一种富硒灵芝孢子粉或子实体的培育方法.pdf

本发明涉及一种富硒灵芝的培育方法，本发明的方法包含配制硒源、制备富硒基料及配制富硒培养基的步骤，其中，所述硒源为无机硒源。该方法通过将灵芝生长过程中吸收的无机硒，转化为安全高效易吸收的有机硒，促进灵芝有效成份的增加，使得培育出来的灵芝药效更强，并且该方法成本低、对多菌丝体的毒害小、培育过程简单易行，且培育出的灵芝子实体和灵芝孢子粉的硒含量高。

权利要求书
1.  一种富硒灵芝子实体或孢子粉的培育方法，该方法包括将 无机硒源与木屑基料混合，形成富硒基料，将该富硒基料与段木混 合装袋灭菌，形成富硒灵芝培养基，在该富硒灵芝培养基中接入灵 芝菌栽培种，通过灵芝菌丝吸收无机硒进行生物转化，培育出富硒 灵芝子实体或孢子粉。

2.  根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述无机 硒源包含亚硒酸的钾盐；优选地，所述无机硒源还包含磷酸盐；更 优选地，所述无机硒源由亚硒酸的钾盐和磷酸盐组成；或者，所述 无机硒源为亚硒酸的钾盐。

3.  根据权利要求1或2所述的培育方法，其特征在于，所述 亚硒酸的钾盐为亚硒酸氢钾或亚硒酸钾；优选为亚硒酸氢钾。

4.  根据权利要求1至3中任一项所述的培育方法，其特征在 于，所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和磷酸钾中的一种或 多种；优选地，所述磷酸盐为磷酸二氢钾。

5.  根据权利要求1至4中任一项所述的培育方法，其特征在 于，所述无机硒源中亚硒酸的钾盐、磷酸盐之间的摩尔比为 1:0.1～1:10，优选为1:1～1:3，更优选为1:3。

6.  根据权利要求1至5中任一项所述的培育方法，其特征在 于，所述无机硒源与所述木屑基料采用如下方式进行混合：将所述 无机硒源溶于水，喷撒在所述木屑基料上，然后混合均匀；或将所 述无机硒源与所述木屑基料干拌混合；优选地，在干拌混合时采用 多级搅拌。

7.  根据权利要求1至6中任一项所述的培育方法，其特征在 于，所述木屑基料包含或由木屑、麦麸、蔗糖和硫酸钙组成；优选 地，所述蔗糖为白砂糖或红糖，优选地，所述蔗糖为红糖；优选地， 所述木屑基料中所述木屑、麦麸、蔗糖和硫酸钙之间的重量比为 60～95:4～39:0.5～2:0.5～2，优选为70～85:13～29:0.5～1:0.5～1，更优选 为85:13:1:1。

8.  根据权利要求1至7中任一项所述的培育方法，其特征在 于，所述富硒灵芝培养基中所述富硒基料占5重量％以上；优选占 15重量％～20重量％，更优选占15重量％。

9.  根据权利要求1至8中任一项所述的培育方法，其特征在 于，所述富硒灵芝培养基中含硒量为5～100mg/kg，优选为 10～30mg/kg，更优选为30mg/kg。

10.  根据权利要求1至9中任一项所述的培育方法，其特征在 于，所述培育方法还包含在第一年采芝后到第二年出芝后一周内补 充无机硒源；优选地，所述无机硒源的补充量为首次加硒量的10 重量％～50重量％，优选为20重量％～30重量％，更优选为30重量 ％。

说明书一种富硒灵芝孢子粉或子实体的培育方法
技术领域
本发明属于栽培技术领域，具体涉及一种富硒灵芝孢子粉或子实 体的培育方法。
背景技术
硒是人体必需的微量元素，对健康有极其重要的生物学功能。与 其它的半金属不同，作为硒代半胱氨酸(人类内合成蛋白质的第21 个氨基酸)的一部分，硒可以通过共转译机制成为蛋白质的一部分。 至今已有二十五个硒蛋白在人类体内被确认，然而它们仅有很少的功 能被了解。大多数的硒蛋白参与抗氧化应答和氧化还原状态的调节， 特别是谷胱甘肽过氧化物酶(GPxs)家族和硫氧还蛋白还原酶(TrxRs) 家族。一些硒蛋白还发挥更特殊的必须作用，例如，甲腺氨酸脱碘化 酶(DIOs)参与甲状腺素的代谢，GPx4是精子发育必不可少的，硒 磷酸合成酶2(SPS2)参与硒蛋白的生物合成。其它的硒蛋白可能也 参与了重要的生物过程，但它们确切的作用机理现阶段还未被充分认 识。
尽管对硒蛋白的生化功能缺乏精确的认识，但通过过去二十年开 展的大量研究表明：硒水平，尤其是硒蛋白的不足与许多人类的疾病 相关，这些疾病包括癌症、糖尿病、心血管和免疫系统疾病。大部分 情况下，这种联系在于氧化应激可能是引发疾病或由疾病引发。另外， 最近发现的硒蛋白的基因多态性与癌症和其它疾病的相关性，引起了 人们的注意。并且，大量文献支持了硒对人类健康的重要作用，催生 了补充硒的研究热点。
癌症研究是最有希望的战线，硒作为一些新设计的抗癌药的关键 组成成分，已经试验使用。另一方面，由于化学预防的兴起，植物天 然成份、食物和营养干预成为热点和前沿，利用动植物的生长特性， 将人工施加的无机硒或某些有机硒吸收利用，在生物体内自然转化成 为特有的硒形态，随同动植物提供的食物、药物供给人们食用，不但 达到补充硒的保健作用，而且结合原植物的功效成份，发挥更强的、 甚至新的功效。市场上低端的富硒产品林林总总，例如富硒玉米、富 硒大蒜、富硒大米、富硒麦芽、富硒茶叶等，但缺乏明确的药学价值。
灵芝是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌赤芝和紫芝的总称，具备很 高的药用价值，是中国传统四大圣药之一。现代医学研究也证实，灵 芝对于增强人体免疫力、调节血糖、控制血压、辅助肿瘤放化疗、保 肝护肝、促进睡眠等方面均具有显著疗效。研究表明野生灵芝硒含量 相比其它物种有较高的含量，灵芝的药效可能跟微量元素有关，因此 启示人们通过人工添加硒营养素使灵芝吸收富集硒，并且近十年来已 经成为一个热点研究。
例如中国专利申请“有机富硒灵芝保健食品及其制备方法”(专 利申请号200810073463.5)的技术方案中采用无机亚硒酸钠为硒源， 混入栽培料中培育富硒灵芝，子实体硒含量可达69.04mg/kg；此外， 中国专利申请“一种富硒段木灵芝孢子粉的培育方法”(专利申请号 200810109660.8)中介绍了利用亚硒酸钠为硒源，首先培育富硒灵芝菌 种，然后将富硒灵芝种子接种于含亚硒酸钠的栽培料中，然后通过段 木栽培的方式培育富硒灵芝的方法，最终得到的灵芝孢子粉中的硒含 量可达51-130mg/kg。以上两个专利申请公开的培育方法基本相同， 但这两种技术方案中均存在灵芝对硒的累积与吸收利用效率不高的 问题，并且需要施用大剂量的硒(例如，亚硒酸钠与培养基的配比为 25-100mg/kg)，为了克服亚硒酸钠对菌丝体生长发育的毒性，需要使 用大量的木屑(为段木重量的33％到67％)来稀释亚硒酸钠的含量； 还需要先培育富硒灵芝菌种，操作繁琐。
此外，中国专利申请“一种用于食品添加剂的高硒灵芝的制备方 法”(专利申请号201310461401.2)将灵芝种子首先通过一系列硒浓 度的固体平板培养基对其进行逐级富硒驯化，得到最优硒耐受浓度下 的灵芝菌种后进行扩大培养制得栽培时所需的原种；通过种子富硒驯 化与中性粘土或高粘凹土负载亚硒酸钠作为硒缓释剂，硒含量范围为 1000-3000mg/kg。在栽培料中拌入硒缓释剂，使栽培料硒含量在 10-300mg/kg范围内，随后接种灵芝原种，进行正常的灵芝栽培管理， 即可以获得灵芝孢子粉，其总硒含量达到30-1630mg/kg(干重)、灵芝 子实体总硒含量可达30-2060mg/kg(干重)。但是方法仍存在需要驯化 菌种，需要高剂量的硒，硒缓释剂制备复杂，生物吸收及转化率低的 缺点。
此外，中国专利申请“富硒灵芝培育方法”(专利申请号 201110462256.0)是利用有机酵母硒为硒源，通过椴木打孔的方法培育 富硒灵芝；此外，中国专利申请“有机硒灵芝孢子粉的生产方法”(专 利申请号200910144893.6)则首先将无机硒通过EM菌经过发酵转化 得到有机硒生物液，然后制成有机硒剂喷洒于灵芝培养基上，培育富 硒灵芝，得到硒含量在10-30μg/g的有机硒灵芝孢子粉；此外，中国 专利申请“栽培富硒灵芝的培养基添加剂的配制方法”(专利申请号 200710077982.4)利用栽培过富硒蘑菇的培养基菌糠，加入各种营养素 配置成富硒灵芝培养基添加剂，然后将该添加剂按比例混入栽培料中 培育富硒灵芝，得到硒含量为30mg/kg的富硒灵芝粉。以上几种技术 方案中均存在采用有机硒为硒源，成本相对较高的问题，并且技术方 法的实现较为困难，而且最终得到的灵芝的硒含量也较低。
综上所述，目前富硒灵芝的规模化培育仍然存在技术障碍，为提 高灵芝对硒的累积与吸收利用效率，使灵芝体内的硒含量能够定向富 集并累积到一个更为合理、安全、有效的水平，降低硒剂的使用量、 缩减生产成本、简化生产步骤、开发和应用新技术十分迫切。
发明内容
为了克服现有技术的缺陷，本发明提供了一种富硒灵芝子实体或 富硒灵芝孢子粉的培育方法，该方法通过将灵芝生长过程中吸收的无 机硒，转化为安全高效易吸收的有机硒，促进灵芝有效成份的增加， 使得培育出来的灵芝药效更强，并且该方法成本低、对菌丝体的毒害 小、培育过程简单易行，且培育出的灵芝子实体和灵芝孢子粉的硒含 量高，硒源利用率高。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。
一种富硒灵芝子实体或孢子粉的培育方法，该方法包括将无机 硒源与木屑基料混合，形成富硒基料，将该富硒基料与段木混合装 袋灭菌，形成富硒灵芝培养基，在该富硒灵芝培养基中接入灵芝菌 栽培种，通过灵芝菌丝吸收无机硒进行生物转化，培育出富硒灵芝 子实体或孢子粉。所述灵芝菌栽培种，是指将普通灵芝母种接种到 木屑、麸皮为主的培养基上长成的菌丝体，本领域的技术人员按公 知技术可以获得。
优选地，上述培育方法中，所述无机硒源包含亚硒酸的钾盐； 优选地，所述无机硒源还包含磷酸盐；更优选地，所述无机硒源由 亚硒酸的钾盐和磷酸盐组成；或者，所述无机硒源为亚硒酸的钾盐。
优选地，上述培育方法中，所述亚硒酸的钾盐为亚硒酸氢钾或 亚硒酸钾；优选为亚硒酸氢钾。其中，亚硒酸氢钾或亚硒酸钾可以 通过将二氧化硒与氢氧化钾或碳酸钾或碳酸氢钾在水中反应获得。
优选地，所述亚硒酸的钾盐可以为溶液形式或通过干燥去除水 分。
优选地，上述培育方法中，所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸 氢二钾和磷酸钾中的一种或多种；优选地，所述磷酸盐为磷酸二氢 钾。
优选地，上述培育方法中，所述无机硒源中亚硒酸的钾盐、磷 酸盐之间的摩尔比为1:0.1～1:10，优选为1:1～1:3，更优选为1:3。
优选地，上述培育方法中，所述无机硒源与所述木屑基料采用 如下方式进行混合：将所述无机硒源溶于水，喷撒在所述木屑基料 上，然后混合均匀；或将所述无机硒源与所述木屑基料干拌混合； 优选地，在干拌混合时采用多级搅拌。木屑基料对无机硒源可以起 到吸附固定的作用。
优选地，上述培育方法中，所述木屑基料包含或由木屑、麦麸、 蔗糖和硫酸钙组成。
优选地，所述蔗糖为白砂糖或红糖，优选地，所述蔗糖为红糖。
优选地，上述培育方法中，所述木屑基料中所述木屑、麦麸、 蔗糖和硫酸钙之间的重量比为60～95:4～39:0.5～2:0.5～2，优选为 70～85:13～29:0.5～1:0.5～1，更优选为85:13:1:1。
优选地，上述培育方法中，所述富硒灵芝培养基中所述富硒基 料占5重量％以上；优选占15重量％～20重量％，更优选占15重量 ％。
优选地，上述培育方法中，所述富硒灵芝培养基中含硒量(以 硒元素计)为5～100mg/kg，优选为10～30mg/kg，更优选为30mg/kg。
优选地，所述培育方法还包含在第一年采芝之后到第二年出芝 后一个星期内(7天内)补充无机硒源；优选地，所述无机硒源的 补充量为首次加硒量的10重量％～50重量％，优选为20重量％～30 重量％，更优选为30重量％(以硒元素计)。
在一个具体实施方案中，本发明的培育方法包括以下步骤：
(1)配制无机硒源
亚硒酸的钾盐作为无机硒源；或者将亚硒酸的钾盐、磷酸盐混 合，得到无机硒源。所述的亚硒酸的钾盐指亚硒酸氢钾或亚硒酸钾； 所述的磷酸盐优选磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和磷酸钾。亚硒酸钾或 亚硒酸氢钾可以用二氧化硒和氢氧化钾(或碳酸钾、碳酸氢钾等) 定量反应生成，优选水作反应溶剂。优选地，所述无机硒源中亚硒 酸的钾盐、磷酸盐之间的摩尔比为1:0.1～1:10，优选为1:1～1:3，更 优选为1:3，其中，可以将磷酸盐直接溶解在亚硒酸钾或亚硒酸氢 钾水溶液中，或将其直接和亚硒酸钾或亚硒酸氢钾混合均匀。
(2)木屑基料的配置
木屑基料除含有木屑外，还可加入麦麸、蔗糖、硫酸钙，这些 对灵芝菌丝体生长有利。优选地，上述培育方法中，所述木屑基料 中所述木屑、麦麸、蔗糖和硫酸钙之间的重量比为 60～95:4～39:0.5～2:0.5～2，优选为70～85:13～29:0.5～1:0.5～1，更优选 为85:13:1:1。
(3)配制富硒基料
将步骤(1)制备的无机硒源溶解，喷洒在步骤(2)制备的木 屑基料上，并混合均匀，得到富硒基料；也可以通过干拌的方法将 无机硒源和木屑基料混合得到富硒基料，这种情况下以多级搅拌的 分散效果好。
(4)配制富硒灵芝培养基
将步骤(3)制得的富硒基料与段木混合装袋为培养基，灭菌； 富硒基料占富硒灵芝培养基重量的5％以上，优选15重量％～20重 量％，更优选15重量％。在富硒灵芝培养基中硒的含量为 5～100mg/kg，优选10～30mg/kg，最优选为30mg/kg。
(5)将灵芝菌栽培种接入富硒灵芝培养基，进行温度、湿度 和光照管理，促使灵芝菌丝发育。
(6)下田培土，出芝管理，扎袋套简。培育富硒灵芝，收集 富硒灵芝孢子粉。
(7)在第一年采芝后到第二年出芝后一周内补充硒源，将无 机硒源溶解于水，浇施在培养基残基上。优选追加的硒量为首次添 加硒量的10重量％～50重量％，优选为20重量％～30重量％，更优 选为30重量％。
以上方法经过三年的大田培育试验，证明产量和富硒量稳定， 施用亚硒酸氢钾和亚硒酸钾的效果无差别；而对照用的亚硒酸钠， 与本发明的技术方案相比，其硒的利用率低30％以上，而且对菌丝 有较大毒性，在高剂量下(30mg/kg以上)会发生灵芝生长抑制现 象。本发明磷酸盐的使用量在1～10个硒当量合适(以硒元素计)， 优选3个当量。
具体而言，本发明的培育方法与现有技术相比，至少具有以下有 益效果：
1、本发明的方法通过将灵芝生长过程中吸收的无机硒，转化为 安全高效易吸收的有机硒，促进灵芝有效成份的增加，使得培育出来 的灵芝药效更强。
2、本发明的方法使用亚硒酸钾或亚硒酸氢钾制作无机硒源，生 物利用率高，所需硒量大大减少，对菌丝体的毒性低，仅需少量的木 屑基料来吸附无机硒源，占培养基总重的15％或以下，因而大大降低 了培育成本。
3、磷酸盐和钾离子对灵芝生长有促进作用，而且促进富硒，尤 其促进硒在孢子粉中的富集。亚硒酸的钾盐与磷酸盐的搭配比例在 1:0.1～1:10效果较佳，磷酸盐的比例低时促进效果不明显，高时过 肥反而影响生长。
4、本发明的方法直接使用普通灵芝栽培种进行富硒种植，无需 培育耐硒灵芝菌种(驯化)简化了培育过程，使得本发明的方法简单 易行。
5、使用本发明的方法培育出的灵芝子实体和灵芝孢子粉的有机 硒含量高，且该方法的定向富集效果明显，灵芝孢子粉的有机硒含量 是子实体的2倍或以上；孢子粉和子实体中有机硒含量占灵芝中总硒 量的95％以上。
6、使用本发明的方法获得的灵芝子实体和孢子粉的有效成份多 糖和三萜含量显著增加。
7、富硒培养基含硒量在10～100mg范围时硒的利用率比较高， 30mg时综合效益较高。本发明的富硒灵芝是灵芝原有多种成份与硒 的结合，治疗效果上并不是硒含量越高越好，而是兼顾各种有效成份 或营养成份的平衡，硒是微量元素，保健的剂量一般在20～200μg/d， 治疗剂量在2mg/d以下。因此在硒含量100mg/kg或以下的富硒培养 基中即可获得较好治疗或保健效果的富硒灵芝孢子粉或富硒灵芝子 实体。
此外，本方法经过三年的大田培育试验，证明其产量和富硒量稳 定，与施用其它硒源如亚硒酸钠相比，硒利用率大大提高，因此本发 明的培育方法具有更广泛的市场应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细的描述。
以下所述的灵芝菌栽培种按本领域技术员知悉的常规方法培育 得到，常规灵芝菌种培育顺序是：灵芝子实体活组织→母种→原种→ 栽培种。本发明使用普通的灵芝栽培种，不需要经过耐硒培育选种(驯 化)。
以下实施例、对比例均以200个平行实验(即200个培养基)为 1个实验组，实验结果取实验组的平均值，本发明所述硒含量或含硒 量均以硒元素计。
实施例1
配制无机硒源：560g(5mol)二氧化硒和280g(5mol)氢氧化 钾在20L水中反应，加入2040g磷酸二氢钾(15mol)溶解，制备得 到含硒20mg/ml的硒源水溶液。
配制富硒基料：
木屑基料的配比(以重量百分比计)：木屑85％，麸皮13％，红 糖1％，硫酸钙粉1％。
将取计算量的无机硒源溶于水，喷洒在取计算量的木屑基料上， 并混合均匀配制成富硒基料。
富硒灵芝培养基的配制：每袋装1.5kg富硒基料和8.5kg段木， 灭菌，培养基中的含硒量为30mg/kg。
培养：灵芝菌栽培种接入富硒灵芝培养基，进行温度、湿度和光 照管理，促使灵芝菌丝发育，下田培土，出芝管理，扎袋套简，培育 富硒灵芝，收集富硒灵芝孢子粉和子实体。
硒元素含量检测方法：电感耦离子原子发射光谱法，检测结果如 表1所示。
实施例2
配制无机硒源：同实施例1。
配制富硒基料：
木屑基料的配比(以重量百分比计)：木屑85％，麸皮13％，红 糖1％，硫酸钙粉1％。
将取计算量的无机硒源溶液，加适量水稀释，喷洒在取计算量的 木屑基料上，并混合均匀配制成富硒基料。
富硒灵芝培养基的配制：每袋装1.5kg富硒基料和8.5kg段木， 灭菌，培养基中的含硒量为10mg/kg。
将灵芝菌栽培种接入富硒灵芝培养基，进行温度、湿度和光照管 理(与实施例1的条件相同)，促使灵芝菌丝发育，下田培土，出芝 管理，扎袋套简，培育富硒灵芝，收集富硒灵芝孢子粉和子实体。
硒元素含量检测方法：电感耦离子原子发射光谱法，检测结果如 表1所示。
实施例3
配制无机硒源：同实施例1。
配制富硒基料：
木屑基料的配比(以重量百分比计)：木屑85％，麸皮13％，红 糖1％，硫酸钙粉1％。
将取计算量的无机硒源溶液，加适量水稀释，喷洒在取计算量的 木屑基料上，并混合均匀配制成富硒基料。
富硒灵芝培养基的配制：每袋装1.5kg富硒基料和8.5kg段木， 灭菌，培养基中的含硒量为20mg/kg。
将灵芝菌栽培种接入富硒灵芝培养基，进行温度、湿度和光照管 理(与实施例1的条件相同)，促使灵芝菌丝发育，下田培土，出芝 管理，扎袋套简，培育富硒灵芝，收集富硒灵芝孢子粉和子实体。
硒元素含量检测方法：电感耦离子原子发射光谱法，检测结果如 表1所示。
实施例4
配制无机硒源：同实施例1。
配制富硒基料：
木屑基料的配比(以重量百分比计)：木屑85％，麸皮13％，红 糖1％，硫酸钙粉1％。
将取计算量的无机硒源溶液，加适量水稀释，喷洒在取计算量的 木屑基料上，并混合均匀配制成富硒基料。
富硒灵芝培养基的配制：每袋装1.5kg富硒基料和8.5kg段木， 灭菌，培养基中的含硒量为50mg/kg。
将灵芝菌栽培种接入富硒灵芝培养基，进行温度、湿度和光照管 理(与实施例1的条件相同)，促使灵芝菌丝发育，下田培土，出芝 管理，扎袋套简，培育富硒灵芝，收集富硒灵芝孢子粉和子实体。
硒元素含量检测方法：电感耦离子原子发射光谱法，检测结果如 表1所示。
实施例5
配制无机硒源：同实施例1。木屑基料的配比(以重量百分比计)： 木屑85％，麸皮13％，红糖1％，硫酸钙粉1％。
将取计算量的无机硒源溶液，加适量水稀释，喷洒在取计算量的 木屑基料上，并混合均匀配制成富硒基料。
富硒灵芝培养基的配制：每袋装1.5kg富硒基料和8.5kg段木， 灭菌，培养基中的含硒量为100mg/kg。
将灵芝菌栽培种接入富硒灵芝培养基，进行温度、湿度和光照管 理(与实施例1的条件相同)，促使灵芝菌丝发育，下田培土，出芝 管理，扎袋套简，培育富硒灵芝，收集富硒灵芝孢子粉和子实体。
硒元素含量检测方法：电感耦离子原子发射光谱法，检测结果如 表1所示。
实施例6
配制无机硒源：112g(1mol)二氧化硒和56g(1mol)氢氧化钾 在500ml水中反应，在烘箱中除去水分制备得到168g(1mol)亚硒 酸氢钾，与408g(3mol)磷酸二氢钾混合均匀,制得576g无机硒源， 硒含量为13.8％。
配制富硒基料：
木屑基料的配比(以重量百分比计)：木屑85％，麸皮13％，红 糖1％，硫酸钙粉1％。
将计算量的无机硒源与取计算量的木屑基料干拌混合，并进行 多级搅拌制备富硒基料。
富硒培养基的配制：每袋装1.5kg富硒基料和8.5kg段木，灭菌， 制得的富硒培养基中的含硒量为30mg/kg。
培养：灵芝菌栽培种接入富硒灵芝培养基，进行温度、湿度和光 照管理，促使灵芝菌丝发育，下田培土，出芝管理，扎袋套简，培育 富硒灵芝，收集富硒灵芝孢子粉和子实体。
硒元素含量检测方法：电感耦离子原子发射光谱法，检测结果如 表1所示。
对比例1
木屑基料的配比(以重量百分比计)：木屑85％，麸皮13％，蔗 糖1％，硫酸钙粉1％。
普通培养基的配制：每袋装1.5kg木屑基料和8.5kg段木，灭菌， 培养基中不添加无机硒源。
培养：灵芝菌栽培种(与实施例1相同)接入普通培养基，进行 温度、湿度和光照管理，促使灵芝菌丝发育，下田培土，出芝管理， 扎袋套简，培育灵芝，收集灵芝孢子粉和子实体。
硒元素含量检测方法：电感耦离子原子发射光谱法，检测结果如 表1所示。
对比例2
配制富硒基料：
木屑基料的配比(以重量百分比计)：木屑85％，麸皮13％，红 糖1％，硫酸钙粉1％。
将计算量的亚硒酸钠溶于水，喷洒在计算量的木屑基料上，混 合均匀制备富硒基料。
富硒培养基的配制：每袋装3.5kg富硒基料和6.5kg段木，灭菌， 制得的富硒培养基中的含硒量为100mg/kg。
培养：灵芝菌栽培种接入富硒灵芝培养基，进行温度、湿度和光 照管理，促使灵芝菌丝发育，下田培土，出芝管理，扎袋套简，培育 富硒灵芝，收集富硒灵芝孢子粉和子实体。
硒元素含量检测方法：电感耦离子原子发射光谱法。检测结果如 表1所示。
相比于对比例1，本例孢子粉减产35％，子实体减产35％；而实 施例1～6有不同程度的增产，如实施例1孢子粉增产16％，子实体增 产11％。
对比例3
配制无机硒源：同实施例1。
配制富硒基料：
木屑基料的配比(以重量百分比计)：木屑85％，麸皮13％，蔗 糖1％，硫酸钙粉1％。
将取计算量的无机硒源溶液，加适量水稀释，喷洒在计算量的木 屑基料上，并混合均匀配制成富硒基料。
富硒灵芝培养基的配制：每袋装1.5kg富硒基料和8.5kg段木， 灭菌，培养基中的含硒量为500mg/kg。
将灵芝菌栽培种(与实施例1中相同)接入富硒灵芝培养基，进 行温度、湿度和光照管理(与实施例1的条件相同)，促使灵芝菌丝 发育，下田培土，出芝管理，扎袋套简，培育富硒灵芝，收集富硒灵 芝孢子粉和子实体。
硒元素含量检测方法：电感耦离子原子发射光谱法。检测结果如 表1所示。
相比于实施例1～6，本例出芝率低，子实体明显偏小偏矮，孢子 粉减产36％，子实体减产34％。
表1第一年收获的灵芝子实体和孢子粉有机硒含量检测结果

实验结果表明，通过本发明的培育方法获得的子实体和孢子粉的 有机硒含硒量在本发明范围内随着培养基中硒含量的增加而增加，说 明普通灵芝菌栽培种以本发明的培育方法培育能耐受较大剂量范围 的硒剂，并将其转化为有机硒，且硒在孢子粉中的富集高于子实体； 而以亚硒酸钠作硒源时，硒主要富集在子实体，孢子粉的含硒量比同 剂量的亚硒酸氢钾低。
实施例7
配制无机硒源：112g(1mol)二氧化硒和56g(1mol)氢氧化钾 在4L水中反应，制备得到含硒20mg/ml的硒源水溶液。
配制富硒基料：
木屑基料的配比(以重量百分比计)：木屑85％，麸皮13％，红 糖1％，硫酸钙粉1％。
将取计算量的无机硒源溶于水，喷洒在取计算量的木屑基料上， 并混合均匀配制成富硒基料。
富硒灵芝培养基的配制：每袋装1.5kg富硒基料和8.5kg段木， 灭菌，培养基中的含硒量为30mg/kg。
培养：灵芝菌栽培种接入富硒灵芝培养基，进行温度、湿度和光 照管理，促使灵芝菌丝发育，下田培土，出芝管理，扎袋套简，培育 富硒灵芝，收集富硒灵芝孢子粉和子实体。
硒元素含量检测方法：电感耦离子原子发射光谱法，检测结果如 表2所示。
实施例8
配制无机硒源：560g(5mol)二氧化硒和280g(5mol)的氢氧 化钾在20L水中反应，加入34g(0.25mol)磷酸二氢钾溶解，制备 得到含硒20mg/ml的硒源水溶液。
配制富硒基料：
木屑基料的配比(以重量百分比计)：木屑85％，麸皮13％，红 糖1％，硫酸钙粉1％。
将取计算量的无机硒源溶液，加适量水稀释，喷洒在取计算量的 木屑基料上，并混合均匀配制成富硒基料。
富硒灵芝培养基的配制：每袋装1.5kg富硒基料和8.5kg段木， 灭菌，培养基中的含硒量为30mg/kg。
培养：灵芝菌栽培种接入富硒灵芝培养基，进行温度、湿度和光 照管理，促使灵芝菌丝发育，下田培土，出芝管理，扎袋套简，培育 富硒灵芝，收集富硒灵芝孢子粉和子实体。
硒元素含量检测方法：电感耦离子原子发射光谱法，检测结果如 表2所示。
实施例9
配制无机硒源：560g(5mol)二氧化硒和280g(5mol)氢氧化 钾在20L水中反应，加入7480g(55mol)磷酸二氢钾溶解，制备得 到含硒20mg/ml的硒源水溶液。
配制富硒基料：
木屑基料的配比(以重量百分比计)：木屑85％，麸皮13％，红 糖1％，硫酸钙粉1％。
将取计算量的无机硒源溶液，加适量水稀释，喷洒在计算量的木 屑基料上，并混合均匀配制成富硒基料。
富硒灵芝培养基的配制：每袋装1.5kg富硒基料和8.5kg段木， 灭菌，培养基中的含硒量为30mg/kg。
培养：灵芝菌栽培种接入富硒灵芝培养基，进行温度、湿度和光 照管理，促使灵芝菌丝发育，下田培土，出芝管理，扎袋套简，培育 富硒灵芝，收集富硒灵芝孢子粉和子实体。
硒元素含量检测方法：电感耦离子原子发射光谱法，检测结果如 表2所示。
对比例4
配制富硒基料：
木屑基料的配比(以重量百分比计)：木屑85％，麸皮13％，红 糖1％，硫酸钙粉1％。
将取计算量的亚硒酸钠溶于水中，喷洒在计算量的木屑基料上， 混合均匀制备富硒基料。
富硒培养基的配制：每袋装3.5kg富硒基料和6.5kg段木装袋， 灭菌，制得的富硒培养基中的含硒量为30mg/kg。
培养：灵芝菌栽培种接入富硒灵芝培养基，进行温度、湿度和光 照管理，促使灵芝菌丝发育，下田培土，出芝管理，扎袋套简，培育 富硒灵芝，收集富硒灵芝孢子粉和子实体。
硒元素含量检测方法：电感耦离子原子发射光谱法。检测结果如 表2所示。
表2

注：表2中实施例1a、1b和1c为调整实施例1无机硒源中亚硒 酸氢钾与磷酸二氢钾的配比，以相同的方法制备含硒量为30mg/kg 的富硒培养基a、b、c，并以实施例1中相同的方法培育灵芝，将培 育结果与实施例1、实施例7-9、对比例4比较的结果示意。
实施例10
测量对比例1、对比例2、实施例1、实施例2和实施例5的多 糖含量，其中灵芝多糖含量按中国药典收录的方法测量，灵芝三萜含 量使用比色法测量，对照品为齐墩果酸，检测结果如表3所示。
表3


结果表明，富硒种植的灵芝子实体和孢子粉的多糖和三萜含量比 无添加硒的方法种植的灵芝含量有较大幅度的增加。
实施例11
将按本发明方法培养的灵芝第一年收采后60天，在培养基残基 上浇施追加硒源，添加量为首次添加硒源量的30％，获得灵芝子实体 和孢子粉进行检测，检测结果如表4所示。
表4

结果表明，第二年生长的灵芝，未追加硒源的实验组的灵芝子实 体和孢子粉的硒含量比第一年显著偏低，通过追加硒源后，可以获得 与第一年相当的含硒量。
以上实施例说明：用亚硒酸的钾盐作为硒剂，有较大的耐受剂量 范围，在100mg/kg(以硒元素计)剂量范围内有很好的富硒效果， 获得的子实体和孢子粉的含硒量随着培养基中硒含量的增加而增加， 并将其转化为有机硒，且硒在孢子粉中的富集高于子实体。而使用亚 硒酸钠，其培养基含硒量在30mg/kg(以硒元素计)时发现灵芝生长 抑制现象。亚硒酸钾盐在500mg/kg(以硒元素计)剂量会抑制灵芝 生长。磷酸盐能够促进亚硒酸钾盐的吸收和富集。
上述实施例用于解释本发明，而不是对本发明进行限制，在本发 明的精神和权利要求保护范围内，对本发明作出的任何修改和改变， 都落入本发明的保护范围。