一种基于浙江缙云天然沸石紧急救生止血剂的制备方法.pdf

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1、10申请公布号CN102000111A43申请公布日20110406CN102000111ACN102000111A21申请号201010550867622申请日20101223A61K33/26200601A61K33/00200601A61P7/04200601A61K33/24200601A61K33/0820060171申请人范杰地址310013浙江省杭州市求是新村45207室72发明人范杰李云龙李辉74专利代理机构杭州中成专利事务所有限公司33212代理人唐银益54发明名称一种基于浙江缙云天然沸石紧急救生止血剂的制备方法57摘要本发明公开了一种基于浙江缙云天然沸石紧急救生止血剂的制备。

2、方法，选择浙江省缙云天然斜发沸石、天然丝光沸石为原料，主要成分为氧化硅、氧化钛、氧化铝、氧化铁、氧化镁、氧化钙、氧化钠、和氧化钾等。本发明可以用于不同的医用场合止血，与其他医用材料、医疗器械组合，可制成创可贴、输液贴、自粘敷料、急救包等，同时利用其微孔的特点可吸附抗菌素和止痛药等于其中，还可以作为药物传输载体；利用其离子交换特性可以负载其他离子，从而得到更好的疗效。本发明的浙江缙云天然沸石止血剂止血速度快、低放热、无菌、无热原、无细胞毒性、无致敏反应、无皮肤刺激性、无还原物质、无酸碱刺激性、可萃取重金属极低、使用方便且成本低。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要。

3、求书1页说明书8页附图5页CN102000121A1/1页21一种基于浙江缙云天然沸石紧急救生止血剂的制备方法，其特征是所述的浙江缙云天然沸石紧急救生止血剂为选取浙江缙云天然沸石为原料，经过改性加工制备得到止血剂，所述的浙江缙云天然沸石包括浙江缙云天然丝光沸石或天然斜发沸石或两者的混合物，所述的浙江缙云天然沸石组成包括氧化硅、氧化钛、氧化铝、氧化铁、氧化镁、氧化钙、氧化钠和氧化钾，其中氧化硅和氧化铝的总含量超过70；其具体制备步骤如下（1）沸石成粒将块状浙江缙云天然沸石通过中药粉碎机粉碎成不同尺寸的颗粒，通过滤筛得到不同粒径（1微米1毫米）的浙江缙云天然沸石颗粒；（2）将粉碎后的浙江缙云天然沸。

4、石通过去离子水洗涤3次；（3）将浙江缙云天然沸石进行CA离子交换，得到CA离子交换后的浙江缙云天然沸石；（5）将CA离子交换后的浙江缙云天然沸石在200500OC温度下杀菌处理124小时，得到改性后的无菌浙江缙云天然沸石紧急救生止血剂。2根据权利要1所述的浙江缙云天然沸石紧急救生止血剂的制备方法，其特征是所述的去离子水洗涤3次是将浙江缙云天然沸石颗粒与去离子水按1G/10ML的固液比混合搅拌，10MIN后过滤，重复三次，得到洗涤后的浙江缙云天然沸石颗粒。3根据权利要求1所述的浙江缙云天然沸石止血剂的制备方法，其特征是所述的CA离子交换是将洗涤后的浙江缙云天然沸石与浓度为0150MOL/L的CA。

5、CL2溶液，按1G/20ML的固液比混合，室温反应24H，用去离子水洗涤三次,120OC烘干后得到离子交换后的浙江缙云天然沸石。权利要求书CN102000111ACN102000121A1/8页3一种基于浙江缙云天然沸石紧急救生止血剂的制备方法技术领域0001本发明涉及一种紧急救生止血剂的制备方法，特别涉及一种用于治疗常规止血措施无法控制的致命性大血管出血的浙江缙云天然沸石止血剂的制备方法。0002背景技术0003紧急救生止血剂在国际上是一个新兴的研究领域。紧急救生止血剂主要针对外伤中血流不止的紧急情况而开发的。在很短的时间内（3分钟）就能控制住像主动脉流血这样的紧急情况，为进一步的医疗救治赢。

6、得宝贵的时间。0004根据2002年的卫生部统计，引起人死亡的十大因素中，创伤和中毒排名第五，每年因此而丧生的人数高达950万。失血过多是导致创伤死亡的最大因素，大约67的人死于无法控制的失血。造成创伤的主要原因主要有三个1）战争。2003年3月2008年3月，伊拉克战争造成60万的伊拉克平民和4000美国士兵死亡。根据统计，死去的人有一半是在抵达医疗点之前因失血过多而亡。多次战争死伤数据统计也揭示3060的死亡源于失血过多。战伤救治研究表明，如果伤员在伤后13小时以得到救治，出血得到有效控制，那么阵亡与伤死率将大大降低，战伤救治水平将大大提高。初期的紧急救生止血剂（如QUIKCLOT）主要用。

7、于军用，针对诸如主动脉出血等紧急情况使用。在战场上使用的LSRHA材料QUIKCLOT已经拯救了上百名美军士兵的性命，成为美军海军陆战队官兵必备的战斗辅助装备。2）交通事故这是全球年轻人（低于25岁）和我国民众意外死亡的主要原因。2007年的世界卫生组织报告指出，每年有40万以上不到25岁的年轻人死于交通事故。我国2001年道路交通事故死亡10万6千多人，占全国各类事故死亡总人数的78。更值得注意的是我国道路交通事故致死率十年（19932002年）来的平均值高达255，而美国为13，日本为09，加拿大为15。造成我国汽车事故致死率居高不下的一个主要原因是我国的道路交通和车辆本身的事故应急救生机。

8、制不建全。交通事故发生后受伤者不能迅速得到救治，以致许多人因失血过多而死亡。据统计，绝大部分意外事故中，导致受伤者死亡的直接原因不是事故本身造成的伤害，而是失血过多。85的交通死亡发生在30分钟内。在这宝贵的30分钟，受伤人员如能得到救治，创伤出血情况能得到有效控制，交通事故致死率将大大下降。3）重大自然灾害。像地震、海啸和强热带风暴等自然灾害可以在短时间内造成大量的人员伤亡。今年5月12日四川汶川80级大地震截至5月22日10时已经造成51151人死亡，288431人受伤。地震后抢救伤员分六个急救步骤，分别为止血、固定、包扎、通气、搬运和基础生命支持。其中止血是首先步骤，是抢救生命的关键。目。

9、前为止，国内用于中、重度出血的紧急救生止血剂产品极少，常用的止血剂有止血带、纱布和云南白药，它们对于中、重度出血的快速止血作用有限。000520世纪80年代FRANCISXHURSEY无意发现了沸石分子筛具有优良的止血作用并于1989年申请了专利。2002年初，ZMEDICA公司成立，专门开发生产商品名为QUIKCLOT的新型止血材料，该材料是以75的合成沸石（A型沸石，LTA结构）为基底和25的粘土作为说明书CN102000111ACN102000121A2/8页4粘合剂混合而成的复合型沸石止血材料，目前使用沸石分子筛材料为主体的新型止血材料QUIKCLOT已经获得美国FDA批准上市，无论在。

10、实验室还是在实践中（尤其在野战战场），其止血效果及提高存活率两方面都优于传统止血材料。目前人们普遍认为其机理主要是依赖分子筛材料超强的吸附能力，可在数秒内吸干伤口流出血液中的水分，而不吸收红细胞、血小板、和其他凝血因子，因而使凝血因子浓缩并立即发挥止血作用，同时由于QUIKCLOT在血液中其表面带有负电荷，因而激发了内源性凝血通道，从而加速凝血过程，达到快速止血的目的。由于QUIKCLOT不具备物理及化学活性，因而不会引起任何过敏反应，也不会引起伤口感染，使用非常安全。美国在阿富汗和伊拉克的军事行动中都使用了QUIKCLOT，效果令人非常满意。更重要的是由于使用方便，效果远优于传统止血产品，Q。

11、UIKCLOT正在进入普通家庭，其市场前景十分光明。0006但是QUIKCLOT在凝血过程中会给伤者带来较大的副作用，主要是由于QUIKCLOT在与血液接触时会释放大量的热量，以致烧伤肌肉组织。研究者发现在通过交换银离子之后热量得到较大幅度的降低，同时抗菌能力也大幅提高，但是通过交换银离子之后QUIKCLOT的止血性能却有较大幅度的降低。因此研究人员不得不寻求其他途径以降低QUIKCLOT的热效应。0007由于浙江缙云天然沸石与传统分子筛一样，遇血可迅速吸收、溶胀，经物理、化学、生物等作用不仅可以做到只吸收水分而不吸收凝血因子，达到富集后者的目的，从而促进凝血因子活化并粘附血小板，同时浙江缙云。

12、天然沸石在血液中其表面也带有负电荷，因而激发了内源性凝血通道，从而加速凝血过程，促进血栓形成，达到快速止血的目的。同时在某些方面具有更为优越的性质，以确保其可以成为新型止血材料的研究。因为与QUIKCLOT相比浙江缙云天然沸石放热量少、自然界含量丰富；QUIKCLOT的价格为150元/包（100克），缙云浙江缙云天然沸石矿下山价不到002元/100克，有明显的价格优势。而且浙江缙云天然沸石的离子交换能力强，通过交换钙离子可以增强材料的凝血性能。0008研究表明，浙江缙云天然沸石止血剂具有止血速度快、无菌、无热原、无细胞毒性、无致敏反应、无皮肤刺激性等特点，并且使用方便、成本低，具有良好的市场应。

13、用前景。目前为止，未见有将浙江缙云天然沸石应用于凝血材料、伤口处理和外创修复以及浙江缙云天然沸石与医用绷带、医用黏合剂等不同形式结合，用于外创修复的国内外专利文件报道。0009发明内容0010本发明的目的在于提出一种新型的浙江缙云天然沸石止血剂的制备方法。0011本发明提出了一种以浙江缙云天然沸石为原料制备紧急救生止血剂的工艺，本发明实验中所选择的原料是浙江缙云天然沸石，所述的浙江缙云天然沸石包括浙江缙云天然丝光沸石或天然斜发沸石或两者的混合物。浙江缙云天然沸石的主要成分为氧化硅、氧化钛、氧化铝、氧化铁、氧化镁、氧化钙、氧化钠、和氧化钾等。其中氧化硅和氧化铝的总含量超过70。本发明中是将浙江缙。

14、云天然沸石通过中药粉碎机粉碎成一定粒径，同时本发明在浙江缙云天然沸石的基础上作了相应的改进，从而得到富含钙离子的改性浙江缙云天然沸石，得到了具有高效止血功能的沸石材料。因此，可以用于不同的医用场合止血，与其他医用材料、医疗器械组合，可制成创可贴、输液贴、自粘敷料、片剂和胶囊芯料、手术包、急救包说明书CN102000111ACN102000121A3/8页5等，同时利用其微孔的特点可吸附抗菌素和止痛药等于其中，还可以作为药物传输载体；利用其离子交换特性可以负载其他离子，从而得到更好的疗效。本发明的浙江缙云天然沸石止血剂止血速度快、低放热、无菌、无热原、无细胞毒性、无致敏反应、无皮肤刺激性、使用方。

15、便且成本低。0012浙江缙云天然沸石紧急救生止血剂制备步骤如下（1）沸石成粒将块状浙江缙云天然沸石通过中药粉碎机粉碎成不同尺寸的颗粒，通过滤筛得到不同粒径（1微米1毫米）的浙江缙云天然沸石颗粒；（2）将粉碎后的浙江缙云天然沸石通过去离子水洗涤3次；（3）将浙江缙云天然沸石进行CA离子交换，得到CA离子交换后的浙江缙云天然沸石；（5）将CA离子交换后的浙江缙云天然沸石在200500OC温度下杀菌处理124小时，得到改性后的无菌浙江缙云天然沸石紧急救生止血剂。0013本发明所述的去离子水洗涤3次是将浙江缙云天然沸石颗粒与去离子水按1G/10ML的固液比混合搅拌，10MIN后过滤，重复三次，得到洗涤。

16、后的浙江缙云天然沸石颗粒。0014本发明所述的CA离子交换是将洗涤后的浙江缙云天然沸石与浓度为0150MOL/L的CACL2溶液，按1G/20ML的固液比混合，室温反应24H，用去离子水洗涤三次,120OC烘干后得到离子交换后的浙江缙云天然沸石。0015本发明具有如下优点1、操作简单易行，原料丰富，廉价易得，应用方便，止血效果好，低放热。00162、浙江缙云天然沸石其吸水放热反应所产生的热量，因此对机体热损伤副作用小。00173、浙江缙云天然沸石经过加载钙离子之后其止血性能得到明显的提高。00184、浙江缙云天然沸石特有的孔性质，可吸附一些抗菌素或止痛药等，有助于伤口的治疗。本材料能与多种止血。

17、材料混合使用，如蒙脱土、石膏、花蕊石等。并能在一定程度上减少吸水反应产生的热量，同时减少凝血时间。本材料还可以用于不同医用场合的止血，与其他医用材料、医疗器械组合，可制成创可贴、输液贴、自粘敷料、片剂和胶囊芯料、手术包急救包等；本材料还可以作为多种药物片剂、散剂的添加剂，起缓释与控释作用。00195、本发明的浙江缙云天然沸石止血剂具有止血速度快、低放热、无菌、无热原、无细胞毒性、无致敏反应、无皮肤刺激性、无还原物质、无酸碱刺激性、可萃取重金属极低、使用方便且成本低等优点。0020附图说明0021图1为本发明中所涉及的天然斜发沸石止血材料的XRD谱图。0022图2为本发明所涉及的天然丝光沸石原矿。

18、石及分别经过700焙烧、1MOL/LNH4CL铵化、6MOL/LHCL酸处理的天然丝光沸石的XRD图谱。0023图3为浙江缙云天然斜发沸石的扫描电镜图。0024图4为浙江缙云天然丝光沸石的扫描电镜图。0025图5为天然斜发沸石、丝光沸石止血材料与其他止血材料的凝血时间测定结果，说明书CN102000111ACN102000121A4/8页6其中空白对照组为没有用止血材料的情况，对照组使用商业化止血剂QUIKCLOT以及合成丝光沸石，实验组为用本实验组开发的止血材料（误差线为016）。0026图6为本发明中水洗、改性的天然斜发沸石的凝血时间图（误差线015）。0027图7本发明中所述的天然丝光沸。

19、石的放热效应图，其中QUIKCLOT、速效止血粉为对照材料（误差线为三次实验结果得到）。0028图8为本发明中天然斜发沸石的浸提液的细胞毒性图（曲线由3组数据的平均值得到）。0029具体实施方式0030下面通过实施例进一步描述本发明。0031实施例1本发明选择浙江缙云天然沸石作为原料，浙江缙云天然斜发沸石的XRD图谱见附图1，扫描电镜图见图3；缙云天然丝光沸石的原粉、以及酸处理、焙烧、铵化后的XRD图见附图2，扫描电镜图见附图4。0032将一定量的缙云天然沸石放入中药粉碎机中，粉碎时间约5MIN；粉碎后的得到的颗粒粒径在1微米1毫米。将上述粉碎后的天然沸石于100烘箱中干燥1H。其止血效果与Q。

20、UIKCLOT相近，见附图5。0033实施例2将改型后的钠型天然沸石与浓度为10MOL/L的CACL2按1G/20ML的固液比混合，室温反应24H，用去离子水洗涤至溶液内无CA2，并于100烘箱中干燥24H得到改性的富含钙的天然斜发沸石。其止血效果见附图6。0034实施例3取50G天然沸石与一定量的水混合搅拌1H，然后抽滤、洗涤，100干燥24H。得到水洗后的天然丝光沸石、天然斜发沸石，其中水溶性成分减少，磁性物质亦减少。其止血效果与QUIKCLOT相近，见附图6。0035实施例4首先在室温下将190G氢氧化钠（NAOH）溶解于4G去离子水中，搅拌，待NAOH溶解后加入143G铝酸钠（NAAL。

21、O2）,待铝酸钠溶解后加入645G去离子水，搅拌30MIN，最后加入982GSIO2,继续搅拌1H。混合液转移到水热釜中在170水热24H，过滤洗涤，在100烘箱中干燥24H后得到合成的丝光沸石。其止血效果见附图5。0036实施例5取玻璃试管一只，加入10G本发明所述的天然沸石，然后再加入10ML水，摇匀，用温度计测定温度变化，通过温度变化反映出天然沸石止血时的热效应。其温度变化远小于QUIKCLOT以及国内商业化产品速效止血粉，说明天然沸石放热量非常少，见附图7。0037实施例6取适量的本发明所述的天然沸石于干燥箱中100处理1H，同时取出一定量的猪全血（取自杭州肉联厂）于2500恒温水浴箱。

22、中恒温，待猪全血温度稳定后开始凝血实验；取试管一只，加入40LCACL2溶液，然后再加入100MG本发明所述的天然沸石，最后加入2ML猪说明书CN102000111ACN102000121A5/8页7全血，用手甩匀，同时开始计时，在预先校正了转速、角度的静音混合器上测定凝血时间。0038实施例7天然斜发沸石还原性物质测定将浙江缙云天然斜发沸石与去离子水以1/10的比例浸提，然后取10ML浸提液用0002MOL/L的高锰酸钾溶液滴定，对照实验取10ML去离子水用0002MOL/L的高锰酸钾溶液滴定,高锰酸钾溶液消耗量之差05ML。0039实施例8天然斜发沸石浸提液PH测定将浙江缙云天然斜发沸石与。

23、去离子水以1/10的比例浸提，然后取20ML浸提液测量PH，PH值范围为7505。0040实施例9可浸提的重金属元素测定将浙江缙云天然斜发沸石与去离子水以1/10的比例浸提，然后取20ML浸提液测量浸提液，用ICPAAS测量浸提液内PB、CD、NI等金属元素的含量。结果如下表所示,所测金属总含量小于1MG/L。0041实施例10生物相容性测试1全身毒性试验按照ASTMF750872002、ASTMF61903、ASTMF74804以及GB/T1688611规定的试验方法测定。0042将浙江大学附属第一医院卫生部多器官联合移植研究重点实验室动物实验室提供的ICR小鼠（雌雄各十只，体重1922G）。

24、分成实验组和对照组各十只（雌雄各五只）。将本发明的浙江缙云天然沸石止血剂用生理盐水按15比例浸提3天，浸提液过滤，随后将浸提液直接注入待测动物体内，连续注射三天，观察7天内动物体重变化，并与对照组（注射生理盐水）比较。0043结果表明，受测动物均无死亡。半小时内动物无明显的异常反应，如明显的毛松、蹦跳等。在连续观察的七天内，所有动物健存、体重增加，并且体重增加无明显差异。可见，本发明的浙江缙云天然沸石止血剂无毒性。00442皮肤刺激性实验按照GB/T1688610中规定进行测试。0045实验试剂35甲醛溶液，用于阳性对照；75酒精棉球；生理盐水，用于阴性对照；白凡士林。0046实验动物健康成年。

25、家兔，浙江大学附属第一医院卫生部多器官联合移植研究重点实验室动物实验室提供。0047实验前，将动物背部脊柱两侧各选面积为46CM2的区域，除去被毛。将本发明的浙江缙云天然沸石止血剂与凡士林按13的比例配制，均匀涂在兔暴露的皮肤上（左右各选三只），立即用四层44CM的纱布覆盖。阳性对照组与阴性对照组也在脊柱左右两侧各选三只家兔，先用75的酒精棉球涂抹，皮肤润湿后将3ML35甲醛溶液或者生理盐水涂说明书CN102000111ACN102000121A6/8页8抹在暴露的皮肤上，再用纱布覆盖。最后左右两侧都用无刺激性医用胶布及纱布缠绕兔背腹三周加以固定。4小时后除去覆盖纱布，用75酒精棉球清洗覆盖部。

26、位皮肤，并用纱布吸干。0048按照下表的计分标准（表2），在移去纱布24H、48H、及72H后观察记录纱布部位皮肤反应分数，并计算每只动物对材料的原发刺激指数（PII）及平均原发刺激指数（APII）。0049表2皮肤反应记分标准原发刺激指数（PII）为皮肤在24H、48H、及72H红斑水肿的总分除以观察的总数所得的值。0050平均原发刺激指数（APII）为实验所有动物的原发刺激指数（PII）的总和除以动物的总数所得的值。0051反应结果记分三组材料均测试六次，分别在家兔脊椎左右两侧各三次。0052表3皮肤刺激实验评分每只动物对材料的原发刺激指数（PII）约为0平均原发刺激指数（APII）约为0。

27、可见本发明的浙江缙云天然沸石止血剂对皮肤没有刺激性作用。00533细胞毒性作用细胞系及培养基使用细胞系为IT3细胞，实验细胞为48H72H生长旺盛的细胞。培养基为DMEM加入10（V/V）胎牛血清。PH7274。0054实验试剂浙江缙云天然沸石说明书CN102000111ACN102000121A7/8页9阳性对照06的苯酚溶液，将苯酚溶于含有血清的DMEM培养基制得。0055阴性对照含10胎牛血清的新鲜无菌DMEM培养基。00565MG/MLMTT液。0057二甲亚砜（DMSO）。0058所有试剂均为无菌状态。0059浸提液的制备将1G本发明的浙江缙云天然沸石加10ML含10胎牛血清的新鲜无。

28、菌DMEM培养基于37浸提24H。0060试验在1块96孔板上进行。初始培养液的细胞密度约为5万个/ML，每孔中加入200UL，使每孔中细胞个数约为800010000个。每个孔重复三次，于5（V/V）二氧化碳空气的37恒温培养箱内培养24H。006124H后弃去原培养基。阴性对照组加200UL的含10胎牛血清的新鲜无菌DMEM培养基，实验组和阳性对照组分别再加20、40、60、120、160、200UL浸提液和阳性对照液，再加入阴性对照液使每孔中溶液体积为200UL。放入上述环境中再培养24H。0062取出培养板，弃去培养板里的溶液，每孔加入20UL的MTT溶液，继续培养6H，然后吸去原液，加。

29、入150UL二甲亚砜，震荡十分钟，在免疫酶标仪上570NM波长测定吸光度值。按下面公式计算细胞的相对增殖度（RELATIVEGROWTHRATE，RGR），并按下表进行细胞毒性的结果评价。0063RGR实验组平均吸光度值/阴性对照组平均吸光度值表4实验结果为0和1级为合格实验结果为2级，应结合细胞形态分析，综合评价。0064实验结果为35级为不合格。0065MTT法实验结果见附图8。0066由实验结果可知，本发明的浙江缙云天然沸石止血剂在DMEM培养基中的成分对细胞的生长没有明显的抑制作用，因此，本发明的浙江缙云天然沸石止血剂无细胞毒性作用。00674热源实验照中华人民共和国药典200年版第二。

30、部，内毒素检查法进行测试。0068取本发明浙江缙云天然沸石止血剂与生理盐水以15的比例混合在37恒温水浴箱中，保温一天。取浸提液。分为阳性对照、阴性对照、实验组三组，实验组中加入01ML说明书CN102000111ACN102000121A8/8页10沸石浸提液，阴性对照组加01ML生理盐水，阳性对照组加入01ML01EU/ML内毒素溶液，然后加入01ML鲎试剂，375水浴中恒温一段时间，然后加入显色剂再在375水浴中恒温一段时间。然后依次加入偶氮试剂1、2、3，最后在545NM处测定吸光度或者直接观察颜色深浅。0069结果显示加入01ML01EU/ML的阳性对照组成棕红色，阴性对照组和实验组均接近无色，可见本发明所述的浙江缙云天然沸石止血剂经鲎试剂法检测合格，无热原。说明书CN102000111ACN102000121A1/5页11图1说明书附图CN102000111ACN102000121A2/5页12图2图3说明书附图CN102000111ACN102000121A3/5页13图4图5说明书附图CN102000111ACN102000121A4/5页14图6图7说明书附图CN102000111ACN102000121A5/5页15图8说明书附图CN102000111A。