复方土霉素滴眼液.pdf

本发明提供了一种滴眼液，其中包含土霉素和中药组合物，二者的重量比例为1-2:550。中药组合物包括金银花20份，黄连15份，决明子12份，鱼腥草8份。

权利要求书
1.  一种滴眼液，其中包含土霉素。

2.  一种滴眼液，其中包含土霉素和中药组合物。

3.  如权利要求2所述的一种滴眼液，其中包含土霉素和中药组合物，二者的重量比例为1-2:550。

4.  如权利要求2或3所述的一种滴眼液，其中中药组合物包括金银花20份，黄连15份，决明子12份，鱼腥草8份。

5.  如权利要求4所述的一种滴眼液，其制备方法包括如下步骤：
(1)按处方取中药原材料，洗净，备用；
(2)加中药原材料5-7倍量的水，将上述中药原材料煎煮3次，每次0.5-1.0小时，合并煎液，过滤，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.05-1.06，冷藏，过滤，备用；
(3)在步骤(2)制得的滤液中加入处方量的土霉素，搅拌均匀，调节pH为6.8-7.2，加入活性炭处理，过滤；
(4)加入适当甘露醇调成等渗溶液，0.20μm膜过滤除菌，即得滴眼液。

说明书复方土霉素滴眼液
技术领域
本发明涉及一种复方土霉素滴眼液，其中包括土霉素和中药组合物作为活性成分。
背景技术
目前用于治疗眼部感染疾病的药物有很多，主要有喹诺酮类、氨基糖苷类、激素类等，这些药物虽然在很大程度上缓解了患者临床用药的需要，但同时也存在很多问题，包括病程较长、费用昂贵、副反应大等。纯中药制剂例如鱼腥草滴眼液、板蓝根滴眼液具有清热解毒、消炎止痛的功效，但是起效慢、疗程长，也不能很好地应用于临床。
土霉素(氧四环素)是由芬利(A.C Finlay)等(1950)在放线菌的龟裂链丝菌(Streptomyces rimosus)的培养液中发现的广谱抗菌素。能抑制各种细菌、立克次体和衣原体的发育而广泛用于治疗。土霉素的作用机制为药物能特异性地与细菌核糖体30S亚基的A位置结合，抑制肽链的增长和影响细菌蛋白质的合成。现有的土霉素制剂包括片剂、胶囊、软膏、眼膏等。用于治疗痢疾、沙眼、结膜炎、肺炎、中耳炎、皮肤炎症等，亦用于治疗阿米巴肠炎及肠道感染。
现有技术中，尚未公开过土霉素和中药组合物的组合用作滴眼液的报道。
发明概述
本发明申请人意外地发现将土霉素和中药组合物以特定比例组合作为滴眼液使用，对于抗菌和治疗眼部炎症疾病具有协同作用。
本发明提供了一种滴眼液，其中包含土霉素。
本发明提供了一种滴眼液，其中包含土霉素和中药组合物。
本发明提供了一种滴眼液，其中包含土霉素和中药组合物，二者的重量比例为1-2:550。
本发明提供了一种滴眼液，其中中药组合物包括金银花20份，黄连15份，决明子12份，鱼腥草8份。
本发明提供了一种滴眼液，其制备方法包括如下步骤：
(1)按处方取中药原材料，洗净，备用；
(2)加中药原材料5-7倍量的水，将上述中药原材料煎煮3次，每次0.5-1.0小时，合并 煎液，过滤，滤液浓缩至200ml，冷藏，过滤，备用；
(3)在步骤(2)制得的滤液中加入处方量的土霉素，搅拌均匀，调节pH为6.8-7.2，加入活性炭处理，过滤；
(4)加入适当甘露醇调成等渗溶液，0.20μm膜过滤除菌，即得滴眼液。
除非特别指明，本发明所述剂量单位均为重量。
本发明经实验证实，只有特定比例的土霉素和中药组合物的组合物才具有协同抗菌和治疗眼部炎症疾病的作用。活性成分不同或者活性成分相同但用量不同均会降低治疗效果。
具体实施方式
实施例1
滴眼液处方： 
土霉素 100mg
金银花 20g，
黄连 15g，
决明子 12g，
鱼腥草 8g
蒸馏水 1050ml。
制备方法： 
(1)按处方取金银花、黄连、决明子和鱼腥草，洗净，备用；
(2)加350ml水煎煮上述中药原材料，煎煮3次，每次0.5小时，合并煎液，过滤，滤液浓缩至200ml，冷藏，备用；
(3)在步骤(2)制得的滤液中加入处方量的土霉素，搅拌均匀，调节pH为6.8-7.2，加入活性炭处理，过滤；
(5)加入适当甘露醇调成等渗溶液，0.20μm膜过滤除菌，即得滴眼液。
实施例2
滴眼液处方： 
土霉素 200mg
金银花 20g，
黄连 15g，
决明子 12g，
鱼腥草 8g
蒸馏水 1050ml。
制备方法同实施例1。
对比实施例1：
滴眼液处方： 
土霉素 200mg
蒸馏水 200ml。
制备方法：将处方量的土霉素溶于蒸馏水中，调节pH为6.8-7.2，加入适当甘露醇调成等渗溶液，0.20μm膜过滤除菌，即得滴眼液。
对比实施例2：
滴眼液处方： 
金银花 40g，
黄连 30g，
决明子 24g，
鱼腥草 16g
蒸馏水 1050ml。
制备方法同实施例1。
对比实施例3：
滴眼液处方： 
土霉素 500mg
金银花 20g，
黄连 15g，
决明子 12g，
鱼腥草 8g
蒸馏水 1050ml。
制备方法同实施例1。
对比实施例4：
滴眼液处方： 
土霉素 100mg
金银花 10g，
黄连 25g，
决明子 20g，
鱼腥草 5g
蒸馏水 1050ml。
制备方法同实施例1。
对比实施例5：
滴眼液处方： 
土霉素 100mg
菊花 20g，
大黄 15g，
决明子 12g，
冰片 8g
蒸馏水 1050ml。
制备方法同实施例1。
对比实施例6：
滴眼液处方： 
利福平 100mg
金银花 20g，
黄连 15g，
决明子 12g，
鱼腥草 8g
蒸馏水 1050ml。
制备方法同实施例1。
对比实施例7：
市售利福平滴眼液(广州东康药业有限公司)
说明：上述实施例和对比实施例变化情况汇总如下：
组别 变化情况 实施例1 土霉素和中药组合物的重量比例为1:550(土霉素100mg) 实施例2 土霉素和中药组合物的重量比例为2:550(土霉素200mg) 对比实施例1 仅包括土霉素200mg，无中药组合物 对比实施例2 仅包括中药组合物(用量翻倍)，无土霉素 对比实施例3 土霉素和中药组合物的重量比例为5:550(土霉素500mg) 对比实施例4 中药组合物中各成分用量改变 对比实施例5 中药组合物中成分改变 对比实施例6 土霉素变为利福平 对比实施例7 市售利福平滴眼液
抗菌效果试验 
1.体外实验
以卡他球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、芽孢杆菌、白色念珠菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌为试验菌，采用浊度法，考察抑菌剂的抑菌效果。
菌悬液的制备：卡他球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、芽孢杆菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌分别在无菌条件下接种至10ml营养肉汤培养基中，35℃，培养24h。菌悬液用无菌生理盐水稀释，使菌液浓度达106cfu/ml。白色念珠菌在无菌条件下接种至10ml改良马丁液体培养基中，25℃，培养48h。菌悬液用无菌生理盐水稀释，使菌液浓度达106cfu/ml。
供试液的配制：分别称取对羟基苯甲酸酯0.2g和称(量)取对羟基苯甲酸酯0.2g、苯乙醇5ml，溶于100ml营养肉汤培养基中，供卡他球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、芽孢杆菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌测试用。分别称取对羟基苯甲酸酯0.2g和称(量)取对羟基苯甲酸酯0.2g、苯乙醇5ml，溶于100ml改良马丁液体培养基中，供白色念珠菌试用。取10ml供试液至试管中，高压灭菌。每个测试菌设8管供试液，并设一组对照管。无菌条件下，每支试管添加菌悬液0.2ml。卡他球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、芽孢杆菌、肺炎克雷伯菌和 铜绿假单胞菌35℃，培养24h，白色念珠菌25℃，培养48h。观察试管中溶液是否澄清。
按照《中国药典2010年版二部》附录规定的抑菌剂效力检查法指导原则，对本发明供试液进行抑菌效力验证试验。
实验结果如下：
表1实施例1抑菌效力试验菌数下降lg值

表2实施例2抑菌效力试验菌数下降lg值

表3对比实施例1抑菌效力试验菌数下降lg值

表4对比实施例2抑菌效力试验菌数下降lg值

表5对比实施例3抑菌效力试验菌数下降lg值


表6对比实施例4抑菌效力试验菌数下降lg值

表7对比实施例5抑菌效力试验菌数下降lg值

表8实施例6抑菌效力试验菌数下降lg值

表9对比实施例7抑菌效力试验菌数下降lg值

从表1-表9的数据可知，本发明实施例1和实施例2包含土霉素和中药组合物的滴眼液抑菌效果最强，相对于单一组分、组分成分变化或者用量变化的组合(对比实施例1-7)均明显具有协同抑菌效果。
2.体内试验
将接种于普通琼脂培养基平板上的卡他球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和血琼脂培养 板的芽孢杆菌用接种环刮下，生理盐水分别配成2×1012CFU/L(光电比浊仪测定浓度)。按方法(肖毅，李晨，梅其炳，张峰，陈水英，马吉献.家兔眼损伤型细菌性角膜炎动物模型的建立.陕西医学杂志，2003；32(2):187-188)用角膜环钻致家兔角膜损伤(双眼)，家兔每眼感染细菌0.1mL，2d用无菌盐水棉签取眼睛分泌物，放入4mL无菌生理盐水瓶中，用琼脂平板培养法对其液体做细菌培养。同时进行炎症评分，0级:眼明亮无分泌物；0.5级:无分泌物覆盖，眼稍有红肿；1级:分泌物覆盖小于6mm；2级:分泌物覆盖充满6mm；3级:分泌物覆盖大于6mm。根据评分标准随机分组。治疗组(感染细菌+本发明滴眼液)，未治疗对照组(感染细菌+滴生理盐水)，各组6只家兔。正常对照组(不造模、不感染细菌、滴生理盐水)2只。治疗组滴本发明滴眼液0.8mL/d(双眼)，未治疗对照组和正常对照组滴生理盐水0.8mL/d(双眼)，每眼0.1mL，4次/d，连续点药7d。每隔24h双眼进行一次评分，连续观察7d，评分结果作统计学t检验处理。并于给药前1d，给药后1，3，5，7d用无菌盐水棉签取眼分泌物作细菌培养，判断阴阳性结果。d8处死家兔，取角膜放入40g/L甲醛中固定作病理切片，HE染色检查。
四种菌感染兔眼24h后出现炎性症状，轻者结膜红肿眼充血。重者全身状态欠佳伴结膜红肿充血，角膜水肿增厚，大量分泌物呈黄白色，将上下眼睑粘住，双眼紧闭。绿脓杆菌感染的兔眼分泌物微显黄绿色。芽孢杆菌感染炎症反应较重，持续7d以上。评分标准在1.5～3级。细菌培养结果:给药前角膜分泌物4种细菌培养均为阳性，本发明实施例1滴眼液治疗5d的角膜分泌物细菌培养转阴率卡他球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均为100％，芽孢杆菌96％。家兔眼评分结果，与未治疗对照组比较，本发明实施例1滴眼液对卡他球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、芽孢杆菌感染组给药后4，5d都有明显差异(P<0.01，表10)。病理切片，本发明实施例1滴眼液治疗前3种菌感染的角膜各层结构基本完整，伤口表面被复层鳞状上皮覆盖，伤口处有纤维组织增生，伤口斑痕性愈合，未见炎细胞浸润；芽孢杆菌治疗组部分片子可见角膜水肿，伤口未愈合并有少量炎细胞浸润；未治疗对照组感染4种菌后兔眼均显示角膜水肿，血管扩张充血，伤口未愈合并有溃疡，有大量炎细胞浸润及坏死组织。正常对照组角膜完好无损。
表10给药5d后对四种细菌感染家兔眼疗效比较(评分值x±s,n＝12)


由表10数据可知，本发明实施例1、实施例2包含土霉素和中药组合物的滴眼液治疗细菌感染的眼部炎症效果最强，相对于单一组分、组分成分变化或者用量变化的组合(对比实施例1-7)均明显具有协同治疗效果。