催产素的抑制剂与促进剂.pdf

本发明利用N端氨基酶CD13/APN的特异性抑制剂对催产素降解的阻断作用，提供了一类新型作用机理的对抗催产素降解的药物，可作为流产促进剂；反之，CD13/APN用于降解催产素的内源性生物药物，可作为流产抑制剂，从而预防或治疗自然流产的发生。

1.  N端氨基酶CD13/APN的特异性抑制剂在制备阻断催产素降解的药物的应用和CD13/APN用于降解催产素的内源性生物药物的应用。

2.  权利要求1所述的N端氨基酶CD13/APN的特异性抗体抑制剂是抗体F23。

3.  权利要求1所述的N端氨基酶CD13/APN的外源特异性抑制剂是Actinonin、Amastatin、Bestatin和Probestin。

4.  权利要求1所述的N端氨基酶CD13/APN的内源特异性抑制剂是P物质、舒缓激肽。

5.  权利要求1所述的用于降解催产素的内源性生物药物是N端氨基酶CD13/APN。

6.  权利要求1所述的N端氨基酶CD13/APN的特异性抑制剂和N端氨基酶CD13/APN在动物药物流产中和保胎治疗中的应用。

催产素的抑制剂与促进剂
技术领域
本发明涉及催产素的抑制剂与促进剂，具体涉及CD13/APN的特异性抑制剂在制备阻断催产素降解的药物的应用和CD13/APN用于降解催产素的内源性生物药物的应用。
背景技术
流产是指妊娠不到28周，胎儿体重不足1000克而中止者。当自然流产连续发生3次以上时则称为“习惯性流产”。根据统计，其实人类的妊娠大约有70％是不成功的，其中50％左右的受精卵在下次月经来潮之前就发生了所谓的“临床前流产”。这种流产可能仅仅被认为是一次血量偏多的正常月经或延期月经，仅有20％左右的自然流产会被患者感觉到或被医生确诊出来。真正能够发育成熟的正常分娩者仅占人类妊娠的1/4左右，由此可见，人类流产的发生率相当高。
奶牛的流产发生率一般为10％左右。根据流产的原因，流产分为传染性流产和非传染性流产两大类。大多数流产属于非传染性流产。非传染性流产根据流产的原因可分为：营养性流产、中毒性流产、损伤性流产、药物性流产、症状性流产。根据流产胎儿的月龄及变化，流产一般分以下几种类型：隐性流产、小产、干胎、死胎、胎儿浸溶、胎儿腐败。
催产素(Oxytocin)止孕的机理主要在于诱发、促进子宫收缩。催产素与流产有关，但催产素的半衰期只有1.5～2分钟；催产素由于半衰期短，故不是一种比较理想的终止早孕的药物(参见文献Neuroendocrinology in Physiology and Medicine by P.MichaelConn，Marc E.Freeman；1999，Page179)。米非司酮和前列腺素类药物流产的机理也主要在于诱发宫缩。催产素由于其半衰期短，故不是一种比较理想的终止早孕的药物。
N端氨基酶(Aminopeptidase N，简称为APN)，又称为CD13(本文以下称为CD13/APN)。主要分布于肺、肠、肾、子宫的上皮/内膜细胞、纤维母细胞及中性粒细胞(参见文献XuY et al.Antitumor activity of actinonin in vitro and in vivo.Clin Cancer Res1998；4：171-176)。
F23是抗CD13/APN单克隆抗体(鼠源性)，已知F23作用于CD13/APN活性点。CD13/APN主要是通过其N端酶学功能来调控某些活性信号蛋白，它可以灭活或激活某种多肽或蛋白，70％的白血病细胞表达这种CD13/APN。曾有人用F23作为抗肿瘤剂，如用于治疗白血病等(参见文献Xu Y，Scheinberg DA.，Elimination of human leukemia by monoclonalantibodies in an athymic nude mouse leukemia model.Clin Cancer Res1995；1：1179-1187)。
已有人发现，某些外源性小分子化合物也可作为CD13/APN抑制剂(参见文献Xu Y，Wellner D，Scheinberg DA.Cryptic and regulatory epitopes in CD13/aminopeptidaseN.Exp Hematol 1997；25：521-529)。这些小分子化合物包括商品名为Actinonin、Amastatin、Bestatin和Probestin等的药物。
目前已知一些体内自然物质包含P物质(Substance P)、舒缓激肽(Bradykinin)也是CD13/APN的内源性或自然性特异性抑制剂(参见文献Xu Y et al.Substance P andbradykinin are natural inhibitors of CD13/aminopeptidase N.Biochem Biophy ResCommun 1995；208：664-674)。但未见用CD13/APN的特异性抑制剂在制备阻断催产素降解的药物和将CD13/APN用于降解催产素的内源性生物药物的报道。
发明内容
本发明的目的是利用CD13/APN的特异性抑制剂对催产素降解的阻断作用，提供一类新型作用机理的动物流产促进剂；并且利用CD13/APN对催产素降解作用从而提供一类新型的动物流产抑制剂。
本发明的技术方案是：
(1)选择可与CD13/APN特异性结合的抑制剂，从而阻断催产素降解，以产生人工流产；
(2)由于体内催产素的半衰期只用1.5～2分钟，这样通过静脉注射CD13/APN或局部应用CD13/APN就可能很快地将催产素降解并预防催产素在血中的浓度升高，即可以预防流产的发生。
所述可与CD13/APN特异性结合的抑制剂包括F23、Actinonin、Amastatin、Bestatin和Probestin等外源性小分子化合物以及Substance P and bradykinin等内源性小分子化合物。以上所述这些药物可称之为CD13/APN特异性抑制剂。
上述外源性小分子化合物的化学名称是：
Actinonin：(3-[[1-[(2-(Hydroxymethyl)-1-pyrrolidinyl)carbonyl]-2-methylpropyl]carbamoyl]octanohydroxamic acid)
Amastatin：((2S，3R)-3-Amino-2-hydroxy-5-methylhexanoyl-Val-Val-Asphydrochloride)
Bestatin：(N-[(2S，3R)-3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutyryl]-L-leucinehydrochloride)
上述内源性小分子化合物的化学名称是：
Substance P(P物质)：Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH₂
Bradykinin(舒缓激肽)：Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-NH₂
本发明进行了如下实验：先将F23单抗及本发明所述的小分子化合物分别加入HL60(CD13/APN阳性人类细胞株)细胞培养液中，然后加入催产素，发现本发明提供的这些CD13/APN抑制剂能有效地保护催产素不受降解。
反之，如果先将催产素加入HL60细胞株中，然后再加入F23单抗，则F23与HL60的结合率减少了91～93％。本发明提示催产素与F23是同一结合点。
以上实验证实：
1.CD13/APN是催产素降解的酶。当CD13/APN进入体内后，可降低催产素浓度，从而防止流产，可作为流产抑制剂的药物。
2.小分子化合物(CD13/APN酶抑制剂)及催产素的结合点与F23是同一位点，均可结合至CD13/APN。
3.F23和CD13/APN酶抑制剂都能阻断CD13/APN对催产素的降解，使催产素半衰期延长，可作为流产促进剂的药物。
本发明提供的CD13/APN抑制剂能有效阻断催产素的降解，从而提高其血液及局部的浓度。本发明提供的CD13/APN可作降解催产素的酶，可为一类新型的预防或治疗流产的内源性生物药物。
具体实施方式
名词介绍：
HL60：CD13/APN阳性人类细胞株，CD33也为阳性。CD33是一种人类细胞表面受体，分子量67000Da，分布于70％白血病细胞，在本发明实验中CD33作为CD13/APN的对照受体。
RAJI：CD13/APN阴性人类细胞株。
F23：抗CD13/APN单克隆抗体(鼠源性)。
M195：抗CD33单克隆抗体(鼠源性)。
Actinonin：CD13/APN活性抑制剂，与F23竞争CD13/APN活性点(参见文献Xu Y，Wellner D，Scheinberg DA.Cryptic and regulatory epitopes in CD13/aminopeptidaseN.Exp Hematol 1997；25：521-9)。
GAM-FITC：羊抗鼠荧光抗体，用于检测鼠抗体的含量，常用于流式细胞检测法中。
实验材料来源：
HL60、RAJI购买于美国ATCC组织；
M195、F23、CD13/APN、GAM-FITC由SCHEINBERG赠送；
催产素、CD13/APN酶抑制剂购买于美国Sigma公司。
实施例1F23和Actinonin、Substance P、Bradykinin阻断CD13/APN阳性细胞株降解催产素
1.实验方法
将F23，Actinonin、Substance P、Bradykinin及M195分别加入HL60细胞培养液(RPMI)中30～60分钟，然后加入催产素(100nM)，5分钟后检测催产素浓度。
2.实验结果
表1人类CD13/APN阳性细胞株对催产素浓度影响的实验