgtcgccga ctaaattcat gtcgcgcgat    4320
agtggtgttt atcgccgata gagatggcga tattggaaaa atcgatattt gaaaatatgg    4380
catattgaaa atgtcgccga tgtgagtttc tgtgtaactg atatcgccat ttttccaaaa    4440
gtgatttttg ggcatacgcg atatctggcg atagcgctta tatcgtttac gggggatggc    4500
gatagacgac tttggtgact tgggcgattc tgtgtgtcgc aaatatcgca gtttcgatat    4560
aggtgacaga cgatatgagg ctatatcgcc gatagaggcg acatcaagct ggcacatggc    4620
caatgcatat cgatctatac attgaatcaa tattggccat tagccatatt attcattggt    4680
tatatagcat aaatcaatat tggctattgg ccattgcata cgttgtatcc atatcataat    4740
atgtacattt atattggctc atgtccaaca ttaccgccat gttgacattg attattgact    4800
agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc    4860
gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg    4920
acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa    4980
tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca    5040
agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac    5100
atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc    5160
atggtgatgc ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga    5220
tttccaagtc tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt tttggcacca aaatcaacgg    5280
gactttccaa aatgtcgtaa caactccgcc ccattgacgc aaatgggcgg taggcgtgta    5340
cggtgggagg tctatataag cagagctcgt ttagtgaacc gtcagatcgc ctggagacgc    5400
catccacgct gttttgacct ccatagaaga caccgggacc gatccagcct ccgcggccgg    5460
gaacggtgca ttggaacgcg gattccccgt gccaagagtg acgtaagtac cgcctataga    5520
gtctataggc ccaccccctt ggcttcttat gcatgctata ctgtttttgg cttggggtct    5580
atacaccccc gcttcctcat gttataggtg atggtatagc ttagcctata ggtgtgggtt    5640
attgaccatt attgaccact cccctattgg tgacgatact ttccattact aatccataac    5700
atggctcttt gccacaactc tctttattgg ctatatgcca atacactgtc cttcagagac    5760
tgacacggac tctgtatttt tacaggatgg ggtctcattt attatttaca aattcacata    5820
tacaacacca ccgtccccag tgcccgcagt ttttattaaa cataacgtgg gatctcacgc    5880
gaatctcggg tacgtgttcc ggacatgggc tcttctccgg tagcggcgga gcttctacat    5940
ccgagccctg ctcccatgcc tccagcgact catggtcgct cggcagctcc ttgctcctaa    6000
cagtggaggc cagacttagg cacagcacga tgcccaccac caccagtgtg ccgcacaagg    6060
ccgtggcggt agggtatgtg tctgaaaatg agctcgggga gcgggcttgc accgctgacg    6120
catttggaag acttaaggca gcggcagaag aagatgcagg cagctgagtt gttgtgttct    6180
gataagagtc agaggtaact cccgttgcgg tgctgttaac ggtggagggc agtgtagtct    6240
gagcagtact cgttgctgcc gcgcgcgcca ccagacataa tagctgacag actaacagac    6300
tgttcctttc catgggtctt ttctgcagtc accgtccttg acacgaagct taagccgcca    6360
ccatgggatg gagctgtatc atcctcttct tggtagcaac agctacaggc gtgcactccg    6420
acatccagat gacccagtct ccgtcctccc tgtctgcttt tgtgggagac ggagtcacca    6480
tgacttgttg ggcaagtcag agtatcaacg actatttaaa ttggtatcac cagaggccag    6540
gggaggcccc tgagctcctg gtctttgctg cctccaattt gcaaattgga gtcccgtcaa    6600
ggttcagggg cagtggatct gagacgtatt tcactttaac tatcaacagt ctgcaacctg    6660
aagatagtgg cacatacttc tgtcagaatg ctcactcttt cccgcttact ttcggcggag    6720
ggaccaagct cgagatcaaa cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat    6780
ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc    6840
ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg    6900
agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc    6960
tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc    7020
tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg ttaggaattc attgatcata    7080
atcagccata ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa aaaacctccc acacctcccc    7140
ctgaacctga aacataaaat gaatgcaatt gttgttgtta acttgtttat tgcagcttat    7200
aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt tttttcactg    7260
cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt atcatgtctg gcggccgccg    7320
atatttgaaa atatggcata ttgaaaatgt cgccgatgtg agtttctgtg taactgatat    7380
cgccattttt ccaaaagtga tttttgggca tacgcgatat ctggcgatag cgcttatatc    7440
gtttacgggg gatggcgata gacgactttg gtgacttggg cgattctgtg tgtcgcaaat    7500
atcgcagttt cgatataggt gacagacgat atgaggctat atcgccgata gaggcgacat    7560
caagctggca catggccaat gcatatcgat ctatacattg aatcaatatt ggccattagc    7620
catattattc attggttata tagcataaat caatattggc tattggccat tgcatacgtt    7680
gtatccatat cataatatgt acatttatat tggctcatgt ccaacattac cgccatgttg    7740
acattgatta ttgactagtt attaatagta atcaattacg gggtcattag ttcatagccc    7800
atatatggag ttccgcgtta cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct gaccgcccaa    7860
cgacccccgc ccattgacgt caataatgac gtatgttccc atagtaacgc caatagggac    7920
tttccattga cgtcaatggg tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca    7980
agtgtatcat atgccaagta cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg    8040
gcattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt    8100
agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc gtggatagcg    8160
gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga gtttgttttg    8220
gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat tgacgcaaat    8280
gggcggtagg cgtgtacggt gggaggtcta tataagcaga gctcgtttag tgaaccgtca    8340
gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagacacc gggaccgatc    8400
cagcctccgc ggccgggaac ggtgcattgg aacgcggatt ccccgtgcca agagtgacgt    8460
aagtaccgcc tatagagtct ataggcccac ccccttggct tcttatgcat gctatactgt    8520
ttttggcttg gggtctatac acccccgctt cctcatgtta taggtgatgg tatagcttag    8580
cctataggtg tgggttattg accattattg accactcccc tattggtgac gatactttcc    8640
attactaatc cataacatgg ctctttgcca caactctctt tattggctat atgccaatac    8700
actgtccttc agagactgac acggactctg tatttttaca ggatggggtc tcatttatta    8760
tttacaaatt cacatataca acaccaccgt ccccagtgcc cgcagttttt attaaacata    8820
acgtgggatc tccacgcgaa tctcgggtac gtgttccgga catgggctct tctccggtag    8880
cggcggagct tctacatccg agccctgctc ccatgcctcc agcgactcat ggtcgctcgg    8940
cagctccttg ctcctaacag tggaggccag acttaggcac agcacgatgc ccaccaccac    9000
cagtgtgccg cacaaggccg tggcggtagg gtatgtgtct gaaaatgagc tcggggagcg    9060
ggcttgtacc gctgacgcat ttggaagact taaggcagcg gcagaagaag atgcaggcag    9120
ctgagttgtt gtgttctgat aagagtcaga ggtaactccc gttgcggtgc tgttaacggt    9180
ggagggcagt gtagtctgag cagtactcgt tgctgccgcg cgcgccacca gacataatag    9240
ctgacagact aacagactgt tcctttccat gggtcttttc tgcagtcacc gtccttgaca    9300
cgaagcttaa gccgccacca tgggatggag ctgtatcatc ctcttcttgg tagcaacagc    9360
tacaggcgcg cactcccaag tcactttgaa ggagtctggt cctacgctgg tgaaacccac    9420
acagaccctc acgctgacct gcagcttctc tgggttctca ctcagcacta gtggagtggg    9480
tgtgggctgg gtccgtcagc ccccaggaaa ggccctggag tggcttgcat tcatttggtg    9540
ggatgatgat aagtactaca gcccgtctct ggagagcagg ctcaccatca ccaaggacac    9600
ctccaaaaac caggtggtcc ttacaatgac caacatggac cctgtggaca cagccacata    9660
ttactgtgca cgatccgctg atgactatct ttactattct tttgacacgt ggggccaggg    9720
aaccctggtc accgtctcct cagcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcacc    9780
ctcctccaag agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt    9840
ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt    9900
cccggctgtc ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc    9960
cagcagcttg ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa   10020
ggtggacaag agagttggtg agaggccagc acagggaggg agggtgtctg ctggaagcca   10080
ggctcagcgc tcctgcctgg acgcatcccg gctatgcagt cccagtccag ggcagcaagg   10140
caggccccgt ctgcctcttc acccggaggc ctctgcccgc cccactcatg ctcagggaga   10200
gggtcttctg gctttttccc caggctctgg gcaggcacag gctaggtgcc cctaacccag   10260
gccctgcaca caaaggggca ggtgctgggc tcagacctgc caagagccat atccgggagg   10320
accctgcccc tgacctaagc ccaccccaaa ggccaaactc tccactccct cagctcggac   10380
accttctctc ctcccagatt ccagtaactc ccaatcttct ctctgcagag cccaaatctt   10440
gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc caggtaagcc agcccaggcc tcgccctcca   10500
gctcaaggcg ggacaggtgc cctagagtag cctgcatcca gggacaggcc ccagccgggt   10560
gctgacacgt ccacctccat ctcttcctca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc   10620
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca   10680
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac   10740
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac   10800
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag   10860
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa   10920
ggtgggaccc gtggggtgcg agggccacat ggacagaggc cggctcggcc caccctctgc   10980
cctgagagtg accgctgtac caacctctgt ccctacaggg cagccccgag aaccacaggt   11040
gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct   11100
ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga   11160
gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctatag   11220
caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat   11280
gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaata   11340
ggaattcatt gatcataatc agccatacca catttgtaga ggttttactt gctttaaaaa   11400
acctcccaca cctccccctg aacctgaaac ataaaatgaa tgcaattgtt gttgttaact   11460
tgtttattgc agcttataat ggttacaaat aaagcaatag catcacaaat ttcacaaata   11520
aagcattttt ttcactgcat tctagttgtg gtttgtccaa actcatcaat gtatcttatc    11580
atgtctggat cctctacgcc ggacgcatcg tggccggcat caccggcgcc acaggtgcgg    11640
ttgctggcgc ctatatcgcc gacatcaccg atggggaaga tcgggctcgc cacttcgggc    11700
tcatgagcgc ttgtttcggc gtgggtatgg tggcaggccc cgtggccggg ggactgttgg    11760
gcgccatctc cttgcatgca ccattccttg cggcggcggt gctcaacggc ctcaacctac    11820
tactgggctg cttcctaatg caggagtcgc ataagggaga gcgtcgacct cgggccgcgt    11880
tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa    11940
gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct    12000
ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc    12060
cttcgggaag cgtggc                                                    12076
<210>51
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR1
<400>51
Thr Ser Gly Met Cys Val Ser
1               5
<210>52
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR1
<400>52
Thr Ser Gly Val Ala Val Gly
1               5
<210>53
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR1
<400>53
Thr Ser Gly Val Ser Val Gly
1               5
<210>54
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR1
<400>54
Thr Ser Gly Val Gly Val Gly
1               5
<210>55
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR1
<400>55
Thr Ser Gly Val Ala Val Asn
1               5
<210>56
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR2
<400>56
Leu Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Arg Ser
1               5                   10                  15
<210>57
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR2
<400>57
Leu Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys His Tyr Ser Pro Ser Leu Lys Ser
1               5                   10                  15
<210>58
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR2
<400>58
Leu Val Tyr Trp Asp Asp Asp Arg Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn
1               5                   10                  15
<210>59
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR2
<400>59
Leu Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Ser Pro Ser Leu Lys Asn
1               5                   10                  15
<210>60
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR2
<400>60
Phe Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser Leu Glu Ser
1               5                   10                  15
<210>61
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR2
<400>61
Val Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Arg Arg Tyr Ser Pro Ser Leu Ser Ser
1               5                   10                  15
<210>62
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR3
<400>62
Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr
1               5                   10
<210>63
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR3
<400>63
Phe Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr
1               5                   10
<210>64
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR3
<400>64
Ser Ala Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr
1               5                   10
<210>65
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR3
<400>65
Ser Gly Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr
1               5                   10
<210>66
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR3
<400>66
Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Leu Asp Tyr
1               5                   10
<210>67
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR3
<400>67
Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ser Leu Asp Tyr
1               5                   10
<210>68
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR3
<400>68
Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Phe Asp Tyr
1               5                   10
<210>69
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR3
<400>69
Ser Tyr Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Thr
1               5                   10
<210>70
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR3
<400>70
Ser Ala Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ser Leu Asp Tyr
1               5                   10
<210>71
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR3
<400>71
Ser Ala Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Phe Asp Tyr
1               5                   10
<210>72
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR3
<400>72
Ser Ala Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ser Phe Asp Tyr
1               5                   10
<210>73
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR3
<400>73
Ser Ala Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ser Phe Asp Thr
1               5                   10
<210>74
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR1
<400>74
Arg Ala Ser Gln Thr Ile Asp Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>75
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR1
<400>75
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asn Phe Leu Ala
1               5                   10
<210>76
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR1
<400>76
Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1               5                   10
<210>77
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR1
<400>77
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ile Tyr Leu Asn
1               5                   10
<210>78
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR1
<400>78
Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asp Phe Leu Asn
1               5                   10
<210>79
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR1
<400>79
Trp Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asp Tyr Leu Asn
1               5                   10
<210>80
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR2
<400>80
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1               5
<210>81
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR2
<400>81
Lys Val Ser Ser Leu Arg Ser
1               5
<210>82
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR2
<400>82
Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>83
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR2
<400>83
Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser
1               5
<210>84
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR2
<400>84
Ala Ser Ser Asn Leu Gln Ser
1               5
<210>85
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR2
<400>85
Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ile
1               5
<210>86
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR3
<400>86
Gln Gln Tyr Ala Lys Ser Pro Ile Thr
1               5
<210>87
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR3
<400>87
Gln Gln Thr Arg Arg Phe Pro Leu Thr
1               5
<210>88
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR3
<400>88
Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu Thr
1               5
<210>89
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR3
<400>89
Gln Gln Thr Tyr Arg Asn Leu Phe Thr
1               5
<210>90
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR3
<400>90
Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Leu Gly Thr
1               5
<210>91
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR3
<400>91
Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr
1               5
<210>92
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR3
<400>92
Gln Ser Gly His Ser Phe Pro Leu Thr
1               5
<210>93
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR3
<400>93
Gln His Gly His Ser Phe Pro Leu Thr
1               5
<210>94
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR3
<400>94
Gln Leu Gly His Ser Phe Pro Leu Thr
1               5
<210>95
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR3
<400>95
Gln Asn Ala His Ser Phe Pro Leu Thr
1               5
<210>96
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VL CDR3
<400>96
Gln Asn Gly Trp Ser Phe Pro Leu Thr
1               5
<210>97
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR2
<400>97
Leu Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Ser Pro Ser Leu Glu Thr
1               5                   10                  15
<210>98
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR3
<400>98
Ser His Asp Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr
1               5                   10
<210>99
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR1
<220>
<221>MISC_特征
<222>(4)..(4)
<223>Xaa可以是任何氨基酸
<220>
<221>MISC_特征
<222>(5)..(5)
<223>Xaa可以是任何氨基酸
<220>
<221>MISC_特征
<222>(7)..(7)
<223>Xaa可以是任何氨基酸
<400>99
Thr Ser Gly Xaa Xaa Val Xaa
1               5
<210>100
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人VH CDR2
<220>
<221>MISC_特征
<222>(1)..(1)
<223>Xaa可以是任何氨基酸
<220>
<221>MISC_特征
<222>(2)..(2)
<223>Xaa可以是任何氨基酸
<220>
<221>MISC_特征
<222>(3)..(3)
<223>Xaa可以是任何氨基酸
<220>
<221>MISC_特征
<222>(8)..(8)
<223>Xaa可以是任何氨基酸
<220>
<221>MISC_特征
<222>(9)..(9)
<223>Xaa可以是任何氨基酸
<220>
<221>MISC_特征
<222>(11)..(11)
<223>Xaa可以是任何氨基酸
<220>
<221>MISC_特征
<222>(15)..(15)
<223>Xaa可以是任何氨基酸
<220>
<221>MISC_特征
<222>(16)..(16)
<223>Xaa可以是任何氨基酸
<400>100
Xaa Xaa Xaa Trp Asp Asp Asp Xaa Xaa Tyr Xaa Pro Ser Leu Xaa Xaa
1               5                   10                  15