一种口服药物组合物在制备预防或治疗肾脏疾病药物中的 用途 技术领域 本发明属于医药领域， 具体涉及一种口服药物组合物在制备预防或治疗肾脏疾病 药物中的用途。
背景技术 继发性肾脏病是指全身系统疾病导致的肾脏损害， 其中糖尿病和高血压引起的肾 脏损害占有相当的比例。并且糖尿病肾病和高血压肾病对肾脏的危害较大， 应引起充分重 视。
糖尿病 (diabetes mellitus， DM) 是一组由环境和遗传因素共同作用引起的综合 征， 是由于胰岛素分泌不足或靶组织对胰岛素敏感性降低， 引起糖、 脂肪和蛋白质等一系列 代谢紊乱， 久病可致多个系统损害。糖尿病肾病 (diabetic nephropathy， DN) 已经成为糖 尿病最常见的并发症之一， 也是导致糖尿病患者致死率及致残率升高的主要原因之一。糖 尿病肾病临床发病率高， 对患者健康危害严重， 并且很快将进入依赖肾脏透析维持生存的 痛苦状态， 给患者家庭和社会造成极为巨大的经济负担。
流行病学调查发现在欧美发达国家， 通过对糖尿病病人的临床观察发现， 高达 20％～ 40％的病人发展为 DN， 更严重的是其发病率于糖尿病发病 10 年后迅速上升， 20 ～ 30 年后达最高峰， 约为 40％～ 50％。在美国， 糖尿病是导致终末期肾病 (endstage renal disease， ESRD) 最常见的疾病， 糖尿病肾病占终末期肾功衰病因中的首位， 约为 38％ ； 在日 本， 糖尿病肾病是透析的重要原因， 约占透析病人的 36.6％ ； 在我国， 尽管糖尿病肾病仅占 继发性肾小球疾病的 10％， 但随着人们生活水平的提高及老龄化社会的到来， 糖尿病发病 率快速增长， 可以预见糖尿病肾病将会不断增加， 糖尿病肾病导致终末期肾功衰的比率会 越来越高。 临床上糖尿病肾病一旦出现持续性蛋白尿， 其肾功能将不可遏制地进行性下降， 目前尚缺乏有效治疗手段来阻抑糖尿病肾病的进展， 约 25％的病人在 6 年内、 50％的病人 在 10 年内、 75％病人在 15 年内发展为终末期肾功能衰竭， 从出现蛋白尿到死于尿毒症平均 病程为 10 年。
高血压病是临床常见病、 多发病 ； 而高血压肾病是高血压病的严重并发症之一。 随 着高血压病的进展， 肾脏损害几乎不可避免。许多高血压肾病患者早期并无肾脏损害的临 床表现， 因此未能引起高度重视， 一旦出现临床表现或常规检测发现异常时， 肾脏病变已达 相当的程度， 及需要疗效显著的药物进行治疗。
与此同时， 高血压和糖尿病时常相互损害并导致病情的加重。高血压加速糖尿病 肾病的进展和恶化， 长期有效地控制高血压可延缓肾功能恶化和有利于减少尿蛋白。某 些研究结果表明， 将糖尿病肾病患者血压降至＜ 17.6 ～ 18.7/11.3 ～ 12.0kPa(130 ～ 140/85 ～ 90mmHg)， 对稳定肾功能、 避免尿蛋白增加均显示良好的作用。糖尿病肾病高血压 简便有用。 患者对限盐和利尿剂反应常较为敏感。低盐饮食 ( 钠＜ 3g/d) 有利于血压控制， 利尿剂影响胰岛素分泌和糖代谢使低密度和极低密度脂蛋白升高， 刺激肾素 - 血管紧张素
系统， 并可引起心血管合并症增加等副作用。故对糖尿病肾病高血压患者不应采用单一的 利尿剂治疗。 当血肌酐＞ 221.0μmol/L(2.5mg/dl)， 噻嗪类利尿剂无效， 但袢利尿剂仍可有 效；
鉴于此， 如何预防和治疗糖尿病肾病、 糖尿病伴高血压肾病和高血压肾病是广大 医学工作者共同关注的问题。目前， 临床上对于糖尿病肾病和高血压肾病的治疗没有非常 有效的药物， 因此， 开发这方面的新药十分必要。
瑞舒伐他汀是主要用于治疗高胆固醇和高脂血症的药物。 美国 FDA 早在 2003 年 8 月根据临床试验结果， 批准上市。 该药物主要用于临床试验结果显示， 该药物可以降低总胆 固醇、 LDL- 甘固醇以及甘油三酯水平， 并可以升高 HDL- 甘固醇 ( 有益甘固醇 ) 水平。 该药物 最常见的副作用包括肌肉疼痛、 胃痛、 恶心、 便秘以及虚弱等。此前有学者认为长期服用瑞 舒伐他汀会造肾脏损伤。 但经过长期的临床试验表明， 瑞舒伐他汀在造成肾脏损害方面， 作 用很小。Jonathan Sorof 等人在 JACC 中揭示了在糖尿病或高血压等极易引起肾脏损害的 疾病中， 长期服用瑞舒伐他汀能够改善患者的肾脏功能。( 参见 《长期服用瑞舒伐他汀能够 改善美国国家胆固醇教育计划成人治疗组第三指南的高危病人的肾脏功能》 ， JACC.2007 ： 392A.Abstract1002-131.)。在药物的相互作用方面瑞舒伐他汀和地高辛、 非诺贝特、 抗高 血压药物、 抗糖尿病药物和激素替代疗法之间没有临床相关的副作用。 肝素类药物属粘多糖类药物， 由己糖醛酸、 氨基己糖及它们的硫酸化、 乙酰化等衍 生物为结构单位构成的一类物质， 包括肝素、 低分子肝素和超低分子肝素。 肝素是体内外均 能延长凝血时间的抗凝血药。 其抗凝血作用极为复杂， 对凝血过程的许多环节都有影响。 低 分子量肝素的活性 / 抗凝血活性的比值为 1.5 ～ 4.0， 而普通的肝素为 1， 保持了肝素的抗 血栓作用而降低了出血的危险。 具有半衰期长， 生物利用度高等优点， 正广泛应用于血栓栓 塞性疾病的预防及治疗， 其有效性和安全性均优于普通肝素， 量效关系明确。
肝 素 治 疗 实 验 性 肾 小 球 肾 炎 有 效 的 报 道 最 早 可 以 追 溯 到 1940 年。15 年 后， Kleinerman 发现在刚开始发病时就给予肝素治疗对家兔肾炎模型有保护作用。几乎与此 同时， Good 和 Thomas 应用肝素治疗 Shwartzman 反应， 认为肝素不仅能防止血管内凝血， 而 且能抑制炎症反应。1965 年， Halpern 等证实肝素能明显减轻抗基底膜肾炎模型的肾脏病 变 .1970 年， Cade 等对 18 例慢性增生性肾炎患者进行皮下注射肝素 (200-600mg/d)， 历时 12 个月， 结果显示， 在治疗期间， 患者的 GFR 升高， 在肝素减量和停药时， GFR 又降低 ； 与对 照组相比， 治疗组患者血清白蛋白上升， 尿白蛋白降低 ； 肾活检显示， 肾小球增生性病变显 著减轻。1972 年， Wardle 等报道肝素能阻止急进性肾小球肾炎患者肾功能的恶化， 有益于 合并严重高血压和肾功能减退的肾炎患者， 甚至可以治疗部分肾移植排斥反应。80 年代末 至 90 年代初， 人们在体外研究中发现肝素能抑制肾小球系膜细胞的增殖， 在动物实验中发 现肝素通过抑制血小板源性生长因子 (PDGF) 的释放减轻蛇毒 (Habu-venom) 诱导的系膜损 伤， 并能减轻部分肾切除大鼠模型的进行性肾小球硬化。但是， 由于使用不方便， 出血并发 症等因素， 这些早期的研究结果并未引起肾脏学界的重视。
他汀类药物联合低分子肝素治疗肾脏疾病已经有所报道， 其中已经报道的他汀类 药物主要包括阿托伐他汀、 辛伐他汀、 氟伐他汀、 洛伐他汀等， 低分子肝素都是采用注射给 药的。 胡庆等在 《低分子肝素与洛伐他汀联合治疗糖尿病肾病的疗效分析》 ( 华西医学， 2005 年 20(4) ： 第 733 页 ) 一文提到， 低分子肝素联合洛伐他汀治疗糖尿病肾病取得了较好的疗
效。 然而， 该治疗方案中低分子肝素是用来注射给药的， 肝素注射制剂在临床上应用最大的 缺点是反复注射， 皮下注射经常会造成皮下出血， 对于需要长期用药的病人难以接受。 发明内容
本发明提供一种口服药物组合物在制药上的用途， 具体地涉及该口服药物组合物 在制备治疗糖尿病肾病和高血压肾病药物中的用途。
发明人对瑞舒伐他汀或其可药用盐和肝素、 低分子肝素或其可药用盐联合应用进 行了认真的动物实验研究， 得出了合适的该组合物的剂量比例和用法。使用基于这些研究 得到的发现来制备的口服药物组合物， 发明人进行了如实施例 1-3 的动物实验研究。结果 发现， 通过本发明提供的方式给予该组合物， 可以达到极好的血糖控制， 能预防和治疗糖尿 病肾病。并且在预防和治疗高血压肾病方面具有很好的疗效。
为此， 本发明公开了一种口服药物组合物在制备治疗肾脏疾病的药物中的用途， 所述的肾脏疾病是糖尿病肾病或高血压肾病， 所述的口服药物组合物含有如下活性成分 ：
1) 瑞舒伐他汀或其可药用盐， 和
2) 肝素或低分子肝素或其可药用盐。
优 选 地， 瑞 舒伐他汀 或其可 药用盐与肝 素或 其可 药用 盐的 重量 比为 0.06 ～ 16 ∶ 1， 其中所述的肝素的效价以 170IU/mg 计 ； 进一步优选地， 瑞舒伐他汀或其可药用盐与 肝素或其可药用盐的重量比为 1 ～ 8 ∶ 1， 其中所述的肝素的效价以 170IU/mg 计。
优 选 地， 瑞舒伐他汀或其可药用盐与低分子肝素或其可药用盐的重量比为 0.03 ～ 40 ∶ 1， 其中所述的低分子肝素的效价以 104.4IU/mg 计 ； 进一步优选地， 瑞舒伐 他汀或其可药用盐与低分子肝素的重量比为 0.1 ～ 8 ∶ 1， 其中所述的低分子肝素的效价 以 104.4IU/mg 计 ； 再进一步优选地， 瑞舒伐他汀或其可药用盐与低分子肝素的重量比为 0.1 ～ 4 ∶ 1， 其中所述低分子肝素效价以 104.4IU/mg 计。
值得说明的是， 如果肝素或者低分子肝素以其它效价计， 那么根据上述组合物中 在肝素或低分子肝素原效价下 ( 即肝素的效价为 170IU/mg， 低分子肝素效价为 104.4IU/ mg) 的瑞舒伐他汀或其可药用盐与肝素或低分子肝素或其可药用盐的重量比例关系， 可以 换算成在肝素或低分子肝素的其它效价下 ( 比如肝素的效价为 125IU/mg， 低分子肝素的效 价为 80IU/mg) 的瑞舒伐他汀或其可药用盐与肝素或低分子肝素或其可药用盐的重量比例 关系。
上述口服药物组合物用于人的糖尿病肾病的治疗时， 所述肝素或低分子肝素或其 可药用盐的人用剂量为 3 ～ 140IU/kg·d， 瑞舒伐他汀或其可药用盐的人用剂量为 0.15 ～ 0.42mg/kg· d； 优选地， 所述肝素、 低分子肝素或其可药用盐的人用剂量为 9 ～ 80IU/kg· d， 瑞舒伐他汀或其可药用盐的人用剂量为 0.20 ～ 0.33mg/kg·d。
上述口服药物组合物中， 所述肝素可药用盐， 包括钠盐、 钙盐、 钾盐、 镁盐、 锌盐、 铁 盐， 优选其钙盐和钠盐。
上述所有涉及的肝素、 低分子肝素或其可药用盐的衍生物包括其不同程度的硫酸 化产物、 脱硫酸化产物。
上述口服药物组合物中， 所有涉及的肝素、 低分子肝素或其可药用盐和瑞舒伐他 汀或其可药用盐， 可以根据它们的性质， 通过常规制剂技术制成固体口服制剂， 包括普通片、 分散片、 缓释片或胶囊。
通过动物试验研究， 本发明人证实了瑞舒伐他汀或其可药用盐与肝素、 低分子肝 素或其可药用盐的口服药物组合物在制备治疗大鼠糖尿病肾病和高血压肾病的药物中的 用途。 值得说明的是， 本部分的动物试验研究中， 给药方式都是优选的。 需要说明的是， 采用 如下重量比的组合物给药进行实验， 并不会改变该药物组合物具有制备治疗大鼠糖尿病肾 病和高血压肾病的用途这一结论的成立。所述的如下重量比的组合物为 ： 瑞舒伐他汀或其 可药用盐与肝素或其可药用盐的重量比 0.06 ∶ 1 或者 16 ∶ 1( 肝素的效价以 170IU/mg 计 ) 的药物组合物 ； 瑞舒伐他汀或其可药用盐与低分子肝素或其可药用盐的重量比 0.03 ∶ 1 或 40 ∶ 1( 低分子肝素的效价以 104.4IU/mg 计 ) 的药物组合物。
具体地， 首先发明人通过对 SD 大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素 (STZ) 来完成糖尿 病肾病的造模。对造模成功的大鼠给予本发明的药物组合物， 连续给药 4 个月后测尿微量 白蛋白、 尿 β2 微球蛋白， 血标本检测血糖、 血肌酐。结果发现， 经过长期灌胃给药瑞舒伐他 汀和低分子肝素或其可药用盐， 可以治疗大鼠的糖尿病肾病。在对 DN 大鼠尿微量白蛋白 (MA) 和尿 β2 微球蛋白 (U-β2MG) 的影响方面， 瑞舒伐他汀与低分子肝素口服中剂量复方 组与瑞舒伐他汀口服联合低分子肝素注射组剂量完全一致， 他们对 DN 大鼠尿微量白蛋白 (MA) 和尿 β2 微球蛋白 (U-β2MG) 的影响效果相当 ； 瑞舒伐他汀与低分子肝素口服高剂量 复方与瑞舒伐他汀口服联合低分子肝素注射组相比， 具有显著性差异。而且本发明提供的 药物组合物全部是固体口服制剂， 可以避免肝素或低分子肝素注射给药带来的痛苦， 进一 步表明瑞舒伐他汀与低分子肝素口服组合物在治疗糖尿病肾病的综合效果比口服瑞舒伐 他汀联合低分子肝素注射给药具有明显的优势。
其次， 发明人通过对高血压大鼠 (SHR) 使用本发明提供的治疗方案进行干预， 以 尿微量白蛋白和尿 β2 微球蛋白作为衡量肾脏功能的指标， 结果发现瑞舒伐他汀与肝素复 方能够预防因高血压造成的肾脏损伤。其次， 发明人通过对高血压大鼠 (SHR) 给药硝基左 旋精氨酸甲酯来完成高血压肾病的造模， 并且以肾小球滤过率、 尿微量白蛋白、 尿 β2 微球 蛋白三个指标来衡量肾功能， 结果发现瑞舒伐他汀与低分子肝素复方对高血压肾病具有很 好的治疗效果。
本发明另一个创新点在于， 该药物组合物是口服给药。传统的肝素或低分子肝素 注射给药会造成出血， 尤其是反复给药会大大增加患者的痛苦。然而口服肝素或低分子肝 素不仅可以避免注射带来的痛苦， 而且可以避免肝素或低分子肝素注射造成的出血。特别 是肝素或低分子肝素和他汀类药物联合应用并选择本发明给出的最佳剂量配比时， 该组合 物表现出意想不到的药效学作用。
与其它治疗糖尿病肾病和高血压肾病的药物相比， 本发明中的药物组合物在治疗 糖尿病肾病和高血压肾病方面具有以下优点或意想不到的效果 ：
(1) 协同作用。本发明的组合物通过动物实验研究， 表明当用本发明的组合物时， 尤其是采用优选的配比时， 与单独应用有效量的 HMG-COA 还原酶抑制剂或肝素时相比， 本 发明的组合物给出意想不到的更好效果， 同时毒性没有增加， 在达到相同降糖效果的情况 下， 两类药物合用大大降低了每种药物的使用剂量， 这就显著降低了 HMG-COA 还原酶抑制 剂的不良反应和肝素的用药风险。
(2) 方便给药。本发明药物组合物可以制成胶囊和片剂等， 方便患者服用， 尤其对于需要长期给药的患者来说， 本发明摒弃传统的注射给药方式， 能够极大地减轻患者痛苦， 适用于患者的长期治疗。 具体实施方式
以下通过具体实施例进一步描述本发明， 本发明的应用范围不限于下列实施例。 由于已经根据以下优选实施例描述了本发明， 某些修饰和等价变化对于本领域的普通技术 人员是显而易见的且包括在本发明的范围内。
1. 瑞舒伐他汀或其可药用盐与肝素或低分子肝素或其可药用盐药物组合物的药 效学研究
实例 1 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方对大鼠糖尿病肾病的影响
1 动物模型的建立
选用 SD 大鼠 90 只， 雄性， 体重 (250±20)g。所有大鼠适应性喂养一周后， 禁食 12h， 按照 65mg/kg 腹腔内一次性注射链脲佐菌素 (STZ)。STZ 临用前用枸橼酸钠缓冲液 (0.1mol/L， PH4.5) 配制成 2％的 STZ 注射剂， 10min 内用完。全部大鼠在同一动物房内分 笼饲养， 标准饮食。连续喂养 2 周， 测血糖、 尿糖、 24h 尿微量白蛋白和尿 β2 微球蛋白。糖 尿病肾病 (DN) 大鼠的选择标准需同时满足如下三个条件 ： 大鼠血糖高于 16.7mmol/L、 尿量 增加多于一倍和尿白蛋白阳性。 2 分组与给药
成模 DN 大鼠随机分成模型组对照组以及给药组 (6 组 )。 正常对照组选用 SD 大鼠， 每组 8 只。瑞舒伐他汀口服与低分子肝素注射组 ( 他汀口服联合低分子肝素注射组 ) 采用 口服瑞舒伐他汀钙联合尾静脉注射低分子肝素钙给药， 其余各组均采取灌胃给药方式。具 体分组及给药如下 ：
正常对照组 ： 同体积的纯化水 ；
模型对照组 ： 同体积的羧甲基纤维素钠 ；
瑞舒伐他汀组 ： 0.3mg/(kg.d) 瑞舒伐他汀钙 ；
低分子量肝素组 ： 3.0mg/(kg.d) 低分子肝素钙 ；
瑞舒伐他汀口服与低分子肝素注射组 ( 他汀口服联合低分子肝素注射组 ) ： 0.3mg/(kg.d) 瑞舒伐他汀钙 +3.0mg/(kg.d) 低分子肝素钙 ；
瑞舒伐他汀与低分子肝素复方低剂量组 ( 复方低组 ) ： 0.1mg/(kg.d) 瑞舒伐他汀 钙 +1.0mg/(kg.d) 低分子肝素钙 ；
瑞舒伐他汀与低分子肝素复方中剂量组 ( 复方中组 ) ： 0.3mg/(kg.d) 瑞舒伐他汀 钙 +3.0mg/(kg.d) 低分子肝素钙 ；
瑞舒伐他汀与低分子肝素复方高剂量组 ( 复方高组 ) ： 0.9mg/(kg.d) 瑞舒伐他汀 钙 +9.0mg/(kg.d) 低分子肝素钙。
3 实验方法与指标检测
糖尿病肾病大鼠模型成功后， 继续喂养 12 周， 期间按照上述给药方案进行给药， 并进行严密观察。实验结束前一天， 用代谢笼收集 24h 尿， 检测尿微量白蛋白、 尿 β2 微球 蛋白。末次给药后， 大鼠取血， 迈瑞全自动生化分析仪检测血糖。
3.1 血糖指标 ： 采用 Advantage 电子感应血糖仪及配套试制条 (Roche， 瑞士 ) 检
测。 3.2 尿微量白蛋白 (MA) 和尿 β2- 微球蛋白 (U-β2MG) 指标 ： 收集大鼠 24h 尿液， 取 5ml 尿液采用美国核电 ACE 全自动生化分析仪检测尿微量白蛋白 (MA) 和尿 β2- 微球蛋 白 (U-β2MG)， 方法为颗粒增强透析免疫比浊分析法。尿 β2- 微球蛋白试剂盒购自美国 COX 公司， 尿微量白蛋白试剂盒购自英国 Randox 公司。
血糖水平是衡量糖尿病的指标， 血糖浓度越大表示糖尿病的病情越严重 ； 尿微量 白蛋白 (MA) 和尿 β2- 微球蛋白 (U-β2MG) 是衡量肾小球和肾小管损坏程度的指标， 这两个 数值越大表明肾脏损坏程度越大。
4. 实验结果
4.1 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方对 DN 大鼠血糖的影响
实验结果表明 ： 与模型组比较， 仅有瑞舒伐他汀与低分子肝素复方高组在降低血 糖方面具有显著性差异 ； 其它各个治疗组之间均无显著性差异。 分析可能的原因是， 瑞舒伐 他汀与低分子肝素复方高组改善了肾脏功能从而带来的对血糖的影响。见表 1。
表 1 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方对 DN 大鼠血糖的影响
▲ 注： 与模型组比较， P ＜ 0.05。
4.2 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方对 DN 大鼠尿微量白蛋白、 尿 β2 微球蛋白 (U-β2MG) 的影响
实验结果表明 ：
(1) 与模型组比较， 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方三个组对于 DN 大鼠尿微量白蛋 白、 尿 β2- 微球蛋白 (U-β2MG) 的降低有显著性差异。瑞舒伐他汀与低分子肝素复方中组 和复方高组的影响更为显著。 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方三个组分别与瑞舒伐他汀组或 低分子肝素组比较， 复方中组和复方高组有显著性差异。说明瑞舒伐他汀与低分子肝素复 方对预防和治疗糖尿病引起的肾脏损伤具有很好的作用， 并且瑞舒伐他汀和低分子肝素复 方对于影响 DN 大鼠尿微量白蛋白和尿 β2 微球蛋白方面具有协同作用。见表 2。
(2) 瑞舒伐他汀与低分子肝素口服中剂量复方与瑞舒伐他汀口服联合低分子肝素 注射组剂量完全一致， 他们对 DN 大鼠尿微量白蛋白 (MA) 和尿 β2 微球蛋白 (U-β2MG) 的影 响效果相当。在对 DN 大鼠尿微量白蛋白 (MA) 和尿 β2 微球蛋白 (U-β2MG) 的影响方面， 瑞 舒伐他汀与低分子肝素口服高剂量复方与瑞舒伐他汀口服联合低分子肝素注射组相比， 具 有显著性差异。而且本发明提供的药物组合物全部是固体口服制剂， 可以避免肝素或低分 子肝素注射给药带来的痛苦， 进一步表明瑞舒伐他汀与低分子肝素口服组合物在治疗糖尿 病肾病的综合效果比口服瑞舒伐他汀联合低分子肝素注射给药具有明显的优势。见表 2。
因此， 瑞舒伐他汀与低分子肝素的药物组合物可以作为制备治疗糖尿病肾病的药 物使用。
表 2 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方对 DN 大鼠尿微量白蛋白 (MA) 和尿 β2 微球蛋 白 (U-β2MG) 的影响
▲ 注： 与模型组比较， p ＜ 0.05 ； ▲▲
与模型组比较， p ＜ 0.01 ； ★
与瑞舒伐他汀组比较， p ＜ 0.05 ； ★★
与瑞舒伐他汀组比较， p ＜ 0.01 ； ■
与低分子肝素组比较， p ＜ 0.05 ； *
与他汀口服与低分子肝素注射组相比， p ＜ 0.05。
实施例 2 瑞舒伐他汀与肝素复方对高血压引起的早期肾脏损伤的干预作用
1. 实验动物分组与给药
SPF 级雄性自发性高血压大鼠 (SHR)48 只， 12 周龄， 体重 280-300g， 由中国科学研 上海实验动物中心提供。4 只一笼， 标准饲料喂养， 自由进食和饮水， 24±2 摄氏度的恒温安 静环境。同时， 另设 8 只同龄 Wistar-Kyoto(WKY) 作为正常对照组。将高血压大鼠 (SHR) 随机分成模型组、 给药组， 每组 8 只。各组均为灌胃给药。具体分组及给药如下 ：
正常对照组 ： 同体积的纯化水 ；模型对照组 ： 同体积的羧甲基纤维素钠 ；
瑞舒伐他汀组 ： 0.66mg/(kg.d) 瑞舒伐他汀钙 ；
肝素组 ： 0.165mg/(kg.d) 肝素钠 ；
瑞舒伐他汀与肝素复方低剂量组 ( 复方低组 ) ： 0.22mg/(kg.d) 瑞舒伐他汀钙 +0.055mg/(kg.d) 肝素钠 ；
瑞舒伐他汀与肝素复方中剂量组 ( 复方中组 ) ： 0.66mg/(kg.d) 瑞舒伐他汀钙 +0.165mg/(kg.d) 肝素钠 ；
瑞舒伐他汀与肝素复方高剂量组 ( 复方高组 ) ： 2.00mg/(kg.d) 瑞舒伐他汀钙 +0.50mg/(kg.d) 肝素钠。
2. 试验方法与指标检测
将所有 SHR 大鼠和 WKY 大鼠适应性普通饲养 7 天。每只大鼠做好标记， 分别检测 血压及上午采集大鼠尿液检测尿微量白蛋白 (MA)。各组大鼠自第 2 周开始按照上述的方 案给药至第 9 周结束。于试验开始时及第 5 周、 第 9 周， 采用尾动脉测压法测量大鼠血压， 每次测 3 次， 取其平均值。动物治疗 8 周后， 收集大鼠 24h 尿液， 取 5ml 尿液采用美国核电 ACE 全自动生化分析仪检测尿微量白蛋白 (MA) 和尿 β2- 微球蛋白 (U-β2MG)， 方法为颗粒 增强透析免疫比浊分析法。尿 β2- 微球蛋白试剂盒购自美国 COX 公司， 尿微量白蛋白试剂 盒购自英国 Randox 公司。
将以上所得实验数据按照一下方法进行统计学处理 ：
采用 SPSS 统计软件， 计算数据以均数 ± 标准差表示， 多组资料比较采用方差分析， 组内比较采用 t 检验。以 p ＜ 0.05 为有统计学意义。 3. 试验结果
3.1 瑞舒伐他汀与肝素复方对血压的影响
实验结果表明， 实验结束时 ( 第 9 周 )， 与模型组、 肝素组、 瑞舒伐他汀组相比， 瑞舒 伐他汀与肝素复方高组对 SHR 血压的降低有显著性差异。与模型组比较， 瑞舒伐他汀组和 肝素组对 SHR 血压的降低均无显著性差异。这一定程度上说明瑞舒伐他汀与肝素复方对于 降低 SHR 大鼠血压方面具有协同作用。
表 3 瑞舒伐他汀与肝素复方对血压 (mmHg) 的影响
注▲与模型组比较 p ＜ 0.05 ； ★
与瑞舒伐他汀组比较 p ＜ 0.05 ； ■
与肝素组比较 p ＜ 0.05。
3.2 瑞舒伐他汀与肝素复方对尿微量白蛋白和尿 β2- 微球蛋白的影响
实验结果表明， 与模型组、 瑞舒伐他汀组比较， 瑞舒伐他汀与肝素复方组对于 SHR 大鼠尿微量白蛋白、 尿 β2- 微球蛋白 (U-β2MG) 的降低有极显著性差异 (p ＜ 0.01) ； 与肝 素组比较， 瑞舒伐他汀与肝素复方对于 SHR 大鼠尿微量白蛋白、 尿 β2- 微球蛋白 (U-β2MG) 的降低有显著性差异 (p ＜ 0.05)。然而瑞舒伐他汀组与模型组相比无显著差异， 并且瑞舒 伐他汀和肝素复方对于降低 SHR 尿微量白蛋白、 尿 β2- 微球蛋白 (U-β2MG) 方面具有协同 作用。因此瑞舒伐他汀与肝素复方了以作为制备治疗高血压引起的肾脏损伤的药物使用。 ( 见表 4)。
表 4 瑞舒伐他汀与肝素复方对尿微量白蛋白和尿 β2 微球蛋白的影响
注▲与模型组比较 p ＜ 0.05 ； ▲▲
与模型组比较 p ＜ 0.01 ； ★
与瑞舒伐他汀组比较 p ＜ 0.05 ； ★★
与瑞舒伐他汀组比较 p ＜ 0.01 ； ■
与肝素组比较 p ＜ 0.05
实施例 3 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方对高血压肾病的影响
1. 高血压肾病动物模型的建立
SPF 级 雄 性 自 发 性 高 血 压 大 鼠 (SHR)48 只， 12 周 龄， 体 重 280-300g， 由中国 科学研上海实验动物中心提供。全部 SHR 大鼠的饮用水中加入硝基左旋精氨酸甲酯 (L-NAME)50mg/L。并且于每周一、 三、 五更换新配置的含有 L-NAME 的水瓶。在实验开始后 的 0d、 14d、 28d， 分别收集大鼠 24h 尿液， 测定尿蛋白的含量。以大鼠尿白蛋白尿 “++” 作为 高血压大鼠 (SHR) 获得严重高血压肾病的标志， 以此作为造模成功的选择标准。
2. 高血压肾病大鼠分组与给药
优选高血压肾病大鼠 40 只， 随机分为 5 组。各组给药方式均为灌胃给药。连续给
药 14 天。具体分组与给药方案如下 ：
模型对照组 ： 同体积的纯化水 ；
瑞舒伐他汀组 ： 0.83mg/(kg.d) 瑞舒伐他汀钠 ；
低分子量肝素组 ： 0.104mg/(kg.d) 低分子肝素钠 ；
瑞 舒 伐 他 汀 与 肝 素 复 方 低 剂 量 组 (L 组 ) ： 0.28mg/(kg.d) 瑞 舒 伐 他 汀 钠 +0.035mg/(kg.d) 低分子肝素钠 ；
瑞 舒 伐 他 汀 与 肝 素 复 方 中 剂 量 组 (M 组 ) ： 0.83mg/(kg.d) 瑞 舒 伐 他 汀 钠 +0.104mg/(kg.d) 低分子肝素钠 ；
瑞 舒 伐 他 汀 与 肝 素 复 方 高 剂 量 组 (H 组 ) ： 2.50mg/(kg.d) 瑞 舒 伐 他 汀 钠 +0.3125mg/(kg.d) 低分子肝素钠。
3. 实验方法与指标测定
在收集完最后一次 24h 尿样后， 用 2％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠 50mg/kg， 并 且放置于可控制温度的手术台以维持大鼠的自主呼吸， 左侧腹股沟静脉插管用以注射人造 血浆、 菊糖和对氨基马尿酸 (PAH)。 左侧腹股沟动脉插管并和一压力转换器连接用以记录血 压 (BP)、 平均动脉压 (MAP)。 所有记录由计算机通过图表软件系统处理。 在耻骨弓上和腹中 线交界处作一水平 1cm 左右的切口， 用一个带有边缘的 PE 管插入膀胱收集尿液。整个手术 期间， 从大鼠静脉缓慢推注约 1ml 人造血浆、 0.5ml 含有 20mg 菊糖和对氨基马尿酸 (PAH) 的 生理盐水。再以 100μl/(min.kg) 持续静脉滴注同浓度剂量的菊糖和对氨基马尿酸 (PAH) 的生理盐水。经过 45 分钟的平衡时间， 肾脏清除率实验由两个持续 20min 的收集尿液的周 期组成。每个周期的中点收集一次血液样品 ( 约 150μl)， 离心血液， 收集血浆留待分析。 收集后的大鼠尿液称重计算尿量并作菊糖和 PAH 的浓度测定。尿中和血浆中的 菊糖浓度用蒽酮法测定。PAH 浓度用比色法测定。尿蛋白的含量用 Bradford 法化验， 并用 牛血清白蛋白作标准曲线。这些测定可以计算出菊糖的清除率 ( 相当于肾小球的滤过率， GFR)， 对氨基马尿酸 (PAH) 清除率 ( 相当于肾脏血浆流量， RPF)。将两个周期的结果平均后 得到肾脏功能指标， 以菊糖的清除率表示肾小球的滤过率， 以对氨基马尿酸 (PAH) 清除率 表示肾脏血浆流量。
将以上所得实验数据按照一下方法进行统计学处理 ：
采用 SPSS 统计软件， 计算数据以均数 ± 标准差表示， 多组资料比较采用方差分析， 组内比较采用 t 检验。 以 p ＜ 0.05 为有统计学意义。 在本次实验中， 我们选择平 均动脉压和心率两个指标作为衡量血压状况的指标， 这两个指标越高， 表示血压水平越高。 于此同时， 我们选择肾小球滤过率、 肾脏血浆流量两个指标作为衡量肾脏功能的重要指标， 这两个数值越高表明肾脏功能越好。 4. 实验结果
4.1 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方对高血压肾病大鼠血压的影响
实验结果表明， 与模型组， 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方高组对于降低平均动脉 压方面具有显著差异。 与低分子肝素组、 瑞舒伐他汀组相比， 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方 三个组均没有显著的差异。这说明， 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方在降低血压水平方面具 有一定的作用。
表 5 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方对高血压肾病大鼠血压和心率的影响
注▲与模型组比较 p ＜ 0.05.
4.2 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方对高血压肾病大鼠肾脏功能的影响。
实验结果表明 ：
(1) 在对肾小球滤过率影响方面， 低分子肝素组与模型组相比具有显著性差异 (p ＜ 0.05)， 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方三个组与模型组和瑞舒伐他汀组相比具有极显著 的差异 (p ＜ 0.01)， 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方中组、 复方高组与低分子肝素组相比具 有显著差异 (p ＜ 0.05)。见表 6。
(2) 在对肾脏血浆流量影响方面， 低分子肝素组、 瑞舒伐他汀组与模型组相比， 没 有显著差异 ； 然而瑞舒伐他汀与低分子肝素复方三个组与模型组、 瑞舒伐他汀组、 低分子肝 素组相比均具有显著的差异或极显著的差异， 并且瑞舒伐他汀和低分子肝素对高血压引起 的肾小球滤过率和肾脏血浆流量的影响具有协同作用。见表 6。
因此， 瑞舒伐他汀与低分子肝素的药物组合物可以作为制备治疗高血压肾病的药 物使用。
表 6 瑞舒伐他汀与低分子肝素复方对高血压肾病大鼠肾脏功能的影响
注▲与模型组比较 p ＜ 0.05 ； ▲▲ 与模型组比较 p ＜ 0.01 ；13101991597 A CN 101991599
★说明书12/14 页与瑞舒伐他汀组比较 p ＜ 0.05 ； 与瑞舒伐他汀组比较 p ＜ 0.01 ； ■ 与低分子肝素组比较 p ＜ 0.05 ； ■■ 与低分子肝素组比较 p ＜ 0.01 2. 瑞舒伐他汀或其可药用盐与肝素或低分子肝素或其可药用盐药物组合物的制★★备 实施例 4 片剂
处方 瑞舒伐他汀钙 32g
肝素钠 2g
微晶纤维素 120g
2％羟丙基甲基纤维素溶液 适量
低取代羟丙基纤维素 8g
硬脂酸镁 2g
制备工艺 ： 瑞舒伐他汀钙和肝素钠过 100 目筛， 微晶纤维素和低取代羟丙基纤维 素过 80 目筛， 称取处方量的瑞舒伐他汀钙、 肝素钠与低取代羟丙基纤维素、 微晶纤维素混 合均匀， 加入 2％羟丙基甲基纤维素溶液适量制粒， 40℃干燥， 16 目筛整粒， 干颗粒中加入 处方量的硬脂酸镁混匀， 压片即得。
实施例 5 片剂
处方 瑞舒伐他汀钙 10g
肝素钠 10g
微晶纤维素 110g
2％羟丙基甲基纤维素溶液 适量
低取代羟丙基纤维素 7g
硬脂酸镁 2g
制备工艺同实施例 4。
实施例 6 片剂
处方 瑞舒伐他汀钙 32g
肝素钠 4g
微晶纤维素 130g
2％羟丙基甲基纤维素溶液 适量
低取代羟丙基纤维素 8g
硬脂酸镁 3g
制备工艺同实施例 4。
实施例 7 胶囊
处方 瑞舒伐他汀锌 1.5g
肝素钠 25g
预胶化淀粉 60g
微晶纤维素 100g
6％ PVP 的 95％乙醇溶液 适量
硬脂酸镁 3g
制备工艺 ： 将处方中的瑞舒伐他汀锌、 肝素钠、 预胶化淀粉、 微晶纤维素和硬脂酸 镁分别过 100 目筛， 混匀， 加 6％ PVP 的 95％乙醇溶液适量制粒， 40℃烘干， 18 目筛整粒， 胶 囊充填即可。
实施例 8 分散片
处方 瑞舒伐他汀钙 20g
肝素钠 5g
交联聚乙烯吡咯烷酮 7g
5％ PVP K30 无水乙醇溶液 适量
微晶纤维素 110g
硬脂酸镁 2g
制备工艺 ： 瑞舒伐他汀钙和肝素钠过 100 目筛， 交联聚乙烯吡咯烷酮过 80 目筛， 称 取处方量的瑞舒伐他汀钙、 肝素钠和交联聚乙烯吡咯烷酮混合均匀， 加入 5％ PVPK30 无水乙 醇溶液适量制粒， 干燥后加入处方量微晶纤维素、 硬脂酸镁混匀， 压片即得。
实施例 9 片剂
瑞舒伐他汀钙 40g
低分子肝素钙 1g
微晶纤维素 120g
2％羟丙基甲基纤维素溶液 适量
低取代羟丙基纤维素 8g
硬脂酸镁 2g
制备工艺 ： 瑞舒伐他汀钙和低分子肝素钙过 100 目筛， 微晶纤维素和低取代羟丙 基纤维素过 80 目筛， 称取处方量的瑞舒伐他汀钙、 低分子肝素钙与低取代羟丙基纤维素、 微晶纤维素混合均匀， 加入 2％羟丙基甲基纤维素溶液适量制粒， 60℃干燥， 16 目筛整粒， 干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁混匀， 压片即得。
实施例 10 胶囊
处方 瑞舒伐他汀钙 1g
低分子肝素钠 33g
预胶化淀粉 60g
微晶纤维素 100g
6％ PVP 的 95％乙醇溶液 适量
硬脂酸镁 3g
制备工艺 ： 将处方中的瑞舒伐他汀钙、 低分子肝素钠、 预胶化淀粉、 微晶纤维素和 硬脂酸镁分别过 100 目筛， 混匀， 加 6％ PVP 的 95％乙醇溶液适量制粒， 60℃烘干， 18 目筛整 粒， 胶囊充填即可。
实施例 11 胶囊
处方 瑞舒伐他汀钙 10g
低分子肝素钠 10g
预胶化淀粉 100g15处方101991597 A CN 101991599
说明书100g 适量 3g14/14 页微晶纤维素 6％ PVP 的 95％乙醇溶液 硬脂酸镁 制备工艺同实施例 10。 实施例 12 胶囊 处方 瑞舒伐他汀钙 低分子肝素钠 预胶化淀粉 微晶纤维素 6％ PVP 的 95％乙醇溶液 硬脂酸镁 制备工艺同实施例 10。 实施例 13 分散片 处方 瑞舒伐他汀钙 低分子肝素钙32g 8g 60g 100g 适量 3g2g 20g交联聚乙烯吡咯烷酮 7g
微晶纤维素 110g
5％ PVPK30 无水乙醇溶液 适量
硬脂酸镁 2g
制备工艺 ： 瑞舒伐他汀钙和低分子肝素钙过 100 目筛， 交联聚乙烯吡咯烷酮过 80 目筛， 称取处方量的瑞舒伐他汀钙、 低分子肝素钙和交联聚乙烯吡咯烷酮混合均匀， 加入 5％ PVPK30 无水乙醇溶液适量制粒， 干燥后加入处方量微晶纤维素、 硬脂酸镁混匀， 压片即 得。
实施例 14 缓释片
处方 瑞舒伐他汀钙 32g
低分子肝素钠 4g
羟丙基甲基纤维素钠 40g
微晶纤维素 100g
硬脂酸镁 2g
制备工艺 ： 将处方量的瑞舒伐他汀钙、 低分子肝素钠、 羟丙基甲基纤维素钠、 微晶 纤维素混匀， 按照常规工艺制粒， 干燥， 整粒， 加硬脂酸镁混匀， 压片即得。16